SE468181B - Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden - Google Patents
Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptidenInfo
- Publication number
- SE468181B SE468181B SE8701294A SE8701294A SE468181B SE 468181 B SE468181 B SE 468181B SE 8701294 A SE8701294 A SE 8701294A SE 8701294 A SE8701294 A SE 8701294A SE 468181 B SE468181 B SE 468181B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- peptide
- hiv
- positive
- virus
- leu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 title claims abstract description 41
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 6
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 title claims description 4
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 title description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 claims abstract 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 27
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 9
- 101800005164 Peptide V Proteins 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 5
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 4
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 4
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 208000012124 AIDS-related disease Diseases 0.000 description 1
- 241000714195 Aids-associated retrovirus Species 0.000 description 1
- OOIMKQRCPJBGPD-XUXIUFHCSA-N Arg-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OOIMKQRCPJBGPD-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940033332 HIV-1 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N Trp-Gly-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 1
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Mycology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
468 181 g patientserum inhiberas reaktionen. Men trots detta kan Wellcomes test vid enstaka tillfällen ge Falskt positiva reaktioner.
Andra alternativa metoder att Få Fram reagens som ger specifika och säkra svar på HIV-1 tester är baserade på molekylärbiologiska metoder. Genen för HIV-1 virus har klonats och hela nukleotidssekvensen år känd (Muesing M.A..Douglas H.
Smith D. Cabradilla, Charles V.Benton, Laurence A. Lasky and Daniel J. Capon. Nucleic acid structure and expression of the human AIDS/lymphadenopathy retrovirus. Nature 313:450-458, 1985.) (Sanchez-Pescador;Ray. Michael D. Power. Philip J.
Barr, Kathelyn S. Steimer. Michelle M. Stemoien, Sheryl L.
Brown-Shimer. Wendy W. Gee. Andre Renard. Anne Randolph, Jay A. Levy, Dino Dina, Paul A. Luciw. Nucleotide sequence and expression of an AIDS-associated retrovirus (ARV-21. Science 227:484-492, 1985.) Man vet vilka delar av HIV-1 genomet som kodar för de olika virusproteinerna. Intressanta delar av HIV-1 genomet har klonats i bakterier och man har fått bakterierna att syntetisera immunologiskt aktiva HIV-1 proteiner som kan användas i diagnostiska tester. Ett exempel är att en _del av HIV-1 virusets höljesprotein gp41 har syntiserats i bakterier och används för serologisk diagnostik av AIDS (Cabradilla Cirilo D..Jerome E.Gropman. Joan Lanigan, Mark Renz. Laurence A. Lasky and Daniel J. Capon Seodiagnosis of antibodies to the human AIDS retrovirus with a bacterially synthesized ENV polypeptide. Biotechnology 4:128-133, 1986.) En test uppbyggd kring ett syntetiskt bakteriellt antigen anses som specifik, känslig och ger ej nâgra falskt positiva reaktioner. Men allmänt sett finns det alltid en nackdel med bakteriellt framställda proteiner och det år den höggradiga rening som krävs för att avlägsna alla bakterieproteiner från antigenet. I likhet med vad som sagts för cellodlat virus kan intensiva reningsprocesser skada virusproteinerna så att de i viss utsträckning förlorar sina antigena egenskaper.
De områden av ett protein som fungerar som antigen i serologiska tester t.ex. ELISA kallas epitoper. antalet epitoper i ett ordinärt protein uppgår till omkring 5-10 olika »gp 3 468 181 epitoper. Varje epitop-region är uppbyggd av 6-7 olika aminosyror som antingen kan ligga i en följd och utgöra en kontinuerlig epitop eller. vilket är vanligare. sammanstrålar flera delar av aminosyrekedjan till ett område som bildar en diskontinuerlig epitop (Novotny Jiri, Mark Handschumacher and Robert E. Bruccoleri Protein antigenicity: A static surface property Immunology today 8:25-31, 1987). Den moderna utvecklingen på peptidsyntesområdet har gjort det möjligt att syntetisera peptider som kan innehålla upp till cirka 100 aminosyror. Med peptidsyntesmetodik bör det därför vara möjligt att ta fram de så kallade kontinuerliga epitoperna från HIV-1 virus strukturella proteiner. Det gäller då att först välja ut de HIV-1 virusproteiner som är särskilt intressanta som antigen i en ELISA test. Våra egna och andras bedömningar visar att gp41 är ett sådant intressant protein.
Nukleotidsekvensen av gp41 är känd och nukleotidsekvensen kan lätt översätta i motsvarande aminosyresekvens. Från denna långa aminosyresekvens gäller det att för syntes välja ut områden som kan svara mot diagnostiskt intressanta kontinuerliga epitoper.
