[go: up one dir, main page]

SA517390029B1 - طريقة لإنتاج غونادوتروفين - Google Patents

طريقة لإنتاج غونادوتروفين Download PDF

Info

Publication number
SA517390029B1
SA517390029B1 SA517390029A SA517390029A SA517390029B1 SA 517390029 B1 SA517390029 B1 SA 517390029B1 SA 517390029 A SA517390029 A SA 517390029A SA 517390029 A SA517390029 A SA 517390029A SA 517390029 B1 SA517390029 B1 SA 517390029B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
sequence
hcg
alpha
cell
sialic acid
Prior art date
Application number
SA517390029A
Other languages
English (en)
Inventor
جرينهوت ايليت
بلاكسين دانيل
Original Assignee
.فيرينج بي. في
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by .فيرينج بي. في filed Critical .فيرينج بي. في
Publication of SA517390029B1 publication Critical patent/SA517390029B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1081—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
    • C12Y204/99004—Beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase (2.4.99.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الراهن بخلية مضيفة host cellcell تتسم باشتمالها، مدمجًا بالجينوم genome الخاص بها، على متوالية تشفر سلسلة sequence coding لـ hCG منتقاة من: متوالية وفقا لمتوالية برقم تعريفي: 1، متوالية بنسبة تجانس homology 96.5% على الأقل مع متوالية لها رقم تعريفي : 1، متوالية بنسبة تجانس 97 % على الأقل مع متوالية لها رقم تعريفي: 1، متوالية وفقا لـمتوالية برقم تعريفي 4، متوالية بنسبة تجانس 96.5% على الأقل مع المتوالية برقم تعريفي: 4، ومتوالية بنسبة تجانس 97% على الأقل مع متوالية لها رقم تعريفي: 4، وطريقة للحصول على hCG في خلية cell. شكل 7 .

Description

طريقة لإنتاج غونادوتروفين ‎Method of Production of Gonadotrophin‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالي بهرمونات غونادوتروفين (موجهات الغدد التناسلية) للاستخدام في معالجة العقم. على ‎dag‏ التحديد؛ يتعلق الاختراع بغونادوتروفين مشيمي بشري ‎human chorionic‏ ‎.(hCG) gonadotrophin‏ الغونادوتروفينات ‎Ble‏ عن مجموعة من الهرمونات البروتينية السكرية متغايرة الدايمر تنظم وظيفة الغدد التناسلية فى الذكور والإناث. إنها تتضمن الهرمون المنبه للجُريب ‎follicle stimulating‏ ‎(FSH) hormone‏ والهرمون الملوتن (المكون للجسم الأصفر) ‎(LH) luteinising hormone‏ والغونادوتروفين المشيمي ‎.(CG) chorionic gonadotrophin‏ يُفرز الغونادوتروفين المشيمي البشري ‎(hCG) Human chorionic gonadotrophin‏ بصورة 0 أساسية بواسطة المشيمة البشربة أثناء الحمل ويدعم الحفاظ على الجسم الأصفر. يشتمل الغونادوتروفين المشيمي البشري (706) على وحدة فرعية ألفا تتكون من 92 حمض أميني (سلسلة ألفا ‎(a‏ موجودة أيضاً في الهرمونات البروتينية السكرية الأخرى ‎FSH 3 LH‏ ووحدة فرعية بيتا تتكون من 145 حمض أميني (سلسلة بيتا 8) ينفرد بها الهرمون 106 وتفرض نوعية الهرمون. تُعدل كل وحدة فرعية بعد الترجمة من خلال إضافة بقايا كربوهيدرات معقدة. تحتوي 5 الوحدة الفرعية ‎Wl‏ على موقعين ارتباط بالغليكوزيل من جهة النيتروجين عند الأحماض الأمينية 52 5 78 وتحتوي الوحدة الفرعية بيتا على موقعين ارتباط بالغليكوزيل من جهة النيتروجين عند الأحماض الأمينية 13 و30 وأربعة مواقع ارتباط بالغليكوزيل من جهة الأكسجين عند الأحماض الأمينية 1 3 و136. يتم استخدام الغونادوتروفين المشيمي البشري ‎(WCB)‏ المستخلص من بول ‎shall‏ الحامل (كوراجون 0 فيرينج)) منذ عدة سنوات لمعالجة العقم. يتضمن إنتاج هرمون 706 المستخلص من البول
تجميع ومعالجة كميات كبيرة من البول. (أوفيتريل (سيرونو))؛ عبارة عن نسخة مؤتلفة (معاودة الارتباط الجيني) من هرمون ‎hCG‏ متوفرة أيضاً للاستخدام في معالجة العقم. يتم التعبير عن هذا المنتج المؤتلف في ‎WA‏ مبيض حيوان هامستر صيني ‎Chinese hamster ovary‏ (0110) ويملك نمط حرائك دوائية مختلف عن هرمون 7065 الذي يتم إنتاجه من البول البشري.
