SE447243B - 3,7,11,15-tetrametyl-2,4,6,10,14-hexadekapentaensyra samt farmaceutisk komposition innehallande denna - Google Patents

Description

u i 447 243 2 ' Såsom exempel på Wittig~reagens, vilka kan användas i det ovan _angivna steg (1) och härrör från en förening med formel III, kan man nämna fosforföreningar framställda genom reaktion mellan föreningen med formel III och trifenylfosfin, fenyldialkoxifosfin, trialkylfos- fit eller liknande. Framställning av detta reagens och dess använd- ningi.Wittig-reaktionen genomföres enligt konventionella metoder, så- som de metoder som har beskrivits av Wadworth et al., J. Am. Chem.

Soc., vol. 83, p. 1733 (1961), Greenwald et al., J. Org. Chem., vol. 28, p. 1128 (1962), och Horner et al., Ber. vol. 95, P. 581 (1962).

I steg (2) ovan genomföres hydrolysen i närvaro av en sådan bas som vanligen användes för hydrolys av karboxylsyraestrar, t.ex. natriumhydroxid eller kaliumhydroxid.

Metod B. Denna metod omfattar följande steg. (1) En förening med formeln /[\/\ I Å/CHO \ /\/\ \ omsättes med ett Wittig-reagens härrörande från en förening med den X W CO2R1 där X betecknar en halogenatom och R1 betecknar en lågalkylgrupp, till bildning av en förening med formeln IV. _ (2) Den erhållna föreningen med formel IV hydrolyseras i när- varo av en bas till bildning av föreningen med formel I.

Reaktionsstegen (1) och (2) ovan kan genomföras på samma sätt (V) allmänna formeln (VI) fsom har angivits för metod A.

Metod C. ,Denna metod omfattar följande steg. (1) En förening med den allmänna formeln 2 (VII) där Y betecknar en lågalkylgrupp eller en arylgrupp, omsättes med en förening med den allmänna formeln VI till bildning av en förening med den allmänna formeln so I 'Å/\Ä\/\Å\@KJ\/CO2R1 (nu) 447 243 3 där Y och R1 har de ovan angivna betydelserna. (2) Den erhållna föreningen med formel VIII underkastas desul- fineríng och esterhydrolys i närvaro av en bas till bildning av före- nU@m1mfl fimmfl'L Reaktionssteg (1) genomföres i närvaro av en bas. Såsom exem- pel på användbara baser kan man nämna n-butyllitium och fenyllitium.

Såsom exempel på reaktionslösningsmedel kan man nämna tetrahydrofuran, dietyleter och 1,2-dimctoxietan. Reakticnen genomföres vanligen vid en temperatur lägre än rumstemperatur.

Steg (2) kan genomföras på samma sätt som steg (2) i den ovan beskrivna metod A. I Nedan anges exempel på substituenter i föreningarna med de all- männa formlerna III, IV, VI, VII och VIII. Symbolen X betecknar en halogenatom, såsom klor, brom eller jod. Symbolen H1 betecknar en lågalkylgrupp, såsom metyl, etyl eller propyl. Symbolen Y betecknar en lågalkylgrupp, såsom metyl, etyl eller propyl, eller en arylgrupp, såsom fenyl eller p-tolyl.

Såsom exempel på farmaceutiskt godtagbara salter av föreningen med formel I kan man nämna natriumsaltet och kaliumsaltet.

Föreningen med formel I enligt föreliggande uppfinning är också terapeutiskt verksam vid behandling av hudsjukdomar med keratinisering.

Såsom exempel på hudsjukdomar med keratinisering som kan be- handlas med föreningen med formel I kan man nämna hudsjukdomar uppvi- sande sådana symptom som hyperkeratos, parakeratos och dyskeratos.

Såsom konkreta exempel på dylika hudsjukdomar kan man nämna psoriasis, akne, akne vulgaris, Daríers sjukdom, palmoplantar pustulos, lichen planus, iktyos, erytrodermi, pityriasis rubra pilaris och keratosis senilis.

För behandling av hudsjukdomar med keratinisering användes vanligen föreningar av steroidtyp avsedda för lokal administrering.

Dessa föreningar"har emellertid kraftiga biverkningar, varför de icke kan användas för upprepad administrering under lång tidsperiod eller administreras i stora mängder.