I ett arbete av Wang och medarbetare (Wang James J.G.. Samuel Steel, Rosanne Wiesniewolski and Chang Yi Wang Direction of antibodies to human T-lymphotropic virus type III by using a synthetic peptide of 21 amino acid residues corresponding to a highly antigenic segment of gp41 envelope protein. Prod Natl Acad Sci USA 83:6159-6183, 1986) presenteras en sådan syntetisk peptid. Den aktuella peptiden består av 21 aminosyror med följande sekvens. Arg-Ile-Leu*Ala-Val-Glu-Arg- Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser, och svarar mot aminosyror nr 586-606 av precursorn av höljeproteinet till HIV-1 (HTLV III). En kombinerad serologisk. kemisk analys av denna peptid och angränsande peptider .visade hur viktiga vissa aminosyror var för den serologiska reaktiviteten. Av alla olika kombinationer gav borttagande av de fyra karboxyterminala aminosyrorna Trp-Gly-Ser endast en liten förändring. minsking, av den serologiska reaktiviteten. Däremot var nâgra aminosyror i den aminoterminla delen av peptiden av stor vikt för den 468 181 q serologiska reaktiviteten särskilt gäller detta Arg-1, Ile-2 och Lys-10. Wang och medarbetare har använt denna peptid i ELISA för att mäta antikroppar mot HIV-1/HTLV III med gott resultat. Peptiden ger ej några falska positiva reaktioner, och endast ett fåtal falskt negativa reaktioner.
I U.S. patentet 4.529.783 beskrivs flera immunologiskt reaktiva syntetiska peptider svarande mot delar av HIV-1 virusets proteiner för diagnostik av AIDS och AIDS~relaterade sjukdomar. Av speciellt intresse är peptid V(39) med sekvensen Arg-I1e-Leu-Ala~Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu- Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-X, där X är OH eller NH2. vilket svarar mot en del av gp41 kodad genom baspar (bp) 7516-7593 av HIV-1 genomet. Peptid V(39) reagerade med 23/24 (95.8Z) serumprov från patienter med bekräftad HIV-1 infektion.
För andra virus har syntetiska peptider använts som vaccin.(Van Regenmortel M.H.V. Synthetic peptides as viral vaccines ann Inst Pasteur/Virol 137E, 497-528. 1986 och det kan även vara möjligt att framställa HIV-1 vaccin baserade på syntetiska -peptider, ett första steg i denna rikting har presenterats av Kennedy. Essex och medarbetare ( Kennedy R.C..Henkel, D.Pauletti, J.S. allan, T.H. Lee M. Essex, G.R.
Dreesman Antiserum to a synthetic peptide recognizes the HTLV III envelope glycoprotein Science 23fl4%556-1559, 1986). De har syntiserat en peptid som svarar mot aminosyra 735-752 i gp16O ett höljesprotein i HIV-1. Denna peptid reagerar med humana antisera som innehåller antikroppar riktade mot HIV-1.
Författarna har då dragit slutsatsen att peptiden är vård att pröva som ett vaccin mot HIV-1 och även som ett eventuellt diagnostiskt antigen. Ändamålet med föreliggande uppfinning är att syntetisera en immunreaktiv peptid att användas för diagnostik av HIV-1 dels för bestämning av antikroppar och även för immunisering av djur för att ta fram antikroppsreagens som kan användas för 5 468 181 att bestämma och leta efter HIV-1 antigen i patientprover under den tidiga fas av HIV-1 infektionen då patienterna ännu ej hunnit bilda antikroppar. En antigent aktivt peptid bör även kunna prövas för om den är effektiv som ett vaccin mot HIV-1.
Bland den stora mängd syntetiska peptider vi framställt och testat har vi funnit en peptid som uppvisar särskilt goda egenskaper som diagnostiskt reagens i ELISA för att påvisa antikroppar mot HIV-1 i patientsera. Denna peptid svarar mot en aminosyresekvens i gp41 och peptiden har av oss fått beteckningen "A5".
Aminosyresekvensen i A5 är följande: Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile- Cys~Thr-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Cys-OH.
Om man använder samma system för numrering av Wang (7) svarar den uppfinningsenliga peptiden mot aminosyra nr. 598-618. Den peptid som Wang har syntetiserat svarar mot aminosyra 586-606.
