SE406810B - Kromatografiskt element - Google Patents

Description

15' 20 25 30' 35 _ ÄO 7211481-2 2 vid konventionell tunn-skiktskromatografi och endast mycket små mängder nav provet och/eller lösningsmedlet fordras. Dessutom sker den kromo¿ gena identifieringen eller åskádliggörandet av kromatogrammen mycket lätt eftersom detta kan genomföras genom enkel indränkning och extrak- tionen av det framkallade provet sker lätt genom enkel skärning, vilket underlättar lagring på grund av den ringa volymen och på grund av att elementet har hög fysikalisk naiifeetnec. D Dessutom kan denna kromatografímetod användas för kvantitativ analys av lipider, mediciner och metaboliska produkter som en gång har utsatts för förändringar i en levande kropp, och tillämpning vid TLC-FID-(Flame Ionization Detection of Thin-layer Chromatogram)~metoden har nyligen föreslagits. Till skillnad mot TLD-(Direct Densitometry of Thin-layer Chromatogram)-metoden ger denna TLC-FID-metod ej avvikning på grund av bakgrundsstörningar och dess känslighet vid detektion är av storleksordningen nanogram (l0'9 g) som är samma som vid ECD- (Electron Capture Detection)-metoden vid gas-vätske-kromatografi. Där- vid möjliggöres vidare analyser av en termiskt icke-stabil förening, och av en substans med en mycket hög koktemperatur, som därför är svår att förånga för införande i en anordning för gas-vätskekromato- grafi, exempelvis en polär förening såsom aminosyror, socker och steroider. g - Fastän denna metod i sig själv är en utmärkt metod för analys har, såsom beskrivits, tidigare, en metod för åstadkomande av kromato- grafiska element, som år tillgängliga för denna metod, hittills van- ligen innefattat manuellt arbete i laboratoriet, som innefattar an- bringande av ett skikt av ett adsorbtionsmedel, såsom kiselgel eller aluminiumoxid, runt en stav som vanligen består av glasmaterial. Det . är emellertid mycket svårt att erhålla ett likformigt och homogent tunn-skikt av adsorbtionsmedlet och tillräcklig reproducerharhet för de experimentella resultaten på gr-undav att envíàdan känslig manipulering ofta fordrar speciell skicklighet hos den som framställer elementet.

Den personliga skickligheten hos operatören påverkar oundvikligen verkan av elementet och därmed noggrannheten för separationen. Dess- utom är sådana tunnskikt av adsorbtionsmedlet mycket spröda och fordrar försiktig hantering.

Dessutom har ett kromatografiskt element som såsom adhesions- medel innehåller en organisk substans såsom stärkelse, polyvinylalko- ' hol eller polyakrylamid, den olägenheten att den inte kan motstå in- tensiv upphettning genom en vätelâga eller en termisk åskådliggörande_ process med ett frätande reagens såsom svavelsyra, salpetersyra el- 10 15 20 25 30 35 HO 3 7211481-2 ler dikromat-svavelsyra som är icke selektiva medel och som vanligen kan användas i ett kromogent förfarande för åskâdliggörande. Det kan nämligen inte detektera ett kromatogram av en färglös substans genom . förkolning av bakgrunden med de frätande reagensen. ' Fastän ett element som använder gips som adhesionsmedel å andra 1 sidan är eldfast och kan motstå den höga temperaturen för vätelågan i É FID-metoden är det uppenbarligen omöjligt att med detta detektera föreningar som bildar ett sulfat eller ett kalciumsalt.

Föreliggande uppfinning avser sålunda ett kromatografiskt element med vilket ovan angivna problem undanröjes i stor utsträckning och vilket är lika lätt _att hantera som vanliga glashjälpmedel och som har utmärkt hållfasthet och kemisk stabilitet. ' Föreliggande uppfinning avser sålunda ett kromatografiskt ele- ment som lätt kan användas för framkallningsförfaranden och som lätt kan anpassas till olika slags instrument. ; Föreliggande uppfinning avser vidare ett kromatografiskt element I med utmärkt beständighet mot den höga temperaturen i en vätelåga och mot regenerering för upprepad användning som innefattar behandling med frätande medel.

