SK282529B6

SK282529B6 - Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu, spôsob jeho výroby, medziprodukt na jeho výrobu a farmaceutický prípravok, ktorý ho obsahuje

Info

Publication number: SK282529B6
Application number: SK725-94A
Authority: SK
Inventors: Jeffrey A. Robl; David R. Kronenthal; Jollie D. Godfrey
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 1993-06-15
Filing date: 1994-06-14
Publication date: 2002-10-08
Also published as: EG20537A; CN1099392A; KR100395604B1; FI106464B; UA39924C2; GEP19981301B; RU94021350A; US5756832A; TW329423B; HUT70842A; CZ289488B6; LT3626B; US5627278A; IL109924A; PL303832A1; FI111950B; CA2124375C; ZA944163B; CA2124375A1; CY2492B1

Abstract

Je opísaný merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu všeobecného vzorca (I), kde znamená A skupinu všeobecného vzorca (a), v ktorom R1 a R12 znamená od seba nezávisle atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka s priamym alebo rozvetveným reťazcom, skupinu -CH2-cykloalkylovú s 3 až 6 atómami uhlíka v cykloalkylovom podiele, -CH2-fenylovú, -CH2- naftylovú, -CH2-tienylovú, -CH2-tiazolylovú skupinu, alebo R1 a R12 spolu vytvárajú skupinu cykloalkylovú s 5 atómami uhlíka, R2 znamená atóm vodíka alebo skupinu všeobecného vzorca (b), kde R6 znamená alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka alebo fenylovú skupinu, X atóm kyslíka alebo síry, R3 atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, Y skupinu -CH2- alebo atóm kyslíka, a to za predpokladu, že ak Y znamená atóm kyslíka, znamená m číslo 1, m 0 alebo 1, n 1 alebo 2, r 0 alebo 1 a jeho farmaceuticky prijateľná soľ. Ďalej je opísaný spôsob ich výroby kopuláciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II) s amínom všeobecného vzorca (III), kde je jednotlivé substituenty a symboly majú uvedený význam a odstránením acylovej skupiny a farmaceutický prípravok s ich obsahom na ošetrenie kardiovaskulárnych chorôb.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka merkaptoalkanoylových a acylmerkaptoalkanoylových derivátov oxazepínu, tiazínu a tiazepínu, ktoré sú použiteľné ako inhibítory enzýmu konvertujúceho angiotenzín. Niektoré tieto deriváty sa vyznačujú taktiež inhibičnou účinnosťou neutrálnej endopeptidázy. Tento vynález sa taktiež týka spôsobu prípravy týchto derivátov a medziproduktov na ich výrobu. Vynález sa rovnako týka farmaceutických prípravkov, ktoré tieto nové selektívne pôsobiace inhibítory obsahujú.

Doterajší stav techniky

Inhibítory enzýmu prevádzajúceho angiotenzín, ako sú captopril, enalapril, lisipril, fosinopril sú známymi obchodnými prípravkami na ošetrovanie vysokého krvného tlaku. Napríklad európsky patentový spis číslo EP 481522, EP 534363, EP 534396 a EP 534492 opisuje enzým prevádzajúci angiotenzín a inhibítory neutrálnej endopeptidázy. Akokoľvek sú teda známe početné účinné látky na výrobu liečiv na ošetrovanie kardiovaskulárnych chorôb, ako je vysoký krvný tlak a zlyhanie srdca po prekrvení, venuje sa stále úsilie vývoju nových účinných látok pre tento odbor. Vynález je výsledkom takéhoto vývoja.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I) m 0 alebo 1 n 1 alebo 2, r 0 alebo 1 a jeho farmaceutický prijateľná soľ.

Výrazom „alkylová skupina“ sa vždy mieni alkylová skupina s 1 až 5 atómami uhlíka s priamym alebo rozvetveným reťazcom.

Výraz „cykloalkylová skupina“ sa týka nasýtených cyklov s troma až šiestimi atómami uhlíka, najvýhodnejšie skupina cyklopropylová, cyklobutylová, cyklopentylová a cyklohexylová.

Spôsob výroby merkaptoalkanoylovcho a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepínu, tiazínu a tiazepínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, spočíva podľa vynálezu v tom, že sa

a) kopuluje acylmerkapto-postranný reťazec všeobecného vzorca (II) o o

P

R -C-S-(CH₂)_r-C-C-0H (II) kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, alebo jeho aktivovaná forma s amínom všeobecného vzorca (III)

kde znamená

A skupinu všeobecného vzorca

RZ—S (CHj), .

ÍRI kde znamená

R¹ a R¹² od seba nezávisle atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka s priamym, alebo rozvetveným reťazcom, skupinu -CH₂-cykloalkylovú s 3 až 6 atómami uhlíka v cykloalkylovom podieli, -CH₂.fenylovú -CH₂-naftylovú, -CH₂-tienylovú, -CH₂-tiazolylovú skupinu, alebo R¹a R¹² spolu vytvárajú skupinu cykloalkylovú s 5 atómami uhlíka,

R² atóm vodíka, alebo skupinu všeobecného vzorca o

tl

R⁶ -Ckde znamená

R⁶ alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo fenylovú skupinu

X atóm kyslíka, alebo síry

R³ atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, Y skupinu -CH₂-,alebo atóm kyslíka, a to za predpokladu, že ak Y znamená atóm kyslíka, znamená m číslo 1, kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, za prítomnosti kopulačného činidla a o

b) odstráni sa acylová skupina R⁶ -c- a prípadne sa získaný ester karboxylovej skupiny, teda v prípade že R³ znamená alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, prevádza na voľnú kyselinu, teda na zlúčeninu, kde R³znamená atóm vodíka.

Jednoduchou a najvýhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je kyselina (4S-[4a(R*),7a, 10aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido [2,1 -b][ 1,3]tiazeρίη-7-karboxylová vzorca

a jej farmaceutický prijateľná soľ.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú dvojitými inhibítormi so schopnosťou inhibovať enzým konvertujúci angiotenzín i neutrálnu endopeptidázu.

Sú teda zlúčeniny všeobecného vzorca (I) so zahrnutím ich farmaceutický vhodných solí užitočné pri upravovaní fyziologických podmienok, kde sa ukázalo byť vhodným použitie inhibítorov enzýmu, premieňajúceho angiotenzín. Do takýchto stavov patria ochorenia a stavy, charakterizované abnormalitami krvného tlaku, tlaku v očiach a oblič kách so zahrnutím kardiovaskulárnych ochorení, zvlášť hypertenzie a srdcového zlyhania po preťažení, ďalej sa to týka glaukómu, obličkových ochorení, ako je zlyhanie a zástava obličiek, diabetická nefropatia a obličkové ťažkosti, ktoré sú dôsledkom použitia cyklosporínu a ďalších imunosupresných látok. Ďalšie stavy, kde sa uvádza použitie inhibítorov enzýmu, premieňajúceho angiotenzín, zahŕňajú cirhózu pečene, inhibíciu postupujúcej aterosklerózy, prevenciu alebo liečbu hypertenzívnej alebo diabetickej retinopatie, zlepšenie myokardiálnej dysfúnkcie v priebehu alebo po infarkte a prevenciu restinózy po angioplastike. Dvojité inhibítory sú taktiež použiteľné pri liečbe fyziologických stavov, keď sa ukazuje, že sú na použitie vhodné inhibítory neutrálnej endopeptidázy. Tieto stavy zahŕňajú teda kardiovaskulárne ochorenia, zvlášť vysoký tlak, hyperaldosteronémiu, obličkové ochorenia, glaukóm, ako aj úľavu pri akútnych a chronických bolestiach. Sú teda zlúčeniny všeobecného vzorca (I) použiteľné pri znižovaní krvného tlaku a dvojité inhibítory všeobecného vzorca (I) sú navyše použiteľné na tieto účely s prihliadnutím k ich vlastnostiam ako diuretiká a naturetiká. Dvojité inhibítory sú zvlášť použiteľné pri liečbe srdcového zlyhania pri prílišnej námahe.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický vhodné soli sa môžu teda podávať v tomto zmysle v množstvách podobných tým, ktoré sa obvykle používajú pri inhibítoroch enzýmu premieňajúceho angiotenzín. Tak napríklad je možné podávať zlúčeniny všeobecného vzorca (I) postihnutému, ako je človek, v množstve od asi 0,1 do asi 100 mg na kg hmotnosti tela a deň, výhodne od asi 0,5 mg do asi 25 mg na kg hmotnosti tela a deň. Pritom sa zlúčeniny všeobecného vzorca (I) výhodne podávajú orálne, ale parenterálne cesty sa dajú použiť napríklad formou subkutánnych, intramuskulámych alebo intravenóznych injekcií a práve tak je možné použiť aj aplikovanie topické. Dennú dávku je možné podávať naraz alebo sa môže rozdeliť na dve až štyri dávky podávané počas dňa.

Inhibítory všeobecného vzorca (I) je možné podávať v kombinácii s ľudským ANF 99-126. Takáto kombinácia potom bude obsahovať inhibitor všeobecného vzorca (I) v množstve od asi 1 do asi 100 mg na kg hmotnosti tela a ľudský ANF 99-126 v množstve od asi 0,001 do asi 0,1 mg na kg hmotnosti tela.

Inhibítory všeobecného vzorca (I) je možné podávať v kombinácii s inými triedami farmaceutický aktívnych zlúčenín. To môže byť napríklad diuretikum, činidlo, blokujúce prechod vápnika aktivátor prechodu draslíka, činidlo, znižujúce obsah alebo podiel cholesterolu, β-blokujúce činidlo atď.

Inhibítory všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický vhodné soli, ako aj ďalšie farmaceutický vhodné prísady sa môžu vhodne upravovať na použitie, ako to bolo uvedené. Takéto prípravky na orálne podávanie zahŕňajú tablety, kapsuly a elixíry a medzi vhodné prípravky na parenterálne podávanie patria sterilné roztoky a suspenzie. Vhodné prípravky na liečbu glaukómu taktiež obsahujú topické kompozície, ako sú roztoky, masti a pevné prísady, ako je to opisované v Americkom patentovom spise 4 442 089. Na toto použitie vyhovuje dávka asi 10 až 500 mg aktívnej zložky po spracovaní do fyziologicky vhodného nosiča, expicienta, spojiva, konzervačného činidla, stabilizátora, príchuti atď.

Ďalšie príklady opisujú bližšie uskutočnenie podľa tohto vynálezu. Teploty sú uvádzané v stupňoch Celzia. Chromatografia na tenkej vrstve bola vykonávaná na silikagéli, pokiaľ nie je výslovne uvedené inak.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10afi]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[l,3]-oxazepín-7-karboxylová

a) Soľ (S)-2-ftalimido-4-hydroxybutánovej kyseliny a trietylamínu

K roztoku 3,0 g (25,2 mmol) L-homoserínu a 2,670 g (25,2 mmol) uhličitanu sodného v 60 ml vody sa pridá 5,570 g (25,4 mmol) N-karbetoxyftalimidu. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti, roztok sa okyslí pridaním 6 N kyseliny chlorovodíkovej a potom sa vykoná extrakcia do etylesteru kyseliny octovej. Získaný extrakt v uvedenom rozpúšťadle sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a filtruje sa do roztoku 4,0 ml trietylamínu v 40 ml metylénchloridu. Zakalený roztok sa zahustí a triturovaním zvyšku s etylesterom kyseliny octovej a etyléteru sa získa 5,11 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, a to vo forme bielej tuhej látky s 1.1 142 až 144 °C. Chromatografia na tenkej vrstve (5 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej): R_f= 0,36.

[a]_D=-6,2° (c = 0,08, CHC1₃). Analýza pre C18H2₆N2O₅vypočítané: 61,70% C, 7,48 % H, 7,99% N nájdené: 61,45% C, 7,47% H, 7,84% N

b) Soľ (S)-2-ftalimido-4-(trifenylmetoxy)butánovej kyseliny a trietylamínu

Homogénny roztok 1,890 g (5,4 mmol) produktu z časti

a) v 20 ml chloroformu a 80 μΐ trietylamínu sa mieša po pridaní 1,590 g (5,70 mmol) trifenylchlórmetánu 2,5 hodiny pri teplote miestnosti, na to sa roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej a 150 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Organický podiel sa premyje soľankou a vodou, znova vodou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a filtruje do roztoku 1,0 ml trietylamínu v 30 ml metylénchloridu. Takto získaný roztok sa zahustí až do olejovitého zvyšku, ten sa znova rozpustí v malom množstve zmesi metylénchloridu a etylesteru kyseliny octovej a takto získaný koncentrovaný roztok sa trituruje s etyléterom až sa zakalí. Zmes sa potom očkuje, ponechá sa v pokoji pri teplote miestnosti, vylúčená zrazenina sa odfiltruje, premyje etylesterom kyseliny octovej a etyléterom, potom sa sušením vo vákuu získa 2,538 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielej tuhej látky, t. t. 165 až 170 °C (za rozkladu). Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v chloroforme), Rf= 0,23.

[a]_D = +7,0° (c = 1,2, chloroform).

c) Kyselina (S)-2-ftalimido-6-hydroxyhexánová

K roztoku 1,030 g (7,0 mmol) (+)-L-e-hydroxynorleucínu (pripraveného podľa postupu Bodanszkého a spol., J. Med. Chem. 21, 1030-1035, 1978) v 745 g (7,0 mmol) uhličitanu sodného v 12 ml vody sa pridá 1,495 g (7,0 mmol) N-karbetoxyftalimidu a reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti. Vzniknutý roztok sa po filtrácii ochladí na 0 °C a okyslením 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej vznikne biela zrazenina. Tá sa odfiltruje, suší vo vákuu pri 80 °C hodinu. Výsledkom je 1,297 g zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, 1.1. 162 až 163 °C.

[a]_D= -35,7° (c = 1,3, metanol).

d) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-6,6-dimetoxyhexánovej

Suspenzia 3,752 g (13,5 mmol) produktu z časti c) a 2,178 g (6,7 mmol) uhličitanu cézneho v 44 ml dimetylformamidu sa po pridaní 3,0 ml, teda 6,84 g (48,2 mmol) metyljodidu mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti, zriedi sa potom pridaním etylesteru kyseliny octovej a roztok sa postupne premýva vodou, obsahujúcej malé množstvo hydrogensiričitanu sodného, vodou, 50 %-ným nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, na to sa vysuší bezvodým síranom sodným. Po filtrácii sa vydestilovaním rozpúšťadla z filtrátu vo vákuu získa 3,825 g bezfarebného oleja, ktorý je podľa vyhodnotenia chromatografiou na tenkej vrstve homogénny (acetón a zmes hexánov, 1:1), Rf= 0,37.

K roztoku 1,37 ml, teda 2,00 g (15,7 mmol) oxalylchloridu v 50 ml suchého metylénchloridu sa po vychladení na 78 °C prikvapkáva roztok suchého dimetylsulfoxidu (2,24 ml, teda 2,47 g, 31,6 mmol) v 2 ml metylénchloridu. Po 10-tich minútach sa pridá roztok 3,825 g (13,1 mmol) uvedeného alkohol-esteru v 10 ml metylénchloridu, za ďalších 15 minút 8,0 ml trietylamínu a reakčná zmes sa mieša za chladenia na -78 °C 5 minút, nato sa vyhreje na 0 °C. Po zriedení zmesou etylesteru kyseliny octovej a dietyléteru sa vzniknutý roztok postupne premýva 1 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu vydestilujú rozpúšťadla vo vákuu. Získa sa tým očakávaný aldehyd ako homogénny olej podľa vyhodnotenia chromatografiou na tenkej vrstve (acetón a zmes hexánov 1:1), R_f= 0,48.

K roztoku uvedeného aldehydu v 17 ml metanolu a ml metylénchloridu sa pridá 1,7 ml trimetylesteru kyseliny ortomravčej a potom 180 g monohydrátu kyseliny ptoluénsulfónovej. Zmes sa mieša 1,5 hodín pri teplote miestnosti, na to sa roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej a 50 % roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa po premytí vodou a soľankou vysuší bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu vydestilujú organické rozpúšťadlá vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou (silikagél Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 1:1), frakcie čistého produktu sa spoja a kryštalizovaním zo zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu sa získa 3,45 g analyticky čistej látky, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to ako prvá dávka s nasledujúcou druhou v množstve 215 mg. Sú to biele ihličky, 1.1. 69 až 70 °C, chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 1 : 1), Rf= 0,35.

[a]_D= -27,4° (c = 1,5, chloroform).

Analýza pre C₁₇H₂₁NO₆vypočítané: 60,89% C, 6,31% H, 4,18% N nájdené: 60,80% C, 6,32% H, 4,16% N

e) Metylester kyseliny [S-(R‘,R*)]-2-{[2-ftalimido-4-(trifeny lmetoxy)-1 -oxobutyljamino} -6,6-dimetoxyhexánovej

K suspenzii 2,540 g (7,57 mmol) produktu z časti d) v ml metanolu sa pridá 378 μί, teda 390 mg (7,80 mmol) monohydrátu hydrazinu. Miešaním sa za 10 minút zmes zhomogenizuje, mieša sa potom ďalej pri teplote miestnosti 3 dni, vzniknutá suspenzia sa filtruje, z filtrátu sa vydestiluje metanol vo vákuu, zvyšok sa rozmieša v metylénchloride a po filtrácii sa znova rozpúšťadlo vydestiluje. Vo forme bezfarebného oleja sa takto získa surový amín ako medziprodukt. Medzitým sa k roztoku 4,622 g (7,80 mmol) trietylamínovej soli b) v 50 ml metylénchloridu pridá za chladenia na 0 °C 3,519 g (7,95 mmol) benzotriazol-1-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu, zmes sa mieša 35 minút, ďalej sa pridá roztok uvedeného amínu v 15 ml metylénchloridu a po 10-tich minútach u chovávania za chladenia na 0 °C a dvoch hodinách pri 20 °C sa roztok rozdeľuje medzi etyléter a vodu. Organická vrstva sa premyje nasýteným (z 50 %) roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa rozpúšťadlo vydestiluje vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), etylacetát a hexán 6 : 4, získa sa tým 3,580 g čistej látky, ako je jej zloženie uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 6 : 4), R_f= 0,32. [a]_D= +26,2° (c = 0,6, chloroform).

f) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[2-ftalimido-4-hydroxy-1 -oxobutyl)-amino]-6,6-dimetoxyhexánovej

K roztoku 5,420 g (8,0 mmol) produktu z časti e) v 60 ml metanolu sa pridá 520 mg monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej, reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1,5 hodiny, na to sa rozdeľuje medzi etylester kyseliny octovej a zriedený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Po oddelení fáz sa vodný podiel extrahuje znova do etylesteru kyseliny octovej, spojené organické extrakty sa premyjú soľankou, po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa rozpúšťadla z filtrátu vydestilujú vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 8 : 2) ďalej potom 5 % metanolu v etylesteri kyseliny octovej a získa sa tým 2,860 g zlúčeniny, ako je jej zloženie uvedené v nadpise, a to vo forme bezfarebného oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (etylacetát a zmes hexánov, 7 : 3), R_f = 0,26.

[a]_D= +18,7° (c = 1,3, chloroform).

g) Metylester kyseliny 4S-(4a,7a,10aB)-oktahydro-4-ftalimido-5-oxo-7H-pyrido[2,1-b] [ 1,3]-oxazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 2,10 g (4,95 mmol) produktu z časti Ó v 100 ml metylénchloridu sa pridá 240 mg ionexovej živice Amberlyte^R 15, vopred premývanej postupne 6 N roztokom chlorovodíkovej kyseliny, vodou, tetrahydrofuránom a metylénchloridom. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2,5 hodiny, roztok sa prefiltruje, rozpúšťadla sa vydestilujú a čistením rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 6 : 4) s nasledujúcim použitím 100 % etylesteru kyseliny octovej sa získa 1,40 g zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny.

h) Kyselina (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánová

Do roztoku 30,0 g (181,0 mmol) D-fenylalanínu a 73,5 g bromidu draselného v 365 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej sa vnesie 10,3 g (280 mmol) dusitanu sodného, a to počas hodiny za udržovania teploty reakčnej zmesi na 0 °C. Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C ďalšiu hodinu, potom ešte hodinu pri teplote miestnosti, roztok sa extrahuje do éteru, na to sa roztok v éteri vysuší bezvodým síranom sodným. Po filtrácii sa éter vydestiluje vo vákuu a destiláciou olejovitého zvyšku sa získa 25,7 g kyseliny (R)-2-bróm-3-benzénpropánovej, t. v. 141 °C (73 Pa). Md - +14,5° (c = 2,4, chloroform).

Zmes 7 ml (97,9 mmol) kyseliny tiooctovej a 5,48 g (97,9 mmol) hydroxidu draselného v 180,5 ml acetonitrilu sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti hodinu a 54 minút. Po ochladení v ľadovom kúpeli sa do reakčnej zmesi pridá roztok 20,4 g (89 mmol) kyseliny (R)-2-bróm-3-benzénpropánovej v 20 ml acetonitrilu, čo trvá 10 minút.

Reakčná zmes sa potom mieša pod argónom 5 hodín pri teplote miestnosti, filtruje sa a acetonitril sa po filtrácii vydestiluje vo vákuu. Olej ovitý zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej, roztok sa premyje 10 % roztokom hydrogensiričitanu sodného a vodou. Ďalej sa etylester kyseliny octovej vydestiluje vo vákuu a získa sa tak 19,6 g surového produktu. Surový produkt sa čistí použitím zodpovedajúcej soli dicyklohexylamínu s použitím izopropyléteru ako rozpúšťadla pri kryštalizácii. Analyticky čistá vzorka soli dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej sa pripraví prekryštalizovaním z etylesteru kyseliny octovej, 1.1. 146 až 147 °C.

[a]_D= -39,6° (c = 1,39, chloroform). Analýza pre C_nH₁₂O₃S . C₁₂H₂₃N vypočítané:68,11%C, 8,70%H, 3,45%N, 7,91 %S nájdené: 67,93 % C, 8,71 % H, 3,37% N, 7,94% S

Voľnú kyselinu je možné rozdeľovaním soli dicyklohexylamínu medzi 5 % roztok hydrogensiričitanu sodného a etylesteru kyseliny octovej, čím sa získa kyselina (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánová.

[a]_D= -70,1° (c = 1,91, chloroform). Analýza pre C, iH_t2O₃S vypočítané: 58,91% C, 5,39 % H, 14,30% S nájdené: 58,73 % C, 5,41 % H, 14,53% S

i) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a, 10afi]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-1 -oxo-3-fenylpropyl]amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[l,3]-oxazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 620 mg (1,66 mmol) produktu zo stupňa g) v 10 ml metanolu sa pridá 85 μΐ, teda 88 mg (1,75 mmol) monohydrátu hydrazínu a roztok sa mieša pri teplote miestnosti 44 hodín. Po filtrácii sa tuhý podiel na filtri premyje metanolom, filtrát sa zbaví destiláciou vo vákuu rozpúšťadiel, zvyšok sa trituruje s metylénchloridom, znova sa filtruje a oddestilovanim prchavých podielov sa získa surový amín ako zakalený olej, výťažok asi 400 mg.

K studenému roztoku (0 °C) 410 mg (1,83 mmol) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej a 250 μΐ, teda 182 mg (1,80 mmol) trietylamínu v 10 ml metylénchloridu sa pridá uvedený amín vo forme roztoku v 8 ml metylénchloridu; ďalej sa pridá 808 mg (1,83 mmol) benzotriazol-1 -yloxytris-(dimetylamino)-fosfónium-hexafluórfosfátu a vzniknutý číry, takmer bezfarebný roztok sa mieša 40 minút pri 0 °C a ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti. Zmes sa rozdeľuje medzi zmes etylesteru kyseliny octovej a etyléteru a vodu. Organická vrstva sa premyje postupne 50 %-ným nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu rozpúšťadla vydestilujú. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, 60 až 70 % etylesteru kyseliny octovej v hexánoch) a získa sa tým 601 mg čistej látky, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 6 : 4), R_f= 0,27.

j) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l ,3]-oxazepín-7-karboxylová

Za vychladenia na 0 °C sa roztok 590 mg (1,32 mmol) produktu z časti i) v 10 ml metanolu zbaví kyslíka prebublávaním argónom, nato sa pridá 7 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného kyslíka prebublávaním argónom. Reakčná zmes sa mieša 15 minút, teplota sa nechá potom vystúpiť na 20 °C a v miešaní za zavádzania argónu sa pokračuje počas ďalších 4,5 hodín. Potom sa reakčná zmes okyslí pridaním 5 %-ného roztoku hydrogensiričitanu draselného, zriedi sa vodou, extrahuje do etylesteru kyseliny octovej a získaný extrakt sa premyje vodou a soľankou. Po vysušení bezvodým síranom sodným sa filtrát zahustí na objem asi 3 ml, tento zvyšok sa rozmieša do etylesteru ky seliny octovej a malého množstva hexánu, vylúčený tuhý podiel sa odfiltruje a sušením vo vákuu sa takto získa 413 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, t t. 180,5 °C (za rozkladu). Chromatografia na tenkej vrstve (2 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,39.

[a]_D= -37,6° (c = 0,36, metanol).

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia: kolóna YMC S3 ODS (6,0 na 150 mm), eluovanie % A : 90 % vody, 10 % metanolu, 0,2 % kyseliny fosforečnej, % B : 10 % vody, 90 % metanolu, 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Detekcia: 220 nm, t_R= 6,73 min. (95,7 %) Analýza pre C₂₀H₂₈N₂O₄S .0,12 etylesteru kyseliny octovej vypočítané: 58,05 % C, 6,24 % H, 6,95% N, 7,96% S nájdené: 58,23 % C, 6,34 % H, 6,83% N, 7,81% S

Príklad 2

Kyselina {3R-[3a(S*),6a,9aí3]}-hexahydro-3-[(2-merkapto-1 -oxo-3 -fenylpropyl)amino]-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 -b]-[l,3]-tiazín-6-karboxylová

a) N-[(fcnylmctoxy)karbonyl]-L-cysteín

K roztoku 4,658 (9,16 mmol) N,N'-bis-[(fenylmetoxy)karbonyl]-L-cystínu v 35 ml metanolu sa pridá 23 ml 2 N roztoku kyseliny sírovej, nato sa po malých dávkach vnáša 2,442 g (37,3 mmol) práškového zinku. Reakčná zmes sa zohrieva 1,5 hodiny na 70 °C, ešte za tepla sa filtruje a zahustí na rotačnej odparke. Zvyšný roztok sa extrahuje do etylesteru, roztok v éteri sa premyje vodou a soľankou. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa z filtrátu vydestiluje vo vákuu rozpúšťadlo, zvyšný olej sa rozpustí v chloride uhličitom, roztok sa vychladí na 0 °C a pridaním kryštálkov sa vyvolá vylučovanie zrazeniny. Získaný tuhý podiel sa odfiltruje a premytím studeným chloridom uhličitým sa izoluje 2,647 g produktu. Materský lúh sa zbaví rozpúšťadla a rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej, potom 4 % kyselina octová v etylesteri kyseliny kyseliny octovej) sa získa ďalší produkt, po vykryštalizovaní 246 mg. Celkový výťažok je 2,894 g. Chromatografovanie na tenkej vrstve (5 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), Rf= 0,58.

b) S-acetyl-N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-L-cysteín

K homogénnemu roztoku 2,70 g (10,6 mmol) produktu z časti a) v 30 ml vody, zbavenému kyslíka prebublávaním argónom a obsahujúcemu 2,140 g (21,4 mmol) hydrogenuhličitanu draselného sa pridá 8,0 ml, teda 8,66 g (84,8 mmol) anhydridu kyseliny octovej a po 10 minútach pri teplote miestnosti sa zmes okyslí pridaním 10 %-ného roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Po extrakcii do etyléteru sa získaný roztok premyje dvakrát vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa zbaví rozpúšťadla destiláciou vo vákuu. Zvyšný olej sa destiluje azeotropne trikrát s toluénom a dvakrát so zmesou etyléteru a hexánu, na to olej zkryštalizuje. Zvyšok sa trituruje so zmesou etyléteru a hexánu, odfiltrovaním tuhého podielu sa takto získa 2,19 g produktu, čistého, zloženia, ktoré je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (5 % kyseliny octovej v etylesteri v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,56.

c) Metylester kyseliny (S)-2-{N-[(fenylmetoxy)karbonyl-S-acetyl-L-cysteinyl]-amino}-6,6-dimetoxyhexánovej

K suspenzii 1,158 g (3,45 mmol) metylesteru kyseliny (S)-2-ftalimido-6,6-dimetoxyhexánovej (pozri príprava v príklade 1 d) v 12 ml metanolu sa pridá 176 pl, teda 182 mg (3,63 mmol) monohydrátu hydrazínu, počas 10-tich minút je zmes homogénna, mieša sa pri teplote miestnosti 76 hodín, získaná suspenzia sa filtruje, z filtrátu sa oddestiluje rozpúšťadlo, zvyšok sa rozmieša do metylénchloridu a po filtrácii sa znova oddestiluje rozpúšťadlo. Vo forme bezfarebného oleja sa izoluje surový amín ako medziprodukt. Medzitým sa k čiastočnej suspenzii 1,185 g (3,98 mmol) produktu z časti b) v 14 ml metylénchloridu pridá 555 μΐ, teda 403 mg (3,98 mmol) trietylamínu, získaný homogénny roztok sa ochladí na 0 °C, pridá sa k nemu uvedený amín vo forme roztoku v 7 ml metylénchloridu, ďalej potom 1,762 g (3,98 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórborátu a reakčná zmes sa mieša pri 0 °C 2,5 hodiny, ďalej 45 minút pri teplote miestnosti. Po oddestilovaní rozpúšťadla sa zvyšok rozdeľuje medzi etylester kyseliny octovej a vodu, organický roztok sa premyje 50 % nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zbaví rozpúšťadla. Zvyšok sa rýchlo chromatografuje na silikagéli (Merck, zmes etylesteru kyseliny octovej a hexánov 65 : 35) a získa sa tak 1,15 g čistého produktu zloženia, uvedeného v nadpise, a to vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov 75 : 25) Rf= 0,42. Analýza pre C22H32N₂0gS vypočítané: 54,53% C, 6,66% H, 5,78% N, 6,62% S nájdené: 54,79 % C, 6,72 % H, 5,77% N, 6,95 % S

d) Metylester kyseliny [3R-(3a,6a,9afi)]-l-hexahydro-3-{[(fenylmetoxy)karbonyl]amino}-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,l-b]-[ 1,3]-tiazín-6-karboxylovej

Do roztoku 1,040 g (2,15 mmol) produktu z časti c) v 12 ml metanolu sa po vypudení vzduchu argónom a po vychladení na 0 °C pridá 490 μΐ, teda 463 mg (2,14 mmol) roztoku nátriummetoxidu v metanole (25 % podľa hmotnosti). Za 20 minút sa reakčná zmes rozruší pridaním nasýteného roztoku chloridu amónneho, zriedi sa vodou a všetko sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej. Získaný extrakt sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu vydestiluje rozpúšťadlo. Zvyšok sa opäť rozpustí v 200 ml metylénchloridu a po pridaní 820 mg ionexovej živice Amberlyte^R15, vopred premytej postupne 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofúránom a metylénchloridom sa všetko mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny. Potom sa roztok filtruje, filtrát sa zbaví rozpúšťadla a rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov (65 : 35) sa získa 757 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme bezfarebného oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 75 : 25), Rf= 0,58.

e) Metylester kyseliny [3R-(3a,6a,9aB)]-hexahydro-3-amino-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 -b]-[ 1,3]tiazín-6-karboxylovej

Roztok 752 mg (1,99 mmol) produktu zo stupňa d) v 15 ml suchého metylénchloridu sa zmiešava pri teplote miestnosti so 620 μΐ, teda 872 mg (4,36 mmol) trimetylsilánu, reakčná zmes sa mieša 3 hodiny, rozhasí sa vodou a po pridaní malého množstva 10 %-ného roztoku kyseliny chlorovodíkovej sa všetko extrahuje do etyléteru. Vrstvy sa oddelia, roztok v éteri sa extrahuje ešte vodou, spojené vodné podiely sa alkalizujú na pH 13 pridaním 10 %-ného roztoku hydroxidu sodného, nasleduje dvojitá extrakcia do metylénchloridu. Spojený roztok v uvedenom rozpúšťadle sa vysuší bezvodým síranom sodným, roztok sa prefiltruje a filtrát sa zbaví rozpúšťadla. Výsledkom je 290 mg surového produktu zloženia, ako je uvedené v nadpise, bezfarebný olej, chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), R_f- 0,38.

f) Metylester kyseliny {3R-[3a (S*),6a,9aB])-hexahydro-3-[2-(acetyltio)-1 -oxo-3-fenylpropyl] amino-4-oxo-2H,6H-pyrido- [2,1 -b]-[ 1,3]-tiazín-6-karboxy lovej

K vychladenému roztoku (0 °C) 294 mg (1,31 mmol) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej a 180 μΐ, teda 131 mg (1,29 mmol) trietylamínu v 8 ml metylénchloridu sa pridá roztok 287 mg (1,17 mmol) produktu z časti e) v 6 ml metylénchloridu. Ďalej sa pridá 575 mg (1,30 mmol) benzotriazol-1 -yloxytris-(dimetylamino)-fosfónium hexafluórfosfátu a číry, takmer bezfarebný roztok sa mieša pri 0 °C počas 1 hodiny, ďalej ešte hodinu pri teplote miestnosti. Po oddestilovaní rozpúšťadla na rotačnej odparke sa zvyšok roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej a 5 %ný roztok hydrogensiričitanu draselného. Organická vrstva sa premýva postupne vodou, 50 %-ným nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa rozpúšťadlo oddestiluje. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 1 : 1) a získa sa tak 412 mg čistej látky zloženia, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov), R_f= 0,27.