I motsats därtill har föreningen 3,7,1],15-tetrametyl-2,U,6,10,1ü- hexadekapentaensyra enligt föreliggande uppfinning förmåga att hämma hudkeratinisering samtidigt som den uppvisar en låg giftighet.

Nedan anges resultat av farmakologiska försök och toxicitets- försök genomförda med föreningen enligt föreliggande uppfinning.

(A) Verkan mot kancer.

Såsom försöksdjur användes honmöss ICR med en ålder av 60 dygn. 447 243 H Mössen rakudvs I nacken på en yta av 5 cm?. Y,LP-dímety1bnnso-/É/- antracen löstes i aceton till en lösning innehållande 75 mg per 100 ml lösning. Den sålunda framställda lösningen anbragtes på den raka- de ytan hos mössen i en mängd av 0,2 ml per mus, en första gång när mössen var 60 dygn gamla och en andra gång när mössen var 75 dygn gamla.

Krotonolja löstes i aceton till en lösning innehållande 250 mg per 100 ml lösning. Den sålunda framställda lösningen anbragtes på den rakade ytan hos mössen i en mängd av 0,2 ml per mus, två gång- er per vecka fram till begynnande behandling med provföreningen. Be- handling med provförening startades när varje mus uppvisade 3-7 papil- lom (diameter 5-8 mm för varje papillom; total diameter 30-60 mm).

Provföreningen löstes i jordnötsolja till en lösning innehål- lande 20 mg provförening per ml lösning. Den framställda lösningen administrerades oralt till mössen. Lösningen administrerades tio gånger under 1U dygn (en gång per dygn), och papillomens diameter mättes efter lä dygn för bestämning av den totala diametern för varje mus.

Såsom provföreningar användes dels föreningen 5,7,11,15-tetra- metyl-2,U,6,10,lä-hexadekapentaensyra enligt föreliggande uppfinning och dels, såsom jämförelseförening, den kända föreningen etyl-9- (2,3,6-trimetyl-4-metoxifenyl)-3,7-dimetyl-2,U,6,8,-nonatetraenoat.

De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell 1.

' Tabell 1 Antal Papillom (total diameter/mus) Provforenlng moss Medelvärde Medelvärde ökning eller (dygn 0) . (dygn lä) minskning Enbart jordnötsolja 3 35,9 mm 39,? mm + 17,1% Föreningen enl. uppf. (200 mg/kg/dygn) 5 51,5 mm 21,5 mm - U5,2% Jämförelseföreningen 3 58,1 mm 32,7 mm - U5,7% (H0 mg/kg/dygn) Av försöksresultaten i tabell 1 framgår, att föreningen enligt uppfinningen är verksam mot papillom.

(B) Hämning av keratinisering I en Petri-skål med diametern 6 cm placerades 8 täckglas med en diameter av vardera 15 mm. I skålen hälldes 5 ml av en suspension av den variant av epitelialceller från urinblåsa hos råtta som be- 447 243 5 nämnes EES 20B (ca 2 x 105celLn~ per ml). lnkubering genomfördes vid 3700 under 2H timmar vid en koldioxidkoncentration av 5%. Vart och ett av de sålunda behandlade täckglasen placerades i 2 ml av Eagles MEM-medium innehållande provförening i varierande koncentration.

En andra inkubering genomfördes därefter vid 3700 och vid en koldioxid- koncentration av 5%. Mediet förnyades med intervall om 2-3 dygn.

Under det 2:dra, 5:te, 8:de och iüzde dygnet från begynnande inkube- ring uttogs täckglaset ur mediet och underkastades en Papanicolaou- färgning för bestämning av keratiniseringsgraden. Man mätte härvid absorptionsspektrumet inom våglängdsområdet Ä00~750 nm, och KI (dvs. keratiniseringsindex) beräknades med hjälp av följande formel: Absorptionstopp i närheten av H90 nm som kan tillskrivas keratiniserade celler KI = Absorptionstopp i närheten av 6U0 nm som kan tillskrivas icke-keratiniserade celler Ett KI-värde av 1,0 eller högre indikerar kraftig keratinise- ring, under det att ett KI-värde av 0,5 eller mindre tyder på i huvud~ sak ingen keratinisering.

