SE469256B - Rengoeringsprodukt - Google Patents

Description

469 256. rengöringsproduktens matris. Sådan adherens kan åstad- kommas genom att man helt enkelt doppar matrisen i en lösning innehållande den aktiva komponenten, som häri- genom uppsuges i materialet och efter materialets tork- JS 11.; 10 15 20 25 30 ning kvarstannar i detsamma.

Det är emellertid föredraget att mera specifikt binda mannospyranosiden via dess p-aminogrupp till produktmatrisen. Sådan bindning är företrädesvis en kovalent bindning, antingen direkt till mannosidens p-aminogrupp eller indirekt via någon form av linker, såsom är välkänt inom tekniken.

Ett annat sätt att fixera den aktiva komponenten rengöringsprodukten enligt sampolymerisation låta den vilket i detta senare fall uppfinningen är att genom ingå i matrismaterialet, lämpligen innefattar en sampolymer av ett mannosderivat och en amid. f'coNHR2 coNH2 ' l i l l~c-cH2 - (c-CH2) 'l 'l R3 I R3 vari R2 har formeln ~_ R3 är H eller CH3; 1 I I (I) -I I _J ü t* KÉåÄC/Kijy X är ett helt tal från 0 till ca 20; och m är sådan att sampolymerens molekylvikt är från ca 5 till ca 2000 KDa.

Ett särskilt föredraget mannosderivat för använd- ning vid sådan sampolymerisation har formeln R2-NH-co-p-R3 l cH2 (II) P- 10 15 20 25 30 35 469 256 vari R2 och R3 har ovan angivna betydelser. För ytterligare de- taljer beträffande tekniken för att utföra sädan sampolymerisation hänvisas till svenska utläggningsskriften 463314, vars hela innehàll ingar häri genom referensen därtill.

Som tidigare antytts kan rengöringsprodukten enligt före- liggande uppfinning föreligga i form av en servett eller en pro- duktrulle likt toalettpapper, men den kan även utgöras av en s.k. vàtservett som da lämpligen för att undvika för tidig av- dunstning är innesluten i ett tättslutande hölje.

Föreliggande uppfinning kommer i det följande att illus- treras ytterligare genom konkreta exempel, vilka emellertid ej far tolkas sa att de inverkar inskränkande pà uppfinningen.

EXEMPEL 1 a) Koppling av mannosid till fraktogel.

Som utgàngsmaterial vid kopplingen användes aldehydo Frac- togel TSK HV 65(F) (100 g) i fuktig avfiltrerad form (0,1 M KH2PO4, justerad med NaOH eller HCl till pH 7), 10 umol p-amino- fenyl-&~D-mannopyranosid (A 1394, Sigma), 630 mg NaCNBH3 (10 och 250 mg NaBH4. 4 Fraktogelen avvattnas ordentligt och placeras i en sug- umol) kolv, varefter 0,1 M fosfatbuffert, pH 7 (400 ml), mannopyrano- siden och natriumcyanoborhydriden tillsättes. Kolven placeras pà ett skakbord och uppslamning sker genom igàngsättning av skak- bordet. Reaktionen fàr fortgà under ca 4 dygn vid rumstempera- tur. Överskottet av formylgrupper destrueras sedan genom för- siktig tillsats av natriumborhydrid, varefter kolvens innehàll skakas under ytterligare 1 timme. Gelen avfiltreras och tvättas omsorgsfullt med vatten. Därefter omskakas gelen i rent vatten under ytterligare 1 timme innan den slutligen avfiltreras. Den färdiga gelen förvaras i 25% etanollösning fram till försöket med bindning av E.coli till densamma. b) Bindning av E.coli till mannosidsubstituerad fraktogel. 50 ul E.coli KSKP 373, 382 respektive 395 märkta med ra- dioaktiv jod sattes till 1,5 ml fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS). Till 0,2 ml av vardera bakteriesuspensionen sattes 0,2 ml r 10 15 20 25 30 35 469 256 _ suspension av substituerad respektive osubstituerad fraktogel.