[a]_D= -107,0° (c = 0,6, chloroform).

g) Kyselina {3R-[3a(S’),6a,9aB]}-hexahydro-3-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)amino]-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 -b]-[l,3]-tiazín-6-karboxylová

K roztoku 406 mg (0,90 mmol) produktu z časti í) v 5 ml metanolu, vychladenému na 0 °C a zbavenému kyslíka prebublávaním argónu sa pridá 5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného kyslíka argónom. Po hodinovom miešaní sa teplota roztoku nechá vystúpiť na teplotu miestnosti a v miešaní pod argónom sa pokračuje ďalšiu hodinu. Zmes sa ďalej okyslí pridaním 5 %-ného roztoku hydrogensiričitanu draselného, zriedi sa vodou a extrahuje do etylesteru kyseliny octovej. Roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje vodou, soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a z pripraveného filtrátu sa vypudí rozpúšťadlo. Zvyšok sa čistí dvakrát rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, 2 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej). Frakcie sa testujú z hľadiska produktu vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou. Zodpovedajúce vhodné frakcie sa spoja, zbavia sa rozpúšťadla a zvyšok sa destiluje dvakrát azeotrópne s etylesterom kyseliny octovej. Zvyšok sa potom rozpustí v malom množstve etylesteru kyseliny octovej, koncentrát sa trituruje s hexánom, rozpúšťadlá sa oddestilujú a zvyšok sa suspenduje v hexáne, ktorý sa opäť oddestiluje a sušením zvyšku sa získa 98,3 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme tvrdej bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (2 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,46.

[a]_D= -57,0° (c = 0,4, chloroform).

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia: kolóna YMC S3 ODS (6,0 na 150 mm), eluovanie:

% A : 90 % vody, 10 % metanolu, 0,2 % kyseliny fosforečnej, % B : 10 % vody, 90 % metanolu, 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Detekcia pri 220 nm, t_R = 8,33 min. (retenčný čas), 95,0 %.

Analýza pre C₁₈H₂₂N₂O₄S₂.0,2 etylesteru kyseliny octovej vypočítané: 54,79% C, 5,77% H, 6,80%N, 15,56% S nájdené: 54,59 % C, 6,04 % H, 6,59% N, 15,17% S

Príklad 3

Kyselina 4S-[4a(R*),7a, 1 Oafl] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{[2-ftalimido-4-(acetyltio)-1 -oxobutyl] amino} -6,6-dimetoxyhexánovej

K studenému roztoku (0 °C) 1,143 g (4,36 mmol) trifenylfosflnu v 20 ml tetrahydrofuránu sa pridá 860 μΐ, teda 883 mg (4,37 mmol) diizopropylazidodikarboxylátu. Počas 5-tich minút vznikne biela zrazenina a po 30-tich minútach sa pridá roztok 928 mg (2,19 mmol) metylesteru kyseliny S-(R’,R’)-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)aminoJ-6,6-dimetoxyhexánovej, ako bol opísaný v príklade lf), v 8 ml tetrahydrofuránu a ďalej 312 μΐ, teda 332 mg (4,36 mmol) kyseliny tiooctovej. Reakčná zmes sa mieša pri 0 °C počas 1,25 hodín a potom sa roztrepáva medzi 50 % nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného a etylester kyseliny octovej. Organický podiel sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu rozpúšťadlo vydestiluje. Zvyšok sa rozpustí v malom množstve etylesteru kyseliny octovej a malým podielom hexánu sa vyzráža trifenylfosflnoxid. Zmes sa filtruje, filtrát sa spracuje rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a hexány, 65 : 35) a získa sa tým 894 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise vo forme bezfarebného oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej : zmes hexánov 75 : 25), R_f= 0,43.

b) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] - [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 814 mg (1,65 mmol) produktu z časti a) v 15 ml metanolu sa po ochladení na 0 °C a vypudení kyslíka argónom pridáva pri uvedenej teplote 1,05 ml (4,6 mmol) 25 %-ného roztoku (podľa hmotnosti) nátriummetoxidu v metanole, za 5 minút sa reakčná zmes rozruší pridaním nasýteného roztoku chloridu amónneho a po zriedení vodou sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej. Organický extrakt sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zbaví rozpúšťadla. Zvyšok sa opäť rozpustí v 180 ml metylénchloridu a roztok sa mieša s 285 mg Amberlytu^R 15, ktorý bol vopred postupne premývaný 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofuránom a potom metylénchloridom. Miešanie počas 46 hodín pri teplote miestnosti je zakončené filtráciou a po oddestilovaní rozpúšťadla nasleduje rýchla chromatografia na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 1:1), čim sa získa 314 mg zlúčeniny, ako je jej zloženie uvedené v nadpise vo forme bielej peny. Triturovaním tejto peny a etyléterom sa získa čistý produkt vo forme bielej tuhej látky, t. t. 147 až 148 °C, chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 75 : 25), R_f= 0,56.

[a]_D= -143,2° (c = 0,6, chloroform).

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10afi])-oktahydro-4- {[2-(acetyltio)-1 -oxo-3 -fenylpropyl] amino} -5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

280 mg (0,72 mmol) produktu z časti c) sa rozpustí v 8 ml metanolu, do roztoku sa pridá 42 μΐ, t. j. 43,3 mg (0,86 mmol) monohydrátu hydrazinu a reakčná zmes sa mieša 67 hodín pri teplote miestnosti, filtruje sa a filtrát sa spojí s metanolickým podielom na prepláchnutie tuhej látky na filtri. Po oddestilovaní rozpúšťadla sa zvyšok trituruje s metylénchloridom, znova sa filtruje a zahustením filtrátu sa získa surový amín ako žltý olej, výťažok asi 205 mg.

Do roztoku 178 mg (0,79 mmol) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej a 111 μΐ, teda 80 mg (0,80 mmol) trietylamínu sa po vychladnutí na 0 °C v prostredí 3 ml metylénchloridu pridá uvedený amín vo forme roztoku v 7 ml metylénchloridu. Ďalej sa pridá 353 mg (0,80 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu, takto pripravený roztok sa mieša hodinu pri 0 °C, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa oddestiluje a zvyšok sa roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej a 5 %-ný roztok hydrogensiričitanu draselného.

Organický podiel sa premýva postupne vodou, z 50 % nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa z filtrátu vydestiluje rozpúšťadlo. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, etylester kyseliny octovej a zmes hexánov, 1 : 1) a získa sa tým 272 mg produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Pri teplote miestnosti sa 227 mg (0,49 mmol) produktu z časti c) rozpustí v 5 ml metanolu, roztok sa zbaví kyslíka prebublávaním argónom a pridá sa 8 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, zbaveného taktiež kyslíka argónom. Zmes sa mieša hodinu, po okyslení 10 %-ným roztokom kyseliny chlorovodíkovej sa zriedi vodou a nasleduje extrakcia do etylesteru kyseliny octovej. Organický extrakt sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšný tuhý podiel sa rozmieša do etylesteru kyseliny octovej, tuhý podiel sa odfiltruje a filtrát sa spracuje rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck, 1 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej). Vhodné frakcie sa spoja, zbavia rozpúšťadiel a triturovaním zvyšku s etylesterom kyseliny octovej a dietyléterom sa získa ďalší podiel tuhej látky. Spojením tuhých podielov sa izoluje celkom 150 mg produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise, 1.1. 216 až 217 °C (za rozkladu). Chromatografia na tenkej vrstve (2 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,56.

[a]_D= -72,6° (c = 0,28, dimetylformamid).

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia: kolóna YMC S3 (6,0 na 150 mm), eluovanie použitím:

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Detekcia pri 220 nm, retenčná čas = 9,48 min. (97,4 %).

Analýza pre Ci₅H₂₄N₂O₄S₂. 0,14 etylesteru kyseliny octovej vypočítané: 55,82% C, 6,02% H, 6,66% N, 15,24% S nájdené: 55,53 % C, 6,01 % H, 6,63 % N, 14,91 % S

SK 282529 Β6

Príklad 4

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-oxazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-ňalimido-5-oxo-5-(fenylmetoxy)pentánová

Do roztoku 17,49 g (73,70 mmol) benzylesteru kyseliny L-glutamovej v 180 ml vodného roztoku 7,81 g (73,70 mmol) uhličitanu sodného a 120 ml dioxánu sa pridá 16,50 g (75,27 mmol, 1,02 ekv.) N-karbetoxyftalimidu, reakčná zmes sa mieša 4,5 hodiny, potom sa okyslí pridaním 30 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej a všetko sa extrahuje dvakrát vždy do 40 ml etylesteru kyseliny octovej. Spojený roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje použitím 200 ml 50 %-nej soľanky, 200 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením a sušením vo vákuu získa 41,4 g surového oleja. Ten sa rozpustí v 100 ml etyléteru, k roztoku sa pridá 14 ml dicyklohexylamínu a všetko sa ponechá v pokoji v chladničke cez noc. Potom sa etyléter oddestiluje na rotačnej odparke, olejovitý zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej a hexáne, vylúčený kryštalický podiel sa odsaje, premyje hexánom a sušením vo vákuu sa takto získa 21,21 g zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, vo forme soli s dicyklohexylamínom. Suspenzia tejto soli v 200 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje tromi podielmi po 50 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, ďalej použitím 50 ml soľanky, všetko sa vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu izoluje 13,5 g produktu, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (3 % kyseliny octovej v zmesi 9 : 1 etylesteru kyseliny octovej a heptánu), R_f= 0,30.

b) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxo-5-(fenylmetoxy)-pentánovej

Do roztoku 13,22 g (36,0 mmol) produktu z časti a) a 5,86 g (18,0 mmol) uhličitanu cézneho v 100 ml dimetylformamidu sa pridá 8,1 ml (129,6 mmol, 3,6 ekv.) metyljodidu a vzniknutý žltý roztok sa mieša 2,5 hodiny, potom sa roztrepáva medzi 300 ml etylesteru kyseliny octovej a 250 ml vody. Organický extrakt sa premyje použitím 200 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa takto 13,68 g žltého oleja. Ten sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 20 cm za eluovania zmesou 30 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne. Zodpovedajúce frakcie sa spoja a zahustením sa získa 10,0 g produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej : hexán), R_f= 0,45.

c) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-4-(karboxy)-butánovej

Do roztoku 10,0 g (26,22 mmol) produktu z časti b) v 115 ml etylesteru kyseliny octovej sa pridá 1,90 g 20 %-ného hydroxidu paladnatého na aktívnom uhlí vo funkcii katalyzátora a získaná suspenzia sa mieša 2,5 hodiny v uzavretej nádobe v atmosfére vodíka. Po filtrácii sa podiel na filtri premyje starostlivo etylesterom kyseliny octovej a zahustením spojených organických roztokov vo vákuu, ako aj vysušením produktu vo vákuu sa získa 7,29 g surového produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise, vo forme bielej tuhej látky, t. t. 137 až 138 °C. Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), R_f= 0,43.

c) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxo-5-(etyltio)-pentánovej

Do roztoku 7,27 g (24,95 mmol) produktu z časti c) v 125 ml metylénchloridu sa za chladenia na 0 °C a pod argónom pridá 4,81 ml (64,92 mmol, 2,6 ekv.) etántiolu, 609 mg (4,99 mmol, 0,2 ekv.) hydrochloridu etyl-3-(3-dimetylamino)-propylkarbodiimidu, reakčná zmes sa ďalej mieša 2 hodiny pri teplote 0 °C, hodinu pri teplote miestnosti, po zahustení reakčnej zmesi sa zvyšok zriedi pridaním 400 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje použitím 200 ml hydrogensíranu draselného, 200 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 200 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Sušením zvyšku vo vákuu sa získa takto 8,30 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to v olejovitej forme. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej/hexán, 1:1), R_f= 0,47.

e) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxopentánovej

Do suspenzie 8,30 g (24,75 mmol) produktu zo stupňa

d) a 1,24 g 10 %-ného paládia na uhlí v prostredí 150 ml acetonitrilu sa pod argónom prikvapkáva 7,91 ml (49,5 mmol, 2 ekv.) trietylamínu. Po miešaní pri teplote miestnosti 45 minút sa zmes filtruje a filtrát sa zahustí s tým, že sa zvyšok suší vo vákuu. Tento surový zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu (5 na 25 cm) za eluovania zmesou 25 % etylesteru kyseliny octovej/hexáne (41.) a potom 35 % etylesteru kyseliny octovej/hexáne (21.) Zodpovedajúce frakcie sa spoja a získa sa tak 5,60 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 :1), R_f= 0,32

f) Metylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5,5-dimetoxypentánovej

K roztoku 5,60 g (20,34 mmol) produktu z časti e) v 60 ml metanolu a 40 ml metylénchloridu sa vnesie 3,8 ml (34,59 mmol), 1,7 ekv.) trimetylesteru kyseliny ortomravčej a 280 mg monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej. Reakčná zmes sa mieša 1,5 hodiny pri teplote miestnosti, rozruší sa potom pridaním 2 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, zahustí sa a zvyšok sa rozdeľuje medzi 400 ml etylesteru kyseliny octovej a 100 ml vody. Roztok v organickom rozpúšťadle sa premyje použitím 100 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 100 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí, surový' olejovitý zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 20 cm za eluovania zmesou 30 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne (21.). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia a sušením vo vákuu sa izoluje 6,20 g produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovcj/hcxán, 1:1), Rf= 0,40.

g) Metylester kyseliny (S)-2-amino-5,5-dimetoxypentánovej

Do roztoku 6,16 g (19,18 mmol) produktu z časti f) v 125 ml metanolu sa pridá 0,98 ml (20,14 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazínu, reakčná zmes sa mieša 6 dní pri teplote miestnosti, vzniknutá suspenzia sa filtruje, filtrát sa zahustí, zvyšok sa trituruje s metylénchloridom, opäť filtruje a filtrát sa zahustí. Sušením vo vákuu sa izoluje 3,57 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme zakaleného oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), Rf= 0,41.

h) Metylester kyseliny [S-(R*,R')]-2-{[2-ftalimido-4-(trifenylmetoxy)-l-oxobutyl]amino}-5,5-dimetoxypentánovej

V 100 ml metylénchloridu sa rozpustí 11,62 g (19,60 mmol, 1,05 ekv.) soli trietylamínu a kyseliny (S)-2-ftalimido-4-(trifenylmetoxy)-butánovej, ako bola pripravená v príklade lb) a po ochladení na 0 °C sa pridá 8,67 g (19,60 mmol, 1,05 ekv.) benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C 45 minút, potom sa pridá roztok

3.57 g (18,67 mmol) produktu z časti g) v 50 ml metylénchloridu. Po 10 minútach za chladenia na 0 °C a 2 hodinách pri teplote miestnosti sa roztok roztrepáva medzi 300 ml etylesteru kyseliny octovej a 100 ml vody. Roztok v organickom rozpúšťadle sa premyje použitím 100 ml z 50 % nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 100 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 25 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 :1), získa sa tak

8.58 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 : 1), Rf= 0,20.

i) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)amino]-5,5-dimetoxypentánovej

Do roztoku 8,58 g (12,91 mmol) produktu z časti h) v 100 ml metanolu sa pridá 850 g monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej, reakčná zmes sa mieša 3,5 hodiny pri teplote miestnosti a rozdeľuje sa potom medzi 200 ml etylesteru kyseliny octovej a 100 ml z 10 % nasýteného hydrogenuhličitanu sodného. Fáza sa oddelí, vodný podiel sa extrahuje do 100 ml etylesteru kyseliny octovej, spojené extrakty v uvedenom rozpúšťadle sa premyjú soľankou, po vysušení bezvodým síranom horečnatým a nevyhnutnej filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu (5 na 20 cm) za eluovania zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu 8 : 2 (11.), ďalej s použitím 1 % metanolu v etylesteri kyseliny octovej (21.). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia vo vákuu a sušením vo vákuu sa získa 4,33 g produktu zloženia, ako je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,21.

j) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-oxazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 1,89 g (4,48 mmol) produktu z časti i) v 90 ml metylénchloridu sa pridá 400 mg ionexovej živice Amberlyte” 15, ktorá bola predtým premytá následne 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofuránom a metylénchloridom. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri teplote miestnosti, filtruje sa, filtrát sa zahustí a rýchlou chromatografiou na kolóne silikagélu (5 na 15 cm) za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (6 : 4) sa získa 1,51 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,32.

k) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-oxazepin-7-karboxylovej

Do roztoku 764 mg (2,13 mmol) produktu z časti j) v 15 ml metanolu sa pridá 109 μΐ (2,24 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazínu a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 4 dni. Potom sa filtruje a tuhý podiel sa premyje metanolom. Filtrát sa zahustí, zvyšok sa trituruje s metylénchloridom a po novej filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu (2 na cm) za eluovania roztokom 3 % metanolu v metylénchloride (31.), potom s použitím 10 % metanolu v metylénchloride (11.). Potrebné frakcie sa spoja a zahustením sa získa 451 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), R_f= 0,18.

l) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9afl]}-oktahydro-4- {[2-(acetyltio)-1 -oxo-1 -fenylpropyljamino} -5-oxopyrolo[2,1 -b]-[l ,3]-oxazepín-7 -karboxylovej

Suspenzia 870 mg (2,14 mmol, 1,14 ekv.) soli dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-acetyltio-3-benzénpropánovej, pripravenej, ako to bolo opísané v príklade lh), v 70 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje piatimi podielmi po 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, ďalej s použitím 20 ml 50 %-ného roztoku soľanky a 20 ml soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a ektíve príkladu 6 podľa predkladaného vynálezu a pri použití referenčného transdermálneho produktu, známeho podTáto voľná kyselina sa rozpustí v 10 ml suchého metylénchloridu, roztok sa vychladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C, pridá sa 298 μΐ (2,14 mmol) trietylamínu a potom roztok (430 mg, 1,88 mmol) produktu z časti k) v 10 ml metylénchloridu a ešte 947 mg (2,14 mmol) benzotriazol-1-yloxytris-(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu (1,14 ekv.). Vzniknutý roztok sa mieša za chladenia na 0 °C počas 50-tich minút, ďalej pri teplote miestnosti 3 hodiny. Reakčná zmes sa zahustí, zriedi pridaním 150 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje použitím 50 ml 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, vodou (50 ml), ďalej použitím 50 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vodou (50 ml) a 50 ml soľanky. Po vysušení a filtrácii sa filtrát zahustí do sucha. Surový produkt sa absorbuje na Celite^R a chromatografuje sa na kolóne silikagélu (5 na 10 cm) za eluovania zmesou 60 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne (31). Vhodné frakcie sa spoja a zahustia. Získa sa tým 779 mg čistého produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 6 : 4), R_f=0,17.

m) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b]-[l,3]-oxazepín-7-karboxylová

Roztok 754 mg (1,74 mmol) produktu z časti 1) v 15 ml etanolu sa zbaví kyslíka zavádzaním argónu počas 30 minút, ochladí sa na 0 °C v kúpeli a ľadu a soli a potom sa do tohto roztoku prikvapkáva vopred pripravený roztok, zbavený kyslíka argónom (30 minút), 12 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, pričom počas pridávania sa stále zavádza argón. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny za chladenia na 0 °C, okyslí sa pri teplote 0 °C pridaním 5 %-ného hydrogensulfátu draselného na pH 1, potom nasleduje extrakcia etylesterom kyseliny octovej, a to tromi podielmi po 100 ml. Spojený organický extrakt sa premyje použitím 100 ml 50 %-ného roztoku soľanky, ďalej s použitím 100 ml soľanky, po vysušení bezvodým síranom sodným sa roztok filtruje, filtrát sa zahustí do sucha a sušením vo vákuu sa získa biela pena. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 2,5 na 15 cm za eluovania pomocou 500 ml etylesteru kyseliny octovej, potom 0,3 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej (11.). Vhodné frakcie sa spoja, zahustia, znova sa odparia s použitím chloroformu a sušením vo vákuu cez noc pri 50 °C nad oxidom fosforečným sa získa zlúčenina, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej peny, 1.1. 88 až 92 °C. [a]_D= -63,8° (c = 1,0, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (1 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,24.

‘H-NMR: 400 MHz, CDC1₃: d 1,80 - 2,31 (m's, 7H), 3,10 (m, 1H), 3,27 (m, 1H), 3,63 (m, 1Η), 4,0 (m, 1Η), 4,20 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 7,19 - 7,30 (m's, 5H), 7,52 (d, 1H, J = 6 Hz).

¹³C-NMR: 100 MHz, CDCly. d 26,4, 32,0, 32,6, 41,2,44,2, 53,0, 59,4, 70,6, 89,47, 126,9, 128,4, 129,3, 137,4, 171,2, 171,6, 174,8

Analýza pre C₁₈H₂2N2O₅S . 0,85 H₂O vypočítané: 54,91 % C, 6,07% H, 7,12 %N, 8,14% S nájdené: 54,85 % C, 5,68 % H, 7,18% N, 8,14% S

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia: retenčný čas

13,5 min. (96,7 %, UF 220), kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 30 % B: a až 100 % B: a, lineárny gradient 25 minút.

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: l,5ml/min.

Príklad 5 Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[2-ftalimido-4-(acetyltio)-1 -oxobutyl]amino-5,5-dimetoxypentánovej

Do roztoku 1,26 g (4,79 mmol, 1,5 ekv.) trifenylfosfitu v 15 ml suchého tetrahydrofuránu sa za chladenia na 0 °C pridá 943 μΐ (4,79 mmol) diizopropylesteru kyseliny azodikarboxylovej, vzniknutá biela suspenzia sa mieša 30 minút a potom sa do nej vnesie roztok 1,35 g (3,20 mmol) metylesteru kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)amino]-5,5-dimetoxypentánovej (príprava pozri príklad 4i) v 15 ml suchého tetrahydrofuránu, potom 343 μΐ (4,79 mmol) kyseliny tiooctovej a reakčná zmes sa opäť mieša pri teplote 0 °C počas 1,5 hodiny. Ďalej sa roztrepáva medzi 150 ml etylesteru kyseliny octovej a 100 ml 50 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vrstva organického rozpúšťadla sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým, filtruje sa a filtrát sa zahustí. Zvyšok sa adsorbuje na Celite^R, suší vo vákuu a ďalej sa surový materiál čistí chromatografiou na kolóne silikagélu 2,5 na 15 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (11) a zmesou týchto rozpúšťadiel 6 : 4 (11.). Zodpovedajúce frakcie sa spoja a zahustením vo vákuu sa takto získa 1,35 g zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, vo forme oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej : hexán, 8 : 2), R_f= 0,42.

b) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-merkapto-l-oxobutyl)amino]-5,5-dimetoxypentánovej

Roztok 1,33 g (2,76 mmol) produktu z časti a) v 25 ml metanolu sa zbaví kyslíka prebublávaním argónom a po vychladnutí na 0 °C sa k nemu pridá 1,52 ml (6,63 mmol, 2,4 ekv.) hmotnostné 25 %-ného roztoku nátriummetoxidu v metanole. Za 3 minúty sa reakčná zmes rozruší pridaním 3 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho, zriedi sa vodou a extrahuje do etylesteru kyseliny octovej (100 ml). Extrakt v tomto rozpúšťadle sa premyje použitím 50 ml vody, 50 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 15 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu, najskôr 1 : 1 (31), potom 8 : 2 (21). Frakcie s očakávaným produktom sa spoja a zahustením sa takto ziska 853 mg zlúčeniny uvedenej v nadpise, ako olej. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej: hexán, 8 : 2), R_f = 0,43.

c) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxopyrolo[2,l-b][1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Roztok 847 mg (1,93 mmol) produktu z časti b) v metylénchloride (20 ml) sa mieša so 700 mg ionexovej živice Amberlyte“ 15, ktorá bola predtým premývaná postupne 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofúránom a metylcnchloridom. Všetko sa mieša pri teplote miestnosti 17 hodín, potom sa zmes filtruje, roztok sa zahustí a rýchlo sa chromatografuje na kolóne silikagélu

2,5 na 15 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 1), čím sa získa 691 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, vo forme bielej peny. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán (8 : 2), R_f~ 0,48.

d) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

K roztoku 899 mg (2,40 mmol) produktu z časti c) v 17 ml metanolu sa pridá 122 μΐ (2,52 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazínu a reakčná zmes sa mieša 3 dni pri teplote miestnosti. Po filtrácii sa tuhý podiel premyje metanolom, filtrát sa zahustí, zvyšok sa trituruje s metylénchloridom, opäť sa filtruje, zahustí a sušením vo vákuu sa získa 572 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, vo forme zakaleného oleja. Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), R_f= 0,13.

e) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-([2-(acetyltio)-1 -oxo-3 -fenylpropyl] amino} -5-oxopyrolo[2,1-b][1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Suspenzia 1,045 g (2,58 mmol, 1,1 ekv.) soli kyseliny (S)-2-(acetyltio)benzénpropánovej s dicyklohexylamínom, ako bola pripravená v príklade lh) v 100 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje použitím piatich podielov po 25 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, 25 ml 50 %-ného roztoku soľanky a 25 ml roztoku soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Sušením vo vákuu počas jednej hodiny sa získa kyselina (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánová.

Takto získaná vodná kyselina sa rozpustí v 10 ml suchého metylénchloridu, roztok sa ochladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C, pridá sa 360 μΐ (2,58 mmol) trietylamínu, ďalej 1,141 g (2,58 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu a roztok 572 mg (2,34 mmol) produktu z časti d) v 10 ml metylénchloridu. Takto pripravená reakčná zmes sa mieša 30 minút pri teplote 0 °C, potom ešte 2,5 hodiny pri teplote miestnosti, zahustí sa, zvyšok sa zriedi etylesterom kyseliny octovej (100 ml), roztok sa premyje s použitím 50 ml 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, 50 ml vody, 50 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml soľanky. Po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha, surový produkt sa adsorbuje na Celíte“ a chromatografuje na kolóne silikagélu 5 na 10 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu, najskôr s obsahom 25 % (51.), potom 30 % (21.), 35 % (21.) a 40 % (21.) uvedeného esteru. Zodpovedajúce frakcie sa spoja a opäť chromatografujú s použitím sústavy toho istého gradienta. Zodpovedajúce frakcie sa opäť spoja a zahustia, čím sa získa 490 mg čistej látky, ktorej zloženie je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1), R_f = 0,16.

f) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9afil)-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l -b][l ,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 490 mg (1,09 mmol) produktu z časti e) v zmesi 8 ml metanolu a 4 ml tetrahydrofuránu sa zbaví kyslíka argónom, ktorý sa zavádza 30 minút, ochladí sa v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C, potom sa prikvapká 10 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, ktorý bol taktiež zbavený kyslíka zavádzaním argónu počas 30 minút a argón sa potom zavádza ďalej po celý čas pridávaním lúhu. Reakčná zmes 3 a ďalej mieša 3 hodiny za chladenia na 0 °C, pri tej istej teplote sa okyslí pridaním 5 %-ného hydrogensíranu draselného až na pH 2, nasleduje extrakcia trikrát vždy do 75 ml etylesteru kyseliny octovej. Extrakty sa spoja, všetko sa premyje použitím 75 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha a sušením zvyšku vo vákuu sa získa 489 mg bielej peny. Tento zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu

2,5 na 15 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a heptánu 9:1, 400 ml tej istej zmesi s obsahom 0,5 % kyseliny octovej (11.). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zvyšok sa po zahustení oddestiluje s metylénchloridom a ďalším sušením vo vákuu sa získa 428 mg produktu. Čistý materiál sa kryštalizuje zo zmesi etylesteru kyseliny octovej, metanolu a hexánu. Kryštály sa odsajú, starostlivo sa premyjú etyléterom a sušením vo vákuu počas noci pri teplote 40 °C nad oxidom fosforečným sa získa 305 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielych kryštálov, 1.1. 206 až 208 °C.

[a]n= -96,3° (c = 1,0, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve, 5 % kyseliny octovej v zmesi etylesteru kyseliny octovej a heptánu, R_f= 0,29.

’H-NMR: 400 MHz, CDCl₃/2 kvapky CD₃OD: d 1,94 (m, 1H), 2,02 (d, 1H, J = 9 Hz), 2,08 (m, 1H), 2,20 - 2,55 (M's, 4H), 2,95 (m, 1H), 3,08 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 3,27 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 4,54 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 4,60 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 7,18 - 7,34 (m's, 5H), 7,63 (d, 1H, J = 6 Hz).