توجد تغايرية كبيرة مرتبطة بتحضيرات هرمون ‎hCG‏ تتعلق بالاختلافات في مقادير الأشكال الإسوية المتنوعة الموجودة. الأشكال الإسوية لهرمون ‎NCG‏ المفرد تظهر تسلسلات أحماض أمينية متماثلة ولكنها تختلف في مدى تعديلها بعد الترجمة؛ تتسم أشكال إسوية معينة بتغايرية تركيبات فرع الكربوهيدرات ومقادير مختلفة من دمج حمض السياليك (سكر طرفي)؛ ‎gang‏ أن كليهما يؤثران على النشاط الحيوي للشكل الإسوي النوعي.
0 إن ارتباط منتجات هرمون 7006 المؤتلف ("006" ‎(recombinant hCG‏ بالغليكوزيل يعكس نطاق إنزيمات ترانسفيراز - الغليكوزيل الموجودة في الخط الخلوي للخلية المضيفة. منتج هرمون 6 المؤتلف "106 الموجود؛ أوفيتريل» ‎Gide‏ من ‎WA‏ مبيض حيوان هامستر صيني معدلة وراثيا (خلايا 0110). نطاق تعديلات الغليكان في الغونادوتروفين المشيمي البشري المؤتلف ‎(rhCG) glycosylation of recombinant‏ المشتق من ‎WIA‏ مبيض حيوان هامستر صيني
5 0000 محدود أكثر من تلك الموجودة في المنتجات الطبيعية المشتقة من البول. تتضمن الأمثلة على تغايرية الغليكان المختزلة الموجودة في الغونادوتروفين المشيمي البشري المؤتلف (1166) المشتق من خلايا مبيض حيوان هامستر صيني 0110 عوز الغلوكوزامين المتفرع وانخفاض محتوى إضافة سكر الفوكوز الأساسي وامتدادات أسيتيل لاكتوز أمين. بالإضافة إلى ذلك؛ خلايا مبيض حيوان الهامستر الصيني ‎CHO‏ قادرة فقط على إضافة حمض السياليك باستخدام الارتباط
‎(Kagawa et al, 1988, Takeuchi et al, 1988, Svensson et al., 3 2 wi 20‏ )1990 هرمون الغونادوتروفين المشيمي البشري ‎(hCG) glycosylation of recombinant‏ البولي (أي؛ هرمون ‎hCG‏ المستخلص من بول المرأة الحامل) والذي تم استخدامه حتى الآن في معالجة العقم هوء في الواقع؛ عبارة عن هرمون ‎hCG‏ مشيمي؛ هرمون ‎hCG‏ المنتج في المشيمة
‏5 (لبشرية) وتم إخراجه بعد ذلك في البول. يتم استخلاص هرمون ‎MCG‏ هذا من البول ليتم
استخدامه باعتباره منتج صيدلاني. ينص المرجع وفقا لبوسفيلد وآخرين ‎(Rev Endocr Metab‏ ‎Disord (2011) 12:289-302(‏ على ما يلي "بينما تملك الغونادوتروفينات النخامية كلا نوعي حمض السياليك المرتبط عند ألفا 2 3 وحمض السياليك المرتبط عند ألفا 2 6» إلا أن هرمون © المشيمي والغونادوتروفينات المؤتلفة المنتجة في الخلايا المبيضية لحيوان هامستر صيني تملك فقط حمض السياليك المرتبط عند ألفا 2 3". وبالتالي» هرمون ‎hCG‏ البولي البشري (والذي يتم إنتاجه في المشيمة) يتضمن فقط ارتباط مجموعة حمض سياليك عند الموقع ألفا 2؛ 3 (مثل المنتجات المؤتلفة المشتقة من خط خلية حيوان هامستر صيني). وبالتالي؛ التركيبات الصيدلانية المعروفة التي تتضمن هرمون ‎hCG‏ تتضمن فقط حمض السياليك المرتبط عند ألفا 2؛ 3؛ ولكنها لا تتضمن حمض السياليك المرتبط عند ألفا 2 6.
