SE458611B - Substituerade vinylcefalosporiner, farmaceutisk komposition daerav samt foerfarande foer framstaellning daerav - Google Patents

Description

' 458 40 611 ansökningen 1 342 241, som publiserades den 3 januari 1974 (motsvarande de amerikanska patentskrifterna 3 769 277 och 3 994 884 av den 30 oktober 1973 respek- tive den 30 november 1976). Föreningarna IV och V avslö- jas på sidorna 25 och 29 i den brittiska patentansökningen. s ' N32 N 2 / a=cncns o z ef* O CO E IV Dessa föreningar framställdes genom omsättning av mot- svarande 3-trifenylfosfoniummetylcefalosporin med form- aldehyd eller acetaldehyd. Det omvända förfarandet, som innebär att man omsätter ett fosforanylidinderivat med formeln R3P=CR3R4 med en 3-CHO-cefalosporin, avslöjas även i ansökningen på sid 5. Föreningen IV anges absor- beras vid oral administrering enligt amerikanska patent- skriften 4 107 431.

Föreningar av denna typ har tidigt avslöjats även av Webber et al. J. Med. Chem. 18(10) (1975) 986-992 och i den amerikanska patentskriften 4 065 620 av den 27 decem- ber 1977, som i spalterna 3, 4 och 5 avslöjar den klass föreningar till vilken föreliggande föreningar hör. Spe- cifika föreningar som avslöjas representeras av formeln VI. ®_cnconxà 5 ' :__ ' i \| Nå: / N\///_ . ° 2 ån; 2 ass; “se (CN) .H_ nu... . 1......,.... 4......... *___-a 16 40 "3 458 611 Andra variationer av denna typ avslöjas i de amerikanska patentskrifterna 4 094 978 (13 juni 1978) och 4 112 087 (5 september 1978), där föreningarna VII och VIII avslö- jas.

| ED_<:;:>_Cm:NH1__1/fS)\\ Nå /__n / cH-cacazoea / fif' O C023 VII U.S. 4 094 978 Spalt 44 i _. .

EÜææm-fsw = - aecacaoo! Lï /J-Ny- 2 3 VIII Andra substituerade 3-alkenylcefalosporiner avslöjas i följande patentpublikationer.

US 3 830 700, O'Callaghan et al. (20 april 1974) 3-(nitrostyryl)~cefalexin-analoger. ' US 3 983 113, Beeby (28 september 1976), US 4 049 806, Beeby (20 september 1977) och US 4 139 618, Beeby (13 februari 1979), 3-(heterocyklotio)propenyl-cefalosporiner.

US 4 147 863, Miyadera et al. (3 april 1979), 3-(1-metyl-5~tetrazolyl)vinyl-cefalosporiner.

DE-OS 3019445 (december 1980) 3-(sulfonyloxi)vinyl-cefalosporiner. '458 611 .35 40 -4 FR 2460302 (23 januari 1981) 3-(dimetylamino)vinyl-cefalexin-analoger.

EP 30630 (24 juni 1981) 7-[(3-metansulfonamidofenyl)-u-amincacetamido]-3- vinylcef-3-em-4-karboxylsyra.

US 4 255 423, Beattie et al.((10 mars 1981) US 4 390 693, Beattie et al. (28 juni 1983) 7-(2-tienyl)acetamido-3-(3-acetoxi-1-propenyl) och -3-(heterocyklovinyl)cef-3-em-4-karboxylsyror_och Im-metoxi-analoger.

De viktiga kommersiellt tillgängliga, oralt aktiva ce- falosporiner för vilka föreliggande föreningar är av- sedda att användas är cefalexin, cefadroxil, cefradin och cefaklor. Dessa substanser har formlerna IX, X, XI och XII. *Üamps i a» z amma I m2 Nwglæs m: c1 o ooza ° ' m; geg cefalexin 'IX R=OH cefadrcil X cefaklor XI j ef* cefradin XII Dessa föreningar är föremål för följande patent. cefalexin - Us 3 so? 861 (21 april' 197m US 3 489 752 (13 januari 1970) (Re 29 164) cefadroxil - '5 458 611 US 3 925 372 (9 december 1975) US 3 485 819 (23 december 1969) cefaklor - cefradin - Besläktade strukturer, som har avslöjats, är 3-klor- cefadroxil och 3-hydroxicefadroxil i US 3 489 751 (13 januari 1970) respektive brittiska patentet 1 472 174 (publicerat 4 maj 1977).

Föreliggande uppfinning avser föreningar med formeln 1:2 Ezcou ' 5 1 _ / ena-cm? n o ceza med Z(cis)-konfiguration vid den exocyklíska dubbelbind- ningen, i vilken formel R1 är väte, GH, lägre alkoxi eller halogen; R2 är väte, OH eller lägre alkoxi; och R3 är c1_4-a11 alkyliden eller alkylen med 1-4 kolatomer och X är brom, klor eller jod; och farmaceutiskt godtagbara syraadditions- salter därav.

De nya föreningarna enligt föreliggande uppfinning är av intresse som oralt effektiva cefalosporinantibiotika med kraftig aktivitet mot grampositíva bakterier och ett förbättrat aktivítetsspektrum mot gramnegativa bakterier, olika granntyckta bakterier och anaerober relativt cefa- lexin, cefadroxil, cefaklor och cefradin. De tillhanda- häller utsträckta antibiotiska koncentrationer i blod- strömmarna vid oral administrering och är lämpliga för administrering till människa en eller två gånger dagligen.

Som sådana administreras de i doser varierande från 100 mg till 5000 mg per dag beroende på patientens storlek och sjukdomstillstàndet. De kan administreras parenteralt i liknande doseringsmängder. 458 611 -e Föreningarna enligt uppfinningen administreras oralt eller parenteralt i antibakteriellt effektiva, ogiftiga doser såsom sådana eller i form av ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt eller ett farmaceutiskt godtagbart metall- eller aminsalt.

De farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalterna är sådana i vilka anjonen icke signifikant bidrar till saltets toxi- citet och vilka salter är kompatibla med de sedvanliga farmaceutiska bärarna och är avsedda för oral eller paren- teral administrering. De innefattar salterna av föreningar- na enligt uppfinningen med mineralsyror, såsom klorväte- syra, bromvätesyra, fosforsyra och svavelsyra, med orga- niska karboxylsyror eller organiska sulfjonsyror, såsom åttiksyra, citronsyra, maleinsyra, bärnstenssyra, bensoe- syra, vinsyra, fumarsyra, mandelsyra, askorbinsyra, äppel- syra, metansulfonsyra, p-toluensulfonsyra och andra syror, som är kända och använda inom penicillin- och cefalosporin- området. Framställningen av dessa salter utförs medelst konventionell teknik, som innefattar omsättning av en av substanserna enligt uppfinningen med syran i väsentligen ekvivalent mängd.

Farmaceutiskt godtagbara metall- och aminsalter är lika- ledes sådana salter av föreningarna enligt uppfinningen, vilka är stabila under omgivningens betingelser och i vilka katjonen icke bidrar signifikant till saltets toxicitet eller biologisk aktivitet. Lämpliga metallsalter innefattar natrium-, kalium-, barium-, zink- och aluminiumsalterna.

Natrium- eller kaliumsalterna föredras. Amínsalter fram- ställda utgående från aminer, som exempelvis används med bensylpenicillin och som har förmåga att bilda stabila salter med den sura karboxylgruppen, innefattar trialkyl- aminer, såsom trietylamin, prokain, dibensylamin, N-bensyl- -ß-fenetylamin, l-efenamin, N,N'-dibensyletylendiamin, de- hydroabietylamin, N-etylpiperidin, bensylamin och dicyklo- hexylamin. 458 611 -7 Föreningarna enligt uppfinningen och deras salter enligt ovan angivna definition kan beredas för oralt eller paren- teralt bruk på konventionellt sätt under användning av kända farmaceutiska bärare och excipienter och de kan före- ligga i form av enhetsdoser eller i multipeldosbehållare.

Kompositionerna kan föreligga i form av tabletter, kapslar, lösningar, suspensioner eller emulsioner. Dessa föreningar kan även beredas som suppositoria under användning av kon- ventionella suppositoriumbaser, såsom kakaosmör eller andra fettartade material. Föreningarna kan, om så önskas, admi- nistreras i kombination med andra antibiotika innefattande cefalosporiner, penicilliner och aminoglykosider.

Tabell 1 nedan innehåller en sammanfattning av strukturerna av de produkter som avslöjas i utföringsexemplen 1-38. De flesta av dessa föreningar är 7ß-(D-fenylglycylamido)-cefa- losporíner med 1-propen-1-yl-gruppen i 3-ställningen. Den ändstáende kolatomen i propenylsubstituenten i vissa av fö- reningarna uppbär en substituent, såsom en alkylgrupp (me- tyl), halogen (klor eller jod) eller en arylgrupp (fenyl).

Fenylglycylaminogruppen kan vara osubstituerad eller mono- eller disubstituerad med hydroxi, alkoxi eller halogen.

Tabell 1.

Produkter avslöíade i utförinasexemolen 1-gå.

R $HCONH 31 “H2 J/:N / cn=cxn3 O. 23 Förening nr gl 32 33 (konfiggratíon) 9 (BMY-28100) H on -CH3 (z) 11 (BBS-1058) H OH -CZH5 (Z) 18 (sas-loss) n n -cn3 (z) (BBS-1066) H H -cH2c1 (2) 8 (BBS-1067) H OH -CH3 (E) 13 (BBS-1075) H OH ~CH2C6H5 (Z) 458 611 40 -8 Förening nr §l_ gi R3 (konfiguration) 26 (BMY-28060) Cl OH -CH3 (Z) 31 (BMY-28068) H0 OH -CH3 (Z) 36 (BMY-zaosv) cr13o . ou -cH3 (z) Tabell 2 nedan ger en sammanfattning av den antibakte- riella aktiviteten in vitro av de substanser som avslö- jas i föreliggande patent. De minsta inhiberande koncen- trationerna, fastställda medelst agarutspädningstekniken för tre grupper av organismer betecknade Gp-Ia, Gp-Ib och Gn-Ia, anges. Var och en av dessa grupper av orga- nismer utgörs av fem individuella stammar av mikroorga- nismer, vilka är identifierade i en fotnot till tabellen.

Gp-Ia-organismerna är grampositiva stafylokocker, vilka är känsliga för penicillin. Gp-Ib-organismerna är gram- positiva stafylokocker, som är resistenta mot penicillin och producerar penicillinas. Gn-Ia-organismerna är gram- negativa bakterier, som är känsliga mot ampicillin och cefalotin. Föreliggande substanser har allmänt låg akti- vitet mot ampicillin- och cefalotinresistenta gramnega- tiva bakterier. Följande slutsatserfkan dras från tabell 2 beträffande den antibakteriella aktiviteten in vitro av dessa föreningar. w Samtliga föreningar har god aktivitet mot penicillin- känsliga stafylokocker (Gp-Ia). De är allmänt mindre aktiva mot penicillinresistenta stafylokocker (Gp-Ib) med en faktor av 3 eller mera. Varje enskilt fall är emellertid föreningarna flera gånger aktivare än cefa- lexin och cefadroxil.

Endast de föreningar med den osubstituerade cis(Z)- propenylgruppen i 3-ställningen har god aktivitet mot gramnegativa bakterier (Gn-Ia). Hänvisning sker till fö- reningarna 9, 18, 26 och 36. Trans(E)-propenylföreningen, förening nr 8, är mindre aktiv mot gramnegativa bakterier med en faktor 8 i förhållande till motsvarande cis-pro- penylförening, förening nr 9. Likaledes synes substi- tion på den ändstâende metylgruppen av propenylsubsti- 458 611 -9 tuenten i 3-ställningen resultera í en minskning av den gramnegativa aktiviteten. Hänvisning sker till föreningarna nr 11 och 13. Dessa föreningar är icke desto mindre potenta antíbakteríella medel och är i huvudsak ekvivalenta med cefalexin och cefedroxil. Ringsubstitution inverkar icke på något sätt manligt på den antibakteriella aktiviteten. se föreningarna nr 9, 18, 26 och 36. Föreningen nr 31 synes vara ett undantag vad gäller var och en av ovan dragna slutsatser men är i själva verket en synnerligen aktiv sub- stans både mot grampositiva och gramnegatíva bakterier, sä- som kommer att visas i tabell 3.

Tabell 2.

Agarutspädningsteknik (Mueller-Hinton-Agar) Minsta inhiberande koncentration (mcg/ml) Gp 1a3 gp 133 cg Ia3 E§renins_nr l 2 1 Z l 2 9 (sur-20100) 0,23 0,35 0,92 0,0 0,0 0,7 11 (sas-1050) 0,40 1,4 4,1 (sas-1065) 0,23 0,3 0,92 0,92 0,8 0,8 8 (sas-1067) 0,26 1,4 6,3 13 (ass-1076) 0,20 0,7 >s0 26 (BMY-28060) 0,13 0,53 1,1 31 (Buy-zsosa) 6,30 7,2 6,3 36 (sur-28097) 0,354 1,24 0,s34 cefalexin 1,2 0,70 4,1 3,6 6,2 4,1 cefadroxil 1,2 1,10 3,6 4,1 8,3 8,3 1. Spalterna 1 och 2 anger separata testförsök. 2. Spalterna l och 2 anger separata testförsök. 3. Medelvärde av fem organismer från varje grupp - Gp Ia gram+ stafylokocker; penicillinkänsliga; inget penícillinas produceras. .

S. aureus Smith A9537 S. aureus A9497 S. aureus Terajima 458 611 40 S. aureus A9534 S. aureus A9601 Gp Ib gram+ stafylokocker; penicillinresistenta; penicillinas produceras. 193 BX-1633-2 A9606 A15092 Russell A9602 _ Gn Ia gram- bakterier; ampicillin- och cefalotin-~ känsliga E. coli Juhl A15l19 E. coli A9660 K. pneumoniae D11 P. mirabilis A9554 P. mirabilis A9900 4. Ej del S. aureus S. aureus S. aureus S. aureus S. aureus av försök 1; testades separat.