Dessa och andra syften med föreliggande uppfinning och åtföljande fördelar är uppenbara för fackmannen genom följande detaljerade be- skrivning av uppfinningen.

Föreliggande uppfinning avser ett kromatografiskt element_ för användning i pelarkromatografi eller stav-tunnskiktskromatografi innefattande ett på ett eldfast och kemiskt stabilt material an- bringat poröst sintrat skikt av finfördelat eller pulverformigt" glas innehållande fina partiklar av ett kromatografiskt aktivt oorganiskt adsorbtionsmedel inneslutet i den porösa strukturen av pulverformigt glas, kännetecknat därav, att det eldfasta och kemiskt stabila materialet'har formen av en tunn stav och att det porösa skiktet kraftigt häftar vid den tunna staven.

Föreliggande kromatografiska element framställes lämpligen genom blandning av finfördelat eller pulverformigt glas med fina partiklar av oorganiskt adsorbtionsmedel, knådning av blandningen med en liten mängd av uppslamningsmedel för erhållande av en upp- slamning, anbringande av denna-uppslamning på en yta av en tunn stav av eldfast och kemiskt-stabilt material och bränning av den belagda tunna staven vid en temperatur ungefär motsvarande den temperatur vid vilken glaset börjar smälta tills glaset blir klib- bigt och partiklarna därav häftar vid varandra, till adsorptions- 10 15 20 25 Bon 35 ÄO i '7211481-2 partiklarna och till den tunna bärarstaven.

Materialet i den tunna staven kan utgöras av glas, kvarts, ke- ramiskt material och metaller och om elementet endast användes i kon- ventionella framkallningsförfaranden kan vilka' som helst glasmaterial och metaller företrädesvis användas såsom stav. När en metall användes, användes företrädesvis en som är kemiskt stabil i så hög grad som möjligt, exempelvis titan, tantal, rostfritt stål eller platina men även aluminium, koppar eller järn kan användas förutsatt att metallen ej angripes av provet som skall framkallas eller av framkallningslös- ningsmedlet. _ Sådana material bearbetas till en tunn stav med en diameter av ca 0,5'5 mm före beläggningsförfarandet. Om diametern är större än l mm kan även en ihålig stav, dvs en rörformig kropp användas. När elementet användes i FID-förfarandet föredrages en tunn stav med dia- metern 0,5-0,8 mm och av speciellt eldfast material såsom kvarts.

Fastän längden för staven ej är signifikant är vanligen en längd av ca 15 cm lämpligt för bekväm hantering.

Det finfördelade eller pulverformiga glaset kan erhållas genom krossning av sodaglas, borosilikatglas, höghaltigt silikatglas, kri- stalliserat glas eller blysilikatglas i en konventionell kulkvarn och genom slamning och siktning av den krossade produkten. Vilken som helst blandning av de krossade produkterna av glasmaterialen kan även användas. Partikelstorleken för det pulverformiga glaset kan variera från ca l-NO Pm, dvs till och med granulat av 325-500 mesh, ungefär samma storlek (ca 1-10 pm) som de adsorberande partiklarna. Dessa ut- väljes så att de adhesiva egenskaperna och partikelstorleken är lämpliga,för avsett användningsändamål. Om elementet utsättas för en låga av hög temperatur i FID-förfarandet är ett pulver av kristalli- serat glas, "Devitroceramics", som är kommersiellt tillgängligt under exempelvis varumärket Heatron (Fuji Photo Film Corporation) och Pyroceram (Corning Glass Works) eller liknande, lämpligt.