¹³C-NMR: 100 MHz, CDCl₃/2 kvapky CD₃OD: d 27,6, 31,1, 32,1 32,9, 41,1, 44,0, 52,8, 60,4, 62,2, 126,77, 128, 3, 129,0,137,4,170,2,171,4,172,6

Analýza pre C₁₈H₂₂N₂O₄S₂.0,08 H₂O vypočítané: 54,60% C, 5,64% H, 7,07% N, 16,19% S nájdené: 54,65 % C, 5,54 % H, 7,02% N, 15,80% S

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 13,0 min. (98,8 %, UF 220), kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 40 % B: A - 100 % B : A, lineárny gradient 25 minút,

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Príklad 6

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aU])-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3J-tiazepín-7-karboxylová

Produkt z príkladu 5 sa dá pripraviť tiež takto:

a) N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-homoserín

23,57 g (94,58 mmol) N-(benzyloxykarbonyloxy)-sukcínimidu sa vnesie do roztoku 10,24 g (85,98 mmol) L-homoserínu a 7,95 g (94,58 mmol, 1,1 ekv.) hydrogenuhličitanu sodného v zmesi 100 ml vody a 100 ml acetónu. Reakčná zmes sa mieša počas noci pri teplote miestnosti, a cetón sa oddestiluje za zníženého tlaku na rotačnej odparke, vodný roztok sa pretrepáva dvakrát vždy so 75 ml metylénchloridu. Vodná vrstva sa potom okyslí na pH 2 pridaním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, nasleduje dvakrát extrakcia do 250 ml etylesteru kyseliny octovej, extrakty sa spoja a organická vrstva sa premyje dvakrát s použitím 100 ml vody, potom soľankou, vysušením nad bezvodým síranom sodným sa po filtrácii a zahustení získa zvyšok a sušením tohto vo vákuu 19,54 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise, ako biela tuhá látka.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej - butanol - kyselina octová - voda 2 : 1 : 1 : 1), R_f= 0,74.

b) N-[(fenylmetoxy)-karbonyl] -0-(trifenylmetyl)-L-homoserín

Do suspenzie 19,50 g (77,04 mmol) produktu z časti a) v 250 ml chloroformu sa pridá 12,35 ml (88,59 mmol, 1,14 ekv.) trietylamínu, ďalej sa pridá do homogénnej zmesi 24,70 g (88,59 mmol) trifenylmetylchloridu a reakčná zmes sa mieša 3 hodiny. Zahustí sa ďalej za zníženého tlaku na rotačnej odparke, nasleduje roztrepávanie medzi 400 ml etylesteru kyseliny octovej a 200 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného. Organická vrstva sa premyje použitím 200 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát vždy s použitím 200 ml vody, ďalej 200 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa 45,4 g látky. Tento zvyšok sa chromatografuje na kolóne silikagélu 10 na 30 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu 8 : 2. Výsledkom je 8,76 g čistej látky, ktorej zloženie je uvedené v nadpise.

c) Metylester (S)-2-amino-5,5-dimetoxypentánovej kyseliny

Do roztoku 3,35 g (10,43 mmol) metylesteru kyseliny (S)-2-ftalimido-5,5-dimetoxypentánovej (príprava pozri príklad 4f) v 70 ml metanolu sa pridá 531 μΐ (10,95 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazínu a roztok sa mieša 6 dní pri teplote miestnosti. Po filtrácii sa tuhý podiel na filtri premyje metanolom, filtrát sa zahustí, zvyšok sa trituruje s metylénchloridom, opäť nasleduje filtrácia, zahustením filtrátu a sušením vo vákuu sa vo výťažku 1,89 získa vo forme zakaleného oleja produkt, ktorého zloženie je uvedené v nadpise.

Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), Rf= 0,39.

d) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-{2-[(fenylmetoxy)-karbonylj-amino} -4-(trifenylmetoxy)-1 -oxobutyl-amino-5,5 -dimetoxypentánovej

Do roztoku 5,28 g (10,65 mmol, 1 ekv.) produktu z časti b) v 50 ml suchého metylénchloridu sa za teploty 0 °C pridá 1,48 ml (10,65 mmol) trietylamínu a ďalej 1,85 g (9,68 mmol) produktu z časti c) v prostredí 30 ml suchého metylénchloridu a ešte 4,71 g (10,65 mmol, 1,1 ekv.) benzotriazol-1 -yloxytris-(dimety lamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti, potom sa roztrepáva medzi 100 ml etylesteru kyseliny octovej a 150 ml vody. Vrstva v organickom rozpúšťadle sa premyje s použitím 200 ml z 50 % nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát s použitím 200 ml soľanky. Vysuší sa nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje sa a filtrát sa zahustí, potom sa adsorbuje na Celite^R a čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 7 na 20 cm za eluovania najskôr zmesou 40 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne (31.), ďalej % etylesteru kyseliny octovej v hexáne (21), čím sa získa 4,84 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise.

Chromatografía na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1), R_f= 0,22.

e) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-{2-[(fenylmetoxy)-karbonylj-amino} -4-hydroxy-l -oxobutylamino-5,5-dimetoxypentánovej

Do roztoku 4,80 g (7,18 mmol) produktu z časti d) v 70 ml metanolu sa pridá 300 mg monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej, reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa roztrepáva medzi 400 ml etylesteru kyseliny octovej a 200 ml z 25 % nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Obe fázy sa oddelia, vodný podiel sa znova extrahuje do 100 ml etylesteru kyseliny octovej, extrakty v tomto rozpúšťadle sa spoja, celok sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 20 cm za eluovania zmesou 7 : 3 (11.), 8 : 2 (11) etylesteru kyseliny octovej a hexánu, ďalej s použitím 10 % metanolu v etylesteri kyseliny octovej (21.). Vhodné frakcie sa spoja a zahustením vo vákuu sa získa 2,92 g zlúčeniny, ktorá je uvedená v nadpise. Chromatografía na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej : : hexán 8 : 2), R_f= 0,09.

f) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{2-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-amino}-4-(acetyltio)-l-oxobutylamino-5,5-dimetoxypentánovej

Do roztoku 3,06 g (11,65 mmol, 1,7 ekv.) trifenylfosfínu v 40 ml suchého tetrahydrofuránu sa pridá 2,27 ml (11,65 mmol) diizopropylesteru kyseliny azodikarboxylovej. Vzniknutá biela suspenzia sa mieša počas 30 minút, potom sa k nej pridá roztok 2,92 g (6,85 mmol) produktu z časti e) v suchom tetrahydrofúráne s následným pridaním 833 pl (11,65 mmol) kyseliny tioloctovej. Zmes sa mieša za chladenia na 0 °C 2 hodiny, potom sa roztrepáva medzi 300 ml etylesteru kyseliny octovej a 200 ml 50 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Podiel vo vrstve etylesteru kyseliny octovej sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustí, zvyšok sa adsorbuje na Celite^R a suší vo vákuu. Surový materiál sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu 5 na 20 cm a to za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 1) (31.). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia a sušením vo vákuu sa takto získa 2,58 g zlúčeniny, ktorá je uvedená v názve, a to vo forme takmer bielej látky. Chromatografía na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,40.

g) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{[(fenylmetoxy)-karbonyl]-amino} -4-merkapto-1 -oxobutyl-amino-5,5 -dimetoxypentánovej

Do roztoku 2,56 g (5,28 mmol) produktu z časti f) v 50 ml metanolu sa po vypudení kyslíka argónom pri teplote 0 °C pridáva 3,62 ml (15,84 mmol, 3 ekv.) roztok nátriummetoxidu (25 % hmotnostne) v metanole. Po 10-tich minútach sa zmes rozruší pridaním 40 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho, zriedi sa pridaním 100 ml vody a extrahuje do 300 ml etylesteru kyseliny octovej.

Extrakt v etylesteri kyseliny octovej sa premyje s použitím 100 ml vody a 150 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 5 na 20 cm za eluovania zmesou 1 : 1 etylesteru kyseliny octovej a hexánu (31.). Predpokladané frakcie sa spoja a za hustením sa získa 1,99 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme oleja.

Chromatografía na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej : : hexán, 8 : 2), R_f= 0,43.

h) Metylester kyseliny [4S-(4«,7a,9afl)]-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)-karbonyl]amino-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

K roztoku 2,16 g (4,88 mmol) produktu z príkladu g) v 50 ml metylénchloridu sa pridá 620 mg ionexovej živice Amberlyte^R 15, predtým premytej 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofuránom a metylénchloridom. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny, potom sa filtruje, zahustí sa a zvyšok sa bleskovo chromatografuje na kolóne silikagélu 5 na 20 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu 6:4a získa sa tým 1,34 g zlúčeniny, ako je uvedené v názve vo forme bielej peny.

Chromatografía na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,51.

i) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Roztok produktu z časti h) (1,20 g, 3,17 mol) sa oddestiluje trikrát s toluénom a suší sa cez noc, potom sa v prostredí 40 ml suchého metylénchloridu po pridaní 632 μί (4,44 mmol, 1,4 ekv.) jódtrimetylsilánu mieša cez noc pri teplote miestnosti pod argónom. Zmes sa rozruší pridaním 50 ml vody, pridá sa 5 ml 10 %-ného roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 1 a pretrepáva sa s 50 ml etylesteru kyseliny octovej. K vodnému podielu sa pridá 10 %-ný roztok hydroxidu sodného, všetko sa extrahuje trikrát do metylénchloridu, spojené extrakty sa vysušia bezvodým síranom sodným, po filtrácii sa filtrát zahustí a sušením vo vákuu sa získa 396 mg zlúčeniny, ako je uvedené v názve, vo forme číreho oleja.

Chromatografía na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride),

R_f= 0,10.

j) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9al3])-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] - [ 1,3]-ti azep ín-7 -karboxyl o vá

Do roztoku kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej v suchom metylénchloride sa pridá trietylamín, ďalej sa pridá produkt z časti i) v metylénchloride a ešte benzotriazol-1 -yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluorofosfát. Takto pripravený roztok sa spracuje, ako je to opísané v príklade 5e) za vzniku metylesteru kyseliny (4S-[4<x(R’),7a,9aB] }-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-1 -οχο-3-fenylpropyl]amino-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepin-7-karboxylovej.

Suspenzia tohto metylesteru ako produktu sa v prostredí metanolu a tetrahydrofuránu zbaví kyslíka vypudením argónom, ochladí sa na 0 °C a pridá sa roztok 1,0 N hydroxidu sodného, taktiež zbavený kyslíka argónom. Spracovaním, ako je to opísané v príklade 5f), sa získa produkt zloženia uvedeného v nadpise.

Príklad 7

Kyselina (4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(3-cyklohexyl-2-merkapto-l-oxopropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b] [ 1,3]-tiazcpín-7-karboxylová

a) Soľ kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9afi)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Roztok 738 mg (1,95 mmol) metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aU]}-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)karbonyl]amino-5-oxo-pyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 6h) v 25 ml suchého metylénchloridu sa destiluje trikrát s toluénom a potom sa suší vo vákuu počas noci. Po pridaní 389 μΐ (2,73 mmol, 1,4 ekv.) jódtrimetylsilánu sa reakčná zmes mieša pod argónom pri teplote miestnosti, po dvoch hodinách sa k reakčnej zmesi pridá ďalší podiel 40 μΐ jódtrimetylsilánu a v miešaní sa pokračuje 30 minút. Zmes sa potom rozruší pridaním 9,7 ml roztoku 0,4 M kyseliny chlorovodíkovej v zmesi metanolu a dioxánu (9 : 1) a mieša sa potom 5 minút. Prchavé podiely sa vydestilujú vo vákuu na rotačnej odparke a zvyšok sa roztrepáva medzi vodu a etylester kyseliny octovej. Oddelená vrstva roztoku v etylesteri kyseliny octovej sa premyje vodou, spojené vodné podiely sa premyjú etylesterom kyseliny octovej, vodná fáza sa ochladí na 0 °C a hodnota pH sa upraví na 10,3 (sledované pH metrom) pridaním 1,0 N roztoku hydroxidu sodného. Vodný podiel sa potom extrahuje trikrát do metylénchloridu, potom sa vodný podiel nasýti chloridom sodným a extrahuje sa znova trikrát do metylénchloridu. Spojené extrakty sa vysušia bezvodým síranom sodným, po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu a sušením vo vákuu sa získa 455 mg voľného amínu vo forme číreho oleja.

Chromatografia na tenkej vrstve (10 % metanolu v metylénchloride), R_f= 0,28.

Získaný voľný amín sa rozpustí v 5 ml etylesteru kyseliny octovej, pridá sa 354 mg (1 ekv.) monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej v 1 ml etylesteru kyseliny octovej. Ihneď sa začnú tvoriť biele kryštáliky, zmes sa ponechá 30 minút v chladničke pri teplote 5 °C, kryštály sa odfiltrujú, dobre sa premyjú etylesterom kyseliny octovej a etyléterom a sušením cez noc vo vákuu sa získa 639 mg produktu, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej tuhej látky.

b) Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-3-cyklohexylpropánovej kyseliny

Roztok 5,20 g (31,5 mmol) D-fenylalanínu v 75 ml 2 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v 500 ml Párovom hydrogenačnom zariadení sa zbaví kyslíka zavádzaním dusíka, pridá sa 640 mg (2,82 mmol) oxidu platičitého a v uzavretej nádobe sa začne s hydrogenovaním za tlaku 280 KPa s doplnením, pokiaľ je to nutné. Celková spotreba vodíka bola dvojnásobná za 6 hodín. Po vypudení vodíka plynným dusíkom sa reakčná zmes filtruje Celitom, podiel na filtri sa premyje horúcou vodou, filtrát sa zahustí na objem asi 40 ml a tento zvyšok sa ponechá pri teplote 5 °C počas noci. Vylúčené tuhé podiely sa odfiltrujú, premyjú sa malým množstvom studenej vody a sušením vo vákuu pri teplote 60 °C sa získa 5,46 g hydrochloridu kyseliny (R)-2-amino-3-cyklohexylpropánovej.

Do miešaného roztoku 2,81 g (13,5 mmol) tohto hydrochloridu v 32 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej sa pri teplote miestnosti pridá 10,0 g (84 mmol) bromidu draselného, reakčná zmes sa ochladí na -4 °C a po častiach sa počas hodiny pridáva 1,75 g (25,4 mmol) dusitanu sodného, pričom sa teplota udržuje stále pod 0 °C. Reakčná zmes pení, začne sa vylučovať olej. Po skončení pridávania sa reakčná zmes mieša hodinu, teplota sa nechá vystúpiť na teplotu miestnosti a v miešaní sa pokračuje ďalšiu hodinu. Potom sa reakčná zmes extrahuje dvakrát do éteru, extrakt sa vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa bezfarebný olej (2,3 g) kyseliny (R)-2-bróm-3 -cyklohexy lpropáno vej.

Do miešanej suspenzie 1,07 g (9,36 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 15 ml suchého acetonitrilu sa pri teplote 0 °C a pod argónom pridáva počas 10-tich minút roztok 2,20 g (9,36 mmol) kyseliny (R)-2-bróm-3-cyklopropylpropánovej v 3 ml acetonitrilu. Reakčná zmes sa vytemperuje na teplotu miestnosti a mieša potom 16 hodín, vzniknutá suspenzia sa filtruje a potom sa filtrát zahustí. Zvyšok sa znova rozpustí v etylesteri kyseliny octovej, roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Žltý olejovitý zvyšok (2,21 g) sa rozpustí v éteri a k roztoku sa pridá roztok 1,8 ml dicyklohexylamínu (9,0 mmol) v 5 ml éteru. Škrabaním povrchu sklenenej banky sklenenou tyčinkou sa získa 2,38 g bieleho kryštalického produktu zloženia, ako bolo uvedené v nadpise, 1.1. 159 až 161 °C.

[a]_D= -41,2° (c = 1,0, chloroform) Analýza pre C₂₃H₄₁NSO3 vypočítané: 67,11 % C, 10,04 % H, 3,40 % N, 7,79 % S nájdené: 66,95 % C, 10,12 % H, 3,25 % N, 7,88% S

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-{[2-(acetyltio)-3-cyklohexyl-l-oxopropyl]amino}-5-oxopyrolo-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Suspenzia 289 mg (0,69 mmol, 1,05 ekv.) soli dicyklohexylamínu s kyselinou (S)-2-(acetyltio)-3-cyklohexylpropánovej v 15 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje s použitím 3 dávok po 10 ml hydrogensíranu draselného, 10 ml 50 %-ného roztoku soľanky a 10 ml soľanky. Vysuší sa (bezvodým síranom horečnatým) a po filtrácii sa filtrát zahustí odparením dvakrát s metylénchloridom a sušením vo vákuu počas jednej hodiny sa získa v olejovej forme kyselina (S)-2-(acetyltio)-3-cyklohexylpropánová.

Táto voľná kyselina sa rozpustí v 5 ml suchého metylénchloridu, roztok sa ochladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C, do roztoku sa vnesie 96 μΐ (0,69 mmol, 1,05 ekv.) trietylamínu, ďalej 275 mg (0,66 mmol) produktu z časti a), trietylamín v množstve 92 μΐ (0,66 mmol) a potom 305 mg (0,69 mmol) benzotriazol-l-yl-oxytris-(dimetylamino)-fosfóniumfluorofosfátu. Takto pripravený roztok sa mieša za chladenia na 0 °C hodinu, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí, zriedi pridaním etylesteru kyseliny octovej, premyje sa použitím 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, ďalej použitím 20 ml 50 %-ného nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 20 ml soľanky a vysuší sa použitím bezvodého síranu horečnatého. Po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha, surový produkt sa adsorbuje na Celíte a chromatografuje sa na kolóne silikagélu (2,2 na 10 cm) za eluovania 40 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne. Zodpovedajúce frakcie sa spoja a zahustia, čím sa získa 246 mg čistej látky, ako je jej zloženie uvedené v nadpise.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,53.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(3-cyklohexyl-2-merkapto-1 -oxopropyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b][l ,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok produktu z časti c) sa v množstve 245 mg (0,54 mmol) zbaví v prostredí 6 ml metanolu kyslíka argónom, ktorý sa zavádza počas 30 minút, potom sa roztok vychladí na 0 °C a prikvapkáva sa počas 30-tich minút 1,0 N roztok hydroxidu sodného, zbavený kyslíka zavádzaním argónu počas 30 ηιίηύζ a to v množstve 5 ml, pričom sa argón zavádza počas pridávania a počas celej reakcie.

Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C počas 2 hodín, okyslí sa pri uvedenej teplote na pH 2 pridávaním hydrogensíranu draselného a všetko sa potom extrahuje troma podielmi po 20 ml etylesteru kyseliny octovej. Spojený organický extrakt sa premyje použitím 50 %-ného roztoku soľanky (20 ml), ďalej 20 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha. Zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu 2,5 na 10 cm za eluovania 300 ml zmesí etylesteru kyseliny octovej a heptánu (7 : 3) a 500 ml tej istej zmesi s obsahom 1 % kyseliny octovej. Vhodné frakcie sa spoja, metylénchlorid sa použije pri oddestilovaní rozpúšťadiel ako pomocné rozpúšťadlo a sušením vo vákuu sa získa 172 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, ako biela pena. [a]_D= -116,9° (c = 0,5, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (1 % kyseliny octovej v etylacetáte), R_f= 0,35.

’H-NMR: 400 MHz, CDC1₃: d 0,91 (m, 2H), 1,22 (m, 3H), 1,44 (m, IH), 1,55 (m, IH), 1,68 (m's, 5H), 1,83 (m, IH), 1,97 (m's, 2H), 2,12 (m, IH), 2,19 - 2,40 (m's, 3H), 2,53 (m, IH), 2,96 (m, IH), 3,38 (M's, 2H), 4,62 (t, IH, J = 6,8 Hz), 4,70 (m, IH), 5,25 (m, IH), 7,55 (d, IH, J = 6,4 Hz) ¹³C-NMR: 100 MHz, CDC1₃: d 26,0, 26,1, 27,5, 31,5, 32,3, 33,0, 33,3, 35,2, 40,7, 43,0, 52,9, 60,6, 62,5, 170,9, 172,7, 175,3.

Analýza pre C_]8H₂₈N2O₄S2 vypočítané: 53,98 % C, 7,05 % H, 6,99 % N, 16,01 % S nájdené: 53,97 % C, 7,18 % H, 6,84% N, 15,75% S

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 16 min. (nad 99 %, UF 217), kolóna YMC S-3 ODS (C18), 6,0 na 150 mm, 50 % B: A - 100% B : A, lineárny gradient 25 minút,

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Príklad 8

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-hexyl)amino] -5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-brómhexánová

Do miešaného roztoku 5,0 g (38 mmol) D-norleucinu sa v prostredí 77 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej vnesie pri teplote miestnosti 15,9 (133 mmol) bromidu draselného, reakčná zmes sa ochladí na -10 °C a pridáva sa po častiach 3,94 g (57 mmol) dusitanu sodného v tuhom stave. Teplota sa udržuje v rozmedzí -10 °C až 5 °C, po skončenom pridávaní sa peniaca reakčná zmes mieša hodinu, teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C a za tejto teploty sa v miešaní hodinu pokračuje. Ďalej sa reakčná zmes extrahuje dvakrát do éteru, roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje raz vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa 3,3 g surového produktu zloženia, ako je uvedené v nadpise.

b) Soľ kyseliny (S)-2-(acetyltio)-hexánovej a dicyklohexylamínu

Do miešanej suspenzie 2,11 g (18,5 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 50 ml suchého acetonitrilu sa pridá pri teplote miestnosti a pod argónom roztok 3,27 g (16,0 mmol) produktu z časti a) v 26 ml acetonitrilu a reakčná zmes sa mieša 5 hodín. Vzniknutá suspenzia sa filtruje, filtrát sa zahustí, zvyšok sa rozpustí v etylesteri a roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného a raz soľankou a po vysušení bezvodým síra nom horečnatým sa po filtrácii filtrát zahustí. Zvyšok sa rozpusti v 64 ml éteru a do roztoku sa pridá 3,4 ml (16,8 mmol) dicyklohexylamínu. Zahustením roztoku v éteri a triturovaním zvyšku s hexánom vznikne biela tuhá látka, ktorá sa prekryštalizuje zo zmesi etyléteru a hexánu za vzniku produktu zloženia, uvedeného v názve. Materský lúh sa zahustí a dvojitým prekryštalizovaním sa získa v celkovom výťažku 2,2 g zlúčeniny zloženia, ako je uvedené v názve, 1.1. 145 až 147 °C.

[a]_D= -33,8° (c = 1,08, chloroform).

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9afl]}-oktahydro-4- {[2-(acetyltio)-l -oxohexyljamino} -5-oxopyrolo[2,1 -

-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Suspenzia 255 mg (0,69 mmol, 1,05 ekv.) dicyklohexylamínovej soli z príkladu 8, časť b) v 15 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje trikrát s použitím 5 ml 5 %-ného hydrogensulfátu draselného, ďalej 10 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa filtrát zahustí, zvyšok sa dvakrát oddestiluje s metylénchloridom a sušením hodinu vo vákuu sa získa v olejovitej forme voľná kyselina.

Získaný olej sa rozpustí v 6 ml suchého metylénchloridu, roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli na 0 °C, pridá sa 96 pl (0,69 mmol, 1,05 ekv.) trietylamínu, potom 275 mg (0,66 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9afi]}-oktahydro-5-oxo-pyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 7a), ďalej 92 pl (0,66 mmol) trietylamínu a potom 305 mg (0,69 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. Takto pripravený roztok sa mieša pri teplote 0 °C hodinu, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti, zahusti sa, zriedi pridaním etylesteru kyseliny octovej a po premytí s použitím 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, 20 ml z 50 % nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha. Surový produkt sa adsorbuje na Celite^R a chromatografovaním na silikagélovej kolóne 2,5 na 10 cm za eluovania zmesou 40 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne sa vhodné frakcie spoja, zahustia a získa sa tak 258 mg čistej látky zloženia uvedeného v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f = 1,54.

d) Kyselina (4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-hexyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 255 mg (0,54 mmol) produktu z časti c) v 5 ml metanolu sa zbaví kyslíka argónom (30 minút zavádzania), ochladí sa na 0 °C a po kvapkách sa pridáva do tohto roztoku roztok 5 ml 1,0 N hydroxidu sodného, z ktorého bol predtým tiež 30 minút vypudzovaný kyslík argónom. Argón sa tiež zavádza po celý čas prikvapkávania, reakčná zmes sa mieša 2 hodiny za chladenia na 0 °C, okyslí sa pri tejto teplote pridaním 5 %-ného hydrogensíranu draselného na pH 2, nasleduje extrakcia trikrát do 20 ml etylesteru kyseliny octovej. Extrakty sa spoja a po premytí použitím 20 ml 50 %-nej soľanky a 20 ml soľanky sa organický roztok vysuší bezvodým síranom horečnatým, potom sa po filtrácii filtrát zahustí do sucha. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu 2,5 na 10 cm za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a heptánu 7 : 3 (300 ml) a ďalej zmesou etylesteru kyseliny octovej a heptánu s obsahom 1 % kyseliny octovej. Zahustením zodpovedajúcich spojených frakcií s použitím metylénchloridu ako pomocného rozpúšťadla a nasledujúcim sušením vo vákuu sa zís ka 170 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise, vo forme bielej peny.

[a] □ = -13 5,1 ° (c = 0,5, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (1 % kyseliny octovej v etylesteri kyseliny octovej), R_f= 0,32.

'H-NMR: 400 MHz, CDC1₃: d 0,89 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,32 (m, 4H), 1,73 (m, IH), 1,96 (m, 2H), 2,00 (d, IH, J = 8,6 Hz), 2,11 (m, IH), 2,32 (m's, 3H), 2,52 (m, IH), 2,98 (m, IH), 3,32 (m's, 2H), 4,61 (t, IH, J = 7,1 Hz), 4,72 (m, IH), 5,25 (m, IH), 7,63 (d, IH, J = 6,4 Hz), ¹³C-NMR: 100 MHz, CDC1₃: d 13,8, 22,2, 27,6, 29,2, 31,4, 32,6, 33,1, 35,3, 43,0, 52,8, 60,5, 62,42, 170,7, 172,5, 174,0.

Analýza pre C15H24N4O4S20.0,08 H₂O vypočítané: 49,79% C, 6,73% H, 7,74% N, 17,72% S nájdené: 49,90 % C, 6,92 % H, 7,63% N, 17,57% S Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas

9,4 min. (nad 99 %, UF 220), kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 50 % B: A - 100 % B : A, lineárny gradient 25 minút,

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť: 1,5 ml/min.

Príklad 9

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9al3] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-4-metylpentyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-bróm-metylpentánová

Do miešaného roztoku 3,0 g (23 mmol) D-leucínu v 47 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej sa pridáva pri teplote miestnosti 9,5 g (80 mmol) bromidu draselného, reakčná zmes sa ochladí na 10 °C a po častiach sa pridáva 2,4 g (34 mmol) dusitanu sodného, pričom sa teplota udržuje v rozmedzí -10 °C až -5 °C. Po skončenom pridávaní sa reakčná zmes udržuje po vytemperovaní na teplotu miestnosti takto za miešania hodinu, extrahuje sa dvakrát do éteru, roztok v éteri sa premyje raz vodou a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu získa 2,7 g surového produktu, ako je uvedené v názve.

b) Soľ kyseliny (S)-2-(acetyltio)-4-metylpentánovej a dicyklohexylamínu

Do miešanej suspenzie 1,7 g (15,0 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 50 ml suchého acetonitrilu sa pridáva pri teplote miestnosti pod argónom roztok 2,6 g (13 mmol) produktu z časti a) v 17 ml acetonitrilu a reakčná zmes sa mieša 4 hodiny. Vzniknutá suspenzia sa filtruje, filtrát sa zahustí, zvyšok sa rozpusti v etyléteri, roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensiranu draselného a raz soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa rozpustí v 64 ml éteru, pridá sa dicyklohexylamín (2,7 ml, 14 mmol) a z roztoku sa ihneď začnú vylučovať podiely bielej tuhej látky. Po filtrácii sa takto získa 2,0 g soli, ako je uvedené v nadpise, t. t. 153 až 158 °C.

[a]_D= -54,5° (c = 0,61, chloroform).

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9aB])-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-1 -οχο-4-metylpentyl] amino-5-oxopyrolo[2,1 -b]-[ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Miešaná suspenzia 234 mg (0,63 mmol) soli dicyklohexylamínu z časti b) v 15 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje trikrát vždy s použitím 5 ml 5 %-ného vodného roztoku hydrogensiranu draselného, organický extrakt sa potom vysuší bezvodým síranom horečnatým, po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha a zvyšok sa oddestiluje ešte dvakrát s hexánom. Zvyšný olej sa rozpustí v 6 ml metylénchloridu, roztok sa mieša pod dusíkom za chladenia na 0 °C, pridá sa 88 pl (0,63 mmol) trietylamínu, potom 249 mg (0,06 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny 4S-[4a(R*)₍7a,9aB]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,1 -b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 7a), ešte ďalší podiel 84 μί (0,60 mmol) trietylamínu a za 10 minút 279 mg (0,63 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. Po hodine sa teplota reakčnej zmesi nechá vystúpiť na 20 °C, reakčná zmes sa mieša 2 hodiny a získaný bezfarebný roztok sa zahustí pri teplote pod 30 °C vo vákuu, olejovitý zvyšok sa 0päť rozpustí v etylesteri kyseliny octovej, roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensiranu drasclné-ho, raz nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz soľankou. Potom sa organická vrstva vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí na 5 g silikagélu. Rýchlou chromatografiou na kolóne 2,5 na 15 cm sa eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu 1 : 1 sa získa 203 mg zlúčeniny zloženia, uvedeného v nadpise, a to ako biela tuhá látka, 1.1. 101 až 103 °C. [a]_D= -157,5° (c = 1,04, chloroform).

Chromatografia na tenkej vrstve, etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1, R_f= 0,19.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-4-metylpentyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 184 mg (0,44 mol) produktu z časti c) v 5 ml metanolu sa zbaví kyslíka zavádzaním dusíka počas 10 minút, ochladí sa na 0 °C a prikvapkáva sa potom 5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného kyslíka zavádzaním dusíka, ten sa potom pomaly zavádza počas trvania reakcie vôbec. Za 2 hodiny sa reakčná zmes okyslí pridaním 2 ml 6 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, kyslý roztok sa extrahuje dvakrát do etylesteru kyseliny octovej, tieto extrakty sa spoja, roztok sa po vysušení bezvodým síranom horečnatým zahustia. Zvyšok sa odparí ešte po pridaní hexánu a triturovaním zvyšku zmesi metanolu a vody sa získa kryštalická tuhá látka, 1.1. 94 až 96 °C.

[a]_D= -158,6° (c = 0,42, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej, hexán a kyselina octová 4 : 4 : 0,1), R_f= 0,13.

Analýza pre C^^NjS^.0,75 H₂O vypočítané:48,17%C, 6,87%H, 7,49%N, 17,15%S nájdené: 48,33 % C, 6,51 % H, 7,37% N, 16,82% S Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 17,6 min. (99,2 %), kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm.

Lineárny gradient (25 min.) 0 % až 100 % B : A, 15 min.

1,5 ml/min.

