SK15692002A3

SK15692002A3 - 3-Amino-6,7-dioxygénované steroidy a s nimi súvisiace použitie

Info

Publication number: SK15692002A3
Application number: SK1569-2002A
Authority: SK
Inventors: Jeffrey R. Raymond; Claudia E. Kasserra; Yaping Shen
Original assignee: Inflazyme Pharmaceuticals Limited
Priority date: 2000-04-28
Filing date: 2001-04-30
Publication date: 2003-11-04
Also published as: CA2418748A1; HK1050694A1; DE60126597T2; CO5590904A2; DZ3355A1; US20070060553A1; BG107289A; MXPA02010645A; OA12255A; WO2001083512A1; US7112580B2; US20040138186A1; ATE353909T1; KR20030045671A; UA79229C2; NO20025106D0; EP1278763B1; AP2002002659A0; CN1214039C; JP2003531916A

Description

3-AMINO-6.7-DIOXYGÉNOVANÉ STEROIDY A S NIMI SÚVISIACE POUŽITIE /VWM£

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka 3-amino-6,7-dioxygénovaných steroidov, prostriedkov obsahujúcich tieto steroidy a s nimi súvisiaceho terapeutického použitia.

Doterajší stav techniky

Zápalová odpoveď (zápal)

Zápal je základná lokalizovaná odpoveď hostiteľa na napádajúce organizmy alebo na poranenie tkaniva, na ktorej sa zúčastňujú bunky imunitného systému. Klasické známky zápalu zahrňujú sčervenanie (erytém), opuch (edém), bolesť a zvýšenú tvorbu tepla (pyrém) v mieste poranenia. Zápalová odpoveď umožňuje telu špecificky rozpoznať a eliminovať invázny organizmus a/alebo opraviť poškodenie tkaniva. Mnohé z akútnych zmien v mieste zápalu možno buď priamo alebo nepriamo prisúdiť masívnemu prísunu leukocytov (napríklad neutrofilov, eozinofilov, lymfocytov, monocytov), ktorý je vlastný pre túto odpoveď. Leukocytárna infiltrácia a akumulácia v tkanive vedie k aktivácii a následnému uvoľňovaniu zápalových mediátorov, ako sú LTB₄, prostaglandíny, TNF-α, interleukíny IL-1 β, IL-8, IL-5, IL-4, histamín, proteázy a zlúčeniny s reaktívnym kyslíkom.

Normálny zápal je vysoko regulovaný proces, ktorý sa prísne kontroluje na niekoľkých úrovniach pre každý z bunkových typov zúčastňujúcich sa tejto odpovede. Napríklad expresia prozápalového cytokínu TNF-α sa kontroluje na úrovni génovej expresie, translácie, posttranslačnej modifikácie a uvoľňovania zrelej formy z bunkovej membrány. Mnohé z proteínov, ktoré sa v priebehu zápalu regulujú vzostupne, sa kontrolujú faktorom transkripcie NF-kapaB. Prozápalové odpovede sa v niektorých prípadoch vyrovnávajú endogénnymi protizápalovými mechanizmami, ako je tvorba IL-10. Pre normálnu zápalovú odpoveď je charakteristické, že je svojou povahou dočasná a prichádza po nej fáza rozptýlenia choroby, ktorá obnovuje pôvodný stav tkaniva. Uvažuje sa, že fáza rozptýlenia choroby zahrňuje vzostupnú reguláciu protizápalových mechanizmov, ako je IL-10, rovnako tak ako zostupnú reguláciu prozápalových procesov.

Zápalové choroby

Zápalové choroby nastávajú pri začatí zápalovej odpovede, ktorá je neprimeraná alebo sa nerieši normálnym spôsobom, avšak skôr pretrváva a vedie k chronickému zápalovému stavu. Zápalová choroba môže byť systémová (napríklad lupus) alebo lokalizovaná na konkrétne tkanivá alebo orgány a vykazuje mimoriadnu personálnu a ekonomickú záťaž spoločnosti. Príklady niektorých z najbežnejších a najproblematickejších zápalových chorôb zahrňujú astmu, alergiu, reumatoidnú artritídu, zápalové črevné ochorenie, psoriázu, emfyzém, kolitídu, reakciu štepu proti hostiteľovi, kontaktnú dermatitídu a ischemické reperfúzne poškodenie. Ďalšie chorobné stavy, ako sú ochorenia s nedostatočnosťou imunity, súvisia s pozmenenou reguláciou siete chemokín/cytokín a ich receptorov, čo môže pozmeňovať replikáciu vírusov a patogenézu AIDS.

Mnohé z tkanivových, bunkových a biochemických procesov, ktoré sa narušujú pri zápalovom ochorení, boli objasnené, čo umožňuje rozvoj experimentálnych modelov alebo skúšok pri napodobňovaní chorobného stavu. Tieto skúšky in vitro a in vivo umožňujú voľbu a skríning zlúčenín s vysokou pravdepodobnosťou terapeutickej účinnosti pri príslušných zápalových chorobách. Napríklad schopnosť zlúčeniny inhibovať alergénom indukovanú akumuláciu zápalových buniek, ako sú eozinofily a lymfocyty vo výplachovej tekutine získanej od senzibilizovaných zvierat, ukazuje na antiastmatickú aktivitu. Tento model je konkrétne použiteľný na hodnotenie účinkov zlúčenín pri liečení odpovede neskorej fázy a nadmernej odpovede charakteristickej pre astmu pri pozorovateľnom zápale pľúc. ,

Astma a alergia

Astma a alergia tesne súvisia s dostatočným preukázaním z klinických skúšok dokazujúcich silnú koreláciu medzi závažnosťou astmy a stupňom atopie (alergie). Uvažuje sa, že senzibilizácia na alergény je najdôležitejším rizikovým faktorom astmy u detí i dospelých, kde zhruba 99 % prípadov astmy vykazuje atopiu.

Alergiu možno charakterizovať zvýšenou hladinou IgE (protilátky) v krvnom sére. Opakovaná expozícia alergénom v procese nazvanom senzibilizácia sa normálne požaduje na spustenie atopie a následnej astmatickej a alergickej odpovede. B bunky pri expozícii alergénom poskytujú protilátky, ktoré sa viažu na povrch žírných buniek. Zosietenie dvoch protilátok antigénom spôsobí rad reakcií vedúcich k degranulácii a vysielaniu radu mediátorov, ktoré modulujú zápalovú odpoveď. Mediátory, ktoré sa uvoľňujú alebo tvoria v priebehu astmatickej a alergickej odpovede, zahrňujú histamín, leukotriény, prostaglandíny, cytokíny a tryptázu.

Astma je charakterizovaná nadmernou odpoveďou dýchacích ciest, epizodickými bronchospazmami a chronickým zápalom pľúc. Obštrukcia dýchacích ciest je reverzibilná v priebehu času alebo následkom odpovede na liekové spôsoby terapie. Pacienti vykazujúci normálny prietok vzduchu, môžu byť nadmerne reaktívni na rad prirodzených podnetov, napríklad na chladný vzduch, cvičenie, chemické látky a alergény. Najbežnejším prípadom zahajujúcim astmatickú odpoveď je priama precitlivenosť na bežné alergény vrátane peľu burín, peľu tráv, rôznych húb, prachu z roztočov, švábov a domácich zvierat. Symptómy ochorenia zahrňujú zvieranie hrdla, sipot, krátkosť dychu a kašeľ. Výskyt astmy a mortalita na celom svete rastie a za posledných 20 rokov sa zdvojnásobila napriek použitiu moderných spôsobov liečby.

Odpovede dýchacích ciest na alergén sú komplexné a zahrňujú včasnú astmatickú odpoveď (EAR), ktorá dosahuje vrchol 20 až 30 min po expozícii podnetom, možno ju charakterizovať bronchokonstrikciou a normálne vymizne v priebehu 1,5 až 2 h. Neskorá astmatická odpoveď (LAR) všeobecne nastáva 3 až 8 h po počiatočnej expozícii a zahrňuje ako bronchokonstrikciu, tak rozvoj zápalu a edému v pľúcnom tkanive. Tento zápal sa často stáva chronickým s poškodením epitelu a infiltráciou pľúc zápalovými bunkami, ako sú eozinofily a neutrofily.

Súčasné spôsoby liečby astmy

Glukokortikoidy (steroidy) sú najúčinnejšou modalitou dlhodobej terapie na liečenie astmy. Napríklad sa vzhľadom na prítomnosť zápalu dýchacích ciest, dokonca aj pri miernej astme, používajú inhalované steroidy i v ranom štádiu liekovej terapie. I keď sú steroidy účinnými protizápalovými prostriedkami, nie sú príliš vhodné na kontrolu akútnych nástupov astmy. Perorálne podávané steroidy majú významné vedľajšie účinky a vzhľadom na to je ich chronické používanie na kontrolu astmy minimálne. Často sa používa kombinovaná terapia s perorálne dodávanými steroidmi, ktorú možno rozdeliť do nasledujúcich oblastí: protizápaiové lieky (napríklad inhalované a perorálne steroidy), bronchodiiatačné prostriedky (napríklad p₂-agonisty, xantíny, anticholínergné prostriedky) a inhibítory mediátorov (napríklad kromolyny a leukotriénové antagonisty). Všeobecne možno pomocou súčasného arzenálu liečiv zvládať miernu až závažnú astmu obtiažne. Lieky, ktoré sú bezpečné, majú iba okrajovanú účinnosť, zatiaľ čo účinné lieky majú neprijateľné vedľajšie účinky s požiadavkou na rozsiahle sledovanie pacientov. Vyvíjané lieky majú spĺňať požiadavky týkajúce sa vedľajších účinkov (napríklad vedľajšie účinky vyvolávajúce zvracanie typické pre určité inhibítory fosfodiesterázy 4) a zlých farmakokinetických a metabolitických parametrov. Existuje značná potreba terapeutických prostriedkov na bezpečnú a účinnú liečbu zápalových chorôb, ako je astma a alergia. Tento vynález poskytuje tieto prostriedky a súvisiace prospešné výsledky, ktoré sa tu opisujú.

Podstata vynálezu

V jednom aspekte tento vynález poskytuje zlúčeniny podľa všeobecného vzorca 1 a ich farmaceutický prijateľné soli, solváty, stereoizoméry a prekurzory liekov, oddelene alebo v zmesiach.

d) v ktorom nezávisle a vo všetkých prípadoch platí, že:

R¹ a R² sa volia z prípadov atóm vodíka, atóm kyslíka tak, aby vznikla nitroskupina alebo skupina oxímu, aminoskupina, skupina -SO₃-R a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúce 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, kyslíka, fosforu, kremíku a síry, kde R² môže byť priama väzba k atómu číslo 3 alebo môžu skupiny R¹ a R² spolu s atómom dusíka, ku ktorému sú obidve pripojené, tvoriť heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a môže prípadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, kyslíka a kremíka a R¹ môže byť reťazec s 2 až 3 atómami pripojený k atómu číslo 2, takže -N-R¹ tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry kruhu A,

R³ a R⁴ sa volia z prípadov priamych väzieb k atómom číslo 6 respektíve 7 takým spôsobom, aby sa získali karbonylové skupiny, atóm vodíka alebo chrániace skupiny, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú alebo karbonylovú skupinu, atómy označené číslami 1 až 17 sú všetky atómy uhlíka a atómy uhlíka označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15, 16 a 17 môžu byť nezávisle substituované (a) jednou zo skupín =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))n- a -(O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je 1 až 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z prípadov -X,

-N(R¹)(R²), -R⁵ a-OR⁶, a atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9, 10, 13 a 14 môžu byť nezávisle substituované jednou zo skupín -X, -R⁵, -N(R¹)(R²) alebo -OR⁶, navyše k menovaným skupinám -OR³ a -OR⁴ môže byť každý z atómov uhlíka číslo 6 a 7 nezávisle substituovaný jedným zo substituentov -X, N-(R¹)(R²), -R⁵ alebo -OR⁶, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle plne nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený,

R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, atóm halogénu a organický zvyšok Ci-3o, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený z atómov boru, halogénu, dusíka, kyslíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu vytvárať kruh spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obe pripájajú,

R⁶ je atóm vodíka alebo chrániaca skupina, takže OR⁶ je chránená hydroxylová skupina, kde vicinálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni vicinálne hydroxylové skupiny a kde geminálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni karbonylovú skupinu a X predstavuje fluorid, chlorid, bromid a jodid.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci steroidnú zlúčeninu, ako sa opisuje vyššie, a farmaceutický prijateľný nosič, excipient alebo zrieďovací prostriedok.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia zápalu zahrňujúci podávanie osobe, ktorá potrebuje toto liečenie, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob profylaktickej liečby zápalu zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, profylaktický účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia astmy zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynálezu poskytuje spôsob liečby alergickej choroby zahrňujúci, avšak bez obmedzenia, dermálne a očné indikácie, zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia chronického pľúcneho ochorenia zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia atopickej dermatitídy zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia solidných tumorov zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia AIDS zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia ischemického reperfúzneho poškodenia zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje spôsob liečenia srdcových arytmií zahrňujúci podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, terapeuticky účinného množstva steroidnej zlúčeniny, ako sa opisuje vyššie.

Tieto a súvisiace aspekty tohto vynálezu sa opisujú podrobnejšie nižšie.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obrázky 1A a 1B znázorňujú súhrnné údaje o syntetických transformáciách, ktoré možno použiť na prevedenie 3-aminosteroidu na 3-nitrogénsteroid podľa tohto vynálezu.

Obrázky 2A, 2B a 2C tvoria súbor stĺpcových grafov ukazujúcich účinok zlúčeniny 89 (závislosť od dávky, 4x denne, perorálne) na ovalbumínom vyvolanú akumuláciu zápalových buniek v kvapaline z pľúcneho výplachu získaného od senzibilizovaných krýs kmeňa Brown Norway. Obrázok 2A ukazuje akumuláciu eozinofilov, obrázok 2B ukazuje akumuláciu neutrofilov, obrázok 2C ukazuje akumuláciu lymfocytov.

Obrázky 3A, 3B a 3C poskytujú súbor stĺpcových grafov ukazujúcich účinok zlúčeniny 28 (závislosť od dávky, 4x denne, perorálne) na ovalbumínom vyvolanú akumuláciu zápalových buniek v kvapaline z pľúcneho výplachu získaného od senzibilizovaných krýs kmeňa Brown Norway. Obrázok 2A ukazuje akumuláciu eozinofilov, obrázok 2B ukazuje akumuláciu neutrofilov, obrázok 2C ukazuje akumuláciu lymfocytov.

Obrázok 4 je graf ukazujúci účinok skúšaných látok 28 a 89 podávaných perorálne raz denne počas 4 dní pred záťažou na alergénom indukované zmeny pľúcneho odporu u senzibilizovaných morčiat.

Obrázok 5 je graf ukazujúci účinok skúšaných látok 28 a 89 podávaných perorálne raz denne počas 4 dní pred záťažou na alergénom indukované zmeny pľúcnej elastancie u senzibilizovaných morčiat.

Obrázok 6 je graf ukazujúci trvanie antibronchospastického pôsobenia skúšanej látky 89 podávanej perorálne v množstve 1 mg/kg raz denne počas 4 dní pred záťažou na alergénom indukované zmeny pľúcneho odporu u senzibilizovaných morčiat.

Obrázok 7 je graf ukazujúci trvanie antibronchospastického pôsobenia skúšanej látky 89 podávanej perorálne v množstve 1 mg/kg raz denne počas 4 dní pred záťažou na alergénom indukované zmeny pľúcnej elastancie u senzibilizovaných morčiat.

Nasleduje podrobný opis vynálezu.

Tento vynález poskytuje zlúčeniny, prípravky a spôsoby použiteľné pri liečení a/alebo prevencii rôznych chorobných stavov. Jeden aspekt tohto vynálezu napríklad poskytuje spôsob liečenia a/alebo prevencie zápalového ochorenia. Tento spôsob zahrňuje podávanie subjektu, ktorý potrebuje túto liečbu, účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, solvátu, stereoizoméru alebo liekového prekurzora alebo účinného množstva prípravku obsahujúceho zlúčeninu všeobecného vzorca 1 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, solvát, stereoizomér alebo liekový prekurzor.

Pred podrobnejším opisom vynálezu sa tu poskytujú určité pojmy s nasledujúcimi definíciami a určité konvencie, ktoré sa tu taktiež používajú.

A. Definícia pojmov

Nasledujúce pojmy tak, ako sa tu používajú, majú opisovaný zmysel, pokiaľ sa zreteľne neurčuje inak.

Alkylová skupina” je univalentná, nasýtená alebo nenasýtená, priama, rozvetvená alebo cyklická, alifatická (to jest nie aromatická) uhľovodíková skupina. V rôznych uskutočneniach má táto alkylová skupina 1 až 20 atómov uhlíka, to jest je to skupina C1-C20 (alebo C1-C20), alebo je to skupina C1-C18, C1-C12, C1-C6 alebo C1-C4. V rôznych uskutočneniach má nezávisle alkylová skupina nula vetiev (to jest predstavuje priamy reťazec), jednu vetvu, dve vetvy alebo viac ako dve vetvy, je nasýtená, je nenasýtená (kde nenasýtená alkylová skupina môže mať jednu dvojitú väzbu, dve dvojité väzby, viac ako dve dvojité väzby a/alebo jednu trojitú väzbu, dve trojité väzby alebo viac ako dve trojité väzby), predstavuje alebo zahrňuje cyklickú štruktúru, je acyklická. Príklady alkylových skupín sú Ci alkylová skupina (to jest -CH₃(metylová skupina)), C₂ alkylová skupina (to jest -CH₂CH₃ (etylová skupina), CH=CH₂ (etenylová skupina) a -C=CH (etinylová skupina) a C₃ alkylová skupina (napríklad -CH₂CH₂CH₃ (n-propylová skupina), -CH(CH₃)₂ (izopropylová skupina), -CH=CH-CH₃ (1-propenylová skupina), -C=C-CH₃ (1-propinylová skupina), -CH₃-CH=CH₂ (2-propenylová skupina), -CH₂-C=CH (2-propinylová skupina), -C(CH₃)=CH₂ (1-metyletenylová skupina) a -CH(CH₂)₂ (cyklopropinylová skupina)).

Arylová skupina” je univalentný aromatický uhľovodíkový kruhový systém. Tento kruhový systém môže byť monocyklický alebo kondenzovaný polycyklický (napríklad bicyklický, tricyklický, atď.). V rôznych uskutočneniach je arylovým kruhom kruh C5-C10 alebo C5-C7 alebo C5-C6, kde sa tieto počty uhlíkových atómov týkajú počtu uhlíkových atómov tvoriacich kruhový systém. Kruhový systém C6, to jest benzénový kruh, je preferovanou arylovou skupinou. V rôznych uskutočneniach je polycyklický kruh bicyklickoarylovou skupinou, kde preferované bicyklické arylové skupiny sú skupiny C8-C12 alebo C9-C10. Naftylový kruh, ktorý má 10 atómov uhlíka, je preferovanou polycyklickou arylovou skupinou.

Heteroalkylová skupina je alkylová skupina, ako sa tu definuje, v ktorej je aspoň jeden z atómov uhlíka nahradený heteroatómom. Preferované heteroatómy sú atómy dusíka, kyslíka, síry a halogénu. Heteroatóm môže mať, avšak obvykle nemá, rovnaký počet väzbových miest ako atóm uhlíka. V súlade s tým, pokiaľ sa atóm uhlíka nahradí heteroatómom, môže sa počet vodíkov viazaných na heteroatóm zvýšiť alebo znížiť vzhľadom na počet valenčných miest heteroatómu. Napríklad, ak sa atóm uhlíka (4 valencie) nahradí atómom dusíka (3 valencie), potom je potrebné jeden z atómov vodíka pripojených v prvom prípade k nahradenému atómu uhlíka vypustiť. Podobne pokiaľ sa atóm uhlíka nahradí halogénom (jedna valencia) potom sa musia tri (všetky vodíky) skôr viazané na nahradený atóm uhlíka vypustiť.

Heteroarylová skupina” je univalentný aromatický systém obsahujúci atómy uhlíka a aspoň jeden heteroatóm vo vnútri kruhu. Heteroarylová skupina môže mať v rôznych uskutočneniach jeden heteroatóm alebo jeden až dva heteroatómy alebo jeden až tri heteroatómy alebo jeden až štyri heteroatómy v kruhu. Heteroarylové kruhy môžu byť monocyklické alebo polycyklické, kde polycyklický kruh môže zahrňovať kondenzovaný kruh, kruh spirozlúčeniny alebo kruhy spojené mostíkom. V jednom uskutočnení sa heteroarylová skupina volí z monocyklického a bicyklického systému. Monocyklické heteroarylové kruhy môžu obsahovať od zhruba 5 do zhruba 10 atómov (uhlíka a heteroatómov), prednostne od 5 do 7 a najlepšie od 5 do 6 atómov v kruhu. Bicyklické heteroarylové kruhy môžu obsahovať od zhruba 8 do 12 členov alebo 9 až 10 členov v kruhu. Heteroarylový kruh môže byť nesubstituovaný alebo substituovaný. V jednom uskutočnení je heteroarylový kruh nesubstituovaný. V ďalšom uskutočnení je heteroarylový kruh substituovaný. Príklady heteroarylových kruhov zahrňujú kruhy benzofuránu, benzotiofénu, furánu, imidazolu, indolu, izotiazolu, oxazolu, piperazínu, pyrozínu, pyrazolu, pyridazínu, pyridínu, pyrimidínu, pyrolu, chinolínu, tiazolu a tiofénu.

Heteroatóm” je atóm halogénu, dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka alebo síry. Skupiny obsahujúce viac ako jeden heteroatóm môžu obsahovať rôzne heteroatómy.

Uhľovodíky” sú chemické zlúčeniny tvorené výlučne vodíkom a uhlíkom. Halogénkarbóny sú chemické zlúčeniny tvorené výlučne halogénom a uhlíkom a hydrohalogénkarbóny” sú chemické zlúčeniny tvorené výlučne vodíkom, halogénom a uhlíkom.

Organické skupiny” a organické zvyšky” sa používajú ako synonymá a týkajú sa stabilných štruktúr, ktoré majú opisovaný počet a typ atómov.

Farmaceutický prijateľná soľ” a jej soli” sa v prípade zlúčenín podľa tohto vynálezu týkajú kyslých adičných solí a bázických adičných solí.

Kyslé adičné soli sa týkajú solí tvorených zo zlúčenín podľa tohto vynálezu a anorganických kyselín, ako je kyseliny chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a podobne a/alebo organických kyselín, ako je kyselina octová, kyselina propiónová, kyselina glykolová, kyselina pyrohroznová, kyselina šťavelová, kyselina maleínová, kyselina jablčná, kyselina jantárová, kyselina fumárová, kyselina vínna, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina škoricová, kyselina mandlová, kyselina metánsulfónová, kyselina etánsulfónová, kyselina p-toluénsulfónová, kyselina salicylová a podobne.

Bázické adičné soli sa týkajú solí vytvorených zo zlúčenín podľa tohto vynálezu a anorganických zásad, ako sú sodné, draselné, Utne, amónne, vápenaté, horečnaté, železité, zinočnaté, meďnaté, manganaté, hlinité soli a podobne. Vhodné soli zahrňujú amónne, draselné, sodné, vápenaté a horečnaté soli a soli odvodené od farmaceutický prijateľných netoxických báz, ako sú primárne, sekundárne a terciárne amíny, substituované amíny vrátane prirodzených substituovaných amínov, cyklické amíny a bázické iónomeniče, ako je izopropylamín, trimetylamín, dietylamín, tripropylamín, etanolamín, 2-dimetylaminoetanol, 2-dietylaminoetanol, trimetamín, dicyklohexylamín, lyzín, arginín, histidín, kofeín, prokaíny, hydrabamín, cholín, betaín, etyléndiamín, glukozamín, metylglukamín, teobromín, puríny, piperazín, piperidín, Netylpiperidín a podobne.

Pokiaľ sa akákoľvek premenná vyskytuje viac ako raz v akejkoľvek zložke alebo v zlúčeninách všeobecného vzorca 1, je jej definícia vždy nezávislá od definície v ktoromkoľvek inom výskyte. Kombinácie substituentov a/alebo premenných sú prípustné iba pokiaľ tieto kombinácie vedú k stabilným zlúčeninám. Zlúčeniny použiteľné v spôsoboch a prípravkoch podľa tohto vynálezu, rovnako tak ako zlúčeniny podľa tohto vynálezu, môžu mať asymetrické centrá a vyskytovať sa ako racemáty, racemické zmesi a ako jednotlivé diastereoméry alebo enantioméry a všetky izomérne formy sa zahrňujú do tohto vynálezu. Racemát alebo racemická zmes neimplikuje zmes stereoizomérov 50:50.

V ďalšom uskutočnení tento vynález poskytuje farmaceutické prípravky obsahujúce zlúčeninu všeobecného vzorca 1, ako sa opisuje vyššie, v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom, zrieďovacím prostriedkom alebo pomocnou látkou. Tieto prípravky možno používať na liečenie zápalu alebo iných stavov, ako sa tu opisuje. Tieto prostriedky možno tiež pripravovať ako liečivo, ktoré možno používať pri liečení, napríklad pri liečení zápalu.

Tieto prostriedky sú použiteľné napríklad ako štandardy pre skúšky, vhodné prostriedky na prípravu hromadných dodávok alebo farmaceutických prípravkov. Zistiteľné množstvo zlúčeniny podľa tohto vynálezu je množstvo, ktoré možno ľahko merať štandardnými spôsobmi rozboru, ktoré sú dobre známe a uznávané tými, ktorí majú skúsenosti v odbore. Zistiteľné množstvá zlúčeniny podľa tohto vynálezu budú všeobecne od zhruba 0,001 hmotnostných % do zhruba 100 hmotnostných % z celej hmotnosti prípravku. Inertné nosiče zahrňujú akúkoľvek látku, ktorá sa nerozkladá alebo nereaguje inou kovalentnou reakciou so zlúčeninou všeobecného vzorca 1. Príklady vhodných inertných nosičov sú voda, vodné pufre, ako sú tie, ktoré sa bežne používajú vo vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografii (HPLC), organické rozpúšťadlá, ako je acetonitril, etylacetát, hexán a podobne a farmaceutický prijateľné nosiče.

Farmaceutický prijateľné nosiče” na terapeutické použitie sú dobre známe v odbore farmácie a opisujú sa napríklad v Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro red., 1985). Napríklad možno použiť sterilný fyziologický roztok a fyziologický roztok pufrovaný fosfátom pri fyziologickom pH. Do farmaceutického prípravku sa môžu pridávať konzervačné prostriedky, stabilizačné prostriedky, farbivá a dokonca i príchute. Napríklad možno ako konzervačné prostriedky pridávať benzoát sodný, kyselinu sorbovú a estery kyseliny phydroxybenzoovej. Id. 1449. Navyše možno použiť antioxidačné a suspenzačné prostriedky. Id.

