SE447903B - Antitumorglykosider - Google Patents

Description

447 903 är 3' ,4'-diepi-4'-0-metyldaunorubicin och föreningen i vilken R är hydroxi är 3',4'-diepi-4'-0-metyldoxorubicin.

Uppfinningen avser vidare ett förfarande för framställning av 3',4'-diepi-4'-O-metyl-daunorubicin (I, R==H) vid vilket daunomycinon kondenseras med 4-O-metyl-2,3,6-trideoxi-3-tri- fluoracetamidoribohexapyranosylklorid med formeln . NHCOCF3 i; -- (min CH3 CH3Û i ett inert organiskt lösningsmedel i närvaro av ett lösligt silversalt som katalysator och en molekylsikt som dehydrati- seringsmedel till den skyddade alfa-glykosiden med formeln H0 1 k /\ /;¿;C0CH3 r 'CH - / (Iv) f' i Cn30 H0 u { I O CH3 CH O 447 903 och från denna avlägsnas genom mild alkalisk hydrolys N-tri- fluoracetylskyddsgruppen. 3',4'-diepi-4'-0-metyldaunorubicinen kan isoleras som hydroklorid.

Det inerta organiska lösningsmedel i vilket kondensationen genomföres är lämpligen kloroform eller metylendiklorid.

Det lösliga silversaltet kan vara silvertrifluormetansulfonat.

Molekylsikten kan vara en sådan som kan erhållas i handeln under varubeteckningen Merck. De betingelser under vilka kondensationen genomföres kan vara sådana som beskrives i den amerikanska patentskriften 4.112.076.

Det skyddade halogensockret (III) är likaledes en ny förening och faller inom skyddsomrâdet för föreliggande uppfinning.

Det skyddade halogensockret (III) kan framställas från metyl- -2,3,6-trideoxi-3-trifluoracetamido-alfa-L-ribohexüpyranosid med formeln °CÉ3.i NncocF3 mm|_ (V) --o CH3 HO Denna förening beskrives i den amerikanska patentskriften 4.112.076.

Behandlingen av föreningen (V) med diazometanbortrifluorid- eterat i metylendiklorid som beskrives av J.O. Deferrari et. al. (Methods in Carbohydrate Chemistry, band VI, sid. 365 (1972) Academic Press, New York och London) och i den belgiska patentansökan 862.102, dock vid en lägre temperatur (-70°C) 447 903 ger det tidigare icke kända 4-O-metylderivatet med formeln OCH NHCOCF (VI) .

CH *O CHO Sur hydrolys av föreningen (VI) ger föreningen med formeln ' OH NHCOCF 3 (VII) -cn CH3O¶ med en fri hydroxigrupp i l-ställníng. Föreningen (VII) omsättes med p-nitrobensoylklorid i torr pyridin varvid det motsvarande l-O-p-nitrobensoylderivatet med formeln 447 903 NHCÖCF3 (VIII) H p 0 '-C NO ca ”__” CH O erhålles. Slutligen behandlas föreningen (VIII) med torrt klorväte i vattenfri metylendiklorid varvid 1-klorderivatet (III) erhålles.

Uppfinningen avser vidare ett förfarande för fiamställning av 3',4'-diepi-4'-O-metyldoxorubicin (I, R = OH) vid vilket 3',4'-diepi-4'-O-metyldaunorubicin (I, R = H) bromeras och det erhållna 14-bromderivatet hydrolyseras med vatten- haltigt natriumformiat. De betingelser under vilka dessa förfaranden genomföres kan vara sådana som beskrives i den amerikanska patentskriften 3.803.124. 3',4'-diepi-4'-O-metyl- doxorubicinen kan isoleras som hydroklorid.

Uppfinningen åskådliggöres närmare medelst följande exempel.

Exemgel l.

Framställning av mellanprodukten 4-0-metyl-2,3,6-trideoxi- -3-trifluoracetamido-ribohexopyranosylklorid (III).

En lösning av 11,7 g (45 mmol) metyl-2,3,6-trideoxi-3-tri- fluoracetamido-alfa-L-ribohexopyranosid (V) i 100 ml torr metylendiklorid behandlades vid -70°C med 0,6 ml bortrifluo- rideterat. Under det att temperaturen hölls vid -70°C till- sattes ett överskott av diazometan i metylendiklorid tills en svagt gul färg blev bestående. Efter 60 minuter vid -70°C avfiltrerades en vit fast substans (polymetylen). Filtratet tvättades efter varandra med 10 %-ig bikarbonatlösning och 447 905 vatten och torkades därefter med vattenfritt natriumsulfat.