Tabell 3 innehåller jämförelsedata för den antibakte- riella aktiviteten in vitro med avseende på samma orga- nism som i tabell 2 under utnyttjande av två olika bak- teriologiska odlingsmedier. Mueller-Hinton-agar är det standardmedium som användes vid de i tabell 2 angivna försöken. Tabell 3 innehåller en jämförelse mellan de minsta inhiberande koncentrationerna för tre av testfö- reningarna först genom bestämning i Mueller-Hinton-medium och därefter i näringsagar. Förening nr 9, som innehåller 4-hydroxisubstitution i fenylringen, och förening nr 36, som innehåller 3-metoxi-4-hydroxisubstitution i'fenyl- ringen, uppvisar endast en måttlig mediumeffekt. Härmed avses att skillnaderna i MIK är mindre än trefaldig. Fö- rening nr 31, den 3,4-dihydroxifenylsubstituerade före- ningen, uppvisar 6- till 12-faldiga aktivitetsskillnader mellan de tvâ medierna, varvid de minsta inhiberande kon- centrationerna i näringsagar är mycket lägre än de som bestämmes i Mueller-Hinton-agar. Följaktligen kan den slutsatsen dras att förening nr 31 är jämförbar i anti- bakteriell aktivitet med de övriga cefalosporinerna med cis-propenylgruppen i 3-ställningen, vilka beskrivs i tabell 2. Detta fenomen, vilket innebär att ett antibio- _11 " 458 611 tikum uppvisar större aktivitet i en typ av näringsme- dium än i en annan typ, har rapporterats och studerats tidigare. Hänvisning sker till T.A. Pursiano et al.

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 3, No. 1, sid 33-39 (1973).

Tabell 3.

Testmediumjämförelse Agarutspädningsteknik Minsta inhiberande koncentration (mcg/ml) Förening nr 1 Gp Ia2 Gp Ibz Gn Iaz 9 (BMY-28100) A 0,23 0,92 0,70 B 0,17 0,35 0,70 31 (BMY-28068) A 4,8 6,3 5,5 B 0,40 0,61 0,92 (BMY-28097) A 0,35 1,2 0,53 B 0,23 0,40 '0,4O 1 A Mueller-Hinton-agar B Näringsagar 2 .. H . .

Medelvarden for samma grupp av organismer som 1 tabell 2.

De korrelationer mellan struktur och aktivitet som fram- går av ovan angivna undersökningar in vitro bekräftas av resultaten från undersökningar in vivo på möss. I tabell 4 återges skyddsdoserna för möss, som har infekterats med ett letalt inockulat av en bakterie. Två olika bakterier användes vid undersökningarna, en grampositiv organism och en gramnegativ organism. Skyddsdosen (PDSO) är den dos som vid administrering till en grupp av infekterade möss resulterar i 50% överlevnad efter 5 dagar. Normalt dör obehandlade infekterade möss inom 3 dagar efter in- jektion av det letala inockulatet. \458 611 40 ~l2 x Tabell 4 Skyddsdos för möss infekterade med ett letalt inockulat.1 Oral behandling Förening nr S. aureus Smith E. coli Juhl 9 (amy-28100) 0,14 (o,31)2 1,2 (a,4)2 11 (ass-1oss) 0,32 (o,31) 3,0 (8,4) 18 (aas41oss) 0,18 (o,21) 1,s (s,2) a (ans-1067) 0,20 (o,31) 7,5 (8,2) 26 (Bmx-26060) 0,17 (o,22) 3,04 (8,4) 31 (Bmx-28068) 0,13 (o,27) 0,44 (8,2) se (sur-28097) o,o93 Dos i mg/kg som förhindrar död under 5 dagar hos 50% av djuren i grupper av 5 möss, som har be- handlats med olika doser av testföreningen på in- fektionsdagen; bestämd genom interpolation från dos/svarskurvan: obehandlade möss dör inom 3 dagar.

Värden inom parentes avser cefalexin vid samma försök.

I detta försök erhölls ett värde av 0,16 mg/kg för BMY-28100; kontrollvärden för cefalexin eller ce- fadroxil ej tillgängliga.

Data i tabell 4 härrör från flera olika försök. Vid des- sa försök användes cefalexin som kontrollbehandling. Det för cefalexin bestämda PD50-värdet i samma försök anges inom parentes efter PD50-värdena för testföreningarna.

Det är uppenbart att var och en av cefalosporinerna upp- visar god aktivitet mot infektion av grampositiv Staphylococcus aureus och att föreningarna, som uppbär cis-propenylgruppen i 3-ställningen, är mer aktiva mot gramnegativa infektioner; se föreningarna nr 9, 18 och 31.

Tabell 5 innehåller jämförande blodnivâdata för möss, som har behandlats oralt och intramuskulärt med de i tabell l angivna testföreningarna. En jämngod oral absorption fram- går.Föreningru'3luppvisarexceptionellthögablodnivàerhos -13 458 611 möss efter oral administrering. Denna förening har vi- sat sig metaboliseras till förening nr 36 hos råtta. Hän- visning sker till utföringsexempel 37. Förening nr 31 är 3,4-dihydroxifenylföreningen och förening nr 36 är 3- metoxi-fi-hydroxifenylföreningen. sistnämnda har visat sig uppvisa hög aktivitet in vitro och in vivo. ~l4 458 611 Hwflwä ¥ Fm >m.° om FN @_f wF >w m 9 Pm mm~ ~.« wa oßw ~.m mm www m.~ oæv MF w«.o PN mr >.f m.> »M >.F mw mv æm.o WP mf mw_o m.m wv f_« mm mp w«.Q vw WP ~.F mr wæ m~f .w I w- mm.Q FN ær N.. N, moví m_~ wm WP Q«.° w~ vv m.P fw ßm «.f »w Nm mm.° Pm mm >_~ NP fw >.~ .w vw mw.o vn NN m.P OF mw «.f om - °m_o Pm wF m.f m_> vw F., cv ON «>.° mw vw o_~ mv om, m_P Pm Nm w@.° »N WN m.P mf wofi m._ mm .Hs\».m=. As«».^He\m=..Ha\».mø. ~afl»_ .Ha\w=.^He\@.@=v Aaflp. .He\wø. foam ~\Pa xmsu «un< ~\Pa xmao usa ~\wa xmeu .a.fi mx\ms ON .o.m mx\ma ON .0.m mxwms QQP "mon .WWÛÉ MOà HÜW>flfiUOHN m Hfiwâmà HHXOHUNMÜO ^wwow~|wzm. Hm Aøwommlwzm. wm .mw°P|mmm. wfl .oo-æ~|wzm._m N xmmuwm Hfl%0HUMw®0 «üflNwHmmw0 .w>°P|wmm. MH ~>w°P|mmm. w Amwopuwmm. mä ^wm°P:mmm. flfl .~ pofl. ^oo_w~|wzm. m ~ xwmHm@_ Hc wøflnwumm *U 458 611 Tabell 6 innehåller ytterligare data in vivo för förening nr. 9 med avseende på fyra andra organismer vid jämfö- relse med cefalexin, cefaklor och cefadroxil. Tabeller- na 7 och 8 innehåller jämförande data in vitro för före- ning nr 9 i förhållande till cefalexin, cefadroxil och cefaklor med avseende på ett antal streptokocker, Neisseria, Haemophilis och olika anaerober.

Vid försök med råttor avseende utsöndringen i urinen är 24 timmars utsöndringen av förening nr 9 med urinen hos råttor, som har behandlats oralt, jämförbar med den av cefalexin och cefadroxil och större än den av cefa- klor. Stabilitetsundersökningar, som har jämfört före- ning nr 9 med cefalexin och cefaklor i lösning under an- vändning av fosfatbuffert vid pH 6,5 och pH 7,0, human- serum (pH 6,8), hästserum (pH 7,6) och kalvserum (pH 8,2) som bärare, har avslöjat att förening nr 9 är avsevärt stabilare än cefaklor och jämförbar med cefalexin.

Tabell 6.

Skyddsdos PD50 för möss infekterade med ett letalt in- ockulat.

Oral behandling Organism 9(BMY-28100) Cefalexin Cefaklor Cefadroxil S. aureus Bx-1633 2,2 17 2,2 7,2 S. pyogenes A2o2o1 0,11 0,74 0,14 6,25 H. influenza A9729 1,8 18 1,6 25 P. mirabilis A9554 1,8 12,5 1,8 14 -16 458 611 w.o m.w m.w QQPA °w.o wwum>Hwwwa pxmfluuweoww @.° m.m m.w oo_^ w.° mm.°~< = w.° m.w m.@ QQPA @.Q «mPo~< = @.° m.m m.w QQFA @.° m«,°~< ¶ = || m.w m.w OQPA w.Q ~«P°~< = @.° m_w m.@ QQPA m_o -,m,< mßwnuuoaow .2 m.P w., ,.m m~.o o~_° w@nm>Hmøwe uxmflnpweoww w.o Q., F.m ~.o ~_o mwomrm = w_P @_F P.m «.o ~_o mwmmæ = || w.f -m ~.o ~.o HHH mm» = @.f Q.. ,_m ~.° ~.° H mh» = w.« w.F ~.m -o N.o HH mæu mmflcoëswam .w ~.° °m.° °w~° o~.Q Qmo_° @wuw>Hww@a ugmfinuwsoww ~.o w.o w.° ~.o mo_Q oqomvæ = ~.° m.° w_° ~.0 mo.o mw°o~« = ~.° æ_° w.Q ~.o mo.o flowmæ = ~.° @.° @_° ~.o mo_o xufln = ~_° w.o @.° ~_° mo_o mN|w mm:wwo»m.w uodxnuwu Hflxouøfluwu cflxwfimmwu A@>°F .N wumm. mmmmmwmm |mmm. MH ^oo_w~ |w:m. m .He\msV xHz ß Hflwnfle mfiflflnmoñmmm zoo mfluwmmflmz .flouuoummuuw uoE ouufl> :fi.»muH>flux< mmflcoäflmcm .m mmcmmowm .m n- ÜNNCNÖHHCH .I 0NNCÜflHMCfi .E 2 wfiuflwfimqflcwa .z Emflcmwuø 1: || ..m ~.m «_o ~_o mmßomm mw || «.° w.o ~.o w_o Powowa 1: m.@ P.m m~ w., fmqwmm mw 1- m.@ «.~ m~ w.P fw«-< ne || m.@ P.m m~ w~P ßmfwwm ww.° m.@ m.@ OQPA °w.Q wuHm>Hwuwe pxwflnuweoww v.o m.w m_@ QOFA w_o ~æ«-m «.° m_@ m_@ °o.^ w_° mw«-< w.° m.w m.@ OQFA æ.o mmwm< @.o m_@ m.@ OOFA w.Q m~mf~« U 0.0 m.@ m.@ oo~^ w.o mmfowa _ wßo m_@ m.w QOPA w.° >>f°~< w_° m.w m.@ QCFA w_o mwßmæ @.o m.w m.@ øof^ ow.o wwHw>Hwøwa pxwfiupwsoww m.° m.@ m.w QOPA w_o ßmvfwæ w.o m.w m.@ oo-A w.0 wmvfmæ @.o n.w m.@ OOPA w.o >w«P~< @.° 1: 11 nu 1: m @.° m.w m_@ QQPA w.o m«øQ~< uofixuwwu flflxogømwwu cfixmflmwwo ^@>QF ^~ wpmm. |wmm, mfi Aoofiww |w=m. Q ^.mvHOwv ß fiflwflmß 458 611 40 -18 Tabell 8 Aktivitet in vitro mot anaeroberl MIX ug/ml -lak- 9(BMY- Cefa1èxin^Cefak1or Organism tamas 28100) Gn,stavar B.fragilis A20928-1 (-) 0,8 12,5 3,1 B.fragi1is A21900 (-)* 50 12,5 6,3 B.fragilis A20935 (-) 0,8 6,3 3,1 Geometriskt medel- värde 3,2 9,9 3,9 Gn,stavar B.fragilis A220S3 (+) 50 25 100 B.fragi1is, A22021 (+) >100 100 >100 B.fragilis , A22693 (+) >100 >100 >100 Geometriskt medel- värde >100 > 75 >100 B.fragilis A22695 (+) >100 100 100 B.fragilis A22533 (+) >100 >100 >100 Geometriskt medel- värde >100 >100 >100 Gp,stavar C.difficile A21675 * 6,3 100 25 C.perfríngens A9645 0,4 12,5 1,6 Gp,kocker P.acnes A21933 0,4 1,6 0,8 P.anaerobius 1121905 0,8 6,3 (1,4 Geometrisk medelvärde 0,95 11 * Clindamycin-resistent 40 ”I” 458 611 Föreningarna enligt förevarande uppfinning framställes genom tillämpning av de syntesvägar som avslöjas i brit- tiska patentskriften 1 342 241 och de amerikanska patent- skrifterna 3 994 884 och 4 107 431 genom val av lämpliga utgångsmaterial. I huvuddrag innebär bildningen av den substituerade vinylgruppen 1 3-ställningen av cefalospo- rinerna enligt föreliggande uppfinning omsättning av en halidreaktant med en triarylfosfin för erhållnade av ett fosfoniumsalt, som vid behandling med bas ger en fosforanyl- mellanprodukt. Sistnämnda behandlas därefter med en kar- bonylreaktant för framställning av föreningen enligt fö- religgande uppfinning. Antingen halidreaktanten eller karbonylreaktanten innehåller cefalosporinkärnan. Detta åskâdliggöres i följande reaktionsschema.

Halidreaktant Fosforanyl- Karbonyl- mellanprodukt reaktant Qcflzx 49635) 39 H \ R Reaktionsschema 1 3 1 t Reaktionsschema 2 QCH=CHR S U //än produkt H QCH=O ïcnx (c6H5) BP [H \ c=P(c6n5)3] 3 ' 3/ R bas R I ovan angivna reaktionsschema är R3 C1_4-alkyl, C7_l4-aralkyl _eller gruppen AlkX, där Alk och X har ovan angivna betydelser. Symbolen Q avser 7-amino-3-cefem-3-yl-4-karboxylsyrakärnan, vari amino- och karboxylsyragrupperna kan uppbära skyddsgrup- per, såsom en silylgrupp eller någon annan grupp som är välkänd för fackmannen inom det kemiska'ß-laktamantiobio- tika-området, eller också kan Q vara en 7-acylamino-3- cefem-3-yl-4~karboxy1syrakärna, där 7-acylaminogruppen kan vara en grupp, som konventionellt ingår i cefalosporin- antiobiotika innefattande den àëamino-aêsubstituerade fenylacetamidogruppen enligt föreliggande uppfinning.