Steroidné zlúčeniny podľa tohto vynálezu majú aspoň štyri kruhy, obvykle označované ako A, B, C a D, ako sa ukazuje nižšie, kde kruh A môže byť kondenzovaný s ďalším kruhom.

B. Zlúčeniny

Tento vynález poskytuje zlúčeniny všeobecného vzorca 1 a farmaceutický prijateľné soli, solváty, stereoizoméry a liekové prekurzory týchto zlúčenín, oddelene alebo v zmesiach

(D v ktorých platí nezávisle a vo všetkých prípadoch, že

R¹ a R² sa volia z prípadov atóm vodíka, atóm kyslíka tak, aby vznikla nitroskupina alebo skupina oxímu, aminoskupina, skupina -SO3-R a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúce 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka a síry, kde R² môže byť priama väzba k atómu číslo 3 alebo môžu skupiny R¹ a R² spolu s atómom dusíka, ku ktorému sú obidve pripojené, tvoriť heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a môže prípadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, kyslíka a kremíka a R¹ môže byť reťazec s 2 až 3 atómami pripojený k atómu číslo 2, takže -N-R¹ tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry kruhu A, *3 Λ

R a R sa volia z prípadov priamych väzieb k atómom číslo 6 respektíve 7 takým spôsobom, aby sa získali karbonylové skupiny, atóm vodíka alebo chrániace skupiny, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú alebo karbonylovú skupinu, atómy označené číslami 1 až 17 sú všetky atómy uhlíka a atómy uhlíka označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15, 16 a 17 môžu byť nezávisle substituované (a) jednou zo skupín =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))n- a -(O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je 1 až 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z prípadov -X,

-N(R¹)(R²), R⁵ a -OR⁶, a atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9, 10, 13 a 14 môžu byť nezávisle substituované jednou zo skupín -X, -R⁵, -N(R¹)(R²) alebo -OR⁶, navyše k menovaným skupinám -OR³ a -OR⁴ môže byť každý z atómov uhlíka číslo 6 a 7 nezávisle substituovaný jedným zo substituentov -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ alebo -OR⁶, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle plne nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený,

R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, atóm halogénu a organický zvyšok C1.30, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený z atómov boru, halogénu, dusíka, kyslíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu vytvárať kruh spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú,

R⁶ je atóm vodíka alebo chrániaca skupina, takže OR⁶ je chránená hydroxylová skupina, kde vicinálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni vicinálne hydroxylové skupiny a kde geminálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni karbonylovú skupinu a

X prestavuje fluorid, chlorid, bromid a jodid.

V jednom aspekte tohto vynálezu sa R¹ a R² volia z prípadov atóm vodíka a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúce 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka a síry. R²môže byť prípadne priama väzba k atómu číslo 3. V ďalšom aspekte R¹, R² a atóm dusíka, ku ktorému sa obidva tieto substituenty pripájajú, tvoria heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť súčasťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a pripadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm dusíka, atóm kyslíka a atóm kremíka. V ďalšom aspekte je R¹ dvojatómový alebo trojatómový reťazec pripojený k atómu číslo 2, takže -N-R¹- tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry s kruhom A a tieto 2 alebo 3 atómy sa volia z prípadov atóm uhlíka, dusíka a kyslíka, pokiaľ takto vzniká stabilná štruktúra. V týchto ďalších aspektoch tohto vynálezu môže organická skupina mať 1 až 20 atómov uhlíka, zatiaľ čo v ďalších prípadných uskutočneniach má táto organická skupina 1 až 10 atómov uhlíka.

V jednom preferovanom aspekte tohto vynálezu sú obidva substituenty R¹ a R²atómy vodíka. Tieto steroidy majú nielen požadovanú biologickú aktivitu, môžu tiež slúžiť ako vhodné prekurzorové zlúčeniny na prípravu iných steroidov podľa tohto vynálezu, v ktorých R¹ a/alebo R² nie sú atómy vodíka.

Tento vynález napríklad v jednom uskutočnení poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca 1, v ktorom R¹ a R² sú atómy vodíka alebo chrániacich skupín, •J Λ

R a R sa volia z prípadov priamych väzieb k atómom 6 respektíve 7 za vytvorenia karbonylových skupín, atómov vodíka, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou hydroxylových alebo karbonylových chrániacich skupín a navyše k ukázaným skupinám -OR³ a -OR⁴je každý z atómov 6 a 7 substituovaný atómom vodíka, pokiaľ tento prípad nie je vylúčený, pretože -OR³ alebo -OR⁴ tvoria karbonylovú skupinu, atómy uhlíka číslo 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka číslo je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka číslo 17 je substituovaný (a) jedným z prípadov =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵)(R⁵))n- a -(O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je 1 až 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich substituentov, ktoré sa volia nezávisle: -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ a -OR⁶, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený, R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, X a C1.30 organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený z atómov boru, halogénu, dusíka, kyslíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu spolu tvoriť kruh s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú, R⁶ je atóm vodíka alebo chrániaca skupina, takže -OR⁶ je chránená hydroxylová skupina, kde vicinálne skupiny -OR⁶ môžu spoločne tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni vicinálne hydroxylové skupiny, a kde geminálne skupiny -OR⁶ môžu spoločne tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni karbonylovú skupinu a X predstavuje fluorid, chlorid, bromid a jodid.

V jednom z ďalších uskutočnení tento vynález poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca 1, v ktorom R¹ a R² sú atómy vodíka, R³ a R⁴ sa volia z prípadov atómov vodíka a chrániacich skupín, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú skupinu, uhlíky číslo 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, uhlíky číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, uhlík číslo 10 je substituovaný metylovou skupinou, uhlík číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby, uhlík číslo 17 je substituovaný (a) jednou zo skupín =C(R⁵)(R⁵) a =C=C(R⁵)(R⁵) alebo (b) nasledujúcimi dvoma skupinami, ktoré sa volia nezávisle: -X, -N(R¹)(R²) a -R⁵, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený alebo čiastočne nasýtený, R⁵ sa nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, X a skupín Ci-₃₀uhľovodíkov, zlúčenín halogénov s uhlíkom a halogénovaných uhľovodíkov a X predstavuje fluorid, chlorid, bromid a jodid.

V jednom ďalšom uskutočnení tento vynález poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca 1, v ktorom R¹ a R² sú atómy vodíka, R³ a R⁴ sa volia z prípadov atómov vodíka a chrániacich skupín takých, že R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú skupinu, atómy uhlíka číslo 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka číslo 10 je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka číslo 17 je substituovaný (a) jedným z prípadov =C(R⁵)(R⁵) a =C=C(R⁵)(R⁵) a (b) dvoma zo substituentov -R⁵, každý z kruhu A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený alebo čiastočne nasýtený a R⁵ sa nezávisle volí z prípadov atóm vodíka a Cmo uhľovodíkov.

Konkrétne zlúčeniny podľa tohto vynálezu, v ktorých R¹ a R² sú atómy vodíka, zahrňujú:

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje steroidy s dusíkatým substituentom v polohe 3, kde dusík tohto substituenta je substituovaný organickou skupinou. Napríklad tento vynález poskytuje steroidné zlúčeniny, v ktorých R¹ sa volí z prípadov -C(=O)-R⁷, -C(=O)NH-R⁷ a -SO2-R⁷, kde R⁷ sa volí z prípadov alkylová skupina, heteroalkylová skupina, arylová skupina a heteroarylová skupina. V príbuznom uskutočnení je R¹ atóm vodíka a R² je skupina -CH₂-R⁷, v ktorej sa R⁷ volí z prípadov alkylová skupina, heteroalkylová skupina, arylová skupina a heteroarylová skupina. V jednom uskutočnení sa R⁷ volí z Cvw hydrokarbylových skupín. V ďalšom uskutočnení zahrňuje -C(=O)-R⁷ biotín. V ďalšom uskutočnení sa R⁷ volí z alkylsubstituovaných fenylových skupín, halogén-substituovaných fenylových skupín, alkoxy-substituovaných fenylových skupín, aryloxy-substituovaných fenylových skupín a nitrofenylových skupín.

V ďalšom aspekte je (R¹)(R²)N- heterocyklická skupina, čo znamená, že atóm uhlíka skupiny (R¹)(R²)N- môže byť časťou heterocyklického kruhu. Príklady zahrňujú

AAp/V»

Ä

V ďalšom aspekte predstavuje aspoň jeden zo substituentov R¹ a R²heterocyklický kruh alebo karbocyklický kruh. Preferovaným heterocyklickým kruhom J^e

a preferovaným karbocyklickým kruhom je benzénový kruh vrátane substituovaného benzénového kruhu, ako je to v 3-metylfenylovej skupine, 4-hydroxyfenylovej skupine a 4-sulfónamidfenylovej skupine.

V ďalšom aspekte môže byť R¹ dvojatómový alebo trojatómový reťazec pripojený k atómu číslo 2, takže N-R¹- tvorí časť bicyklickej štruktúry kondenzovanej s kruhom A. Tento vynález poskytuje zlúčeniny všeobecného vzorca znázorneného nižšie, kde Z predstavuje 2 alebo 3 atómy zvolené z atómov uhlíka, dusíka a kyslíka.

Kruh zahrňujúci Z môže byť nasýtený alebo nenasýtený.

t Í Y1

Z·

I

N·

As⁷

Príklady týchto zlúčenin s kondenzovaným kruhom zahrňujú

V ďalšom aspekte je R¹ atóm vodika a R² zahrňuje Cmo hydrokarbylovú skupinu.

V ďalšom aspekte je R¹ atóm vodíka a R² je heteroalkylová skupina. Vhodná heteroalkylová skupina zahrňuje bez obmedzenia (Cvw alkyl)-W-(Cvio alkylénovú) skupinu, v ktorej W sa volí z prípadov atóm kyslíka a skupina NH, HO-(Ci-io alkylénovú) skupinu a HO(Ci.i₀ alkylén-W-(Ci.i₀ alkylénovú) skupinu, v ktorej W sa volí z prípadov atóm kyslíka a skupina NH.

V ďalšom aspekte sa obidva substituenty R¹ a R² nezávisle volia z prípadov atómu vodíka a organických skupín s 1 až 20 atómami uhlíka, ktoré prípadne obsahujú 1 až 5 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka, kremíka a síry.

V ďalšom aspekte sa každý zo substituentov R¹ a R² nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹², kde R⁸ sa volí z prípadov Cm0 alkylová skupina, C1-10 heteroalkylová skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, Ce-io arylová skupina a C3.15 heteroarylová skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, R⁹ sa volí z prípadov (R⁸)r-(Ci.₁₀ alkylénová) skupina, (R⁸)r-(Ci.i0 heteroalkylénová) skupina obsahujúca 1, 2, 3 heteroatómy, (R⁸)r(C,.i0 arylénová) skupina a (R⁸)r-(C3_i5 heteroarylénová) skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, R¹⁰ sa volí z prípadov (R⁹)r-(C₁.i₀ alkylénová) skupina, (R⁹)r-(C3-15 heteroarylénová) skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, R¹¹ sa volí z prípadov (R¹°)r-(Ci-io alkylénová) skupina, (R¹°)r-(Ci-io heteroalkylénová) skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, (R¹⁰)r-(C6-io arylénová) skupina a (R¹⁰)r(C3.i5 heterorylénová) skupina obsahujúca 1, 2, 3 heteroatómy, R¹² sa volí z prípadov (R¹¹)r-(Ci-io alkylénová) skupina, (R¹¹)r(Ci-io heteroalkylénová) skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy, (R¹¹)r-(C6-io arylénová skupina) a (R¹¹)r(C3.is heteroarylénová) skupina obsahujúca 1, 2 alebo 3 heteroatómy a r sa volí z čísel 0, 1, 2, 3, 4 a 5 s podmienkou, že R¹ a R² sa môžu pripájať k spoločnému atómu tak, aby tvorili kruh s týmto spoločným atómom.

V ďalšom aspekte tento vynález poskytuje steroidné zlúčeniny štruktúry znázornené vyššie, v ktorých sa R¹ a R² nezávisle volia z prípadov atóm vodíka, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹², kde R⁸ sa volí z prípadov alkylová skupina, heteroalkylová skupina, arylová skupina a heteroarylová skupina, R⁹ sa volí z prípadov (R⁸)ralkylénová skupina, (R⁸)r-heteroalkylénová skupina, (R⁸)r-ary!énová skupina a (R⁸)r heteroarylénová skupina, R¹¹ sa volí z prípadov (R¹⁰)r-alkylénová skupina, (R¹⁰)rheteroalkylénová skupina, (R¹⁰)rarylénová skupina a (R¹⁰)r-heteroarylénová skupina, R¹² sa volí z prípadov (R¹¹)ralkylénová skupina, (R¹¹)r-heteroalkylénová skupina, (R¹¹)rarylénová skupina a (R¹¹)ľ-heteroarylénová skupina a r sa volí z čísel 0, 1,2, 3, 4 a 5 s podmienkou, že sa substituenty R¹ a R² môžu pripájať k spoločnému atómu takým spôsobom, že tvoria s týmto spoločným atómom kruh, R³ a R⁴ sa volia z prípadov atóm vodíka a chrániace skupiny také, že R³ a/alebo R⁴ tvoria časť skupiny chrániacej hydroxylovú skupinu, atómy uhlíka číslo 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka číslo 10 je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ netvorí časť nenasýtenej väzby, atóm uhlíka číslo 17 je substituovaný (a) jednou zo skupín =C(R⁵)(R⁵) a =C= C(R⁵)(R⁵) alebo (b) dvoma skupinami R⁵, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený alebo čiastočne nasýtený a R⁵ sa vo všetkých prípadoch volí z prípadov atóm vodíka a C1-10 uhľovodíkových skupín.

R¹ a R² sa môžu napríklad voliť z prípadov atóm vodíka, CH3-, CH₃(CH2)2-, CH₃(CH₂)4-, CH3CO-, CsHsCO-, (CH₃)₂-CHSO₂-, C₆H₅SO₂-, C₆H₅NHCO-,

CH₃(CH₂)₂NHCO-, CH₃(CH₂)2-NH(CH₂)2-, (CH₃)₂N(CH₂)2-, HOCH2CH2-,

HOCH₂(CH₂)4-, HOCH2-CH2NHCH2CH2-, 3-(CH₃)C₆H₄-, 4-(HO)C₆H₄-, 4-(H₂NSO₂)C_bH₄-, 4-((CH₃)₂CH)C₆H4-CH2-, 2-(F)C₆H₄-CH₂-, 3-(CF₃)C₆H₄-CH2-, 2-(CH₃O)C₆H₄CH₂-, 4-(CF₃O)C_eH₄-CH₂-, 3-(C_sH₅)C₆H₄-CH₂-, 3-(NO)C₆H₄-CH₂-

alebo R¹ a R² môžu spolu s atómom dusíka, ku ktorému sa obidva pripájajú, tvoriť heterocyklický kruh zvolený z prípadov

Konkrétne zlúčeniny podľa tohto vynálezu R² nie je atóm vodíka zahrňujú v ktorých R¹ je atóm vodíka, avšak

Jeden súbor preferovaných zlúčenín podľa tohto vynálezu má teda substituent R¹, ktorý je atómom vodíka a substituent R², ktorý nie je atómom vodíka.

V steroidných zlúčeninách podľa tohto vynálezu, ktoré sa tu opisujú, je v jednom aspekte R³ a R⁴ atóm vodíka, to jest steroid má hydroxylovú substitúciu na každom z atómov uhlíka označenom číslicami 6 a 7. V príbuznom aspekte sú jedna alebo obidve hydroxylové skupiny na uhlíkoch 6 a 7 v chránenej forme, to jest sú pripojené na skupinu chrániacu hydroxylové skupiny. Takéto chrániace skupiny sú v odbore dobre známe, opisujú sa napríklad v Green a Wuts Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1999). Vhodnou chrániacou skupinou je ketalová skupina, takže tento vynález poskytuje zlúčeniny všeobecného vzorca

IP ^13—

Í A

2^ \

-i/

Rl

R² i

Ako sa opisuje vyššie, poskytuje tento vynález steroidné zlúčeniny zahrňujúce zlúčeniny definovaného stereochemického usporiadania. Jedna z takýchto zlúčenín má stereochemické usporiadanie znázornené v nasledujúcej štruktúre pre R³O- a R⁴O-.

*N' í²

2^ I ,3.

*10

1*4 5

-₈/¹⁴15 '4' r⁴

Ako sa tiež opisuje vyššie, poskytuje tento vynález formy solí steroidov podľa tohto vynálezu, prednostne farmaceutický prijateľné soli. V jednom uskutočnení je N(R¹)(R²) vo forme soli. Inými slovami je skupina -N(R¹)(R²) protonizovaná tým spôsobom, že atóm uhlíka nesie kladný náboj. V takýchto prípadoch je steroidná zlúčenina podľa tohto vynálezu kyslou adičnou soľou, ako sa tu definuje. V jednom preferovanom aspekte poskytuje tento vynález hydrochloridové soli steroidných štruktúr znázornených vyššie. V ďalšom preferovanom aspekte poskytuje tento vynález acetátové soli steroidných štruktúr, ktoré sa tu opisujú.

Ako sa tiež opisuje vyššie, poskytuje tento vynález prekurzory liekov určitých zlúčenín znázornených všeobecným vzorcom 1. V jednom aspekte sa tento vynález zameriava na prekurzor ktorejkoľvek z konkrétnych zlúčenín znázornených všeobecným vzorcom 1. V ďalšom aspekte tento vynález vylučuje prekurzory špecifických zlúčenín znázornených všeobecným vzorcom 1, takže v jednom aspekte sa tento vynález zameriava na zlúčeniny všeobecného vzorca 1 a farmaceutický prijateľné soli, solváty, stereoizoméry, avšak nie na ich prekurzory, oddelene alebo v zmesi.

V steroidných zlúčeninách podľa tohto vynálezu, ako sa definuje vyššie, je v preferovanom uskutočnení atóm 17 substituovaný skupinou =C(R⁵)(R⁵) a skupina R⁵sa volí z prípadov atóm vodíka, atóm halogénu, Cv6 alkylová skupina, C-i-e hydroxyalkylová skupina a -CO₂-(Ci_6 alkylová) skupina. V ďalšom preferovanom uskutočnení je atóm 17 substituovaný C-i-6 alkylovou skupinou alebo Ci.₆halogénalkylovou skupinou alebo je substituovaný skupinou -OR⁶ alebo =0, kde R⁶ je atóm vodíka.

V steroidných zlúčeninách podľa tohto vynálezu, ako sa tu definujú, je v preferovanom uskutočnení aspoň jeden z atómov 10 a 13 substituovaný metylovou skupinou.

V steroidných zlúčeninách podľa tohto vynálezu, ako sa tu definujú, predstavujú v preferovanom uskutočnení číslice 1 až 16 všetky atómy uhlíka, kde tieto atómy uhlíka číslo 1,2, 4, 11, 12, 15a 16 môžu byť nezávisle substituované (a) jednou zo skupín =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))n- a (O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je od 1 do zhruba 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z prípadov -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ a -OR⁶ a číslica 17 predstavuje atóm uhlíka substituovaný (a) jednou zo skupín =C(R^5a)(R^5a) a =C=C(R^5a)(R^5a) a C(R^5a)(R^5a)C(R^5a)n-, kde n je od 1 do zhruba 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z prípadov: -X, -N(R¹)(R²) a -R^5a, kde R^5a sa vo všetkých prípadoch nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, atóm halogénu a C1.30 organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený z prípadov atóm boru, halogénu, dusíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵môžu tvoriť kruh spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú. Prípadne možno vo všetkých prípadoch voliť R^5a nezávisle z C1.30 uhľovodíkovej skupiny, C1.30 halogénkarbónovej skupiny, C4.30 hydrohalogénkarbónovej skupiny, atómu vodíka a atómu halogénu. V alternatívnom prípadnom uskutočnení možno vo všetkých prípadoch R^5a nezávisle voliť z prípadov Cmo uhľovodíkovej skupiny, Cmo halogénkarbónovej skupiny, C-mo hydrohalogénkarbónovej skupiny, atómu vodíka a atómu halogénu. Prípadne poskytuje tento vynález v každom z týchto vymenovaných uskutočnení ďalšie uskutočnenia, v ktorom sa R¹ a R² volia z prípadov atóm vodíka, atóm kyslíka takým spôsobom, že sa vytvára nitroskupina, skupina oxímu, aminoskupina, skupina -SO3-R a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúce 1 až 6 heteroatómov zvolených z prípadov atóm kyslíka, atóm fosforu, atóm kremíka, atóm síry, kde R² môže byť priama väzba k atómu číslo 3 alebo R¹ a R² môžu tvoriť spolu s atómom dusíka, ku ktorému sa obidva pripájajú, heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a môže prípadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov kyslíka a kremíka alebo R¹ môže byť dvojatómový alebo trojatómový reťazec pripojený k atómu číslo 2, takže -N-R¹- tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry s kruhom A. Prípadne poskytuje tento vynález v každom z týchto vymenovaných uskutočnení ďalšie uskutočnenia, v ktorých sú všetky atómy uhlíka číslo 1,2,4,11, 12, 15 a 16 substituované dvoma atómami vodíka, pokiaľ nie je tento atóm uhlíka časťou nenasýtenej väzby, atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, pokiaľ tento atóm uhlíka nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka číslo 10 je substituovaný metylovou skupinou a atóm uhlíka číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby. V každom z týchto vymenovaných uskutočnení tento vynález prípadne poskytuje ďalšie uskutočnenie, v ktorom atómy uhlíka 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka číslo 10 je substituovaný metylovou skupinou a atóm uhlíka číslo 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby.

V steroidných zlúčeninách podľa tohto vynálezu, ako sa tu definujú, sú v preferovanom uskutočnení obidva substituenty R a R atómami vodíka a/alebo obidva R³ a R⁴ sú atómy vodíka a/alebo atóm uhlíka číslo 17 je substituovaný (a) jednou z nasledujúcich skupín: C(R^5a)(R^5a), =C=C(R^5a)(R^5a),

C(R^5a)(R^5a)(C(R^5a)(C(R^5a)(R^5a))_n, kde n je od 1 do zhruba 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z prípadov -X, -N(R¹)(R²) a -R^5a, kde R^5a sa vo všetkých prípadoch nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, atóm halogénu a C1-30 organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený z atómov boru, halogénu, dusíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú tvoriť kruh.

V steroidoch podľa tohto vynálezu, pokiaľ sa neopisuje inak, je každý z kruhov A, B, C a D nezávisle celkom nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený. To znamená, že atómy vodíka pripojené ku ktorémukoľvek z atómov uhlíka v polohách 1 až 17 môžu byť vynechané takým spôsobom, aby sa umožnilo nenasýtenie v rámci kruhu A, B, C a/alebo D. Napríklad pokiaľ sa atómy uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 opisujú ako substituované jedným atómom vodíka a tiež sa opisuje, že každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený, potom možno ktorýkoľvek z jedného alebo viacerých atómov vodíka pripojených k atómom uhlíka číslo 5, 8, 9 a 14 vynechať na umožnenie nasýtenia atómu uhlíka.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa uvažujú ako farmaceutické prostriedky. Prednostne je molekulová hmotnosť zlúčeniny podľa tohto vynálezu relatívne malá, to jest menšia ako zhruba 5000 g/mol, zvyčajne menšia ako 4000 g/mol, zvyčajnejšie menšia ako 3000 g/mol, ešte zvyčajnejšie menšia ako 2000 g/mol a ešte zvyčajnejšie menšia ako 1000 g/mol, kde minimálna molekulová hmotnosť zlúčeniny podľa tohto vynálezu je zhruba 300 g/mol a každé z týchto typických rozmedzí predstavuje zvláštne uskutočnenie tohto vynálezu.

Steroidné zlúčeniny podľa tohto vynálezu zahrňujú farmaceutický prijateľné soli, solváty, stereoizoméry a prekurzory steroidných štruktúr s dusíkatou skupinou v polohe 3, dioxygénované v polohách 6, 7, oddelene alebo vo vzájomných zmesiach.

Steroidné zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu existovať a obvykle existujú ako tuhé látky vrátane kryštalických tuhých látok, ktoré možno kryštalizovať z bežných rozpúšťadiel, ako je etanol, Ν,Ν-dimetylformamid, voda alebo podobne. Kryštalizačný proces môže poskytovať v závislosti od podmienok kryštalizácie rôzne polymorfné štruktúry. Obvykle je na výrobu v komerčnom meradle výhodná termodynamicky stabilná forma steroidnej zlúčeniny podľa tohto vynálezu a je preferovanou formou tejto zlúčeniny.

Kryštalizácia často poskytuje solvát steroidnej zlúčeniny všeobecnej štruktúry znázornenej vyššie. Pojem solvát”, ako sa tu používa, sa týka agregátu, ktorý obsahuje jednu alebo viacero steroidných zlúčenín substituovaných dusíkatou skupinou v polohe 3, dioxygénovaných v polohách 6, 7 podľa tohto vynálezu s jednou alebo viacerými molekulami rozpúšťadla. Týmto rozpúšťadlom môže byť voda a v tomto prípade je solvátom hydrát. Alternatívne môže byť týmto rozpúšťadlom organické rozpúšťadlo. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu preto existovať ako hydrát vrátane monohydrátu, dihydrátu, hemihydrátu, sesquihydrátu, trihydrátu, tetrahydrátu a podobne, rovnako tak ako iné zodpovedajúce solvátované formy. Steroidné zlúčeniny môžu byť pravé solváty, zatiaľ čo v iných prípadoch môže steroid iba zadržiavať náhodne prítomnú vodu alebo môže byť zmesou s vodou a niektorým náhodne prítomným rozpúšťadlom.

Pojem farmaceutický prijateľný solvát”, ako sa tu používa, sa týka solvátu, ktorý zachováva biologickú účinnosť a vlastnosti biologicky aktívnych steroidných zlúčenín s dusíkatou skupinou v polohe 3, dioxygénovaných v polohách 6, 7, podľa tohto vynálezu. Príklady farmaceutický prijateľných solvátov zahrňujú, avšak bez obmedzenia, vodu, izopropanol, etanol, metanol, dimetylsulfoxid, etylacetát, kyselinu octovú a etanolamín. Ten, kto má skúsenosti v odbore, si uvedomí, že solvátované formy sú ekvivalentné nesolvátovaným formám a uvažujú sa takým spôsobom, že patria do rámca tohto vynálezu. Príkladom odkazu opisujúceho solváty je P. A. Sykes, Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6. vydanie (1986, John Wiley & Sons, N. Y.).