0 "تم توضيح أن تحضير الهرمون المنبه للججريب ‎FSH‏ المؤتلف (أورجانون) يختلف في مقادير هرمون ‎FSH‏ مع نقطة تساوي الكهربية أقل من 4 (مع الأخذ في الاعتبار الأشكال الإسوية الحمضية) عندما تتم مقارنته مع هرمون ‎FSH‏ النخامي؛ أو هرمون 511 في مصل الدم أو هرمون ‎FSH‏ البولي بعد انقطاع الحيض )1995 ‎(Ulloa-Aguirre et al.‏ كان مقدار الأشكال الإسوية الحمضية في التحضيرات البولية من هرمون 7511 أكثر بكثير مقارنة مع المنتجات
5 المؤتتفة ‎(Serono‏ 6008-1 وى )2004 ‎Puregon (Organon) (Andersen et al.‏ . يجب أن يعكس ذلك محتوى مولي من حمض السياليك أقل في الهرمون المنبه للجُريب المؤتلف ‎FSH‏ ‏نظراً لأن محتوى الغليكان سالب الشحنة المعدل بالكبريتات قليل في هرمون ‎FSH‏ إن محتوى حمض السياليك الأقل؛ مقارنة مع هرمون ‎FSH‏ الطبيعي؛ هو سمة لكلا منتجي هرمون ‎FSH‏ ‏المتوفرين تجارياً ولذلك يجب أن يعكس تقييدا في عملية التصنيع 800 ‎(Bassett‏
‎.Driebergen, 2005) 0‏ تم توثيق متوسط العمر الدوراني لهرمون ‎FSH‏ لمواد من مجموعة متنوعة من المصادر. تمت تجزئة بعض من هذه المواد على أساس الشحنة الجزيئية الكلية؛ كما وصفت بواسطة نقطة تساوي الكهربية الخاصة بهاء والتي بها المزيد من الحمض يعادل شحنة سالبة أعلى. المساهم الرئيسي في الشحنة السالبة الكلية هو المحتوى الكلي للسياليك لكل جزيء ‎FSH‏ على سبيل المثال» ‎IFSH‏ (أورجانون) به محتوى حمض سياليك حوالي 8 مول/ مول؛
‏5 بينما ‎FSH‏ المشتق من البول به محتوىي حمض سياليك أعلى )1996 ‎.(de Leeuw et al.‏
معدلات تصفية البلازما المقابلة في الجرذ هي 0.34 و0.14 ‎[Je‏ دقيقة ‎(Ulloa—Aguirre et‏ )2003 .81. في مثال آخر حيث تم شطر عينة من الهرمون المنبه للجُريب المؤتلف 511 إلى أجزاء ‎Lille‏ نقطة تساوي الكهربية وأجزاء منخفضة نقطة تساوي الكهربية؛ انخفضت فاعلية ‎gral)‏ ‎Je‏ نقطة تساوي الكهربية في الخلية الحية (محتوى حمض سياليك أقل) وكانت ذات ‎jee‏ نصف أقصر في البلازما )1999 ‎et al.‏ 078010010). اكتشف مقدمو الطلب أن؛ مثلما في حالة ‎(FSH‏ منتج الغونادوتروفين المشيمي البشري ‎(WCG)‏ المؤتلف المعروف المشتق من خلايا مبيض هامستر صيني (على سبيل المثال أوفيتريل) أيضاً به مقدار أقل من ‎hCG‏ مع نقطة تساوي الكهربية أقل من 4 (مع الأخذ في الاعتبار الأشكال الإسوية الحمضية) عن هرمون ‎hCG‏ ‏البولي؛ مما يعكس أيضاً محتوى حمض سياليك أقل من منتج ‎TCG‏ المعروف مقارنةً مع ‎hCG‏ ‏0 البولي. طور مقدمو الطلب 106 مؤتلف مشتق من الإنسان (أي أنه ‎hCG‏ مؤتلف يتم إنتاجه أو التعبير عنه في خط خلية بشرية؛ على سبيل المثال مصنوع عن طريق هندسة خط خلية بشرية) والذي له شاكلة حمضية أكثر من منتج ‎ThCG‏ المشتق من خط خلية مبيض هامستر صيني؛ أوفيتريل؛ والذي به محتوى حمض سياليك أعلى. هذا الهرمون المؤتلف 106 هو موضوع تطبيق براءة 5 الاختراع الدولية رقم 2010/001854 المنشورة باعتبارها 2011/042688. تم تصنيع ‎hCG‏ ‏مؤتلف مع خليط من كلا نوعي حمض سياليك مرتبط عند ‎Ul‏ 2 3 وحمض سياليك مرتبط عند ‎Wl‏ 2 6 عن طريق التعديل الوراثي لخط خلية بشرية للتعبير عن كلا ‎thCG‏ وترانسيفراز ألفا 2؛ 3 سياليل. المنتج المعبر ‎Jo die‏ الحمضية؛ وبه محتوى حمض سياليك (معبر ‎die‏ من حيث نسبة مولات حمض السياليك إلى مولات البروتين) على سبيل