Ovan angivna sulfoxider har flera fördelar. Speciellt har Q någon av följande formler: 458 611 40 -20 ((13) n 211m s / l . | o f 011222 (931 (ann vari R har ovan angivna betydelse; n är heltalet 0 eller 1 och avser antalet syreatomer, som år bundna till svavel; Ac avser en acylgrupp av den typ som vanligen ingår i 7- acylaminocefalosporiner, såsom fenylacetyl och fenoxi- acetyl; och - B är en alkyliden- eller aralkylidenskyddande grupp, som härrör från en aldehyd eller keton, såsom bensylidengrup- pen, som lätt avlägsnas i ett efterföljande steg, exempel- vis genom hydrolys under användning av Girard's Reagens T.

P1, P2 och P3 är skyddsgrupper av den typ som vanligen används inom cefalosporinkemín med aminogrupper, hydroxi- grupper och karboxylgrupper.

Lämpliga karbonylskyddande grupper (P2) innefattar aralkyl- grupper, såsom bensyl, p-metoxibensyl, p-nitrobensyl och difenylmetyl (benshydryl), alkylgrupper,.sâsom t-butyl, haloalkylgrupper, såsom 2,2,2-trikloretyl, och andra kar- boxylskyddande grupper, som beskrives i litteraturen, exem- pelvis i brittiska patentskriften 1 399 086. Det är före- 40 '21 458 611 draget att använda karboxylskyddande grupper, som lätt avlägsnas genom behandling med syra, speciellt benshyd- ryl eller t-butyl.

Amino- och hydroxiskyddande grupper (P1.och P3) är väl- kända inom tekniken och innefattar trityl- och acylgrup- per, såsom kloracetyl, formyl, trikloretoxikarbonyl, tert.-butoxikarbonyl, karbobensyloxi, etc. Även i detta fall föredras aminoskyddande grupper, som lätt avlägsnas genom behandling med syra, speciellt tert.-butoxikarbonyl- gruppen.

I reaktionsschema 1 och 2 ovan framställs oxiderna, när cefalosporinkärnan Q används i form av 1-oxiden (n=1), medelst kända förfaranden, såsom genom oxidation av mot- svarande cefalosporin (n=0) med m-klorperbensoesyra eller perättiksyra. I senare skede av syntesen reduceras 1-oxi- den medelst kända förfaranden, exempelvis genom reduktion med jodidjoner i ett vattenhaltigt medium.

Omvandling av halidreaktanten med formeln QCHZX enligt reaktionsschema 1 till fosforanylmellanprodukten utförs företrädesvis genom användning av en halidreaktant, där X är jodid. Om en klorid- eller bromidhalidreaktant använ- des kan den först omvandlas till jodiden genom behandling med natriumjodid i dimetylformamid eller acetonlösning.

Jodidreaktanten reagerar lätt med en triarylfosfin, såsom trifenylfosfin, i en organisk flytande bärare, som är inert med avseende på reaktanterna under reaktionsbetingelserna.

Rumstemperatur under en kort tidsperiod av upp till flera timmar utgör lämpliga betingelser. Lämpliga triarylfos- finer förutom trifenylfosfin innefattar de lättillgängliga föreningarna med reaktionskompatibla arylgrupper, såsom substituerad fenyl, exempelvis tolyl, naftyl, substituerad naftyl och heteroaromatiska eller substituerade hetero- aromatiska grupper. Det första steget i reaktionen inne- fattar bildning av triarylfosfoniumsaltet, som vanligen utfaller ur lösningen och tillvaratas på ett filter. Tri- arylfosfoniumsaltet upplöses därefter i'ett lämpligt fly- tande organiskt lösningsmedel, som icke är blandbart med 458 611 40 vatten och som är inert under reaktionsbetingelserna, så- som kloroform, trikloretylen eller annan polyklorerad el- ler -bromerad metan eller etan. Fosforanylmellanprodukten framställes därefter in situ genom behandling av lösningen med en vattenlösning av ett alkalimetallkarbonat, -bikar- bonat eller -hydroxid vid rumstemperatur. Det organiska skiktet, som innehåller fosforanylmellanprodukten, sepa- reras, tvättas med vatten och torkas på sedvanligt sätt.

Den i reaktionsschemat visade karbonylreaktanten sättes därefter till den torra lösningen av fosforanylmellanpro- dukten och slutsteget i reaktionen äger därefter rum vid rumstemperatur inom en relativt kort tid av från cirka 2 till 20 timmar. Den önskade produkten, som represente- ras av formeln QCH=CHR3, utvinnes medelst teknik, som är* känd för fackmannen, som är förtrogen med organisk-kemiska laboratorieförfaranden, såsom kromatografi på en silikagel- kolonn.

Halidreaktanterna med formeln QCHZX i reaktionsschema 1 framställes utgående från motsvarande 7-amino- eller 7- acylamino-3-hydroximetyl-cef-3-em-4-karboxylsyraderivat medelst metoder, som i princip är kända.

Omvandling av halidreaktanten med formeln R3CH2X enligt reaktionsschema 2 till fosforanylmellanprodukten kan ut- föras antingen med kloriden, bromiden eller jodiden (X=Cl, Br eller I). Om så önskas kan kloriden eller bromiden om- vandlas till jodiden i förväg, men detta är icke väsent- ligt. Omsättning med triarylfosfinen, såsom trifenylfos- fin, utförs antingen utan lösningsmedel eller i en orga- nisk vätskeformig bärare, som är inert under reaktionsbe- tingelserna. Rumstemperatur eller förhöjda temperaturer under en tidsrymd av från 1 till 24 timmar vid 20°C till 150°C kan användas. Triarylfosfoniumsaltet utfaller van- ligen och tillvaratas pâ ett filter. Det upplöses därefter i ett lämpligt flytande organiskt lösningsmedel, såsom di- metylsulfoxid, eller ett lösningsmedel, som icke är bland- bart med vatten, såsom eter, eller tetrahydrofuran och behandlas med en bas, såsom butyllitium, fenyllitium, natriummetoxid eller natriumhydrid, under en period av 40 '23 458 611 från flera minuter till flera timmar vid en temperatur inom intervallet från -40°C till +50°C. Karbonylreaktan- ten sättes därefter till den torra reaktionslösningen och reaktionen fåt äga rum vid en temperatur från -40°C till +50°C under 1 till flera timmar. Den önskade produkten, som representeras av formeln ///H c \R3 utvinnes såsom tidigare.

QCH= Reaktionssohema 1 har visat sig vara bekvämt för fram- ställning av de substanser med formeln QCH=CHR3, där R3 är lägre alkyl, fenylalkyl, naftalkyl_e11er haloalkyl i cis-(Z)-konfiguration. Enligt en variant av reaktionsschema 1, som i det följande betecknas metod A, används som halidreaktant 25-Åk(N-t-butoxi-karbonylamino)- ae(p-hydroxifenyl)aoeuænidQ]-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxyl- syra-benshydrylester. Detta åskådliggörs i utföringsexem- pel 4, 5 och 6 nedan.

En ytterligare variant av reaktionsschema 1, som vi har funnit vara bekvämt, liknar metod A genom att Z6-Z&-(N-t- butoxikarbonylamino)-KP(p-hydroxifenyl)acetamidq]-3-klor- metyl-3-cefem-4~karboxylsyrabenshydrylester användes som utgângsmaterial men vid metod B användes kloracetaldehyd för framställning av den blockerade 7-aminocefalosporan- syran med 3-klor-1-propen-1-yl-gruppen i 3-ställningen.

Sistnämnda material uppvisar antibakteriell aktivitet men icke i någon överdriven utsträckning. Vid metod B utnytt- jas 3-klor-1~propen-1-yl-föreningen som en mellanprodukt och omvandlas först till motsvarande 3-jod-1-propen-1-yl- förening, som därefter omvandlas med heteroaromatiska te- oler till 3~heteroaryltioprop-1-en-1-yl-cefalosporinderi- vat.

En ytterligare variant av reaktionsschema 1 betecknas i det följande metod C. Vid denna variant framställes 7- amino-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylsyrabenshydr§lestern såsom tidigare och 7-amino-gruppen skyddas genom omsätt- 458 611 40 -24 ning med bensaldehvd för framställning av bensylidenskydds- gruppen.

Sistnämnda behandlas därefter med trifenylfosfin för till- handahållande av fosfoniumsaltet, som därefter omvandlas med basen till fosforanylmellanprodukten, och sistnämnda behandlas med en aldehyd för erhållande av den 3-substi- tuerade vinyl-7-aminocefalosporansyran, som därefter acy- leras för införande av den önskade acylgruppen i 7-stä1l- ningen.

Två variationer av reaktionsschema 2 föreslås. Enligt den första varianten, metod D, omvandlas 3-hydroximetyl-7-fenyl- acetamido-3-cefem-4-karboxylsyran, som har framställts så- som beskrivits ovan, varvid karboxylsyran skyddas som bens- hydrylestern, till motsvarande 3-formylförening. Sistnämn- da får därefter reagera med fosforanylmellanprodukten, som härrör från en halid med formeln R3CH2X, såsom visas i reaktionsschema 2, och den önskade 7-acylaminogruppen in- föres genom acylbyte.

Metod E är en ytterligare variant av reaktionsschema 2, där blockerad 7-p~hydroxifenylglycy1amido-3-formyl-3- cefem-4-karboxylsyra användes som karbonylreaktant. 7-fenylacetamido-cefalosporansyra är ett lämpligt utgångs- material på grund av dess lättillgänglighet. Acetoxigrupï pen däri kan lätt hydrolyseras enzymatiskt under utnyttjan- de av vetekli som enzymkälla för erhållande av 7-fenyl- acetamido-3-hydroximetyl-cef-3-em-4-karboxylsyra. Karboxyl- syragruppen kan skyddas genom omvandling till benshydryl~ estern genom behandling av syran med difenyldiazometan.

Estern behandlas därefter med fosforpentaklorid under kända betingelser, vilket resulterar i en spjälkning av 7-fenyl- acetylgruppen och omvandling av 3-hydroximetylgruppen till en 3-klormetylgrupp. Framställningen av 7-amino-3-klor- metyl-3-cefem-4-karboxylsyrabenshydrylestern medelst des- sa metoder åskådliggöra i utföringsexemplèn 1 och 2.

Alternativt kan 7-fenylacetamido-3-hydroximetylcef-3-em- a» 458 611 4-karboxylsyran omvandlas till 3-halometylföreningen och följaktligen till fosforanylmellanprodukten, följt av omsättning med en aldehyd för framställning av den substituerade 3-vinylcefalosporinen enligt någon av va- rianterna av reaktionsschema 1.

Den cefalosporin-3-karboxaldehyd som representeras av formeln QCH=0 i ovan angivna reaktionsschema och som tjä- nar som karbonylreaktant i reaktionsschema 2 framställes genom oxidation av en 7-acylamino-3-hydroximetyl-cef-3- em-4-karboxylsyraester, såsom beskrives i ovan angivna amerikanska patentskrift 3 351 596. Reaktionsschema 2 är mindre föredraget av de tvâ visade syntesvägarna och synes icke vara lämpligt för propenylprodukterna med for- meln XIII.

Föreningarna med formeln QCH=CHR3 föreligger i cis-(Z)- och trans(E)-konfigurationerna. De föreningar som har cis(el1er Z)-konfiguration föredras. De har större anti- bakteriell aktivitet än motsvarande substanser med trans- (eller E)-konfiguration.

Uppfinningen åskâdliggörs närmare medelst följande ut- föringsexempel. ÅID: * '458 611 40 -26 Exemgel 1 .

Benshydryl-3-hydroximetyl-Zß~fenylacetamido-3-cefem-4- karboxylat (förening 1) Till en omrörd suspension av 162,5 ml fosfatbuffert, pH 7 och 20 g torrt vetekli vid rumstemperatur sattes g (12,1 mmol) 7-fenylacetamidocefalosporansyranatrium- salt i en portion. Fortskridandet av reaktionen följdes- medelst HPLC till dess hydrolysen var fullbordad (5 tim- mar). Suspensionen filtrerades för avlägsnande av veteklit och filtratet.ky1des till 5-10°C för extraktiv förestring.

Till den kylda lösningen sattes 32 ml metylenklorid, följt av en 0,5 M lösning av difenyldiazometan i metylenklorid (24 ml). PH inställdes därefter på 3,0 med 28% fosforsyra.

Efter 1 timme fick reaktionsblandningens temperatur stiga till 20°C. 56 ml heptan tillsattes långsamt och den erhåll- na kristallina, i rubriken angivna produkten utvanns ge- nom filtrering. Produktutbytet var 3,0 g (50%).

Exemgel 2.

Benshydryl-Z5-amino-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylat (2) O H2Cl COOCH(Ph)2 Till en uppslamning av 8,3 g (40 mmol) PCl5 i 1000 ml CH2Cl2 sattes 3,2 g (40 mmol) pyridin och blandningen om- rördes 20 minuter vid 20°C. Till blandningen sattes 5,1 g (10 mmol) benshydry1-3-hydroximetyl-7-fenylacetamido-3- cefem-4-karboxylat (1) under omrörning vid -40°C i en por- tion. Blandningen omrördes 15 minuter vid -10°C och fick stå 7 timmar vid en temperatur av från -1000 till -15°C.

Till den kylda lösningen (1-20°C) sattes 10 ml propan-1,3- diol och blandningen fick stå 16 timmar vid -20°C och där- 40 “27 1458 611 efter 20 minuter under omröring vid rumstemperatur. Den erhållna lösningen tvättades med 2 x 20 ml isvatten och ml av en mättad vattenlösning av natriumklorid, tor- kades över magnesiumsulfat och koncentrerades i vakuum.

Den gummiartade återstoden (12 g) upplöstes i en blandning av CHCI3 och n-hexan (2:1) och underkastades kromatogra- fi under användning av 200 g av en silikagelkolonn och samma lösningsmedel som elueringsmedel. De fraktioner som innehöll den i rubriken angivna föreningen indunstades i vakuum och återstoden triturerades med n-hexan för erhål- lande av föreningen 2 (2,1 g; 51%) med smältpunkten 110°C (sönderdelning). 1 Im v 3400, zsoo, 1785, 1725 cm' .