För jämförelse inkuberades cellerna BES 20B i ett medium fritt från provförening.

Provföreningen utgjordes av föreningen 5,7,l1,15-tetrametyl- 2,ü,6,10,14-hexadekapentaensyra enligt föreliggande uppfinning.

De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående ta- bell 2. Éabell 2 KI-varse Inkubationsperiod 2 dygn '5 dygn 8 dygn lü dygn Kontroll - o,h5 1,10 5,27 3,08 Föreningen enl.“uppf.: 0,1 pg/ml 0,US 0,67 0,55 0,52 1,0 pg/ml 0,ü2 0,U6 0,58 0,39 5,0 pg/ml 0,U8 0,50 ~ 0,22 Vid kontrollförsöket översteg KI-värdet 1,0 när 5 dygn hade förflutit från begynnande inkubering, vilket tyder på kraftig kerati- nisering. Vid användning av olika koncentrationer av föreningen en- ligt uppfinningen erhölls däremot KI-värden lägre än 1,0 i samtliga fall, vilket visade att föreningen hade en hämmande verkan på kerati- niseringen. 447 243 (C) Toxicitet Provföreningen administrerades en gång per dygn under ífl dygn till en grupp om 6 honmöss av ICR~stam. Den admínistrerade mängden av föreningen enligt föreliggande uppfinning var antingen UG eller 200 eller H00 mg/kg per dygn, och den admínistrerade mängden av jäm- förelseföreningen var antingen H0 eller 200 mg/kg per dygn. Under administreringsperíoden observerades viktökning eller viktminskning, inträffade dödsfall, etc.

De använda provföreningarna var dels föreningen enligt uppfin- ningen och dels den jämförelseförening som också användes i försöket för påvisande av verkan mot kancer.

Försöksresultaten sammanfattas nedan. (a) Mössens viktökning eller viktminskning under administre- ríngsperioden visas í nedanstående tabell 3. 447 243 _ _ _ _ M N Tvßë 253 _” :N23 w M I M I M I mi: NNNN OWÄ ma." NaN “_ NON _ u .N m . 1 _. Na N .Nw N Na N NaN _ Na N Na N _. N; N NJ N % N N. -MMWMMWWMN _ _ .N - M _ m M W m. _ . _ W _ .EN _" NaN NaN NaN NaN . ONNN NaN ÄN of.

M _ ._ __ .m _ ._ N _ _ N . W W ä: .N_NN_ N_NN m QNN NTNN CNN M NÅN ÉN W OON _ F @ @ N W cmwcflncflmmms 0.4.. N. .u NN N 0:6, N im N W QN N N_N N NN N Na N M o N. Nmwhwwwwww M m ._ w w _ .r m W m. w N _ _ M m W _ N M . M W mnflnm >wNr. _ NNNN w QNN N_NN QNNN .N ñNN .ïNN QNN NaN _ .r N m _ U N N nas» . N v.. . _ 3 __ NN i _ N N .v N o _ u M ucflnmhpmflcfiëwm vmwnwnwø cmæm :www HNQQQ ^umM _ øääë _ H . : W ,m.o , Awv NNÉNNNNNN Lfluvfiwmflwum ä: Naflotfl m flfimnmä 447 243 8 ' (b) Alla möss behandlade med jämförelseföreningen i en mängd av 200 mg/kg/dygn dog senast under det 8:de dygnet, under det att inget dödsfall observerades för de möss som behandlades med förening- en enligt uppfinningen. (c) Håravfall observerades senast under det 6:te dygnet på varje mus som behandlades med jämförelseföreningen i en mängd av 200 mg/kg/dygn, under det att inget håravfall observerades på de möss som behandlades med föreningen enligt uppfinningen. (d) Cyanos observerades senast under det 7:de dygnet på var- je mus som behandlades med jämförelseföreningen i en mängd av 200 mg/kg/dygn, under det att ingen cyanos observerades på de möss som behandlades med föreningen enligtfföreiggande uppfinning.

Vid toxicitetsförsök är det känt att håravfall och viktminsk- ning tyder på vitamin A hypervitaminos. Eftersom håravfall och vikt- minskning inträffade i påfallande hög grad hos de möss som behandla- des med jämförelseföreningen, antages det att vitamin A hypervitami- nos uppträdde. I motsats därtill iakttogs inga sådana problem hos de möss som behandlades med föreningen enligt uppfinningen.