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Príklad 10

Kyselina (4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-[l,4]oxazino[3,4-b][l,3]-oxazepín-7-karboxylová

a) 2-Propenylester kyseliny 2,2,2-trichlóracetimidovej

Do suspenzie 945 mg (31,5 mmol) 80 %-ného hydridu sodíka, premyté dvakrát s použitím 25 ml hexánu, v 30 ml suchého éteru sa prikvapkáva roztok 21,4 ml, teda 18,3 g (315 mmol) 2-propen-l-olu v 45 ml suchého éteru, reakčná zmes sa mieša pod argónom počas 20-tich minút, ochladí sa na 0 °C v kúpeli z ľadu a soli, potom sa ešte pridáva počas 15 minút 30 ml, teda 42,3 g (0,30 molu) trichlóracetonitrilu. Hnedý roztok sa mieša pri teplote 0 °C 40 minút, potom 10 minút pri teplote 10 °C a 10 minút pri teplote miestnosti. Zahustením reakčnej zmesi vznikne sirup, ku ktorému sa pridá zmes 1,2 ml metanolu a 30 ml pentánu a v miešaní sa energicky pokračuje 5 minút. Vylúči sa mierne hnedá zrazenina, ktorá sa odsaje, premyje dvakrát pentánom vždy s použitím 30 ml a zahustením spojených filtrátov sa ďalej získa mierne hnedá kvapalná látka. Tá sa opäť rozpustí v 50 ml pentánu, roztok sa mieša niekoľko minút, získaná suspenzia sa filtruje a získaná zrazenina sa premyje pentánom (30 ml), pričom tento postup sa opakuje najmenej ešte raz. Zahustením číreho filtrátu a sušením vo vákuu sa takto pripraví 54,0 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise vo forme slabo červeno-hnedej kvapaliny. Tá sa uchováva v hexánovom roztoku pri teplote 10 °C.

b) Metylester N-ftaloyl-L-serínu

Suspenzia 25 g (161 mmol) metylesteru L-serínu v 350 ml vody sa zriedi pridaním 250 ml dioxánu, do získania číreho roztoku sa pridá 17 g (1,0 ekv.) tuhého uhličitanu sodného a ďalej 37 g (1,05 ekv.) N-karbetoxy-ftalimidu. Reakčná zmes sa ďalej potom mieša 2,5 hodiny pod argónom pri teplote miestnosti, extrahuje sa trikrát do 500 ml etylesteru kyseliny octovej, extrakty sa spoja a všetko sa premýva postupne s použitím 250 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 250 ml 5 %-ného hydrogensíranu draselného a 250 ml soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha a zvyšok sa suší vo vákuu. Zmes produktov sa chromatografuje na silikagéli (kolóna Merck) za eluovania zmesami etylesteru kyseliny octovej a hexánu 1 : 3 a 1 : 2, vhodné frakcie sa spoja, zahustia do sucha a sušením vo vákuu sa izoluje 31 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme hustého sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 : 1), R_f= 0,52.

c) Metylester N-ftaloyl-O-(2-propenyl)-L-serínu

Do roztoku 7,37 g (29,5 mmol) produktu z časti b) v 30 ml suchého metylénchloridu sa pridá roztok 11,97 g (59,1 mmol) produktu z časti a) v cyklohexáne (60 ml) a ďalej 0,37 ml kyseliny trifluórmetánsulfónovej. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti pod argónom 20 hodín, vylúčená zrazenina sa odsaje, premyje sa najmenším množstvom metylénchloridu a spojené filtráty sa premyjú s použitím 30 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 30 ml vody, ďalej sa organický roztok vysuší bezvodým síranom sodným, po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha a zvyšok sa suší vo vákuu. Surová zmes produktov sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 9). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, roztok sa zahustí do sucha a sušením vo vákuu sa takto pripraví 7,56 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme číreho, hustého sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 : 1), R_f= 0,70.

d) Metylester N-ftaloyl-O-(acetaldehyd)-L-serínu

Roztok 2,5 g (8,64 mmol) produktu z časti c) v zmesi

46,4 ml suchého metylénchloridu a 4,6 ml metanolu sa vychladí na -78 °C v kúpeli z tuhého ľadu a acetónu a zavádza sa ozón (asi 15 minút), až modrá farba zostane. Do zmesi sa potom zavádza 10 minút dusík, lepšie až modrá farba zmizne, pridá sa 14,0 ml (0,19 mmol) dimetylsulfidu (22,1 ekv.), teplota zmesi sa nechá vystúpiť na 20 °C a pod dusíkom sa zmes mieša 2,5 hodiny. Ďalej sa zahustí zmes do sucha, zvyšný sirup sa rozpustí v 50 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje použitím 15 ml vody a 15 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha s následným sušením zvyšku vo vákuu.

Surový produkt sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu 1 : 9, potom 1 : 4 a 1 : 2 za vzniku 1,54 g produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 : l),R_f=O,33.

e) Metylester N-ftaloyl-0-(2,2-dimetoxyetyl)-L-serinu

K roztoku 1,54 g (5,29 mmol) produktu z časti d) v zmesi 8,3 ml metylénchloridu a 8,3 ml suchého metanolu sa pridá 0,84 ml (7,68 mmol, 1,45 ekv.) trimetylesteru kyseliny ortomravčej a 92 g monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej, reakčná zmes sa potom mieša pod argónom pri teplote miestnosti 2,5 hodiny, potom sa roztrepáva medzi 50 ml etylesteru kyseliny octovej a 15 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Spojený organický roztok sa premyje použitím 15 ml vody, 15 ml soľanky a suší sa bezvodým síranom sodným. Po filtrácii sa zahustením filtrátu do sucha získa zvyšok ten sa suší vo vákuu a surový produkt sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 4) a získa sa tým 1,35 g zlúčeniny ako je uvedená v nadpise, vo forme hustého ale číreho sirupu. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1 : 1), R_f- 0,58.

f) Metylester O-(2,2-dimetoxyetyl)-L-serinu

Do roztoku 2,0 g (5,93 mmol) produktu z časti e) v 14 ml suchého metanolu sa pridá 0,30 ml (6,1 ml) hydrazínhydrátu a reakčná zmes sa mieša 4 dni pod argónom. Vzniknutá suspenzia sa filtruje, vyzrážaný podiel na filtri sa premyje dvoma dávkami po 14 ml metanolu, filtrát sa zahustí do sucha. Sirup sa opäť rozpustí v metylénchloride a filtruje sa dvakrát, až sa neobjavuje žiadna zrazenina. Zahustením číreho filtrátu sa takto pripraví 1,17 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, tvorí mierne žltý sirup. Chromatografia na tenkej vrstve (metylénchlorid : metanol, 9:1), R_f= 0,54.

g) N-[(Fenylmetoxy)-karbonyl]-O-[(l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]-L-homoserín

Do roztoku 3,0 g (11,85 mmol) N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-homoserínu (príprava pozri príklad 6a)) v 65 ml suchého dimetylformamidu sa pridá 10,72 g (71,1 mol) (l,l-dimetyletyl)-dimetylsilylchloridu, ďalej 9,65 g (0,14 mmol) imidazolu a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti pod argónom 24 hodín. Ďalej sa zriedi pridaním 207 ml metanolu, v miešaní pri teplote miestnosti sa pokračuje 24 hodín a reakčná zmes sa zahustí potom do konzistencie sirupu. Ten sa rozpustí v 200 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje dvakrát vždy s použitím 75 ml 10 %-ného roztoku kyseliny citrónovej, ďalej soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha, zvyšok sa suší vo vákuu. Surová zmes produktov sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny najskôr zmesou etylesteru a hexánu (1 : 1), ďalej zmesou toho istého esteru a kyseliny octovej (99,5 : 0,5), vhodné frakcie sa spoja, zahustia a niekoľkokrát oddestilujú s toluénom za vzniku zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, výťažok 3,56 g, a to vo forme voskovitej tuhej látky.

Chromatografia na tenkq vrstve (etylester kyseliny octovej : : kyselina octová, 95 : 5), R_f= 0,82.

h) Metylester N-{O-[(l,l-dimetyletyl)dimctylsilyl]}-N-{[(fenyl-metoxy)-karbonyl]-L-homoseryl}-0-(2,2-dimetoxyetyl)-L-serínu

Roztok 2,18 g (5,93 mmol) produktu z časti g) v suchom metylénchloride sa vychladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C a striedavo sa do nej pridáva roztok 1,71 g (5,65 mmol) produktu z časti f) v 5 ml suchého metylénchloridu, 0m78 ml (5,65 mmol) trietylamínu a 2,63 g (6,0 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylarnino)-fosfóniumhexafluorofosfátu. Reakčná zmes sa mieša 30 minút pri teplote 0 °C, ďalej hodinu a 45 minút pri teplote miestnosti, potom sa roztrepáva medzi 100 ml etylesteru, a to dvakrát s 30 ml vody, organické extrakty sa spoja a všetko sa premyje s použitím 20 ml z 50 % nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 25 ml soľanky, po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha a zvyšok sa suší vo vákuu. Surová zmes produktov sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu v pomere najskôr 1 : 4, potom 1 : 3 a 1 : 1, čím sa získa 2,38 g produktu zloženia uvedeného v nadpise.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1), R_f= 0,40.

i) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)-karbonylamino]-5-oxo-[ 1,4]oxazino[3,4-b][l,3]-oxazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 1,0 g (1,8 mmol) produktu z časti h) v 50 ml suchého metylénchloridu sa pridá ionexová živica Amberlyte* 15 (v kyslej forme) a 0,1 metanolu, reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti pod argónom 3 dni, živica sa odfiltruje, premyje malým množstvom metylénchloridu a filtrát sa zahustí na sirup. Surová takto získaná zmes produktov sa chromatografuje na kolóne silikagélu za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 1). Získa sa tak 339 mg produktu, ako je uvedené v názve. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 3 : 1), Rf= 0,53.

j) Metylester kyseliny [4S-(4«,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-[l,4]oxazino[3,4-b][l,3]-oxazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 771 mg (2,04 mmol) produktu pripraveného, ako to bolo opísané v časti j), v 25 ml suchého metanolu sa pridá ako katalyzátor 125 mg 10 %-ného paládia na uhli a reakčná zmes sa v uzavretej nádobe hydrogenuje 16 hodín. Filtruje sa potom vrstvou Celitu^R, táto vrstva sa premyje dvoma podielmi po 25 ml metanolu, číry filtrát sa zahustí vo vákuu do sucha a sušením vo vákuu sa získa 448 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme sirupu. Chromatografia na tenkej vrstve (metylénchlorid a metanol, 9 : 1), R_f=0,22.

k) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-{[2-(acetyltio)-l-oxo-3-fenylpropyl]amino}-5-oxo-[l,4]oxazino-[3,4-b][l,3]-oxazepín-7-karboxylovej

V prostredí 70 ml etylesteru kyseliny octovej sa suspenduje 813 mg (2,01 mmol) soli dicyklohexylamínu a ky seliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej, roztok sa premyje päťkrát vždy s použitím 9,3 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného a 9,3 ml soľanky', vysuší sa bezvodým síranom horečnatým) filtruje a po filtrácii sa sušením filtrátu do sucha získa zvyšok, ktorý sa suší vo vákuu.

Získaná voľná kyselina sa rozpustí v 12 ml suchého metylénchloridu, roztok sa ochladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C a pridávajú sa striedavo tieto zložky: roztok 448 mg (1,84 mmol) produktu z časti j) v 4,0 ml suchého metylénchloridu, 0,25 ml trietylamínu (1,80 mmol) a 823 mg (1,86 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetyl-amino)-fosfónium-hexafluorofosfátu, reakčná zmes sa potom mieša pri 0 °C hodinu, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti pod argónom. Zbaví sa rozpúšťadiel zahustením do sucha a získaný sirup sa znova rozpustí v 60 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje dvakrát použitím 11 ml 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, 11 ml vody a 11 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha, zvyšok sa suší vo vákuu. Chromatografovaním surovej zmesi produktov dvakrát na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania každej kolóny zmesami etylesteru kyseliny octovej a hexánu (1 : 1, 1 : 2) sa získa 665 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, a to vo forme sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 3 :1), R_f= 0,30.

1) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)amino]-5 -oxo-[ 1,4] oxazino[3,4-b] [ 1,3]-oxazepín-7-karboxylová

Roztok 650 mg (1,44 mmol) produktu z časti k) v 13 ml metanolu sa preplachuje argónom 30 minút, ochladí sa v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C, potom sa za tejto teploty prikvapkáva 5,84 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, predtým zbaveného kyslíka zavádzaním argónu počas 30-tich minút. Argón sa potom zavádza po celý čas vykonávania reakcie. Reakčná zmes sa mieša 5 hodín za chladenia na 0 °C, rozruší sa za tejto teploty pridaním

25,4 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C a nasleduje extrakcia do etylesteru kyseliny octovej (trikrát 50 ml) s tým, že sa organické extrakty spoja, po premytí použitím 15 ml soľanky vysušia bezvodým síranom sodným a filtrát po filtrácii sa zahustí do sucha, zvyšok sa suší vo vákuu. Surový produkt sa trituruje so zmesou hexánu a metylénchloridu (130 : 7) a tuhý podiel sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny etylesterom kyseliny octovej a hexánom (najskôr 1 : 2, potom 1:1), potom s použitím zmesi metylénchlorid : metanol : kyselina octová (100 : 4,0 : : 0,2). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia do sucha a odparia niekoľkokrát s toluénom. Vznikne tak 364 mg zlúčeniny, ako je uvedené v názve, ktorá sa suší vo vákuu počas 9 hodín. Získaný produkt sa trituruje potom so zmesou metylénchloridu a hexánu (1 : 10), s 50 ml hexánu a dvakrát s 50 ml pentánu, pričom prvá pentánová frakcia sa mieša 4 hodiny a ďalšia pentánová frakcia cez noc pod argónom. Rozpúšťadlo sa oddekantuje a tuhý podiel sa suší 6 hodín vo vákuu za vzniku čistej zlúčeniny zloženia, ako je uvedené v nadpise. Látka tvorí amorfnú tuhú penovitú hmotu.

[a]_D= -49,1° (c = 0,48, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (toluén : kyselina octová, 5 : 1), R_f= 0,17.

Analýza pre C₁₈H₂₂N₂O₆S . 0,56 H₂O vypočítané: 53,45% C, 5,76% H, 6,93% N, 7,92% S nájdené: 53,45 % C, 5,53 % H, 6,75% N, 7,48 % S

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 10,45 min. (98,3 %), kolóna YMC S-3 ODS (C = 18), 6,0 na 150 mm, 44 % sústavy (10 % vody - 90 % metanolu + 0,2 % kyseliny fosforečnej) / 56 % sústavy (90 % vody, 10 % metanolu + 0,2 % kyseliny fosforečnej), izokraticky,

1,5 ml/min.

Príkladll Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

Produkt z príkladu 3 sa dá pripraviť aj týmto spôsobom:

a) N-[(Fenylmetoxy)-karbonyl]-O-[(l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]-L-homoserín

Do roztoku 41,56 mmol N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-L-homoserínu (príprava pozri príklad 6a) v 125 ml dimetylformamidu sa pridá 37,5 g (249 mmol) [(1,1-dimetyletyl)-dimetylsilylj-chloridu, ďalej potom 33,95 g (498 mmol) imidazolu a takto pripravená reakčná zmes, teda mierne zažltnutý roztok sa mieša pri teplote miestnosti 22 hodín. Ďalej sa pridá 500 ml metanolu a reakčná zmes sa mieša ďalších 6 hodín, potom sa metanol a najväčší podiel dimetylformamidu oddestiluje vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v 800 ml etylesteru kyseliny octovej, tento roztok sa premyje dvakrát s použitím 300 ml 10 %-ného roztoku kyseliny citrónovej, vodné podiely sa spoja a celok sa extrahuje do 300 ml etylesteru kyseliny octovej. Spojený roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným, filtrát sa po filtrácii zahustí a po odparení zvyšku s hexánom sa získa biela prášková hmota. Tento produkt sa suší vo vákuu a získa sa tak 12,942 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise.

b) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{4-[(l,l-dimetyletyl)-dimetylsilyljoxy) -1 -oxo-2- {[(fenylmetoxy)karbonyl]amino} -butylamino-6,6-dimetylhexánovej

Do roztoku 22,78 g (61,97 mmol) produktu z časti a) v 100 ml metylénchloridu, ochladeného na 0 °C, sa pridá 6,81 ml (61,97 mmol) N-metylmorfolínu, ďalej potom 8,37 g (61,97 mmol) hydroxybenzotriazolu a 10,6 g (51,64 mmol) metylesteru kyseliny (S)-2-amino-6,6-dimetoxyhexánovej (príprava pozri príklad le) v 50 ml metylénchloridu a ďalej ešte 11,88 g (61,97 mmol) 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimidu. Reakčná zmes sa mieša pri 0 °C počas hodiny, potom cez noc pri teplote miestnosti. Ďalej sa reakčná zmes zahustí vo vákuu a zvyšok sa zriedi pridaním 600 ml etylesteru kyseliny octovej, získaný roztok sa premyje použitím 200 ml 50 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, 0,5 N hydroxidu sodného (200 ml), vodu a soľankou, potom sa vysuší bezvodým síranom sodným. Filtrát sa zahustí, zvyšok sa rozpustí v etyléteri (150 ml), vzniknutá suspenzia sa filtruje, tuhý podiel sa odsaje a premyje dokonale etyléterom. Zahustením filtrátu vo vákuu do sucha sa získa 30 g surového produktu, ako je zloženie uvedené v nadpise, a to vo forme olejovitého produktu, ktorý sa použije bez akéhokoľvek čistenia na ďalšiu reakciu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,55.

c) Metylester kyseliny [S-(R’,R*)]-2-{4-hydroxy-l-oxo-2-[(fenyl-metoxy)karbonyl]amino}-butylamino-6,6-dimetylhexánovej

Do roztoku 30 g produktu z časti b) v 150 ml metanolu sa po ochladení na 0 °C pridá 1,96 g monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej, reakčná zmes sa mieša za chladenia na °C 2 hodiny a rozruší sa potom pridaním vodného roztoku 1,3 g hydrogénuhličitanu sodného (1,3 g tejto soli v 100 ml vody). Zmes sa zahusti vo vákuu a zvyšok sa roztrepáva medzi 400 ml etylesteru kyseliny octovej a 150 ml vody. Vodná fáza sa oddelí, extrahuje sa dvakrát do 150 ml etylesteru kyseliny octovej, organické roztoky sa spoja a celok sa vysuší po premytí 10 %-ným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou (dvakrát) bezvodým síranom sodným, po filtrácii sa filtrát zahusti do sucha. Zvyšok sa podrobí rýchlej chromatografii na kolóne silikagélu 10 na 25 cm za eluovania 80 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne (51), etylesterom kyseliny octovej (31) a 2 % metanolu v etylesteri kyseliny octovej (51). Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia sa a zvyšok sa suší vo vákuu. Výsledkom je 17,45 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, ako svetložltý olej.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,17.

d) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{4-[metánsulfonyl)-oxy]-1 -oxo-2- {[(fenylmetoxy)karbonylamino]butyl} amino-6,6-dimetylhexánovej

Do roztoku 17,40 g (39,50 mmol) produktu z časti c) (po trojnásobnej destilácii s toluénom a sušením vo vákuu počas noci) v 250 ml metylénchloridu sa po ochladení na -15 °C (ľad a acetón) pridá čerstvo predestilovaný trietylamín v množstve 8,26 ml (59,28 mmol) a potom sa prikvapká 3,67 ml (47,4 mmol) metánsulfonylchloridu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote -15 °C počas 30 minút, rozruší sa pridaním 100 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho, získaná zmes sa mieša 5 minút, zriedi sa pridaním 600 ml etylesteru kyseliny octovej a premyje sa 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného, soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha. Zvyšok sa suší vo vákuu a získa sa tak 20,40 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme žltého oleja, ktorý sa takto použije na ďalšiu reakciu priamo, bez čistenia.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f= 0,35.

e) Metylester kyseliny [S-(R’,R*)]-2-(4-acetyltio)-l-oxo-2-{[(fenylmetoxy)karbonyl-amino]butyl-amino}-6,6-dimetylhexánovej

Do roztoku 5,09 ml (71,10 mmol) kyseliny tiooctovej v 100 ml metanolu sa pridá 10,81 g (33,18 mmol) uhličitanu cézneho a roztok sa zahustí vo vákuu. Tuhý podiel sa trituruje trikrát so suchým acetónom, potom sa sušením vo vákuu nad oxidom fosforečným počas noci získa takto tiooctan cézny.

Roztok 20,40 g (39,50 mmol) produktu z časti d) v 150 ml suchého dimetylformamidu sa pridáva via kanula zo suspenzie 10,576 g (50,85 mmol) tiooctanu cézneho v 50 ml dimetylformamidu. Získaný žltý roztok sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti počas noci, potom sa zahustí za vysokého vákua, aby sa tak odstránil pokiaľ možno všetok dimetylformamid. Zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej (H.), roztok sa premyje použitím 200 ml hydrogénuhličitanu sodného, ďalej s použitím štyroch podielov po 200 ml vody, 400 ml soľanky a štyroch podielov po 200 ml vody. Po vysušení bezvodým síranom sodným sa filtrát zahustí a zvyšok sa oddestiluje trikrát s toluénom. Následným sušením vo vákuu sa získa takto 20 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme mierne nahnedlej alebo nažltlej tuhej látky, ktorá sa použije na ďalšiu reakciu bez čistenia.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 : 2), R_f = 0,47.

f) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[4-merkapto]-l-oxo-2-[(fenylmetoxy)karbonyl-aminobutyl-amino]-6,6-dimetylhexánovej

Roztok 20 g (39,50 mmol) produktu z časti e) v 250 ml metanolu sa vychladí na 0 °C a 15 minút sa do roztoku zavádza argón. Za stáleho zavádzania argónu sa prikvapká-va 9,17 ml (40 mmol) 25 %-ného roztoku (hmotnostne) metoxidu sodného v metanole. Reakčná zmes sa mieša 5 minút, potom sa reakčná zmes rozruší pridaním 200 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho a zmes sa roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej (11.) a 200 ml vody. Vodný podiel sa extrahuje použitím 200 ml etylesteru kyseliny octovej, spojené extrakty v tomto rozpúšťadle sa premyjú použitím 400 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho, 400 ml soľanky, po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí vo vákuu a získa sa tým 17,5 g zlúčeniny zloženia, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme žltého oleja, ktorý sa použije na ďalšie reakcie bez akéhokoľvek čistenia.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 8 :2), Rf= 0,45.

g) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)-karbonylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 17,5 g (38,3 mmol) produktu z časti f) v 600 ml metylénchloridu sa pridá 6 g ionexovej živice Amberlyte^R 15, vopred upravenej 6 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodou, tetrahydrofúránom a metylénchloridom s následným vysušením. Suspenzia sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti 18 hodín, potom sa filtruje, filtrát sa zahustí a zvyšok sa adsorbuje na Celite^R, ďalej sa čistí na kolóne silikagélu 10 na 30 cm za eluovania zmesou 20 až 30 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne. Predpokladané frakcie sa spoja a zahustením vo vákuu do sucha sa získa 9,18 g zlúčeniny, ktorá je uvedená v nadpise, a to vo forme žltého oleja.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1), Rf= 0,32.

h) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10afl)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Do roztoku produktu z príkladu, časť g) (9,1 g, 23,19 mmol), ktoiý sa trikrát oddestiluje s toluénom a suší vo vákuu cez noc, sa v prostredí 150 ml metylénchloridu pridá 4,95 ml (34,78 mmol) jódtrimetylsilánu po kvapkách. Vzniknutý žltý roztok sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti počas 1,5 hodín, rozruší sa pridaním 120 ml 0,4 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej v zmesi metanolu a dioxánu, prchavé podiely sa oddcstilujú vo vákuu a zvyšok sa roztrepáva medzi 500 ml éteru a 700 ml vody. Organická fáza sa extrahuje s použitím 150 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, spojené kyslé vodné extrakty sa ochladia na 0 °C a po alkalizácii pridaním 1 N roztoku hydroxidu sodného na pH 10,5 (sledované pH-metrom) sa všetko extrahuje do metylénchloridu (štyrikrát do 400 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú soľankou, vysušia sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustením vo vákuu získa 6,45 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme žltého oleja, ktorý sa použije na ďalšiu reakciu bez akéhokoľvek čistenia.

Chromatografia na tenkej vrstve (metanol a metylénchlorid, 1 : 9), Rf= 0,20.

i) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Do vychladeného roztoku (0 °C) soli trietylamínu a kyseliny (S)-(2-acetyltio)-benzénpropánovej v metylénchloride sa pridá roztok produktu z časti h) v metylénchloride a ďalej benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluorofosfát. Reakčná zmes sa spracuje ako v postupe, opísanom v príklade 3 c) za vzniku metylesteru kyseliny {4S-[4a(R’),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej.

K roztoku tohto metylesteru ako produktu v metanole, zbaveného kyslíka, sa pridá 1 N roztok hydroxidu sodného, a to podľa postupu z príkladu 3 d) a získa sa tým produkt, ako je uvedený v nadpise.

Príklad 12

Kyselina {4S-[4ct(R*),7a,10aB])-oktahydro-4-[2-merkaptometyl)-1 -oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Soľ kyseliny (S)-2-(acetyltio)metyl benzénpropánovej a efedrínu

Roztok 17,3 g (105 mmol) (lR,2S)-(-)-efedrínu v 175 ml dietyléteru sa pridá naraz do roztoku 50,0 g (210 mmol) kyseliny 2-[(acetyltio)-metyl]-benzénpropánovej v 175 ml dietyléteru. Potom, čo sa nechá reakčná zmes stáť pri teplote miestnosti 16 hodín, odfiltruje sa kryštalická soľ efedrínu (19,7 g), 1.1. 114 až 125 °C.

[a]_D= -40,6° (c = 1, metanol).

Ďalšie množstvo tuhého podielu (8,9 g), t. t. 121 až 126 °C, [a]_D = -47,2° (c = 1, metanol), sa získa z roztoku státím pri teplote miestnosti počas ďalších 20 hodín. Tuhé podiely sa spoja a prekryštalizujú z 1500 ml acetonitrilu. Po 16-tich hodinách pri teplote miestnosti sa takto získa 20,8 g látky s 1.1. 125 až 130 °C, [ot]_D= -48,9° (c = 1, metanol). Táto látka sa prekryštalizuje tým istým spôsobom z 300 ml acetonitrilu, získa sa tým 18,7 g zlúčeniny s t. t. 128 až 130 °C, [a]_D= -48,9° (c = 1, metanol). Treťou kryštalizáciou z 225 ml acetonitrilu sa získalo 17,4 g kryštalickej soli efedrínu a kyseliny (S)-2-[(acetyltio)-metyl]-benzénpropánovej, 1.1.128 až 129 °C, [a]_D= -50,2° (c = 1, metanol).

Analýza pre C|₂H₁₄O₃S. Ci₀Hi₅NO vypočítané: 65,48% C, 7,24% H, 3,47% N, 7,95 % S nájdené: 65,46 % C, 7,34 % H, 3,21 % N, 8,00 % S

b) Metylester kyseliny {4S-[4a(R‘),7a,10aBJ}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-metyl]-l-oxo-3-fenylpropylamino-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Miešaná suspenzia 333,1 mg (0,822 mmol) soli efedrínu z časti a) v 5 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje trikrát použitím 5 ml dávky roztoku 1 N kyseliny chlorovodíkovej, organický extrakt sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí s tým, že sa zvyšok suší 30 minút vo vákuu. Zvyšný olej sa rozpustí v 2 ml metylénchloridu, roztok sa mieša pod dusíkom za chladenia na 0 °C a pridáva sa k nemu roztok 200,0 mg (0,774 mmol) metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10afi)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][l,3]-tiazepin-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 3c) v 6 ml metylénchloridu, ďalej 0,113 ml (0,813 mmol) trietylamínu a nakoniec 360,0 mg (0,813 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)fosfóniumhexafluorofosfátu. Pri teplote 0 °C sa reakčná zmes mieša, teplota sa nechá pomaly vystúpiť na 20 °C a po hodinách sa reakčná zmes zahustí vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej a získaný roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného (20 ml) raz tým istým objemom nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom soľankou. Organický podiel sa vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa žltý penovitý produkt. Ten sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (0,062 - 0,050 mm) za tlaku 70 až 140 KPa dusíka s eluovaním zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (4 : 3). Výsledkom je 303 mg produktu vo forme číreho oleja.

c) Kyselina {4S-[4a(R‘),7a,10aB]}-oktahydro-4-[2-(merkaptometyl)-l-oxo-3-fenylpropyl]amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 303,1 mg (0,635 mmol) produktu z časti b) v

6,5 ml metanolu sa zbaví kyslíka zavádzaním dusíka, ochladí sa na 0 °C a pridáva sa 6,5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného kyslíka dusíkom. Za stáleho zavádzania dusíka sa reakčná zmes mieša pri 0 °C hodinu, potom sa teplota ponechá vystúpiť na 20 °C a po celkom 3 hodinách reakcie sa reakčná zmes okyslí na pH 1 pridaním 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného a extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, organické podiely sa spoja, všetko sa premyje vodou, soľankou a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením filtrátu vo vákuu získa takto 219 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to vo forme bielej tuhej látky, t. t. 200 °C (za rozkladu).

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej, kyselina octová a hexán 6 : 0,01 : 3,99), R_f= 0,15.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný Čas 26,3 min. nečistoty: 27,0 min. Kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 0 % až 100 % B : A, 30 min. lineárny gradient s 10-timi minútami zdržania, 1,5 ml/min.