Såsom oorganiska adsorptionsmedel kan exempelvis nämnas kisel- A gel, aluminiumoxid, diatomacêjord, magnesinmsilikat, poröst glaspulver och liknande eller en blandning därav. Dessa användes efter granule- ring till partikelstorlekar som är mest användbara för det avsedda syftet. De flesta av de kommersiellt tillgängliga adsorbtionsmedlen för tunnskiktskromatografi kan med fördel användas för uppnående av syftet med uppfinningen förutom exempelvis cellulosa, som har dålig värmebeständighet. I ' Detta finfördelade eller pulverformiga glas blandas vanligen =-f=;h:-:==-':: .. vvvn-n- _... . ..~ .. t " -. .much-vx vnmn- v . -u-.u- -. .n- -. ,_ __ _ ______,_ _ï________ 10 15 20 30 55 H0 7211481-2 med det finfördelade partikelformiga adsorbtionsmedlet i ett vikt- förhâllande av ca lzl-30:l, lämpligen ca 2:1 till lO:l. När förhållan- det av adsorbtionsmedlet till pulverformigt glas är större än l, är binmfingfloeftazn _ för partiklarna som utgör skiktet otillräckliga. Å andra sidan är ett förhållande som är mindre än 1:30 ej lämpligt på grund av att det ger ofullständig utveckling av kromatogrammet.

Typiskt ger en mängd av adsorbtionsmedlet av ca 10-30 viktprocent för hela blandningen fördelaktiga resultat fastän andra förhållanden kan vara användbara för speciella kombinationer av adsorbtionsmedel och utveckling av lösningsmedel.

Fastän det finns en tendens att höja Rf-värdet för tunn-skiktet när det framkallas i samma framkallningslösningsmede1 med större för- hållande av finfördelat eller pulverformigt glas, kan Ef-värdet juste- ras genom sänkning av polariteten för framkallningslösningsmedlet.

Därför kan en förening med hög polaritet, som hittills varit svår att kromatografera, separeras, om en pelare med ett tunnskikq vars aktivitet har justerats för adsorbtionsmedlet användes, genom bestämning av blandningsförhållandet i. överensstämmelse med polari- teten för föreningen som skall detekteras. Detta är en av de överraskan-f de fördelarna med föreliggande uppfinning.

:Föreliggande element framställes genom knådning av bland- ningen av finfördelat eller pulverformigt glas och det finfördelade adsorbtionsmedlet efter tillsats av en ringa mängd uppslamníngs- medel som lämpligen är ett flyktigt lösningsmedel innefattande vatten, bensen, alkoholer, ketoner eller en blandning därav. Med- let tjänar för homogenisering av blandningen och ger uppslamningen en lämplig konsistens och vídhäftande egenskaper gentemot den tunna staven. Den önskvärda egenskapen för medlet är att det bibehåller formen för tunnskiktet ostört till bränningsförfarandet och aceton är speciellt lämpligt för detta syfte.

Andra hjälpbindemedel kan eventuellt sättas till blandningen om de kan avlägsnas fullständigt genom bränning eller förångning och ej ger någon rest efter bränningen. En sådan tillsats kan ge uppslamningen lämplig fasthet, konsistens eller viskositet för beredningsförfarandet.

Exempelvis kan kanadabalsam med starka adhesiva egenskaper lämpligen sättas till blandningen eftersom den uppfyller olika fordringar och eftersom bensen som användes som lösningsmedel därför har god flyk- tighet.

En vattenhaltig lösning av stärkelse kan även användas såsom tillsats men ett sådant organiskt material färgar ibland eller för- i 10 15 20 25 30 35 H0 7211lr81 2 6 kolar det sintrade skiktet på grund av dess förkolning eller dess askrester. På liknande sätt är polyvinylalkohol, polyakrylamid, nitro- eller acetylcellulosa och liknande användbara i vissa fall. När provet som skall kromatograferas ej bildar ett olösligt sulfat eller kalcium- salt, kan gips tillsättas utan någon väsentlig svårighet och i sådana fall kan ett relativt tjockt skikt, upp till ca 2 mm, bildas efter hand. a Emellertid är tillsatsen av sådana hjälpbindemedel ej väsentlig eftersom i själva verket vilket som helst flyktigt lösningsmedel in- klusive vatten kan användas ensamt vid knådningen. När vatten användes är infraröd strålning mycket effektiv för snabb avdunstning av kvar- varande vatten. ' i Den tunna staven doppas sedan i uppslamningen och drages upp omedelbart, varefter den belagda staven torkas och brännes lämpligen i en ren omgivning exempelvis i en elektrisk ugn vid en temperatur som är något högre.än den temperatur varvid det använda glaspulvret börjar smälta-under en period som är tillräcklig för sintring.