På grund av de ovan angivna resultaten av farmakologiska för- sök och toxicitetsförsök anses föreningen enligt uppfinningen ha en hög säkerhet och vara av värde såsom medel mot kancer och såsom medel för behandling av hudsjukdomar med keratinisering.

Föreningen enligt uppfinningen kan därför användas för att förhindra eller behandla kancer och prekancerösa tillstånd, och den kan även användas för behandling av hudsjukdomar med keratinisering, såsom akne och psoriasis vulgaris, och behandling av allergiska och inflammatoriska hudsjukdomar. Vidare kan föreningen enligt uppfin- ningen användas för behandling av muskelsjukdomar förorsakade av inflammation, degenerering och dysplastiska förändringar.

Vid användning såsom medel mot kancer och såsom medel för be- handling av hudsfiukdomar med keratinisering administreras föreningen enligt uppfinningen oralt i form av pulver, granuler, pelletar, hårda kapslar etc., eller parenteralt i form av salva, suppositorier injektionslösning, etc. För vuxna människor är dygnsdosen vanligen från HO mg till H g. Om föreningen enligt uppfinningen användes i form av ett preparat för yttre administrering, kan dosen varieras i beroende av sjukdomstillståndet. Farmaceutiska kompositioner kan framställas genom att föreningen enligt uppfinningenipå.konventionellt sätt kombineras med sådana bärare som vanligen användes för medicinska ändamål. 447 243 9 - Förfarandena för framställning av föreningen enligt uppfinningen illustreras genom följande, icke begränsande exempel.

Ešempel 1. Till en suspension av 5,0 g 55%~ig natriumhydrid (oljesuspension) i 60 ml n-hexan sattes 28,6 g trietylfosfonoacetat.

Den resulterande blandningen kokades under återflöde, och 20 g 6,10,1ü-trimetyl-3,5,9,l5~pentadekatetraen-2-on sattes droppvis till blandningen under omrörning. Efter 30 minuter hälldes reaktionsbland- ningen i 200 ml vatten, varefter 500 ml n-hexan tillsattes för extrak- tion. n-hexanfasen avskildes, tvättades med två portioner om vardera 100 ml av en blandning av metanol och vatten i volymförhâllandet 2:1, och koncentrerades. Det härvid erhållna koncentratet renades genom kolonnkromatografi på silikagel, varvid man erhöll 18 g etyl~5,7,11,15- tutrametyl-2,H,o,10,lH~hwxadekapentuenoat.

Till 10 g av det ovan erhållna etyl-3,7,11,15-tetrametyl- 2,ü,6,10,1H-hexadekapentaenoatet sattes en lösning av 5,9 g kalium~ hydroxid i 30 ml isopropylalkohol, och den resulterande blandningen omrördes vid 5000 under 1 timme. Reaktíonsblandningen hälldes däref- ter i isvatten, surgjordes genom tillsättning av saltsyra och extra- herades med 100 ml etyleter. Eterfasen tvättades med vatten, torka- des över magnesiumsulfat, och koncentrerades till en olja (9,0 g).

Denna olja löstes i 50 ml n-hexan och kristalliserades vid -20°C.

Härvid erhölls 4,0 g 3,7,11,15~tetrametyl~2,ü,6,10,1H-hexadekapenta- ensyra i form av ljusgula nålar.

Smp: 78,400 Mass-spektrum (m/e): 302 (M+).

Ira-spektrum (Cm-l, Klar-tablett» 5450, 2900, 1680, 1595.

Niin-spektrum ( g ,cDc13)= 1,61 (GH, s), 1,68 (BH, s), 1,86 (za, s), 1,92-2,2u (8H, b), 2,35 (BH, S), 5,10 (an, b), 5,76 (m, be), 5,98 (1H, d, J = ll Hz), 6,20 (1H, d, J = 15 Hz), 6,90 (IH, dd, J = 11 Hz, 15 Hz), 11,63 (1H, b).

UV-spektrum: Å max (metanol) 304 nm.

Exempel 2. Till en suspension av ü,8 g natriumetoxid i 100 ml n-hexan sattes 18 g dietyl-3-etoxikarbonyl-2-metyl-2-propenylfosfonat.