Den återstod som erhölls genom indunstning kromatograferades på en silikagelkolonn. Vid eluering med kloroform erhölls ren metyl-4-0-metyl-2,3,6-trideoxi-3-trifluoracetamido-alfa- -L-ribohexopyranosid (VI) som amorf fast substans; smält- punkt ss¿6o°c, EIQÉ3°= -11o° (c = 0,5 i cHc13); masspektrum: m/e 271 (M+). NMRrspektrumet visade'absorptioner vid 1,30 (d, CH3-C~5), 2,95 (dd, J = 9,5 och 4,0 Hz, C-4-H), 3,42 och 3,43 (s, 2 CH30-) 3,70 (dq, J = 6,0 och 9,0 Hz, C-5-H), 4,45 - 4,85 (m, C-3-H) och 4,75 §(brett s, WH = 5,5 Hz, C-1-H).

Till en lösning av 1,76 g (6,5 mmol) av föreningen (VI) i '35 ml ättiksyra sattes 140 ml vatten. Lösningen upphettades därefter i l timma till 1000C. Lösningsmedlet avdunstades och återstoden omkristalliserades ur koltetraklorid varvid man erhöll 1,64 g (98 %) 4-0-metyl-2,3,6-trideoxi-3-tri- fluoracetamido-glfa-L-ribohexopyranos (VII); smältpunkt 113-11s°c, B11? = -e1,s° (c = o,s i czxci3n masspektrum; m/e 257 (M+). NMR-spektrumet visade absorptioner vid 1,27 (d, CH3-C-5), 2,96 (dd, J = 9,5 och 4,0 Hz, C-4-H), 3,44 (s, CH30), 4,00 (dq, J = 6,5 och 9,5 Hz, C-Sfñ), 4,69 (m, C-3-H) och 5,32 (WH = 6,0 Hz, C-l-H).

En lösning av 1,64 9 (6,38 mmol) av förening (VII) i 76 ml torr pyridin behandlades vid 0°C under omröring med 2 g p-nitrobensoylklorid. Efter 30 minuter vid 0°C och 20 timmar vid rumstemperatur hälldes reaktionsblandningen i isvatten och extraherades med kloroform; de förenade kloroformextrak- ten tvättades efter vartannat med 10 %-ig kaliumbisulfat- lösning, med 10 %-ig natriumbikarbonatlösning och vatten, torkades över vattenfritt natriumsulfat och indunstades till torrhet. Återstoden kromatograferades på en silikagel- kolonn. Vid eluering med en kloroform-aceton-blandning (95:5, räknat i volym) erhölls 1,76 g (68 %) 4-O-metyl-1-0-p- -nitrobensoyl-2,3,6-trideoxi-3-trifluoracetamido-L-ribohexo- pyranos (VIII). 447 903 En lösningaVJ476 g (4,34 mmol) av föreningen (VIII) i 48 ml torr metylendiklorid mättades vid 0°C med vattenfritt klorväte.

Den erhållna p-nitrobensosyrafällningen avfiltrerades under vattenfria betingelser och filtratet indunstades, varvid man erhöll en återstod av l,2 g (100 %) 4-O-metyl-2,3,6-trideoxi- -3-trifluoracetamido-L-ribohexipyranosylklorid (III).

Detta material var utan ytterligare rening lämpligt för använd- ning vid den i exempel 2 beskrivna kopplingsreaktionen.

Exemgel 2: 3',4'-diepi-4'-0-metyldaunorubicin. (I, R = H) (IMI 94) Till en lösning av 2,7 g (6,78 mmol) daunomycinon i 310 ml torr metylenklorid sattes 1,2 g 4-0-metyl,2,3,6-trideoxi-3- -trifluoracetamidoL-ribohexapyranosylklorid (III) (i 25 ml torr metylendiklorid) och 8,2 g molekylsikt (4 Å Merck).