A : 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B : 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Analýza pre C₂oH₂₆0₄N₂S₂.0,11 C₄H₈O₂.0,07 CH₂C1₂vypočítané: 56,22 % C, 6,21 % H, 6,39 % N, 14,63 % S nájdené: 56,46 % C, 6,28 % H, 6,31 % N, 14,59 % S

Príklad 13

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4-metyl-1 -oxopentyl)amino] -5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-bróm-4-metylpentánová

Do miešaného roztoku 3,0 g (23 mmol) D-leucínu v 47 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej sa pridá pri teplote miestnosti 9,5 g (80 mmol) bromidu draselného, reakčná zmes sa ochladí na -10 °C a po častiach sa pridáva 2,4 g (34 mmol) dusitanu sodného, pričom sa teplota udržuje v rozmedzí -10 °C až -5 °C. Po skončení pridávania sa reakčná zmes mieša ešte jednu hodinu, teplota sa nechá vystúpiť na °C a v miešaní sa pokračuje ešte hodinu. Ďalej sa reakčná zmes extrahuje dvakrát do éteru, roztok v éteri sa premyje raz vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Získa sa tým 2,7 g surovej látky, ako je jej zloženie uvedené v nadpise.

b) Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-4-metylpentánovej

Do miešanej suspenzie 1,7 g draselnej soli kyseliny tiooctovej (15,9 mmol) v 50 ml suchého acetonitrilu sa vnesie pri teplote miestnosti a pod argónom roztok 2,6 g (13 mmol) produktu z časti a) v 17 ml acetonitrilu, reakčná zmes sa mieša 4 hodiny, vzniknutá suspenzia sa filtruje a zahustí. Zvyšok sa znova rozpustí v etylesteri kyseliny octovej, ten sa oddestiluje, zvyšok sa rozpustí v dietyléteri, roztok sa premyje raz 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného a raz soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa rozpustí v 64 ml éteru, do roztoku sa pridá 2,7 ml (14 mmol) dicyklohexylamínu. Z roztoku sa začne ihneď vylučovať biela tuhá látka a po odfiltrovaní tohto podielu sa získa 2,0 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, 1.1. 153 až 158 °C, [a]_D= -54,6° (c = 0,61, chloroform).

c) Metylester kyseliny {4S-[4ct(R*),7a,10aB])-oktahydro-4-2-(acetyltio)-4-metyl-l-oxopentyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Miešaná suspenzia 403,3 mg (1,09 mmol) produktu z časti b) v 5 ml etylesteru kyseliny octovej sa premyje trikrát s použitím 5 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, organické extrakty sa spoja, všetko sa premyje soľankou a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením filtrátu získa zvyšok, ktorý sa suší 30 minút. Zvyšný olej, 179,4 mg (0,943 mmol) sa rozpustí v 2 ml metylénchloridu, roztok sa vychladí za miešania pod dusíkom na 0 °C a do tohto roztoku sa pridá 232,0 mg (0,898 mmol) metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)j-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 3c) v prostredí 6 ml metylénchloridu, ďalej 0,131 ml (0,943 mmol) trietylamínu a konečne 417,1 mg (0,943 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša hodinu za chladenia na 0 °C a ďalej

3,5 hodín pri teplote miestnosti. Po celkovom čase 4,5 hodín sa reakčná zmes zahustí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej. Získaný roztok sa premyje raz s použitím 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a raz s použitím soľanky. Organická vrstva sa vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí za vzniku peny. Tá sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli tu už uvedenej kvality' za tlaku dusíka, ako bol uvedený a eluovaním zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu (2 : 3) sa získa 209,4 mg zlúčeniny, ako bolo uvedené v nadpise, a to vo forme číreho oleja.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-4-metyl-l-oxopentyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 209,4 mg (0,486 mmol) produktu z časti c) v 5 ml metanolu sa zbaví kyslíka zavádzaním dusíka, ochladí sa na 0 °C, pridá sa 5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, zbaveného kyslíka zavádzaním dusíka a reakčná zmes sa mieša hodinu pri teplote 0 °C za stáleho zavádzania dusíka a potom sa teplota reakčnej zmesi nechá vystúpiť na 20 °C. Celkom po 2,5 hodinách sa reakčná zmes okyslí na pH 1 pridaním 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, nasleduje extrakcia do etylesteru kyseliny octovej, organické podiely sa spoja, premyjú sa vodou, soľankou a po vysušení bezvodým síranom sodným sa filtrujú a filtrát sa zahustí vo vákuu. Čistením rýchlou chromatografiou na silikagéli uvedených vlastností za uvedeného tlaku dusíka a za eluovania dusíkom s použitím zmesi etylesteru kyseliny octovej/kyseliny octovej a hexánu 6 : 0,01 : 3,99) sa získa 142,0 mg zlúčeniny, ako je uvedené v názve, za vzniku bielej tuhej látky. Chromatografia na tenkej vrstve etyleste ru kyseliny octovej : kyseliny octovej a hexánu (6 : 0,1 : :3,9), R_f= 0,20.

[ot]_D= -103,0° (c = 0,43, chloroform).

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas = = 26,7 min. kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 0 % až 100 % B. A : 30 min. lineárny gradient a 10 minút zdržania, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B = 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Analýza pre C|₆H₂₆O₄N₂S₂.0,19 C₄H₈O₂.0,18 C₇Hi₆.0,9 H₂O vypočítané: 50,87% C, 7,63% H, 6,58% N, 15,07% S nájdené: 50,57% C, 7,20% H, 6,83% N, 14,75% S.

Príklad 14

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxobutyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brómbutánová

7,85 g (65,94 mmol) bromidu draselného sa vnesie do roztoku 2,0 g (19,40 mmol) kyseliny (R)-2-aminobutánovej v 25 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej, zmes sa ochladí na 0 °C a v niekoľkých dávkach sa pomaly pridáva 2,06 g (29,87 mmol) dusitanu sodného. Počas tohto pochodu sa teplota reakčnej zmesi udržuje pod 2 °C, reakčná zmes sa ďalej mieša hodinu pri teplote 0 °C a 16 hodín pri teplote miestnosti a potom sa extrahuje niekoľkokrát dávkami po 50 ml etylesteru kyseliny octovej. Spojený roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje dvakrát 50 ml vody, raz použitím soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým sa zahustením filtrátu získa 2,86 g zlúčeniny uvedenej v nadpise, vo forme surového oleja.

b) Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-butánovej

Do suspenzie 2,14 g (18,17 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 15 ml acetonitrilu sa za miešania pri teplote miestnosti prikvapkáva 15 minút roztok 2.83 g (17,07 mmol) kyseliny (R)-2-brómbutánovej v 15 ml acetonitrilu a reakčná zmes sa po miešaní 16 hodín pri teplote miestnosti filtruje. Filtrát sa vo vákuu zahustí a zvyšný olej sa rozpustí v 30 ml etyléteru. Roztok v éteri sa premyje dvakrát s použitím 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát použitím vždy 20 ml vody, dvakrát tým istým objemom soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa k filtrátu pridajú 3,4 ml (17,07 mmol) dicyklohexylamínu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny a vylúčený podiel zrazeniny sa odsaje 1,24 g produktu, t. j. soli dicyklohexylamínu. Ďalší podiel 724 mg tejto soli sa získa z filtrátu.

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9afl]}-oktahydro-3-[2-(acetyltio)-l-oxobutylamino]-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

V 15 ml etylesteru kyseliny octovej sa rozpustí 227 mg (0,66 mmol) soli dicyklohexylamínu ako produktu z časti

b), roztok sa premyje tromi podielmi po 10 ml roztoku hydrogensíranu draselného, raz použitím 10 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu vo vákuu získa 108 mg kyseliny (S)-2-(acetyltio)-butánovej vo forme číreho oleja.

K roztoku 108 mg (0,66 mmol) tejto voľnej kyseliny v 5 ml suchého metylénchlorídu sa po ochladení na 0 °C pridá 90 μί (0,66 mmol) trietylamínu, ďalej 250,0 mg (0,66 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej, pripravenej zproduktu, opísaného v príklade 5d a druhý podiel 90 μί (0,66 mmol) trietylamínu. Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C 20 minút, potom sa naraz pridá 292 mg (0,66 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu a reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C. Ponechá sa v chladničke 56 hodín, ďalej sa mieša 3 hodiny pri teplote miestnosti, zahustí sa vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v 30 ml etylesteru kyseliny octovej a roztok sa premyje postupne s použitím vždy 20 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, hydrogenuhličitanu sodného (nasýteného roztoku) a soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa surový olej, ten sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), 25 na 100 mm s použitím zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu, 2:3. Výsledkom je 208 mg látky, uvedenej v názve, vo forme bielej napenenej hmoty.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxobutyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b][ 1,3] -tiazeρίη-7-karboxylová

Roztok 225 mg (0,559 mmol) produktu z časti c) v 5 ml metanolu sa preplachuje argónom 30 minút, ochladí sa na 0 °C a prikvapkáva sa 5 ml 1 M roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného kyslíka argónom, čo za chladenia na 0 °C trvá 30 minút. Za uvedenej teploty sa reakčná zmes mieša 3 hodiny za neustáleho prívodu argónu, potom sa okyslí na pH 25 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného. Reakčná zmes sa extrahuje tromi dávkami po 40 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok v tomto rozpúšťadle sa po spojení výtrepkov vysuší bezvodým síranom horečnatým a zahustením vo vákuu sa získa ako surový produkt pena. Rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) 25 na 180 mm, 3 % kyseliny octovej v etylacetáte sa získa biela pena, ktorá sa rozpustí v metylénchloride a triturovaním s hexánom sa získa 176 mg zlúčeniny, uvedenej v názve, opäť vo forme kompaktnej bielej peny.

[a]_D= -125,4° (c = 1,0, chloroform).

Chromatografia na tenkej vrstve, metanol a metylénchlorid 1 :9,R_f=0,16.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas = = 15,5 min. (97 %, UF 220 nM, kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 120 A, 6,0 na 150 mm, 0 % B : A až 100 % B : A. Lineárny gradient 25 minút.

A = 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B = 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť 1,5 ml/min.

Analýza pre C₁₃H₂₀N₂O4S₂.0,8 H₂O vypočítané: 46,10 % C,6,66 % H, 7,52 % N, 17,21 % S nájdené: 46,00 % C, 6,17 % H, 7,52 % N, 16,82% S.

Príklad 15

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxopentyl)amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brómpentánová

Podľa postupu z príkladu 14a), ale s použitím D-norvalínu namiesto (R)-2-aminobutánovej sa získa kyselina (R)-2-brómpentánová ako číra kvapalina.

b) Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-pentánovej

Reakciou kyseliny (R)-2-brómpentánovej s draselnou soľou kyseliny tiooctovej v acetonitrile podľa postupu z príkladu 15b) sa získa vo forme bielej tuhej látky dicyklohexylamínová soľ kyseliny (S)-2-(acetyltio)-pentánovej.

c) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l -oxopentyl]amino-5-oxopyrolo[2,l-b][l ,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Reakciou voľnej kyseliny z dicyklohexylamínovej soli z časti b) s metylesterom kyseliny [4S-(4a,7a,9afi)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej podľa postupu z príkladu 14c) sa získa produkt, ako je jeho zloženie uvedené v nadpise, vo forme bielej peny.

c) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9afi]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopentyl)amino]-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazeρίη-7-karboxylová

K roztoku produktu z časti c) v metanole sa pridá 1 M roztok hydroxidu sodného, reakčná zmes sa spracuje podľa postupu z príkladu 14d) a získa sa tým produkt, uvedený v nadpise, vo forme kompaktnej bielej peny.

[<x]_D=-122,8° (c =1,0, CDClj).

Chromatografia na tenkej vrstve s použitím zmesi metanolu a metylénchloridu 1 : 9, Rf= 0,15.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas = = 20,5 min. (97 %, UF 220 nM), kolóna YMC S-3 ODS (C-18, 120 A), 6 na 150 mm, 0 % B : A až 100 % B : A. Lineárny gradient 25 minút.

A = 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B = 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Prietoková rýchlosť 1,5 ml/min.

Analýza pre C₁₄H2₂N2S₂O₄. 0,65 H₂O . 0,20 C₆H₁₄vypočítané: 48,63 % C,7,01 % H, 7,46 % N, 17,08 % S nájdené: 48,86 % C, 6,70 % H, 7,24% N, 16,74% S.

Príklad 16

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9afi]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimetyl-1 -oxopentyl)] -amino-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-bróm-4,4-dimetylpentánová

Roztok 950 mg (6,55 mmol) kyseliny (R)-2-amino-4,4-dimetylpentánovej v 13 ml (33 mmol) 2,5 N vodného roztoku kyseliny sírovej sa ochladí na -5 °C a po pridaní 2,72 g (22,9 mmol) bromidu draselného sa k číremu roztoku pridáva po častiach 680 mg (9,86 mmol) dusitanu sodného, pričom sa teplota udržuje počas 25-tich minút v rozmedzí 0 až 3 °C. Hodinu sa reakčná zmes mieša pri 0 °C, hodinu a pol pri teplote miestnosti, zriedi sa potom vliatím do 10 ml vody a reakčný produkt sa extrahuje do 60 ml éteru. Roztok sa premyje použitím 20 ml vody, 20 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a filtrát sa zahustí vo vákuu. Vo forme bezfarebnej kvapaliny sa získa látka, uvedená v nadpise.

b) Kyselina (S)-2-(acetyltio)-4,4-dimetylpentánová

Do suspenzie 750 mg (6,58 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 10 ml acetonitrilu, vysušeného molekulárnym sitom sa po ochladení na 0 °C pridáva počas 5 minút roztok kyseliny (R)-2-bróm-4,4-dimetylpentánovej z časti

a) v 2 ml acetonitrilu, teplota reakčnej zmesi sa nechá vystúpiť na 20 °C, reakčná zmes sa takto mieša 2,5 hodiny a suspenzia sa filtruje. Filtrát sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa zriedi pridaním 5 ml éteru, roztok sa premyje dvoma dávkami po 50 ml vodného roztoku símatanu sodného, ďalej použitím 25 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečnatým sa filtrát zahustí vo vákuu. Svetložltý olej sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagélovej kolóne (Merck), 12 na 3 cm, 10 % metanolu v metylénchloride a získa sa tým 575 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, vo forme svetložltého oleja.

c) Metylester kyseliny (4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-4,4-dimetyl-1 -oxopentyl]-amino-5-oxopyrolo-[2,1 -bl [ 1,3] -tiazepín-7-karboxylovej

Číry roztok 148 mg (0,72 mmol) produktu z časti b) v 5 ml metylénchloridu (predestilovaného cez hydrid vápnika) sa ochladí na 0 °C a pridá sa roztok soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)j-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,1 -b][l ,3]-tiazepín-7-karboxylovej v množstve 250 mg (0,60 mmol), pripraveného z materiálu, ako to bolo opísané v príklade 5d), v 3 ml metylénchloridu taktiež predestilovaného cez hydrid vápnika. Ďalej sa pridá 122 mg (1,2 mmol) trietylamínu a 319 mg (0,72 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfónium-hexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C 24 hodín, ďalej 5 hodín pri teplote miestnosti, zahustí sa vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylesteru kyseliny octovej a organický roztok sa premyje s použitím 50 ml 5 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného, 50 ml na 50 % nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a tým istým objemom soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a zahustením filtrátu vo vákuu sa čistí takto pripravený surový produkt rýchlou chromatografiou na 20 g silikagélu (Merck) s využitím etylesteru kyseliny octovej a získa sa tak 244 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme bielej peny.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimetyl-l-oxopentyl)]-amino-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

Číry roztok 240 mg (0,56 mmol) produktu z časti c) v ml metanolu sa prepláchne zavedením dusíka, ochladí sa na 0 °C a do roztoku sa prikvapká za neustáleho chladenia na 0 °C a zavádzania argónu 2,27 ml (2,24 mmol) 1 N roztoku hydroxidu sodného. Reakčná zmes sa mieša hodiny pri 0 °C, 3 hodiny pri teplote miestnosti, potom sa okyslí na pH 1 5 %-ným vodným roztokom hydrogensíranu draselného, stále za zavádzania argónu. Produkt sa extrahuje do 50 ml metylénchloridu (zbaveného kyslíka argónom), premyje sa soľankou, vysuší bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustí vo vákuu. Surový produkt sa prekryštalizuje zo zmesi metylénchloridu a hexánu a získa sa tým 75 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, ako biela tuhá látka, 1.1. 124 až 126 °C.

[a]_D = -175° (c = 0,25, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve s použitím zmesi kyselina octová : metanol a metylénchlorid 1 : 5 : 94, R_f= 0,65. Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas min. kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6 na 150 mm,

1,5 ml/min. lineárny gradient 0 až 100 % počas 30 minút, pufer.

A = metanol, voda, kyselina fosforečná 10 : 90 : 0,2,

B = metanol, voda, kyselina fosforečná 90 : 10 : 0,2,

24,4 min. 95 % celkovej oblasti piku pri 254 nm.

Analýza pre Ci₆H₂6N₂O₄S₂.0,13 C₆H_]4vypočítané: 52,24 % C,7,28 % H, 7,26 % N, 16,62 % S nájdené: 51,97 % C,7,26 % H, 7,09 %N, 16,23 %S.

Príklad 17

Kyselina {4S-[4a(R’),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxopropy l)-amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7 -karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brómpropánová

Podľa postupu z príkladu 14a), ale s použitím D-alanínu namiesto kyseliny (R)-aminobutánovej, sa získa vo forme ľahko nažltlého oleja kyselina (R)-2-brómpropánová.

b) Kyselina (S)-2-(acetyltio)-propánová

Do ľahko nazelenalého roztoku 3,94 g (34,5 mmol draselnej soli kyseliny tiooctovej v 150 ml acetonitrilu sa pridá roztok 4,8 g (31 mmol) kyseliny (S)-2-brómpropánovej v 12 ml acetonitrilu pod argónom a za teploty miestnosti. Vzniknutá biela suspenzia sa mieša 2 hodiny pri teplote miestnosti, potom sa filtruje a filtrát sa zahustí vo vákuu. Zvyšok sa zriedi pridaním 100 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje použitím 50 ml 10 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Získa sa tak 4,61 g surového produktu, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na 60 g silikagélu Merck s použitím zmesi kyseliny octovej, etylesteru kyseliny octovej a hexánu 1 : 45 : 54. Získa sa tak 3,7 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise vo forme mierne žltého oleja.

[ct]_D= -114° (c = 0,50, metanol).

c) Metylester kyseliny (4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[2-(acetylti o)-1 -oxopropyl]-amino-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepin-7-karboxylovej

Číry roztok 86 mg (0,58 ml) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-propánovej v 5 ml metylénchloridu, ktorý bol destilovaný cez hydrid vápnika, sa ochladí na 0 °C a pridá sa roztok 200,0 mg (0,46 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (pripravenej z materiálu, opísaného v príklade 5 d), v 5 ml metylénchloridu, predestilovaného cez hydrid vápnika, ďalej 98 mg (0,97 mmol) trietylamínu a 255 mg (0,58 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša 22 hodín pri 0 °C, ďalej 2 hodiny pri teplote miestnosti, zahustí sa vo vákuu a zvyšok sa zriedi pridaním 100 ml etylesteru kyseliny octovej. Po premytí s použitím 30 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, 50 %-ného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a soľankou sa filtrát po vysušení bezvodým síranom sodným zahustí vo vákuu. Surový takto získaný produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na 40 g silikagélu (Merck) s použitím ďalej etylesteru kyseliny octovej a získa sa tak vo forme bielej tuhej látky s t. t. 143 až 145 °C produkt, so zložením uvedeným v nadpise.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxopropyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3] -tiazeρίη-7-karboxylová

Do číreho roztoku 180 mg (0,48 mmol produktu z časti c) v 2 ml metanolu sa za ochladenia na -10 °C a pod argónom pridáva ďalej pod argónom po kvapkách 1,95 ml (1,95 mmol) 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného, reakčná zmes sa ďalej mieša za zavádzania argónu a pri 0 °C počas 3 hodín, okyslí sa na pH 1 5 %-ným vodným roztokom hydrogensíranu draselného, taktiež pod argónom. Produkt sa extrahuje do 100 ml etylesteru kyseliny octovej (z ktorého bol vypudený vzduch dusíkom), roztok sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa fíltrát zahustí vo vákuu. Ďalej sa surový produkt čistí rýchlou chromatografiou na 40 g silikagélu (Merck), sústava kyselina octová - metanol - metylén-chlorid 1:5: : 94 a získa sa tak 154 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme bielej tuhej látky s 1.1. 150 až 152 °C. [a]_D= -156° (c = 0,50, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve s použitím tej istej sústavy, R_f= 0,28.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min. lineárny gradient 0 až 100 % B počas 30 minút.

Pufer A = metanol/voda/kyselina fosforečná 10:90: 0,2, Pufer B = metanol/voda/kyselina fosforečná 90 :10 : 0,2, Retenčný čas 14,69 min. nad 95 % v celkovom priestore piku pri 254 nm.

Analýza pre C₁₂H₁₈N₂O₄S₂. 0,7 CH₃COOH vypočítané: 44,61 % C,5,82 % H, 7,71 % N, 17,64 % S nájdené: 44,76 % C,5,71 % H, 7,81%N, 17,76 % S.

Príklad 18

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-l-oxopropyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-[(fenylmetoxy)-karbonylamino]-4-penténová

Zmes 2,8 g (24,3 mmol) S-alylglycínu, 25 ml 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného a 10 ml tetrahydrofuránu (vydestilovaného z ketylu) sa mieša pri teplote miestnosti až do vzniku homogénnej sústavy, ktorá sa vychladí v kúpeli z ľadu. Potom sa do prudko miešaného tohto roztoku pridá asi 5 ml 1,0 M vodného roztoku hydroxidu sodného a prikvapká sa asi 1 g benzylesteru kyseliny chlórmravčej. To sa opakuje ďalej ešte štyrikrát, až sa spotrebuje celkom 28 ml 1,0 M vodného roztoku hydroxidu sodného a 4,80 g (95 %, 27 mmol) benzylesteru kyseliny chlórmravčej. Reakčná zmes sa mieša 15 minút pri 0 °C, potom 30 minút pri teplote miestnosti, extrahuje sa ďalej do 50 ml éteru, vodný podiel sa okyslí na pH 1,5 pridaním asi 10 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej a nasleduje trikrát extrakcia do 50 ml éteru. Spojené roztoky v éteri sa vysušia bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu vo vákuu sa takto získa 6,01 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bezfarebného oleja.

b) Fenylmetylester kyseliny (R)-2-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-amino-4-penténovej

Do roztoku 5,96 g (23,9 mmol) produktu z časti a) tohto príkladu v 25 ml bezvodého dimetylformamidu sa pridá pri teplote miestnosti 4,28 g (13,1 mmol) uhličitanu cézneho). Reakčná zmes sa mieša 20 minút a ďalej sa rýchlo pridá za mierne exotermickej reakcie 4,5 g (26,3 mmolov) benzylbromidu a reakčná zmes sa ďalej mieša 30 minút a potom sa roztrepáva medzi 100 ml vody a 100 ml éteru. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa trikrát s použitím 100 ml dávok vody, 50 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu vo vákuu sa izoluje olej. Tento surový produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), 24 na 5,0 cm s použitím zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu 1 : 10, potom 1:4a získa tak 6,13 g produktu, ktorého zloženie je uvedené v nadpise, vo forme bezfarebného oleja.

c) Fenylmetylester kyseliny (R)-a-{[(fenylmetoxy)-karbonyl]-amino}-cyklopropánpropánovej

Do roztoku 5,78 g (17,1 mmol) produktu z časti b) v 60 ml bezvodého éteru sa pridá 65 mg (0,29 mmol) octanu paládnatého, všetko sa mieša 10 minút, potom sa zmes ochladí na 0 °C a počas 15-tich minút sa pridáva po častiach roztok diazometánu v éteri, pripravený z 12 g N-metyl-N'-nitro-N-nitrozoguanidínu, v 120 ml éteru. Po miešaní 15 minút sa reakčná zmes rozruší pridaním 1 ml ľadovej kyseliny octovej, zmes sa prepraví do deličky, tam sa premyje použitím 100 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 50 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu vo vákuu sa pripraví žltý olej. Ten sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), 20 na 5,0 cm, etylester kyseliny octovej a hexán, 1:4a získa sa tak 5,74 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bezfarebného oleja.

d) Kyselina (R)-a-ammocyklopropánpropánová

Do roztoku 5,71 g (16,2 mmol) produktu z časti c) v 75 ml metanolu sa pridá 1,14 g 10 %-ného paládia na uhlí ako katalyzátor v prostredí metanolu a všetko sa mieša v atmosfére vodíka v uzavretej nádobe pri teplote miestnosti 48 hodín. Z reakčnej zmesi sa odfiltruje katalyzátor, ktorý sa prepláchne teplou vodou a filtrát sa potom cez 0,4 μΜ polykarbonátový membránový filter. Ďalej sa filtrát zahustí vo vákuu a zostane 2,03 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielej tuhej látky.

e) Kyselina (S)-a-(acetyltio)cyklopropánpropánová

Zmes 2,00 g (15,5 mmol) produktu z časti d) v 30 ml

2,5 N vodného roztoku kyseliny sírovej sa mieša pri teplote miestnosti, až je homogénna, potom sa vychladí na -5 °C a v jednej dávke sa do zmesi pridá 6,50 g (54,6 mmolov) bromidu draselného, zmes sa ďalej mieša, až je homogénna, potom sa v malých dávkach počas asi 25 minút pridáva 1,60 g (23,2 mmol) dusitanu sodného. Reakčná zmes sa udržuje stále na teplote pod 0 °C, mieša sa pri 0 °C ďalšiu hodinu, potom 1,5 hodiny pri teplote miestnosti. Zriedi sa potom pridávaním 30 ml vody a všetko sa extrahuje tromi dávkami po 30 ml éteru. Eterové extrakty sa spoja, všetko sa premyje použitím 25 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustením vo vákuu sa takto dospeje k 2,82 g surovej kyseliny (R)-a-brómcyklopropánpropánovej, ktorá sa získa vo forme svetložltého oleja.

Roztok takto získanej surovej kyseliny (R)-a-brómcyklopropánpropánovej sa v prostredí 10 ml acetonitrilu vnáša počas 5-tich minút do miešanej suspenzie 1,83 g (16,1 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 20 ml acetonitrilu za chladenia zmesi v kúpeli z ľadu a soli. Pri teplote 0 °C sa mieša reakčná zmes hodinu, potom 16 hodín pri teplote miestnosti, filtruje sa a zahustením filtrátu vo vákuu sa získa olej. Ten sa čistí rozdeľovaním medzi 50 ml éteru a 50 ml 5 %-ného vodného roztoku símatanu sodného. Organická vrstva sa potom po oddelení premyje použitím 25 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu vo vákuu sa pripraví žltý olej. Ten sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), 12 na 5,9 cm, sústava metanol a metylénchlorid 1 : 19 a získa sa tak 1,52 g zlúčeniny uvedenej v nadpise ako žltý olej.

f) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9afl]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-3-cyklopropyl-l-oxopropyl]-amino-5-oxopyrolo-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

292 mg (0,66 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu sa pridá v jednej dávke do zmesi 250 mg (0,60 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny |4S-(4a,7a,9aB)|-oktahydro-4-amino-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (príprava z materiálu, opísaného v príklade

d), 3 ml metylénchloridu (destilovaného cez hydrid vápnika), 121 mg (1,20 mmol) trietylamínu a 122 kg (0,65 mmol) produktu z časti e) v 3 ml metylénchloridu, destilovaného cez hydrid vápnika). Reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C, potom 1,5 hodiny pri teplote miestnosti. Rozdeľuje sa ďalej medzi 20 ml etylesteru kyseliny octovej a 20 ml 1 M vodného roztoku hydrogensíranu draselného, organická vrstva sa oddelí, premyje použitím 20 ml 5 %-ného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 20 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu vo vákuu zostane olej. Ten sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck), 12 na 3,0 cm, etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1a získa sa tak 191 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise vo forme tuhej bielej peny.

g) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-1 -oxopropyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 185 mg (0,45 mmol) produktu z časti f) sa v prostredí 3 ml metanolu zbaví kyslíka argónom, ktorý sa zavádza 10 minút pri 0 °C, potom sa pridajú 3 ml 1 M roztoku hydroxidu sodného vo vode, z ktorého bol taktiež odstránený kyslík zavádzaním argónu 10 minút. Reakčná zmes sa mieša 2,5 hodiny pri teplote miestnosti za neprerušovaného prívodu argónu, potom sa okyslí pridaním 20 ml 1 M roztoku hydrogensíranu draselného a extrahuje do 20 ml etylesteru kyseliny octovej. Organický extrakt sa premyje použitím 20 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a zahustením vo vákuu sa získa gumovitá látka, ktorá sa rozotrie z bezvodým éterom a z roztoku sa zahustením vo vákuu olejovej vývevy získa 121 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme bielej peny.

[a]_D= -103° (c = 0,23, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve v sústave kyselina octová, metanol, metylénchlorid 1 : 10 : 90, R_f= 0,46.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, kolóna YMC S-3 ODS 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min. lineárny gradient 0 až 100 % B počas 30 minút.

Pufer A = metanol/voda/kyselina fosforečná 10 : 90 : 0,2, Pufer B = metanol/voda/kyselina fosforečná 90 : 10 : 0,2, 20,7 min. nad 97 % piku celkovej plochy pri 254 nm. Analýza pre C15H22N2O4S2.0,20 H₂O vypočítané: 49,77 % C, 6,23 % H, 7,74 % N, 17,71 % S nájdené: 50,01 % C, 6,27 % H, 7,50% N, 17,40% S.

Príklad 19

Kyselina [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4-[(l-merkaptopenty l)-karbonylamino] -5-oxopyrolo [2,1 -b] [ 1,3] -tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina 1 -merkaptocyklopentánkarboxylová

Roztok lítiumdiizopropylamidu sa pripraví pod dusíkom z 5,4 ml (38,5 mmol) diizopropylamínu a 15,4 ml (38,5 mmol) 2,5 M roztoku n-butyllítia v hexáne v prostredí 17,6 ml tetrahydrofuránu, pričom sa teplota udržuje v rozmedzí -3 až 0 °C. Po miešaní 15 minút sa pridáva počas 25 minút pri teplote 0 až 3 °C 2,0 g (17,5 mmol) kyseliny cyklopentánkarboxylovej v 2 ml tetrahydrofuránu. Po 15-tich minútach pri teplote 0 °C sa chladiaci kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša ešte 15 minút, keď sa nechá vystúpiť teplota na 15 °C. Mliečne zakalená reakčná zmes sa podchladí na -78 °C a za udržovania tejto teploty sa pridáva 618,0 mg (19,3 mmol) síry. Teplota reakčnej zmesi sa nechá vystúpiť na 20 °C, po 70-tich hodinách sa reakčná zmes znova ochladí na 0 °C, rozruší sa pridaním vody a rýchle sa okyslí na pH 1 pridaním 6 N roztoku kyseliny chlorovodí kovej. Po extrakcii do etylesteru kyseliny octovej (3 dávky po 30 ml) sa spojený organický roztok premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Získa sa tým 2,62 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme žltého oleja.

b) Kyselina l-(acetyltio)-cyklopentánkarboxylová

Do roztoku 1,44 g (9,89 mmol) produktu z časti a) v 20 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného (zbaveného kyslíka dusíkom) sa pridá pri teplote 0 °C 0,93 ml (9,89 mmol) anhydridu kyseliny octovej. Ešte sa pridá 13 ml tetrahydrofuránu s úmyslom previesť vzniknutý olej do roztoku. Reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C (pH 7), nechá sa potom teplota vystúpiť na 20 °C, pridá sa ďalší podiel 0,47 ml (4,9 mmol) anhydridu kyseliny octovej, ako aj 2,04 g (14,8 mmol) uhličitanu draselného až do dosiahnutia hodnoty pH 10, ďalej 4 ml tetrahydrofuránu. Po miešaní cez noc pri teplote miestnosti sa reakčná zmes okyslí na pH 1 pridaním 1 N kyseliny chlorovodíkovej a všetko sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej. Extrakty v tomto rozpúšťadle sa spoja, roztok sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu za vzniku 1,61 g žltej tuhej látky. Tá sa potom prekryštalizuje dvakrát zo zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu za vzniku 614 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme svetlohnedej tuhej látky, t. t. 119 až 121,5 °C.

c) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9al3)]-oktahydro-4-[l-(acetyltio)-cyklopentylkarbonyl]amino-5-oxopyrolo[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 94,5 mg (0,502 mmol) produktu z časti b) v

3,6 ml metylénchloridu sa pri teplote 0 °C a pod dusíkom pridáva 70 μΙ (0,502 mmol) trietylamínu a potom v jedinej dávke 198,9 mg (0,478 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)j-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej (pripravené z materiálu, opísaného v príklade 5 d), a to v jedinej dávke a potom 66,6 μΐ (0,478 mmol) trietylamínu. Reakčná zmes sa mieša 5 minút pri teplote 0 °C, ďalej sa vnesie 222,0 mg (0,502 mmol) benzotriazol-1 -yloxytris-(dimety laminoj-fosfóniumhexafluórfosfátu a reakčná zmes sa mieša hodinu za chladenia na 0 °C, ďalej 2,25 hodín pri teplote miestnosti, zahustí sa potom vo vákuu a zvyšok sa rozdeľuje medzi etylester kyseliny octovej a 5 %-ný roztok hydrogensíranu draselného (20 ml). Organická vrstva sa premyje roztokom z polovice nasýteným hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu pripraví číry olej. Čistením rýchlou chromatografiou za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu sa získa 169,4 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme číreho oleja.

d) Kyselina [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4-[(l-merkaptopentyl)-karbonylamino]-5-oxopyrolo[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 167,3 mg (0,404 mmol) produktu z časti c) v 4 ml metanolu, zbavený kyslíka zavádzaním dusíka, sa ochladí na 0 °C a pridá sa 1 N roztok hydroxidu sodného v množstve 4 ml, taktiež zbavený kyslíka zavádzaním dusíka. Reakčná zmes sa mieša 1,5 hodiny pri 0 °C, pričom sa stále zavádza dusík, potom sa teplota reakčnej zmesi nechá vystúpiť na teplotu miestnosti, po celkom 3 hodinách sa reakčná zmes okyslí na pH 1 pridaním 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného a nasleduje extrakcia do etylesteru kyseliny octovej. Organické výtrepky sa spoja, všetko sa premyje vodou (20 ml), soľankou a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením vo vákuu a následným odparením z hexánu získa tuhá biela látka. Tá sa rozpustí v bezvodom dioxáne a lyofilizovaním sa ziska 110 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, vo forme bielej tuhej látky.

