SE449996B - (6r,7r)-7-/(z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxiimino)acetamidol/-3-(1-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxylat i form av en kristallin bishydroklorid farmaceutisk komposition derav samt anvendning som mellanpr - Google Patents

Description

449 996 _. positiva Proteus, Serratia, Providence och speciellt Pseudomo- nasorganismer och dess antibakteriella egenskaper minskas inte av humanserum. Dessutom är effekten av ökad inoculum mot före- ningen låg och föreningen är snabbt baktericidal vid koncentra- tioner nära den minimala inhiberande koncentrationen. Den för- delas väl i kroppen hos små gnagare och ger användbara terapeu- tiska nivåer efter subkutan injektion. Försöksinfektioner på mus med gramnegativa bakterier har framgångsrikt behandlats med användning av föreningen och speciellt har utomordentligt skydd erhållits mot stammar av Pseudomonas aeruginosa, en orga- nism som normalt inte är känslig för behandling med cefalospo- rinantibiotikum. Detta skydd kunde jämföras med behandlingen med en aminoglykosid såsom amikacin. Akut toxicitetstest med föreningen på mus gav LD5 värden överstigande 6 g/kg. Ingen nefrotoxicitet har observgrats på råtta vid doser av 2,0 g/kg.

Vid studium på frivilliga försökspersoner har föreningen visat goda farmakokinetiska egenskaper med höga och långvariga serum- nivåer efter injektion. Den långa serumhalveringstiden antyder att mindre frekventa doser kan erfordras för mindre allvarliga infektioner. Tidigare kliniska resultat antyder att föreningen kliniskt reproducerar de utomordentliga antibiotiska egenskaper- na som demonstreras in vitro och vid försök på djur.

Det brittiska patentet 2025398 innefattar även solvaten och de ogiftiga salterna, t.ex. bassalter och syraadditionssalter av den ovannämnda cefalosporinföreningen.

Det brittiska patentet 2025398 innefattar bl.a. ett sätt för framställning av den ovannämnda cefalosporinföreningen (I) lik- som solvaten och de ogiftiga salterna därav genom: acylering av en förening med formeln H n I å s nzn__l_r / __N e» \ 04 / cnzn 449 996 företrädesvis som bishydrokloridsyraadditionssaltet, med en syra med formeln //íï S \\N __' C-COOH lz|a\ çH3 2 O_“C.COOR I CH3 (vari R1 betecknar en amino- eller skyddad aminogrupp; och R2 betecknar en karboxylblockerande grupp), eller med ett därtill motsvarande acyleringsmedel varefter följande reaktioner kan genomföras I) eventuellt aminoskyddande grupper och den karboxylblocke- rande gruppen R2 avlägsnas och, om så önskas, II) överföres en karboxylgrupp i ett ogiftigt salt.

Den önskade föreningen med den ovan angivna formeln (I) och dess bishydrokloridsalt enligt det brittiska patentet 2025398 erhölls som amorfa fasta substanser och deras stabilitet var inte särskilt tillfredsställande, speciellt vid förhöjda tempe- raturer.

Man har nu funnit att (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2- (2-karboxiprop-2-oxiimino)-acetamid0]~3-(l-pyridiniummetyl)cef- 3-em-4-karboxylat (I) bishydroklorid fördelaktigt kan framstäl- las och isoleras i kristallín form.

Den kristallina f0rmen av bishydrokloridföreningen har_genere11t överlägsna renhets- och stabilitetsegenskaper. Speciellt har den nya formen av hydrokloriden befunnits ha en väldefinierat kristallin struktur och den har befunnits vara anmärkningsvärt stabil även när den lagras under förlängda tidsperioder vid en temperatur av 50°C. Dessa egenskaper gör föreningen värdefull 449 996 4. vid farmaceutisk användning liksom vid framställning av andra aktiva cefalosporinföreningar.

Man har funnit att det nya kristallina bishydrokloridsaltet av den ovan angivna cefalosporinföreningen kan framställas under kontrollerade betingelser. Man har exempelvis funnit att den önskade kristallina bishydrokloriden kan framställas genom kristallisation ur ett lämpligt medium, exempelvis innefattande aceton och myrsyra. Det har även befunnits möjligt att omkristal- lisera den kristallina bishydrokloriden ur olika media. Exempel på andra media för kristallisation eller omkristallisation inne- fattar industriellt denaturerad alkohol och blandningar av meta- nol, n-propanol och diisopropyleter.

Kristallisation av dihydrokloriden sker företrädesvis vid en temperatur av io - 35%, lämpligen ungefär 2o°c, följa av eu: kylningssteg för att förbättra kristallutbytet, till en tempera- tur i storleksordningen O° - l5°C.