Därefter behandlades reaktionsblandningen med l,4 g silver- trifluormetansulfonat i 34 ml vattenfri dietyleter under kraftig omröring. Efter 1 timma vid rumstemperatur neutra- liserades reaktionsblandningen med 0,72 ml s-kollidin, filtrerades, tvättades med 0,1 m vattenhaltig saltsyra och därefter med vatten, torkades över vattenfritt natrium- sulfat och indunstades under vakuum. Vid kromatografisk rening av den råa återstoden på en silikagelkolonn under användning av kloroform:aceton (9:l, räknat i volym) som lösningsmedel erhölls 1,42 g (51 %) 3',4'-diepi-4-O-metyl- -N-tråfluoracetyidaunorubicin (IV), smältpunkt 94-950, UG? = +137,s° (c = o,os i cHc13). NMR-spcktrcc visade absorptioner vid 1,29 (d, CH3-C-5'), 2,40 (s, CH3CO), 2,97 (dq, J = 9,0 och 4,0 Hz, C-4'-H), 3,40 (S, CH3O-C-4), 4 4,04 (s, CH3 0-C-4), 4,47 till 4,91 (m, C-3'-H), 5,13 (brett s, WH = 8,0 Hz, O-7-H), 5,42 (brett s, WH = 6,0 Hz, C-l-H), 7,35 (dd, J = 7,5 och 2,0 Hz, C-3-H), 7,33 (dd, J = 7,5 Hz, C-2-H), 7.87 (dd, J = 7,5 och 2,0 Hz, C-l-H), 13,40 och 14,206 (två s, c-e-on och c-ll-ou) . 447 903 En lösning av 1,4 g (2,2 mmol) av förening (IV) i 24 ml aceton behandlades med 57 ml 0,2 n vattenhaltig natrium- hydroxid och omrördes under kväve vid rumstemperatur. Efter 3 timmar inställdes reaktinnsblandningen med 1 n vattenhaltig saltsyra tå pH 4 och extraherades därefter med kloroform för avlägsnande av eventuella föroreningar. Den vattenhaltiga fasen, inställd på pH 7,5, extraherades med kloroform; de förenade extrakten tvättades med destillerat vatten, torkades över vattenfritt natriumsulfat, indunstades till en liten volym och surgjordes med 0,5 n metanoliskt klorväte till pH 4,5. Vid tillsats av dietyleter erhölls en fällning av 500 mg (39 %) 3',4'~diepi-4'-0-metyldaunorubicin (I,R = H) som hydroklorid, smältpunkt 188-l92°C (sönderdelning), [gJD = +373° (c = 0,015 i metanol).

Exemgel 3. 3',4'-diepi-4'-0-metyl-doxorubicin ((, R = OH) (IMI l24).

En lösning av 0,29 g (0,5 mmol) 3',4'-diepi-4'-0-metyldauno- rubicinhydroklorid i en blandning av 4 ml vattenfri metanol, 11,5 mb dioxan och 0,3 ml etylorotoformiat behandlades med 1,2 ml av en 1,3 M lösning av brom i kloroform. Efter 2 tim- mar vid l0°C hälldes reaktionsblandningen i en 2:1 (räknat på volym) blandning av dietyleter och n-hexan (90 ml). Den erhållna fällningen löstes efter filtrering och tvättning med dietyleter i en l:l (räknat på volym) blandning av aceton och 0,25 n vattenhaltig bromvätesyra (20 ml).

Efter 20 timmar vid 30°C sattes en 1,3 n vattenhaltig lösning av natriumformiat (5 ml) till reaktionsblandningen och blandningen omrördes i 48 timmar vid 30°C. Den erhållna bland- ningen extraherades med kloroform för avlägsnande av even- tuella lyofila föroreningar, varpå den vattenhaltiga fasen återigen extraherades med kloroform vid pH 7,6. De förenade extrakten torkades över vattenfritt natriumsulfat och indunstades under vakuum till liten volym.Till den erhållna, med vattenfritt metanoliskt klorväte till pH 3,5 inställda lösningen sattes dietyleter, varpå 3',4'-diepi-4'-0-metyl- s'|. 447 905 doxorubicin (I, R = OH) utföll som hydroklorid. Smältpunkt 195-1s7°c (sönaerae1ning),E0[L = +1ae° (C = o,os 1 metanol).

Biologisk verkan.

Tabell I.

Förening šgso på HeLa-celler (ng/ml) Daunorubicin 14 a IMI 94 36 Doxorubicin 9,5 IMI 124 5 , 9 ID50 = minimum-dos av läkemedlet som inhiberar 50% av kloningsaktiviteten av HeLa-celler.

Tabell II.

Förening Verkan på P 388 leukemi (behandling i.p. vid l.dagen) mg/kg T/C % Toxicitet LTS Daunorubicin 2 9 172,168 0/18 0/18 4.4 181.187 0/18 0/18 _ 6.6 163 3/s o/8 IMI 94 6.6 145 '0/8 ' 0/8 10 154 0/8 0/3 15 190,213 O/18 - 0/18 22 222 '0/10 - 0/10 33 231 2/10 1/10 Doxorubicin 4,4 209 0/8 2/10 6,6 233 0/8 0/10 IMI 124 1,9 180 0/10 0/10 249 200 2/10 0/10 4,4 109 10/10 0/10 6,6 76 10/10 0/10 T/C % = Medelöverlevnadstid föt behandlade möss till medelöverlevnadstid för jämförelsedjur x 100 LTS = Làngtidsöverlevande (>60 dygn) e. -.f.,,......_... _..

Claims (3)

ID 447 903 PATENTKRÄV.

1. l. Förening med den allmänna formeln (Il vari R är väte eller hydroxyl och dess hydroklorid.

2. Förening enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a d av att den är 3',4'-diepi-4'-0-metyldaunorubicin-Hydtoklorid.

3. Förening enligt patentkravet 1, k ä n n e tle c k n a d av att den är 3',4'-diepi-4-0-metyldoxorubicin-hydroklorid.