Denna temperatur (mjukningspunkt) för glaset varierar naturligt- vis med de fysikaliska egenskaperna för glasmaterialen, som användes, och varierar vanligen från ca 570°C för blysilikatglas till ca 90G°C 'för kristalliserat glas. Tillräcklig tidsperiod för sintring är ca 3-10 minuter. Om temperaturen är för hög smälter hela skiktet och för- störes men om den är för låg bildas inget sintrat skikt. Temperaturen och tiden måste vara lämpligt avpassade så att bränningen är tillräck- ligt genomförd när glaset blir klibbigt och partiklarna därav häftar vid varandra, vid partiklarna i adsorhtionsmedlet och vid den tunna .bärarstaven.

Den brända tunna staven kyles gradvis för avlägsnande av spän- ningar, som orsakats genom upphettningen, bland komponentpartiklarna och-spänning mellan partiklarna och kärnstaven, som orsakas genom _ kylning. Denna gradvisa kylning kan utelämnas när kvarts eller-hög- haltigt silikatglas användes som kärnstav. Oberoende av det faktum/ att det finns approximativt en tiofaldig differens mellan den termiska expansionskoefficienten för glaset och den för adsorbtionsmedlet (exempelvis är expansionskoefficienten för sodaglas ca 9,2 x 10-5, medan den för kiselgel är ca 5,ß x l0'7) bildar partiklarna starka* och inbördes smälta bindningar. Detta fenomen är mycket oväntat och förmodas bero på det faktum att det sintrade skiktet för de fina .partiklarna av glas, som täcker ytan av den tunna staven, har svamp- liknande utrymmen av kontinuerliga håligheter och kanaler och att 10 15 20 25 30 55 72111481-2 de adsorberande partiklarna kvarhâlles i eller omslutes av utrymmena utan att packas ihop tätt.

Detta antagande stödes av svepelektronmikroskopiskt fotografi av det sintrade skiktet i provet varav det framgår att de adsorberande partiklarna omslutes eller hålles kvar under bibehållande av den po- rösa strukturen. Detta bidrager även till det faktum att den kromato- grafiska aktiviteten för adsorbtionsmedlet bíbehålles i tillräcklig grad till och med efter sintring eller bränning. Skulle det sintrade skiktet vara sådant att de adsorberande partiklarna är helt täckta av smält glas skulle förmodligen den väntade aktiviteten för adsorb- tionsmedlet gå förlorad. g Tjockleken av tunnskiktet, som täcker kärnstaven, är i området ca 10-200 pm,~mätt genom en mikrometer eller en tjockleksmätare. Denna ~ tjocklek kan justeras genom förhållandena av inneslutningen av upp- slamningsmedel och hjälpbindemedel i uppslamningen.

Föreliggande uppfinning beskrives närmare i det följande genom utföringsexempel.

Exempel 1-ll. I varje exempel användes kvarts, höghaltigt sili- katglas, borosilikatglas eller rostfritt stål som material för den tunna bärarstaven, som bearbetas till en stav med en diameter av ca 0,5-l mm eller ett rör med en yttre diameter av ca l-U mm och en längd av ca 15 cm. Uppslamningen som användes är en suspension (l:l,M; vikt/volym) av en blandning (l:ü; vikt/vikt) av respektive adsorbtions- medel och fina partiklar av sodaglas (medeldiameter ca l-10 pm) i ace- ton. Denna tunna stav doppas i uppslamningen och drages upp för tork- ning av acetonen genom luftning. Sintringen genomföres i en elektrisk ugn vid 670-680°C under ca 6-7 minuter.

Den sintrade tunna staven som erhålles sålunda kan regenereras efter framkallningsförsöken om inte det adsorberande tunnskiktet har deaktiverats eller förstörts genom upphettning vid hög temperatur med vätelåga i FID-förfarandet. I exemplen genomföras upprepade fram- kallningsförsök för bekräftande av reproducerbarheten för separationen med samma stav med azofärger, estrogener, lipider och alkaloider.

Som resultat av experimentet iakttages att standardavvflælsen (d) för hRf (hundradelen av Rf) ligger inom området hñf-värdet'i 4.