Efter fällning kan den kristallina bishydrokloridprodukten åter- vinnas genom filtrering och tvättas och torkas på konventionellt sätt.

Bishydrokloridsaltet som skall användas vid framställning av den nya kristallina bishydrokloriden enligt uppfinningen kan framställas enligt ett förfarande som beskrivs i det ovannämnda brittiska patentet 2025398, t.ex. enligt ett förfarande inne- fattande den ovannämnda metoden.

Den nya kristallina bishydrokloriden enligt uppfinningen har ut- satts för'röntgenpulverdiffraktionsundersökningar.Produkten enligt exempel 2 användes för att ge ett Debye Scherrerpubmudiffiæmtflxß- foto genom exponering i l2 timmar för CoKa-strålning och ett andra foto genom exponering i 3 timmar för CuKa-strålning. Li- nieintensiteten jämfördes mot en standarduppsättning och gav de relativa intensiteterna i följande tabell: 4 ' 449 996 TABELL "d" värde relativ intensitet "d" värde relativ intensitet (R) < I 1 1 1100 (R) (1100 10.6 93 , 2.76 12 7.9 22 2.73 10 6.6 30 2.65 15 6.4 10 2.59' 5.65 45 2.53 3 5.43 " 15 2.46 5.07 10 2.43 .10 4.90 10 2.39 spår 4.70 12 2.35 7 4.54 10 2.26 10 4.25 100 2.24 spår 4.12 30 _ 2.19 4 3.97 30 diffus. 2.11 2 3.69 65 2.09 4 3.62 25 2.06 2 3.75 35 2.03 2 3.60 35 _ 1.963 2 3.51 35 1.919 2 3.34 10 diffus. 1.666 1 3.26 18 diffus 1.870 1 3.07 25 1.636 1 2.95 6 22 1.612 1 2.67 ~ 5 1.776 1 2.61 10 _ 1.746 1 449 996 ..6 Det nya saltet enligt uppfinningen karakteriseras även genom sitt infraröda spektrum. Det infraröda spektrumet för produkten enligt exempel 2 i Nujol erhölls och detta visas i figuren i den bifogade ritningen.

Den kristallina bishydrokloriden enligt föreliggande uppfinning kan användas för framställning av ett kristallint pentahydrat av föreningen med formeln I genom tillsats av en organisk eller oorganisk bas till en vattenhaltig lösning av bishydrokloriden till pH 3,3 - 4,0, företrädesvis ungefär 3,7. Det_erhållna pen- tahydratet har även befunnits ha väldefinierat kristallin struk- tur. Detta pentahydrat har befunnits vara anmärkningsvärt sta- bilt också när det lagras vid en temperatur av 50°C under en förlängd tidsperiod. Pentahydratet visar de antibiotiska egen- skaperna hos den ovannämnda föreningen (I) och kan användas som antibiotikum på samma sätt.

Framställningen av bishydrokloriden enligt uppfinningen åskåd- liggöres närmare medelst följande exempel vari temperaturerna avser Celsiusgrader.

Protonmagnetiskt resonans (p.m.r.) spektrum bestämdes vid 100 MH2. Integralerna överensstämmer med anvisningarna, kopp- lingskonstanterna, J, är i Hz, tecknen är inte bestämda: s = singlett t = triplett,d = dubblett, dd = dubbel dubblett, m = multiplettoch ABq = AB kvartett.

Samtliga följande exempel åskådliggör framställningen av (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxiimi-A no)acetamidol]-3-(l-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxçlat bis- hydroklorid.

Exempel l . _84 ml myrsyra sattes under omrörning till 41,8 g (6R,7R)-7- [(Z)-2-(2-tritylaminotiazol-4-yl)-2-(2-t-butoxíkarbonylprop-2- oxiimino)acetamido]-3-(1-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxylat N,N-dimetylformamidsolvat under vattenkylning för att hålla tem- peraturen under 280. Den erhållna lösningen kyldes till 20° ooh 17,0 ml koncentrerad saltsyra tillsattes under omröring i 5 Û _. 449 996 minuter. Blandningen omrördes i 3 timmar vid rumstemperatur, filtrerades därefter för att avlägsna trifenylmetanol. Filtra- tet sattes till 800 ml omrörd aceton. Trifenylmetanolen tvät- tades med 3 x 7 ml myrsyra och de kombinerade tvättvätskorna sattes till filtrat-acetonblandningen. Den erhållna suspensio- nen omrördes i 1,25 timmar och filtrerades därefter. Den kristallina fasta substansen tvättades med aceton och torkades i vakuum och gav 20,2 g av titelföreningen,'f(D20) 0,95 (d, J6Hz, pyridinium 2-och 6-H), 1,29 (dd, J6Hz, pyridinium 4-H), 1,80 (dd, J6Hz, pyridinium 3- och 5-H), 2,77 (s, tiazole 5-H), 4,02 (d, J5Hz, 7-H), 4,10 och 4,47 (ABg, J.6Hz, 3-CH2), A,59 (d, J5Hz, 6-H), 6,l7 och 6,54 (ABq, Jl8Hz, 2-H2) och 8,36 (s; C(CH3)2); funnen klor: 11,0 procent; beräknat för c.22n24n6o7s2c12= 11,5 procennlmax (pH s fosfatbuffert) 257 nm 1% 1% . - 1% (Elcm 347) ,¿ inf via 240 (Elm 310) och 29o nm (Elm 1so>.