Uv- Å ëšöflzss nm (ER 160) ' max 1cm ' mmm annso-aö + cDc13 3,69 (zu, s), 4,43 (211, s), 5,09 HH, PPm a, J=4,s az), 5,24 (m, a, J=4,5 Hz), _ 6,87 (1H, S), 7,3 (10H, m).

Exemgel 3: Benshydryl-7 -/D-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-acetamido/-3-klormety1-3-cefem-4-karboxylat (före- ning 3 ) _ BO-<fi::>»-fi3C:N3__1__1:;i;:L_ .

Na cff-h 1/ CE2C1 CDIC ((33) 3 cnzce (cszs) 2 Till en blandning av 20,7 g (0,05 mol) benshydryl-7-amino- 3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylat (2) och 20 g (0,07S mol) D-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxifenyl)Äättiksyra i 500 ml torr tetrahydrofuran (THF) sattes 15,44 g (0,075 mol) N,N'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC) och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstemperatur och indunstades till torrhet. Återstoden upplöstes i 1 liter etylacetat (AcOEt) och den olösliga dicyklohexylkarbamiden avlägsnades genom filtrering. Filtratet tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat, vatten och en mättad vattenlösning av natriumklorid, torkades över vatteníritt natriumsulfat och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kro- motagraferades på en silikagelkolonn (Waho-gel C-100, 500 g) genom eluering med 4 l kloroform och 6 l 1% kloro- form-metanol. Den önskade fraktionerna kombinerades och “458 611 -28 indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden triture- rades med eter-isopropyleter för erhållande av 30,6 g (92%) av föreningen 3. nu våg: om* 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150. man: :Scncla ppm 1,45 (en, s, c-cn3), 3,4 (zu, br-s, 2-H), 4,28 (2H, s, CHZC1), 4,86 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), ,12 (1H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,63 (ZH, d, 9Hz, fenyl-H), 6,93 (1H, s, CH-Phz), 7,08 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7,0-7,5 (10H, m, fenyl-H).

Den oljiga återstoden kan användas utan kromatografisk re- ning i exempel 4.

Exemgel 4.

Benshydryl-Zå-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-acetamidQ]-3-jodmetyl-3-cefem-4-karboxylat (före- ning 4).

En blandning av 26,6 g (0,04 mol) av föreningen 3 och 18 g (0,12 mol) natriumjodid i 400 ml aceton omrördes 2 timmar vid rumstemperatur och indunstades till torrhet. Återstoden extraherades med 400 ml etylacetat och extrak- tet tvättades med en vattenlösning av Na2S2O3, vatten och en mättad vattenlösning av natriumklorid. Efter avdrivning av lösningsmedlet triturerades återstoden med eter-iso- propyleter för erhållande av 27 g (89%) av den i rubriken angivna föreningen. Etylacetatlösningen kan användas di- rekt i efterföljande steg (förening 5) utan isolering av förening 4, om så önskas.

IR; vä: cm* 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150. mm; .scDcla ppm 1,47 (en, s, c-cn3), 3,3-3,6 (211, m, z-m, 4,20 (ZH, s, CH2), 4,89 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,12 (1H, d, 6 Hz, CH-CO), 5,68 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,62 (ZH, d, 9 Hz, fenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh2), 7,08 (ZH, d, 9Hz, fenyl-H), 7-7,5 (10H, m, fenyl-H). -29 453 611 Exemgel 5: Benshydry1-Zß[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hvdroxi- fenyl)-acetamidq]-3-(trifenylfosfonio)mety1-3-cefem-4- karboxylat-jodid (förening 5). ao-©~ cx-xcoma S 1 <3 ED I ïä . f/ cH2P3 02C(CB3)3 0 C02CB(C6H5)2 En blandning av 15,1 g (0,02 møl) av föreningen 4 och ,7 g (0,06 mol) trifenylfosfin i 200 ml etylacetat om- rördes 1 timme vid rumstemperatur. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering, varvid man erhöll 17,4 g (as,s%) av föreningen s maa smäitpunkten 17o-1so°c. F11- tratet koncentrerades till 100 ml och koncentratet späd- des med 500 ml eter för erhållande av en andra sats om 1,1 g av föreningen 5. Totalutbytet var 18,5 g (91%). To- talutbytet av föreningen 5 räknat på föreningen 2 var 74,5%. Utbytet kunde ökas till 87,5% genom uteslutning av ovan angivna renings- cch isoleringssteg.

IR: V :gi cm_1 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150, 1090. man; áwso ppm 1,42 (9n, s, c-cHB), 3,45 (za, br-s, z-H), -5,4 (3H, m, 3-H a 6-H), 5,7 (1H, m, 7-H), 6,63 (za, d, 9 Hz, fenyl-H), 7,1-7,45 (12H, m, fenyl-H), 7,5-7,9 (15H, m, fenyl-H).

Analys för C52H49N307SPI: Beräknat: C=61,36; H=4,85; N=4,13; S=3,15.

Funnet: C=61,26; H=4,82; N=4,11; S=3,92.

Exemgel 6.

Benshydryl-Zß[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)-açetamidq]-3-112)-1-propen-1-yL]cef-3-em-4-karbo- xvlat (förening 6).

H0 eacoN1-1 _,/S *fä Å-N / cHecz-xcn co2c(cn3)3 0 3 cozcs (csas) 2 458 611 40 -30 Till en lösning av 1,8 g (1,77 mmol) av föreningen 5 i 100 ml kloroform sattes 100 ml vatten, som innehöll 2 ml (2 mmol) 1N-natriumhydroxid, och blandningen skakades S minuter. Det organiska skiktet separerades, tvättades med vatten och torkades på vattenfritt natriumsulfat. Kloro- formlösningen filtrerades och filtratet koncentrerades till 50 ml under reducerat tryck. Till koncentratet sat- tes 1 g acetaldehyd och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstemperatur och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wako- gel C-200, 50 g) genom eluering med kloroform och kloro- form-metanol (99:1). De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades för erhållande av 318 mg (28%) av produk- ten 6 med smältpunkten 120-130°C (sönderdelning). utväg; cmq 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1130.

NMR; 5 Cncla ppm 1,3-1,s (12n, m, c-cns), 3,22 (211, br-s, 2H), 4,90 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 (1H, br-d, CH-CO), ,5-6,1 (3H, m, CH=CH & 7-H), 6,63 (ZH, d, 9H2, fenyl-H), 6,91 (1H, s, CH-Ph), 7,09 (2H, d, 9Hz, fenyl-H), 7,2- 7,5 (10H, m, fenyl-H).

Exemgel 7: Natrium-Zß-[D-2-amino-2-(Q-hydroxifenyl)acetamidQ]-3- 112)-1-propen-1-yl]-3-cef-em-4-karboxylat_ (förening 7, BMY-28100 natriumsalt) 1a cin-Icons 5 NH: N / ca=cncn3 (cis) o 1 C005 En blandning av 318 mg (0,48 mmol) av föreningen 6 och 2,5 ml trifluorättiksyra (TFA) omrördes 1 timme vid rumstemperatur och späddes därefter med 50 ml eter och 50 ml isopropyleter. Den avskilda fällningen tillvara- togs genom filtrering och tvättades med eter för erhål- lande av av 188 mg (77%) av trifluoracetatet av före- ningen 7, som.upplöstes i 2 ml metanol (MeOH). Till lös- 40 '31 458 611 ningen sattes 2 ml (2 mmol) av en lösning av natrium- 2-etylhexanoat (SEH) i etylacetat och blandningen späd- des med 30 ml etylacetat för avskiljning av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering, tvättades med eter och torkades i vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 144 mg (73%, räknat på föreningen 6) av föreningen 7 1 form av en råprodukt. Råprodukten (135 mg) upplöstes i ml vatten obh“lösningen kromatograferades på en kolonn (25 mm x 100 mm) under användning av ca 20 ml av kolonn- fyllningen i PrepPak-500/C18 (Waters). Kolonnen eluera- des med vatten och eluatet, som innehöll den önskade produkten, koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 93 mg (69%) av föreningen 7 med smält- punkten 200°C (gradvis sönderdelning). Uppskattad ren- het 60% (enligt HPLC).

KBr -1 IR: V max cm 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250. uv= Aíâífatbuffert PH 7 mm 1 221 (11300), zso (ßzoo). mm; 1s Hz, 2-11), 3,52 (m, a, 1s az, z-m, 5,12 (m, a, 4,5 az, 6-11), 5,65 (m, a, 4,5 m, v-m, 5,s-5,9 (m, m, vinyl-H), 5,95 (m, a) 11,5 Hz, vinyl-H), 6,94 (za, d, 8 Hz, fenyl~H), 7,36 (2H, d, 8 Hz, fenyl-H).

Exempel 8: 7ß-[D-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidQ]-3-[(E)-1- propen~1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 8, BB-S1067) Den i exempel 7 erhållna râprodukten, 11,9 g oren före- ning 7 före kromatografisk rening, upplöstes i 50 ml av 0,01M fosfatbuffert (pH 7,2)-metanol (85:15) och lös- ningen inställdes på pH 6 med 6 N klorvätesyra. Denna lös- ning underkastades preparativ högprestandavätskekromato- grafi (HPLC) (prepPAK-500/C18, System 500, Waters) genom eluering med 0,01 M fosfatbuffert (pH 7,2), som innehöll % metanol. Eluatet övervakades medelst analytisk HPLC och den första fraktionen om 4 l visade sig innehålla cis-isomeren (BMY-28100). Den andra frahtionen om 1 l in- nehöll trans-isomeren och tillvaratogs och koncentrerades 458 611 40 -32 till S00 ml. Koncentratet inställdes på pH 3 med utspädd klorvätesyra och kromatograferades på 100 ml HP-20-kolonn genom eluering med 1 1 vardera av vatten och 30% metanol.

Sistnämnda eluat med en volym av ca 300 ml koncentrera- des till 10 ml och lyofiliserades för erhållande av 290 mg av trans-isomeren i form av en råprodukt (renhet 55%).

Detta material upplöstes i 100 ml 50% metanol och behand- lades med aktivt kol. Filtratet koncentrerades till en volym av 20 ml och fick stå över natten vid 5°C. Produk- ten kristalliserade som färglösa prismor, som tillvara- togs genom filtrering och torkades i vakuum i ett utbyte av 129 mg och med smältpunkten 230°C (sönderdelning). :n= ~v::§ cm'1 1760, 1680, 1s9o, 1sso, 1520, 1450, 1390, 1sso. 1z4o. mv; Ašåífatbuffert (PH 7) nmz ) zzs (1aooo), 292 (1e9oo). una: 6D2°*Naz°°3 ppm 1,89 (an, a, snz, c=c-cH3), 3,60 (2H, s, 2-H), 5,13 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-co), 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,99 (1H, d-q, 16 a 6Hz), 6,54 (1H, d, 16 Hz), 6,98 (ZH, d, 9 Hz, fenyl-H), 7,41 (2H, d, 9 Hz, fenyl-H).

Exempel 9: Kristallin I5-[b-2-amino-(p-hydroxifenyl)acetamido]-3- 112)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 9, BMY-28100) Den första fraktionen om 4 l som erhölls vid den prepara- tiva HPLC i exempel 8 innehöll cis-isomeren (BMY-28100) och koncentrerades till en volym av 2 l och koncentratet inställdes på pH 3 med utspädd klorvätesyra. Lösningen satsades på en kolonn innehållande 1 1 HP-20 och kolon- nen tvättades med 6 l vatten till dess effluentens pH- värde var 7. Kolonnen eluerades därefter med 4 1 av en % vattenlösning av metanol. Eluatlösningen övervakades medelst HPLC och de lämpliga fraktionerna kombínerades (ca 2,5 l) och koncentrerades till S0 ml vid en tempera- tur mindre än 40°C under reducerat tryck: En kristallin fällning bilaaaes. Kancentratet kyiaes 2 timmar via o°c och den kristallina fällningen tillvaratogs genom filtre- ”f” 458 611 ring, tvättades med en 80% vattenlösning av aceton, där- efter med 100% aceton och torkades därefter i vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 4,09 g av den önskade produkten i ren kristallin form med smältpunkten 218- 220°C (sönderdelning) i form av färglösa prismor; renhet 95% enligt HPLC-analys.

IR: \*::š cm_1 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235. uv; xšâfšfatbüfert (PH 7) mn ( ) zzs (12:00), 279 (saoo).

NMR= ¿D2°*NaH°°3 ppm 1,71 (an, d, e az, c-cn3), 3,27 (1u, d, 18 Hz, 2-H), 3,59 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 5,18 (18, d, 4,5 Hz, 6-11), 5,22 (111, s, cHco) 5,73 (m, d, 4,5 Hz, 7-H). ,5-6,0 (1H, m, CH=C), 6,02 (1H, d, 11Hz, cH=c), 6,98 (za, d, 9 Hz, fenyl-H), 7,41 (ZH, d, 9 Hz, fenyl-H).

Analys för C18H19N3O5S 1/2 H20: Beräknat: C=54,26; H=5,06; N=10,55; S=8,05 Funnet: C=54,15, 54,19; H=5,13, 5,08; N=10,30, 10,42 S=8,38, 8,04 Moderluten från föregående kristallisation koncentrerades till en volym av 10 ml och behandlades med 20 ml aceton.

Då lösningen fick stå i kylskåp över natten bildades en kristallin fällning, som tillvaratogs genom filtrering och torkades i vakuum över fosforpentoxid; vikt 670 mg (renhet 90% enligt HPLC). En portion av detta material, 560 mg, upplöstes i 200 ml av en 50% vattenlösning av metanol och lösningen behandlades med 0,5 g aktivt kol och filtrerades. Filtratet koncentrerades under reducerat tryck och vid 40°C till en volym av 20 ml och hölls där- efter 5 timmar vid 5°C. Produkten kristalliserade och tillvaratogs genom filtrering, tvättades med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid, varvid man erhöll 227 mg kristallin BMY-28100 (renhet 98% enligt HPLC).