Suspensionerna tillàtes inkubera under 30 min pà skakbord, varefter centrifugering sker under 10 min vid 500 varv/min.

Supernatanten avdekanteras och radioaktiviteten mätes i fraktogelen före tvätt, tvättningar med PBS. 373 och 382 typ lfimbrierade, 1-fimbrier.

RESULTAT: efter tvättning med PBS samt efter tva Vid föreliggande försök är E.c0li i KSKP medan KSKP 395 saknar typ Resultaten av försöken redovisas i Tabell I nedan.

TABELL I E.coli- Före tvätt Efter första Efter andra stam tvätt tvätt Kontroll~ KSKP 373 1841469 193567 86162 gel 18884026 206900 84472 1682612 199781 100471 Substitu- KSKP 373 1900011 434393 272106 erad gel 2030421 428443 264717 2265375 460703 239423 Kontroll- KSKP 382 1373657 189580 115216 gel 1524220 194324 103543 1508750 233895 141118 Substitu- KSKP 382 2478434 956399 624386 erad gel 2110952 897985 677083 1973859 773461 541835 Kontroll- KSKP 395 1659411 252034 86400 gel 1654242 222732 107824 1549139 164238 68923 Substitu- KSKP 395 2133908 301827 164542 erad gel 2287366 382092 183858 2677496 450601 187693 10 15 20 25 30 35 469 2552* Såsom framgår av tabellen medför mannosidsubstituering väsentligt förbättrad fasthàllning av bakterierna än med osub- stituerad gel. Dessutom framgår av tabellen att bakterier med typ 1-fimbrier ger nagot bättre vidhäftning till den substitue- rade gelen än bakterier som saknar sådana fimbrier.

Det kan tilläggas att strukturen för den mannosidsubstitu- erade fraktogelen schematiskt kan illustreras pà följande sätt: pgß kf Gti l _. ouwo FRACTOGEL (III) EXEMPEL 2 a) Framställning av ett konjugat av p-aminofenyl-ü-D-mannopyra- nosid och humant serumalbumin (HSA). p-aminofenyl-G-D-mannopyranosid (0,1 umol, Sigma Chemi- cals) upplöses i 0,1 M fosfatbuffert, pH 7,0 (50 ml) i en 50 ml spetskolv, varefter etanol (10 ml) tillsättes. Under magnetomrö- ring tillsättes därefter tiofosgen (0,040 ml) och efter 10 min avlägsnas omrörarmagneten och noggrann sköljning utföres med destillerat vatten (totalt ca 5 ml). Till kolven sättes sedan dietyleter (ca 10 ml) och kolven omskakas försiktigt därefter kraftigt med isatt propp. Faeezna tillåtas separera, varefter den undre våttenfasen med pasteurpipett överföras till en 100 ml spetskolv. Destillerat vatten (ca 2 ml) tillsättes den kvarvar- ande eterfasen, omskakning sker sedan ordentligt, och efter se- paration överföres även den nya vattenfasen till spetskolven.

Spetskolven överföres pà en rullindunstare och innehållet in- dunstas till ca 2 ml.

Den erhållna lösningen sättes till en proteinlösning som beretts i förväg och som innehåller HSA (162,5 mg) upplöst i boratbuffert (pH 9,2, 26,3 ml), varvid upplösning sker efter någon timme. pH justeras sedan till 9,5 med 2 M NaOH-lösning.

Blandningen får stå över natten under långsam omröring och pH kontrolleras så att det ligger inom intervallet 8,5 till 9,5.

Reaktionsförloppet kontrolleras med TLC. Blandningen överföres 10 15 20 25 30 35 469 256 .I till ett ultrafilter som fylls med 10 till 150 ml destillerat vatten. Ultrafiltrering utföres tills endast nagra tiotals mil- liliter àterstàr, påfyllning göres ànyo, sedan filtrering, sedan pafyllning igen och filtrering ned till nagra milliliter. Bland- ningen filtreras genom glasull ned i en vägd burk, varefter frystorkning sker.