Exempel 2 5'g (6R,7R)-7-I(Z)-2-(2-t-butoxikarbonylprop-2-oxíimino)-2- (2-tritylaminotiazol-4-yl)acetamido]-3-(l-pyridiniummetyl)cef- 3-em-4-karboxylat N,N-dimetylformamidsolvat sattes till 10 ml omrörd myrsyra. När lösningen hade klarnat tillsattes 2,1 ml koncentrerad saltsyra droppvis under 2 minuter och den erhållna suspensionen omrördes vid rumstemperatur ytterligare 3 timmar.

Suspensionen filtrerades och filterbädden tvättades med flera små portioner myrsyra (totalt 2,5 ml).

Filtratet hälldes i l0O ml industriellt denaturerad alkohol och lösningsmedlet indunstades i vakuum på rotationsindunstare (vattenpumpvakuum, badtemperatur 400) och gav en olja. 50 ml etylacetat tillsattes och indunstningen fortsatte. Detta för- farande upprepades med ytterligare 2 x 50 ml etylacetat tills ett skum bildades. Skummet upptogs i l00 ml industriellt de- naturerad alkohol och indunstningen fortsattes omsorgsfullt tills tecken på kristallisation observerades. Den grumliga lös- ningen placerades i kylskåp över natten och den vita fasta sub- stansen isolerades genom filtrering och torkades vid 40° i va- kuum för att ge 150 mg av titelföreningen. 449 996 Ytterligare noggrann indunstning av vätskorna gav en andra li- 3 ten skörd av titelföreningen(l50 mg). De kvarvarande industri- ellt denaturerade alkoholvätskorna blåstes i en kvävegasström och en rikhaltig skörd av kristallint material avskikdes. Dessa isolerades genom filtrering och torkades i vakuum vid 400 och gav (léö g) av titelföreningen.2Huïš (pH 6 fosfatbuffert) 257 nm (Elcm 348), och Å 243 nm (Elc 316) och línf 390 nm (Eâšm 152); pmr liknande den i exempel l, kloranalys 11,3 pro- cent, vatten enligt Karl Fischer 3,0 procent. Debye-Scherrerpuhær- röntgendiffraktionsfoton visade att materialet var kristallint. inf m Exempel 3 0,5 g av den kristallina fasta titelföreningen, framställd enligt exempel l ovan, upplöstes i 5 ml metanol varefter 15 ml n-propanol tillsattes och lösningen behandlades med 20 ml diisopropyleter i 20 minuter. Suspensionen värmdes till 500 och omrördes vid rumstemperatur i 30 minuter. Suspensionen filtrerades och tvättades och gav 0,48 g av den omkristalli- 1% 349, cm l V . l° ls É2l,660) ochllinf vid 245 (Eläm 3214 E13,920) och 285 (El:m 170, 8lO,550); rüDzO) identiskt med den enligt exempel l; oren- heter enligt högtryckvätskekromatografi 1,2 procent, vattenhalt enligt Karl Fischer-metod 4,0 procent; klor, funnet: 10,6 pro- serade tite1föreningen.Änmx (pn 6 fosfat) 257 (E Cent (C22H24N6O7S2Cl2 1,4 H20, motsvarar 10,9 procent).

FARMACEUT IS KA BE REDNI N GAR Den kristallina bishydrokloriden enligt föreliggande uppfinning visar de antibiotiska egenskaperna hos den ovannämnda före- ningen (I) och kan användas för behandling av en mångfald sjuk- domar förorsakade av patogena bakterier i människor och djur såsom infektioner i andningsvägarna och urinvägarna, Enligt en annan aspekt ger föreliggande uppfinning farmaceu- tiska kompositioner innehållande den nya bishydrokloriden an- passad för användning inom human -eller veterinärmedicinen. Så- dana kompositioner kan framställas på konventionellt sätt med 0» hjälp av eventuellt erforderliga farmaceutiska bärare eller .. 449 996 excipienter.

Den antibiotiskt verksamma bishydrokloridföreningen enligt före- liggande uppfinning kan beredas för injektion och kan tillhanda- hållas i enhetsdosform i ampuller eller i multidosbehållare, om så erfordras med tillsatt konserveringsmedel.