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu existovať ako jednotlivé stereoizoméry, racemáty a/alebo zmesi enantiomérov a/alebo diastereomérov. Všetky tieto jednotlivé stereoizoméry, racemáty a ich zmesi sa uvažujú v rámci tohto vynálezu. V jednom preferovanom aspekte sa používajú zlúčeniny podľa vynálezu v opticky čistej forme.

Pojem farmaceutický prijateľný prekurzor” sa uvažuje takým spôsobom, že znamená zlúčeninu, ktorú možno za fyziologických podmienok alebo solvolýzou previesť na biologicky aktívnu steroidnú zlúčeninu s dusíkatou skupinou v polohe 3, dioxygénovanou v polohách 6, 7, ako sa opisuje vyššie. Termín liekový prekurzor” sa teda týka metabolického prekurzora steroidnej zlúčeniny podľa tohto vynálezu, ktorý je farmaceutický prijateľný. Liekový prekurzor môže byť pri podaní subjektu neaktívny, avšak prevádza sa in vivo na aktívnu steroidnú zlúčeninu s dusíkatou skupinou v polohe 3, dioxygénovanou v polohách 6, 7 podľa tohto vynálezu. Liekové prekurzory sa zvyčajne rýchlo prevádzajú in vivo za získania materskej zlúčeniny vyššie znázornených vzorcov, napríklad hydrolýzou v krvi.

Diskusiu o liekových prekurzorov poskytuje T. Higuchi a V. Stella Prodrugs as Novel Delivery Systems”, diel 14 A. C. S. Sympózium Šerieš a v Bioreversible Carriers in Drug Design, redakcia Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association a Pergamon Press, 1987 a obidve tieto monografie, sú tu zahrnuté formou odkazu. Zvyčajný liekový prekurzor je derivátom steroidných zlúčenín podľa tohto vynálezu, ktoré majú chemicky a metabolický štiepiteľné skupiny a stávajú sa solvolýzou alebo za fyziologických podmienok zlúčeninami podľa tohto vynálezu, ktoré sú farmaceutický aktívne in vivo. Forma liekového prekurzorového derivátu často ponúka výhody v rozpustnosti, tkanivovej kompatibilite alebo oneskorenom uvoľňovaní v organizme cicavcov (pozri H. Bundgard, Design of Products, s. 7-9, 2127

24, Elsevier, Amsterdam 1985). Preferovaným liekovým prekurzorom je zlúčenina, ktorá má substitúciu na dusíkovom atóme 3 steroidov podľa tohto vynálezu, kde sa substituent odštiepuje in vivo za získania farmaceutický aktívnej zlúčeniny.

Steroidy podľa tohto vynálezu, ktoré majú dusíkatú substitúciu na atóme C3 a kyslíkatú substitúciu v polohách 6 a 7, majú neočakávané vlastnosti zvyšujúce účinnosti týchto zlúčenín. Napríklad steroid podľa tohto vynálezu vykazuje vynikajúcu metabolickú stabilitu vo frakciách S9 z ľudskej pečene. Napríklad 100 % zlúčenín 28, 89, 139 a 143 zostáva bez zmeny po 15 a dokonca i po 30 min inkubácie s ľudskými frakciami S9. Neočakávaným nálezom bolo, že dusíkaté substitučné skupiny na uhlíku C3 významne zvyšujú glukuronidáciu molekúl v krvnej plazme. Navyše steroidy podľa tohto vynálezu, ktoré majú dusíkaté substitučné skupiny na uhlíku C3, ako sú zlúčeniny 28, 89 a 83, sú vysoko rozpustné vo vodnom roztoku a vykazujú rozpustnosť väčšiu ako 100 mg/ml vo vode. Ďalej účinnosť a farmakokinetický profil steroidov podľa tohto vynálezu s dusíkatými substitučnými skupinami na uhlíku C3 sú vysoko vhodné na terapeutické použitie. Dávky <1,0 mg/kg raz denne reprodukovateľné preukazujú významnú protizápalovú účinnosť v modeloch zápalu in vivo. U krysy majú zlúčeniny 28 a 89 priemerný polčas 7,5 h a perorálnu biologickú dostupnosť zhruba 100 %, zatiaľ čo u opice je polčas v priemere 15 h a perorálna biologická dostupnosť 25 až 30 %. Maximálna koncentrácia v krvnej plazme oboch druhov je predvídateľná a lineárna.

C. Príprava zlúčenín

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu možno pripraviť spôsobmi používajúcimi kroky známe tomu, kto má skúsenosti v odbore alebo analogické týmto krokom. Všeobecné spôsoby uskutočnenia reakcií steroidných zlúčenín možno nájsť v Steroid Reactions”, C. Djerassi, red. Holden Day, San Francisco, Calif. 1963 a v odkazoch, ktoré sa citujú. Všeobecné spôsoby prípravy možno nájsť v Comprehensive Organic Transformations”, R. C. Larock, VCH Publishers, New York, N. Y., 1989 a v odkazoch, ktoré sa tu citujú. Ďalšie odkazy na literatúru použiteľné pri príprave zlúčenín podľa tohto vynálezu sú T. Reichstein, C. H. Meystre, Helv. Chim. Acta, 22, 728 (1932), H. Westmijze, H. Kleyn, P. Vermeer. L. A. van Dijck, Tet. Lett., 21, 2665 (1980), K. Prezewowsky, R. Wiechert, US Patent č. 3 682 983, P. Kaspar, H. Witzel,

J. Steroid Biochem., 23, 259 (1985), W. G. Dauben, T. Brookhart, J. Am. Chem.

Soc., 103, 237 (1981), A. J. Manson a kol., J. Med. Chem., 6, 1 (1963), R. O. Clinton a kol., J. Am. Chem. Soc., 83, 1478 (1961) a J. A. Zderie, a kol., Chem. and Ind.,

1960. 1625.

V jednom preferovanom uskutočnení sa používajú steroidy polyoxygénované na atómoch C3, C6, C7 a C17 ako východiskové látky alebo medziprodukty. Spôsoby zavedenia kyslíka v polohách C6 a C7 do komerčne dostupných východiskových látok sa opisujú v US patente č. 6 046 185. Tento patent tiež opisuje mnoho spôsobov, ktorými možno zaistiť substitúciu a preferovanú stereochemickú konfiguráciu do polôh C1, C2, C4, C5, C8, C9, C10, C11, C12, C13, C14, C15, C16a C17. V tomto vynáleze môže byť kyslík prítomný v substituentoch C6 a C7 vo forme hydroxylových skupín alebo chránených hydroxylových skupín. 6- a 7-hydroxylové skupiny možno chrániť jednotlivo alebo môžu spoločne tvoriť časť kruhu. Vhodné chrániace skupiny sú vymenované v Greene a Wuts Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, New York, N. Y. (1999).

S odkazom na schému A možno ketóny zlúčeniny 2 alebo analogických zlúčenín alkylovať mnohými alkylačnými skupinami za získania steroidov podľa tohto vynálezu, ktoré majú, avšak bez obmedzenia, alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové substitučné skupiny. Napríklad alkylácia 17-ketónu 2 aniónom acetylénu poskytuje 17a-etinyl-17p-hydroxylový medziprodukt 3. Prevrátenie stereochémie substituentov C17 možno uskutočniť najprv vytvorením metylsulfonátu s následným spracovaním dusičnanom strieborným v tetrahydrofuráne a vode. Dehydratácia zlúčeniny 3 oxychloridom fosforečným v 2,4-lutidíne poskytuje zlúčeninu 4. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje tercbutyldimetylsilylovú chrániacu skupinu z 3-hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 5. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 5 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a diizopropylazodikarboxylátom (DIAD) v toluéne poskytuje 3p-azidovú zlúčeninu 6. ZnN6-2py sa pripraví reakciou s dusičnanom zinočnatým a nitridom sodným s následným spracovaním pyridínom podľa spôsobu M. C. Viauda a P. Rollina v Synthesis 1990, 130. Redukcia azidu lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amín 7. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amónium-chloridovej soli 8.

i) KCCH, ii) POCI₃, 2,4-lutidín, iii) Bu₄NF, THF, iv) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iii) L1AIH4, Et₂O, iv) HCl, voda, MeCN.

Podľa schémy B možno steroidy podľa tohto vynálezu s alénovou funkčnou skupinou pripraviť z medziproduktov analogických zlúčenine 3. Príkladom je reakcia zlúčeniny 3 s lítiumalumíniumhydridom a chloridom hlinitým v tetrahydrofuráne za získania alénu 9. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3-hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 10. Spracovanie 3ahydroxylovej skupiny zlúčeniny 10 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3p-äzidovú zlúčeninu 11. Redukcia azidu 11 lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amín 12. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amóniumchloridovej soli 13.

Schéma B

i) LiAIH₄, AlCb, THF, ii) B114NF, THF, iii) ZnN₆2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iv) LiAIH₄, EtsO, v) HCI, voda, MeCN.

Podľa schémy C možno pripraviť zlúčeniny podľa tohto vynálezu s alkinylovou funkčnou skupinou z alénových medziproduktov. Príkladom je spracovanie zlúčeniny 9 n-butyllítiom v tetrahydrofuráne za získania 17p-etinylovej zlúčeniny 14. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 15. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 15 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3p-azidovú zlúčeninu 16. Redukcia azidu 16 lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amín 17. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amónium-chloridovej soli 18.

i) n-BuLi, THF, ii) Bu₄NF, THF, iii) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iv) LiAIH₄, Et₂O, v)

HCI, voda, MeCN.

Podľa schémy D možno pripraviť steroidy podľa tohto vynálezu s alkenylovou funkčnou skupinou z alkínových medziproduktov. Príkladom je kontrolovaná hydrogenácia zlúčeniny 14 s použitím paládia na uhličitane vápenatom ako katalyzátora za získania alkénu 19. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3-hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 20. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 20 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 30-azidovú zlúčeninu 21. Redukcia azidu 21 lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amín 22. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amónium-chloridovej soli 23.

Schéma D

i) H₂, Pd-CaCO₃, ii) Bu₄NF, THF, iii) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iv) LiAIH₄, Et₂O, v) HCI, voda, MeCN.

Zlúčeninu 2 možno použiť v mnohých olefinančných reakciách vrátane reakcií Wittigovho typu za získania zlúčeniny podľa tohto vynálezu s exocyklickou olefínovou skupinou na uhlíku C17. Napríklad možno podľa znázornenia v schéme E zlúčeninu 2 spracovať etyltrifenylfosfónium-bromidom a kálium-(terc-butoxidom) (KO’Bu) za získania zlúčeniny 24, v ktorej R¹ je metylová skupina a R² je atóm vodíka. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 25. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 25 ZnN6-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3p-azidovú zlúčeninu 26. Redukcia azidu 26 lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amin 27. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amónium-chloridovej soli, v ktorej R¹ je metylová skupina a R² je atóm vodíka.

Analogicky pri príprave znázornenej v schéme E, môžu reagovať ketóny, ako je zlúčenina 2 s inými činidlami Wittigovho typu, ako sú, avšak bez obmedzenia, metyl-, propyl-, butyl-, pentyl- alebo hexyltrifenylfosfónium-bromid za získania steroidov podľa tohto vynálezu analogických zlúčenine 28, v ktorých R² je atóm vodíka a R¹ je atóm vodíka, etylová skupina, propylová skupina, butylová skupina alebo pentylová skupina.

i) EtPPh₃Br, KO^lBu, toluén, ii) Bu₄NF, THF, iii) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iv)

LiAIH₄, Et₂O, v) HCI, voda, MeCN.

Steroidy podľa tohto vynálezu môžu obsahovať exocyklické dvojité väzby geometrie E a/alebo Z. Napríklad možno spracovať podľa znázornenia v schéme F Zolefín 24 v cyklohexáne pôsobením ultrafialového svetla za prítomnosti difenyldisulfidu s výslednou izomerizáciou na E-olefín 29. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3-hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 30. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 30 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3p-azidovú zlúčeninu 31. Redukcia azidu 31 lítiumalumíniurnhydridom v dietyléteri poskytuje amín 32. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za vytvorenia amónium-chloridovej soli 33.

Schéma F

i) (PhS)₂, UV svetlo, cyklohexán, ii) Bu₄NF, THF, iii) ZnN6-2py, PhaP, DIAD, toluén, iv) LiAIH₄, Et₂O, v) HCI, voda, MeCN.

Mnoho steroidov podľa tohto vynálezu s funkčnými skupinami na vedľajších reťazcoch možno pripraviť spôsobmi, ako je pripájanie k aldehydom a Michaelovým akceptorom podporované Lewisovou kyselinou. Napríklad možno podľa znázornenia v schéme G uskutočniť reakciu zlúčeniny 24 s metylpropionátom za prítomnosti dietylalumínium-chloridu za získania zlúčeniny 34. Dvojité väzby možno hydrogenovať za prítomnosti katalyzátora, ako je platina, za získania zlúčeniny 35. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstráni chrániacu skupinu z 3hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 36. Spracovanie 3a-hydroxylovej zlúčeniny 36 ZnN6-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3p-azidovú zlúčeninu 37. Hydrogenácia azidu 37 za prítomnosti paládiového katalyzátora poskytuje amín 38. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje acetonidovú skupinu za vytvorenia amónium-chloridovej soli 39.

Schéma G

i) HCCCO₂Me, Et₂AICI, ii) H₂, Pt, iii) Bu₄NF, THF, iv) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, v) H₂, Pd, EtOAc, vi) 80 % kyselina octová.

Z 3-aminosteroidu, ktorý sa pripraví podľa ktorejkoľvek zo schém A až G vyššie, možno pripraviť mnoho sekundárnych a terciárnych aminozlúčenín podľa tohto vynálezu. Obrázky 1A a 1B znázorňujú niekoľko spôsobov prípravy, ktoré možno použiť na získanie 3-aminozlúčenín podľa tohto vynálezu. Napríklad možno použiť redukčnú amináciu na spojenie primárnych (pozri obrázok 1A) a sekundárnych (pozri obrázok 1B) amínov s aldehydmi (RC(=O)H) a ketónmi (RC(=O)R')· Aj keď to nie je znázornené na obrázkoch 1A alebo 1B, zlúčeniny môžu reagovať s dvoma aldehydovými skupinami, to jest dialdehydy všeobecného vzorca HC(=O)-R-C(=O)H s 3-aminosteroidmi za získania steroidov s heterocyklickými štruktúrami v polohe 3. Navyše (alebo alternatívne) možno použiť spôsoby redukčnej aminácie na pripojenie 3-ketosteroidov k heterocyklickým sekundárnym amínom. Prostredníctvom týchto spôsobov poskytuje tento vynález zlúčeniny, v ktorých môžu substituenty R¹ a R²spolu s atómom dusíka, ku ktorému sa obidva pripájajú, tvoriť heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka, ktoré prípadne obsahujú 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka a kremíka. Komerčné zdroje a odkazy na chemickú literatúru poskytujú tomu, kto má skúsenosti v odbore, prístup k mnohým aldehydom (vrátane díaldehydov) a ketónom, ktoré možno použiť na prípravu steroidných zlúčenín podľa tohto vynálezu. Spôsoby redukčnej aminácie sa opisujú napríklad v Synthesis, 1975, 135, J. Am. Chem. Soc., 93. 2897 (1971), M. Freifelder in Catalytic Hydrogenation in Organic Synthesis”, L. Wiley & Sons 1978, kapitola 10, Russ. Chem. Rev., 49, 14 (1980) a v odkazoch, ktoré sa tu citujú. Pozri tiež J. Chem. Soc. Perkin Trans, 1, 2527 (1998) a Synlett, 1999, 1781, rovnako tak ako odkazy, ktoré sa tu citujú.

Primárne (pozri obrázok 1A) a sekundárne (pozri obrázok 1B) amíny možno spájať s arylovými zlúčeninami (ArX) za vytvorenia mnohých arylsubstituovaných aminozlúčenín podľa tohto vynálezu. Komerčné zdroje a odkazy na chemickú literatúru poskytujú tomu, kto má bežné skúsenosti y odbore, prístup k mnohým arylovým zlúčeninám, ktoré možno použiť na prípravu steroidných zlúčenín podľa tohto vynálezu. Príklady spôsobov aminácie amínarylových zlúčenín možno nájsť v J. Org. Chem., 65, 1158 (2000) a v prehľade v Angew. Chem. Int. Ed., 37, 2046 (1998) a v odkazoch, ktoré sa tu citujú.

Spôsoby reakcií primárnych (pozri obrázok 1) a sekundárnych (obrázok 1B) amínov s acylchloridmi (RC,(=O)CI) a sulfonylchloridmi (RSO₂CI) za vytvorenia amidov respektíve sulfónamidov podľa tohto vynálezu sú dobre známe tomu, kto má skúsenosti v odbore organická chémia, v súvislosti s ďalšími aminozlúčeninami a rovnaké spôsoby možno použiť pre aminozlúčeniny podľa tohto vynálezu. Komerčné zdroje a odkazy na chemickú literatúru poskytujú tomu, kto má bežné skúsenosti v odbore, prístup k mnohým acylchloridom a sulfonylchloridom, ktoré možno použiť na prípravu steroidných zlúčenín podľa tohto vynálezu.

Spôsoby reakcií primárnych (pozri obrázok 1A) a sekundárnych (pozri obrázok 1B) amínov s izokyanátmi (RN=C=O) a izotiokyanátmi (RN=C=S) za vytvorenia močovín respektíve tiomočovín sú taktiež dobre známe tomu, kto má skúsenosti v odbore organická chémia, v súvislosti s ďalšími aminozlúčeninami a tieto spôsoby možno použiť pre aminozlúčeniny podľa tohto vynálezu. Komerčné zdroje a odkazy na chemickú literatúru poskytujú tomu, kto má bežné skúsenosti v odbore, prístup k mnohým izokyanátom a izotiokyanátom, ktoré možno použiť na prípravu steroidných zlúčenín podľa tohto vynálezu. Prehľadný článok Russ. Chem. Rev., 54, 249 (1985) a odkazy, ktoré sa tu citujú, opisujú príklady mnohých substituovaných močovín a tiomočovín, ktoré možno zahrnúť do tohto vynálezu.

Pri použití príslušne zvolených aldehydov, ketónov, arylových zlúčenín, acylchloridov, sulfonylchloridov, izokyanátov a/alebo izotiokyanátov môže teda ten, kto má skúsenosti v odbore, pripraviť steroidné zlúčeniny, v ktorých sa R¹ a R² volí z prípadov atóm vodíka a organických skupín s 1 až 30 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcich 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka a síry.

Steroidy podľa tohto vynálezu môžu mať kondenzované heterocyklické kruhy ako sú, avšak bez obmedzenia, kruhy pyrazolu, izoxazolu a pyrimidínu. Ako znázorňuje schéma H, zlúčenina 43 je príkladom kondenzovaného pyrazolu podľa tohto vynálezu, pre ktorý sa príprava východiskovej látky 40 opisuje v US patente 6 046 185. Spracovanie zlúčeniny 40 etyl-mravčanom v pyridíne za prítomnosti metanolátu sodného poskytuje hydroxymetylénový medziprodukt 41. Reakcia zlúčeniny 41 s hydrazínhydrátom v etanole poskytuje pyrazolovú zlúčeninu 42, ktorá pri spracovaní tetrabutylamónium-fluoridom v tetrahydrofuráne poskytuje zlúčeninu

43.

Schéma H

i) EtO₂CH, NaOMe, pyridín, ii) N₂H₄, EtOH, iii) Bu₄NF₃, THF.

Ako znázorňuje schéma I, možno medziprodukty, ako je zlúčenina 41, previesť na izoxazoly, ktorých príkladom je zlúčenina 44. Spracovanie hydroxymetylénového medziproduktu 41 hydroxidom amónnym v pyridíne s ďalšou deprotekciou hydroxylov v polohách 6 a 7 tetrabutylamónium-fluoridom v tetrahydrofuráne poskytuje izoxazol

44.

Schéma I

i) HONH.HCI, pyridín, ii) Bu₄NF, THF.

Ako znázorňuje schéma J, medziprodukty, ako je zlúčenina 41, možno previesť na pyrimidíny, ktorých príkladom je zlúčenina 44a. Spracovanie hydroxymetylénového medziproduktu 41 hydrochloridom benzamidínu a hydroxidom draselným v etanole s následnou deprotekciou hydroxylov v polohách 6 a 7 tetrabutylamónium-fluoridom v tetrahydrofuráne poskytuje pyrimidín 44a.

Schéma J

i) hydrochlorid benzamidínu, KOH, EtOH, ii) BiuNF, THF.

Pokračovaním cez zlúčeniny s ketónovou substitúciou v polohe 3 a substitúciou =CHOH v polohe uhlíka 2 tento vynález teda poskytuje prístup k mnohým zlúčeninám, v ktorých R¹ môže byť dvojatómový alebo trojatómový reťazec pripojený k uhlíku 2, takže -N-R¹- tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry s kruhom A.

Reakciu 3-ketosteroidov s hydroxylamínom a pyridínom možno použiť na získanie steroidných oxímov podľa toho vynálezu. Steroidný oxím má R² ako priamu väzbu k atómu uhlíka 3, čím poskytuje dvojitú väzbu medzi atómom uhlíka 3 a atómom dusíka a R¹ je hydroxylová skupina. Primárne amíny možno oxidovať na nitrozlúčeniny, napríklad dimetyldioxiránom. R¹ a R² môžu byť teda atómy kyslíka. Spôsoby vytvorenia nitroskupiny sa opisujú v J. Org. Chem., 54. 5783 (1989). Reakcia 3-ketónov s dimetylhydrazínom poskytuje Ν,Ν-dimetylhydrazónové steroidy podľa tohto vynálezu, v ktorých R² je priama väzba k atómu 3 a R¹ je NMe₂. Spracovanie dimetylhydrazónových steroidov hydräzinom poskytuje hydräzónové steroidy podľa tohto vynálezu. Opis spôsobov tvorby Ν,Ν-dimetylhydrazónov a hydrazónov možno nájsť v J. Org. Chem., 31, 677 (1966). Primárne amíny môžu tiež reagovať spôsobom známym v odbore so sulfónovými kyselinami/kyselinou sírovou a estermi za získania sulfamátových zlúčenín, to jest steroidov, v ktorých je atóm 3 viazaný na -N-SO3-R a R je atóm vodíka alebo organická skupina s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúca 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka a síry.

D. Farmaceutické prípravky

Tento vynález poskytuje farmaceutický alebo veterinárny prípravok (ďalej iba farmaceutický prípravok) obsahujúci zlúčeninu všeobecného vzorca 1, ako sa opisuje vyššie, v zmesi s farmaceutický prijateľným nosičom. Tento vynález ďalej poskytuje prípravok, prednostne farmaceutický prípravok, obsahujúci účinné množstvo zlúčeniny opísanej vyššie spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.

Farmaceutické prípravky podľa tohto vynálezu môžu byť v akejkoľvek forme, ktorá umožňuje podávanie prípravku pacientovi. Napríklad môže byť prípravok vo forme tuhej, kvapalnej alebo plynnej látky (aerosól). Zvyčajné spôsoby podávania zahrňujú bez obmedzenia perorálne, lokálne, parenterálne, sublingválne, rektálne, vaginálne, očné a intranazálne podávanie. Pojem parenterálne, ako sa tu používa, zahrňuje subkutánne injekcie, intravenózne, intramuskulárne, intrasternálne injekcie alebo infúzne spôsoby. Farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu sa formuluje takým spôsobom, aby účinné zložky, ktoré obsahuje, boli pri podaní prípravku pacientovi biologicky dostupné. Prípravky, ktoré sa podávajú pacientovi, sú vo forme jednej alebo viac dávkových jednotiek, kde napríklad tableta môže byť jednotlivá dávková jednotka a nádobka so zlúčeninou všeobecného vzorca 1 v aerosóle môže predstavovať niekoľko dávkových jednotiek.

Látky použité pri príprave farmaceutického prípravku by mali byť farmaceutický čisté a netoxické v použitých množstvách. Tomu, kto má bežné skúsenosti v odbore, bude zrejmé, že optimálna dávka účinnej zložky (účinných zložiek vo farmaceutickom prípravku závisí od mnohých faktorov. Príslušné faktory zahrňujú bez obmedzenia typ subjektu (napríklad človek), konkrétnu formu účinnej zložky, spôsob podávania a použitý prípravok.

Všeobecne farmaceutický prípravok obsahuje (tam, kde sa použije neurčitý člen tu aj v celom opise, jeden alebo viackrát) jednu účinnú zložku podľa všeobecného vzorca 1, ako sa tu opisuje, v zmesi s jedným alebo viacerými nosičmi. Nosič (nosiče) môže byť (môžu byť) vo forme častíc, takže prípravky sú napríklad vo forme tablety alebo prášku. Nosič (nosiče) môže byť (môžu byť) kvapalný (kvapalné) a prípravky sú napríklad perorálny sirup alebo injekčná kvapalina. Navyše nosič (nosiče) môže byť (môžu byť) plynný (plynné) na získanie aerosólovej zmesi použiteľnej napríklad pri inhalačnom podávaní.

Prípravok zamýšľaný na perorálne podávanie je prednostne v tuhej alebo kvapalnej forme a polotuhé, polokvapalné suspenzné a gélové formy sa tu zahrňujú do foriem uvažovaných buď ako tuhé alebo ako kvapalné.

Tuhý prípravok na perorálne podávanie možno vytvoriť vo forme prášku, granuly, stlačenej tablety, pilulky, tobolky, žuvacej gumy, oblátky alebo podobne. Takýto tuhý prípravok zvyčajne obsahuje jeden alebo viacero inertných zrieďovacích prostriedkov alebo požívateľných nosičov. Navyše možno použiť jednu alebo viacero z nasledujúcich pomocných látok: spojivá, ako je karboxymetylcelulóza, etylcelulóza, mikrokryštalická celulóza alebo želatína, pomocné látky, ako je škrob, laktóza alebo dextríny, rozvoľňovadlá, ako je kyselina alginová, alginát sodný, Primogel, kukuričný škrob a podobne, mazivá, ako je stearát horečnatý alebo Sterotex, klzné látky, ako je koloidný oxid kremičitý, sladidlá, ako je sacharóza alebo sacharín, ochucovadlá, ako je mätová príchuť, metyl-salicylát alebo pomarančová príchuť a farbivá.

Pokiaľ je prípravok vo forme tobolky, napríklad želatínovej tobolky, môže navyše k látkam typu opísaného vyššie obsahovať kvapalný nosič, ako je polyetylénglykol, cyklodextrín alebo mastný olej.