I tabell I i det följande sammanfattas använda betingelser och metoder.

'Tftšli fiiinwílffu:e;f§ï:!=-àï¥=f'=avf=':um- 7211481-2 Enea Ehom lohøfiz |onoHx « aaEonx«Umn»mHw> _ Enouonoflx M mcwnxcwnn ußëobxwumnhm w mcwc w:w::«>mwvw wcwcxcmhø |m>m M wcwnxcwhm nHw>m>w M wflfifixcmhø lxflwhn hah Uoumä wcwwæøn 1=owcm umëouxfiv nuhoucmw ocox hva |mn>mfim> :Oman Lama nmfi :Hm Nwcm |N>w maa ocoz nwH_ Hfiu nam mwcw :wow uoä :Hm mwcw Iam mmnw Adm Gowaxøumu |=wN> ¿@ow uwe w=N= HH«=mN> :wow vws :wow uns |=m«> »nu uo»@= mcficwæmm. amnmm wcficwhmm wcwcwnmm Eu Q md mfi =N NN mN ma mfi QN :H NH ON |mW wwuøwwwm A _« |::wEv cwa Afiuæuwnv Afinonuoæfiv :Nea mnzm lfimßwfiw AHMNV |«N»»N ANNNV w=~= ñnou amwwom øwnoflx nwum umuwom flmouë | . comcæfl aohoflx nfiæum nwnoou :wmcum ufiæuwfin nfiæuw cmmcmm amwcwc |%wmx .cwmcom .Gmmcwm nfloz cmxmsnc ncmmcøm lmøa 3 Am Am Am Am Am nmämnmmwn H fiwwnmw nmufioa nmcmw Aæ AN nmcmw nmwumu flfldxm Eon |on< umxfl< lonumm HH nwwuwuoN< Am H nmwnwuou< nmøwmwq nohumm Ions nwmcauwnsm N N N ._ q , N N .t N N q m= Q 0 N m mA N o ø N NN 0 N N m N N 0 o.= N 0 nuvwswwu Hwpm »Nam N An »NN >N»æ vafimu suæxwfiwm A: mmfiwamx uamxfifiwm cc: uamoæ wuam>& uonom w»um>a nwfiwmonom awfivflmnwnm mv§m>x Hmfinøawa B om wofi cha ow maa ma omfi owfl om mw om Ii .umuxflxmsczu w .N mmm gøflxuow Hmm øwxosswc Hw øwxossw: A Hwfløfi lflwmfix |Ne=H< 1H@n«=.N -«e=N< AH Hmwfiwmfix |m=oN»n»om@< NN OH N N N w _ W _ N _ n _ N H nfluqewxm mcficflflmxëmnu nfi> zoo .wcfihmmmcmwwh :oo cowsxwuwv hmu.mU:mnmuawu »vu :oo nm>uum mums» muænvcwm >m wcwcfiflwumsmhu o«> uwmfluwnfiamm H flaønmà 10 15* 1) 2) 3) U) 5) 6) 7) 8) 9) 9 7211l+81~2 Kiselge1:'Merck, “Silica Gel H" Aluminíumoxídz Merck, “Aluminium Oxid neutral (Type T)" Höghaltigt siükatglas: Corning Glass Works, Vycor Borosílikatglas: Corning Glass Works, Pyrex R Azofärger I: En blandning av "Indofenol" (IP), "Sudan red G" (SRG) och “Butter yellow" (BY).

Estrogener: En blandning av estriol (E3), estradiol (E2) och estron (El).

Lipider: En blandning av palmítinsyra (P), metyloleat (M0), och kelesterylstearat (CS).

Azofärger II: En blandning av paraaminobensen (PAB), yellow" (SY) och azobensen (AB).

Alkaloider: en blandning av kínin (Q), burucin (B) och tebain (T).

"Sudan Resultat från upprepade framkallníngsförsök (n=5) uttryckta som hfif På Varje Sínfirad bunnstav som framställts enligt de angivna me- toderna sammanfattas i tabell 2-12 nedan, vari i är medelvärdet av naf: ' .