Kompositionerna kan även ha sådana former som suspensioner, lös- ningar eller emulsioner i olje- eller vattenhaltiga vehiklar och kan innehålla beredningsmedel såsom suspendering-, stabili- sering och/eller dispergeringsmedel. Alternativt kan den aktiva beståndsdelen vara i pulverform för att ombildas med en lämplig vehikel, t.ex. sterilt pyrogenfritt vatten innan användningen.

Företrädesvis kan sådana pulverberedningar innehålla en lämplig ogiftig bas för att förbättra vattenlösligheten hos den aktiva beståndsdelen och/eller säkerställa att när pulvret ombildas med vatten den erhållna vattenhaltiga beredningens pH är fysio- logiskt acceptabel. Alternativt kan basen finnas närvarande i vattnet med vilket pulvret ombildas. Basen kan exempelvis vara en oorganisk bas såsom natriumkarbonat, natriumbikarbonat eller natriumacetat eller en organisk bas såsom lysin eller lysinace- tat .

Den antibiotiska föreningen kan även beredas som suppositoria, t.ex. innehållande konventionella suppositoriebaser såsom kakao- smör eller andra glycerider.

För medicinering av ögonen eller öronen kan preparaten beredas S0m individuella kapslar i vätske-eller halvvätskeform eller droppar.

Kompositioner för veterinärmedicin kan även exempelvis beredas som intramammära preparat i antingen långtidsverkande eller" osnabbfrigörande baser.

Kompositionerna kan innehålla från 0,1 procent och uppåt, t.ex. 0,1 - 99 procent, av det aktiva materialet beroende på admini- 449 996 _- lO strationssättet. När kompositionerna innefattar dosenheter skall varje enhet företrädesvis innehålla 50 - 1500 mg av den aktiva bestândsdelen. Den dos som användes för behandling av vuxna människor skall företrädesvis vara i storleksordningen å 500 till 6000 mg per dag, beroende på administrationssätt och frekvens. Exempelvis bör normalt för behandling av vuxna en dos av 1000 till 3000 mg per dag intravenöst eller intramusku- lärt administrerat räcka. För behandling av Pseudomonas infek- [I tioner kan högre dagsdoser erfordras.

Den antibiotiskt aktiva föreningen enligt uppfinningen kan ad- ministreras i kombination med andra terapeutiska medel såsom antibiotika, exempelvis penicilliner eller andra cefalosporiner.

Claims (4)

449 996 11 PATENTKRAV

1. (6R,7R)-7-I(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)~2-(2-karboxiprop- 2-oxiimino)acetamidoI-3-(1-pyridiniummetyl)cef~3-em-4-karbox- ylat i form av en kristallin bishydroklorid som huvudsakligen har följande 'd'-värden och relativa intensiteter när den ut- sättes för Debye Scherrer pulver-röntgendiffraktion med användning av CoKx~strâlning: 'd' värde relativ intensitet 'd'-värde relativ intensitet (R) 1 I 1 1 1100 (R) (1100 1 10.6 93 2.16 12 1.9 22 2.13 10 6.6 30 2.65 15 6.4 10 2.59 5 5.65 45 2.53 3 5.43 15 2.46 1 5.01 10 2.43 10 4.90 10 2.39 Spår 4.10 12 2.35 1 4.54 10 _ 2.26 10 4.25 100 “ 2.24 spår 4.12 30 2.19 4 3.91 30 diffus 2.11 2 3.89 65 2.09 4 3.62 25 2.06 2 3.15 35 2.03 2 3.60 ' 35 1.963 2 3.51 35 1.919 2 3.34 10 diffus 1.666 1 3.26 16 diffus 1.610 1 3.01 25 1.036 1 2.95 22 1.612 1 2.61 5 1.116 1 2.61 10 1.140 1 449 996 ' 12

2. Förfarande för framställning av den kristallina bishydro- kloriden enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att den önskade bishydrokloriden kristalliseras ur h: (6R,7R)-|(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxi- imino)acetamido|-3-(l-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxylat- bishydroklorid i ett medium utvalt bland myrsyra och aceton, industriell denaturerad alkohol och blandningar av metanol, n-propanol och diisopropyleter.

3. Farmaceutisk komposition med antibiotísk aktivitet, k ä n n e t e c k n a d därav, att den som aktiv beståndsdel innefattar den kristallina bishydrokloriden enligt patent- kravet l, anpassad för användning inom human- eller veterinär- medicinen.

4. Kristallin bishydroklorid enligt patentkravet l till användning för framställning av (6R,7R)-7-I(Z)-2-(2-amino- tiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxiimino)acetamidol-3-(l- pyridiniummetyl)cef~3-em-4-karboxylat-pentahydrat.