Prípravok môže byť vo forme kvapaliny, napríklad elixíru, sirupu, roztoku, emulzie alebo suspenzie. Kvapalina môže napríklad slúžiť na perorálne podávanie alebo na injekčné podávanie. Pri určení na perorálne podávanie obsahuje preferovaný prípravok navyše k zlúčeninám podľa tohto vynálezu jedno alebo viacero sladidiel, konzervačných prostriedkov, farbív a prostriedkov na zlepšenie chuti. V prípravku určenom na injekčné podávanie môže byť jedna alebo viac povrchovo aktívnych látok, konzervačných prostriedkov, namáčacích prostriedkov, dispergačných prostriedkov, suspenzačných prostriedkov, pufrov, stabilizátorov a izotonických prostriedkov.

Kvapalný farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu, pokiaľ je vo forme roztokov, suspenzií alebo v podobnej forme, môže zahrňovať jednu alebo viacero z nasledujúcich pomocných látok: sterilné zrieďovacie prostriedky, ako je voda na injekcie, fyziologický roztok, prednostne fyziologický roztok, Ringerov roztok, izotonický roztok chloridu sodného, nevysychavé oleje, ako sú syntetické monoalebo diglyceridy, ktoré môžu slúžiť ako rozpúšťadlo alebo suspenzačné prostredie, polyetylénglykoly, glycerol, cyklodextrín, propylénglykol alebo ďalšie rozpúšťadlá, protibakteriálne prostriedky, ako je benzylalkohol alebo metylparabén, antioxidačné prostriedky, ako je kyselina askorbová alebo nátriumbisulfit, chelatotvorné prostriedky, ako je kyselina etyléndiamíntetraoctová, pufry, ako sú acetáty, citráty alebo fosfáty a prostriedky na úpravu osmotického tlaku, ako je chlorid sodný alebo dextróza. Parenterálny prípravok možno uzavrieť do ampúl, jednorazových injekčných striekačiek alebo fľaštičiek s viacerými dávkami zhotovených zo skla alebo plastu. Preferovanou pomocnou látkou je fyziologický roztok. Injekčný farmaceutický prípravok je prednostne sterilný. Kvapalný prostriedok uvažovaný na parenterálne alebo perorálne podávanie by mal obsahovať množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca 1, ktorým možno dosiahnuť vhodné dávkovanie. Zvyčajne je toto množstvo aspoň 0,01 % zlúčeniny podľa tohto vynálezu v prípravku. Pre prípravok na perorálne podávanie sa toto množstvo môže meniť od 0,1 % do zhruba 80 % hmotnosti prípravku. Preferované perorálne prípravky obsahujú medzi zhruba 4 % a zhruba 50 % účinnej zlúčeniny všeobecného vzorca 1. Preferované prostriedky a prípravky podľa tohto vynálezu sa pripravia takým spôsobom, že jedna parenterálna dávková jednotka obsahuje medzi 0,01 % a 2 % hmotnosti účinnej látky.

Farmaceutický prípravok možno uvažovať na lokálne podávanie a v tomto prípade môže nosič vo vhodných prípadoch zahŕňať bázu roztoku, emulzie, masti alebo gélu. Táto báza môže napríklad zahŕňať jednu z nasledujúcich látok: prírodná vazelína, lanolín, polyetylénglykoly, včelí vosk, minerálny olej, zried’ovacie prostriedky, ako je voda a alkohol a emulgátory a stabilizátory. Farmaceutický prípravok na lokálne podávanie môže obsahovať zahusťovacie prostriedky. V prípade potreby transdermálneho podávania môže prípravok zahŕňať transdermálnu náplasť alebo zariadenie na ionoforézu. Zvyčajné prípravky môžu obsahovať koncentráciu zlúčeniny všeobecného vzorca 1 od zhruba 0,1 % do zhruba 10 % (hmotnosť na jednotku objemu).

Prípravok možno uvažovať na rektálne podávanie napríklad vo forme čapíka, ktorý sa rozpúšťa v rekte a uvoľňuje liek. Prípravok na rektálne podávanie môže obsahovať olejovitú bázu ako vhodnú nedráždivú pomocnú látku. Tieto bázy zahŕňajú bez obmedzenia lanolín, kakaové maslo a polyetylénglykol.

Prípravok môže zahŕňať rôzne látky, ktoré pozmeňujú fyzikálnu formu tuhej alebo kvapalnej dávkovej jednotky. Napríklad prípravok môže zahŕňať látky, ktoré tvoria obal obklopujúci účinné zložky. Látky, ktoré tvoria tento obal, sú zvyčajne inertné a možno ich voliť napríklad ako cukor, šelak a ďalšie enterické poťahovacie prostriedky. Alternatívne môžu byť účinné zložky zapuzdrené v želatínovej tobolke.

Prípravok v tuhej alebo kvapalnej forme môže zahŕňať prostriedok, ktorý viaže účinnú zložku (účinné zložky) a tak napomáha pri dodávke účinných zložiek. Vhodné prostriedky, ktoré môžu pôsobiť týmto spôsobom, zahŕňajú monoklonálne alebo polyklonálne protilátky, proteíny alebo lipozómy.

Farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu môže obsahovať plynné dávkové jednotky, napríklad môže byť vo forme aerosólu. Pojem aerosól sa používa na označenie rôznych systémov od takých, ktoré majú koloidnú povahu, k systémom predstavujúcim tlakové balenia. Dodávka sa môže zaisťovať skvapalneným alebo stlačeným plynom alebo vhodným čerpadlovým systémom, ktorý dodáva účinné zložky. Aerosóly zlúčenín podľa tohto vynálezu možno dodávať jednofázovým, dvojfázovým alebo trojfázovým systémom na zaistenie dodávky účinnej zložky (účinných zložiek). Zariadenie na dodávku aerosólu zahrňuje potrebnú nádobu, spúšťacie zariadenie, ventily, čiastkové nádoby, medzikusy a podobne, ktoré môžu spoločne tvoriť súpravu. Preferované aerosóly môže určiť ten, kto má skúsenosti v odbore bez zbytočného experimentovania.

Farmaceutický prostriedok podľa tohto vynálezu, či už v tuhej, kvapalnej alebo plynnej forme obsahuje jeden alebo viacero farmakologických prostriedkov používaných pri liečení zápalu (vrátane astmy, alergie, reumatoidnej artritídy, sklerózy multiplex, atď.), proliferačných porúch (karcinómy), chorôb liečiteľných reguláciou vápnika (vrátane hypertenzie, srdcových arytmií, atď.) a získaného syndrómu imunitnej nedostatočnosti (AIDS).

Farmaceutické prípravky možno pripraviť spôsobmi dobre známymi v odbore farmácie.

Prípravok uvažovaný na podávanie v injekcii možno získať zmiešaním zlúčeniny všeobecného vzorca 1 s vodou tak, aby sa vytvoril roztok. Možno pridať povrchovo aktívnu látku na uľahčenie vzniku homogénneho roztoku alebo suspenzie. Povrchovo aktívne látky sú zlúčeniny, ktoré interagujú nekovalentným spôsobom so zlúčeninou všeobecného vzorca 1 tak, aby sa uľahčilo vytvorenie roztoku alebo homogénnej suspenzie účinnej látky vo vodnom systéme pre dodávku.

E. Biologické pôsobenie

Zlúčeniny všeobecného vzorca 1, ktoré sa tu opisujú, alebo prípravky obsahujúce jednu alebo viacero z týchto zlúčenín a farmaceutický prijateľný nosič, zried’ovací prostriedok alebo pomocnú látku, možno použiť pri spôsobe liečenia alebo prevencie zápalového stavu alebo ochorenia u pacienta, pri ktorom tento spôsob zahrňuje podávanie pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu zápalového stavu alebo ochorenia pacienta.

Zápalový stav alebo choroba môže zahŕňať respiračný zápal (napríklad ak je respiračnou chorobou astma alebo ak je respiračnou chorobou chronické obštrukčné pľúcne ochorenie alebo ak je respiračnou chorobou emfyzém), zápalový stav môže byť autoimunitným stavom alebo chorobou, zápalový stav alebo ochorenie môže byť chorobou lupus erythematosus, zápalový stav alebo choroba môže zahŕňať akútny alebo chronický zápal kostných a/alebo chrupavkových kompartmentov kĺbov, zápalový stav alebo ochorenie môže byť artritída zvolená z prípadov reumatoidná artritída, dnavá artritída alebo juvenilná reumatoidná artritída, zápalový stav alebo ochorenie môže byť chorobou centrálneho nervového systému, stav alebo ochorenie môže byť sprevádzané leukocytárnou infiltráciou, stav alebo ochorenie môže byť sprevádzané opuchom, stav alebo ochorenie môže byť sprevádzané ischemickým reperfúznym poškodením, stav alebo poškodenie môže byť sprevádzané zvýšenými hladinami zápalových cytokínov (napríklad keď je týmto zápalovým cytokínom interleukín IL-4, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-5, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-10, alebo keď je týmto cytokínom IL-13, alebo keď je týmto cytokínom IL-9, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-1, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-2, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-6, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-18, alebo keď je týmto zápalovými cytokínom IL-3, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-8, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IL-12, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom TNF-α, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom TNF-β, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom GM-CSF, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom IFN-gama, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom LTB4, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom člen cysteinyl leukotriénovej skupiny, alebo keď sa tento zápalový cytokín reguluje aktiváciou normálnych exprimovaných a uvoľňovaných T buniek (RANTES), alebo keď je týmto protizápalovým cytokínom eotaxín-1,2 alebo 3, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom makrofágový zápalový protein (MIP)-1a, alebo keď je týmto zápalovým cytokínom monocytárny chemoatraktívny proteín-1,2,3 alebo 4), stav alebo ochorenie môže byť sprevádzané pozmenenými hladinami zápalových adhezívnych molekúl (napríklad keď je touto adhezívnou molekulou adhezívna molekula vaskulárnej bunky (VCAM-1 alebo 2), keď je touto adhezívnou molekulou intracelulárna adhezívna molekula (ICAM-1 alebo 2), keď je touto adhezívnou molekulou veľmi neskorý antigén-4 (Vl_A-4), keď je touto adhezívnou molekulou veľmi neskorý antigén-1 súvisiaci s funkciou leukocytov, keď je touto adhezívnou molekulou selektín), zápalový stav pri ochorení môže byť skleróza multiplex, zápalový stav alebo ochorenie môže byť pľúcna sarkoidóza, zápalový stav alebo ochorenie môže byť očný zápal alebo alergia, zápalový stav alebo ochorenie môže byť alergická rinitída, zápalový stav alebo ochorenie môže byť zápalové črevné ochorenie, napríklad Crohnova choroba alebo ulceratívna kolitída), zápalový stav alebo ochorenie môže byť zápalové kožné ochorenie (napríklad psoriáza alebo dermatitída), zápalový stav alebo ochorenie môže byť reakcia štepu proti hostiteľovi, zápalový stav alebo ochorenie môže byť vaskulárne ochorenie (napríklad vaskulitída), zápalový stav alebo ochorenie môže byť aterosklerotická choroba.

Ďalej tento vynález poskytuje spôsob liečenia alebo prevencie ochorenia alebo stavu pacienta, pri ktorom toto ochorenie alebo stav súvisí s patologickými stavmi, ktoré zahŕňajú infiltráciu leukocytov a tento spôsob spočíva v podávaní pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu choroby alebo stavu súvisiaceho s patologickými stavmi zahrňujúcimi infiltráciu leukocytmi.

Ďalej tento vynález poskytuje spôsob liečenia alebo prevencie astmy u pacienta zahrňujúci podávanie tomuto pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu astmy u tohto pacienta.

Ďalej tento vynález poskytuje spôsob liečenia alebo prevencie alergie u pacienta zahrňujúci podávanie tomuto pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu alergie u tohto pacienta.

Pri spôsobe podľa tohto vynálezu zlúčenina všeobecného vzorca 1 alebo prípravok obsahujúci jednu alebo viacero zlúčenín všeobecného vzorca 1 a farmaceutický prijateľný nosič, zried’ovací prostriedok alebo pomocnú látku môže, avšak nemusí, dosahovať jeden alebo viacero z nasledujúcich požadovaných výsledkov u pacienta, ktorému sa podáva zlúčenina všeobecného vzorca 1, ako sa definuje vyššie, alebo prípravok obsahujúci jednu z týchto zlúčenín a farmaceutický prijateľný nosič, zrieďovací prostriedok alebo pomocnú látku:

1. inhibícia infiltrácie leukocytmi (napríklad neutrofilmi, eozinofilmi, atď.),

2. inhibícia aktivácie leukocytov,

3. pozmenenie pomeru lymfocytov (napríklad buniek TH1 oproti TH2),

4. inhibícia chemotaxie leukocytov,

5. inhibícia tvorby a/alebo uvoľňovania TNF-a,

6. inhibícia tvorby a/alebo uvoľňovania chemokínu (napríklad eotaxín, atď.),

7. inhibícia tvorby, uvoľňovania a/alebo funkcie adhezívnej molekuly (napríklad VCAM, VLA-4, atď.),

8. inhibícia edému,

9. inhibícia tvorby a/alebo uvoľňovania interleukínového cytokínu (napríklad IL1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18),

10. inhibícia uvoľňovania zápalového mediátora (napríklad leukotriénov, tryptázy, adenozínu, atď.).

11. inhibícia uvoľňovania histamínu,

12. potlačenie parametrov astmy a

13. potlačenie parametrov alergie.

Zlúčeniny všeobecného vzorca 1, ktoré sa tu opisujú (to jest zlúčeniny všeobecného vzorca 1 alebo zlúčeniny podľa tohto vynálezu), alebo prípravky obsahujúce jednu alebo viacero z týchto zlúčenín, farmaceutický prijateľný nosič, zrieďovací prostriedok alebo pomocnú látku, možno použiť pri spôsobe liečenia alebo prevencie proliferačnej poruchy u pacienta, pri ktorom sa tomuto pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, podáva množstvo zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu proliferačnej poruchy tohto pacienta. Proliferačné poruchy, ktoré sa tu uvažujú, zahrňujú bez obmedzenia všetky leukémie a solidné tumory, ktoré citlivo reagujú na diferenciáciu alebo apoptózu pri prerušení svojho bunkového cyklu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca 1, ktoré sa tu opisujú (to jest zlúčeniny všeobecného vzorca 1 alebo zlúčeniny podľa tohto vynálezu), alebo prípravky obsahujúce jednu alebo viacero z týchto zlúčenín, farmaceutický prijateľný nosič, zrieďovací prostriedok alebo pomocnú látku, možno použiť pri spôsobe liečenia alebo prevencie chorôb liečiteľných reguláciou vápnika u pacienta, pri ktorom tento spôsob zahrňuje podávanie pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu tejto choroby pacienta. Pojem choroba liečiteľná reguláciou vápnika zahrňuje bez obmedzenia srdcovú arytmiu, atriálnu fibriláciu, akútne koronárne syndrómy, hypertenziu, ischemické perfúzne poškodenie, mŕtvicu, epilepsiu, demyelinizačné choroby, ako je skleróza multiplex, bolesť, epileptický stav, ateroskleróza a diabetes.

Zlúčeniny všeobecného vzorca 1, ktoré sa tu opisujú (to jest zlúčeniny všeobecného vzorca 1 alebo zlúčeniny podľa tohto vynálezu), alebo prípravky obsahujúce jednu alebo viacero z týchto zlúčenín, farmaceutický prijateľný nosič, zrieďovací prostriedok alebo pomocnú látku, možno použiť pri spôsobe liečenia alebo prevencii získaného syndrómu nedostatočnosti (AIDS) u pacienta, pri ktorom tento spôsob zahrňuje podávanie pacientovi, ktorý potrebuje toto liečenie, množstva zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu, ktoré je účinné na liečenie alebo prevenciu získaného syndrómu imunitnej nedostatočnosti u tohto pacienta. Pojem získanej imunitnej nedostatočnosti, ako sa tu používa, znamená infekciu vírusom typu 1 ľudskej imunitnej nedostatočnosti a zahrňuje bez obmedzenia pridružené komplikácie, ako je komplex demencie pri syndróme získanej imunitnej nedostatočnosti a neurologické syndrómy pri získanej imunitnej nedostatočnosti.

Spôsob podľa tohto vynálezu možno teda použiť pri liečení zápalu vrátane akútneho a chronického zápalu, rovnako tak ako určitých proliferačných porúch (karcinómu, chorôb liečiteľných reguláciou vápnika a AIDS). Pojem zápal, ako sa tu používa, zahrňuje bez obmedzenia, ankylóznu spondylitídu, artritídu (kde tento pojem zahrňuje 100 typov reumatoických ochorení), astmu, chronické obštrukčné pľúcne ochorenie, alergiu, alergickú rinitídu, Crohnovu chorobu, syndróm fibromyalgie, dnu, zápaly mozgu (vrátane sklerózy multiplex, demencie pri AIDS, Lymskej encefalopatie, herpes encefalitis, Creutzfeld-Jakobovej choroby a mozgovej toxoplazmózy), emfyzém, zápalové črevné ochorenie, syndróm dráždivého tračníka, ischemické reperfúzne poškodenie, atopickú dermatitídu, juvenilnú erytematóznu pľúcnu sarkoidózu, Kawasakiho chorobu, osteoartritídu, panvové zápalové ochorenie, psoriatickú artritídu (psoriázu), reumatoidnú artritídu, psoriázu, transplantáciu tkanív/orgánov, reakciu štepu proti hostiteľovi, sklerodermu, spondyloartropatiu, systémový lupus erythematosus, pľúcnu sarkoidózu, vaskulitídu, aterosklerózu, kardiomyopatiu, autoimunitnú myokarditídu a ulceratívnu kolitídu.

Spôsob podľa tohto vynálezu poskytuje podávanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I vrátane ich solí, prípravku, atď. Skutočné množstvo, ktoré sa tu zahrňuje pojmom terapeuticky účinné množstvo” závisí od spôsobu podávania, typu teplokrvného živočícha, ktorý sa podrobuje liečeniu a telesných charakteristík uvažovaného živočícha. Tieto faktory a ich vzťah ku stanoveniu tohto množstva sú dobre známe tomu, kto má prax v lekárskych odboroch. Toto množstvo a spôsob podávania možno upraviť na dosiahnutie optimálnej účinnosti, avšak závisí od takých faktorov, ako je telesná hmotnosť, diéta, súčasné užívanie iných liekov a ďalších faktorov, ktoré rozpozná ten, kto má skúsenosti v lekárskych odboroch.

Účinné množstvo zlúčeniny alebo prípravku podľa tohto vynálezu je dostatočné na liečenie zápalu, proliferačnej choroby, chorôb liečiteľných reguláciou vápnika alebo AIDS u teplokrvného živočícha, ako je človek. Spôsoby podávania účinných množstiev protizápalových prostriedkov sú dobre známe v odbore a zahrňujú podávanie inhalačných, perorálnych a parenterálnych foriem. Tieto dávkové formy zahrňujú, avšak bez obmedzenia, parenterálne roztoky, tablety, tobolky, implantované formy s neprerušovaným uvoľňovaním a systémy transdermálnej dodávky alebo inhalačné dávkové systémy používajúce inhalátory suchého prášku alebo tlakové inhalačné zariadenie pre viac dávok.

Dávkové množstvo a frekvencia sa volí na vytvorenie účinnej hladiny bez škodlivých účinkov. Všeobecne bude v rozmedzí zhruba od 0,001 do 100 mg/kg/deň a zvyčajne od 0,01 do 10 mg/kg/deň pri perorálnom intravenóznom podaní. Rozmedzie dávok bude tiež zvyčajne od 0,0001 do 10 mg/kg/deň pri intranazálnom podaní alebo pri podaní inhaláciou.

Zlúčeniny všeobecného vzorca 1 vrátane zlúčenín použitých pri spôsoboch a prípravkoch, ktoré sa definujú vyššie, možno pripraviť podľa schém poskytnutých v nasledujúcich príkladoch. Nasledujúce príklady sa ponúkajú na ilustráciu a nie ako obmedzenie.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Pokiaľ sa neuvádza inak, možno okamžitú chromatografiu a stĺpcovú chromatografiu uskutočniť na silikagéli Merck 60. Okamžitú chromatografiu možno uskutočniť podľa spôsobu opísaného v Purification of Laboratory Chemicals”, 3. vydanie, Butterworth-Heinemann Ltd., Oxford (1988), red. D. D. Perrin a W. L. F. Armatego, s. 23. Stĺpcová chromatografia sa týka spôsobu, pri ktorom prietok elučného prostriedku náplňou prebieha pôsobením váhy. Vo všetkých prípadoch možno alternatívne použiť okamžitú chromatografiu a radiálnu chromatografiu. Radiálna chromatografia sa používa na silikagéli Chromatotron Model # 7924T (Harrison Reserch, Palo Alto, California). Pokiaľ sa neuvádza inak, získajú sa opisované hodnoty R_f chromatografiou na tenkej vrstve na silikagéli 60 F₂54 (Merck KGaA, 64271, Darmstadt, Germany). Soľanka znamená nasýtený roztok chloridu sodného.

Chemické reakčné zložky a činidlá sa získajú, pokiaľ sa neuvádza inak, zo štandardných chemických zdrojov dodávky, ako je Aldrich (Milwaukee, WI, www.aldrich.sial.com), EM Industries, Inc. (Hawthorne, NY, www.emscience.com), Fisher Scientific Co. (Hampton, NH, www.fischer1.com) a Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH, www.lancaster.co.uk). Sulfo-NHS-biotín pochádza od Pierce (Rockford, IL,www.piercenet.com). Živica MP-TsOH, živica PS-DIEA, živica PStrisamin a živica PS-benzaldehyd pochádza od Argonaut Technologies (San Carlos, CA, www.agrotech.com). Plyny pochádzajú od Praxair (Vancouver, B. C.). Bunkové línie, pokiaľ sa neuvádza inak, pochádzajú z verejných a komerčných zdrojov, napríklad American Tissue Culture Collection (ATCC, Rockville, MD).

Príklady spôsobov prípravy

Príklad 1

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-etylidénový steroid

Zlúčenina 49, reprezentatívna zlúčenina tohto vynálezu, sa pripraví podľa schémy 1. Použitím podobného spôsobu možno získať akýkoľvek počet zlúčenín príbuzných zlúčenine 49. Východiskovú látku, zlúčeninu 45, možno pripraviť podľa spôsobu opísaného v US patente 6 046 185. Olefinácia ketónu 45 sa uskutoční etyltrifenylfosfónium-bromidom a draselnou soľou terc-butanolu v toluéne. Spracovanie 3p-hydroxylovej zlúčeniny 46 ZnNe-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3a-azidovú zlúčeninu 47. Redukcia azidu lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje amin 48. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vodou odstráni acetonidovú skupinu a vytvára amóniumchloridovú soľ 49.

Schéma 1

i) CH3CH₂PPh3Br, .KO’Bu, toluén, ii) ZnN6-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iii) LÍAIH4, Et₂O, iv) HCI, THF, voda.

Príprava zlúčeniny 46

Roztok draselnej soli terc-butanolu (0,24 g, 2,0 mmol), etyltrifenylfosfínbromidu (0,75 g, 2,0 mmol) a toluénu (2,5 ml) sa mieša pri teplote miestnosti pod atmosférou argónu. Po 1 h sa tmavočervený roztok ochladí na ľade a pridá sa ketón (184 mg, 0,508 mmol) a výsledný roztok sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po miešaní cez noc sa reakcia ukončí prídavkom 10 ml vody, zmes sa zriedi 60 ml etylacetátu, vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa premyje 2 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia stĺpcovou chromatografiou elúciou zmesou etylacetát/hexán 1:1 poskytuje 171 mg (90 %) zlúčeniny 46 vo forme bezfarebného filmu.

Príprava zlúčeniny 47

DIAD (0,44 ml, 2,14 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 10 min k roztoku 3p-hydroxylovej zlúčeniny 46 (400 mg, 1,07 mmol), ZnN₆-2py (246 mg, 0,80 mmol), trifenylfosfin u (560 mg, 2,14 mmol) a toluénu (10,7 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 4 h sa reakčná zmes privedie na stĺpec silikagélu s 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 20 % zmesou etylacetát/hexán za získania 422 mg (99 %) zlúčeniny 47 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 48

Lítiumalumíniumhydrid (42 mg, 1,04 mmol) sa pridá k ľadovo chladnému roztoku azidu 47 (415 mg, 1,04 mmol) v 5,2 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 2 h sa roztok ochladí v ľade, zriedi 25 ml dietyléteru a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 2 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa tvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 50 ml etylacetátu, premyje 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje na stĺpci silikagélu spracovanom 1 % zmesou trietylamín/dichlórmetán a premytím 5 % roztokom metanol/dichlórmetán. Surová látka sa dodáva na stĺpec v dichlórmetáne, eluuje 5 % zmesou metanol/dichlórmetán a potom zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín 95:5:2 za získania bielej peny, ktorá podľa nukleárne magnetickej rezonancie ¹H NMR obsahuje stopy trietylamínu. Získaná látka sa vyberie 50 ml hexánu, premyje sa 2 x 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 322 mg (83 %) zlúčeniny 48 vo forme bielej tuhej peny.

Príprava zlúčeniny 49

Roztok 3a-aminozlúčeniny 48 (317 mg, 0,850 mmol), 4 M roztok kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (255 μΙ, 1,02 mmol), tetrahydrofurán (13,6 ml) a voda (3,4 ml) sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Roztok sa odparí do sucha, trituruje 3 x 10 ml acetónu, po každej triturácii sa acetón odparí. Odparenie poskytne 301 mg (96 %) zlúčeniny 49 vo forme tuhej bielej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priame vstrekovanie, elektrosprej +ve, 10 mM octan amónny v zmesi voda/acetonitril 4:1) 334,16, C₂₁H₃₆NO2.

Príklad 2

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-metylidénový steroid

Ďalší príklad alkénov príbuzných zlúčenine 49 ukazuje schéma 2. Olefinácia ketónu 45 s použitím metyltrifenylfosfónium-bromidu a draselnej soli terc-butanolátu v tetrahydrofuráne poskytuje 17-metylidénovú zlúčeninu 50. Azidácia pomocou ZnN₆-2py, trifenylfosfínu a DIAD v toluéne poskytuje 3a-azidovú zlúčeninu 51. Redukcia lítiumalumíniumhydridom v tetrahydrofuráne poskytuje 3a-aminozlúčeninu

52. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstraňuje acetonidovú chrániacu skupinu a vytvára amónium-acetátovú soí 53. Alternatívne sa zlúčenina 52 spracuje kyselinou chlorovodíkovou v acetonitrile a vode za získania hydrochloridu 54.