I den uppfinningsenliga peptiden A5 har lagts till en aminosyra Cys i position 519 i denkarboxyterminala delen. I den verkliga peptiden sitter här aminosyran Ala. Vi har funnit det väsentligt att ge peptiden detta artificiella tillskott för att den skall uttrycka gynnsamma egenskaper vid användning som diagnostiskt reagens i ELISA Man bör observera den stora skillnaden mot wangs peptid. Nang testade ett stort antal peptider i regionen 586-606 men det var endast i den aminoterminala delen kring 586-596 som Wang fann aminosyror kritiska för reaktiviteten. I vår syntes har vi jämfört med Wang sträckt oss långt åt höger inom ett område som Nang fann ointressant och har här definierat en peptid med utomordentligt goda egenskaper som diagnostiskt reagens.
Särskilt har den utsatts för omfattande tester mot stora serier av kända positiva och negativa sera. Resultatet har som framgår av nedanstående redovisningar varit utmärkt. 468 181 Beskrivning av ritningarna Uppfinningen kommer i det Följande närmare beskrivas i form av utföringsexempel och testresultat med hänvisning till bifogade ritningsfigur. vilken är ett histogram visande ELISA värden som erhållits med användande av den uppfinningsenliga peptiden gp41A5 som antigen.
Syntes av peptid gg4]A5 Peptid gp41A5 har syntetiserats enligt Merrifields stegvisa solid-phase strategi med hjälp av en automatisk peptidsyntes apparatur - Applied Biosystem 430. Ingående aminosyror (Nova Biochem, Schweiz) som använts vid syntesen har skyddats på konventionellt sätt i aminoterminaler mer tertbutyloxykarbonyl (t-BOC) grupper och där stabila föreningar använts för protektion av aminosyrornas sidokedjor. t-BOC aminosyror har kopplats sekventiellt p- ett resin-p-metylbenzylhydrylamine- RMB-2100 (peptides International, Luisville, USA).
Extraktion -och klyvning av peptid gp41A5 har utförts via konventionell metodik med för ändamålet avsedd apparat- uppställning (Applied Biosystem). Klyvningen har utförts i närvaro av väteflourid, dimetylsulfoxid och anisol i förhållandet 10:1:1 per del peptid bundet på resin.
Slutlitlig peptidprodukt har analyserats med HPLC reversed phase (Waters). n me- ' ke ' n s en ss " SA et 'k fö v' v ' r ar o e ' 4 A5 Konventionellt ELISA protokoll används enligt ïöljandez - Mikrotiterplattor kopplade med peptid enligt tidigare adsorberar humanserum i spädning 1/100 (spädningsvâtska: PBS _ . 0 _ innehållande 1 Z BSA) under 90 minuter vid 37 C i fukt- kammare.
'I 468 181 - Serum avhälles och plattorna tvättas 3 ggr med PBS innehål- lande 0.052 Tween 20 (PBS-Tween).
- Adsorption med antihumant igG konjugat alkaliskt fos¥atas.
(Dakopatts D-338 spådd i PBS 1:800) - Inkubering i 90 minuter vid 37UC i fuktkammare.
- Tvätt 3 ggr med PBS-Tween.
- Tillsats av alkalisk fosfatas substrat (Sigma 104) 1 mg/ml, 200 pi/hål. - 30-60 minuters konvertering av substrat och avläsning med multiscan multikanal spektrofotometer.
A ' 'k t ter a t Mikrotiterplattor avsedda För antikroppanalys av patientserum med enzymelinked immunsorbent assay (ELISA ) har klätts med peptid enligt Följande protokoll. - 96 håls mikrotiterplattor (Greiner alt. Nunc) Fylls med 50 ul poly-L-lysin (Sigma P 1399) med koncentrationen 1.0 mg/100 ml. fosfatbuffert (PBS pH 7.2) och adsorberar vid 2o°c 1 ao minuter.
- Plattorna avhälles och tvättas med 200 ul PBS/hål. - 50 ul av peptid gp41A5 tillsätts i varje hål i mikrotiter- plattan. Vid en koncentration av 10 pg/ml spådd i PBS. - 50 ul glutaraldehyd (G5882 Sigma) spådd till 0.5 Z i PBS _ _ . . U tillsätts peptidlösningen i mikrotiterplattan. Far sta 20 C under 15 minuter.
- Lösningarna avhälls och plattorna tvättas 2 ggr i PBS. 468 181 s - 200 ul 100 mM glycin (spädd i H20 innehållande 0.11 bovint serum albumin BSA) tillsätts hålen och får reagera 30 minuter vid 20uC.
- Lösningarna avhälls och plattorna tvättas 2 ggr i PBS.
Plattorna får rinna av och förvaras vid -20ÛC till användning. i humana sera.