Tabell 2: exempel 1 Tabell 3: exempel 2 n IP SRG BY n E3 E2 El 1. 16 30 61 1 15 59 72 2 16 34 65 2 15 61 72 3 16 32 6h 3 15 60 72 4 16 33 65 U 15 60 72 5 16 32 63 5 15 60 72 _ ä 16 32 614 ä 15 60 72 § 0 1,5 1,7 ' d 0 0,8 0 Tabell N: exempel 3 Tabell 5: exempel H n P MO CS n IP SRG BY 1 26 YR 89 1 22 32 59) 2 23 73 85 2 20 30 57 3 22 70 86 3 21 35 61 M 21 73 85 U 23 BU 62 5 23 72 811 5 .25 36 62 ä 250 72 86 ä 22 33 _60 Ü 1,9 1,6 O' 1,9 2,5 7211481-2 .19 Tabell 6: exempel 5 Tabell 7: exempel 6 n IP ' SEG BY n IP SRG BY 1 15 26 57 l 15 23 53 2 16 28 55 2 15 30 55 5 15 30= 56 3 15 50 56 N 15 30 56 H 15 28 55 5 l5 30 . 57 5 16 30 56 § 15 29 56 § f 15 28 55 ¿ 0,5 1,8 0,9 5- 1,0 1,1 2,3 Tabelltß: exempel 7 Tabell 9: exempel 8 _ n PAB SY AB n PAB SY AB 1 20 61 90 1 32 51 83 2 20 62 91 2 55 63 85 _ 3 21 62 90 3 35 70 85 H 21 62 91 H 35 65 88 s 'ao eo as s 31 p asp 89 š 21 61 590 ä 35 65 86 6 0,9 1,0 1,2 O» 1,9 3,3 2,1 _ 'Tabell 10: exempel 9 1 Tabell ll: exempel 10 ln t E3 EZ El n Q B 5 T 1 17 61 78 1 37 53 TU , 2 V17 68 79 2 U0 55 72 3 17 67 78 3 M0 55 78 H 15 6R 75 U 35 H8 69 5 15 64 77 5 40 52 78 i 16 655 ' 77 i 38 ss 11: 1,1 2,8 _1,6 _ ¿ 2,3 2,9 .u,o Tabell 12: exeàpel ll n IP SEG BY 1 15 31 52 2 2 15 31 50 5 16 31 So U 18 31 50 5 16 30 51 5 18 31 51 2.0 1,7 1,0 NI 7211481-2 >.\ p; Jämförande framställning En uppslamning innefattande samma kiselgeladsorbtionsmedel som i ovanstående exempel anbringas på en kvartsplatta (5 x 20 cm, tjock- lek 1 mm) och brännes i en elektrisk ugn vid 670-680°C under ca 3-4 minuter efter det att det torkat varvid man erhåller en sintrad platta.

Denna platta användes för framkallningsförsök av Azo-färgblandningen i exempel 1, N, 5, 6 och ll och för estrogenblandningen i exempel 2 och 9 på konventionellt sätt.

Resultaten av utvecklingsförsöken är följande: hRf-värden för Azofärger I hñf-värden för estrogener n IP SRG BY n E5 E2 El 1 lä 31 60 1 lä 63 7k 2 16 31 60 2 13 6ü 76 3 15 33 61 3' 13 65 76 H 16 33 62 U lä 63 72 5 16 32 62 5 15 63 7h i 16 32 61 i 111 614 vu 5 1,0 1,0 1,0 ¿ 0,9 1,0 1,7 Lösningsmedel: Bensen; bensen - etylacetat (2:l) Tid (10 cm): 16 min; 16 min Detektion: Visuell: färgning med konc svavelsyra.

Resultaten jämföras med de för exempel l och 2: x 16 32 61: i 15 60 72 a, o 1,5 1,7 O. _ o -o,8 o På detta sätt styrkas existensen av ett starkt samband mellan Rf-värdena eftersom Ef-värdena för varje framkallad substans enligt stav-tunnskiktskromatografi i exemplen är ungefär samma som för platt- -tunnskümskromatografi för den jämförande beredningen.

Exempel 12.