Schéma 2 o

HO’ ii

OH

i) CH₃PPh₃Br, KO’Bu, THF, ii) ZnN₆ 2py, Ph₃P, DIAD, toluén, iii) LiAIH₄, Et₂O, iv) 80 % kyselina octová alebo voda, MeCN.

Príprava zlúčeniny 50

Roztok draselnej soli terc-butanolu (2,0 g, 16,9 mmol), metyltrifenylfosfóniumbromidu (6,0 g, 16,8 mmol) a TJ ml tetrahydrofuránu sa mieša pri teplote miestnosti pod atmosférou argónu. Po 1 h sa pridá ketón 45 (2,00 g, 5,52 mmol) k žltému roztoku a výsledný roztok sa varí pod spätným chladičom počas 1 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, zmes sa zriedi 100 ml etylacetátu, organická vrstva sa oddelí a premyje 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia stĺpcovou chromatografiou elúciou zmesou etylacetát/hexán 1:1 poskytuje 1,90 g (95 %) zlúčeniny 50 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 51

DIAD (0,85 ml, 4,10 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 15 min pri teplote miestnosti do roztoku 3p-hydroxylovej zlúčeniny 50 (739 mg, 2,05 mmol), ZnN6-2py (473 mg, 1,54 mmol), trifenylfosfínu (1,075 g, 4,10 mmol) a toluénu (20 ml) pod atmosférou argónu. Po 4 h sa reakčná zmes privedie na stĺpec silikagélu naplnený 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 20 % zmesou etylacetát/hexán za získania 743 mg (94 %) zlúčeniny 51 vo forme bielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 52

Lítiumalumíniumhydrid (77 mg, 1,93 mmol) sa pridá do ľadovo vychladeného roztoku 3a-azidu 51 v 5 ml tetrahydrofuránu a 5 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 4 h sa roztok vychladí v ľade, zriedi sa 25 ml dietyléteru a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 5 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 50 ml etylacetátu, premyje 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje na silikagéli naplnenom 1 % zmesou trietylamín/dichlórmetán a premytom 5 % zmesou metanol/dichlórmetán. Surová látka sa dodá v dichlórmetáne, eluuje sa 5 % zmesou metanol/dichlórmetán a potom zmesou dichlórmetán: metanoktrietylamín 95:5:2 za získania 636 mg (92 %) zlúčeniny 52 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 53

Roztok 3a-amínu 52 (287 mg, 0,799 mmol) a 10 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa odparí za získania bielej peny. Pridá sa acetón (10 ml) a roztok sa vystaví pôsobeniu ultrazvuku do rozpustenia látok a potom sa odparí. Pridá sa ďalších 10 ml acetónu, roztok sa vystaví pôsobeniu ultrazvuku a odparí sa za získania 301 mg (99 %) zlúčeniny 53 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi vody a acetonitrilu 4:1) 320,19, C20H34NO2.

Príprava zlúčeniny 54

M roztok kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne sa pridá k roztoku amínu 52 v 1 ml acetonitrilu a 50 μΙ vody. Výsledná kaučukovitá tuhá látka sa zriedi 2 ml acetonitrilu a energicky mieša, pokiaľ sa vytvára tuhá látka. Tuhá látka sa odfiltruje a vysuší za získania 50 mg (63 %) zlúčeniny 54.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi vody a acetonitrilu 4:1) 320,19 C20H34NO2.

Príklad 3

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-metylidénový steroid (alternatívny spôsob prípravy)

Medziprodukt 52 sa tiež pripraví alternatívnym spôsobom znázorneným v schéme 3. Azidácia alkoholu 45 ZnN₆-2py, PPh₃ a DIAD v toluéne poskytuje 3aazidovú zlúčeninu 55. Hydrogenácia azidu za prítomnosti paládia na uhlíku ako katalyzátora poskytuje amín 56. Olefinácia zlúčeniny 56 metyltrifenylfosfóniumbromidom a draselnou soľou terc-butanolu v tetrahydrofuráne poskytuje 17metylidénovú zlúčeninu 52.

Schéma 3

i) ZnN_s-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, ii) H₂, Pd, EtOAc, iii) CH₃PPh₃Br, KO'Bu, THF.

Príprava zlúčeniny 55

DIAD (2,4 ml, 11,6 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 20 min k roztoku 3p-hydroxylovej zlúčeniny 45 (2,108 g, 5,81 mmol), ZnN₆-2py (1,34 g, 4,36 mmol), trifenylfosfínu (3,05 g, 11,6 mmol) a toluénu (58 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Reakcia sa nechá prebiehať cez noc a zmes sa naleje na stĺpec silikagélu a eluuje 20 % zmesou etylacetát/hexán za získania 1,14 g (50 %) zlúčeniny 55 vo forme bielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 56

Roztok azidu 55 (1,10 g, 2,84 mmol), 10 % paládia na uhlíku (60 mg, 0,057 mmol) a 28 ml etylacetátu sa mieša pri teplote miestnosti cez noc pod atmosférou vodíka. Roztok sa prefiltruje celitom a eluuje etylacetátom. Purifikácia radiálnou chromatografiou elúciou zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín 95:5:2 poskytuje 892 mg (81 %) zlúčeniny 56 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 52

Roztok draselnej soli terc-butanolu (175 mg, 1,48 mmol), metyltrifenylfosfónium-bromidu (528 mg, 1,48 mmol) a 3 ml tetrahydrofuránu sa mieša pri teplote miestnosti pod atmosférou argónu. Po 1 h sa pridá ketón 56 (100 mg, 0,277 mmol) ku žltému roztoku a výsledný roztok sa nechá miešať pri teplote miestnosti cez noc. Reakcia sa ukončí prídavkom 5 ml vody, zmes sa zriedi 50 ml etylacetátu, vodná vrstva sa rozdelí a premyje 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia radiálnou chromatografiou elúciou zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín 95:5:2 poskytuje 96 mg (97 %) zlúčeniny 52 vo forme bielej tuhej látky.

Príklad 4

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-fluóretylidénový steroid

Halogénové analógy podobné zlúčenine 49 možno pripraviť z halogénovaných olefinančných prostriedkov. Schéma 4 znázorňuje prípravu 20-fluórovaného analógu 64. Hydroxylová skupina zlúčeniny 45 sa chráni spracovaním tercbutyldimetylsilylchloridom a imidazolom v dimetylformamide. Olefinácia ketónu 57 s použitím aniónu trietyl-(2-fluór-2-fosfonoacetátu) poskytuje zmes zlúčeniny 58 a jej geometrický izomér. Zlúčeniny možno oddeliť silikagélovou chromatografiou. Redukcia esteru lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje alylalkohol 59. Zmes komplexu oxidu sírového s pyridínom v tetrahydrofuráne s následným prídavkom lítiumalumíniumhydridu poskytuje dehydroxylovanú zlúčeninu 60. Tetrabutylamóniumfluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3-hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 61. Azidácia ZnN6’2py, trifenylfosfinom a DIAD v toluéne poskytuje 3a-azidovú zlúčeninu 62. Redukcia lítiumalumíniumhydridom v tetrahydrofuráne poskytuje 3a-amín 63. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstraňuje chrániace skupiny z hydroxylov v polohách 6- a 7- za získania amónium-chloridovej soli.

Schéma 4

El

iv) SO₃.Py, THF, LiAlH₄, v) Bu₄NF, THF, vi) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, vii) LiAIH₄, Et₂O, viii) HCl, THF, voda.

Príprava zlúčeniny 57

Roztok ketónu 45 (4,73 g, 13,1 mmol), TBSCI (3,01 g, 19,6 mmol), imidazolu (2,67 g, 39,2 mmol) a dimetylformamidu (52 ml) sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Biela suspenzia sa zriedi 250 ml etylacetátu, premyje 2 x 50 ml vody a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 5,97 g (96 %) zlúčeniny 57 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 58

Lítium-bis(trimetylsilyl)amid (10,0 ml 1,0 M roztoku v tetrahydrofuráne) (10,0 ml) sa pridá k roztoku (EtO)₂P(O)-CHFCO₂Et (2,65 g, 10,5 mmol) s teplotou miestnosti (2,65 g, 10,5 mmol) v tetrahydrofuráne (22 ml) pod atmosférou argónu. Po 1 h sa pridá roztok ketónu 57 (2,50 g, 5,25 mmol) v tetrahydrofuráne (20 ml) a výsledný roztok sa zahrieva pod spätným chladičom počas 4,5 h a potom sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Reakcia sa ukončí prídavkom 1,5 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a potom sa zmes čiastočne odparí pri odstránení väčšiny tetrahydrofuránu. Zvyšok sa zriedi 200 ml etylacetátu, premyje 3 x 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje stĺpcovou chromatografiou, elúciou

2,5 % a potom 5 % zmesou etylacetát/hexán za získania 1,50 g (50 %) zlúčeniny 58 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 59

Lítiumalumíniumhydrid (106 mg, 2,66 mmol) sa pridá k ľadovo chladnému roztoku esteru 58 (1,50 g, 2,66 mmol) v dietyléteri (13 ml) pod atmosférou argónu. Roztok sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 3 h sa roztok ochladí v ľade a pridáva sa pomaly 20 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa roztok zriedi 150 ml etylacetátu, premyje sa vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 1,44 g (kvantitatívny výťažok) zlúčeniny 59 vo forme bielej peny.

Príprava zlúčeniny 60

Komplex oxidu sírového s pyridínom (69,5 mg, 0,428 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku alylalkoholu 59 (149 mg, 0,285 mmol) v tetrahydrofuráne (2,8 ml) pod atmosférou argónu. Po 6 h sa pridá lítiumalumíniumhydrid (68 mg, 1,71 mmol) a roztok sa nechá ohriať cez noc na teplotu miestnosti. Roztok sa ochladí v ľade a pomaly sa pridáva 5 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa roztok zriedi 75 ml etylacetátu, premyje sa vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 109 mg (76 %) zlúčeniny 60 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 61

Roztok zlúčeniny 60 (410 mg, 0,810 mmol), tetrabutylamónium-fluoridu (0,89 ml 1,0 M roztoku v tetrahydrofuráne, 0,89 mmol) a tetrahydrofuránu (5 ml) sa varí pod spätným chladičom pod atmosférou argónu. Po 1,5 h sa roztok ochladí na teplotu miestnosti, zriedi sa 75 ml etylacetátu, premyje sa 20 ml vody a 2 x 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí.

Zvyšok sa prefiltruje silikagélom s elúciou etylacetátom a odparí sa za získania 318 mg (100 %) zlúčeniny 61 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 62

DIAD (0,33 ml, 1,59 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 10 min k roztoku 3p-alkoholu 61 (312 mg, 0,796 mmol), ZnN₆-2py (183 mg, 0,597 mmol), trifenylfosfínu (417 mg, 1,59 mmol) a toluénu (8,0 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 3 h sa reakčná zmes prevedie na stĺpec silikagélu naplnený 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 20 % zmesou etylacetát/hexán za získania 322 mg (97 %) zlúčeniny 62 vo forme kryštalickej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 63

Lítiumalumíniumhydrid (29 mg, 0,75 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku azidu 62 (314 mg, 0,753 mmol) v 7,5 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti a mieša sa cez noc. Roztok sa ochladí v ľade a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 10 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 75 ml etylacetátu, premyje sa 20 ml vody a 2 x 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje na stĺpci silikagélu spracovanom naplnením 1 % zmesou trietylamín/dichlórmetán a premytím 5 % zmesou metanol/dichlórmetán. Surová látka sa prevedie do dichlórmetánu, eluuje 5 % zmesou metanol/dichlórmetán a potom zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín 95:5:2 za získania bielej tuhej látky. Nukleárna magnetická rezonancia ¹H NMR ukazuje na prítomnosť stôp trietylamínu a preto sa látka vyberie 75 ml dichlórmetánu a premyje 2 x 25 ml vody, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 137 mg (47 %) zlúčeniny 63 vo forme bezfarebného filmu.

Príprava zlúčeniny 64

Roztok 3a-aminozlúčeniny 63 (137 mg, 0,35 mmol), 4 M kyseliny chlorovodíkovej v dioxane (105 μΙ, 0,42 mmol), tetrahydrofuránu (5,6 ml) a vody (1,4 ml) sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Roztok sa odparí, zvyšok sa dvakrát vyberie 3 ml metanolu a odparí sa za získania 130 mg (96 %) zlúčeniny 64 vo forme šedobielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 352,14, C21H35FNO2.

Príklad 5

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-karbometoxyetylidénový steroid

Olefinácia zlúčenín podobných zlúčenine 57 sa taktiež môže uskutočniť za získania 21-karboalkoxy-substituovaných analógov. Schéma 5 ukazuje prípravu 21karbometoxy-substituovanej zlúčeniny 69 ako príklad. Olefinácia ketónu 57 s použitím aniónu trimetyl-(2-fosfonoacetátu) poskytuje zmes zlúčeniny 65 a jej geometrického izoméru. Zlúčeniny možno oddeliť chromatografiou na silikagéli. Tetrabutylamónium-fluorid v tetrahydrofuráne odstraňuje chrániacu skupinu z 3hydroxylovej skupiny za získania zlúčeniny 66. Azidácia s použitím ZnN₆-2py, trifenylfosfínu a DIAD v toluéne poskytuje 3a-azidozlúčeninu 67. Hydrogenácia azidu za prítomnosti paládia na uhlíku ako katalyzátora poskytuje 3a-amín 68. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstraňuje skupiny chrániace hydroxylové skupiny v polohách 6 a 7 za získania amóniumacetátovej soli 69.

i) (MeO)₂P(O)CHFCO₂Me, LiN(TMS)₂, THF, ii) Bu₄NF, THF, iii) ZnN₆-2py, Ph₃P,

DIAD, toluén, iv) H_2l Pd, EtOAc, v) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 65

Lítium-bis(trimetylsilyl)amid (2,00 ml 1,0 M roztoku v tetrahydrofuráne, 2,00 mmol) sa pridá k roztoku (MeO)₂P(O)CH₂Me (390 mg, 2,10 mmol) v tetrahydrofuráne (22 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 3 h sa pridá roztok ketónu 57 (509 mg, 1,07 mmol) v tetrahydrofuráne (2 ml) a výsledný roztok sa varí pod spätným chladičom počas 3 dní. Reakcia sa ukončí prídavkom 5 ml vody, zmes sa zriedi 75 ml etylacetátu, premyje sa 2 x 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje stĺpcovou chromatografíou elúciou 5 % zmesou etylacetát/hexán za získania 307 mg (54 %) zlúčeniny 65 vo forme bezfarebného filmu. Taktiež sa izoluje 119 mg (21 %) izoméru Z.

Príprava zlúčeniny 66

Roztok zlúčeniny 65 (296 mg, 0,550 mmol), tetrabutylamónium-fluoridu (0,61 mg 1,0 M roztoku v tetrahydrofuráne, 0,61 mmol) a tetrahydrofuránu (3 ml) sa varí pod spätným chladičom pod atmosférou argónu. Po 1 h sa roztok ochladí na teplotu miestnosti, zriedi sa 20 ml etylacetátu, premyje sa 10 ml vody a 2 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 230 mg (100 %) zlúčeniny 66 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 67

DIAD (252 pl, 1,28 mmol) sa pridáva po kvapkách k roztoku 3p-alkoholu 66 (230 mg, 0,55 mmol), ZnN₆-2py (147 mg, 0,48 mmol), trifenylfosfínu (335 mg, 1,28 mmol) a toluénu (6,4 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 2 h sa reakčná zmes purifikuje radiálnou chromatografíou elúciou 15 % zmesou etylacetát/hexán za získania 203 mg (84 %) zlúčeniny 67.

Príprava zlúčeniny 68

Roztok azidu 67 (203 mg, 0,45 mmol), 10 % paládia na uhlíku (48 mg, 0,045 mmol) a 4,5 ml etylacetátu sa mieša pri teplote miestnosti pod atmosférou vodíka počas 3 dní. Roztok sa prefiltruje celitom a eluuje etylacetátom a metanolom za získania 165 mg (88 %) zlúčeniny 68.

Príprava zlúčeniny 69

Roztok amínu 68 (165 mg, 0,40 mmol) a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa zriedi 10 ml toluénu a potom sa odparí na odstránenie zvyšku kyseliny octovej. Triturácia zvyšku v 10 ml cyklohexánu s následnou filtráciou a vysušením poskytuje 117 mg (67 %) zlúčeniny 69 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 378,17, C22H36NO4.

Príklad 6

Acetátová soľ 3a-amino-6a,7-dihydroxyandrostatín-17-ónu

Analogickým spôsobom možno získať zlúčeniny s rôznymi funkčnými skupinami na atóme uhlíka C17. Napríklad sa získa 17-ketónová zlúčenina spracovaním zlúčeniny 56 80 % kyselinou octovou za získania acetátovej soli 3aamino-6a,7p-dihydroxyandrostan-17-ónu 70 (pozri tabuľku 2).

Príprava zlúčeniny 70

Roztok ketónu 56 (67 mg, 0,16 mmol) a 1 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa zriedi 10 ml toluénu a potom sa odparí za získania 63 mg (100 %) zlúčeniny 70.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 322,18, C₁₉H32NO₃.

Príklad 7

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-hydroxysteroid

Analógy substituované hydroxyiovou skupinou v polohe 17 možno pripraviť z ketónov podobných zlúčenine 56, ako ukazuje schéma 6. Karbonylová skupina v zlúčenine 56 sa redukuje nátriumbórhydridom v metanole za získania výlučne 17βhydroxylového izoméru 71. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstraňuje acetonidovú chrániacu skupinu za vytvorenia amóniumacetátovej soli 72.

Schéma 6

i) NaBH₄, MeOH, ii) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 71

Ľadovo chladný roztok ketónu 56 (100 mg, 0,28 mmol), nátriumbórhydrid (16 mg, 0,41 mmol) a 1,4 ml metanolu sa nechá reagovať počas 2,5 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 1 ml vody a zmes sa odparí na odstránenie väčšiny metanolu. Zvyšok sa zriedi 40 ml dichlórmetánu a premyje 2 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 90 mg (90 %) zlúčeniny 71.

Príprava zlúčeniny 72

Roztok amínu 71 (90 mg, 0,25 mmol) a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 2 h. Reakčná zmes sa dvakrát zriedi 10 ml toluénu a odparí sa na odstránenie zvyšku kyseliny octovej. Zostávajúca látka sa rozpustí v 1 ml metanolu a 5 ml hexánu, odparí sa a vysuší za získania 86 mg (90 %) zlúčeniny 72 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 324,19, C19H34NO3.

Príklad 8

Soli 3a-amino-6,7-dihydroxy-17-metylidénsteroidu

Hydroxylové skupiny v polohách 6 a 7 možno chrániť rôznymi chrániacimi skupinami. Vhodné chrániace skupiny sú vymenované v Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, New York, N. Y. (1999). Schéma 7 ukazuje príklady analogických zlúčenín, ktoré možno pripraviť s hydroxylovými skupinami v polohách 6 a 7 chránenými ako metylétery. Východisková zlúčenina 73 sa opisuje v US patente č. 6 046 185. Tvorba dianiónu zlúčeniny 73 s použitím hydridu sodného v dimetylformamide s následnou alkyláciou metyljodidom poskytuje zlúčeninu 74. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstraňuje cyklické ketalové a terc-butyldimetylsilyléterové chrániace skupiny. Olefinácia zlúčeniny 75 metyltrifenylfosfónium-bromidom a draselnou soľou terc-butanolu v tetrahydrofuráne poskytuje 17-metylidénovú zlúčeninu 76. Azidácia ZnN6-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3a-azidovú zlúčeninu 77. Redukcia lítiumalumíniumhydridom v tetrahydrofuráne poskytuje 3a-amín 78. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v dietyléteri a metanole poskytuje amóniumchloridovú soľ 79. Spracovanie zlúčeniny 78 kyselinou octovou vedie k amóniumacetátovej soli 80.

Schéma 7

i) NaH, Mel, DMF, ii) 80 % kyselina octová, iii) CH₃PPh₃Br, KO^lBu, THF, iv) ZnNg-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, v) LiAIH₄, Et₂O, vi) HCI, Et₂O, MeOH alebo kyselina octová

Príprava zlúčeniny 74

Hydrid sodný (0,50 g, 12,4 mmol) sa pridá k roztoku diolu 73 s teplotou miestnosti (1,49 g, 3,10 mmol) v 10 ml dimetylformamidu pod atmosférou dusíka. Po 2 h sa roztok ochladí v ľade a po kvapkách sa pridáva metyljodid (1,93 mg, 30,9 mmol) v priebehu 30 s. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti s miešaním cez noc. Reakčná zmes sa zriedi 100 ml dietyléteru, premyje 10 ml vody a 2 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 1,73 g surovej zlúčeniny 74 vo forme svetložltej olejovitej kvapaliny.

Príprava zlúčeniny 75

Roztok surovej zlúčeniny 74 (1,73 g, 3,10 mmol) a 15 ml 80 % kyseliny octovej sa mieša pri teplote miestnosti počas 4 h. Roztok sa odparí, zvyšok sa vyberie 50 ml etylacetátu, premyje sa 2 x 20 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 1,18 g surovej zlúčeniny 75 vo forme bielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 76

Roztok draselnej soli terc-butanolu (1,09 g, 9,20 mmol), metyltrifenylfosfóniumbromidu (3,30 g, 9,20 mmol) a 15 ml tetrahydrofuránu sa mieša pri teplote miestnosti pod atmosférou dusíka. Po 2 h sa pridá surový ketón 75 (1,17 mg, 3,08 mmol) k žltému roztoku a výsledný roztok sa nechá miešať pri teplote miestnosti cez noc. Reakcia sa ukončí prídavkom 2 ml vody, zmes sa zriedi 100 ml etylacetátu, premyje 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Stĺpcová chromatografia s elúciou 80 % zmesou etylacetát/hexán poskytuje 89 mg znečistenej zlúčeniny 76 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 77

DIAD (1,05 mg, 5,08 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 10 min k roztoku 3p-alkoholu 76 (885 mg, 2,54 mmol), ZnN6-2py (585 mg, 1,90 mmol), trifenylfosfínu (1,33 g, 5,08 mmol) a toluénu (25 ml) pod atmosférou argónu. Po 11 h sa reakčná zmes purifikuje stĺpcovou chromatografiou elúciou 15 % zmesou etylacetát/hexán za získania 594 mg (63 %) zlúčeniny 77 vo forme kryštalickej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 78

Lítiumalumíniumhydrid (0,79 ml 1 M roztoku v dietyléteri, 0,79 mmol) sa pridáva k ľadovo chladnému roztoku azidu 77 (588 mg, 1,57 mmol) v 15,7 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Po 10 min sa reakčná zmes nechá ohriať na teplotu miestnosti za miešania cez noc. Po 1 h sa reakčná zmes ochladí v ľade a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 10 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a kvapalina sa dekantuje. Zvyšok sa premyje 2 x 25 ml etylacetátu a premývacie podiely sa spoja so skôr dekantovaným éterovým roztokom. Roztok sa premyje 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia stĺpcovou chromatografiou elúciou zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín 95:5:2 poskytuje 434 mg (79 %) zlúčeniny 78 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 348,20, C22H38NO2.

Príprava zlúčeniny 79

Kyselina chlorovodíková (0,26 ml 1,0 M roztoku v dietyléteri, 0,26 mmol) sa pridá k roztoku aminu 78 (60 mg, 0,17 mmol) v 2 ml dietyléteru. Výsledná gélovitá látka sa rozpustí v 5 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 1 ml metanolu, zriedi sa 5 ml cyklohexánu a odparí sa za získania 66 mg (100 %) zlúčeniny 79 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 80

Roztok amínu 78 (61 mg, 0,17 mmol) a 1 ml kyseliny octovej sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas 30 min. Roztok sa zriedi 5 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa vyberie 5 ml hexánu, odparí sa a zostávajúca látka sa suší počas 2 h v Abderhaldenovom sušiacom zariadení s refluxujúcim acetónom za získania 71 mg (100 %) zlúčeniny 80 ako bielej tuhej látky.

Príklad 9

Soli 3p-amino-6,7-dihydroxy-17-metylidénsteroidu

Stereochemické usporiadanie na uhlíku C3 možno premeniť prídavkom derivátu 3p-amónnej soli ' akýchkoľvek zlúčenín podobných zlúčenine 49. Stereochemické usporiadanie na uhlíku C3 možno premeniť v troch krokoch, ako ukazuje schéma 8 na prípravu zlúčenín 28 a 83. 3p-hydroxylová zlúčenina 46 sa premení na ββ-mesylát 81 metánsulfonylchloridom a pyridínom. Zahrievanie zlúčeniny 81 a octanu cézneho v dimetylformamide s teplotou 100 °C poskytuje 3aacetátovú zlúčeninu 82. Sekvencia premeny sa ukončí metanolýzou acetátu zlúčeniny 82 nátrium-metoxidom za získania 3a-hydroxylovej zlúčeniny 25. Spracovanie zlúčeniny 25 ZnN₆-2py, trifenylfosfínom a DIAD v toluéne poskytuje 3βazidovú zlúčeninu 26. Redukcia azidu lítiumalumíniumhydridom v dietyléteri poskytuje 3β-3ΐτιΐηοζΙύόβηϊηυ 27. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v tetrahydrofuráne a vode odstráni acetonidovú skupinu za získania amóniumchloridovej soli 28. Podobne spracovanie zlúčeniny 27 80 % kyselinou octovou odstráni acetonidovú skupinu za získania amóniumacetátovej soli 83. S použitím spôsobov znázornených v schéme 80 sa zlúčenina 50 prevedie na zlúčeninu 89 a zlúčenina 61 sa prevedie na zlúčeninu 95 (pozri tabuľku 1). Zlúčeniny 26, 27, 87, 88, 89, 93, 94 a 95 sú príklady zlúčenín podľa tohto vynálezu so stereochemickým usporiadaním 3β.

Schéma 8

i) MsCI, pyridín, ii) CsOAc, DMF, 100 °C, iii) NaOMe, MeOH, iv) ZnN₆-2py, Ph₃P, DIAD, toluén, v) LiAIH₄, Et₂O, vi) 4 M HCI v dioxáne, THF, vode alebo 80 % kyseline octovej.

Príprava zlúčeniny 81

Metánsulfonylchlorid (1,2 ml, 16 mmol) sa pridá k ľadovo chladnému roztoku 3p-hydroxylovej zlúčeniny 46 (3,0 g, 8,0 mmol) v pyridíne (20 ml) pod atmosférou argónu. Po 4 h sa roztok ochladí v ľade a pridá sa 20 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Po 15 min sa roztok zriedi 150 ml etylacetátu a premyje 3 x 25 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 3,6 g (100 %) zlúčeniny 81 vo forme šedobielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 82

Roztok mesylátu 81 (3,6 g, 8,0 mmol), octanu cézneho (4,6 g, 24 mmol) a 40 ml dimetylformamidu sa zahrieva na teplotu 100 °C počas 24 h. Roztok sa zriedi 100 ml vody, extrahuje sa 2 x 100 ml dietyléteru, premyje sa 2 x 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania zhruba 3 g surovej zlúčeniny 82.