Peptid gp41A5 har analyserats med avseende på koncentration som används i ELISA och befunnits vara immunoreaktiv vid inbindning till poly-L-lysin i mikrotiterplattor i en koncent- ration från 500 pg/ml - 0.1 ul/ml. Den optimala koncent- rationen av gp41A5 har visats vara 10 ug/ml och har använts vid all vidare dokumentation.
Screening av 101 dokumenterat positiva sera och 170 negative sera åskådliggörs i Figur 1.
Positiva sera utgjordes härvid av hög- och lågpositiva från Tel Aviv i Israel, Göteborg, Sloan-Kettering Ca Ce New York (3 och 4, +40 +54).
Negativa sera härrörde från transplantatmottagare. leukemi- patienter, falskt positiva sera från andra ELISA-tester samt blodgivare (25+21+28+105). Dessa negativa sera visar en mycket låg bakgrund = 0.100 OD enheter. Gränsvärde ¥ör_ att bedömas som positiv reaktion har satts till bakgrunden (M = 0.100) + 3 standard deviationsenheter (0.092) = 0.100 + 3 X 0.092 = 0.367.
Med dessa kriterier för positivitet har 4 separata tester givit klart positiva resultat För 101 sera, som tidigare visats positiva med annan metodik.
Masscreening av 413 dokumenterat positiva (med Wester blot 01 fl 9 konfirmationstest) visar enligt tabell 1 positiva med gp41A5. 468 181 att samtliga utfallit 1024 blodgivare har samtliga visats vara negativa. Ytterligare 182 sera från patienter med infektionssjukdomar eller maligniteter som frekvent ger falskt positiva antikroppsresul- tat med konventionell metodik visade negativa mot gp41A5. 82 patientsera som selekterats reaktioner mot konventionella ELISA HIV-1 samtliga ge negativa reaktioner mot gp41A5. 40 intermediärt med Du positiva sera (positiv/negativ?) med kommersiellt sig samtliga antigener test visade gav Vara på basis av falskt positiva sig gränsvårdesaktivitet Pont med gp41A5 ett resultat som helt sammanföll (100ZT med högkänsligt konfirmationstest western blot.
Tabell 1 Genomförande av gn 41-A Deptid ELISA Sant positiva sera 413 sera positiva med andra ELISA 413 positiva med gp 41 A: dvs. 413/413 (1001) Sant negativa sera 1.024 blodgivarsera: "Förrädiska" sant negativa sera: Wasserman reaktion (WR) positiva sera: Treponema Palladium positiva (WR) Anti-komplement reaktiva sera: Epstein-Barr virus IgM-positiva sera: Transplantatmotttagar-sera: (Western blot positiva): -tester: (Western blot negativa): Sêraå OOOCDO positiva positiva positiva positiva positiva positiva med med med med med med gp41A5 gp41A5 gp41A5 gp41A5 gp41A5 gpk1A5 468 181 /0 21 Leukemipatient-sera: 0 positiva med go41A5 0 / 1.206 (OZ) Falskt positiva sera i andra ELISA -tester: 14 falskt positiva i Abbott-ELISA D positiva med gp41A 38 falskt positiva i Behring-ELISA D positiva med gp41A 8 falskt positiva i Dupont-ELISA 0 positiva med gp41A 4 falskt positiva i ENl-ELISA D s' 'v e 41 D / 52 (OZ) gp41A5 peptid ELISA genomfördes med 40 sera som givit “grâzons"- reaktioner (under gränsvärdet men över negativa kontrollvårderna) vid tester med Dupont-tester; vilket resulterade i: 8 Western blot positiva sera: 32 western blot negativa sera: Som en jämförelse med den syntetiserades peptid V(39) enligt Peptiden användes i ELISA test 8 positiva med gp41A5 32 negativa med gp41A5 (2 gav "gråzons“-reaktioner) uppfinningsenliga peptiden U.S. patentet 4.829.783. och gav 221/233 (94.8Z) positiva reaktioner med kända HIV-1 positiva serumprover. Tolv falskt negative peptid V(39) reaktioner en falskt positiv i 1 sera. negativa Serumprov negativa genom western blot analys med HIV-1 falskt positiva och negativa Western blot analys.
Det bör påpekas peptid SMZB4 enligt Wang m.fl. 83:6159-6163. Och peptid V(39) Den uppfinningsenliga peptiden aminosyrafrekvensen hos kända peptiderna plus en ytterligare sekvens område av gp41 SM284 och V(39). Wang m.fl. erhölls fastställdes reaktioner (Proc. enl. gp41A5 således. 102 Dessutom (0.98Z) SOm gav av bekräftat och Alla positiva proteiner. bekräftades genom att gp41A5 har en partiell överlappning med Natl. Acad. (1986) patentet 4.629.783.