[a]_D= -106,5° (c = 0,68, chloroform).

Chromatografia na tenkej vrstve, etylester kyseliny octovej, hexán a kyselina octová, 7 : 2,9 : 0,1, Rf= 0,12.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas

21,5 min. kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 0 až 100 % B : A, 30 minút lineárny gradient a 10 minút zdržania, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody, 10 % metanolu a 0,2 % kyseliny fosforečnej

B = 90 % metanolu, 10 % vody a 0,2% kyseliny fosforečnej

Analýza pre Ci₅H₂₂N₂O₄S₂.0,15 C₄H₈O₂.0,7 H₂O . 0,08 c₆h₁₄ vypočítané: 49,37 % C, 6,63 % H, 7,16 % N, 16,39 % S nájdené: 49,03 % C, 6,37 % H, 7,21 % N, 16,65 % S.

Príklad 20

Kyselina [4S-(4a,7a, 10aB)]-4-[(2-karboxy-1 -οχο-3-fenylpropyl)-amino]-oktahydro-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazep ín-7-karboxylová

a) Monoetylester kyseliny 3-(fenylmetyl)-propándiovej

Roztok 2,5 g (10 mmol) dietylesteru kyseliny 3-(fenyl metyl)-propándiovej v 10 ml tetrahydrofuránu sa mieša počas noci s 10 ml 1 N roztoku hydroxidu lítneho. Reakčná zmes sa potom okyslí pridaním 11 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej a všetko sa extrahuje do dvoch dávok po 50 ml etylesteru kyseliny octovej. Extrakt v etylesteri kyseliny octovej sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a zahustí vo vákuu. Koncentrát sa ďalej chromatografuje na 80 g silikagélu s použitím sústavy rozpúšťadiel metanol (5 %) a chloroform. Vhodné frakcie sa spoja a zahustením sa izoluje 1,23 g produktu, ako je uvedený v nadpise.

b) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-4-[2-(etoxykarbonyl)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-oktahydro-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

V 5 ml metylénchloridu sa rozpustí 0,222 g (1 mmol) produktu z časti a) a 0,258 g (1 mmol) metylesteru kyseliny [4δ-(4α,7α, 10afi)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b]-[l,3]tiazepín-7-karboxylovej (príprava pozri príklad 3 c) a roztok sa ochladí na 0 °C. Po pridaní 0,14 ml (1 mmol) trietylamínu sa reakčná zmes mieša hodinu, pridá sa 0,442 g (1 mmol) benzotriazol- l-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu, reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C a 2,5 hodiny pri teplote miestnosti. Zriedi sa pridaním 50 ml metylénchloridu, roztok sa premyje vodu, 10 %-ným roztokom hydrogensíranu sodného, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysuší sa bezvodým síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu. Zvyšok sa chromatografuje na silikagéli s použitím 30 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne. Zodpovedajúce frakcie sa spoja a zahustením vo vákuu sa získa 0,22 g produktu, ako je uvedené v nadpise.

c) Kyselina [4S-(4a,7a,10afi)]-4-[(2-karboxy-l-oxo-3-fenylpropyljamino] -oktahydro-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3] -tiazcpín-7-karboxylová

V prostredí 5 ml tetrahydrofuránu sa mieša 0,22 g (0,476 mmol) produktu z časti b) s 5 ml 1 N roztoku hyd roxidu lítneho pri teplote miestnosti počas 3 hodín. Reakčná zmes sa okyslí na pH 2 pridaním 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, zahustí sa vo vákuu a zvyšok sa rozpusti v etylesteri kyseliny octovej, roztok sa premyje vodou, soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustí vo vákuu na objem 3 ml, keď začne látka kryštalizovať. Po státí cez noc pri 0 °C sa tuhý podiel odfiltruje a sušením sa získa 0,16 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, ako biela tuhá látka, 1.1. 159 až 162 °C.

[a]_D= -84,92° (c = 0,7, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (chloroform/metanol, 9: 1), R_f= 0,23,0,28.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 16,15 min. 16,35 min. UF 254 nm, kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 3u koniec kolóny, lineárny gradient 50 - 90 % vodného metanolu s obsahom 0,2 % kyseliny fosforečnej, 20 min., 1,5 ml/min. (44,9 %, 55,1 % zmesi izomérov).

Analýza pre C₂oH₂₄N₂S0₆.0,1 H₂O vypočítané: 56,89 % C, 5,78 % H, 6,66 % N, 7,59 % S nájdené: 56,98 % C, 5,68 % H, 6,58 % N, 7,15% S.

Príklad 21

Kyselina {4S-[4a(R’),7a,10aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-[ 1,4]oxazino-[3,4-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Metylester 0-(2,2-dimetoxyetyl)-N-{N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-homoseryl} -L-serínu

Roztok 5,56 g (10 mmol) metylesteru N-(O-[(1,1-dimetyletyl)-dimetylsilyl]} -N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-L-homoseryl-O-(2,2-dimetoxyetyl)-L-serínu (príprava pozri príklad 10 h) v 65 ml metanolu sa ochladí na 0 °C v kúpeli z ľadu a soli a po pridaní 386 mg (2,0 mmol) monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej sa reakčná zmes mieša

1,5 hodiny za chladenia na 0 °C. Reakčná zmes sa rozruší pridaním 198 mg hydrogenuhličitanu sodného, rozpusteného v 20 ml vody a po miešaní 5 minút sa oddestiluje metanol. Vodná fáza sa extrahuje dvoma podielmi po 200 ml etylesteru kyseliny octovej, spojený organický extrakt sa premyje použitím 110 ml vody, 80 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 80 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustením filtrátu do sucha získaný podiel suší vo vákuu.

Získaný surový produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu (Merck) s tým, že sa kolóna eluuje sústavami etylesteru kyseliny octovej a hexánu 2:1, ako aj tým istým esterom a metanolom 98 : 2 a získa sa tak 3,975 g zlúčeniny, ako je jej zloženie uvedené v nadpise, vo forme sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 4:1), R_f= 0,17.

b) Metylester O-(2,2-dimetyloxyetyl)-N-[O-(metylsulfonyl)]-N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-L-homoseryl)-L-serínu

Roztok 3,975 g (8,98 mmol) produktu z časti a) v 52 ml suchého metylénchloridu sa ochladí na -15 °C a po pridaní 1,82 ml (13,1 mmol) trietylamínu a 0,82 ml (10,6 mmol) metánsulfonylchloridu sa reakčná zmes mieša 30 minút pri uvedenej teplote -15 °C. Potom sa reakčná zmes rozruší pridaním 19 ml 25 %-ného roztoku chloridu amónneho, teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C, všetko sa zriedi pridaním 750 ml etylesteru kyseliny octovej, organický roztok sa premyje použitím 100 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, 100 ml z 50 % nasýteného roztoku soľanky a 100 ml nasýtenej soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou so zahustením filtrátu do sucha a ďalším sušením vo vákuu získa 4,9 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme voskovitej tuhej látky.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 4 : l),R_f=0,32.

c) Metylester N-[S-acetyl-N-(fenylmetoxy)karbonyl]-L-homocysteinyl=O-(2,2-dimetoxyetyl)-L-serínu

Do roztoku 2,6 ml kyseliny tiooctovej v 40 ml suchého metanolu sa pridá 5,56 g (17,04 mmol) uhličitanu cézneho, reakčná zmes sa mieša 10 minút a zahustí sa do sucha. Zvyšná tuhá látka sa trituruje s acetónom (sedem podielov po 8 ml) a zvyšná takmer biela látka sa suší vo vákuu. Získa sa tým 4,39 g céznej soli kyseliny tioloctovej.

Do suspenzie 2,43 g (1,3 ekv.) céznej soli kyseliny tioloctovej v 8,0 ml suchého dimetylformamidu sa pridá roztok 4,9 g (8,98 mmol) produktu z časti b) v 24 ml suchého dimetylformamidu a všetko sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín, a to pod argónom. Zmes sa potom zriedi pridaním litra etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premýva postupne dvakrát s použitím 150 ml 5 %-ného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát s použitím 150 ml vody a s použitím 150 ml soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí do sucha, zvyšok sa suší vo vákuu. Surový získaný produkt sa chromatografuje na silikagéli (kolóna Merck) za eluovania kolóny sústavami etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1a 2:1a získa sa tak 3,93 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, ako voskovitá tuhá látka.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 4 : 1), R_f= 0,63.

d) Metylester O-(2,2-dimetoxyetyl)-N-{N-[(fenylmetoxy)karbony 1] -L-homocy steiny 1} -L-serínu

Roztok 200 mg (0,49 mmol) produktu z časti c) v 8,0 ml metanolu sa zbaví kyslíka argónom, zavádzaným 30 minút a po ochladení na 0 °C v kúpeli z ľadu a vody sa pridáva 0,11 ml (0,5 mmol) 25 %-ného roztoku nátriummetyloxidu v metanole, pričom sa zavádzaním argónu po celý čas pridávania aj počas vykonávania reakcie. Po 5-tich minútach státia na 0 °C sa reakčná zmes rozruší pridaním 2,3 ml 25 %-ného roztoku chloridu amónneho a roztrepáva sa medzi etylester kyseliny octovej (dvakrát 12 ml a vodu 2,3 ml). Organické extrakty sa spoja, celok sa premyje použitím 4,6 ml 25 %-ného roztoku chloridu amónneho, ďalej 4,6 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahusti do sucha a sušením zvyšku vo vákuu sa získa 183,2 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, a to vo forme bielej tuhej látky. Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 4:1), R_f= 0,62.

e) Kyselina [4S-(4a,7a,10aB]}-oktahydro-5-oxo-4-[(fenylmetoxy)-karbonylamino]-[l ,4]oxazino-[3,4-b][l ,3]-tiazeρίη-7-karboxylová

Do roztoku 50 mg (0,11 mmo) produktu z časti d) v 2,0 ml suchého metylénchloridu sa pridá 13 mg Amberlyte^R 15 (v kyslej forme) a reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 3 dni pod argónom, pridá sa ešte 13 mg Amberlyte^R 15 a v miešaní sa pokračuje 3 dni. Oddekantovaný roztok sa potom chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) za eluovania kolóny zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu najskôr 1:3, potom 1:1a získa sa tak 21,1 mg produktu, ako je uvedené v názve, vo forme sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 4:1), R_f= 0,70.

f) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10afl]}-oktahydro-4-amino-5-oxo[l,4]-oxazino[3,4-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Do roztoku 421 mg (1,01 mmol) produktu z časti e) v 25 ml suchého metylénchloridu sa pridá 0,72 ml (5,06 mmol) trimetylsilyljodidu a reakčná zmes sa mieša pod argónom 1,75 hodín. Sirup, ktorý sa získa po zahustení do sucha, sa roztrepáva medzi 50 ml etyléteru a dvakrát 25 ml 0,2 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, vodný podiel sa upraví na hodnotu pH 10 pridaním 25 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a po pridaní 2,0 g chloridu sodného sa trojnásobnou extrakciou vždy do 75 ml metylénchloridu získa po zahustení 219 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, a to ako sirup. Pri druhom využití vodnej fázy za pridania 2,0 g chloridu sodného a novou extrakciou dvoma podielmi po 100 ml metylénchloridu sa získa ďalších 37 mg tohto produktu.

Chromatografia na tenkej vrstve (metylénchlorid a metanol, 9: l),R_f=0,23.

g) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino-5-oxo[l,4]-oxazino-[3,4-bl[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

V 42 ml etylesteru kyseliny octovej sa suspenduje 516 mg (1,32 mmol, 1,2 ekv.) soli dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej a po premytí s použitím piatich podielov po 6,0 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného a 6,0 ml soľanky sa roztok vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtruje sa a filtrát sa zahustí do sucha.

Zvyšok sa suší vo vákuu, získaná voľná kyselina sa rozpustí v suchom metylénchloride (9,5 ml), roztok sa ochladí v kúpeli z ľadu a soli na 0 °C a pridáva sa postupne

285,5 mg (1,09 mmol) produktu zo stupňa f), rozpusteného v 4,2 ml suchého metylénchloridu, 0,14 ml (1,15 mmol) trietylamínu a 484 mg (1,09 mmol) bcnzotriazol-1-yloxytris-(dimetylamino)-fosfómumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti hodinu, ďalej pri teplote miestnosti ešte 2 hodiny pod argónom, potom sa zbaví rozpúšťadla oddestilovanim. Zvyšný sirup sa rozpustí v 40 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje dvakrát 0,5 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vždy s použitím 6,6 ml, ďalej vodou (taktiež 6,6 ml) a rovnakým objemom soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí vo vákuu do sucha a suší sa potom zvyšok vo vákuu. Surový produkt sa chromatografuje na silikagéli (kolóna Merck) za eluovania zmesou etylesteru kyseliny octovej a hexánu najskôr 1 : 2, potom 1:1a získa sa tak 382,9 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, ako sirup.

Chromatografia na tenkej vrstve (etylester kyseliny octovej a hexán, 1:1), Rf= 0,28.

h) Kyselina (4S-[4a(R*),7a,10aU]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo[l ,4]-oxazino[3,4-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Z roztoku 382,9 mg (0,82 mmol) produktu z časti g) v 9,0 ml metanolu sa vypudzuje vzduch zavádzaním argónu počas 30 minút a po ochladení na 0 °C v kúpeli z ľadu a soli sa pridá 3,32 ml (4,0 ekv.) 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, z ktorého bol vypudzovaný kyslík argónom počas 30-tich minút. Zavádzanie argónu sa potom udržuje po celý čas vykonávania reakcie. Reakčná zmes sa mieša pri 0 °C 5 hodín, ďalej hodinu pri teplote miestnosti, hodnota pH sa upraví na 2,0 pridaním 14,5 ml 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, teplota sa nechá vystúpiť na teplotu miestnosti a zmes sa extrahuje dvakrát do 50 ml etylesteru kyseliny octovej. Spojený organický extrakt sa premyje použitím 10 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha, zvyšok sa suší vo vákuu. Získaný sirup sa potom zahustí ešte dvakrát po pridaní 25 ml hexánu a získaná pevná pena sa chromatografuje na kolóne silikagélu (Merck) s tým, že sa kolóna eluuje s použitím zmesi toluén a kyselina octová 100 : 1, 50 : 1, 20 : 1 a získa sa tak 212 mg zlúčeniny, uvedenej v nadpise, ako tuhá látka, 1.1. 224 až 226 °C.

[a]_D = -50,2° (c = 0,45, metanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (toluén : kyselina octová, 5:1), R_f= 0,28.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 5,37 min. (UF 220 nm) (98,9 %), kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm:

% (90 % vody - 10 % metanolu a 0,2 % kyseliny fosforečnej) % (90 % metanolu - 10 % vody a 0,2 % kyseliny fosforečnej)

Analýza pre C^Hij^OsSj. 0,14 H₂O vypočítané: 52,34 % C, 5,44 % H, 6,78 % N, 15,53 % S nájdené: 52,58 % C, 5,57 % H, 6,44 % N, 15,16% S.

Príklad 22

Kyselina (4S-[4a(R*),7a, 10aB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [ 1,3] -tiazepín-7-karboxylová

Produkt z príkladu 3 a 11 sa dá taktiež pripraviť takto:

a) Soľ kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b][l ,3]-tiazcpín-7-karboxylová

Do roztoku 6,11 g metylesteru kyseliny [4S-(4ct,7a, 10aU)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b][ 1,3]-tiazeρίη-7-karboxylovej v asi 100 ml etylesteru kyseliny octovej sa pridá roztok 4,52 monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej v 3 ml metanolu a 20 ml etylesteru kyseliny octovej. Ihneď sa tvorí zrazenina, zmes sa potom zriedi pridaním ďalšieho podielu etylesteru kyseliny octovej a tuhý podiel sa odfiltruje, premyje sa etyléterom a sušením vo vákuu sa získa 7,908 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise vo forme svetložltej látky s čistotou 98 %; t. t. 179 až 181 °C (za rozkladu).

b) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-1 -oxo-3-fenylpropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

K suspenzii 636 mg (1,48 mmol) produktu z časti a) v 5 ml metylénchloridu a 1 ml dimetylformamidu sa pridá 163 μΐ, teda 150 mg (1,48 mmol) N-metylmorfolínu a potom 208 mg (1,52 mmol) l-hydroxy-7-azabenzotriazolu. K mierne žltému roztoku sa potom pridáva 333 mg (1,48 mmol) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej v roztoku v 5 ml metylénchloridu, reakčná zmes sa vychladí v kúpeli z ľadu a soli, ďalej sa pridá 2,88 mg (1,50 mmol) etyl-3-(dimetylamino)-propylkarbodiimidu a reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C hodinu, ďalej 1,5 hodinu pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa vydestiluje s použitím rotačnej odparky a zvyšok sa roztrepáva medzi etylester kyseliny octovej a 0,5 N roztok kyseliny chlorovodíkovej. Roztok v etylesteri kyseliny chlorovodíkovej sa premýva postupne dvakrát vodou, z 50 % nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou, po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením filtrátu získa 651,2 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme bielej peny.

c) Kyselina (4S-[4a(R*),7a,10aC])-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

K roztoku metylesteru ako produktu z časti b) v metanole, ktorý bol zbavený kyslíka, sa pridá 1 N roztok hydroxidu sodného podľa postupu z príkladu 3 d) a získa sa tým zlúčenina, ako je uvedené v nadpise.

Príklad 23

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][1,3] -tiazep ín-7-karboxylová

Produkt z príkladu 3, 11 a 22 sa dá taktiež pripraviť takto:

a) N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-metotionín

V dvojlitrovej banke, vybavenej mechanickým miešadlom a vnútorným teplomerom, sa rozpustí v 100 ml destilovanej vody 61,65 g (1,545 g (1,541 mol) hydroxidu sodného. Pri teplote miestnosti sa do roztoku pridá 100,0 g (0,670 mol) L-metionínu, roztok sa potom ochladí v ľadovom kúpeli na vnútornú teplotu 3 °C a počas 10 minút sa pridáva 110 ml (0,737 mol) benzylesteru kyseliny chlórmravčej. Po 15-tich minútach indukčnej periódy stúpne počas 30-tich minút vnútorná teplota z 3 °C na 12 °C a potom sa zníži počas 15 minút na 0 °C. Pri tejto teplote sa mieša reakčná zmes 2 hodiny, v priebehu tohto času sa spočiatku zakalená reakčná zmes stane homogénna, kúpeľa z ľadu sa odstráni a reakčná zmes sa nechá vytemperovať počas hodiny na teplotu miestnosti. Potom sa preleje do deličky, kde sa premyje hexánom (dvakrát 300 ml), vodný podiel sa okyslí pridaním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 5 a zriedi sa pridaním 600 ml etylesteru kyseliny octovej. Zmes sa ešte okyslí na pH 2, organická vrstva sa oddelí, vodný podiel sa extrahuje ďalej do troch dávok po 600 ml etylesteru kyseliny octovej. Organické extrakty sa spoja, všetko sa premyje použitím 750 ml soľanky, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu vo vákuu získa jasnožltý olej. Tento surový olejovitý produkt sa rozpusti v 1500 ml toluénu a roztok sa zahustí na polovicu objemu. Pridá sa ďalší podiel 750 ml toluénu a roztok sa zahustí tak, že zostane 630 ml toluénu. Tento roztok sa uchová pri teplote 5 °C počas noci a počas tohto času produkt vykryštalizuje z roztoku. Tuhý podiel sa opäť rozpustí vyhriatím na teplotu miestnosti. Pridá sa 134 ml toluénu a niekoľko kryštálikov a ďalej za mechanického miešania 500 ml heptánu v dávkach po 30 ml v intervaloch 10 minút (čo trvá asi 3 hodiny). V tej chvíli začne produkt kryštalizovať z roztoku, počas 1,5 hodiny sa pridá ďalšia dávka 1020 ml heptánu a vzniknutá suspenzia sa mieša 2 hodiny. Produkt sa odsaje, premyje trikrát s použitím 150 ml zmesi toluénu a heptánu 1 : 2, ďalej s použitím troch dávok po 500 heptánu a sušením na vzduchu sa získa 158,6 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise vo forme bielej tuhej látky, 1.1. 66 °C, [a]_D=-l,5° (c= 1,95, etanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (etanol/voda, 3 : 1), R_f= 0,78.

Analýza pre C_]3H₁₇NO₄S vypočítané: 55,11% C, 6,05% H, 4,94% N nájdené: 54,96% C, 6,20% H, 4,83% N.

b) Metylester N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-metionínu

V trojlitrovej banke, vybavenej mechanickým miešadlom a prívodom argónu sa rozpustí v 2 litroch metanolu 100,0 g (0,353 mol) produktu z časti a) a pridá sa 6,71 g (0,035 mol) monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej. Re akčná zmes sa mieša pod argónom 21 hodín, pridá sa 4,9 ml trietylamínu a reakčná zmes sa mieša ďalších 15 minút. Ďalej sa zahustením reakčnej zmesi vo vákuu získa svetložltý olej, ktorý sa rozpustí v 90 ml etylesteru kyseliny octovej a roztok sa premyje použitím 740 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej ďalej dvakrát s použitím 740 ml hydrogenuhličitanu sodného a 740 ml soľanky. Organická vrstva sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu na ľahko žltý olej. Olej sa odparí s použitím hexánu, dvakrát 100 ml a získa sa tak 98,22 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, ako biela tuhá látka.

c) Metylester sulfoxidu N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-metionínu

V trojlitrovej banke, vybavenej mechanickým miešadlom, sa rozpustí v 1675 ml metanolu 97,95 g (0,329 mol) produktu z časti b) za pridania 215 ml vody. Roztok sa potom ochladí v ľadovom kúpeli, pridá sa 28,5 g (0,339 mol) hydrogenuhličitanu sodného a potom sa pridáva počas 25 minút v malých dávkach 44,0 g (0,329 mol) N-chlórimidu kyseliny jantárovej tak, že vnútorná teplota neprestúpi 7 °C. Zmes sa mieša v ľadovom kúpeli hodinu, potom sa nechá teplota vystúpiť na teplotu miestnosti počas hodiny a reakčná zmes sa zahustí vo vákuu z asi 75 % oddestilovanim metanolu, zriedením s použitím 1000 ml etylesteru kyseliny octovej s tým, že sa roztok premyje použitím 500 ml soľanky. Vrstva soľanky sa znova extrahuje s použitím dvoch dávok po 200 ml etylesteru kyseliny octovej, organické extrakty sa spoja, po vysušení bezvodým síranom horečnatým sa filtrát zahusti vo vákuu na číry, viskózny olej. Ten sa ešte oddestiluje s použitím toluénu (3 dávky po 100 ml) a zvyšné rozpúšťadlá sa vydestilujú za vysokého vákua tak, že zostane produkt, ktorého zloženie je uvedené v nadpise ako číry olej, ktorý stuhne na bielu tuhú látku (131,4 g). Podľa vyhodnotenia NMR obsahuje surový produkt hmotnostné 12 % imidu kyseliny jantárovej a 9 % toluénu. Produkt je zmesou diastereizomérov sulfoxidov.

d) Metylester S-[(acetyloxy)metyl]-N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-homocysteínu

Do litrovej banky, obsahujúcej produkt z časti c) (102,8 g korigovanej hmotnosti, 0,328 mol) sa pridá 480 ml toluénu, 32,3 g (0,394 mol) octanu sodného a 186 ml (1,970 mol) anhydridu kyseliny octovej. Získaná zmes sa zohrieva do varu pod spätným chladičom (118 °C) pod argónom 18 hodín a tmavohnedá reakčná zmes sa nechá vychladnúť na teplotu miestnosti. Po hodine státia pri teplote miestnosti sa reakčná zmes veľmi zhustí tuhými podielmi, ktoré sa rozpustia po pridaní 100 ml etylesteru kyseliny octovej a reakčná zmes sa čiastočne zahustí vo vákuu za vzniku viskózneho hnedého zvyšku. Ten sa ešte destiluje s použitím 240 ml toluénu, aby sa tak odstránil anhydrid kyseliny octovej, zvyšok sa zriedi pridaním 1000 ml etylesteru kyseliny octovej a roztok sa premyje opatrne nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, štyrikrát po 680 ml. Organická vrstva sa potom premyje s použitím soľanky (450 ml), vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu vo vákuu získa zvyšok, z ktorého sa zvyšné rozpúšťadlá vydestilujú za vysokého vákua a vzniku svetlohnedej tuhej látky. Tá sa rozpustí v 450 ml n-butylesteru kyseliny octovej za zohriatia na 35 °C a za miešania. Po ochladení na teplotu miestnosti sa pridáva do roztoku za miešania počas 15 minút pomaly 200 ml hexánu. V tú chvíľu začne z roztoku kryštalizovať produkt. Počas 30 minút sa pridá ďalšia dávka 700 ml hexánu a získaná suspenzia sa mieša 3 hodiny. Produkt sa odfiltruje a premyje s použitím 200 ml zmesi 1 : 2 n-butylesteru kyseliny octovej a hexánu, dvakrát s použitím 240 ml zmesi

I : 4 n-butylesteru kyseliny octovej a hexánu a dvakrát s použitím 250 ml hexánu. Získaný produkt sa suší na vzduchu a ďalším sušením za hlbokého vákua sa získa 87,7 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, a to vo forme svetlohnedej tuhej látky, 1.1. 73 °C.

[a]_D=-l,6° (c = 1,95, etanol). Chromatografia na tenkej vrstve (5 % metanolu v metylénchloride), R_f= 0,80.

Analýza pre Ci₆H₂iNO₆S vypočítané: 54,07% C, 5,95% H, 3,94% N nájdené: 53,48 % C, 5,74% H, 3,82% N.

e) S-acetyl-N-[(fenylmetoxy)-karbonyl]-L-homocysteín

V litrovej banke sa roztok 83,0 g (0,233 mol) produktu z časti d) v 415 ml tetrahydrofuránu zbaví vzduchu zavádzaním argónu počas 30 minút. V inej dvojlitrovej banke, vybavenej mechanickým miešadlom a prívodom argónu, sa zavádza do roztoku 86,8 %-ného (62,7 g, 0,969 mol) hydroxidu draselného v 280 ml vody počas 15 minút argón.

Roztok v tetrahydroíuráne sa pridá k roztoku hydroxidu draselného rýchle za vnútornej teploty 20 °C, to s použitím hadičky a energického miešania pod argónom. Banka, obsahujúca produkt z časti d), sa opláchne použitím 20 ml tetrahydrofúránu (do ktorého bol zavádzaný argón počas 15 minút) a tieto podiely sa pridajú do reakčnej zmesi. Za 30 minút je reakčná zmes číra a dvojfázová, prejaví sa exotermická reakcia až do 28 °C.

Po ďalších dvoch hodinách sa reakčná zmes ochladí na vnútornú teplotu 1 °C a v jednej dávke sa pridá 2,75 g (0,073 mol) hydridu boritosodného: exotermická reakcia až do 6,8 °C. Reakčná zmes sa mieša ďalších 20 minút pri 0 °C a potom sa počas 30 minút nechá vytemperovať na

II °C. Ďalej sa reakčná zmes ochladí na 0 °C a počas 10-tich minút sa pridáva 68,6 ml (0,727 mol) anhydridu kyseliny octovej, prejaví sa to exotermickou reakciou s vzostupom teploty na 10 °C, ale teplota klesne v reakčnej zmesi späť na 4 °C pred skončením pridávania. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša 45 minút pri teplote miestnosti.

Po zahustení asi na polovicu sa zmes okyslí na pH 2 pridaním 175 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej a extrahuje sa potom dvakrát do 1,1 litra etylesteru kyseliny octovej, extrakty sa spoja, celok sa premyje použitím 560 ml soľanky, organická vrstva sa odfarbí aktívnym uhlím, po vysušení bezvodým síranom horečnatým sa filtruje a zahustením filtrátu sa získa žltý olej. K tomu sa pridá 380 ml butylesteru kyseliny octovej, roztok sa zahustí vo vákuu pri teplote 45 °C na polovicu pôvodného objemu, pridá sa druhý podiel 190 ml toho istého esteru a zahustí tak, že v zmesi zostane 190 ml n-butylesteru kyseliny octovej. Pomaly sa potom pridáva 300 ml heptánu do zákalu, pridá sa kryštálik ako očko a počas 15 minút vykryštalizuje biela tuhá látka. Počas 30-tich minút sa pomaly pridáva druhý podiel 570 ml heptánu a vzniknutá suspenzia sa mieša počas noci pri teplote miestnosti. Produkt sa odfiltruje, premyje dvakrát s použitím 275 ml zmesi n-butylesteru kyseliny octovej a heptánu (1 : 3) a dvakrát s použitím 275 ml hexánu, suší sa na vzduchu, potom za vysokého vákua a výsledkom je 50,1 g zlúčeniny uvedenej v nadpise, vo forme bielej tuhej látky, 1.1. 73 až 74 °C.

[a]_D=-1,3° (c =1,95% etanol).

Chromatografia na tenkej vrstve (etanol/voda, 3 : 1), R_f= 0,83.

Analýza pre C14H.7NO5S vypočítané: 54,01% C, 5,50% H, 4,50% N nájdené: 53,88 % C, 5,45 % H, 4,44% N.