Príprava zlúčeniny 25

Roztok sodíka (398 mg, 17,3 mmol) v metanole (21,5 ml) sa pridá k 3oc-acetátu 82 (1,8 g, 4,3 mmol) v tetrahydrofuráne (10 ml). Po 2 h sa pridá 20 ml vody a výsledný roztok sa zriedi 100 ml etylacetátu, premyje postupne nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 1,58 g (98 %) surovej zlúčeniny 25 vo forme žltej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 26

DIAD (1,70 ml, 8,24 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 10 min k roztoku 3a-alkoholu 25 (1,54 g, 4,12 mmol), ZnNs-2py (0,94 g, 3,09 mmol), trifenylfosfínu (2,16 g, 8,24 mmol) a toluénu (44 ml) pod atmosférou argónu. Po miešaní cez noc sa reakčná zmes naleje na stĺpec silikagélu naplnený 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 10 % zmesou etylacetát/hexán za získania 0,89 g (61 %) zlúčeniny 26 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 27

Lítiumalumíniumhydrid (146 mg, 3,66 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku azidu 26 (1,46 g, 3,66 mmol) v 18,3 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 1,5 h sa roztok vychladí v ľade, zriedi sa 25 ml dietyléteru a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 20 ml nasýteného roztoku síranu amónneho. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 50 ml etylacetátu, premyje sa 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 1,31 g (96 %) zlúčeniny 27 vo forme bielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 28

Roztok 3p-aminozlúčeniny 27 (227 mg, 0,609 mmol), 4 M roztok kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (183 μΙ, 0,73 mmol), tetrahydrofurán (9,7 ml) a voda (2,4 ml) sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Tetrahydrofurán a voda sa odparí, zvyšok sa vyberie 5 ml metanolu a odparí sa, trituruje 5 ml acetónu a odparí sa za získania 224 mg (100 %) zlúčeniny 28 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 334,10, C21H36NO2.

Príprava zlúčeniny 83

Roztok amínu 27 (412 mg, 1,10 mmol) a 5 ml 80 % kyseliny octovej sa mieša pri teplote miestnosti počas 4 h. Reakčná zmes sa zriedi 5 ml toluénu a potom sa odparí. Zvyšok sa vyberie 2 x 5 ml toluénu a odparí sa s odstránením zostávajúcej kyseliny octovej. Zvyšná látka sa dvakrát trituruje 10 ml dichlórmetánu a odparí sa za získania 430 mg (99 %) zlúčeniny 83 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 334,19, C21H36NO2.

Príprava zlúčeniny 84

Metánsulfonylchlorid (0,33 ml, 4,2 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku 3p-hydroxylovej zlúčeniny 50 (754 mg, 2,09 mmol) v pyridíne (5,3 ml) pod atmosférou argónu. Po 4 h sa roztok ochladí v ľade a pridá sa 5 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Po 15 min sa roztok zriedi 60 ml etylacetátu a premyje sa 3x nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 860 mg (94 %) zlúčeniny 84 vo forme šedobielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 85

Roztok mesylátu 84 (860 mg, 1,96 mmol), octanu cézneho (1,13 g, 5,88 mmol) a 10 ml dimetylformämidu sa zahrieva na teplotu 95 °C počas 32 h. Roztok sa zriedi 50 ml vody, extrahuje sa 2 x 100 ml dietyléteru, premyje sa 2 x 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia stĺpcovou chromatografiou elúciou 5 % a 8 % zmesou etylacetát/hexán poskytuje 558 mg (71 %) zlúčeniny 85 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 86

Roztok sodíka (128 mg, 5,56 mmol) v metanole (7 ml) sa pridá k 3a-acetátu 85 (558 mg, 1,38 mmol). Po 2 h sa pridá 5 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a výsledný roztok sa zriedi 100 ml etylacetátu. Roztok sa premyje 2 x 20 ml vody a 2 x 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 491 mg (99 %) zlúčeniny 86 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 87

DIAD (0,57 ml, 2,74 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 15 min k roztoku 3ot-hydroxylovej zlúčeniny 86 (493 mg, 1,37 mmol), ZnN₆-2py (315 mg, 1,03 mmol), trifenylfosfínu (718 mg, 2,74 mmol) a toluénu (13,7 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 3,5 h sa reakčná zmes naleje na stĺpec silikagélu naplnený 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 10 % zmesou etylacetát/hexán za získania 390 mg (74 %) zlúčeniny 87 vo forme viskóznej olejovitej kvapaliny.

Príprava zlúčeniny 88

Lítiumalumíniumhydrid (40 mg, 1,01 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku azidovej zlúčeniny 87 (390 mg, 1,01 mmol) v 5 ml dietyléteru pod atmosférou argónu. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 2 h sa roztok ochladí v ľade, zriedi sa 25 ml dietyléteru a reakcia sa pomaly ukončí 2 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 40 ml etylacetátu, premyje sa 3 x 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa purifikuje stĺpcovou chromatografiou na silikagéli upravenom 1 % zmesou trietylamín/dichlórmetán a premytom 5 % zmesou metanol/dichlórmetán. Surová látka sa privedie v dichlórmetáne, eluuje sa 5 % zmesou metanol/dichlórmetán a potom zmesou dichlórmetán/metanol/ trietylamín 95:5:2 za získania 277 mg (76 %) zlúčeniny 88 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 89

Roztok aminozlúčeniny 88 (270 mg, 0,752 mmol) a 10 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa odparí za získania bielej penovitej látky. Pridá sa acetón (10 ml) a zmes sa vystaví účinkom ultrazvuku na rozpustenie látok a potom sa odparí. Pridá sa ďalší podiel 10 ml acetónu, zmes sa vystaví účinku ultrazvuku a odparí sa za získania 285 mg (100 %) zlúčeniny 89 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 320,26, C20H34NO2.

Príprava zlúčeniny 90

Metánsulfonylchlorid (0,20 mol, 2,56 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému roztoku ββ-hydroxylovej zlúčeniny 61 (501 mg, 1,28 mmol) v pyridíne (3,2 ml) pod atmosférou argónu. Po 4 h sa roztok ochladí v ľade a pridá sa 5 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Po 15 min sa roztok zriedi 50 ml etylacetátu a premyje 3x nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 590 mg (98 %) zlúčeniny 90 vo forme bielej penovitej látky.

Príprava zlúčeniny 91

Roztok mesylátu 90 (590 mg, 1,25 mmol), octanu cézneho (722 mg, 3,76 mmol) a 6,2 ml dimetylformamidu sa zahrieva na teplotu 100 °C počas 24 h. Roztok sa zriedi 50 ml vody, extrahuje sa 2 x 50 ml dietyléteru, premyje sa 2 x 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia stĺpcovou chromatografiou elúciou 8 % zmesou etylacetát/hexán poskytuje 297 mg (55 %) zlúčeniny 91 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 92

Roztok sodíka (63 mg, 2,7 mmol) v metanole (3,4 ml) sa pridá k 3a-acetátu 91 (297 mg, 0,684 mmol) v tetrahydrofuráne (1 ml). Roztok sa mieša cez noc, pridá sa 5 ml vody a 80 ml etylacetátu a zmes sa premyje dvakrát vodou a dvakrát nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí za získania 251 mg (94 %) zlúčeniny 92 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 93

DIAD (0,26 ml, 1,24 mmol) sa pridáva po kvapkách v priebehu 10 min k roztoku 3a-alkoholu 92 (243 mg, 0,620 mmol), ZnN₆-2py (143 mg, 0,465 mmol), trifenylfosfínu (325 mg, 1,24 mmol) a toluénu (6,2 ml) s teplotou miestnosti pod atmosférou argónu. Po 4 h sa reakčná zmes privedie na kolónu silikagélu naplnenú 10 % zmesou etylacetát/hexán a eluuje sa 20 % zmesou etylacetát/hexán za získania 209 mg znečistenej zlúčeniny 93 vo forme žltej olejovitej kvapaliny.

Príprava zlúčeniny 94

Lítiumalumíniumhydrid (20 mg, 0,50 mmol) sa pridá k ľadovo vychladenému surovému azidu 93 (209 mg, 0,50 mmol) v 5 ml dietyléteru pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Po 4 h sa roztok ochladí v ľade, zriedi sa 25 ml dietyléteru a reakcia sa pomaly ukončí prídavkom 2 ml nasýteného roztoku síranu sodného. Po 10 min sa vytvorí biela zrazenina a roztok sa zriedi 50 ml etylacetátu, premyje sa 3 x 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Surová látka sa chromatografuje s použitím stĺpca silikagélu upraveného naplnením 1 % zmesou trietylamín/dichlórmetán a premytím 5 % zmesou metanol/dichlórmetán. Surová látka sa privedie na stĺpec dichlórmetánu, eluuje sa 5 % zmesou metanol/dichlórmetán a potom zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín 95:5:2 za získania 97 mg znečistenej zlúčeniny 94 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 95

Roztok znečistenej 3p-aminozlúčeniny 94 (97 mg, 0,25 mmol), 4 M kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (74 μΙ, 0,30 mmol), tetrahydrofuránu (4 ml) a vody (1 ml) sa mieša pri teplote miestnosti. Po 4 h sa roztok odparí, zvyšok sa vyberie 5 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje dvakrát 5 ml acetónu a odparí sa. Biela tuhá látka sa rozpustí v zhruba 0,5 ml vody a pomaly sa pridáva acetón (5 ml) tak dlho, až sa objavia kryštály. Kryštály sa odfiltrujú, premyjú acetónom a vysušia sa za získania 66 mg zlúčeniny 95 vo forme bezfarebných jemných ihličiek.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4.Ί) 352,09, C21H35FNO2.

Príklad 10

3-Amino-6,7-dihydroxy-17-alkylsteroid

Akúkoľvek zlúčeninu so 17(20)-alkenylovou funkčnou skupinou možno hydrogenovať na dvojitej väzbe vodíkom za prítomnosti katalyzátora, ako je 10 % paládium na uhlíku. Napríklad možno pripraviť zlúčeninu 96 zo zlúčeniny 28, ako ukazuje schéma 9. Podobne možno pripraviť zlúčeninu 97 zo zlúčeniny 49 spôsobom ukázaným v schéme 9 (pozri tabuľku 2).

Schéma 9

i) H₂, Pd na uhlíku, metanol.

Príprava zlúčeniny 96

Roztok olefínu 28 (52 mg, 0,14 mmol), 10 % paládium na uhlíku (15 mg, 0,014 mmol) a metanol (3 ml) sa mieša cez noc pri teplote miestnosti pod atmosférou vodíka. Roztok sa prefiltruje celitom, eluuje 50 ml metanolu a odparí sa za získania 50 mg (96 %) zlúčeniny 96 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 336,24, C21H38NO2.

Príprava zlúčeniny 97

Roztok olefínu 49 (844 mg, 2,28 mmol), 10 % paládium na uhlíku (243 mg, 0,228 mmol) a metanol (11 ml) sa mieša pri teplote miestnosti cez noc pod atmosférou vodíka. Roztok sa prefiltruje celitom, eluuje 50 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 10 ml acetónu, prefiltruje sa a vysuší za získania 801 mg (94 %) zlúčeniny 97 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 336,21 C2iH₃₈NO₂.

Príklad 11

3-sek-Amino-6,7-dihydroxy-17-metylidénsteroid

Akýkoľvek amin podobný zlúčenine 52 možno pripájať na aldehyd alebo ketón za získania sekundárnych alebo terciárnych amínov. Reakcia zlúčeniny 52 s roztokom 4-izopropylbenzaldehydu a titanum-izopropoxidom v tetrahydrofuráne s následnou redukciou nátriumbórhydridom poskytuje zlúčeninu 99. Spracovanie 8 % kyselinou octovou odstraňuje acetonidovú skupinu za získania amóniumacetátovej soli 100. Príklady zlúčenín 101 až 107 sa pripravia spôsobmi znázornenými v schéme 10 (pozri tabuľka 6).

Schéma 10

i) 4-izopropylbenzaldehyd, Ti(O'Pr)4, THF, NaBH₄, MeOH, ii) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 99

Titanum-izopropoxid (120 μΙ, 0,42 mmol) sa pridá k roztoku amínu 52 (100 mg, 0,28 mmol), 4-izopropylbenzaldehydu (46 μΙ, 0,31 mmol) a 1,4 ml tetrahydrofuránu s teplotou miestnosti pod atmosférou dusíka. Po 12 h sa pridá roztok nátriumbórhýdridu (29 mg, 0,78 mmol) v 1 ml etanolu a reakcia sa nechá prebiehať počas ďalších 8 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 3 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, zmes sa zriedi 30 ml etylacetátu, rozdelí sa, organický podiel sa premyje 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia radiálnou chromatografiou poskytuje 50 mg (36 %) zlúčeniny 99.

Príprava zlúčeniny 100

Roztok amínu 99 (50 mg, 0,10 mmol) a 1 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 3 h. Reakčná zmes sa vyberie dvoma podielmi toluénu po 5 ml a odparí sa a potom raz acetónom a hexánom za získania 25 mg (51 %) zlúčeniny

100.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 452,27, C30H46NO2.

Príprava zlúčeniny 101

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s 2-fluórbenzaldehydom (32 pl, 0,32 mmol) za získania 43 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C v priebehu 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 5 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 49 mg (37 %) zlúčeniny 101 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 428,22, C27H39FNO2.

Príprava zlúčeniny 102

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s 3-(trifluórmetyl)benzaldehydom (41 pi, 0,31 mmol) za získania 61 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracováva 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C počas 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 5 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa rozpusti v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 64 mg (45 %) zlúčeniny 102 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 478,18, C28H39F3NO2.

Príprava zlúčeniny 103

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s o-anizaldehydom (42 mg, 0,31 mmol) za získania 30 mg amínového medziproduktu. Tento aminový medziprodukt sa spracuje 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C v priebehu 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 1 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 18 mg (14 %) zlúčeniny 103 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 440,23, C28H42NO3.

Príprava zlúčeniny 104

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s 4-(trifluórmetoxy)benzaldehydom (44 μΙ, 0,31 mmol) za získania 86 mg amínového medziproduktu. Tento aminový medziprodukt sa spracováva 1,5 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C počas 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 1 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 84 mg (57 %) zlúčeniny 104 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 494,15, C28H39NO3.

Príprava zlúčeniny 105

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s 3-fenoxybenzaldehydom (60 mg, 0,32 mmol) za získania 73 mg amínového medziproduktu. Tento aminový medziprodukt sa spracováva 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C počas 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 5 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 87 mg (58 %) zlúčeniny 105 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 502,20, C33H44NO3.

Príprava zlúčeniny 106

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s 3-nitrobenzaldehydom (46 mg, 0,31 mmol) za získania 18 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracováva 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C počas 3 h. Reakčná zmes sa zriedi 5 ml toluénu a odparí sa.

Zvyšok sa rozpustí v 1 ml acetónu, zriedi sa 5 ml hexánu a odparí sa za získania 18 mg (14 %) zlúčeniny 106 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 455,20, C27H39N2O4.

Príprava zlúčeniny 107

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 52 (200 mg, 0,55 mmol) s 3-pyridylkarboxaldehydom (82 pg, 0,61 mmol) za získania 100 mg amínového medziproduktu. Suspenzia amínového medziproduktu, 4 M roztok kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (65 pi, 0,26 mmol), 110 pl vody a 2,2 ml acetonitrilu sa mieša pri teplote miestnosti počas 1 h. Roztok sa prefiltruje a tuhá látka sa vysuší za získania 77 mg (30 %) zlúčeniny 107 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 411,21, C26H39N2O2.

Príklad 12

3-Cykloamino-6,7-dihydro-17-etylidénsteroid

Akýkoľvek ketón podobný zlúčenine 108 možno spájať s amínom spôsobom znázorneným v schéme 11. Východisková látka, zlúčenina 108 na prípravu sa opisuje v US patente 6 046 185. Reakcia zlúčeniny 108 s piperidínom a nátriumkyanobórhydridom v metanole poskytuje zlúčeninu 109 ako zmes izomérov na uhlíku C3. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstraňuje acetonidové chrániace skupiny a vytvára amónium-acetátovú soľ 110. Príklad zlúčeniny 111 sa pripraví spôsobmi znázornenými v schéme 11 s tým rozdielom, že sa namiesto kyseliny octovej použije kyselina chlorovodíková (pozri tabuľku 5). 3-Cykloaminoskupina je skupina pripojená v polohe 3, kde uhlík v polohe 3 sa priamo pripája k dusíku a tento dusík je časťou heterocyklického kruhu.

Schéma 11 ο

ÔH

110 cz Ο '7- Ο / 10» I

i) piperidín, Ti(O'Pr)4, THF, NaBH₄, MeOH), ii) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 109

Roztok ketónu 108 (200 mg, 0,54 mmol), piperidínu (266 μΙ, 2,68 mmol), 100 mg molekulárnych sít 0,3 nm, nátriumkyanobórhydridu (24 mg, 0,38 mmol) a 5,4 ml metanolu sa mieša pri teplote miestnosti počas 24 h. Reakčná zmes sa zriedi 20 ml vody a extrahuje sa 2 x 20 ml dichlórmetánu. Spojené extrakty sa premyjú 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú sa a odparia. Surová látka sa purifikuje radiálnou chromatografiou elúciou 20 % zmesou metanol/dichlórmetán za získania 112 mg (47 %) zlúčeniny 109 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 110

Roztok amínov 109 (102 mg, 0,23 mmol) a 5 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Roztok sa odparí, zvyšok sa vyberie 2 ml metanolu, zriedi sa 15 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 5 ml acetónu, prefiltruje sa a vysuší za získania 44 mg (42 %) zlúčeniny 10 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 402,31, C26H44NO₂.

Príprava zlúčeniny 111

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 109 reaguje ketón 108 (200 mg

0,54 mmol) s morfolínom (234 μΙ, 2,68 mmol) za získania 56 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 5 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C v priebehu 1 h. Roztok sa odparí, rozpustí v 5 ml metanolu a opäť odparí. Nukleárna magnetická rezonancia ¹H a ¹³C NMR ukazuje na odstránenie acetonidovej chrániacej skupiny, avšak vytvára sa málo soli alebo žiadna soľ. Táto látka sa spracuje 4 M roztokom kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (32 μΙ, 0,13 mmol) a 2 ml acetónu za získania bielej zrazeniny. Suspenzia sa zriedi 2 ml acetónu, prefiltruje sa a vysuší za získania 48 mg (20 %) zlúčeniny 111 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 404,20, C25H42NO3.

Príklad 13

Prevedenie skupiny 3-oxo v steroide na skupinu 3-sek-amino

Akýkoľvek ketón podobný zlúčenine 108 možno spájať s amínom spôsobom znázorneným v schéme 12. Metylamín sa pridá k roztoku zlúčeniny 108 a titanumizopropoxidu v tetrahydrofuráne s nasledujúcou redukciou nátriumbórhydridom. Roztok sa prefiltruje a eluuje na živici MP-TsOH za získania zlúčeniny 112 ako zmesi izomérov na uhlíku C3. Spracovanie kyselinou chlorovodíkovou v acetonitrile a vode poskytuje amónium-chloridovú soľ 113. Príklady zlúčenín 114 až 129 sa pripravia spôsobmi znázornenými v schéme 12 s tým rozdielom, že sa použije kyselina octová namiesto kyseliny chlorovodíkovej v prípadoch, keď sa vytvárajú amónium-acetátové soli (pozri tabuľku 5).

i) hydrochlorid metylamínu, Ti(O'Pr)4, THF, NaBH₄, MeOH, ii) HCI, voda, acetonitril.

Príprava zlúčeniny 112

Titanum-izopropoxid (270 pl, 0,92 mmol) sa pridá k roztoku ketónu 108 s teplotou miestnosti (250 mg, 0,67 mmol), hydrochloridu metylamínu (41 mg, 0,61 mmol) a 1,5 ml tetrahydrofuránu pod atmosférou dusíka. Po 12 h sa pridá roztok nátriumbórhydridu (65 mg, 1,7 mmol) v 2,3 ml etanolu a reakcia pokračuje počas ďalších 10 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 0,5 ml vody a zmes sa prefiltruje na odstránenie bielej zrazeniny. Roztok sa nanesie na stĺpec 600 mg živice MP-TsOH a eluuje 3 ml metanolu a potom 4 ml 2 M roztoku amoniaku v metanole. Reakcia amoniak/metanol sa odparí za získania 76 mg (32 %) zlúčeniny 112.

Príprava zlúčeniny 113

Suspenzia zlúčeniny 112 (76 mg, 0,21 mmol), 4 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne (75 μΙ, 0,30 mmol), 50 μΙ vody a 1 ml acetonitrilu sa mieša pri teplote miestnosti počas 1 h. Roztok sa prefiltruje a tuhá látka sa vysuší za získania 38 mg (13 %) zlúčeniny 113 vo forme šedej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 348,19, C25H₃₈NO₂.

Príprava zlúčeniny 114

S použitím spôsobov opísaných na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (200 mg, 0,53 mmol) s hydrochloridom propylamínu (47 mg, 0,49 mmol) za získania 72 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 34 mg (17 %) zlúčeniny 114.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 376,22, C2₄H₄₂NO₂.

Príprava zlúčeniny 115

S použitím spôsobov opísaných na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s amylamínom (70 μΙ, 0,61 mmol) za získania 82 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 pl roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 75 mg (28 %) zlúčeniny 115 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 404,28, C₂6H4₆NO₂.

Príprava zlúčeniny 116

S použitím spôsobov opísaných na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s cyklopentylaminom (60 μΙ, 0,61 mmol) za získania 99 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 200 μΙ kyseliny octovej v priebehu 1 h a dvakrát sa vyberie 1 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší za získania 98 mg (35 %) zlúčeniny 116.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 402,27, C26H44NO2.

Príprava zlúčeniny 117

S použitím spôsobov opísaných na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s cyklohexylamínom (70 μΙ, 0,61 mmol) za získania 120 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 0,5 ml kyseliny octovej v priebehu 1 h a dvakrát sa vyberie 1 ml toluénu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší sa za získania 101 mg (32 %) zlúčeniny 117.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 416,25, C27H46NO2.

Príprava zlúčeniny 118

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s pyrolidínom (51 μΙ, 0,61 mmol) za získania 70 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 50 pl kyseliny octovej v priebehu 1 h a pridá sa 1 ml cyklohexánu za získania tuhej látky, ktorá sa prefiltruje a vysuší sa za získania 65 mg (22 %) zlúčeniny 118.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 388,28, C25H42NO2.

Príprava zlúčeniny 119

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (200 mg, 0,53 mmol) s N-propyletyléndiamínom (60 pl, 0,49 mmol) za získania 99 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 pl kyseliny octovej za získania 47 mg (20 %) zlúčeniny 119.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 419,32, C26H47NO2.

Príprava zlúčeniny 120

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s N,N-dimetyletyléndiamínom (65 pl, 0,61 mmol) za získania 93 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 pl roztoku kyseliny chlorovodíkovej v priebehu 1 h za získania 77 mg (29 %) zlúčeniny 120 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 405,28, C25H45NO2.

Príprava zlúčeniny 121

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s piperazínom (52 mg, 0,61 mmol) za získania 33 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 200 pl kyseliny octovej v priebehu 1 h a pridá sa 1 rpl cyklohexánu a 2x sa vyberie a odparí 1 ml toluénu. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a odparí za získania 39 mg (14 %) zlúčeniny 121.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 403,23, C25H43N2O2.

Príprava zlúčeniny 122

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s etanolamínom (33 μΙ, 0,61 mmol) za získania 136 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 124 mg (50 %) zlúčeniny 122 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 378,19, C23H40NO3.

Príprava zlúčeniny 123

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s 5-amino-1-pentanolom (63 mg, 0,61 mmol) za získania 129 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 50 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 65 mg (24 %) zlúčeniny 123 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 420,25, C26H46NO3.

Príprava zlúčeniny 124

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s 2-(2-aminoetylamino)etanolom (62 μΙ, 0,61 mmol) za získania 90 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 79 mg (28 %) zlúčeniny 124 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 421,24, C25H45N2O3.

Príprava zlúčeniny 125

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (200 mg, 0,53 mmol) s m-toluidínom (52 pl, 0,49 mmol) za získania 95 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 43 mg (19 %) zlúčeniny 125.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 424,23, C28H42NO2.

Príprava zlúčeniny 126

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s 4-aminofenolom (67 mg, 0,61 mmol) za získania 138 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 41 mg (14 %) zlúčeniny 126.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 426,18, C27H40NO3.

Príprava zlúčeniny 127

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) so sulfanilamidom (105 mg, 0,61 mmol) za získania po purifikácii radiálnou chromatografiou 24 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt sa spracuje 75 μΙ roztoku kyseliny chlorovodíkovej za získania 23 mg (7 %) zlúčeniny 127.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 489,17, C27H₄₁N2O₄S.

Príprava zlúčeniny 128

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s 3-aminometylpyridínom (62 μΙ, 0,61 mmol) za získania 108 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt reaguje s 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C v priebehu 1 h. Reakčná zmes sa odparí a dvakrát sa vyberie podielmi toluénu po 1 ml a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší sa za získania 117 mg (41 %) zlúčeniny 128.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 425,24, C27H41N2O2.

Príprava zlúčeniny 129

Spôsobmi opísanými na prípravu zlúčeniny 112 reaguje ketón 108 (250 mg, 0,67 mmol) s histamínom (68 mg, 0,61 mmol) za získania 120 mg amínového medziproduktu. Tento amínový medziprodukt reaguje s 1 ml 80 % kyseliny octovej pri teplote 40 °C v priebehu 1 h. Reakčná zmes sa odparí a dvakrát sa vyberie podielmi toluénu po 1 mg a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší sa za získania 128 mg (38 %) zlúčeniny 129.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 428,23, C26H42N3O2.

Príklad 14

Prevedenie 3-aminoskupiny steroidu na 3-acylaminoskupinu

Amidové a sulfónamidové analógy možno pripraviť z ktoréhokoľvek amínu podobného zlúčenine 52. Schéma 13 ukazuje prípravu amidu 131. Acetylácia amínu 52 v dichlórmetáne s použitím acetylchloridu a dietylamínu viazaného na živicu poskytuje amid 130. Spracovanie 80 % kyselinou octovou odstráni acetonidovú skupinu za získania dihydroxyamidu 131.