Lyofilisering av moderluten gav 181 mg BMY-28100, som hade en renhet av 95% (HPLC). 458 611 -34 Exempel 10? nifeny1mety1-z6-/b-2-(t-butoxikarbonyiamino)-2- fenyl)-acetamido]-3-112)-1-buten-1-yl]-3-cefem- lat (förening 10) (p-hydroxi- 4-karboxy- En lösning av 3 g (2,95 mmol) av föreningen 5 i S0 ml CHCI3 blandades med en blandning av 3,2 ml (3,2 mmol) 1 N natriumhydroxid och 50 ml vatten och blandningen ska- kades 3 minuter vid rumstemperatur. Det organiska skiktet avskildes, tvättades med 3 x 30 ml vatten och en mättad lösning av natriumklorid och torkades över vattenfrítt natriumsulfat. Till lösningen sattes 1,71 g (29,5 mmol) propionaldehyd. Blandningen omrördes vid rumstemperaturen över natten och koncentrerades under reducerat tryck. Kon- centratet applicerades på en kolonn av silikagel, som eluerades med 1-2% metanol i CHCl3. De fraktioner som vi- sade en fläck vid Rf 0,30 (TLC, Me0H-CHCl3=1:10) kombine- rades och indunstades, varvid man erhöll 1,08 g (55%) av den i rübriken angivna föreningen. _ KB: -1 IR. 9 max Cm 1780, 1680, 1500.

Exempel ll: Natrium-Z§-[b-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamidq]-3- ÅYZ)-1-buten-1-yl]-3-cefem- 4-karboxylat (förening ll, BB-S1058 natriumsalt).

En lösning av 1,08 g (1,61 mmol) av föreningen l0 i 11 ml TFA innehållande 1% vatten fick stå 1 timme vid'rumstem- peratur. Blandningen koncentrerades till ca 2 ml i vakuum och den erhållna sirapen triturerades med ca 20 ml diiso- propyleter, varvid man erhöll 796 mg av ett gult pulver.

Pulvret upplöstes i 3 ml metanol och lösningen behandla- 40 '35 4558 61 1 des med 3 ml o,a M saa 1 etyiacetat (Acosc) för erhållan- de av en fällning, som filtrerades, tvättades med diiso- propyleter och upplöstes i 5 ml vatten. Lösningen fick passera en kolonn, som var fylld med 80 ml av en prepPAK- 500/C1 B-patron (Waters), som tvättades med vatten och elu- erades i tur och ordning med 10% metanol, 20% metanol och % metanol. De önskade fraktionerna (vilka övervakades medelst HPLC) kombinerades, koncentrerades och lyofilise- rades för erhållande av 118 gg (9,4%) av den i rubriken angivna föreningen med en uppskattad renhet av 55% (medelst HPLC); produkten mörknade då den upphettades i ett glas- kapillärrör till en temperatur över 180°C.

In: v ââí cm"1 1755, 1660, 1580.

UV; A åïïfatbuffert (PH 7) nm ( ) 228 (1o9oo), 278 )72oo).

NMR= 6920 ppm o,e1 (sn, t, 7,5 Hz), 1,7-2,2 (zu, m), 3,25 (za, Aag), 5,01 (1n, a, s Hz), 5,so (1u, a-t, 7,5 & 12 az), s,ss (1n, a, snz), 5,78 <1a, a, 12nz), 6,86 (za, a, e az), 7,26 (ZH, Ö, 8 HZ).

Exemgel 12: Difenylmetyl-Z6-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p7hydroxi- fenyl)acetamídQ]-3-[(Z)-3-feny1-1-propen-1-yl]-3-cefem~ 4-karboxylàt (förening 12): En lösning av 3 g (2,95 mmol) av föreningen 5 i 50 ml CHC13 skakades med en blandning av 3,2 ml (3,2 mmol) 1 N natriumhydroxid och 50 ml vatten under 1 minutl Det orga- niska skiktet separerades efter tillsatsen av 20 ml av en mättad natriumkloridlösning, tvättades med 3 x 30 ml vat- ten och en mättad lösning av natriumklorid och torkades med vattenfritt natriumsulfat. Till lösningen sattes 7,2 g (30 mmol) 50% fenylacetaldehyd och blandningen omrördes vid rumstemperatur över natten. Reaktionsblandningen koncentre~ rades i vakuum och koncentratet renades på en kolonn av 75 g silikagel under användning av 3% MeOH/CHCI3 för er=- hållande av 800 mg (37%) av den i rubriken angivna före- ningen. Tunnskiktskromatografi (TLC): RÉ 0,33 (silikagel, meon-cnc13'1=1o). IR (KBr)= 1780, 1710 -1680 Cm'1. Denna 458 611 -36 förening användes i exempel 13 utan ytterligare rening.

Exempel 13: 2ß-Zb-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamídq]-3-112)-3- fenyl-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 13, BB-81076).

En lösning av 800 mg (1,09 mmol) av föreningen 12 i 4 ml 90% TFA fick stå 2 timmar. Reaktionsblandningen koncentre- rades och koncentratet triturerades med diisopropyleter för erhållande av 490 mg av ett gult pulver. En lösning av pulvret i 2 ml metanol blandades med 20 ml vatten och applicerades på en kolonn av 50 ml HP-20, som tvättades' med 250 ml vatten och èluerades i tur och ordning med 250 ml % mefanol Qcn soc m1 75% metanol. Det 75% metanaleluatet koncenterades och lyofilíserades för erhållande av 302 mg râprodukt, som upplöstes i 10 ml 75% metanol och kromato- graferades på en kolonn under användning av 80 ml fyll- ning från en PrepPAK-500/C18-patron (Waters). Kolonnen eluerades med 75% metanol för erhållande av 158 mg (31%) av den önskade produkten. Uppskattad renhet 65% (medelst HPLC). Produkten mörknade då den upphettades i ett kapil- lärrör till en temperatur över 175°C.

IR; v Kßr cmf1 176ø, 1680, 1600-1580, 1520. mâX UV_ A fosfatbuffert (pH 7) max nm ( ) 280 (8900).

NmR= ¿DMs°'D6/D20 (5/1) ppm 4,45 (za, a, 4 Hz, cgzphy, 4,87 (1H, s, C§ND2), 6,7 (ZH, d, 9 Hz, Ph), 6,9-7,5 (7H, m Ph). 40 -w 458 611 Exemgel 14: Difenylmetyl-Zå-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p- hydroxifenyl)-acetamidq]-3-[(2)-3-k1or-1-propen-1-yl]- 3-cefem-4-karboxylat (förening 14) En lösning av 5,0 (4,9 mmol) av föreningen 5 i 100 ml CHC13 behandlades med en blandning av 2,9 ml (5,8 mmol) 2 N natriumhydroxid och 100 ml vatten 5 minuter vid rums- temperatur. Den organiska fasen separerades och tvättades med 50 ml vatten och 50 ml av en mättad natríumkloridlös- ning och torkades över vattenfritt natriumsulfat. Filtra- tet indunstades till ca 20 ml och 2,0 ml (25 mmol) klor- acetaldehyd tillsattes. Blandningen omrördes 30 minuter vid rumstemperatur och indunstades i vakuum. Den reste- rande sirapen kromatograferades på en kolonn av 100 g silikagel och eluerades med toluen-AcOEt (3:1), varvid man erhöll den i rubriken angivna föreningen 14 (900 mg; 27%).

NMR= 6°°C13 ppm 1,45 (sn, S, t-su), ca 3,3 (za, m, 2-cnz), 3,5-4,0 (2H, m, -Cgz-Cl), 4,92 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 (m, s, -cg-NDT), ca 5,7 (za, m; 7-1-1 s. æg-CHZ), 6,15 (1H, d, 11 Hz, 3-C§=CH-CH2-), 6,63 & 7,10 (vardera ZH, vardera d, HO-åh-), 6,89 (1H, s, C§Ph2), 7,3 (10H, s, Ph).

Avblockering av denna substans med TFA, såsom beskrivits i föregående exempel (exempelvis exempel 7) gav 7-[D-2-amino-2-(p-hydroxifenyl)acetamido]-3-[YZ)- 3-klor-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra_ Exemgel 15: Difenylmetyl-$¿-Äb-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(p-hydroxi- fenyl)acetamido]-3-[(3)-3-jod-1-propen-1-yl]-3-cefem-4- karboxylat (förening 15).

En blandning av 900 mg (1,3 mmol) av föreningen 14 och 590 mg (3,9 mmol) natriumjodid i 18 ml aceton omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Efter avdrivning av lösnings- medlet upplöstes återstoden i 100 ml AcOEt, tvättades i tur och ordning med vatten, en vattenlösning av Na S O _ 2 2 3 och en vattenlösning av natriumklorid, torkades och in- "458 611 ~ NHR: 6 CDCl3+D20 dunstades för erhållande av 1,02 g av den i rubriken an- givna föreningen. ppm 1,45 (9H, s, t-Bu), ca 3,4 (2H, 2-CH2), ca 3,8 (ZH, m, -Qgz-I), 4,90 (1H, d, 5,0 Hz, 6-H), ,14 (1H, s, -og-No-), 5,73 (13, d, 7-H), ca 5,5-6,0 (1H, m, =C§-CH2-), 6,68 & 7,10 (vardera 2H H0-Ph-), 6,78 (1H, d, 15 Hz, 3 cgphz), 7,35 (1oH, S, Ph). m: , vardera d, -cš{_=CH"CH2-)| s] Exemnel 16: Benshydry1-Zß-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2 amido]-3-(trifenylfosfonio)metyl-3-cefem- (förening 16). -fenylacet- 4-karboxyljodid En blandning av 14,5 g (0,0196 mmol &>(t-butoxikarbonylamino)-a> cefem-4 ) benshydryl-7-[b(-)- fenylacetamidq]-3~jodmetyl-3- -karboxylat och 5,24 g (0,02 mol) trife i 300 ml etylacetat omrördes 2 timmar vid rums Till reaktionsblandningen sattes 200 ml eter f nylfosfin temperatur. ör bildning av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering och tvät- tades med eter för erhållande av 14,3 g (73%) riken angivna föreningen. 50 ml och koncentratet spä av den i rub- Filtratet koncentrerades till ddes med eter för erhållande av 2,4 g av en andra sats av produkten. Totalt utbyte 16,7 9 (85%). nu o “BI '1 max cm 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.

Exempel 17: Benshydry1-Z5-[D-2-(t-butoxíkarbonylamino)-2-fenylacet- amidq]-3-/YZ)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylatuíföre- ning l7).

Till en lösning av 5 g (5 mmol) av föreningen 16 i 200 ml kloroform sattes en blandning av 100 ml vatten och 5 ml 40 _39 458 611 (5 mmol) 1 N natriumhydroxid och blandningen skakades 3 mi- nuter. Det organiska skiktet separerades och tvättades med vatten och en mättad natriumkloridlösning och torkades över vattenfritt magnesiumsulfat. Kloroformlösningen filtrerades och filtratet koncentrerades till 100 ml under reducerat tryck. Till koncentratet sattes 3 ml acetaldehyd och bland- ningen omrördes 1,5 timmar vid rumstemperatur och indunsta- des till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en kolonn av silikagel (Kiesel gel 60, S0 g) genom elu- ering med kloroform. De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet och återstoden triturerades med n-hexan, varvid man erhöll 990 mg (31%) av den i rubri- ken angivna föreningen 17.

In; väg: cm* 1180, 1710, 1660, 1s1o, 1490, 1360, 1240, 1210, 1150.

NMR: 3 ppm 1,3-1,5 (12H, m, -C-C§3), 3,22 (2H, s, 2-§), 4,93 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,23 (1H, d, 8Hz, Cg-CO), 5,5-6,2 (3H, m, 7-H & vinyl-H), 6,94 (1H, s, C§Ph), 7,2-7,5 (15H, m, fenyl-H).

Exempel 18; Natrium-Z¿-[D-2-amino-fenylacetamido]-3-[YZ)-1-propenyl]-3- cefem-4-karboxylat (förening 181 BB-S1065).

En blandning av 0,94 g (1,47 mmol) av föreningen 17 och 6CDCl 3 ml TFA omrördes 30 minuter vid rumstemperatur och späddes därefter med 50 ml av en 1:1-blandning av eter-isopropy1- eter för att avskilja ca 800 mg fällning, som tillvaratogs genom filtrering och upplöstes i 3 ml metanol. Till lös- ningen sattes 4,5 ml (4,5 mmol) 1 M natrium-2-etylhexanoat (SEH) i etylacetat och blandningen späddes i tur och ord- ning med 50 ml eter och 50 ml isopropyleter. Fällningen tillvaratogs genom filtrering, varvid man erhöll 710 mg av råprodukten 18, som upplöstes i 20 ml vatten och kromatogra- ferades på en kolonn under användning av 50 ml av fyllningen i en PrepPAK/C18-patron (Waters). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. De fraktioner som innehöll den önska- de produkten tillvaratogs, varvid övervakning skedde medelst HPCL, och koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 182 mg (31%) av den önskade produkten med smältpunkt 200°C. Uppskattad renhet 50% enligt HPLC.

KBr -1 IR: 9 max cm 1760, 1660, 1400, 1180, 1100.

UV: lïíâïfatbuffert (pH 7) nm ( ) 282 (5500). i 458 611 40 -40 una: ¿D2° ppm 1,60 (aa, a, 6 az, -c-ca3), 3,12 (1n, a, az, 2-H1, 3,48 (10, d, 10 Hz, 2-H1, 5,03 110, a, 4,5 az, 6-H), 5,62 (1n, d, 4,5 az, 7-H1. 5,93 (1n, a, 1onz, vinyl- H), 5,2-5,8 (1H, m, vinyl-H), 7,41 (SH, s, fenyl-H).

Exemggl 19: Benshydryl-Zß-[b-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-fenylacet- amidq]-3-lïá)-3-klor-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylat (förening 19).

Till en lösning av 2 g (2 mmol) av föreningen 16 i 50 ml kloroform sattes 50 ml vatten, som innehöll 2 ml (2 mmol) 1 N natriumhydroxid, och blandningen skakades 3 minuter.

Det organiska skiktet separerades och tvättades i tur och ordning med vatten och en mättad natriumkloridlösning.