Sci.
U.S. innehåller således den karboxyterminala delen av de två motsvarande ett vid den karboxyterminala sidan av peptiderna ansåg dock att den karboxytermina- 11' 468 181 la delen av peptid SM284 immunologiskt var mindre viktig jämfört med den aminoterminala delen av peptid SM284.
Emellertid har det enligt uppfinningen visat sig. att man genom att utsträcka permutationen av gp41A5 till den karboxyterminala delen av gpki har erhållit en peptid med utmärkta antigenegenskaper för detektering av AIDS-specifika antikroppar i humana sera. Denna peptid visar både en högre reaktivitet och större specificeringsförmâga i ELISA och western blot än de båda peptiderna V(39) och SM284.
I tabell 2 nedan visas att gp41A5 regerar med alla 233 (1002) fastställt positiva HIV-1 sera. Dessa resultat erhölls från samma 233 sera som testats med peptid V(39), vilken gav 12 falskt negativa reaktioner. Medelgränsvårdet för en positiv reaktion i ELISA- testerna var ett O.D.4Ü5 på omkring 0.3.
Varje avläsning under 0.3 ansågs som en negativ reaktion. Det framgår klart att serumproverna 7.19.4D.44,48.6D.101.482,511, 324.375 och 393 inte uppvisade någon reaktivitet med peptid V(39) men överlägsen reaktivitet med gp41A5.
Tabell 3 visar en ytterligare jämförelse av den immunologiska reaktiviteten hos gp41A5 med peptid V(39). Trettioåtta av de 233 serumprov som presenteras i tabell 2 fastställdes som positiva genom western blot analys. Dessa positiva sera plus åtta fastställt negativa serumprov (Western blot) regerades med peptiderna gp41A5 och V(39l:ifparallella ELISA-tester med positiva reaktioner. alla med ett D.D.¿0s överstigande 0.3.
Dessutom användes ett icke-HIV-1 antigen (negativt antigen) som kontroll. Det år slående att gp41A5 inte visade några falskt negativa eller falskt positiva reaktioner. Den uppfinningsenliga peptiden gp41A5 visade sig således överraskande och oväntat ge ELISA-resultat som är klart 1002 riktiga. 400 101 M TABELL 2 Immunologlsk reaktlvitet bestämd genom ELISA.mellan HIV-l antlßroppar 1 233 fastställt positiva seromprover och syntetlska peptldantlgener møtsvarande delar av gp4l Antiqen Se*““Pr°V nr- v (39) gp41As 10 4 0.436 2.009 7 0.137 1.412 12 0.330 2.222 13 0.030 2.090 17 0.005 1.527 15 10 1.336 2.711 19 0.209 2.922 23 1.706 2.022 24 0.405 , 2.010 25 0.404 2.635 20 26 1.443 2.000 27 0.010 2.029 29 1.399 2.459 30 1.009 2.500 31 0.737 2.343 25 32 1.244 2.902 33 1.332 2.071 35 0.930 2.714 37 1.007 2.059 - 30 1.020 " 2.370 30 39 1.362 2.529 40 0.227 1.495 41 1.202 2.692 42 0.731 2.209 43 0.522 1.970 35 44 1.199 2.443 45 1.096 1.044 46 1.456 2.796 47 0.005 2.036 40 0.195 2.592 40 49 1.532 2.009 51 0.712 * 2.579 53 1.217 2.714 54 0.002 2.423 55 1.444 2.567 45 56 0.032 2.511 57 1.104 2.400 50 1.510 2.232 59 1.919 2.726 00 0.219 1.399 50 70 0.409 1.020 79 0.927 2.247 101 0.205. 