A. Framställning av sintrade pelare: Kromatografiska pelare av kiselgeladsorbtionsmedel framställes på väsentligen analogt sätt med tidigare beskrivna exempel. I detta exempel användes emellertid kvartsstavar av ca 0,3-0,9-mm diameter och ca 15-cm längd och ett fint pulver av kristalliserat glas, som kan erhållas från Fuji Photo Film Corporation under varumärket Heatron R P.

Blandningsförhållandet av adsorbtionsmedlet (Merck: "Silica Gel- H") till det pulverformiga glaset är ca lzü (adsorbtionsmedel 25 5, 7"211l|81-2 42 vikt/vikt) och blandningen suspenderas i aceton för erhållande av en uppslamning (l:l,6; vikt/volym). Tjockleken för det sintrade skiktet mätt efter bränning av den belagda pelaren vid ca 90000 under ca 10 minuter, är ca 100 pm.

B. Stigande framkallning av en standardlipid: l) Standardlipidblandning: Fritt kolesterol (F C) 5 pg/pl) _ w f» " " "ä :fsfizëzsï Kolesterolester (C E) " " ") (2:3) 2) framkallnings lösningsme del: Hexan-etyleter-ättiksyra (l80:30:l) 3) Distans: 10 cm U) Tid: 20 minuter 5) Resultat av upprepad framkallning (n=5) hRf F C T G C E ä 3ø 71 8u a' i 2 .t 3 i 3 C. Kvantitativ bestämning genom TLC-FID-metoden: 1) Använd anordning: Iatron "syncnrograpn Tre-10" (Én väteflamjoniseringsautodetektor, från Iatron Laboratories, plnc., Tokyo) 2) Metod: I överensstämmelse med metod B (ovan) erhålles kromatogram på pelarna med varierande mängder av det fläckvis applicerade provet.

De bearbetas med "Synchrograph"-apparaten upprepade gånger för er- hållande av en kalibreringskurva som indikerar ett samband mellan mängden av prov som pâförts fläckvis och toppytan av "Synchrogram“- diagrammet.

Minimal mängd av provet som kan upptäckas med denna kalibrerings- kurva är ca 2-3 pg för varje prov (FC, TG och CE).

Felet i värdet som bestämmes enligt denna metod är ca 1 5 5 (variationskoeffieienten). _ _ 2 Ovan beskriven utföringsform är endast belysande för uppfin- ' ningen och modifikationer och variationer av denna är uppenbara. ._ -...». .J

Claims (3)

1. 7211481-2 Patentkrav 1,1. Kromatografiskt element för användning i pelarkromatografi I eller stav-tunnskiktskromatografi innefattande ett på ett eldfast och kemiskt stabilt material anbringat poröst sintrat skikt av fin- fördelat eller pulverformigt glas innehållande fina partiklar av ett kromatografiskt aktivt oorganiskt adsorbtionsmedel inneslutet i den porösa strukturen av pulverformigt glas, k ä n n e t e c k n a t därav, att det eldfasta och kemiskt stabila materialet har formen av en tunn stav ooh att det porösa skiktet kraftigt häftar vid den tunna staven. _

2. Kromatografiskt element enligt\krav 1, k ä n n e t e c k - n a t därav, att det finfördelade eller pulverformiga glaset ut- göres av soda-glas, borosilikatglas, blysilikatglas, höghaltígt sili- katglas, kristalliserat glas eller en blandning därav.

3. Kromatografiskt element enligt krav 1, k ä n n e t e c k - n a t därav, att adsorbtionsmedlet utgöres av kiselgel, aluminium- oxid, diatomacéjord, magnesiumsilikat, poröst glaspulver eller en blandning därav.. g U. Kromatografiskt element enligt krav 1, k ä n n e t e c k - n att därav, att den tunna staven av eldfast_och kemiskt stabilt material är en stav eller rörformig kropp av kvarts, höghaltigt sili- katglas, borosilikatglas, titan, tantal, rostfritt stål, platina, aluminium, koppar, järn eller keramiska material. - ANFÖRDA PUBLIKATIONER: Sverige patentansökan 1 799/71 1 ' Storbritannien 1 279 710 US 3 418 152 (23-230) Andra pubtíkationer: Journal of chromatography. 37(1968), p. 120-121.