Den torkade kloroformlösningen koncentrerades till 30 ml under reducerat tryck. Till koncentratet sattes 2 ml klor- acetaldehyd och blandningen omrördes 1 timme vid rumstem- peratur, tvättades med vatten och därefter med en mättad natriumkloridlösning. Den organiska lösningen torkades och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kro- matograferades på en kolonn av silikagel (Wako-gel C-200, 50 g) genom eluering med kloroform. De önskade fraktio- nerna tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhål- lande av 534 mg av râprodukten. m; v “Br '1 1700, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240, maX cm 1210, 1150.

Strukturen hos detta prov bekräftades ej på grund av dess dåliga NMR-spektrum.

Exemgel 20: Natrium-Zß-(D-2-amino-2-fenylacetamido)-3-[(Z)-3-klor-1- Eropen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylat (förening 20, BB-S1066).

En blandning av 472 mg (0,7 mmol) av föreningen 19 och 1,5 ml TFA omrördes 15 minuter vid 10~15°C och späddes med 30 ml av en blandning av eter och isopropyleter (1:1) för erhållande av 330 mg av en blekgul fållning, som till- varatogs genom filtrering. Till en lösning av fällningen i 40 41 458 611 3 ml metanol sattes 2 ml (2 mol) SEB i etylacetat och blandningen späddes med 50 ml etylacetat. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering och tvättades med eter för erhållande av 244 mg råprodukt. En lösning av råprodukten i 10 ml vatten kromatograferades på en kolonn under användning av 50 ml av fyllningen i en PrepPAK-500/C18-patron (Waters). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. De önskade fraktionerna av 10% metanol kombinerades och koncentrerades till 5 ml samt lyofiliserades för erhållande av 60 mg av en fast pro- dukt mšg smältpunkten 200°C (gradvis sönderdelning).

I _ IR: 9 max cm 1760, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070. uv= A šâífatbuffert nm 1 1 243 (127oo1, zoosk (4200).

Exemgel 21: 75-(D(-)-2-amino-2-fenylacetamido)-3-[1Z)-1-propen-1-yl]- 3-cefem-4-karboxylsyra (förening 18, BB-S 1065, zwitter- jonform). 2 N /, a=csca3 (2) 1,s g 12,34 mmol) a1feny1mety1-77ß-¿b-2-(t-butoxikarbony1- amino)-2-fenylacetamidq]-3-(1-propenyl)-3-cefemÄ4-karbo- Xylat (förening 17) behandlades med 3 ml trifluorättiksyra och blandningen omrördes 20 minuter vid rumstemperatur och späddes med 100 ml eter för erhållande av 1,15 g (96%) av det orena trifluoracetatet av BB-S1065.

IR; ~vmax (nar) 1 cm'1 1760, 1670, 1zoo, 1130.

UV: (pH 7 fosfatbuffert) 283 nm ( :8300) Å maX 1,1 g (2,25 mmol) av trifluoracetatet upglöstes i 20 ml vatten och lösningen kromatograferades pà en kolonn under användning av 100 ml av fyllningen i en prepPAK/C18-patron 458 611 40 -42 (Waters). Kolonnen eluerades med vatten, 10% metanol och % metanol. Eluatet med 30% metanol koncentrerades till ml. Den kristallina produkten avskildes. Produkten till- varatogs och tvättades med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid för erhållande av 5OSmg (46%) ren BB-S 1065 1zwitterj°nform) med smäitpunkten 180-1a3°c (sönder- delning). Uppskattad renhet 95%.

:R= 0 max (Kur) 1 cmf1 1150, 1690, 1590, 1400, 1350.

UV: Ä max (pH 7 fosfatbuffert) 282 nm ( : 8800).

NMR. 6(n2o+NaHco3) i ppm 1,58 (zn, a, J=s Hz, c-cn3), 3,3 (zu, a, 2-H), 5,03 (1H, a, J=4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1n, s, ca-co), 5,1-5,3 (1H, m, cH=c), 5,63 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), ,92 (1H, d, J=12 Hz, CH=C), 7,4 (5H, s, fenyl-H).

Exempel 22: D(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4-hydroxifenyl)~ ättiksyra (förening 22).

En blandning av 6 g (0,03 mol) 3-klor-4-hydroxifenyl- glycin och 9,8 g (0,045 mol) di-t-butyldikarbonat i 120 ml av en 50% vattenlösning av tetrahydrofuran (TFA) innehål- lande 10 ml (0,071mol) trietylamin omrördes 3 timmar vid rumstemperatur. Blandningen koncentrerades till 60 ml och koncentratet tvättades med eter. Vattenskiktet surgjordes med 6 N klorvätesyra och extraherades med 200 ml eter.

Extraktet tvättades med vatten och en mättad natriumklorid- lösning, torkades över magnesiumsulfat och inddnstades till torrhet för erhållande av 10 g av en oljig återstod, som icke solidifierade vid försök att triturera med eter- n-hexan.

Exempel 23: Benshydryl-Z6-[Ö-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4- hydroxifenyl)acetamidQ]-3-klormetyl-3-cefem-4-karboxylat (förening 23). ÅBAZ' . _. .. 40 "Ü 458 611 , S NE ___N CH Cl cí/ I 6 // _ 2 CO2C(C33)3 co2ca(c6n5)2 Till en lösning av 6,2 g (0,015 mol) av föreningen 2 och 5,4 g (0,018 mol) av föreningen 22 i 150 ml torr THF sattes 3,7 g (0,018 mol) DCC och blandningen omrör- des 1 timme vid rumstemperatur. Dicyklohexylkarbamid, som separerade under omrörning, avlägsnades genom filtrering och filtratet indunstades till torrhet. Återstoden extra- herades med 200 ml etylacetat och extraktet tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat, vatten och en mät- tad natriumkloridlösning och torkades över magnesiumsulfat.

Filtratet indunstades till torrhet och den oljiga åter- stoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wako-gel C-200, 140 g) genom eluering med toluen-etylacetat (10:1).

De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhållande av produkten 23.

IR: v m (KBr) i cm_1 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160.

EX Exemgel 24: Benshydryl-Z¿-[D-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4- hydroxifenyl)acetamidQ]-3-(trifenylfosfonio)metyl~3-cefem- 4-karboxylatjodid (förening 24). ' s so tscoNs---T// N" ...N cl/ la 6- // co2c(CS3)3 “å C52. fC6E5)3 I COzï (C6S5)2 Till en lösning av 10 g (0,0143 mol) av föreningen 23 i 100 ml aceton sattes 11,2 g (0,075 mol) natriumjodid och blandningen omrördes 30 minuter vid rumstemperatur. Bland- ningen koncentrerades till 30 ml. Till koncentratet sattes 200 ml etylacetat och blandningen tvättades med en vatten- 0458 611 -44 lösning av Na2S203, vatten och en mättad natriumklorid- lösning och torkades över magnesiumsulfat. Etylacetatlös- ningen filtrerades och filtratet koncentrerades till halva volymen. Till koncentratet sattes 3,9 g (0,015 mol) tri- fenylfosfin och blandningen omrördes 2 timmar vid rumstem- peratur. Till lösningen sattes 300 ml eter för separation av en fällning, som tillvaratogs genom filtrering och torkades för erhållande av 9,2 g av fosfoniumjodiden 24.

IR: v max (KBr) i cm_1 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.

Exemgel 25: Benshydryl-Z5[Ö-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3-klor-4- hydroxifenyl}acetamidqj-3-ÄYZ)-1-propen-1-yl)-3-cefem-4- karboxylat (förening 25). 50 lacons---T//S gaf 11 w / co2c(cs3)3 ' °°2c3(°s3s72 En lösning av 9,5 g (9 mmol) av föreningen 24 i 200 ml kloroform beskiktades med en blandning av 100 ml vatten och 10 ml 1 N natriumhydroxid och blandningen skakades 3 minuter. Det organiska skiktet tvättades med vatten och en mättad natriumkloridlösning, torkades över magne- siumsulfat och koncentrerades till ca halva volymen. Till koncentratet sattes 20 ml 90% acetaldehyd och blandningen omrördes 3 timmar vid rumstemperatur, behandlades med vat- tenfritt magnesiumsulfat och filtrerades. Filtratet in- dunstades till torrhet och återstoden kromatograferades på Kiesel gel 60 (Merck, 120 g) genom eluering med toluen- etylacetat (4:1). De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet och återstoden triturerades med en blandning av eter, isopropyleter och n-hexan för erhållande av 1,33 g av den blockerade produkten 25.

IR: v (KBI1 1 cm'1 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150. mâX 45 458 611 Exemgel 26: 1ß-/b-2-amino-2-(3-klor-4-hydroxifenyl)acetamidq]-3- [ïZ)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 26, BMYZBOGO) H- 'acoNa_____r”s "az 1 Cl N // B=CHCH3 O C025 En blandning av 1,33 g (1,93 mmol) av föreningen 25 och 3 ml trifluorättiksyra omrördes 30 minuter vid rumstem- peratur och blandningen späddes med 50 ml eter-isopropyl- eter (1:1) för erhållande av 1,072 g av trifluoracetatet av föreningen 32 som en râprodukt, som kromatograferades på en kolonn fylld med fyllningen i en prepPAK-C18- patron (Waters).(80 ml). Kolonnen eluerades med vatten och 10% metanol. Eluatet med 10% metanol koncentrerades till 10 ml av volymen för att separera en kristallin fällning, som tillvaratogs genom filtrering och tvätta- des med aceton och torkades i vakuum över fosforpentoxid för erhållande av 238 ml av föreningen 26 (renhet 95%) med smältpunkten 180-185°c (gradvis sönaeraelning). F11- tratet koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 154 mg av en andra sats, som hade en ren- het av 80% enligt HPLC.

IR; v m (Kax) 1 cm" 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, ax 1290, 1270.

UV: Å max (pH 7 fosfotbuffert) i nm ( ) 232 (10000), 280 110500).

NMR: ¿(D2o + NaHco3) i ppm 1,68 (311, d, J=6 Hz, c=c-cn3), 3,25 (13, d, J=18 Hz, 2-H) 3,57 (13, d, J=18 Hz, 2-H), 4,90 (1H, 5, CH-co), 5,18 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,72 (111, d, J=4,5 Hz, 7-11), 5,5-5,9 (111, m, CH=C), 5,97 (m, d, J=12 Hz, CH=C), 7,02 (1H, d, J=8 Hz, fenyl~H), 7,30 (1H, d-d, J=8 & 1,5 Hz, fenyl-H), 7,50 (1H, d, J=1,5 Hz, fenyl-H). 458 611 40 -46 Exempel 27 = D(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3,4~dihydroxifenyl)- ättiksyra (27a) blandning med dess 3-(och 4)-mono-O- butoxikarbonyl-derivat (21b).

En blandning av 3,66 g (0,02 mol) 3,4-dihydroxifenyl- glycin och 9,24 g (0,04 mol) di-t-bntyldikarbonat i 120 ml av en 50% vattenlösning av THF innehållande 10 ml (0,071 mol) trietylamin omrördes 16 timmar vid rumstem- peratur och blandningen koncentrerades till 60 ml. Kon- centratet tvättades med 100 ml eter, surgjordes med 1 N klorvätesyra och extraherades med 100 x 2 ml eter.

De kombinerade extrakten tvättades med vatten och en mät- tad natriumkloridlösning, torkades med magnesiumsulfat och indunstades till torrhet för erhållande av 8 g av en oljig återstod, som var en blandning av det önskade 3,4- dihydroxífenylderivatet och de 3- och 4-mono-O-BOC-skyd- dade derivaten (BOC avser t-butoxikarbonyl).

Exempel 28: Benshydryl-16-[D(-I-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3,4- dihydroxifenyl)acetamidQ]-3-klormetyl-3-cefem-4-karbo~ gylat (28a) och blandning av dess 0-(och 4-)mono-O- butoxikarbonyl-derivat (28b). ~ s 50 l acoza-*fi NE « -4~ / czzci ao l 6' co; (C33) 3 CQZCE (C559: En blandning av 8 g (0,0193 mol) av föreningen 2, 8 g av blandprodukten enligt exempel 27 och 4,12 g (0,02 mol) DCC i 200 ml torr THF omrördes 1 timme vid rumstempera- tur. Reaktionsblandningen indunstades till torrhet. Åter- stoden upplöstes i 200 ml etylacetat och olösligt mate- rial (dicyklohexylkarbamid) avlägsnades genom filtrering.

Filtratet tvättades med en vattenlösning av natriumbi- karbonat, vatten och en mättad natriumkloridlösning, tor- kades över magnesíumsulfat och índunstades till torrhet 40 47 458 611 under reducerat tryck. Den oljiga återstoden kromatografe- rades på en silikagelkolonn (Kiesel gel 60, 130 g) genom eluering med toluen-etylacetat (S:1) och toluen-etylacetat (2:1). Eluatet med toluen-etylacetat (5:1) tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhållande av 9,5 g av en blandning av de tvåfaldigt skyddade mono-O-BOC-N-BOC- derivaten (28b). Eluatet med toluen-etylacetat (2:1) till- varatogs och indunstades till torrhet för erhållande av 3 g av 3,4-dihydroxifenylderivatet (23a).

Förening 28a: IR: 0 X (xsr) 1 cm'1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, ma 1150.

NMR= ¿(cDc13) i ppm 1,42 (95, s, c-CH), 3,4 (za, br-s, 2-H), 4,30 (ZH, br-s, CH2-Cl), 4,85 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,07 (1H, d, J=6 Hz, C§=NH), 5,74 (1H, d-d, J=9 & 4,5 Hz, 7-H), 6,6-6,9 (3H, m, fenyl-H), 6,93 (1H, s, CHPh), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

Blandning 28b: IR; 0 max (nar) 1 cm'1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR: ¿(cDc13) i ppm 1,42 (9H, s, C-CH3), 1,55 (9H, s, C- CH3), 3,4 (2H, br-s, 2-H), 4,35 (2H, br-s, CH2-Cl), 6,9- 7,1 (4H, m, CHPh & fenyl-H), 7,3 (1OH, s, fenylffl).