Filtrát sa zahustí až zostane 100 ml butylesteru kyseliny octovej, pridá sa 310 ml heptánu, ako to bolo opísané a získa sa tým druhý podiel 8,4 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise, takže celkový výťažok produktu je 58,5 g.

f) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-[4-(acetyltio)-l-oxo-2-(fenylmetoxykarbonylaminobutylamino)]-6,6-dimetoxyhexánovej

V zmesi 600 ml metylénchloridu a 90 ml dimetylformamidu sa rozpustí 0,456 mol) S-acetyl-N-[(fenylmetoxy)]-karbonyl-L-homocysteínu, pridá sa 64,72 g (0,479 mol) hydroxybenzotriazolu vo forme hydrátu, reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a pridá sa do nej roztok 93,7 g (0,456 mol) metylesteru kyseliny (S)-2-amino-6,6-dimetoxyhexánovej (príprava pozri príklad 1 e) v 600 ml metylénchloridu. Ďalej sa pridá ešte 91,83 g (0,479) hydrochloridu etyl-3-(dimetylamino)-propylkarbodimidu, reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C, potom 2 hodiny pri teplote miestnosti, po skončení sa zahusti vo vákuu a zvyšok sa roztrepáva medzi 3 litre etylesteru kyseliny octovej a liter nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organický extrakt sa premyje litrom vody, litrom 5 %-ného roztoku hydrogensíranu draselného, znova tým istým objemom vody a potom soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a zahustením filtrátu vo vákuu sa takto izoluje 238 g surového produktu. Ten sa rozpustí v 300 ml zmesi etylesteru kyseliny octovej a metylénchloridu (1 : 1) a roztok sa pustí cez vrstvu silikagélu Merck 10 na 15 cm. Eluovanítn siedmimi litrami zmesi etylesteru kyseliny octovej a hexánu (8 : 2) a potom s použitím 4 litrov etylesteru kyseliny octovej sa získa 205,28 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

g) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10afl)]-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)karbonylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b][ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Roztok 205,28 g (0,412 mol) produktu z časti f), vysušeného odparovaním s použitím zmesi metylén-chloridu a toluénu, v dvoch litroch metanolu sa ochladí v ľadovom kúpeli na 0 °C a argónom sa 30 minút vypudzuje vzduch. Pridá sa potom 95,1 ml (1,01 ekv.) hmotnostné 25 %-ného roztoku nátriummetoxidu v metanole, a to rýchlo za stáleho zavádzania argónu, reakčná zmes sa mieša ešte 10 minút, rozruší sa pridaním litra nasýteného roztoku chloridu amónneho, zriedi sa pridaním 0,5 litra vody a po pridaní 3 1 etylesteru kyseliny octovej sa zmes rozdelí na 2 časti, z ktorých každá sa oddelene zahustí vo vákuu, aby sa tak odstránili prchavé podiely (etylester kyseliny octovej a metanol). Zahustené zvyšky sa spoja, všetko sa zriedi pridaním litra etylesteru kyseliny octovej, organická vrstva sa oddelí a prepláchne použitím 500 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Spojené vodné podiely sa znova extrahujú do litra etylesteru kyseliny octovej, organické extrakty sa spoja, všetko sa premyje litrom vody a dvoma dávkami po litri soľanky, nasleduje vysušenie bezvodým síranom sodným, filtrácia a zahustenie filtrátu. Zvyšok sa ešte znova odparí s použitím metylénchloridu a sušením vo vákuu sa takto získa 182,65 g voľnej sulfhydrilovej zlúčeniny produktu z časti f).

Z tohto voľného sulfhydrylového medziproduktu sa množstvo 0,400 mol rozpustí v 4 1 metylénchloridu a po pridaní 20,8 ml (0,400 mol) kyseliny trifluóroctovej sa reakčná zmes zohrieva 16 hodín do varu pod spätným chladičom, po ochladení sa zahustí vo vákuu. Získaný zvyšok sa rozpusti v dvoch litroch etylesteru kyseliny octovej, roztok

SK 282529 Β6 sa premyje použitím 400 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, litra vody, litra nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a litra vody a po ďalšom premytí litrom soľanky a vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa filtrát zahustí. Zvyšok sa odparí po pridaní metylénchloridu a sušením vo vákuu sa potom získa 166,24 g zlúčeniny uvedenej v názve.

h) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b][ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Pod argónom sa pridá 76,6 ml (0,538 mol) jódtrimetylsilánu do roztoku 162,43 g (0,414 mol) produktu z časti g) v 1,5 1 metylénchloridu. Reakčná zmes sa mieša

1,5 hodiny, zahustí sa potom vo vákuu a zvyšok sa roztrepáva do litra etylesteru kyseliny octovej a 700 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej (pH 1,2); vyvíja sa oxid uhličitý. Vrstva etylesteru kyseliny octovej sa oddelí a extrahuje do 300 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Spojené kyslé vodné podiely sa premyjú litrom etylesteru kyseliny octovej, ochladia sa na 0 °C a alkalizovaním s použitím asi 275 ml 4 N roztoku hydroxidu sodného na pH 10,0 upravená vodná vrstva sa nasýti vnášaním tuhého chloridu sodného a extrahuje sa potom do piatich podielov po litri metylénchloridu. Organické extrakty sa spoja, celok sa vysuší bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v litri metylénchloridu, ktorý sa prepláchne použitím 0,5 litra soľanky a po vysušení bezvodým síranom sodným a filtráciou sa zahustením filtrátu získa 98,8 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

i) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10afl]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (S)-2-(acetyltio)benzénpropánovej v množstve 173,1 g (0,427 mol) sa roztrepáva medzi liter etylesteru kyseliny octovej a 800 ml 10 %-ného hydrogensíranu draselného, organická vrstva sa oddelí, premyje sa litrom 5 %-ného hydrogensíranu draselného, litrom 50 %-nej soľanky a litrom soľanky, vysuší sa bezvodým síranom sodným a zvyšok sa niekoľkokrát odparuje s metylénchloridom. Ďalším sušením zvyšku cez noc vo vákuu sa získa 97,3 g surovej kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej.

Roztok 0,427 mol tejto látky v 900 ml metylénchloridu sa ochladí v ľadovom kúpeli a pridá sa do nej roztok 100,28 g (0,388 mol) produktu z časti h) v 600 ml metylénchloridu, 154,1 ml (0,388 mol) trietylamínu a potom 188,9 (0,427 mol) benzotriazol-l-yloxytris-(di-metylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu. To v jedinej dávke. Po hodinovom uchovávaní pri 0 °C a dvoch hodinách pri teplote miestnosti sa reakčná zmes zahustí vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dvoch litroch etylesteru kyseliny octovej, organický roztok sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa znova rozpustí v dvoch litroch uvedeného rozpúšťadla, organický roztok sa premyje použitím 0,5 1 soľanky, litra 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, litra vody, dvoch litrov nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, litra vody a litra soľanky. Po vysušení bezvodým síranom sodným a filtrácii sa filtrát zahusti. V tú chvíľu sa vodné výtrepky, obsahujúce produkt (podľa vyhodnotenia chromatografiou na tenkej vrstve), reextrahujú do etylesteru kyseliny octovej, extrakty v tomto rozpúšťadle sa spoja, všetko sa spracuje obvyklým postupom a získa sa tým ako produkt žltý olej. Ten sa nanesie na silikagélovú vrstvu 15 na 15 cm v roztoku 1 : 1 etylesteru kyseliny octovej a hexánu a vrstva sa eluuje sied mimi litrami zmesi 1 : 1 etylesteru kyseliny octovej a hexánu, potom s použitím 4 litrov zmesi 6 : 4 tých istých rozpúšťadiel a potom 2 litrami zmesi 7 : 3 tých istých rozpúšťadiel. Filtrát, obsahujúci požadovaný a očakávaný produkt, sa zahustí a získa sa tak 123,57 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

j) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10afl]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Do dvanásť litrovej trojhrdlej banky, vybavenej prikvapkávacím lievikom a mechanickým miešadlom, sa vnesie roztok 96,0 g (0,207 mol) produktu z časti i) v 1,1 litri metanolu. Do roztoku sa zavádza 30 minút argón, potom sa roztok ochladí v ľadovom kúpeli na vnútornú teplotu +7 °C a počas hodiny sa pridáva celkom 1,45 1 1 N roztoku hydroxidu sodného, do ktorého bol 30 minút predtým zavádzaný argón. Do zmesi sa zavádza stále argón počas pridávania.

Reakčná teplota vystúpi na +12 °C a tak sa udržuje počas pridávania naďalej, reakčná zmes sa mieša ďalších 30 minút, vytemperuje sa v kúpeli s vodou na teplotu miestnosti a mieša sa za zavádzania argónu 2,5 hodiny. Počas 15 až 20 minút sa prikvapkáva asi 250 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej až do dosiahnutia hodnoty pH 2. Počas okysľovania sa vylúči gumovitá zrazenina, ale počas miešania ďalšie dve hodiny sa zrazenina zmení do formy bielej tuhej látky a tá sa odsaje na lieviku zo spekaného skla 600 ml. Následným premytím tuhej látky litrom vody a potom dvoma litrami bezvodého éteru a sušením vo vákuu sa takto získa 70,4 g produktu, uvedeného v nadpise, a to vo forme jemnej bielej látky, 1.1. 218 až 220 °C (za rozkladu).

Chromatografia na tenkej vrstve (kyselina octová a etylester tejto kyseliny, 1 : 99), Rf= 0,48.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia (retenčný čas, kolóna YMC S-3 ODS 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min. izokraticky 60 % B

Pufer A = metanoľvoda/kyselina fosforečná (10 :90 : 0,2) a pufer B = metanol/voda/kyselina fosforečná (90 : 10 : 0,2) = 9,33 min. 99,3 % piku z celkovej plochy pri 220 nm. Analýza pre C19H24N2O4S2 vypočítané: 55,86 % C, 5,92 % H, 6,86 % N, 15,70 % S nájdené: 55,83 % C, 5,83 % H, 6,96% N, 15,70% S.

Príklad 24

Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10afi]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-1 -oxo-3-fenylpropyl-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [ l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Kondenzačné reakcie, opísané v príkladoch 3 (c), 11 (o), 22 (b) a 23 (i) sa dajú vykonávať taktiež takto:

Roztok 1,83 g (8,14 mmol) kyseliny (S)-2-(acetyltio)-benzénpropánovej a 2,11 g (8,17 mmol) metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 10al3)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej sa v 20 ml suchého metylénchloridu podchladí na 0 °C a naraz sa pridá 1,77 g (9,32 mmol) hydrochloridu etyl-3-(dimetyl-amino)-propylkarbodiimidu, potom sa reakčná zmes mieša pri teplote 0 °C počas 6 hodín a zahustí sa až do vzniku olejovitej peny. Tento zvyšok sa roztrepáva medzi 100 ml etylesteru kyseliny octovej a 50 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, organická fáza sa premyje s použitím 50 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, dvakrát s použitím 50 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a použitím 50 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustením vo vákuu získa 3,43 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme bielej peny.

Príklad 25

Soľ 1,1-dimetylamínu a kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aBJ}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Trojhrdlá banka objemu 15 ml, vybavená spätným chladičom, sa trikrát evakuuje a naplní potom argónom. Potom sa náplni vnesením 0,20 g kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aB])-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej a 1,0 ml zmesi 1 : 1 absolútneho alkoholu a acetonitrilu, zbavenej vzduchu; ako sa heterogénna zmes mieša, prikvapkáva sa 53,0 pl (1,03 ekv.) terc.-butylamínu, počas 3 minút je reakčná zmes homogénna po pridaní všetkého amínu. Roztok (vnútorná teplota 20 °C) sa pomaly zriedi na konečný objem 10 ml prikvapkávaním acetonitrilu. Po ďalšom miešaní počas 2 hodín sa tuhé podiely odfiltrujú a po jednom premytí 100 %-ným acetonitrilom (5 ml) sa tieto podiely sušia na vzduchu, potom za vysokého vákua 2 hodiny, aby sa odstránili zvyšné rozpúšťadlá a získa sa tak 0,2 g zlúčeniny uvedenej v nadpise ako biela kryštalická tuhá látka.

Uvedený materiál sa spojí s podielmi z ďalších uskutočnení reakcie a všetko sa prekryštalizuje takto:

Trojhrdlá banka objemu 25 ml, vybavená spätným chladičom, magnetickým miešadlom a prikvapkávacim lievikom, sa trikrát evakuuje a naplní argónom. Po vnesení 0,37 g 1,1-dimetylamínovej soli ako produktu a 2,28 ml zmesi 50 % acetonitrilu v etanole sa banka s obsahom vyhreje na 29 až 32 °C, čím sa tuhé podiely rozpustia, roztok sa zriedi 27 ml acetonitrilu, zahrievací kúpeľ sa odstráni, banka sa ochladí na teplotu miestnosti a po hodine ďalšieho miešania sa zmes filtruje a odfiltrované tuhé podiely sa premyjú použitím 10 ml acetonitrilu. Po ďalšom sušení na vzduchu a za vysokého vákua, aby sa tak odstránili zvyšky rozpúšťadiel, sa získa takto zlúčenina, ako je jej zloženie uvedené v nadpise, vo výťažku 0,29 g ako biela kryštalická tuhá látka, 1.1, zmrštenie pri 160 °C s pomalým topením a rozkladom, ako sa teplota zvyšuje na 190 až 191 °C; zvyšný sklovitý materiál sa roztopí rýchlo.

Príklad 26

Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Tento medziprodukt z príkladu 3 (c) a 11 (h) aj 23 (h) sa môže pripravovať tiež takto:

a) Dietylester kyseliny 2-(acetylamino)-2-[4-(acetyloxy)-buty 1] -propándiovej

Miešaná suspenzia 60,8 g (2,532 mol) 95 %-ného hydridu sodíka v 500 ml bezvodého dimetylformamidu sa pod argónom ochladí v ľadovom kúpeli na 0 °C. Potom sa v priebehu 45 minút prikvapkáva roztok 500 g (2,302 mol) dietylesteru kyseliny acetamidomalónovej v 1,2 1 dimetylformamidu za udržovania teploty pod 18 °C. Po skončení reakcie sa nechá teplota zakaleného roztoku postupne vystúpiť na teplotu miestnosti a po miešaní hodinu pri teplote miestnosti sa pridá 471 g (2,417 mol) 4-brómbutylesteru kyseliny octovej. Reakčná zmes sa mieša 18 hodín pri teplote 59 až 60 °C, vzniknutá suspenzia sa ochladí na teplotu miestnosti, rozruší sa pridaním 40 ml absolútneho etanolu a 4 ml ľadovej kyseliny octovej, mieša sa ďalej asi 15 minút, vleje sa 10 %-ného roztoku chloridu lítneho a všetko sa extrahuje dvakrát do 3 1 etylesteru kyseliny octovej. Spojený extrakt v tomto rozpúšťadle sa premyje trikrát použitím troch litrov 10 %-ného roztoku chloridu lítneho, vysuší sa bezvodým síranom sodným a zahustením filtrátu vo vákuu sa získa 750 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, ako olej.

b) Kyselina 2-(acetylamino)-6-hydroxyhexánová

Do päťlitrovej trojhrdlej banky, vybavenej teplomerom, magnetickou miešačkou a vzduchom chladeným spätným chladičom sa vnesie 730 g (2,2 mol) produktu z časti a), po pridaní 300 ml absolútneho etanolu sa ďalej pridá 1,6 1 (9,6 mol) 6 N roztoku hydroxidu sodného. Reakčná zmes sa zohrieva 5 hodín na 68 °C až 70 °C za vzniku homogénneho roztoku, potom sa reakčná zmes ochladí na teplotu miestnosti a pomaly sa pridáva 1,32 I 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej až na hodnotu pH 1,3. Na banku sa potom nasadí krátky nadstavec na oddestilovanie etanolu, teplota sa pomaly zvyšuje na 87 až 90 °C a na tejto teplote sa reakčná zmes udržuje 8,5 hodiny. Je možné pozorovať malý vývoj oxidu uhličitého. Celkový objem destilátu: 600 ml, pH konečného roztoku 3,0. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu až do odparenia všetkého podielu vody, potom sa zahustí s použitím toluénu, dva podiely po 500 ml. Polotuhá hmota sa trituruje s absolútnym etanolom (1 : 1), filtruje sa a tuhý podiel sa prepláchne ďalším množstvom 500 ml absolútneho etanolu. Zahustením filtrátu vo vákuu sa získa 509 g surového oleja (čistota 82 %), ale obsahujúceho etanol a toluén.

c) Kyselina (S)-2-amino-6-hydroxyhexánová

V 3,3 1 vody sa rozpustí 443 g surového produktu z časti b), obsahujúceho určitý podiel toluénu a etanolu (vlastná hmotnosť = 394 g) a pridáva sa 1 N roztok hydroxidu lítneho až do dosiahnutia hodnoty pH 7,5; je potrebné asi 1,53 1. Zmes sa vyhreje na 35 °C, pridá sa acyláza (0,4 g, z prasačej obličky, stupeň 1) a reakčná zmes sa mieša 24 hodín. K skončeniu tohto času bola hodnota pH 7,33, bola upravená znova na hodnotu pH 7,5, pridaním 1 N roztoku hydroxidu lítneho (asi 2 ml), bola pridaná ďalšia acyláza (0,4 g) a reakčná zmes bola miešaná počas ďalších 17 hodín (pH 7,3). Potom bola hodnota pH upravená na 5,9 kyselinou octovou, bolo pridaných 20 g Celitu^R a aktívneho uhlia (taktiež 20 g), reakčná zmes bola vyhriata na 92 °C, udržovaná takto 5 minút, filtrovaná potom vrstvou Celitu^R a filtrát bol zahustený vo vákuu na polotuhú pastu s hmotnosťou 441 g. Tá bola triturovaná s 900 ml zmesi vody, etanolu a dimetylformamidu (1 : 5 : 10), pričom určité prihriatie bolo nutné na rozrušenie pôvodného tvaru polotuhej hmoty. Reakčná zmes bola uchovaná v chladničke cez noc, filtrovaná a podiel na filtri bol premytý s použitím 200 ml uvedenej zmesi rozpúšťadiel, takže sa získa 214 g surového materiálu (asi 40 % N-acetylovaného). Ten sa suspenduje v 500 ml metanolu, po zohriatí na parnom kúpeli sa reakčná zmes odstaví na 2 hodiny a filtruje sa. Tento postup sa opakuje ešte raz a získa sa tak 108 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

[a]_D= +22° (c = 1,44, 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej).

Inak sa stupne b) a c) môžu vykonať aj takto:

b) Kyselina 2-(acetylamino)-6-hydroxyhexánová

Do päťlitrovej, trojhrdlej banky s mechanickým miešadlom a teplomerom, spojeným s termočlánkom, sa vnesie 631 g (1,933 mol) produktu zo stupňa a) a 259 tetrahydrofuránu a do miešaného roztoku sa pridáva počas 40 minút 1385 ml (8,31 mol) 6 N roztoku hydroxidu sodného. Prebehne silná exotermická reakcia a je potrebné chladiť reakčnú zmes v ľadovom kúpeli, aby sa teplota zachovala pod 60 °C. Reakčná zmes sa potom vyhreje do mierneho varu pod spätným chladičom (teplota kúpeľa 67 až 68 °C) a udržuje sa takto 5,5 hodiny.

Ďalej sa reakčná zmes mieša cez noc (16,5 hodiny) pri teplote miestnosti, hodnota pH sa zníži z 12,75 na 1,30 postupným pridávaním 1150 ml (6,9 mol) 6 N roztoku ky seliny chlorovodíkovej za udržovania teploty asi na 25 °C. Destilačná zmes sa potom vyhreje pod krátkym nadstavcom, až sa prejaví destilácia a únik plynu (oxidu uhličitého), čo nastane pri teplote 72,3 °C v kúpeli, 70 °C v destilačnom nadstavci a pokračuje sa až do chvíle, keď priebeh destilácie ustane a vývoj plynu je potom slabý (teplota kúpeľa 94,1 °C, v nadstavci 50 °C). Vydestiluje sa 410 ml, zvyšok v banke má pH 3,9. V zahrievaní sa pokračuje ešte 10 minút, a to sa už vôbec nevyvíja plyn. Celkový čas destilácie od jej začiatku: 7,5 hodín.

Reakčná zmes sa ďalej mieša počas noci pri teplote miestnosti, potom sa číra reakčná zmes (pH 3,50 ) zahustí vo vákuu na rotačnej odparke (kúpeľ 60 °C) a pastovitý zvyšok sa rozmieša do 750 ml absolútneho etanolu. Vzniknutá kryštalická suspenzia sa zbavi rozpúšťadla na rotačnej odparke vo vákuu olejovej vývevy, teplota kúpeľa 60 °C a pastovitý zvyšok sa rozotrie dvakrát so 750 ml absolútneho etanolu. Ku konečnému zvyšku sa pridá 1500 ml absolútneho etanolu a zmes sa mieša v kúpeli s teplotou 60 °C až do vzniku jemnej kryštalickej suspenzie, teda asi 20 minút, potom sa mieša ešte 20 minút pri teplote miestnosti. Suspenzia sa odsaje, podiel na filtri sa premyje dvakrát použitím vždy 300 ml absolútneho etanolu. Filtráty' sú mierne zakalené a číria sa ďalej filtráciou vrstvou Celitu. Takto pripravený číry filtrát sa zahustí na rotačnej odparke a získa sa tak 434,6 g produktu, ako je uvedené v nadpise, vo forme ambrovo sfarbeného hustého sirupu.

Chromatografia na tenkej vrstve (metanol, kyselina octová a voda (10: 1 : 1), R_f= 0,59.

c) Kyselina (S)-2-amino-6-hydroxyhexánová

Do päťlitrovej, trojhrdlej banky, vybavenej miešadlom a teplomerom, sa vnesie 434 g (1,93 mol) produktu z časti b) a 3 litre vody, pH zakaleného roztoku sa upraví zo 4,05 na 7,50 pridaním 705 ml 1 N roztoku hydroxidu lítneho, roztok sa vyhreje na 36 °C a pridá sa 0,710 g acylázy z prasačej obličky, zmes sa ďalej mieša 23,5 hodín pri teplote 35 až 36 °C, ďalej sa ochladí na teplotu miestnosti a hodnota pH sa upraví zo 7,0 na 5,9 pridaním 4,3 ml ľadovej kyseliny octovej. Po pridaní 29 g Celitu a 29 g aktívneho uhlia sa teplota reakčnej zmesi zvýši za miešania na 91 °C, zohrievanie sa preruší a zmes sa nechá chladnúť na teplotu miestnosti. Suspenzia sa potom filtruje filtračným papierom

18,5 cm a podiel na filtri sa dokonale premyje vodou. Bezfarebné filtráty (asi 3,9 1) sa zahustia na rotačnej odparke pri 60 °C a získa sa tak 476 g číreho oleja. Po pridaní 720 ml absolútneho etanolu sa reakčná zmes mieša až vznikne homogénna kryštalická suspenzia, rozpúšťadlo sa oddestiluje a k tuhému bielemu zvyšku sa pridá 1584 ml absolútneho etanolu. Suspenzia sa potom pretáča 15 hodín (cez noc) v rotačnej odparke a filtruje sa cez kruh 18,5 cm. Podiel na filtri sa premyje absolútnym etanolom, totiž siedmimi podielmi po 100 ml a sušením vo vákuu do konštantnej váhy sa získa 85,8 g bieleho, kryštalického produktu, ako je jeho zloženie uvedené v nadpise.

Chromatografia na tenkej vrstve s použitím sústavy metanol, voda a kyselina octová (10 : 1 : 1), R_f= 0,62.

Analýza pre C₆H₁₃NO₃vypočítané: 48,25 % C, 8,94% H, 9,38% N nájdené: 48,66% C, 8,77% H, 9,43% N

d) Metylester kyseliny S-(R*,R*)-2-[4-(acetyltio)-1-oxo-2-(fenylmetoxy)-karbonylamino-butylamino]-6-hydroxyhexánovej

Suspenzia 1,0 g (6,8 mmol) kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexánovej v 20 ml metanolu sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti a pridáva sa 1,9 ml (15 mmol) trimetylsilylchloridu. Takto pripravená reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 18 hodín a podiel objemu rozpúšťadla sa zníži asi na 3,5 ml oddestilovaním za zníženého tlaku. Pridá sa 5 ml acetonitrilu, roztok sa ochladí na -10 °C, pridá sa ďalej 4,15 ml (23,8 mmol) N,B-diizopropyletvlamínu a roztok sa ochladí na -40 °C, obsahuje metylester kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexánovej.

V oddelenej nádobe sa roztok 2,117 g (6,8 mmol) S-acetyl-N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-homocysteínu (príprava pozri príklad 23 e) v 5 ml acetomitrilu ochladí na 0 °C a pridá sa k nemu 1,20 ml (6,8 mmol) N,N-diizopropyletylamínu. V ešte ďalšej nádobe sa rozpustí 0,14 g (0,68 mmol) hydrátu hydroxybenzotriazolu a 1,450 g (6,8 mmol) metánsulfonyloxybenzotriazolu v acetonitrile a roztok sa ochladí na -18 °C. Skôr pripravený S-acetyl-N-[(fenylmetoxy)karbonyl]-homocysteín sa prikvapká do tohto roztoku za udržovania vnútornej teploty pod -10 °C. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri teplote v rozmedzí -18 °C až -12 °C a vzniknutý roztok sa potom prikvapká do výšky uvedeného roztoku, obsahujúceho metylester kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexánovej, a to za chladenia na -40 °C. Počas 18-tich hodín sa nechá teplota reakčnej zmesi vystúpiť na 16 °C, reakčná zmes sa vleje do 50 ml etylesteru kyseliny octovej a 50 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Všetko sa prepraví do deličky, vrstvy sa oddelia, vodný podiel sa extrahuje dvakrát do 50 ml etylesteru kyseliny octovej, organické podiely sa spoja a všetko sa premyje použitím 100 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 100 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po vy sušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu získa biela tuhá látka, k tej sa pridá 20 ml terc.butylmetyléteru a vzniknutá zmes sa mieša pri teplote miestnosti 4 hodiny. Po filtrácii sa podiel na filtri premyje terc.-butylmetyléterom a sušením sa získa 2,087 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, 1.1. 89 až 90 °C.

e) Metylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[4-(acetyltio)-l-oxo-2-(fenylmetoxy)-karbonylamino-butylamino]-6-oxo-hexánovej

Do roztoku 546 μΐ (6,27 mmol) oxalylchloridu v 16 ml suchého metylénchloridu sa pri teplote -65 °C (v reakčnej zmesi) prikvapkáva roztok 905 μΐ (12,54 mmol) dimetylsulfoxidu v 13 ml metylénchloridu a to počas 12 minút za udržovania vnútornej teploty v rozmedzí -65 až -60 °C. Ďalším pridaním 1,90 g (4,18 mmol) produktu z časti d) v 7 ml metylénchloridu počas 20 minút vznikne zakalená reakčná zmes, použitím ďalšieho podielu 1 ml metylénchloridu sa dokončí preliatie zmieneného alkoholu do reakčnej nádoby a reakčná zmes sa potom mieša 40 minút za chladenia na -65 °C. Ďalej sa pridá Ν,Ν-diizopropyletylamínu v množstve 3,7 ml (20,90 mmol), čím vznikne číry roztok, reakčná zmes sa ďalej mieša 30 minút pri -65 °C, teplota sa nechá vystúpiť za 2 hodiny na -18 °Č a reakčná zmes sa rozruší pridaním 30 ml 10 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného, ďalej potom sa nechá teplota vystúpiť na 20 °C. Po zriedení pridaním 25 ml vody sa obe fázy oddelia, vodný podiel sa ešte extrahuje dvakrát použitím vždy 25 ml metylénchloridu, organické extrakty sa spoja, celok sa premyje 25 ml 10 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného, ďalej dvoma dávkami po 25 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml soľanky a po vysušení bezvodým síranom horečna

SK 282529 Β6 tým a filtráciou sa zahustením filtrátu vo vákuu získa 1,84 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, ako biela tuhá látka.

f) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-[(fenylmetoxy)-karbonyl-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Suchá banka sa pod argónom naplní 1,76 g (3,89 mmol) produktu z časti c), pridá sa 17 ml metanolu, roztok sa ochladí na 0 °C a argón sa zavádza ďalších 25 minút. Počas asi 15 sekúnd sa pridá 983 μΐ (4,28 mmol) roztoku nátriummetoxidu v metanole (25 %, hmotnostné), po hodine sa reakčná zmes rozruší pridaním 20 ml 1 N kyseliny chlorovodíkovej, teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C, pridá sa 35 ml etylesteru kyseliny octovej a po premiešaní sa vrstvy oddelia. Vodný podiel sa extrahuje dvakrát do 15 ml etylesteru kyseliny octovej, spojené organické frakcie sa premyjú použitím 15 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej, soľankou a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu vo vákuu získa 1,69 g metylesteru kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(4-merkapto-1 -oxo-2- {[(fenylmetoxy)karbonylamino]-butylamino}-6-oxohexánovej vo forme bielej peny.

Roztok tejto bielej peny a 305 μΐ (3,95 mmol) kyseliny trifluóroctovej v 17 ml metylénchloridu sa zohrieva 2,25 hodín do varu pod spätným chladičom, potom sa po ochladení na teplotu miestnosti reakčná zmes zahustí a zvyšok sa rozpustí v 25 ml etylesteru kyseliny octovej. Tento roztok sa premyje dvoma dávkami po 20 ml hydrogenuhličitanu sodného, ďalej soľankou a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu vo vákuu získa 1,50 g zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, ako biela pena.

g) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Pôsobením jódtrimetylsilánu na produkt z časti f) s použitím postupu z príkladu 23 h) alebo 11 h) sa odstráni krycia skupina na dusíku a vznikne tak očakávaný 4-aminoderivát.

Príklad 27

Kyselina (S)-2-ftalimido-6-hydroxyhexánová

Tento medziprodukt z príkladu 1 c) sa dá pripraviť aj týmto spôsobom:

K roztoku 730 g (2,2 mol) dietylesteru kyseliny 2-(acetylamino-2-[4-(acetoxy)-butyl]propándiovej (príprava pozri, príklad 24 a) v 300 ml absolútneho etanolu sa pridá 1,6 1 6 N vodného roztoku hydroxidu sodného, reakčná zmes sa zohrieva 5 hodín na 70 až 76 °C, potom sa pri teplote 90 až 95 °C oddestiluje väčšina etanolu, reakčná zmes sa ochladí a okyslí na pH 1,3 s použitím 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej (potreba asi 1,3 1) a zohrievaním na 90 až 100 °C začne prebiehať dekarboxylácia. Po jej skončení sa ochladí surová reakčná zmes na teplotu miestnosti.