Konjugatets halt bestämmes sedan antingen med sockeranalys eller kolorimetriskt. b) Bindning av E.coli till pappershandduk beklädd med HSA~konju- gat.

Samma E.coli-stammar som i Exempel 1 användes vid försöken. Substituerad respektive osubstituerad HSA löses i PBS- (1 mg/ml). 10 pl av varje lösning sättes pá en papperslapp som utstansats med hàlslag fràn en pappershandduk av standardkvalitet. När lappen torkat tillsättes 100 ul bakteriesuspension pà papperslappen i ett rör och inkubering utföres under 30 min vid 37°C. Radioaktiviteten mätes sedan i gammaräknare och lappen tvättas med PBS två gånger. Mätning i sadan gammaräknare utföres före tvättning och efter varje tvättning. Resultaten redovisas i Tabell II nedan.

TABELL II E.coli- Före tvätt Efter första Efter andra stam tvätt tvätt HSA-papper KSKP 373 36937 13773 5645 (kontr) 33563 12945 5982 Subst.HSA- KSKP 373 46562 14654 8288 papper 42882 18616 9432 HSA-papper KSKP 382 19113 13211 9341 (kontr) 19563 14647 10842 Subst.HSA- KSKF 382 48301 24067 15896 papper 33093 22485 17597 10 15 20 forts.

TABELL II HSA-papper (kontr) subst.HsA- Papper r Ch \0 ha nn Ch H E.coli~ Före tvätt Efter första Efter andra stam tvätt tvätt KSKP 395 16982 12102 4337 16164 7915 4579 KSKP 395 13819 7447 4400 14207 8709 4640 Även dessa försöksresultat bekräftar att mannosidsubstitu-- tionen medför väsentligt förbättrad vidhäftning till papperet.

Det kan tilläggas att det aktuella konjugatet mellan mannosid och HSA kan illustreras pà följande sätt: oH' pH füå ffê 04945* S Û hl..

(IV)

Claims (8)

10 15 20 25 30 35 469 256 . PATENTKRAV

1. Rengöringsprodukt för avtorkning, exempelvis av hän- derna,i samband med intimhygien eller liknande, k ä n n e t e c k n a d av att ett mannosderivat, som interagerar med bakterier av typ 1-fimbrierade E. coli, bindes till en matris av cellulosabaserat papper eller ett kompositmaterial, innefattande cellulosa och/eller regenererad cellulosa samt en syntetisk polymer eller sampolymer, för avlägsnande av nämnda bakterier från rengöringsstället genom att bakterierna vidhäftar rengöringsprodukten.

2. Rengöringsprodukt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a d av att nämnda mannosderivat är p-aminofenyl-a-D-mannopyranosid.

3. Rengöringsprodukt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a d av att nämnda p-aminofenyl-a-D- mannopyranosid är bunden till matrisen via sin p-amino- QIUPP-

4. Rengöringsprodukt enligt krav 2 eller 3, k ä n n e t e c k n a d av att nämnda p-aminofenyl-a-D- mannopyranosid är kovalent bunden till matrisen.

5. Rengöringsprodukt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a d av att matrisen innefattar en sam- polymer av ett mannosderivat och en amid.

6. Rengöringsprodukt enligt krav 5, k ä n n e t e c k n a d av att sampolymeren har formeln: r _; ' coum? CONHZ _ i 1 1 * * I C-CH2 (C-CH2) I l lg LB f I šJm 1. 10 15 .rs cm \-:> N: on o\ I vari R2 har formeln: »ça/ “° 0/4333" där R3 är H eller CH3; x är ett heltal från 0 till ca 20; och m är sådan att sampolymerens molekvlvikt är från ca 5 till ca 2000 kDa.

7. Rengöringsprodukt enligt något av föregående krav, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av en servett eller en produktrulle.

8. Rengöringsprodukt enligt något av kraven l - 7, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av en våtservett, innesluten i ett tättslutande hölje.