0.003 402 0.120 1.310 511 0.240 1.030 55 130 0.340 1.741 134 1.256 2.425 137 1.095 2.413 140 0.952 2.364 10 15 2o_ 25 30 35 40 45 50 TABELL 2 (forts.) A3 468 181 S Anticen erumprov nr. V (39) gp4lA5 225 1.464 2.548 232 1.877 2.654 243 0.644 2.397 272 1.968 2.767 273 1.404 2.660 274 2.037 2.821 275 1.786 2.609 276 1.900 2.745 277 1.106 2.243 278 1.203 2.354 279 0.555 2.579 283 1.293 2.570 285 0.437 1.977 286 1.017 2.108 287 0.798 1.845 288 0.875 2.569 289 1.544 2.572 291 0.728 2.561 292 0.690 2.032 293 1.096 2.466 294 0.861 2.228 295 1.631 2.696 297 1.598 2.764 298 1.204 2.636 300 1.854 2.636 301 0.796 2.431 302 1.065 2.623 303 0.733 2.381 305 1.375 2,686 306 1.745 2.696 307 1.239 2.383 308 1.142 2.687 312 1.291 2.553 313 1.100 2.152 314 0.456 1.266 317 0.669 1.051 318 1.329 1.616 319 1.255 2.008 320 1.024 1.941 321 1.493 2.347 322 1.092 1.850 323 1.292 2.077 324 0.281 1.299 330 0.725 1.483 332 0.683 1.385 333 1.620 1.901 334 0.923 1.579 336 1.309 1.951 337 1.258 2.166 340 1.194 1.689 468 181 TABELL 2 (forts.) Antíqen Serumprov nr. v (39) gp41A5 341 1.290 1.763 357 1.138 1.754 358 0.738 1.733 359 0.599 1.033 5 360 0.528 0.840 363 0.711 1.291 365 1.390 1.963 366 0.821 1.682 368 0.665 1.417 10 371 1.183 1.585 372 1.075 1.593 373 0.799 1.711 374 1.046 1.650 375 0.280 0.957 15 377 1.065 1.480 378 1.261 1.644 379 0.610 1.242 380 1.205 1.763 381 1.321 1.645 20 383 0.552 1.146 ' 384 0.620 1.029 385 0.973 1.618 386 1.687 1.646 387 0.695 1.189 25 388 0.928 1.396 389 0.938 1.544 390 _ ;0,679 1.190 391 "“" '0:709 1.250 392 0.629 1.014 30 393 0.195 0.874 394 0.622 1.244 395 0.799 1.404 396 0.736 1.416 398 0.766 1.647 35 400 1.210 1.621 401 0.482 1.073 402 0.614 1.302 403 0.498 1.145 406 1.570 1.600 40 407 0.742 1.186 408 0.398 0.801 411 1.154 1.603 412 1.209 0.864 413 0.557» 1.220 45 414 1.170 1.787 416 0.526 1.326 417 0.473 1.201 419 1.020 1.592 420 0.637 0.944 S0 422 0.742 1.479 10 15 20 25 30 35 40 45 S0 Af TABELL 2 (forts -1 468 181 Antiggn Serumprov nr. V (39) gp41A5 426 0.921 1.381 427 0.548 1.116 428 0.355 1.184 429 0.381 1.051 431 0.542 1.198 432 1.192 1,633 433 1.402 1.793 434 0.637 1.196 435 1.017 1.951 436 1.155 1.512 437 0.465 1.408 438 0.517 0.572 439 0.483 0.422 440 1.345 1.380 441 0.618 1.238 442 0.660 1.088 443 0.638 1.288 444 0.604 0.737 445 1.187 1.462 446 1.731 0.662 447 2.737 2.913 448 2.150 2.936 449 1.580 2.901 450 2.287 2.956 451 1.645 2.777 452 1.741 2.636 453 1.998 2.922 454 1.756 2.860 455 2.590 3.010 456 1.022 2.936 457 1.055 2.724 458 1.706 2.868 459 1.133 2.849 460 1.611 2.636 461 1.809 2.881 462 1.417 2.788 463 1.034 1.536 464 2.027 2.936 477 0.586 1.843 478 0.651 1.783 480 0.678 1.554 510 0.807 2.180 512 1.583 2.670 513 1.592 ~ 2.796 514 1.922 2.812 S15 2.102 2.769 516 1.434 1.918 517 0.369 0.791 518 1.143 2.498 520 1.923 0.593 468 181 10 15 20 TABELL 2 (forts.) /6 Antíqen 5ef“mPr°V nr' v (39) gp41As 521 2.418 2.831 s22 1.107 2.493 s23,_ ._ 0.509 1.043 624 0.026 2.621 szs 0.029 1.993 626 1.456 2.612 s27 2.311 2.049 sza 0.679 2.026 529 0.530 2.631 630 1.6ss 2.746 631 1.177 2.739 532 0.304 1.617 s33 1.005 2.690 534 1.as2 2.034 s3s 1.412 2.744 536 0.350 1.093 537 0.905 2.764 s3a 1.147 2.590 539 0.219 0.407 540 2.644 0.653 \ (i f) /7 TABELL 3 468 181 ELISA-tester för jämförelse av specificeringdförmåga och selektivitet melLan syntetiska peptidantigener 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 f Spektrofotometriska avläsningar, O.D.