Till blandningen sattes 10 g 3,7,11-trimetyl-2,6,10-dodekatrien-1-al under omrörning vid rumstemperatur. Efter 1 timme hälldes reaktions- blandningen i 50 ml vatten, och n-hexanfasen avskildes. Denna fas tvättades med tvâ portioner om vardera 50 ml av en blandning av meta- nol och vatten i volymförhållandet 2:1 och koncentrerades därefter.

Det härvid erhållna koncentratet renades genom kolonnkromatografi på 447 243 10 silikagel, varvid man erhöll 1ü,5 g etyl-3,7,11,15-tetrametyl-2,ü,6,10, :lä-hexadekapcntacnoat. 10 g av den ovan erhållna etylestern hydrolyserades på samma sätt som i exempel 1, varvid man erhöll 3,5 g 5,7,11,15-tetrametyl- 2,H,6,10,1U-hexadekapentaensyra i form av gula nålar.

Den erhållna produkten identifierades på samma sätt som i exem- pel 1, dvs. med hjälp av smältpunkt, mass-spektrum, NMR-spektrum, IR-spektrum och UV-spektrum.

Exempel 3. I 100 ml tetrahydrofuran löstes 10 g 1-p-tolylsul- fonyl-3,7,11-trimetyl-2,6,10,dodekatrien, och den resulterande lös- ningen kyldes till -5000. Till den kylda lösningen sattes droppvis 18,5 ml av en 15%-ig lösning av n-butyllitium i n-hexan, varvid till- sättningen genomfördes under omrörning och i en ström av kvävgas sam- tidigt som lösningens temperatur hölls vid -5000. Till den resulte- rande lösningen sattes därefter droppvis 300 ml av en tetrahydrofuran- lösning innehållande 5,7 g etyl-ü-brom-3-metyl-2-butenat. Efter 30 minuter tillsattes 100 ml av en 10%-ig vattenlösning av ammoniumklo- rid, varefter blandningens temperatur fick stiga till rumstemperatur.

Blandningen extraherades därefter med tvâ portioner om vardera 200 ml n~hexan. n~hexanfasen tvättades med tre portioner om vardera 100 ml vatten, torkades över magneisumsulfat och koncentrerades. Härvid erhölls 13 g etyl-3,7,11,15-tetrametyl-5-p-tolylsulfonyl-2,6,10,1Ä- hexadekatetraenoat.

Till 10 g av den ovan erhållna etylestern sattes en lösning av H,6 g kaliumhydroxid i 50 ml isopropylalkohol, och den resulterande blandningen omrördes vid 5000 under 3 timmar. Reaktionsblandningen hälldes sedan i isvatten, surgjordes genom tillsättning av saltsyra och extraherades med 100 ml etyleter. Etyleterfasen tvättades med vatten, torkades över magnesiumsulfat och koncentrerades till en olja (6 g). Denna-olja löstes i 30 ml n-hexan och kristalliserades vid -2o°c. Härvid erhölls 1,8 g 3,7,11,15-tetramety1-2,1a,6,1o,1u-hexa- dekapentaensyra i form av ljusgula nålar.

Den erhållna prcdukten identifierades på samma sätt som i exem- pel 1, dvs. med hjälp av smältpunkt, mass-spektrum, NMR-spektrum, LR-spektrum och UV-spektrum.

Exempel U. Man framställdes på vanligt sätt pelletar med en vikt av 180 mg. Varje pellet hade följande sammansättning:

Claims (2)

447 243 11 5>7=11=ï5't@tPflm@ï31~2,ü,6,10,14-hexadekapentaensyra 50 g kiselsyraanhydrid 30 g krlstallin uulluluuu 50 g majsstärkelse 36 g hydroxipropylcellulosa 10 g magflêßlumñßeàlfllfi [l g Patentkrav

1. 3,7,11,15-tetrametyl-2,H,6,10,lü-hexadekapentaensyra med formeln /|\/\) \/C00H (I) samt farmaceutískt gödtagbara salter därav.

2. Farmaceutisk komposition, k ä n n e t e c k n a d av att den innefattar 3,7,11,15-tetrametyl-2,U,6,10,1U-hexadekapentaensyra med fürmeln (I) \\ \\ \\ \\ COOH eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav, samt en farmakologisk bärare.