Exemgel 29: Benshydryl-7ß¿[b(-)-2-(t~butoxikarbonylamino)-2-(3,4-di- hydroxifenyf1acetamidq]-3-trifenylfosfoniometyl-3-cefem- 4-karboxylatjodid (29a). s H0 scene ~// Na ' 1 6 G /' eN Cä PIC B 7 I BO 1 _ ,/' 2 6 s 3 coc(cH ) z 3 3 °°2C3(°sEs)2 En blandning av 3 g (4,4 mmol) av föreningen 28a och 3,3 g (22 mmol) natriumjodid i 50 ml aceton omrördes 30 minu- ter vid rumstemperatur och blandningen koncentrerades till torrhet. Aterstoden extraherades med 100 ml etylacetat och extraktet tvättades med en vattenlösning av Na2S2O3, vat- ten och en mättad natriumkloridlösning. Efter torkning med magnesiumsulfat koncentrerades extraktet till 60 ml. 1 ' '458 611 40 -48 Till koncentratet sattes 1,4 g (5,3 mmol) trifenylfosfin och blandningen omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Till blandningen sattes 100 ml eter för avskiljning av en fäll- ning, som tillvaratogs genom filtrering och tvättades med eter, varvid man erhöll 3,2 g (70%) av fosfoniumjodiden (29a).

IR: v max (KBI) i cm-1 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.

Medelst ett liknande förfarande omsattes 9,5 g (12 mmol) av blandningen av mono-0-BOC-skyddade derivat (28b) med natriumjodid och därefter med trifenylfosfin, varvid man erhöll 10,7 g (77%) av en blandning av motsvarande mono- O-BOC-N-BOC-trifenylfosfoniometylderivat (29b). nu ~ø max (mar) i :m4 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1140.

Exemgel 30: Benshydryl-7ß-[D(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(3,4-di- hydroxifenyl)acetamidq]-3-[(2)-1-propen-1-yl7-3-cefem-4- karboxylàt (förening 30a). s H0 TscoNs-fl-l/ ./ NH __N s=caca (z) ao l Û / 3 coc (C293 1 Cozcz-z (C655) 2 Till en omrörd lösning av 3,15 g (3 mmol) av föreningen 29a och 10 ml acetaldehyd i 50 ml kloroform sattes dropp- vis 8 ml (4 mmol) 0,5 N natriumhydroxid under 10 minuter och blandningen omrördes 1 timme vid rumstemperatur. Reak- tionsblandningen tvättades med vatten och en mättad nat- riumkloridlösning, torkades över magnesiumsulfat och in- dunstades under reducerat tryck. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Wako gel C-200, 60 g), som eluerades med 2 l kloroform och 2% metanol i kloroform under övervakning medelst TLC (kloroform: metanol = 10:1). De önskade fraktionerna'frân eluatet med 2% metanol tillvaratogs och indunstades till torrhet 40 '49 458 611 för erhållande av 0,8 g (40%) av propenylderivatet 30a. una: 6 (cnc13) i ppm 1,28 (an, d, J=s Hz, c-cn3), 1,42 (9H, S, C-CH3), 3,25 (2H, S, 2~H), 4,92 (1H, d, J=4,5 Hz, e-H), 5,08 (m, d, J=6 Hz, cg-NH). S,3-5,ß (m, m, cH=c), ,80 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,04 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 6,70 (2H, s, fenyl-H), 6,82 (1H, s, fenyl-H), 6,92 (1H, s, CHPh), 7,3 (10H, s, fenyl-H).

Medelst ett förfarande liknande det ovan beskrivna omsat- tes 10,5 g (9,3 mmol) av blandningen av de tvåfaldigt skyd- dade 3- och 4-O-BOC-N-BOC-derivaten 29b med acetaldehyd för erhållande av 3,3 g (46%) av motsvarande 3-propenyl- derivat 30b.

IR: Q max (KBr) i cm_1 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, 1150.

NMR; 6 (ocn13) i ppm 1,4 (en, s, c-cn3), 1,55 (9H, s, C-CH3), 3,25 (2H, s, 2-H), 6,07 (1H, d, J-11 Hz, CH=C), 6,9-7,1 (4H, m, CH-Ph & fenyl-H), 7,3-7,5 (10H, m, fenyl- H).

Exemgel 31: -[D(-)-2-amino-2-(3,4-dihydroxifenyl)acetamidQ]-3-[YZ)- ljprqpen-1-yl]-3~cefem~4-karboxylsyra (förening 31, BMY- 28068).

HCONB _ 2 n / a=cnca (z) H0 O En blandning av 0,8 g (1,2 mmol) av föreningen 30a, 0,8 ml anisol och 3 ml trifluorättiksyra omrördes 5 minuter vid rumstemperatur och späddes med 25 ml eter och 25 ml isopropyleter. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering och tvättades med isopropyleter för erhållande av 557 mg av det orena trifluoracetatsaltet av föreningen 31. En lösning av râprodukten i 10 ml vatten renades ge- nom kolonnkromatografering under användning av 100 ml av fyllningen i en prepPAK-C18-patron (Waters) och kolonnen elüerades i tur och ordning med vatten och 5% metanol. 458 611 40 -50 Eluatet med 5% metanol innehållande den önskade produkten koncentrerades till S ml och lyofiliserades för erhållan- de av 231 mg (47%) av föreningen 31 (zwitterjonform, ren- het 90%) med smältpunkten 200°C. (Gradvis sönderdelning).

IR: 9 max i cm_1 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270.

UV: Ä max (pH 7 fosfatbuffert) i nm ( ) 233 (9200), 281 (11ooo). _ NMR: Ä(D2O) i ppm 1,68 (BH, d, J=6 Hz, C-CH3), 3,26 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 5,18 (1H, s, C§NH), 5,22 (1H, d, J=4,5 H2, 6-H), 5,5-5,9 (ZH, m, CH=C & 7-H), 5,97 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,05 (3H, m, fenyl-H).

Enligt ett liknande förfarande gav 3,3 g (4,3 mmol) av den N,0-di-t-BOC-skyddade derivatblandningen 30b 1,3 g (75%) av föreningen 31 i zwitterjonformen (renhet 90%), som uppvisade spektraldata, vilka var identiska med de ovan angivna.

Exemgel 32: D(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(4-hydroxi-3-metoxí- fenyl)-ättiksyra (förening 32).

HO CHCO H I cn3o co2c(cs3)3' En blandning av 2,96 g (o,n1s mol) n(-)-2-amin¿-2-(4- hydroxi-3-metoxifenyl)ättiksyra och 3,6 g (0,016S mol) di-t-butyldíkarbonat i 100 ml av en 50% vattenlösning av THF innehållande 4,2 ml (0,03 mol) trietylamin omrördes 16 timmar vid rumstemperatur och reaktionsblandningen koncentrerades till 50 ml. Koncentratet tvättades med 50 ml eter, surgjordes med 1 N klorvätesyra och extrahe- rades 2 gånger med 100 x 2 ml eter. De kombinerade extrak- ten tvättades med vatten och en mättad natriumkloridlös- ning. De torkade extrakten indunstades till torrhet för erhållande av 4,38 g av föreningen 32 som ett skummigt fast material. _51 458 611 NMR: i 114 sy -C-Cë3)| 3|8 S, d' H2 sy Exemgel 33: Benshydry1-Z¿-[b(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(4- hydroxi-3-metoxifenyl)-acetamidq]-3-klormetyl-3-cefem- 4-karboxylat (förening 33).

S ao g lacons í// . m: f ...N ca cl . cH/o I 6 / 2 3 co2c(ca3)3 CO2CE(C6E5)2 En blandning av 4,3 g av föreningen 32, 5 g (0,012 mol) av föreningen 2 och 3 g (0,015 mol) DCC i 150 ml torr THF omrördes 2 timmar vid rumstemperatur. Den utfällda karb- amiden avlägsnades genom filtrering och filtratet indunsta- des till torrhet. En lösning av återstoden i 200 ml etyl~ acetat tvättades med en vattenlösning av natriumbikarbonat och en mättad natriumkloridlösning, torkades över magne- síumsulfat och indunstades till torrhet. Den oljiga åter- stoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Kiesel gel 60, 100 g), som eluerades med toluen-etylacetat (4:1) under övervakning medelst TLC (toluen-etylacetat (1:1) eller kloroform-metanol (50:1)). De önskade fraktionerna tillvaratogs och indunstades till torrhet för erhållande av 7 g av den önskade 3-klormetyl-cefem-föreningen 33 som ett skummigt fast material. ' mm: á i ppm 1,4 (en, s, c-cH3), 3,45 (2H, br-s, z-H), 3,83 (3H, s, OCH3), 4,32 (2H, s, -CHZCI), 4,92 (1H, d, J=4,5 H2, 6-H), 5,13 (1H, d, J=6 Hz Cë-NH), 5,65 (1H, d, J=6 Hz, NH), 5,80 (1H, d-d, J=8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,85 (3H, s, fenyl-H), 6,95 (1H, s, CH-Ph), 7,2-7,5 (10-H, m, fenyl-H). 458 611 40 52 Exemèel 34: Benshydryl-Z6-[Ü(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(4- hydroxi-3-metoxifenyl)-acetamidq]-3-trifenylfosfonio- metyl-3-cefem-4-karboxylatjodid (föreningf34). l ncoNa---( s 6 e na l fri / Cflzflcsasß 1 3 _ co2c(cs3)3 HO °°2°5 (Casa) z En blandning av 7 g (0,01 mol) av föreningen 33 och 7,5 g (0,0S mol) natriumjodid i 100 ml aceton omrördes 30 mi- nuter vid rumstemperatur och indunstades till torrhet.

En lösning av återstoden i 200 ml etylacetat tvättades med en vattenlösning av Na2S2O3, vatten och en mättad natriumkloridlösning, torkades med magnesiumsulfat och koncentrerades till 100 ml. Till koncentratet sattes 3,1 g (0,012 mol) trifenylfosfin och blandningen omrör- des 1 timme vid rumstemperatur. Till reaktionsblandningen sattes 100 ml eter och det utfällda fasta materialet till- varatogs genom filtrering, tvättades med eter och torka- des för erhållande av 5,8 g av trifenylfosfoniumderiva- tet 34. Eterfiltratet koncentrerades till 10 ml och till koncentratet sattes 30 ml eter för erhållande av 0,9 g av produkten som en andra sats. Totalutbytet var 6,7 g.

Exemgel 35: Benshydryl-I¿-[b(-)-2-(t-butoxikarbonylamino)-2-(4-hydroxi- 3-metoxifenvl-acetamido]-3-ZTZ)-1-propen-1-yl]-3-cefem- 4-karboxylat (förening 35). s ao lacom-_-( ' Na »n / n=caca3 (z) 'C330 cozc (C23) 3 °°2°3 (C655) 2 Till en omrörd blandning av 5,8 g (5,5 mmol) av föreningen 34 och 10 ml 90% acetaldehyd i 100 ml kloroform sattes 40 "53 458 611 droppvis 11 ml (5,5 mmol) 0,5 N natriumhydroxid under minuter och blandningen omrördes 2 timmar vid rums- temperatur. Reaktionsblandningen tvättades med vatten, därefter med en mättad natriumkloridlösning, torkades över magnesiumsulfat och indunstades till torrhet. Den oljiga återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn (Kiesel gel 60, 130 g) genom eluering med en blandning av toluen och etylacetat (förhållandet ändrades stegvis; 4:1 (1,3 1), 3:1 (1,1 1), 2:1 (1,0 1)) och eluatet till- varatogs i fraktioner om 20 ml. Fraktionerna 26-59 kom- binerades och indunstades till torrhet för erhållande av 830 mg av den önskade 3-propenylföreningen 35 som ett skummigt fast material.

NMR: 6(cDc13) i ppm 1,35 (3H, d, =cH-cg3), 1,4 (911, s, C-CH3) 3,85 (3H, s, O-CH3), 6,07 (1H, d, J=11 Hz, -CH=C).

Exemgel 36: -[D(-)-2-amino-2-(4-hydroxi-3-metoxifenyl)acetamidQ7- 3-[(2)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra (förening 36, BMY-28097).

S no acoNH-W/ N52 N / B=c3ca3 (z) C330 Q C022 En blandning av 830 mg (1,2 mmol) av föreningen 35, 0,5 ml anisol och 2 ml trifluorättiksyra omrördes 5 minu- ter vid rumstemperatur och blandningen späddes med 30 ml eter och 30 ml isopropyleter. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering, tvättades med isopropyl- eter och torkades för erhållande av 437 mg av det orena trifluoracetatet av föreningen 36. Råprodukten kromato- graferades på en kölonn fylld med 100 ml av fyllningen i en prepPAK-C18-atron (Waters), som eluerades med vatten och 5% metanol. Eluatet med 5% metanol koncentrerades till ml och lyofiliserades för erhållande av 225 mg av före- ningen 36 (zwitterjon, renhet 90%). Smältpunkt 176~180°C (sönderdelning). 458 611 40 -54 IR: i max i cm_1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280.

UV: A max (pn 1 fosfacbuffert) i mn 1 y zss 1100001, 200 111000). man: 61020) i ppm 1,60 (an, a, J=s Hz, c-c113), 3,25 un, d, J=18 Hz, 2-H), 3,57 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, S' 0CH3)| 5,10 (1H| S' CH_c0)' 5,19 (1H' dl J=4'5 Hz' 6_H); ,78 (1H, d] J=4|5 Hz; 7-H)' 515-519 (1H| my cH=C)| 5'98 (151 dy J=11 Hz' CH=C)f 7107 (2H' S, feny1_H)| 7117 (1H; br-s, fenyl-H).

HPLC: retentionstid 9,3 min. (0,02 M acetatbuffert (pH 4) innehållande 15% acetonitril).

Exemgel 37: Isolering av förening 36 från urinen från råttor till vilka föreningen 31 har administrerats.

Sex Wistar-råttor (400-600 g) av hankön infördes i meta- bolismkorgar av stål efter oral administrering av före- ningen 31 i en dos av 100 mg/kg och urinen tillvaratogs under en tid av 24'timmar. Râttorna utfordrades med sin normala diet och tillfördes vatten under försöket. Föl- jande tabell visar volymen urin som tillvaratogs vid olika tidpunkter.