H Ickë"HIV'-l antigen 405 Antíggn SERUM Negativ PROV NR. WB gp4lAS V (39) antigen** 4 + 2.809* 0.436* 0.084* 7 + 1.412 0.137 0.066 12 + 2.222 0.336 0.087 19 + 2.922 0.289 0.071 25 + 2.635 0.484 0.071 31 + 2.343 0.737 0.101 40 + 1.495 0.227 0.090 42 + 2.289 0.731 0.140 43 + 1.978 0.522 0.062 44 + 2.443 1.199 0.085 48 + 2.592 0.195 0.073 60 + 1.399 0.219 0.084 78 + 1.826 0.489 0.219 101 + 0.863 0.205 0.072 482 + 1.316 0.120 0.100 511 + 1.036 0.248 0.067 140 + 2.369 0.952 U.081 277 + 2.243 1.106 0.260 285 + 1.977 0.437 0.057 298 + 2.636 1.204 0.046 324 + 1.299 0.281 0.057 375 + 0.957 0.280 0.066 393 + 0.874 0.195 0.067 416 + 1.326 0.526 0.082 428 + 1.184 0.355 0.142 446 + 0.612 1.731 0.215 457 + 2.724 1.055 0.205 477 + 1.843 0.586 0.104 478 + 1.783 0.651 0.069 517 + 0.791 0.369 0.029 520 + 1.923 0.593 0.088 523 + 1.093 0.509 0.080 524 + 2.621 0.825 0.056 525 + 1.993 0.809 0.067 S32 + 1.617 0.384 0.082 536 + 1.093 0.350 0.086 539 + 0.407 0.219 0.051 540 + 2.644 0.643 0.056 39508 ~ 0.154 0.153 0.087 39509 0.191 0.166 0.043 39510 0.156 0.085 0.044 39511 - 0.241 0.177 0.028 39512 - 0.101 0.144 0.093 39513 0.178 0.123 0.048 39514 0.101 0.118 0.051 39515 - 0.086 0.252 0.063 468 181 'X Användningsområden för qp41A5 Peptiden gp41A5 enligt uppfinningen är i första hand avsedd att användas som antigen i diagnostiska test oavsett testmetodik för att påvisa antikroppar mot HIV-1. antingen i fast fas eller i kompetitions-assay. Den kan användas som antigen, eventuellt kopplat till någon bärarstruktur, för immunisering av djur för att framkalla produktion av antikroppar specifika mot HIV gp41. Dessa antikroppar kan användas dels för detektering av HIV-1 eller delar av HIV-1 i cellkulturer. blod, organsnitt etc.. och dels i kompetitionstest för att påvisa antikroppar mot HIV-1 eller delar av HIV-1. Den kan även användas för att påvisa antikroppsreducerade celler samt cellförmedlad immunitet.
Ett ytterligare tänkbart användningsområde är som antigen, eventuellt kopplat till någon bârarstruktur, för att framkalla produktion av antikroppar mot HIV-1 hos djur och människor. m fl
Claims (4)
1. Ett syntetiskt antigen i form av en peptid, vars sekvens svarar mot delar av HIV-1-virusets proteiner, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att peptiden uppvisar Följande formel: Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile- Cys- Thr-Thr-Ala~Val-Pro-Trp-Asn-Cys-OH_
2. Ett diagnostiskt tëšt'for detektering av antikroppar mot HIV-1 virus hos djur eller människa, och vilket test som antingen innehåller en peptid, vars sekvens svarar mot delar av HIV-1-virusets protein, k ä n n e t e c k n a d d å r a v, att peptiden uppvisar den i patentkrav 1 angivna formeln.
3. Ett vaccin för framkallande av immunitet mot HIV-1 virus hos människa och djur. och vilket vaccin som aktiv komponent innehåller en peptid, vars sekvens svarar mot delar av HIV-1-virusets proteiner, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att peptiden uppvisar den i patentkrav 1 angivna Formeln.
4. Ett antigen avsett att famkalla produktion av antikroppar mot HIV-1 hos djur, och vilket antigen som aktiv komponent innehåller en peptid. vars sekvens svarar mot delar av HIV-1-virusets proteiner, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v. att peptiden uppvisar den i patentkrav 1 angivna formeln.