Schéma 13 o

131

i) acetylchlorid, PS-DIEA, CH2CI2, PS-trisamín, ii) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 130

Roztok amínu 52 (100 mg, 0,28 mmol), acetylchloridu (50 pl, 0,70 mmol), 440 mg živice PS-DIEA a 2,4 ml dichlórmetánu sa mieša pri teplote miestnosti počas 16 h. Živica sa prefiltruje a filtrát sa inkubuje počas 2 h s 260 mg PS-trisamínovej živice. Živica sa odfiltruje a filtrát sa odparí. Purifikácia radiálnou chromatografiou poskytuje 69 mg (62 %) zlúčeniny 130.

Príprava zlúčeniny 131

Roztok amidu 130 (69 mg, 0,17 mmol) a 1 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa dvakrát vyberie 5 ml toluénu, odparí sa, raz sa vyberie 5 ml metanolu a odparí sa a raz 1 ml acetónu a 5 ml hexánu a odparí sa za získania 62 mg (62 %) zlúčeniny 131 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 384,16, C22H₃₅NNaO3, 362,20, C22H36NO3, 344,18 C22H34NO2.

Príprava zlúčeniny 132

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 130 reaguje amín 52 (88 mg, 0,24 mmol) s benzoylchloridom (65 pl, 0,56 mmol) za získania 64 mg amidového medziproduktu. Roztok amidového medziproduktu a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa dvakrát vyberie 5 ml toluénu a odparí sa, raz 5 ml metanolu a raz 1 ml acetónu a 5 ml hexánu a odparí sa za získania 55 mg (55 %) zlúčeniny 132 vo forme bielej tuhej látky (pozri tabuľku 3).

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 446,18, C27H₃7NNaO₃, 424,29, C27H38NO3, 406,19, C27H36NO2.

Príprava zlúčeniny 133

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 130 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s izopropylsulfonylchloridom (63 μΙ, 0,56 mmol) za získania 38 mg amidového medziproduktu. Roztok amidového medziproduktu a 1,5 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa dvakrát vyberie 5 ml toluénu a odparí sa, raz 5 ml metanolu a raz 1 ml acetónu a 5 ml hexánu a odparí sa za získania 35 mg (29 %) zlúčeniny 133 vo forme šedobielej tuhej látky (pozri tabuľku 3).

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 426,14, C23H40NO4S.

Príprava zlúčeniny 134

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 130 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s benzénsulfonylchloridom (90 μΙ, 0,70 mmol) za získania 105 mg amidového medziproduktu. Roztok amidového medziproduktu a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zahrieva na teplotu 40 °C počas 1 h. Reakčná zmes sa dvakrát vyberie 5 ml toluénu a odparí sa, raz 5 ml metanolu a odparí sa a raz 1 ml acetónu a 5 ml hexánu a odparí sa za získania 83 mg (65 %) zlúčeniny 134 vo forme bielej tuhej látky (pozri tabuľku 3)

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 482,11, C₂6H3₇NNaO4S, 477,17, C₂₆H4iN₂O4S, 460,15, C26H38NO4S.

Príklad 15

3-Acylaminobiotín-6,7-hydroxy-17-etylidénsteroid

Schéma 14 ukazuje prípravu amidu 135. Reakcia amínu 83 s trietylamínom a typom vo vode rozpustného N-hydroxysukcínimidu biotínesteru v metanole a vode poskytuje biotinylovaný amidový analóg 135.

Schéma 14

i) Sulfo-NHS-biotín, EÍ3N, MeOH, voda.

Príprava zlúčeniny 135

Roztok zlúčeniny 83 (97 mg, 0,25 mmol), trietylaminu (104 μΙ, 0,75 mmol), sulfo-NHS-biotínu (120 mg, 0,27 mmol), 2,5 ml metanolu a 2,5 ml vody sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Reakčná zmes sa odparí a purifikuje stĺpcovou chromatografiou s reverznými fázami elúciou 5 % zmesou voda/metanol za získania 89 mg (64 %) zlúčeniny 135 vo forme šedobielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 560,30, C31H50N3O4S.

Príklad 16

3-močovina-6,7-hydroxy-17-metylidénsteroid

Ktorýkoľvek z amínov podobných zlúčenine 52 môže reagovať s izokyanátmi alebo izotiokyanátmi za získania zlúčenín, ktoré majú funkčné skupiny močoviny alebo tiomočoviny. Zlúčeniny 136, 137 a 138 sú príklady močovín pripravených spôsobmi znázornenými v schéme 15 (pozri tabuľku 3).

Schéma 15

137

i) fenylizokyanát, PS-Trisamín, CH₂CI₂, ii) 80 % kyselina octová

Príprava zlúčeniny 136

Roztok amínu 52 (100 mg, 0,28 mmol), fenylizokyanátu (76 μΙ, 0,70 mmol) a 2,4 ml dichlórmetánu sa mieša pri teplote miestnosti počas 16 h. Roztok sa inkubuje počas 2 h s 260 mg živice PS-Trisamín. Živica sa odfiltruje a filtrát sa odparí. Purifikácia radiálnou chromatografiou poskytuje 95 mg (71 %) zlúčeniny 136.

Príprava zlúčeniny 137

Roztok močoviny 136 (95 mg, 0,20 mmol) a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zohrieva pri teplote 80 °C počas 2 h. Reakčná zmes sa vyberie 5 ml toluénu a odparí sa, 5 ml metanolu a odparí sa a 5 ml hexánu a odparí sa. Purifikácia radiálnou chromatografiou elúciou zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín 95:5:2 poskytuje 40 mg (33 %) zlúčeniny 137.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 461,18, C₂₇H3eN₂NaO₃,439,22, C₂₇H₃9N₂O₃, 421,25, C₂₇H₃₇N₂O₂.

Príprava zlúčeniny 138

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 137 reaguje amín 52 (100 mg, 0,28 mmol) s propylizokyanátom (52 μΙ, 0,56 mmol) za získania 72 mg močovinového medziproduktu. Roztok močovinového medziproduktu a 2 ml 80 % kyseliny octovej sa zohrieva na teplotu 80 °C počas 2 h. Reakčná zmes sa vyberie dvakrát 5 ml toluénu a odparí sa, raz 5 ml metanolu a odparí sa a raz 5 ml hexánu a odparí sa za získania 51 mg (45 %) zlúčeniny 138 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 427,21, C₂₄H₄₀N₂NaO3, 405,25, C₂₄H₄iN₂O₃.

Príklad 17

Nenasýtený 3-amino-6,7-hydroxy-17-dimetylsteroid

Akékoľvek zlúčeniny príbuzné zlúčeninám 88 alebo 89 možno podrobiť prešmyku s použitím spôsobu znázorneného v schéme 16. Spracovanie zlúčeniny 88 roztokom kyseliny chlorovodíkovej v metanole a vode pri teplote 50 °C odstraňuje acetonidové chrániace skupiny, umožní migráciu 18-metylovej skupiny do polohy C17 a vytvorenie amóniumchloridovej soli 139. Spracovanie zlúčeniny 89 za rovnakých podmienok taktiež poskytuje zlúčeninu 139. Zlúčeniny príkladov 140 až 148 sa pripravia spôsobmi znázornenými v schéme 16 (pozri tabuľku 4).

Schéma 16

i) HCl, voda, metanol, 50 °C

Príprava zlúčeniny 139

Roztok zlúčeniny 88 (300 mg, 0,834 mmol), 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, 2 ml metanolu a 2 ml vody sa zahrievajú pri teplote 50 °C počas 72 h. Reakčná zmes sa odparí a zvyšok sa vyberie dvakrát 5 ml metanolu a odparí sa. Zostávajúca látka sa vyberie 2 ml metanolu, zriedi sa 15 ml acetónu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 5 ml acetónu, prefiltruje sa a vysuší za získania 286 mg (96 %) zlúčeniny 139 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 320,20, C20H34NO2.

Príprava zlúčeniny 139

Rovnakým spôsobom, ktorý sa opisuje na prípravu zlúčeniny 139 zo zlúčeniny 88, reaguje zlúčenina 89 za získania 145 mg (77 %) zlúčeniny 139 vo forme bielej tuhej látky.

Príprava zlúčeniny 140

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 88 (200 mg, 0,55 mmol) s m-tolualdehydom (90 pl, 0,61 mmol). Purifikácia radiálnou chromatografiou 5 % zmesou metanol/etylacetát poskytuje 127 mg amínového medziproduktu. Roztok amínového medziproduktu, 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, 1 ml metanolu a 1 ml vody sa zahrievajú na teplotu 50 °C počas 20 h. Reakčná zmes sa trikrát vyberie 5 ml metanolu a odparí sa a raz 5 ml acetónu a odparí sa za získania 74 mg (30 %) zlúčeniny 140 vo forme šedobielej penovitej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 424,24, C28H42NO2.

Príprava zlúčeniny 141

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 88 (200 mg, 0,55 mmol) s 3,4-difluórbenzaldehydom (67 μΙ, 0,61 mmol). Purifikácia radiálnou chromatografiou 30 % zmesou etylacetát/hexán poskytuje 88 mg amínového medziproduktu. Roztok amínového medziproduktu, 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, 1 ml metanolu a 1 ml vody sa zahrieva na teplotu 50 °C počas 20 h. Reakčná zmes sa trikrát vyberie 5 ml metanolu a odparí sa a raz 5 ml acetónu a odparí sa za získania 73 mg (28 %) zlúčeniny 141 vo forme šedobielej penovitej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 446,42, C27H38F2NO2.

Príprava zlúčeniny 142

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 99 reaguje amín 88 (200 mg, 0,55 mmol) s 3,4-dimetoxybenzaldehydom (70 μΙ, 0,61 mmol). Purifikácia radiálnou chromatografou 40 % zmesou etylacetát/hexán poskytuje 67 mg amínového medziproduktu. Roztok amínového medziproduktu, 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, 1 ml metanolu a 1 ml vody sa zahrieva na teplotu 50 °C počas 20 h. Reakčná zmes sa trikrát vyberie 5 ml metanolu a odparí sa a raz 5 ml acetónu a odparí sa za získania 43 mg (16 %) zlúčeniny 142 vo forme žltej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1), 470,27, C29H44N04.

Príprava zlúčeniny 143

Roztok zlúčeniny 28 (200 mg, 0,540 mmol), 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a 3 ml vody sa zahrieva pri teplote 50 °C počas 72 h. Reakčná zmes sa odparí a zvyšok sa vyberie dvakrát 5 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa vyberie 3 ml metanolu, zriedi sa 20 ml acetónu a odparí sa. Zostávajúca látka sa trituruje 10 ml acetónu, prefiltruje sa a odparí za získania 179 mg (90 %) zlúčeniny 143 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 334,20, C21H36NO2.

Príprava zlúčeniny 144

Titanum-izopropoxid (270 μΙ, 0,92 mmol) sa pridá k roztoku ketónu 108 (250 mg, 0,67 mmol), anilínu (56 μΙ, 0,61 mmol) a 1,5 ml tetrahydrofuránu pri teplote miestnosti pod atmosférou argónu. Po 12 h sa pridá roztok nátriumbórhydrídu (65 mg, 1,7 mmol) v 2,3 ml etanolu a reakcia pokračuje počas ďalších 8 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 0,5 ml vody a zmes sa prefiltruje na odstránenie bielej zrazeniny. Roztok sa nanesie na stĺpec 600 mg živice MP-TsOH a eluuje 9 ml metanolu a potom 9 ml 2 M roztoku amoniaku v metanole. Frakcia amoniak/metanol sa odparí a zvyšok sa vyberie 4 ml tetrahydrofuránu a spracuje 500 mg PS-benzaldehydovej živice a prefiltruje sa na odstránenie všetkého zvyškového anilínu. Roztok sa odparí a zvyšok sa vyberie 2 ml zmesi tetrahydrofurán/voda 9:1 so 100 μΙ koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Po miešaní pri teplote miestnosti cez noc sa reakčná zmes odparí.

Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší za získania 62 mg zlúčeniny 144 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 410,03, C27H40NO2.

Príprava zlúčeniny 145

Spôsobom opísaným na prípravu zlúčeniny 144 reaguje zlúčenina 108 (250 mg, 0,67 mmol) s 3-(trifluórmetyl)anilínom. Medziprodukt sa purifikuje radiálnou chromatografiou a potom reaguje s 100 pl koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej v 2 ml zmesi tetrahydrofuránu a vody 9:1. Po miešaní pri teplote miestnosti cez noc sa reakčná zmes odparí a zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší za získania 23 mg zlúčeniny 145 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 477,94, C28H39F3NO2.

Príprava zlúčeniny 146

Titanum-izopropoxid (216 μΙ, 0,73 mmol) sa pridá k roztoku ketónu 108 (200 mg, 0,54 mmol), benzylamínu (53 μΙ, 0,49 mmol) a 1,2 ml tetrahydrofuránu pri teplote miestnosti pod atmosférou argónu. Po 12 h sa pridá roztok nátriumbórhýdridu (52 mg, 1,4 mmol) v 1,7 ml etanolu a reakcia pokračuje počas ďalších 6 h. Reakcia sa ukončí prídavkom 1 ml vody a zmes sa prefiltruje na odstránenie bielej zrazeniny. Roztok sa zriedi 70 ml dichlórmetánu, premyje 10 ml vody a 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, vysuší sa síranom horečnatým, prefiltruje sa a odparí. Purifikácia radiálnou chromatografiou postupnou elúciou 20 % zmesou etylacetát/hexán, etylacetátom a zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín 95:5:2 poskytuje 127 mg 3a-amínového medziproduktu a 26 mg 3p-amínového medziproduktu. Roztok 127 mg 3a-amínového medziproduktu, 1 ml zmesi tetrahydrofurán/voda 9:1 a 0,1 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa odparí, zvyšok sa vyberie 5 ml metanolu a odparí sa. Zostávajúca látka sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší za získania 118 mg (95 %) zlúčeniny 146 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 424,20 C28H42NO2.

Príprava zlúčeniny 147

Roztok 26 mg 3p-amínového medziproduktu, ktorého príprava sa opisuje pri príprave zlúčeniny 146, 1 ml zmesi hydrofurán/voda 9:1 a 0,1 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Reakčná zmes sa odparí, zvyšok sa vyberie 5 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa trituruje 1 ml cyklohexánu, prefiltruje sa a vysuší za získania 26 mg (100 %) zlúčeniny 147 vo forme bielej tuhej látky.

Hmotnostná spektrometria LC/MS (priama infúzia, elektrosprej +ve, 10 mM roztok octanu amónneho v zmesi voda/acetonitril 4:1) 424,21, C28H42NO2.

Príprava zlúčeniny 148

Roztok zlúčeniny 78 (63 mg, 0,18 mmol), 4 kvapky koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, 1 ml metanolu a 1 ml vody sa zahrieva na teplotu 50 °C počas 48 h. Reakčná zmes sa odparí a zvyšok sa vyberie dvakrát 5 ml metanolu a odparí sa. Zvyšok sa vyberie 2 ml hexánu, odparí sa a suší počas 2 h v Abderhaldenovom sušiacom zariadení za refluxu s acetónom za získania 69 mg (100 %) zlúčeniny 148 vo forme bielej tuhej látky.

Tabuľka 1

Zlúčenina	3α- alebo 3β-ΝΗ₂	Ri	r₂	r₃	HA	Hex IC₅₀ (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
49	α	ch₃	Η	Η	HCI	11,0	26,8
53	α	Η	Η	Η	AcOH	17,6	-0,8
54	α	Η	Η	Η	HCI	16,1	19,8
64	α	ch₃	F	Η	HCI	14,4	6,7
69	α	Η	CO2CH3	Η	AcOH	21,2	11,2
28	β	ch₃	Η	Η	HCI	6,8	29,0
83	β	ch₃	Η	Η	AcOH	7,7	30,3
89	β	Η	Η	Η	AcOH	11,5	15,0
95	β	ch₃	F	Η	HCI	13,5	11,2
78	α	Η	Η	ch₃	-	20,1	5,3
79	α	Η	Η	ch₃	HCI	18,4	9,1
80	α	Η	Η	ch₃	AcOH	10,7	7,4

Tabuľka 2

ÔH

Zlúčenina	3a- alebo 3β-ΝΗ₂	Ri	r₂	HA	Hex IC50 (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
70	a	0	0	AcOH	ND	7,0
72	a	OH	H	AcOH	ND	10,3
96	β	CH3CH2	H	HCI	7,8	47,9
97	a	CH3CH2	H	HCI	9,3	43,0

Tabuľka 3

Zlúčenina	3a- alebo 3β-ΝΗ₂	R1	r₂	r₃	Hex IC₅₀ (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
131	a	H	H	ch₃co	14,1	9,9
132	a	H	H	c₆h₅co	10,0	19,6
133	a	H	H	(CH₃)₂CHSO₂	15,9	13,8
134	a	H	H	C6H5SO2	16,7	25,1
135	β	CH₃	H	^H 0 ^hnh<1	15,1	37,3
137	a	H	H	CgHsNHCO	14,8	13,0
138	a	H	H	CH₃(CH₂)₂NHCO	15,0	9,0

Tabuľka 4

Zlúčenina	3α- alebo 3β-ΝΗ₂	Rf	r₂	r₃	R4	Hex IC₅₀ (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
139	β	ch₃	ch₃	H	H	10,3	26,3
140	α	ch₃	ch₃	H	3-(CH₃)C₆H₄CH₂	10,2	21,5
141	α	ch₃	ch₃	H	3,4-(F)₂C₆H₃CH₂	9,4	36,3
142	α	ch₃	ch₃	H	3.4- (CH₃O)₂C₆H₃CH₂	15,9	13,8
143	β	ch₃	ch₃ch₂	H	H	8,6	22,6
144	α a β	ch₃	ch₃ch₂	H	c₆h₅	6,9	13,0
145	α a β	ch₃	ch₃ch₂	H	3-(CF₃)C₆H₄	22,0	-0,2
146	α	ch₃	ch₃ch₂	H	c₆h₅ch₂	9,0	41,7
147	β	ch₃	ch₃ch₂	H	c₆h₅ch₂	18,1	36,3
148	α	ch₃	ch₃	ch₃	H	29,2	6,6

Tabuľka 5

Zlúčenina	R	HA	Hex IC50 (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
110	, O' / . - .	AcOH	10,9	39,7
111	o	HCI	9,3	53,1
113	ch₃nh	HCI	9,8	45,0
114	CH₃(CH₂)₂NH	HCI	10,2	37,9
115	CH₃(CH₂)₄NH	HCI	11,1	40,0
116	C5H9NH	AcOH	9,6	60,9
117	CeHnNH	AcOH	6.6	42,2
118	0*	AcOH	11,0	41,8
119	CH₃(CH₂)₂NH(CH₂)₂NH	2HCI	6,1	54,5
120	(CH₃)₂N(CH₂)₂NH	2HCI	9,1	44,0
121	H-O	AcOH	14,4	42,4
122	HOCH₂CH₂NH	HCI	12,3	31,4
123	HOCH₂(CH₂)₄NH	HCI	16,7	12,8
124	hoch₂ch₂nhch₂ch₂nh	2HCI	ND	21,0
125	3-(CH₃)C₆H₄NH₂	HCI	39,4	5,7
126	4-(HO)C₆H₄NH	HCI	9,7	45,0
127	4-(H₂NSO₂)C₆H₄NH	HCI	10,1	29,4

100

Zlúčenina	R	HA	Hex IC₅₀ (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
128	ΓΡ® Sr	AcOH	10,5	41,0
129	/X™	2AcOH	N/A	13,8

Tabuľka 6

Zlúčenina	R	HA	Hex IC50 (μΜ)	Vápnik (% inhibície pri 20 μΜ)
100	4-((CH₃)₂CH)C₆H4	AcOH	18,2	33,2
101	2-(F)C₆H₄	AcOH	10,3	16,3
102	3-(CF₃)C₆H₄	AcOH	10,0	9,5
103	2-(CH₃O)C₆H₄	AcOH	11,1	23,7
104	4-(CF₃O)C₆H₄	AcOH	9,5	30,3
105	3-(C₆H₅O)C₆H₄	AcOH	22,5	10,2
106	3-(NO₂)C₆H₄	-	8,8	8,1
107	3-C5H4N	2HCI	17,2	11,6

101

Príklady použitia

Príklad A

Účinok zvolených zlúčenín na pľúcny zápal vyvolaný alergénom

Schopnosť zlúčeniny potláčať alergénom indukované hromadenie zápalových buniek, ako sú eozinofily a neutrofily, v kvapaline z výplachu u senzibilizovaných živočíchov, ukazuje na protiastmatické pôsobenie tejto zlúčeniny. Tento modelový systém je zvlášť použiteľný na hodnotenie účinkov skúšanej látky pri liečení odpovede neskorej fázy astmy, keď sa objaví pľúcny zápal a druhá fáza bronchokonstrikcie. Táto skúška sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

Krysie samce Brown Norway sa senzibilizujú na ovalbumín jednou intraperitoneálnou injekciou 1 mg ovalbumínu adsorbovaného na 100 mg hydroxidu hlinitého v 1 ml sterilného fyziologického roztoku (kontrolné krysy dostávajú iba sterilný fyziologický roztok) v1. deň a ponechajú sa na senzibilizáciu do 21. dňa. Zlúčeniny sa podávajú perorálne denne počas troch dní pred záťažou (dni 19, 20, 21) a jeden deň po záťaži (deň 22), tretia dávka sa podáva 2 h pre záťažou a štvrtá dávka 24 h po záťaži (objem = 300 μΙ/dávka). Krysy sa zaťažujú 0,5 % ovalbumínom vo fyziologickom roztoku z Devillbisovho nebulizačného zariadenia počas 60 min 21. deň.

h po záťaži sa zvieratá utratia predávkovaním intraperitoneálne podanou sodnou soľou pentobarbitalu a uskutoční sa výplach pľúc 2 x 7 ml chladného fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom. Získaná kvapalina z výplachu sa umiestni na ľad. Kvapalina z bronchoalveolárneho výplachu sa centrifuguje a supernatant sa odstráni. Peleta sa resuspenduje vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom pri teplote 4 °C. Pripravia sa centrifugované bunky a zafarbia sa na diferenciáciu a počítanie bunkových typov.

Ochranné účinky rôznych testovaných zlúčenín na alergénom indukovaný zápal pľúc zahrňujú tabuľky 7 a 8. Závislosť odpovede od dávky zvolených zlúčenín ukazuje tabuľka 9. Skúšaná látka sa podáva vo vehikule 300 μΙ kukuričného oleja (tabuľky 7 a 8) alebo vody (tabuľka 9). Kontrolné zvieratá dostali 300 μΙ kukuričného oleja alebo samotnej vody bez lieku. Hodnoty v tabuľkách 7, 8 a 9 predstavujú percento inhibície akumulácie leukocytov vo vzťahu ku kontrolným zvieratám. Negatívne hodnotenie v tabuľke 7, 8 alebo 9 ukazuje na jav exacerbácie nad hodnoty

102 u kontrolných zvierat.

Tabuľka 7

Účinok skúšaných látok (5 mg/kg/deň počas 4 dní, perorálne) na ovalbumínom indukovanú akumuláciu zápalových buniek v kvapaline z výplachu pľúc senzibilizovaných krýs Brown Norway

Zlúčenina	% inhibície eozinofilov	% inhibície neutrofilov	% inhibície lymfocytov
83	67	34	38
97	40	52	56
96	-9	40	19
64	62	70	81
89	57	60	64
28	85	87	124
53	24	57	13
95	14	45	30
49	52	36	73
135	20	58	107

103

Tabuľka 8

Účinok zvolených látok (1 mg/kg/deň počas 4 dní, perorálne) na ovalbumínom indukovanú akumuláciu zápalových buniek v kvapaline z výplachu pľúc senzibilizovaných krýs Brown Norway

Analóg	% inhibície eozinofilov	% inhibície neutrofilov	% inhibície lymfocytov
142	-131	-1	-42
54	-82	-19	-7
107	-122	23	-28
124	-55	-76	-26
129	-296	-114	-71
146	8	24	-27
147	40	58	36
131	16	57	21
138	-52	35	33
133	-43	40	28

Tabuľka 9

Dávkovo dependentný účinok zvolených zlúčenín (opakované dávkovanie, 4 dni, 4 x denne perorálne) na ovalbumínom indukovanú akumuláciu zápalových buniek v kvapaline z pľúcneho výplachu u senzibilizovaných krýs Brown Norway

analóg	% inhibície eozinofilov	% inhibície neutrofilov	% inhibície lymfocytov
mg/kg	1	0,3	0,1	0,03	1	0,3	0,1	0,03	1	0,3	0,1	0,03
89	71	80	35	-	66	72	25	-	6	70	2	-
28	60	71	29	5	41	66	-10	-26	70	85	50	-5
139	42	41	46	-	63	62	42	-	56	34	19	-
143	48	29	28	-	64	25	57	-	-22	-37	-43

104

Príklad B

Účinok zlúčeniny 83 na opuch ucha u myší vyvolaný dráždivou látkou

Myši sa jednoznačne identifikujú umiestnením značky na chvost. Myši dostávajú perorálne 15 mg/kg skúšanej látky v 100 μΙ 45 % β-cyklodextrínu vo fyziologickom roztoku. Myši sa rýchlo anestetizujú 2 % halotanom a 2 pg forbol-12myristát-13-acetátu v 25 μΙ acetónu sa podávajú na vonkajší a vnútorný povrch ľavého ucha myši. Acetón sa aplikuje na pravé ucho myši rovnakým spôsobom a slúži ako kontrola (vehikulum). Kontrolné zvieratá sa liečia rovnakým spôsobom avšak bez skúšanej látky. Po 3 h sa myši utratia dislokáciou krčnej chrbtice a z uší sa vyberú štandardné bioptické vzorky a odvážia sa na najbližšiu desatinu mg. Údaje sa analyzujú z rozdielu medzi každým ľavým a pravým uchom a potom výpočtom % inhibície opuchu (((stredná Rx/stredná s podráždením))x 100)-100.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu ukazujú ochranné účinky proti opuchu ucha u myši vyvolaného dráždivou látkou. Napríklad zlúčenina 83 potláča opuch ucha vyvolaný dráždivou látkou u myši o 38 % v porovnaní s kontrolnými zvieratami.