Urinvolym (ml) 18 19,5 13 42 92,5 Urinen (ca 90 ml) inställdes på pH 3 med 1 N klorväte- syra och filtrerades för avlägsnande av en fällning. Fil- tratet kromatograferades på en kolonn fylld med 300 ml HP-20 genom eluering med 2 l vatten och 2 l 30% metanol under övervakning medelst HPLC. De fraktioner som inne- höll de bioaktiva komponenterna av eluatet med 30% meta- nol tillvaratogs, koncentrerades till 10 ml och lyofili- serades för erhållande av 390 mg av ett brunt fast mate- rial. En lösning av det fasta materialet i 20 ml vatten kromatograferades på en kölonn fylld med 200 ml av fyll- ningen från en prepPAK~C18-patron (Waters) genom elüering i tur och ordning med vatten, 5% metanol och 10% metanol.

Den första hälften av eluatet med 5% metanol koncentrera- 6-24 totalt timmar '55 458 611 des till S ml och lyofiliserades för erhållande av 44 mg av föreningen 31 (renhet 70%) innehållande föroreningar härrörande från urinen. Den andra hälften av eluatet med % metanol koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 36 mg produkt, som var en blandning av förening 31, förening 36 och föroreningar härrörande från urinen. Eluatet med 10% metanol (ca 600 ml) koncentrera- des till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 38 mg av föreningen 36 (70% renhet enligt HPLC), som återkroma- tograferades på en kolonn med samma fyllning som ovan (40 ml) genom eluering med vatten, 5% metanol och 10% metanol. De önskade fraktionerna, som eluerades med 10% metanol, kombinerades och koncentrerades till 5 ml och lyofiliserades för erhållande av 16 mg av föreningen 36, som hade en renhet av 90% enligt HPLC (0,02 M acetat- buffert (pH lzracetønitrn (asnsysmältpunkt 1ao°c (gradvis sönderdelning).

IR: 9 max (KBr) i cm~1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280.

UV: Änmx (pH 7 fosfatbuffert) i nm ( ) 233 (8200), 280 (8800). :mm 611120) i ppm 1,68 (an, a, J=s Hz, -c-cu3>, 3,26 (1H, d, J=18 Hz, 2~H), 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,01 (3H, S, OCH3), 5,12 (1H, S, CH-CO), 5,21 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C+), ,98 (1H, d, J=11 Hz, CH=C), 7,07 (ZH, s, fenyl-H), 7,17 (1H, br-S, fenyl-H).

Metabolitens struktur fastställdes som zß-[b(-f-2-amino- 2~( 4-hydroxi~3-metoxifenyl)acetamidql-3-[(2)-1-propen- 1-yl]-3-cefem-4-karboxylsyra genom jämförelse (NMR, IR, UV, HPLC) med föreningen 36 framställd medelst förfarandena 32-36. 458 611 '56 Exemgel 38 = . ' 7-[D-2-aminof2-13-hydroxifenyl)acetamido)-31](Z)-1 penyl)-3-cefem-4-karboxylsyra(BMY-28272) -pro- Den i rubriken angivna föreningen framställdes enligt följande reaktionsschema: H N 2031? (z) En cs-ca-ca, 1 (m (nràmg coocn(c6a5)2 wwm____-» t gg: uucooc(ca3)3 1 Z fl° “° (m mn S S cscuxa :é Cflwfl-T 1 , m gm o,,l_,, , m fiï ' cs-cz-cu3 2 ca=cuáca3 coøcmas), nm6n5)2 own ¿ aH_2az7á DL-2-M-tertfbutoxikarbonylamino-2-(3-hydroxifenyl)ättik- syra(2) Till en blandning av 2 g (0,012 mol) DL-2-(3-hydronifenyl)- glycin(1) och 2,6 g (0,012 mol) di-tert_-butyl-dikarbonat i 40 ml av en 50%-ig vattenlösning av tetrahydrofuran (THF) sattes 3,4 ml (0,024 mol) trietylamin och blandningen om- rördes 5 timmar vid rumstemperatur, koncentrerades till cir- ka 20 ml, tvättades med 50 ml eter, surgjordes med 40%-ig fosforsyra och extraherades med 2 x 100 ml eter. De kom- binerade extrakten tvättades i tur och ordning med vatten och en mättad vattenlösning av natriumklorid, torkades över magnesiumsulfat, behandlades med aktivt kol och indunstades för erhållande av en olja. Den oljiga återstoden triturera- des med n-hexan för erhållande av 2,7 g (84%) av den i rub- -57 458 611 riken angivna föreningen med smältpunkten 144-148°C (sönderdelning). 1 1760, 1630, 1590, 1560, 1370, 1340, 1290, 1250, 1210, 1160.

Uv=Å.max (meon) 1 nm (a) z76(23oo>, 2s2(2ooo).

IR: '-0 (KBr) i cm- NEX Nnmß (cncifnnso) i ppm 1,42<9n, s, c-cn3), 5,13 (m, a, J=7 Hz, cg-mn, 5,82 (m, a, J=7 Hz, Ng-cn), s,s-7,3 (4H, m, fenyl-H).

Analys för C H NO 13 17 5 beräknat C 58,42; H 6,41; N 5,24; funnet C 58,73; H 6,70; N 5,17.

Benshydryl -7-[DL-2-N-tert.-butoxykarbonylamino-2-(3-hyd- roxifenyl)acetamidqf-3-ÅTZ)-1-propenyl7-3-cefem~4-karboxy- lat (4) En suspension av 443 mg (1 mmol) benshydryl-7-amino-3-[YZ)- -1-propenyl]-3-cefem-4-karboxylathydroklorid(3) i 55 ml av en 10:1-blandning av etylacetat och THF skakades kraf- tigt med 50 ml av en vattenlösning av natriumvätekarbonat.

Det organiska skiktet avskildes, tvättades i tur och ord- ning med vatten och en mättad natriumkloridlösning, torka- des över magnesiumsulfat och koncentrerades till cirka 30 ml. Till koncentratet sattes 320 mg (1,2 mmol) DL-2-N-tert. butoxikarbonylamino-2-(3-hydroxifenyl)ättiksyra(2) och 250 mg (1,2 mmol) N, N'-dicyklohexylkarbodiimid. Blandnin- gen omrördes 0,5 timmar vid rumstemperatur och avfiltrera- des och filtratet indunstades till torrhet för erhållande av en återstod, som renades medelst kolonnkromatografi (Kieselgel 60, Merck 30 g) genom eluering med en 4:1- blandning av toluen och etylacetat. De önskade fraktioner- na, som övervakades medelst tunnskiktskromatografi, till~ varatogs och indunstades till torrhet för erhållande av en återstod, som triturerades med en blandning av eter, isopropyleter och n-hexan för erhållande av 627 mg (95%) 0458 611 ; '58 av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 120°c (sönaeraelning).

IR=\>max (xsr) i cm'1 1780, 1710, 1690, 1590, 1500, 1370, 1 12220, 1160.

Uv=A.max (meon) i nm (5) 283(9900). 7-[D-2-amino-2-(3-hydroxifenyl)acetamidq]-3-[TZ)-1-pro- penyl]-3-cefem-4-karboxylsyra En blandning av 600 mg (0,91 mmol) benshydryl-7-[DL-2- -N-tert.-butoxikarbonylamino-2-(3-hydroxifenyl)acetamidQ]- -3-[(2)-1-propenyl]-3-cefem-4-karboxylat (4), 0,5 ml ani- sol och 2 ml trifluorättiksyra (TFA) omrördes 10 minuter vid rumstemperatur och blandningen späddes med en 50 ml av en 1:1-blandning av eter och isopropyleter. Den erhållna fällningen tillvaratogs genom filtrering, varvid man er- I höll 438 mg (95%) av en råprodukt, som kromatograferades på en kolonn packad med en fyllning av prepPAK-C18-patron (Waters) genom eluering i tur och ordning med vatten, 5% metanol och 10% metanol. Eluaten övervakades medelst HPLC och den fraktion som eluerades med 5% metanol som filtrera- I des. Återstoden (153 mg) kromatograferades ånyo på en kolonn om 300 ml under eluering med 10% metanol, varvid man erhöll 57 mg av den råa D-isomeren. Den fraktion som eluerades med 10% metanol tillvaratogs, koncentrerades till cirka 10 ml och lyofiliserades för erhållande av 83 mg av den råa D-ísomeren. Båda råprodukterna (cirka 140 mg) kombinerades och kromatograferades på kolonnen om 300 ml, som eluerades i tur och ordning med 10% metanol och 20% metanol för erhållande av den i rubriken angivna föreningen (106 mg, 30%). Renhet 90% enligt HPLC (25% metanol-buffert, retentionstid 10,24 minuter). Smältpunkt 2o0°c (graavis sönderaelningy.

IR:\)max (KBI) i cm_1 1750, 1680, 1580, 1390, 1350, 1280.

Uv=AnmX (pH 7 buffert) 1 nm (g) 2ao(1oo0o). '59 458 611 Nm; S (n2o,+ Na2co3) i ppm 1,42 (an, a-d, J=s e. 1,5 az, =cH-cg3),f 3,02 (1H, d, J=18 Hz, z-H), 3,27 (111, d, J=18 Hz, 2-m,““4,'s7 (m, s, cn-co), 4,93 (m, a, J=4,s az, s-u), 5,48 (m, a, a=4,s az, v-u), s,4-s,s (m, m, cn=c), ,68 (m, d-a, J=11 s. 1,5 Hz, cn=c). 6,7-e,9 (su, m, fe- nyl-H), 7,1-7,2 (1H, m, fenyl-H).

Claims (5)

10 15 20 25 30 35 458 611 QC PATENTKRÅV

1. . Föreningar med formeln cucou ° 5 ÅF; l: / Cia-can? o cøzn l med Z(cis)-konfiguration vid den exocykliska dubbelbindningen, i vilken formel R1 R2 R3 är väte, OH, lägre alkoxi eller halogen; är väte, OH eller lägre alkoxi; och är C1_4-alkyl, CFM-aralkyl eller AlkX, där Alk är alkyliden alkylen med 1-4 kolatomer och X ärrbrom, klor eller jod; och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav. eller 2 _ Föreningarna 7 ß -tD-2-amino-2- (ßl-hydroxifenyl) acetamidg] - 3- B Z) -1-propen-1-yg -B-cefem-Q-karboxylsyra , 7 ß - ED-Z-amino-

2. -fenylacetamidoj -3- B Z) -1-propen-1-yl] - B-cefem-é-karboxylsyra , 7 ß - [D-Z-amino-Z- (B-klor-lí-hydroxifenyl) acetamido] -3- BZ) -1- propen-1-yl] -3-cefem-4-karboxylsyra , 7ß-ED-2-amino-2- (3 , 4-di- hydroxifenyl) acetamido] -3- Ü Z) -1-propen-1-yfl -3-cefem-4-kar- boxylsyra och 7 ß-ED-Z-amino-Z- (fl-hydroxi-B-metoxifenyl) acet- amidol-3- B Z) -1-propen-1-yl] -3-cefem-4-karboxylsyra enligt krav 1 .

3. . Föreningarna 7p - ß-Z-amino-Z- (ll-hydroxifenyl) acetamido] - 3- Ü Z) -1-buten-1-yl] -3-cefem-4-karboxylsyra och 7 ,B -ED-Z-amino- 2- (4 -hydroxifenyh -acetamidoj -3- Ü Z) -3-fenyl-1-propen-1-yfl -3- cefem-Ii-karboxylsyra enligt krav 1 .

4. Farmaceutisk komposition i doseringsenhetsform, känne- tecknad därav, att den innehâller en antibakteriellt effektiv, ogiftig mängd av en förening enligt kräv 1 och en farmaceutiskt godtagbar bärare härför. 10 15 20 25 30 35 G' 458 611

5. Förfarande för framställning av cefalosporiner med formeln _ n? cucon ' 5 - _ 1 ” mg / ca-cxn: ° cozn _ med Z(cis)-konfiguration vid den exocykliska dubbelbindningen, i vilken formel R1 är väte, OH, lägre alkoxi eller halogen; R2 är väte, OH eller lägre alkoxi; och 1:3 är c1_4-a1ky1, c7_14-ara11 den eller alkylen med 1-4 kolatomer och X är brom, klor eller jod; k ä n n e t e c k n a t därav, att man i en reaktions- inert, organisk flytande bärare vid 20-15000 omsätter en halid- reaktant med formeln QCH X eller R3CH2X, vari Q har nedan an- givna betydelse, R3 har švan angivna betydelse och X är klor, brom eller jod, med en triarylfosfin för erhållande av ett fos- foniumsalt och omvandlar det sistnämnda i ett med vatten icke blandbart, flytande organiskt lösningsmedel med en vattenhaltig bas till en fosforanylmellanprodukt med formeln QCH=PAr3 eller R3CH=PAr3, där Ar=aryl, följt av omsättning av sistnämnda under torra betingelser vid en temperatur från -40°C till +50°C i nämnda med vatten icke blandbara, flytande organiska lösnings- medel med en karbonylreaktant med formeln R3CHO respektive QCHO, varvid endast en av nämnda halidreaktant och nämnda karbonyl- reaktant innehåller gruppen Q och Q är en grupp med formeln 10 15 20 25 30 35 f45s 611 ” (Iya I z/ :jr Nfiyl I _ I R; . / /” o Q .I . 2 I e; / ”LI/s oozzz ° af; vari n är heltalet 0 eller 1, R1 har ovan angivna betydelse, 1 2 3 P , P och P är konventionella skyddsgrupper, som användes inom cefalosporinkemin respektive med amino-, karboxi- och hydroxigrupper, Ac är en acylgrupp av den typ som vanligen återfinnes i en cefalosporin och B är alkyliden- eller ar- alkylidenskyddande grupp, och att man därefter omvandlar nämnda produkt till den önska- de produkten med den först angivna formeln genom kombination, allt efter behov, av en eller flera åtgärder som innebär att man avlägsnar nämnda blockeringsgrupper P1, P2, P3, Ac och B och inför 7-acylgruppen med formeln 2 8 ïgco- Na al' 2 i den erhållna 3-substituerade-7-aminocef-3-em-föreningen, varvid R och R2 har ovan angivna betydelser, varvid, om n = 1, motsvarande 1-oxid reduceras medelst kända förfaranden i något skede av syntesen.