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8701294A SE468181B (sv) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden |
| NO881151A NO881151L (no) | 1987-03-27 | 1988-03-16 | Syntetisk hiv-1-antigen. |
| ZA882095A ZA882095B (en) | 1987-03-27 | 1988-03-24 | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection |
| FI881418A FI881418L (fi) | 1987-03-27 | 1988-03-24 | Syntetiska peptid antigener foer faststaellande av hiv-1 infektion. |
| AU13807/88A AU606928B2 (en) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection |
| CA000562531A CA1336473C (en) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection |
| NZ224046A NZ224046A (en) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Hiv antigenic peptide fragments and their use |
| ES8800920A ES2013328A6 (es) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Un metodo para detectar anticuerpos contra antigenos hiv-1. |
| DK164088A DK164088A (da) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Syntetiske peptidantigener til paavisning af hiv-1-infektion |
| SU884355648A RU1802871C (ru) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Способ определени антител к Н @ V - 1 |
| EP19880850105 EP0284587A3 (en) | 1987-03-27 | 1988-03-28 | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection |
| ZA892301A ZA892301B (en) | 1987-03-27 | 1989-03-29 | Synthetic peptide antigens for the detection of htlv-1 infection |
| CA000616876A CA1338028C (en) | 1987-03-27 | 1994-06-09 | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8701294A SE468181B (sv) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8701294D0 SE8701294D0 (sv) | 1987-03-27 |
| SE8701294L SE8701294L (sv) | 1988-09-28 |
| SE468181B true SE468181B (sv) | 1992-11-16 |
Family
ID=20368020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8701294A SE468181B (sv) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| SE (1) | SE468181B (sv) |
| ZA (1) | ZA882095B (sv) |
-
1987
- 1987-03-27 SE SE8701294A patent/SE468181B/sv not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-03-24 ZA ZA882095A patent/ZA882095B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8701294D0 (sv) | 1987-03-27 |
| ZA882095B (en) | 1989-10-25 |
| SE8701294L (sv) | 1988-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Veronese et al. | Biochemical and immunological analysis of human immunodeficiency virus gag gene products p17 and p24 | |
| EP0462627B2 (en) | Antigens and peptides of lav. | |
| EP0292454B1 (en) | Synthetic peptide antigen for the detection of hiv-2 infection | |
| US20080261197A1 (en) | Nucleotide sequences of HIV-1 group (or subgroup) O retroviral antigens | |
| EP0330359A2 (en) | Composition useful in the diagnosis and treating of HIV-1 infection | |
| Casey et al. | Human T-cell lymphotropic virus type III: immunologic characterization and primary structure analysis of the major internal protein, p24 | |
| US4833072A (en) | Antigentic peptides and process for their preparation | |
| US6074646A (en) | Nondenatured HIV envelope antigens for detecting early HIV-specific antibodies | |
| Robertson et al. | Maternal antibodies to gp120 V3 sequence do not correlate with protection against vertical transmission of human immunodeficiency virus | |
| BLOMBERG et al. | Identification of regions of HIV-1 p24 reactive with sera which give" indeterminate" results in electrophoretic immunoblots with the help of long synthetic peptides | |
| JP3271666B2 (ja) | Ｈｔｌｖ―ｉ、ｈｔｌｖ―ｉｉ又は関連レトロウイルスに対する抗体間の識別、新規ペプチド、抗体の検出及び免疫アッセイキット | |
| WO1998023771A9 (en) | A new eia test using non-dentured hiv antigen for early detection of hiv infection | |
| US6440657B1 (en) | Nucleic acids and peptides of human immunodeficiency virus type (HIV-1) | |
| Thorn et al. | Enzyme immunoassay using a novel recombinant polypeptide to detect human immunodeficiency virus env antibody | |
| Chiodi et al. | Site‐directed ELISA with synthetic peptides representing the HIV transmembrane glycoprotein | |
| Lal et al. | Characterization of immunodominant epitopes of gag and pol gene-encoded proteins of human T-cell lymphotropic virus type I | |
| CA2034611C (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv | |
| DE3850593T2 (de) | Synthetische Antigene zur Bestimmung der AIDS-bezogenen, von LAV-2 verursachten Krankheiten. | |
| BAILLOU et al. | High antigenic cross-reactivity of the V3 consensus sequences of HIV-1 gp120 | |
| Kanner et al. | Simultaneous infections with human T cell leukemia virus type I and the human immunodeficiency virus | |
| Walther et al. | Evaluation of HIV-1/HIV-2 immunoblots for detection of HIV-2 antibodies | |
| Shin et al. | The use of multiple antigenic peptide (MAP) in the immunodiagnosis of human immunodeficiency virus infection | |
| SE468181B (sv) | Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden | |
| BAILLOU et al. | Site-directed serology using synthetic oligopeptides representing the C-terminus of the external glycoproteins of HIV-1, HIV-2, or SIVmac may distinguish subtypes among primate lentiviruses | |
| Björling et al. | Identification of a uniquely immunodominant, cross-reacting site in the human immunodeficiency virus endonuclease protein |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8701294-4 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8701294-4 Format of ref document f/p: F |