Príklad C

Účinok zlúčenín na uvoľňovanie hexózaminidázy z línie krysích žírnych buniek (RBL2H3)

Protialergické účinky zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa hodnotia meraním jej účinku na antigénom vyvolanú sekréciu hexózaminidázy z pasívne senzibilizovaných krysích žírnych buniek. Schopnosť skúšanej látky potláčať uvoľňovanie obsahu granúl žírnych buniek, napr. histamínu a hexózaminidázy, ukazuje na antialergickú a/alebo antiastmatickú aktivitu tejto zlúčeniny. Hexózaminidáza sa uvoľňuje z väčšiny analógov granúl žírnych buniek histamínom a ďalšími mediátormi v priebehu záťaže antigénom. Skúška sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

Bunky RBL-2H3 sa pestujú a pasívne senzibilizujú počas 1 h pri teplote 37 °C na dinitrofenol (DNP) s použitím ľudskej protilátky proti DNP (IgE). Bunky sa inkubujú so skúšanou látkou počas 30 min pri teplote 37 °C a stimulujú 0,5 pg/ml DNP-HSA (antigén) počas 30 min. Alikvóty supernatantu sa odstránia a použijú na meranie

105 hexózaminidázy uvoľnenej počas záťaže antigénom. Množstvo prítomnej hexózaminidázy v supernatante sa stanoví kolorimetricky monitorovaním enzýmového metabolizmu p-nitrofenyl-N-acetyl-p-D-glukozaminidu (p-NAG) v priebehu 60 min pri vlnovej dĺžke 405 nm. Účinok každej skúšanej látky sa stanoví ako % odpovede vyvolanej antigénom (mínus základné uvoľňovanie) získanej za prítomnosti samotného dimetylsulfoxidu. Tieto hodnoty sa použijú na stanovenie stupňa inhibície uvoľňovania hexózaminidázy indukovanej antigénom z buniek.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu preukazujú schopnosť inhibovať uvoľňovanie hexózaminidázy ako odpoveď na stimuláciu antigénom. Zlúčeniny sa testujú pri koncentráciách 0,3, 3, 10 a 30 μΜ a vypočíta sa IC₅o. Tieto údaje sú zhrnuté v tabuľkách 1 až 6. Napríklad zlúčenina 119 pri koncentrácii 6,1 μΜ inhibuje uvoľňovanie hexózaminidázy o 50 % v dôsledku odpovede na antigénový podnet.

Príklad D

Metabolická stabilita vybraných zlúčenín v ľudských frakciách S9

Terapeutická účinnosť skúšanej látky sa môže priamo vzťahovať na jej metabolickú stabilitu in vivo. Väčšina známych liekov na trhu sa metabolizuje skupinou enzýmov známych ako enzýmy P450. Frakcia S9 ľudskej pečene obsahuje všetky enzýmy P450 a metabolizmu nových chemických látok sa tiež môžu zúčastniť cytoplazmatické enzýmy. Metabolizmus in vitro s použitím ľudských frakcií S9 je štandardnou skúškou na hodnotenie relatívnej metabolickej stability nových zlúčenín. Tento test sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

Činidlá sa nechajú roztopiť na ľade a spoja sa na prípravu Master Mix” nasledujúcim spôsobom: fosforečnan draselný (100 mM, pH 7), G6P (0,25 mM), G6PDH (2 jednotky/ml), NADPH (1 mM), UDP (0,25 mM), APPS (0,25 mM) a frakcia S9 (2 mg/ml). Objem 498 μΙ zmesi Master mix sa rozdelí do mikrocentrifugačných skúmaviek. Objem 2 μΙ 2,5 mM roztoku testovanej zlúčeniny (konečná koncentrácia 10 μΜ) sa uvedie do stredu viečka príslušnej skúmavky a viečka sa jemne uzatvoria tak, aby sa zabránilo premiešaniu. Synchrónna kombinácia skúšanej látky a zmesi Master mix sa dosiahne súčasným prevracaním skúmaviek 10 x a tie sa potom inkubujú pri teplote 37 °C a pretrepávajú pri frekvencii 150 min*¹ príslušný inkubačný čas. Pri pokračovaní inkubácie sa všetky vzorky času 0 premiešajú jednotlivo

106 prevracaním trikrát a potom sa ihneď pridá 500 μΙ ľadovo chladného acetonitrilu a uskutoční sa prevracanie trikrát na zastavenie reakcie. Ihneď po každej 15 minútovej a 30 minútovej inkubácii sa pridá ľadovo chladný acetonitril do každej skúmavky a skúmavky sa zamiešajú obracaním trikrát. Všetky skúmavky so vzorkami sa inkubujú pri teplote -80 °C počas najmenej 15 min, nechajú sa roztopiť a znova sa zamiešajú prevracaním. Alikvóty 650 μΙ sa prevedú do mikrofiltračných skúmaviek Chromatographic Specialties (0,2 pm nylonová membrána, C18505) a centrifugujú sa pri frekvencii otáčania 13000 min'¹ počas 48 s. Filtráty vzoriek sa ukladajú pri teplote -80 °C.

Filtráty vzoriek sa analyzujú kvapalinovou chromatografiou a hmotnostnou spektrometriou a zostávajúci percentuálny obsah sa vypočíta po inkubácii 15 a 30 min vzhľadom na inkubáciu v minúte 0.

Metabolická stabilita rôznych zlúčenín sa sumarizuje v tabuľke 10 ako zostávajúci percentuálny obsah po inkubácii 15 alebo 30 min s frakciou ľudskej pečene S9.

107

Tabuľka 10

Metabolická stabilita zvolených zlúčenín po inkubácii 15 a 30 min s frakciou ľudskej pečene S9 ako percentuálny obsah zostávajúci z východiskovej koncentrácie po čase inkubácie 0 min.

Zlúčenina	% zostávajúce po 15 min	% zostávajúce po 30 min
83	92±19	91±21
97	94±10	89±12
96	92+19	94±21
89	100±17	98±16
28	100±6	104±12
49	93±6	85±8
64	104±4	88±5
139	109+26	100+10
143	100±3	99±10
146	82+6	63±9
107	84±5	62±6
142	80+11	55±2
69	73±24	63±6
104	53±10	56±18
141	100+9	26+4
134	85±54	36±15
137	93+31	71+17
138	71 ±4	65±65
132	60+17	40+9
79	67±6	61±14

Príklad E

Rozpustnosť zvolených zlúčenín vo fyziologicky kompatibilných zmesiach

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu vykazujú dobrú rozpustnosť vo vode. Napríklad

108 zlúčenina 83 má rozpustnosť vo vode 225 mg/ml. Zlúčenina 83 substituovaná hydroxylom na uhlíku C3 má rozpustnosť vo vode nižšiu ako 60 pg/ml. Zlúčeniny 28 a majú pri teplote miestnosti rozpustnosť zhruba 30 mg/ml, čo možno významne zvýšiť zahrievaním. Toto neočakávané zistenie ukazuje, že tieto 3-aminozlúčeniny možno jednoducho formulovať do terapeutických prípravkov.

Príklad F

Účinok zvolených skúšaných látok na tok vápenatých iónov vyvolaný antigénom

Zvýšenie cytoplazmatickej koncentrácie vápenatých iónov je bežným a zásadným dejom nasledujúcim po aktivácii mnohých typov bunkových povrchových receptorov. Vzrastanie intracelulárneho vápnika nastávajúce po agonistickej aktivácii hydrolýzy inozitolových lipidov je výsledkom uvoľňovania vápnika z endoplazmatického retikula a prítoku vápnika plazmatickou membránou. Nárasty koncentrácie vápnika v cytosole sa zúčastňujú mnohých dôležitých bunkových odpovedí pri zápalovom procese vrátane adhézie, motility, génovej expresie, proliferácie a degranulácie. Zmeny intracelulárnych koncentrácií vápnika môžu ovplyvniť krátkodobé i dlhodobé bunkové odpovede. Nasleduje spôsob skúšky na vyhodnotenie pôsobenia skúšanej látky na tok vápnika.

Bunky E6.1 Jurkatovho klonu pestované v prostredí RPMI doplnenom 10 % FBS a 2 mM L-glutamínu sa prenesú do kónických skúmaviek 50 ml a centrifugujú sa počas 5 min pri frekvencii otáčania 900 min'¹ za vytvorenia pelety buniek. Výsledné supernatanty sa odstránia a každá peleta sa premyje 10 ml HBSS. Bunkové suspenzie sa zhromažďujú a centrifugujú počas 5 min pri frekvencii otáčania 900 min'¹ za vytvorenia pelety buniek. Výsledný supernatant sa odstráni a peleta sa resuspenduje v HBSS pri koncentrácii buniek 1 x 10⁷ buniek/ml. Bunková suspenzia sa prenesie do Petriho misky 20 mm a inkubuje sa pri teplote 37 °C za prítomnosti 5 % oxidu uhličitého počas 20 min.

Jeden objem Fúra 2AM sa zmieša s jedným objemom detergentu Plutonic F127. Bunky sa označia 4 pl roztoku sondy na každý ml bunkovej suspenzie. Petriho miska sa zabalí do hliníkovej fólie na ochranu proti svetlu a umiestni na trepacie zariadenie na misky počas 30 min pri teplote miestnosti.

Nasledujúce kroky sa uskutočňujú v digestore s laminárnym prúdením s

109 vypnutými fluorescenčnými svetlami. Petriho miska sa odstráni z trepacieho zariadenia a označená bunková suspenzia sa prenesie do kónickej skúmavky 15 ml a premyje sa dvakrát HBSS ako vyššie. Peleta buniek sa resuspenduje v 12 ml HBSS a nechá sa zabalená vo fólii počas 30 min pri teplote miestnosti. Alikvót označenej bunkovej suspenzie (100 μΙ/jamka) sa prenesie do nepriehľadnej bielej misky pre tkanivové kultúry Dynex 96. Pridá sa po 50 μΙ každej skúšobnej vzorky do príslušných jamiek a obsah sa inkubuje po 10 min pri teplote 37 °C v zariadení na odčítanie dosiek Wallac 1320 Vietor™ (skúšobné vzorky sa pripravia v HBSS s koncentráciou 20 mM, konečná koncentrácia je 20 μΜ). Zvolené zlúčeniny sa testujú ohľadne aktivity vo vzťahu k dávke. Skúšobné vzorky a aktivátor (anti-CD3 mAb s konečnou koncentráciou 4 pg/ml, PharMingen) sa pridajú rôzne (50 μΙ) tak, aby minimálny čas na získanie bodu prvých údajov po stimulácii bol zhruba 30 s. Odpoveď prítoku vápenatých iónov na anti-CD3 mAb sa meria ako skúška konečného bodu”. Celá doska sa odčíta v priebehu 100 s pri pohybe 1 s na jamku.

Miska sa odčíta pred prídavkom anti-CD3 na sledovanie nešpecifického účinku vzoriek/liekov. Fluorescenčná emisia sa meria pri vlnovej dĺžke 510 nm s excitáciou medzi 340 a 380 nm každú sekundu s použitím páru filtrov na excitáciu/emisiu. Údaje pre tieto dve vlnové dĺžky sa poskytujú ako pomer hodnôt pre excitačné vlnové dĺžky. Tento pomer je nezávislý od intracelulámeho farbiva a bunkovej koncentrácie a umožňuje skutočné porovnanie medzi experimentmi.

Účinok zvolených zlúčenín na tok vápnika v E6.1 bunkách Jurkatovho klonu zaťažených antigénom je zhrnutý v tabuľkách 1 až 6. Napríklad zlúčenina 116 poskytuje inhibíciu s 60,9 % pri koncentrácii 20 μΜ. Zlúčenina 119 má IC50 nižšiu ako alebo rovnú 10 μΜ pri stanovení odpovede v závislosti od dávky. To ukazuje na podstatný účinok toku vápnika, ktorý by mohol byť výhodný pri akejkoľvek patológii choroby, pri ktorej je vápnik druhou významnou messengerovou alebo efektorovou molekulou vrátane, avšak bez obmedzenia, ischemického/reperfúzneho poškodenia, ako je mŕtvica alebo infarkt myokardu, zápalového poškodenia, ako je astma alebo alergia, nervových alebo svalových porúch, ako je Parkinsonova choroba alebo epilepsia, srdcových arytmií alebo hypertenzie.

Príklad G

110

Účinok zvolených zlúčenín na zmeny funkcie pľúc vyvolané alergénom

Pri astme je skorá odpoveď dýchacích ciest na zápal alergénom charakterizovaná okamžitou bronchokonstrikciou, ktorá vrcholí 20 až 30 min po expozícii podnetom a ktorá normálne vymizne zhruba po dvoch h. Protizápalové lieky nie sú všeobecne aktívnymi bronchodilatátormi a nie sú príliš účinné pri kontrole akútnej astmatickej bronchokonstrikcie. To vedie k nutnosti kombinovanej liečby pri liečení bronchokonstrikcie a zápalu.

Morčatá Cam-Hartley sa senzibilizujú na ovalbumin (OA) v skupinách po 5 až 6 zvierat expozíciou aerosólovému roztoku 1 % OA vo fyziologickom roztoku počas 15 min 2 po sebe nasledujúce dni s použitím nebulizátora DeVilbiss s prídavnou jednotlivou intradermálnou injekciou 3 pg OA vo fyziologickom roztoku v deň 1. Zvieratá vykazujú maximálnu citlivosť na antigén zhruba 14 deň po počiatočnej expozícii. V deň 14 sa zvieratá narkotizujú ketamínom (50 mg/kg intraperitoneálne) a xylazínom (10 mg/kg intraperitoneálne), odvážia sa a potom sa udržujú na 1 % halotane dodávanom nosným kužeľom. Ľavá karotída sa kanyluje trubičkou PE90 obsahujúcou 200 jednotiek/ml heparínu vo fyziologickom roztoku. Uskutoční sa tracheotómia a vloží sa kanyla plnená kvapalinou (PE 160) zhruba 7 cm do pažeráka. Zviera sa umiestni do pletysmografu a trachea sa pripevní k tracheálnej trubičke z nehrdzavejúcej ocele. Kanyla karotídy sa pripevni k prevádzaču tlaku na sledovanie krvného tlaku a srdcovej tepovej frekvencie. Morča sa paralyzuje pankuróniumbromidom (0,8 mg/kg) a ventiluje vzduchom pri frekvencii 60 Hz a objemu prísunu 3 ml s použitím ventilačného zariadenia pre malé zvieratá Harvard.

Údaje sa zaznamenávajú pre periódy 20 s pri frekvencii odberu 100 Hz na počítačovom fyziologickom záznamovom systéme s použitím fyziologického programového vybavenia DIREC a analyzujú sa programovým vybavením ANADAT. Pľúcny odpor a dynamická pľúcna poddajnosť sa získajú z hodnoty signálov toku a tlaku podľa spôsobu Von Neeguarda a Wirze (1927) s použitím izovolumetrického viacbodového regresného modelu analýzy. (Ludwig, Robatto, a kol. 1991) a vypočítajú sa ako absolútne zmeny pľúcneho odporu (R_Ll cm H₂O/ml/s) alebo pľúcna poddajnosť (Cdyn, ml/cm/HzO). Signály objemu a tlaku sa kalibrujú pred každým súborom experimentov štandardnými spôsobmi.

Niekoľko pľúcnych funkčných meraní sa získa v priebehu času 5 až 10 min na zaistenie stabilnej východiskovej hodnoty a potom sa zvieratá zaťažia OA (2 % vo

111 fyziologickom roztoku) podávaným v priebehu 6 nádychov vo forme nebulizovaného aerosólu pri prietoku 5 l/min. Pľúcna a kardiovaskulárna funkcia sa spojito sledujú v priebehu experimentu, i keď sa údaje odoberajú v daných časových bodoch po záťaži antigénom (10 s, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20 a 30 min).

Skúšané látky sa podávajú pod ľahkou halotanovou narkózou perorálnou sodnou (0,1 až 1,0 mg/kg/deň, denne) v 300 μΙ polyetylénglykolu-200 počas 4 dní pred záťažou konečnou dávkou podávanou 2 h pred záťažou antigénom.

Ochranné účinky zvolených testovaných zlúčenín proti bronchokonstrikcii vyvolanej alergénom sú znázornené na obrázkoch 4 a 5. Trvanie aktivity zlúčeniny 89 ukazujú obrázky 6 a 7. Údaje sa znázorňujú ako stredná hodnota ± smerodajná odchýlka strednej hodnoty. Inhibícia bronchokonstrikcie testovanými zlúčeninami by bola prínosom pri ktorejkoľvek chorobe, pri ktorej je akútna konstrikcia hladkého svalstva odpoveďou na zápal alergénom, ako je astma alebo alergia.

Všetky publikácie a patenty citované v tomto opise sa tu zahŕňajú formou odkazu v tom rozsahu, ako keby bola každá jednotlivá publikácia alebo patentová prihláška špecificky a jednotlivo zahrnutá odkazom. Napríklad kniha v rade Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations,

2. Vydanie, Richard C. Larock, John Wiley and Sons, Inc., 1999 a predovšetkým odkazy, ktoré sa tu citujú, sa tu zahŕňajú formou odkazu pre všetky účely.

Z predchádzajúceho textu je zrejmé, že i keď sa tu opisujú konkrétne uskutočnenia tohto vynálezu na ilustráciu, možno uskutočniť rôzne modifikácie bez odchýlky od podstaty a rozsahu tohto vynálezu.

112

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Zlúčenina všeobecného vzorca

R- i³ a jej farmaceutické soli, solváty, stereoizoméry a prekurzory liečiva, oddelene alebo v zmesi, v ktorých nezávisle a vo všetkých prípadoch

R¹ a R² sa volí z prípadov atóm vodíka, atóm kyslíka tak, aby vznikla nitroskupina alebo skupina oxímu, aminoskupina, skupina -SO₃-R a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka prípadne obsahujúce 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka, fosforu, kremíka a síry, kde R² môže byť priama väzba k atómu číslo 3 alebo môžu skupiny R¹ a R², spolu s atómom dusíka, ku ktorému sú obidve pripojené, tvoriť heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a môže prípadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov dusíka, kyslíka a kremíka alebo R¹ môže byť reťazec s 2 alebo 3 atómami pripojený k atómu číslo 2, takže -N-R¹ tvorí časť kondenzovanej bicyklickej štruktúry kruhu A,

113

R³ a R⁴ sa volí z prípadov priamych väzieb k atómom číslo 6 respektíve 7 takým spôsobom, že sa získajú karbonylové skupiny, atóm vodíka alebo chrániace skupiny, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú alebo karbonylovú skupinu, atómy označené číslami 1 až 17 sú vždy atómy uhlíka, pričom atómy uhlíka označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15, 16 a 17 môžu byť nezávisle substituované (a) jednou zo skupín =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))n- a -(O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je v rozmedzí od 1 až do asi 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sa nezávisle volia z -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ a -OR⁶, a atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9, 10, 13 a 14 môžu byť nezávisle substituované jednou zo skupín -X, -R⁵, -N(R¹)(R²) alebo -OR⁶, naviac k menovaným skupinám -OR³ a -OR⁴ môže byť každý z atómov uhlíka číslo 6 a 7 nezávisle substituovaný jedným zo substituentov -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ alebo OR⁶, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle plne nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený,

R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, X a C1-30 organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený zo súboru zahrňujúceho atóm boru, halogénu, dusíka, kyslíka,

114 kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu vytvárať kruh spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú,

R⁶ je atóm vodíka alebo chrániaca skupina, takže -OR⁶ je chránená hydroxylová skupina, kde vicinálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni vicinálne hydroxylové skupiny a kde geminálne skupiny -OR⁶ môžu spolu tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni karbonylovú skupinu a

X predstavuje fluorid, chlorid, bromid a jodid, ale nezahrňuje pregnan-6,7-diol-3-ón, 3-oxím, 6,7-diacetát (6α,7β), 3-semikarbazonylhelvolovú kyselinu, metylhelvonát 2,4-dinitrofenylhydrazónu, 2,4-dinitrofenylhydrazón helvolovej kyseliny alebo metylhelvolinát 2,4-dinitrofenylhydrazónu.
2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde číslice 1 až 16 predstavujú vždy atómy uhlíka a atómy uhlíka označené číslami 1, 2, 4, 11,12, 15 a 16 môžu byť nezávisle substituované (a) jedným z =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))_n a

-(O(C(R⁵)(R⁵)(R⁵))_nO)-, kde n je od 1 do asi 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich substituentov, ktoré sa nezávisle volia z -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ a -OR⁶ a číslica 17 predstavuje atóm uhlíka substituovaný (b) jedným z =C(R^5a)(R^5a), =C=C(R^5a)(R^5a) a

115

-C(R^5a)(R^5a)(C(R^5a)(R^5a))_n-, kde n je od 1 do zhruba 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich substituentov, ktoré sa nezávisle volia -X, -N(R¹)(R²) a -R^5a, kde R^Sa sa vo všetkých prípadoch nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, X a C^o organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený zo súboru zahrňujúceho atómy boru, halogénu, dusíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵ môžu tvoriť kruh spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú.
3. Zlúčenina podľa nároku 2, kde R^5a vo všetkých prípadoch je nezávisle zvolené zCi-30 uhľovodíkových, C1-30 halogénovaných uhľovodíkových, Ci._3Ohydrogénhalogénovaných uhľovodíkových skupín, atómu vodíka a X.
4. Zlúčenina podľa nároku 2, kde R^5a vo všetkých prípadoch je nezávisle zvolené z Cmo uhľovodíkových, Cmo halogénovaných uhľovodíkových, Cmo hydrogénhalogénovaných uhľovodíkových skupín, atómu vodíka a X.
5. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, kde R¹ a R² sú zvolené z prípadov atóm vodíka, atóm kyslíka, takže sa vytvárajú nitroskupiny, skupiny oxímu, aminoskupiny a skupiny -SO₃-R, a organické skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka, ktoré prípadne môžu obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov kyslíka, fosforu, kremíka a síry, kde R² môže byť priama väzba k číslu 3 alebo R¹ a R² môžu spolu s atómom dusíka, ku ktorému sú obidve pripojené, tvoriť heterocyklickú štruktúru, ktorá môže byť časťou organickej skupiny s 1 až 30 atómami uhlíka a môže prípadne obsahovať 1 až 6 heteroatómov zvolených z atómov kyslíka a kremíka alebo R¹ môže byť reťazec s 2 až 3 atómami pripojený k číslu 2, takže -N-R¹- tvorí časť bicyklickej štruktúry kondenzovanej s kruhom A.
6. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5, kde

116 uhlíky označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, pokiaľ uvažovaný atóm uhlíka nie je časťou nenasýtenej väzby, uhlíky označené číslicami 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, pokiaľ uvažovaný atóm uhlíka nie je časťou nenasýtenej väzby, uhlík označený číslicou 10 je substituovaný metylovou skupinou a uhlík označený číslicou 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby.
7. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, kde uhlíky označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, uhlíky označené číslicami 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, uhlík označený číslicou 10 je substituovaný metylovou skupinou a uhlík označený číslicou 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby.
8. Zlúčenina podľa nároku 1, kde

R¹ a R² sú atómy vodíka,

R³ a R⁴ sa volia z prípadov priamej väzby k atómom číslo 6 respektíve 7 takým spôsobom, že sa vytvárajú karbonylové skupiny, atómu vodíka alebo chrániacej skupiny, takže R³ a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú alebo karbonylovú skupinu a naviac ku skupinám -OR³ a -OR⁴ je každý z atómov číslo 6 a 7 substituovaný atómom vodíka, pokiaľ to nie je vylúčené tým, že -OR³ alebo -OR⁴predstavuje karbonylovú skupinu, atómy uhlíka číslo 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, pokiaľ uvažovaný atóm uhlíka nie je časťou nenasýtenej väzby,

117 atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, pokiaľ uvažovaný atóm uhlíka nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka označený číslicou 10 je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka označený číslicou 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka označený číslicou 17 je substituovaný (a) jednou zo skupín =0, =C(R⁵)(R⁵), =C=C(R⁵)(R⁵), -C(R⁵)(R⁵)(C(R⁵)(R⁵))n a -(O(C(R⁵)(R⁵))nO)-, kde n je od 1 do zhruba 6 alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sú nezávisle zvolené z -X, -N(R¹)(R²), -R⁵ a -OR⁶, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle plne nasýtený, čiastočne nasýtený alebo celkom nenasýtený,

R⁵ vo všetkých prípadoch je zvolené z prípadov atóm vodíka, X a CKo organický zvyšok, ktorý môže prípadne obsahovať aspoň jeden heteroatóm zvolený zo súboru zahrňujúceho atómy boru, halogénu, dusíka, kyslíka, kremíka a síry, kde dve geminálne skupiny R⁵, môžu spolu s atómom uhlíka, ku ktorému sa obidve pripájajú, tvoriť kruh,

R⁶ je atóm vodíka alebo chrániaca skupina, takže -OR⁶ je chránená hydroxylová skupina, kde vicinálne skupiny -OR⁶ môžu spoločne tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni vicinálne hydroxylové skupiny a kde geminálnej skupiny -OR⁶môžu spoločne tvoriť cyklickú štruktúru, ktorá chráni karbonylovú skupinu a

X je fluorid, chlorid, bromid a jodid.
9. Zlúčenina podľa nároku 8, kde R¹ a R² sú atómy vodíka,

R³ a R⁴ sú zvolené z prípadov atóm vodíka a chrániace skupiny, takže R³a/alebo R⁴ je časťou skupiny Chrániacej hydroxylovú skupinu,

118 atómy uhlíka označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka označený číslicou 10 je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka označený číslicou 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby, atóm uhlíka označený číslicou 17 je substituovaný (a) jednou zo skupín =C(R⁵)(R⁵) a =C=C(R⁵)(R⁵) alebo (b) dvoma z nasledujúcich skupín, ktoré sú nezávisle zvolené z -X, -N(R¹)(R²) a -R⁵, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle plne nasýtený alebo čiastočne nasýtený,

R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka, X a Cv₃₀ uhľovodíková, halogénované uhľovodíková a hydrogénhalogénovaná uhľovodíková skupina a

X je fluorid, chlorid, bromid a jodid.
10. Zlúčenina podľa nároku 9, kde R¹ a R² sú atómy vodíka,

R³ a R⁴ sú zvolené z prípadov atóm vodíka a chrániace skupiny, takže R³a/alebo R⁴ je časťou skupiny chrániacej hydroxylovú skupinu, atómy uhlíka označené číslicami 1, 2, 4, 11, 12, 15 a 16 sú všetky substituované dvoma atómami vodíka, atómy uhlíka označené číslicami 5, 8, 9 a 14 sú všetky substituované jedným atómom vodíka, atóm uhlíka označený číslicou 10 je substituovaný metylovou skupinou, atóm uhlíka označený Číslicou 13 je substituovaný metylovou skupinou, pokiaľ nie je časťou nenasýtenej väzby,

119 atóm uhlíka označený číslicou 17 je substituovaný (a) jednou =C(R⁵)(R⁵) alebo (b) dvoma -R⁵, každý z kruhov A, B, C a D je nezávisle celkom nasýtený alebo čiastočne nasýtený a

R⁵ sa vždy nezávisle volí z prípadov atóm vodíka a Ci.i₀ uhľovodíková skupina.