Potom sa reakčná zmes vyhreje na 35 °C, pridá sa asi 600 ml 6 N roztoku hydroxidu sodného a ďalej roztok 1 N hydroxidu sodného na úpravu pH na hodnotu 7,5. Konečný objem zmesi: asi 5,3 1. Do tejto zmesi sa pridá 0,6 g acylázy I z prasačej obličky, reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote 35 °C za hodnoty pH 7,25. Táto hodnota sa upraví na 7,5, pridá sa ďalší podiel 300 mg acylázy a po miešaní počas noci sa javí byť reakcia asi z 90 % skončená. Pridá sa do nej 20 g aktívneho uhlia a 20 g Celitu^R, zmes sa vyhreje na 85 °C a udržuje na tejto teplote 10 minút, ochladí sa na 50 °C a filtruje sa. V tú chvíľu je celkový objem filtrátu asi 4,9 1. Filtrát sa ochladí na 5 °C a pridaním tuhého uhličita nu sodného sa upraví hodnota pH na 9,3, pridá sa 263,04 g (1,2 mol) N-karbetoxyftalimidu v jednej dávke a naraz a ďalej sa pridáva uhličitan sodný tak, ako je to potrebné na udržanie hodnoty pH na 9,3. Po dvoch hodinách pri 5 °C nasledujú tri hodiny pri teplote miestnosti, hodnota pH klesne na 8,5 a väčšina reagujúcich zložiek sa rozpustí. Reakčná zmes sa filtruje, ochladí sa na 5 °C a okyslí sa pridaním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 2,3. Vyzrážaný tuhý podiel sa odfiltruje, premyje sa použitím 200 ml studenej vody a sušením vo vákuu sa takto pripraví 220 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

Príklad 28

Kyselina [4S-(4a,7a, 10aB)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-3-(1 -naftalenyl)-1 -oxopropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3] -tiazepín-7-karboxylová

a) Dietylester kyseliny (acetylamino)-l-(naftalenylmetyl)-propándiovej

Do roztoku 5,613 g (67,8 mmol) nátriummetoxidu v 100 ml etanolu (21 % roztok NaOC₂H₅ v EtOH) sa pridá 14,74 g (67,8 mmol) dietylesteru kyseliny acetamidomalónovej, ďalej 10,0 g (45,2 mmol) 1 -brómmetylnaftalénu a takto pripravený roztok sa mieša hodinu pri teplote miestnosti. Zahustením reakčnej zmesi vznikne oranžový olej, ktorý sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej a roztok sa premyje z 50 % nasýteným roztokom chloridu amónneho a potom soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí za vzniku oranžovej tuhej látky. Tuhý podiel sa prekryštalizuje z etylesteru kyseliny octovej a hexánu za vzniku béžovo sfarbených kryštálikov, znečistených východiskovým derivátom malónovej kyseliny. Tuhý podiel sa rozpustí v zmesi etylacetátu a hexánu (1 : 1) a roztok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) s použitím rovnakej sústavy. Frakcie, obsahujúce čistý produkt, sa spoja a zahustením sa takto pripraví 10,225 g produktu vo forme bielej tuhej látky, t. t. 105 až 108 °C, Rf= 0,57 (50% etylesteru kyseliny octovej v hexáne).

b) Kyselina a-amino-l-naftalénpropánová

Roztok 16,182 g (47,5 mmol) produktu z časti a) sa suspenduje do 100 ml 48 %-nej kyseliny bromovodíkovej a pod argónom sa reakčná zmes zohrieva do varu pod spätným chladičom 14 hodín. Soľ produktu s bromovodíkom sa odfiltruje z roztoku vo forme bielej tuhej látky, tá sa rozpustí v 500 ml teplej vody (50 °C) a roztok sa neutralizuje pridávaním koncentrovaného vodného roztoku amoniaku. Produkt sa z roztoku vyzráža ako jemná biela látka, odfiltruje sa a sušením za vysokého vákua cez noc (asi 18 hodín) sa takto získa 8,335 g látky, jemná vírivá tuhá látka, 1.1. 264 °C.

c) Kyselina a-bróm-l-naftalénpropánová

Do roztoku 4,000 g (18,6 mmol) produktu z časti b) a 7,63 g (63,2 mmol) bromidu draselného v 35 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírovej sa pri teplote 0 °C pridáva počas hodiny roztok 1,92 g (27,8 mmol) dusitanu sodného, reakčná zmes sa mieša ďalšiu hodinu pri 0 °C, potom sa teplota nechá vystúpiť na 20 °C a v miešaní sa pokračuje 2,5 hodiny. Ďalej sa reakčná zmes extrahuje trikrát do éteru, výtrepky v éteri sa spoja a organický roztok sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok tvorí oranžový olej, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) s použitím 70 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne s obsahom 10 kyseliny octovej, aby sa znížila tvorba chvostov. Frakcie, obsahujúce bromovaný produkt, sa spoja a zahustením sa pripraví mierne znečistený produkt vo forme oranžového oleja, ktorý tuhne cez noc.

R_f= 0,40 (40 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne + 1 % kyseliny octovej).

d) Kyselina a-(acetyltio)-l-nafialénpropánová

Do suspenzie 0,912 g (8,00 mmol) draselnej soli kyseliny tiooctovej v 300 ml acetonitrilu sa pridá pri teplote 0 °C 2,030 g (7,27 mmol) produktu z časti d) vo forme roztoku v 3 ml acetonitrilu. Roztok sa mieša hodinu pri 0 °C, teplota sa potom nechá vystúpiť na 20 °C a v miešaní sa pokračuje 15 hodín. Z reakčnej zmesi sa odfiltruje bromid draselný a zahustením reakčnej zmesi aj filtrátu sa izoluje oranžový olej, ktorý sa rozpusti v etylesteri kyseliny octovej, získaný roztok sa premyje 10 %-ným roztokom hydrogensiranu draselného a soľankou a ďalej sa vysuší bezvodým síranom sodným. Po filtrácii sa zahustením filtrátu pripraví oranžový olej, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) s použitím sústavy 50 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne + 1 % kyseliny octovej, aby sa znížila tvorba chvostov. Frakcie, obsahujúce žiadaný produkt, sú znečistené látkou s R_f = 0,43. Tieto frakcie sa spoja a zahustením sa získa oranžový olej. Surový produkt sa čistí cez soľ dicyklohexylamínu tak, že sa oranžový olej rozpustí v éteri a pridá sa ekvivalent dicyklohexylamínu (1,32 g, 7,27 mmol) do roztoku. Zodpovedajúca soľ dicyklohexylamínu sa získa v dvoch dávkach hnedých kryštálov (1,45 g), stále ešte mierne znečistených prímesami. Kryštály sa suspendujú v etylesteri kyseliny octovej, roztok sa pretrepáva trikrát s 10 %-ným roztokom hydrogensiranu draselného. Organická vrstva sa potom premyje vodu a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným, filtruje sa a zahustením filtrátu sa pripraví 875 mg produktu vo forme žltého oleja, Rf= 0,40 (40 % etylesteru kyseliny octovej v hexáne + 1 % kyseliny octovej.

e) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-3-(l-naftalenyl)-l-oxopropyl]amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Roztok racemickej kyseliny ako produktu z príkladu 28, časť d) v metylénchloride a roztok metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]tiazepm-7-karboxylovej v metylénchloride sa nechajú reagovať za prítomnosti trietylamínu a benzotria-zoll-yloxytris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu podľa postupu z príkladu 23 i) za vzniku produktu, ako je jeho zloženie uvedené v nadpise.

f) Kyselina [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-3-(l-naftalenyl)-l-oxopropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok produktu z časti e) v metanole sa spracuje s použitím 1 N roztoku hydroxidu sodného podľa postupu z príkladu 23 j) za vzniku produktu, ako je uvedený v nadpise.

Príklad 29

Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-(2-tienyl)-propylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-a-(acetyltio)-2-tiofénpropánová

Do roztoku 1,37 g, 8,03 mmol) B-(2-tienyl)-D-alanínu v 25 ml 2,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej sa pridá bromid draselný v množstve 3,0 g (40,1 mmol) a to pod argónom pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa mieša 10 minút, ochladí sa na 0 °C a vnáša sa do nej 720 mg (10,44 mmol) dusitanu sodného. Za 2,5 hodiny sa nechá teplota reakčnej zmesi vystúpiť na 20 °C, zmes sa ďalej mieša hodinu, potom sa roztrepáva medzi vodu a etylester kyseliny octovej, organická vrstva sa po oddelení vysuší bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) za eluovania 1 % kyseliny octovej v zmesi 3 : 1 hexánu a etylesteru kyseliny octovej.

Vo výťažku 760 mg sa vo forme žltého oleja pripraví takto kyselina (R)-a-chlór-2-tiofénkarboxylová.

Do roztoku 750 mg (4,73 mmol) uvedeného chloridu v 15 ml dimetylformamidu sa pri teplote miestnosti a pod argónom pridá 2,95 g (14,19 mmol) céznej soli kyseliny tiooctovej. Po dvojhodinovom miešaní sa reakčná zmes roztrepáva medzi 10 %-ný roztok hydrogensiranu draselného a etylester kyseliny octovej, organická oddelená vrstva sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí, zvyšok sa potom čisti rýchlou chromatografiou na silikagéli (Merck) za eluovania 1 % kyseliny octovej v zmesi 4 : 1 hexánu a etylesteru kyseliny octovej, takže sa získa 500 mg zlúčeniny, ako je jej zloženie uvedené v nadpise, vo forme oleja.

Chromatografia na tenkej vrstve (2 % kyseliny octovej v zmesi 3 ; 1 etylesteru kyseliny octovej a hexánu), R_f= 0,73.

b) Metylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-(2-tienyl)-propylamino]-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylo vej

Uskutoční sa reakcia roztoku kyseliny ako produktu z časti a) v metylénchloride a roztoku metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovej taktiež v metylénchloride za prítomnosti trietylamínu a benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu podľa postupu z príkladu 23 i) za vzniku zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise.

c) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-(2-tienyl)-propylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Na roztok produktu z časti b) v metanole sa pôsobí 1 N roztokom hydroxidu sodného s použitím postupu z príkladu 23 j) a vzniku zlúčeniny, ako je jej zloženie uvedené v nadpise.

Príklad 30

Kyselina (4S-[4a(S*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (R)-2-(acetyltio)benzénpropánovej

Podľa postupu z príkladu 1 h), ale s použitím L-fenylalanínu namiesto D-fenylalanínu sa získa soľ dicyklohexylamínu a kyseliny (R)-2-(acetyltio)benzénpropánovej.

b) Metylester kyseliny {4S-[4a(S*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] - [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylovej

Miešaná suspenzia 353,5 mg (0,872 mmol) soli dicyklohexylamínu a kyseliny (R)-2-(acetyltio)benzénpropánovej v 5 ml etylesteru kyseliny octovej sa premýva trikrát vždy použitím 5 ml 5 %-ného roztoku hydrogensiranu draselného. Organické extrakty sa spoja, premyjú soľankou a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtráciou sa zahustením filtrátu do sucha, sušením vo vákuu a dvojitou destiláciou s hexánom získa olejovitá kyselina (R)-2-(acetyltio)benzénpropánová.

Zo získanej voľnej kyseliny sa 181,4 mg (0,809 mmol) rozpustí v 2 ml metylénchloridu a roztok sa mieša pod dusíkom pri 0 °C. K roztoku sa pridá roztok 200 mg (0,774 mmol) metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aB)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido-[2,1 -b]-[ 1,3]-tiazeρίη-7-karboxylovej v 6 ml metylénchloridu, ďalej 0,11 ml trietylamínu (0,813 mmol) a nakoniec 360 mg (0,813 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu. Reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C a reakčná teplota sa nechá vystúpiť pomaly na 20 °C. Celkom po 20-tich hodinách sa reakčná zmes zahustí vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v etylesteri kyseliny octovej a roztok sa premyje 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného, nasýteným roztokom chloridu sodného, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Organická vrstva sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, po filtrácii sa filtrát zahustí za vzniku žltej tuhej látky. Čistením rýchlou chromatografiou za eluovania sústavou etylester kyseliny octovej a hexán (2 : 3) sa pripraví takto 261,7 mg zlúčeniny, ako je uvedená v nadpise, vo forme žltého oleja.

c) Kyselina {4S-[4a(S*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b] [ 1,3]-tiazepín-7-karboxylová

Roztok 261,1 mg (0,562 mmol) produktu z časti b) v 6 ml metanolu sa zbaví vzduchu prebublávanim dusíkom, ochladí sa na 0 °C a pridá sa do nej 6 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, taktiež zbaveného vzduchu dusíkom. Reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C za stáleho zavádzania dusíka, potom sa nechá teplota vystúpiť na 20 °C a 30 minútovým miešaním pri tejto teplote vznikne číry roztok. Po

5,5 hodinách sa reakčná zmes okyslí na pH 5 %-ným roztokom hydrogensíranu draselného, po extrakcii do etylesteru kyseliny octovej sa organické výtrepky spoja, všetko sa vytrepe vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Čistením rýchlou chromatografiou v sústave etylester kyseliny octovej, kyselina octová a hexán (6 : 0,01 : 3,99) sa získa 190 mg zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise, a to ako biela tuhá látka.

[ot]_D = -87,5° (c = 0,51 % etanol).

Chromatografía na tenkej vrstve v sústave etylesteru kyseliny octovej, kyselina octová a hexán (6,0 : 0,1 : 3,99) R_f= 0,83.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografía, retenčný čas 25,3 min. kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 0 % až 100 % B : A, 30 min. lineárny gradient a 10 minútové zdržanie, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v metanole + 0,2 % kyseliny fosforečnej,

B = 90 % metanolu vo vode + 0,2 % kyseliny fosforečnej.

Analýza pre C|₉H₂₄0₄N₂So .0,15 C₄H₈O₂ .0,15 C₇H|₆ . 0,39 H₂O vypočítané: 55,89 % C, 6,45 % H, 6,31 % N, 14,45 % S nájdené: 56,19 % C, 6,50 % H, 6,71 % N, 13,96% S

Príklad 31

Kyselina [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4- {[2-merkapto-1 -oxo-3-(4-tiazolyl)-propyl]-amino}-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-amino-3-(4-tiazolyl)-propánová

Roztok 10 ml 4 N chlorovodíkovej kyseliny v dioxáne sa pridá do roztoku 2,0 g (7,3 mmol) kyseliny (R)-2-{[(l, 1 -dimetoxyetoxy)-karbonyl]-amino)-3-(4-tiazolyl)-propánovej v 2 ml dioxánu, reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny, zahustí sa vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v 3 ml vody. Hodnota pH sa upraví na 6,5 pridaním

N roztoku hydroxidu sodného a tento roztok sa pustí kolónou 20 ml Dowexu^R AG(50⁺), kolóna sa eluuje použitím 300 ml vody, frakcie, obsahujúce produkt sa zahustia vo vákuu a výťažkom je 0,94 g látky, uvedenej v nadpise.

b) Kyselina (R)-bróm-3-(4-tiazolyl)-propánová

Roztok 0,516 ml produktu z časti a) (3 mmol) a 1,19 g (10,1 mmol) bromidu draselného v zmesi 5,94 ml vody a 0,43 ml kyseliny sírovej sa mieša 5 minút pri -10 °C, potom sa po malých dávkach vnáša 0,318 g (4,61 mmol) dusitanu sodného počas 10-tich minút. Reakčná zmes sa mieša ďalších 10 minút pri 0 °C a hodinu pri teplote miestnosti, extrahuje sa troma podielmi po 100 ml éteru, roztok v éteri sa premyje bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa zahustením filtrátu vo vákuu pripraví týmto spôsobom 0,37 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

[a]_D = +37,35° (c = 0,7, metanol).

Druhé uskutočnenie vychádza z 2,67 mmol produktu z časti a) a s použitím rovnakého postupu sa takto získa ďalších 0,35 g produktu, ako je uvedené jeho zloženie v nadpise.

c) Kyselina (S)-2-(acetyltio)-3-(4-tiazolyl)-propánová

Zmes 0,72 g (3,05 mmol produktu z časti b) a 0,35 g (3,05 mol) draselnej soli kyseliny tiooctovej sa mieša v prostredí 9 ml acetonitrilu cez noc pri teplote miestnosti a potom hodinu po vyhriatí na 30 °C. Zmes sa zriedi pridaním 100 ml etylesteru kyseliny octovej, filtruje sa, filtrát sa zahustí vo vákuu. Zvyšok sa znova rozpustí v 100 ml etylesteru kyseliny octovej, roztok sa premyje dvakrát použitím 50 ml vody, ďalej soľankou (20 ml) a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Po filtrácii sa zahustením filtrátu vo vákuu získa týmto spôsobom 0,52 g zlúčeniny, uvedenej v nadpise.

[a]_D= -15,89° (c = 0,8, metanol).

d) Metylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aG)]-oktahydro-4-[2-(acetyltio)-l-oxo-3-(4-tiazolyl)-propyl]-amino-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej

V 5 ml metylénchloridu sa pri teplote 0 °C rozpustí 0,367 g (0,882 mmol) soli kyseliny p-toluénsulfónovej a metylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aB)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrolo[2,l-b]-[l,3]-tiazepín-7-karboxylovej (pripravenej z materiálu opísaného v príklade 5 d), do roztoku sa ďalej pridá 0,12 ml (0,868 mmol) trietylamínu, ďalej potom 0,2 g (0,865 mmol) produktu z časti c) a ďalší podiel 0,12 ml (0,865 mmol) trietylamínu. Ešte sa do reakčnej zmesi vnesie 0,383 g (0,865 mmol) benzotriazol-l-yloxy-tris-(dirnetylamino)-fosfóniumhexafluórfosfátu, reakčná zmes sa mieša hodinu pri 0 °C a 4 hodiny pri teplote miestnosti, zahustí sa vo vákuu, zvyšok sa rozpustí v 60 ml etylesteru kyseliny octovej, organický extrakt sa premyje použitím 10 ml 5 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát soľankou, vždy 10 ml, vysuší sa bezvodým síranom sodným a po filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Získaný surový materiál sa chromatografuje na silikagéli (100 g, Merck) s použitím 0,2 % metanolu v etylesteri kyseliny octovej. Zahustením frakcií, obohatených pomalším izomérom, vo vákuu sa získa 0,134 g zlúčeniny, ako je uvedené v nadpise.

e) Kyselina [4S-(4a,7a,9aB)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-(4-tiazolyl)-propyl]-amino-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylová

V prostredí 3 ml metanolu sa rozpustí 0,135 g (0,29 mmol) produktu z časti d) a do roztoku sa za chladenia na 0 °C zavádza počas 30 minút argón. Potom sa do roztoku pridá 1,32 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, z ktorého bol vzduch taktiež vypudený argónom a reakčná zmes sa mieša za chladenia na 0 °C a za zavádzania argónu hodinu, ďalej potom 2 hodiny pri teplote miestnosti. Pridaním 20 ml 5 %-ného vodného roztoku hydrogensíranu draselného sa reakčná zmes rozruší, organické podiely sa extrahujú do troch dávok etylesteru kyseliny octovej po 50 ml, spojený roztok v tomto rozpúšťadle sa premyje soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným, filtruje sa a po filtrácii sa číry roztok zahustí vo vákuu. Zvyšok sa chromatografuje na 40 g silikagélu (Merck) s použitím chloroformu s obsahom 5 % metanolu a 0,5 % kyseliny octovej. Zodpovedajúce frakcie sa spoja, zahustia a zvyšok sa roztrepáva medzi 20 ml etylesteru kyseliny octovej a 5 %-ný vodný roztok hydrogensíranu draselného. Roztok v etylesteri kyseliny octovej sa premyje vodou a soľankou, vysuší sa bezvodým síranom sodným a filtrát sa zahustí vo vákuu. Lyofilizáciou zvyšku zo 4 ml dioxánu sa takto získa 36 mg zlúčeniny, ktorej zloženie je uvedené v nadpise ako zmes izomérov 70 : 30, T. t. 95 až 115 °C.

[a]_D= -191,7° (c = 0,06, chloroform).

Chromatografia na tenkej vrstve s použitím sústavy chloroform : metanol: kyselina octová (8:2: 0,2), R_f= 0,59.

Vysokotlaková kvapalinová chromatografia, retenčný čas 3,06 min. kolóna YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, ukončenie kolóny 3u, izokraticky 60 % vodný metanol s obsahom 0,2 % kyseliny fosforečnej, 25 min., 1,5 ml/min. 95,4 %).

Analýza pre C|5H|₉N₃O₄S₃.0,2 C₄H₈O₂.0,9 H₂O vypočítané: 43,59 % C, 5,19 % H, 9,65 % N, 22,09 % S nájdené: 43,54 % C, 4,89 % H, 9,44 % N, 21,90 % S

Príklad 32

1000 tabliet, z ktorých každá obsahuje tieto zložky: Kyselinu (4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-tiazepín-7-karboxylovú 100 mg kukuričný škrob 100 mg želatínu 20mg

Avicel (mikrokryštalická celulóza) 50mg horečnatú soľ kyseliny stearovej 5mg

275 mg sa pripravia z dostatočných množstiev zmiešaním produktu z príkladu 3 a kukuričného škrobu s vodným roztokom želatíny. Zmes sa vysuší a zomelie potom na jemný prášok. Primieša sa Avicel a horečnatá soľ kyseliny stearovej za súčasného granulovania. Zo zmesi sa potom lisujú tablety na tabletovacom zariadení tak, že sa vyrobí 1000 tabliet, obsahujúcich po 100 mg aktívnej zložky.

Podobným postupom sa môžu pripraviť tablety s obsahom 200 mg produktu z príkladu 1,2,4 až 23,25 a28 až 31.

Podobný postup je možné použiť na prípravu tabliet alebo kapsúl, obsahujúcich od 10 mg do 500 mg aktívnej zložky.

Testy účinnosti

Účinnosť zlúčenín podľa vynálezu in vitro sa stanovuje nasledujúcim spôsobom:

Inhibičná aktivita na enzým konvertujúci angiotenzín ( Angiotensin converting enzýme ACE ) sa stanovuje spôsobom, ktorý opísal Cushman a kol. (Biochem.Pharmacol.20, str. 1637 až 1648, 1971). Ako zdroj ACE sa použije extrakt z králičích pľúc a monitoruje sa miera vytvárania hippuronovej kyseliny zo substrátu hippuryl-L-histidínL-leucín (HHL). Po 30 minútach inkubácie testovanej zlúčeniny s enzýmom a so substrátom sa reakcia ukončí pridaním kyseliny chlorovodíkovej. Pridá sa etylacetát. Vytvorená hippurová kyselina sa rekonštituuje vo vode a zisťuje sa koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá inhibuje reakciu o 50 % (IC_S0).

Aktivita obličkovej neutrálnej ondopeptidázy (KNEP) sa stanovuje oproti čistenej krysej neutrálnej endopeptidáze s použitím fluorometrického testu. Test je založený na štiepení fluorescentného dansylatovaného tripeptidu Dns-Gly-
-Phe-Arg na vytvorenie Dns-Gly . Dns-Gly	sa extrahuje z
okyslenej zmesi etylacetátom a je silne fluorescentné. Tes-
tovaná zlúčenina sa	predinkubuje počas 10	minút s enzý-
movým prostriedkom pred začatím reakcie	pridaním sub-
strátu. Po 30 minútovej inkubácii sa reakcia	ukončí kyseli-
nou chlorovodíkovou. Dns-Gly sa extrahuje etylacetátom. Relatívna fluorescenčná intenzita extraktu sa meria s pou-
žitím spektrometra a	zisťuje sa koncentrácia testovanej zlú-
čeniny, ktoré inhibuje reakciu o 50 % (IC₅₀).
Výsledky obidvoch testov sú uvedené v tabuľke
Zlúčenina podľa	KNEP	ACE
príkladu	ic₅₀	IC₅₀ nM
1	9,0	8,0
2	42,0	5,0
3,11,22,33	9,0	5,0
4	26,0	7,0
5,6	4,0	4,0
7	930,0	11,0
8	97,0	2,0
9	8,0	7,0
10	30,0	10,0
12	0,6	2,0
13	2,0	4,0
14	154,0	11,0
15	83,0	10,0
16	405,0	11,0
17	2650,0	13,0
18	49,0	13,0
19	309,0	22,0
20	409,0	26,4
21	22,0	11,0
30	12,0	19,0
31	5255,0	13,0

Priemyselná využiteľnosť

Merkaptoalkanoylové a acylmerkaptoalkanoylové deriváty oxazepínu, tiazínu, a tiazepínu a ich farmaceutický vhodné soli sú vhodné na výrobu farmaceutického prostriedku na ošetrovanie kardiovaskulárnych chorôb, ako je vysoký krvný tlak a zlyhanie srdca po prekrvení.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu, a tiazepínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I) kde znamená

A skupinu všeobecného vzorca

R²—S (CH_S),—-C—C--- .

_Bia ÍR¹ kde znamená

R¹ a R¹³ od seba nezávisle atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 až 5 atómami uhlíka s priamym, alebo rozvetveným reťazcom, skupinu -CH₂-cykloalkylovú s 3 až 6 atómami uhlíka v cykloalkylovom podieli, -CII₂.fenylovú -ClL-naftylovú, -CH₂-tienylovú, -CH₂-tiazolylovú skupinu, alebo R¹ a R¹³ spolu vytvárajú skupinu cykloalkylovú s 5 atómami uhlíka,

R³ atóm vodíka, alebo skupinu všeobecného vzorca o

é

R -C- , kde znamená

R⁶ alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo fenylovú skupinu

X atóm kyslíka, alebo síry

R⁵ atóm vodika, alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlika,

Y skupinu -CH₂-,alebo atóm kyslíka a to za predpokladu, že ak Y znamená atóm kyslíka, znamená m číslo 1, m 0 alebo 1 n 1 alebo 2, r 0 alebo 1 a jeho farmaceutický prijateľná soľ.
2. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu, a tiazepínu všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, kde znamená

R² atóm vodíka, alebo skupinu všeobecného vzorca

O

II h₃c-c>

R³ atóm vodíka r 0 alebo 1,

R¹ skupinu benzylovú , cyklopropylmetylovú, alebo alkylovú s 3 až 5 atómami uhlíka s priamym, alebo s rozvetveným reťazcom,

R¹² atóm vodíka n 1 alebo 2 m 0 alebo 1, n 1 alebo 2

X atóm kyslíka alebo síry a

Y skupinu -CH₂-,alebo atóm kyslíka a to za podmienky, že ak Y znamená atóm kyslíka znamená m číslo 1.
3. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu, a tiazepínu podľa nároku 2 všeobecného vzorca (I), kde znamená

X atóm síry,

Y skupinu -CH₂-, n 2, m 1, r 0 alebo 1,

R² atóm vodíka,

R¹ skupinu benzylovú alebo izobutylovú a

R¹² atóm vodíka alebo

X atóm síry,

Y skupinu -CH₂-, n 1, m 1, rO,

R³ atóm vodíka,

R¹ skupinu benzylovú a

R¹³ atóm vodíka alebo

X atóm síry,

Y skupinu -CH₂-, n 2, m 0, rO,

R* atóm vodíka,

R¹ skupinu benzylovú, cyklopropylmetylovú, n-butylovú, izobutylovú, n-propylovú alebo -CH₂C(CH₃)₃ a

R¹² atóm vodíka alebo

X atóm kyslíka,

Y skupinu -CH₂-, n 2, m 1, rO,

R² atóm vodíka,

R¹ benzylovú skupinu a

R¹³ atóm vodíka alebo

X atóm kyslíka,

Y skupinu -CH₂-, n 2, mO, r 0,

R² atóm vodíka,

R¹ benzylovú skupinu a

R¹² atóm vodíka alebo

X atóm kyslíka,

Y atóm kyslíka, n 2, m 1, rO,

R² atóm vodíka,

R¹ benzylovú skupinu a

R¹² atóm vodíka alebo

X atóm síry,

Y atóm kyslíka, n 2, m 1, r0,

R² atóm vodíka,

R¹ benzylovú skupinu a

R¹³ atóm vodíka.
4. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu, a tiazepínu podľa nároku 3 všeobecného vzorca (I) vybraný zo súboru:

kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]tiazepín-7-karboxylová, kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b][ 1,3]tiazepín-7-karboxylová ako soľ 1,1-dimetyletylamínu, kyselina (4S-[4a(S*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]tiazepín-7 -karboxylová, kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[[2-(merkaptometyl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino)-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][ 1,3]tiazepín-7-karboxylová, kyselina [3R-[3a(S*),6a,9aB]}-hexahydro-3-[(2-merkapto-1 -oxo-3 -fenylpropyl)-amino] -4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 -b][l,3]tia-zín-6-karboxylová, kyselina [4S-[4a(R*),7a,9aB]} -oktahydro-4- [(2-merkapto-1 -oxo-3-fenylpropyl)-amino] -5-oxopyrolo[2,1 -b] [ 1,3] tiazepín-7-karboxylová, kyselina [4S-[4a(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-1 -oxopropyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b][l,3]tiazepín-7-karboxylová, kyselina [4S-[4a(R*),7a,10aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4-metyl-1 -oxopentyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b][l,3]tiazepín-7-karboxylová kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-4-metylpentyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,l-b][l,3]tiazepín-7-karboxylová, kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aB]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-pentyl)-amino]-5 -oxopyrolo [2,1 -b] [ 1,3]tiazepín-7-karboxylová, kyselina {4S-[4ot(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimetyl-1 -oxopentyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,1 -b][l ,3] tiazepín-7-karboxylová, kyselina (4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3 -fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]oxazepín-7-karboxylová, kyselina [4S-[4a(R*),7a,9aB] }-oktahydro-4-[(2-sulfanyl-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxopyrolo[2,l -b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylová kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo[l,4]oxazino[3,4-b] [ 1,3]oxazepín-7-karboxylová alebo kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaB] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo[l,4]oxazino[3,4-b] [ 1,3]tiazepín-7-karboxylová.
5. Merkaptoalkanoylový derivát tiazepínu podľa nároku

2, ktorým je kyselina [4S-[4a(R*),7ot, 10aB]}-oktahydro-4-[(2-sulfanyl-1 -oxo-3 -fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido [2,1 -b] [ 1,3]ti a-zepín-7-karboxylová vzorca a jeho farmaceutický prijateľná soľ
6. Farmaceutický prípravok, na ošetrovanie kardiovaskulárnych ochorení, ako je vysoký tlak a srdcové zlyhanie po prekrvení, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický vhodný nosič a aspoň jeden merkaptoalkanoylový alebo acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu podľa nároku 1, všeobecného vzorca (I), kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.
7. Derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu všeobecného vzorca (III) kde znamená

X atóm kyslíka, alebo síry n 1 alebo 2 m O alebo 1

Y skupinu -CH₂-,alebo atóm kyslíka a to za podmienky, že

Y znamená atóm kyslíka iba v prípade, ak m znamená číslo 1,

R³ atóm vodíka, alebo alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka ako medziprodukt na prípravu merkaptoalkanoylového a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepínu, tiazínu a tiazepínu všeobecného vzorca (I), podľa nároku 1, kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam.
8. Spôsob výroby merkaptoalkanoylového a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepínu, tiazínu a tiazepínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, vyznačujúci sa tým, že sa

a) kopuluje acylmerkapto-postranný reťazec všeobecného vzorca (II) (II) kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, alebo jeho aktivovaná forma s amínom všeobecného vzorca (ΠΙ) kde jednotlivé symboly majú v nároku 1 uvedený význam, za prítomnosti kopulačného činidla a o

b) odstráni sa acylová skupina ^{E _c}~ a prípadne sa získaný ester karboxylovej skupiny, teda v prípade že R³ znamená alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, prevádza na voľnú kyselinu, teda na zlúčeninu, kde R’znamená atóm vodíka.