المثال 19.1 مول/ ‎edge‏ ويحمل 0 خليط من كلا نوعي حمض السياليك المرتبط عند ألفا 2 3 وحمض السياليك المرتبط عند ألفا 2؛ 46 الأخير مقدم بواسطة نشاط إنزيم ترانسفيراز سياليل داخلي المنشاً. يشير بحث مقدمي الطلب إلى أن نوع ارتباط حمض السياليك ‎ll‏ 2؛ 3 أو ألفا 2؛ 6 يمكن أن يكون ذو تأثير كبير على التصفية الحيوية لهرمون 065. خطوط الخلية البشرية على عكس خطوط خلية مبيض حيوان الهامستر الصيني؛ يمكن أن تعبر عن ‎hCG‏ مؤتلف ذو أحماض سياليك مرتبطة عن طريق كلا 5 الارتباطين ألفا 2» 3 وألفا 2 6.
خط الخلية وفقاً لبراءة الاختراع الدولية 2011/042688 يعبر عن ‎hCG‏ المؤتلف المشتق من الإنسان بشكل جيد. ومع ذلك؛ يعبر خط الخلية أيضاً عن مستوى عالي نسبياً من سلسلة بيتا الحرة (وحدة فرعية بيتا حرة)» وبلزم التنقية (لإزالة هذه السلسلة الحرة بيتا من ‎hCG‏ الناتج). طور مقدمو الطلب حالياً خط خلية جديد يعبر عن كلا ‎hCG‏ وترانسيفراز ألفا 2؛ 3 سياليل» والذي ينتج 7066 ذو مقدار مخفض من سلسلة بيتا الحرة؛ وبالتالي يحسن الحاصل ويقلل مستوى التنقية اللازم للمنتج (انظر الشكل 7). الوصف العام للاختراع وفقاً للاختراع الحالي تم تقديم خلية (مثلاً مضيفة) تتسم بأنها تشتمل على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎NCC‏ يتم اختياره من: تسلسل 0 وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 ‎Ae)‏ سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Jil‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق 5 تسلسل ‎(pe‏ تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تماثل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل ‎(Jal)‏ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jia)‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ يفضل أن يكون تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ‏ليس عبارة عن التسلسل المودع تحت الرقم 811007338 (أي أن يفضل أن يكون تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ليس ذلك الموضح في تعريف التسلسل رقم: 5). يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على حمض نووي ‎(Sion)‏ منقوص الأكسجين 5 تتكميلي ‎cDNA‏ مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لترانسفيراز ألفا 2؛ 3 سياليل؛ على سبيل
المثال تسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 3. يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة بيتا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ على سبيل المثال التسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 2. يمكن أن تكون الخلية المضيفة عبارة عن على سبيل المثال خلية ‎(PER.CO®‏ خلية 411080 خلية 61-55؛ وما إلى ذلك. يفضل أن تكون الخلية عبارة عن خلية ‎PER.CO®‏ مثل خلية ‎PER.CO®‏ المودعة لدى المجموعة الأوروبية للمستنبتات الخلوية ‎ECACC dd gull‏ تحت الرقم 96022940. وفقاً للاختراع الحالي؛ تم تقديم خلية ‎PER.CO®‏ مثل خلية ‎PER.CO®‏ المودعة لدى ‎de gana)‏ الأوروبية للمستنبتات الخلوية ‎ECACC 4 gall‏ تحت الرقم 96022940؛ تتسم بأنها تشتمل أيضاً 0 على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة ألفا الخاصة بهرمون 6 يمكن اختيار تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ مما يلي: تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو 5 على الأقل 799 ‎Bil‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل ‎(Jal‏ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 0 مع (على سبيل ‎(Jal‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎(pe Jil‏ تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4). يفضل أن يكون تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ليس ‎Ble‏ عن التسلسل المودع تحت الرقم 811007338. يمكن أن تشتمل الخلية ‎Lad‏ على حمض نووي 5 رببوزي منقوص الأكسجين تكميلي ‎CONA‏ مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لترانسفيراز ألفا 2؛
3 سياليل» على سبيل المثال تسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 3. يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة بيتا الخاصة بهرمون 06 ؛؛ على سبيل المثال التسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 2. سوف يتم تقدير أن المصطلح 'تسلسل يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون 106" أو 'تسلسل (حمض نووي) يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎"HCG‏ المستخدم هنا يشير أيضاً إلى تسلسل يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بالهرمون 511" (أو تسلسل يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بالهرمون ‎(LH‏ ‎oY‏ سلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ هي نفس السلسلة الموجودة في ‎(LH 5) FSH‏ يتعلق المصطلح 'تسلسل حمض نووي" هنا بأي جزيء حمض نووي يرمز لبولي ببتيدات ‎ie‏ ‏بيبتيدات؛ بروتينات وما إلى ذلك. يمكن أن تكون هذه الجزيئات الخاصة بالحمض النووي مؤلفة 0 من حمض نووي رببوزي منقوص الأكسجين ‎(DNA‏ أو حمض نووي رببوزي ‎RNA‏ أو متناظرات منها. ومع ذلك؛ تفضل جزيئات الحمض النووي المؤلفة من حمض نووي رببوزي منقوص الأكسجين ‎DNA‏ ‏من الواضح أن صاحب الخبرة في الفن على دراية بأن تعديل تسلسل النيوكلوتيد البادئ يصف عملية التحسين فيما يخص استخدام الرامزة (الكودون). يمكن التعرف بسهولة على التغيرات التي تم 5 إجرائها عن طريق مقارنة التسلسل المعدل والتسلسل البادئ. علاوة على ذلك؛ كلا التسلسلين (أي التسلسل البادئ والتسلسل المحسن) سوف يرمزان لنفس تسلسل الحمض الأميني. تسلسل الحمض الأميني لسلسلة ألفا في هرمون ‎hCG‏ البشري مفصح عنه في التطبيق الدولي 8 المشار إليه بتعريف التسلسل 1 ‎SEQ ١01‏ في هذه الوثيقة)؛ وهو موصوف في 1979 ‎and Goodman‏ 510065. إنه مودع تحت رقم 011007388 وموضح أدناه على 0 أنه تعريف التسلسل رقم 5. تسلسل الحمض الأميني لسلسلة بيتا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ البشري موصوف في تعريف التسلسل رقم 2 ومودع باعتباره 0_000728ل. تسلسلات الأحماض الأمينية هذه تقابل تسلسلات الحمض الأميني بري النمط الخاص بسلسلة ألفا وبيتا لهرمون ‎hCG‏ ‏البشري. المصطلحات 'تسلسل حمض نووي بري ‎hall‏ أو 'تسلسل حمض نووي ‎"eal‏ لأغراض الاختراع الحالي تتعلق بتسلسل حمض نووي يُنوى استخدامه للتعبير (فرط التعبير) في خلية مضيفة
ولم تتم تهيئته لاستخدام الرامزة في الخلية المضيفة؛ ولكنه التسلسل الفعلي للحمض النووي بري النمط الذي يرمز للبروتين. العبارة 'تسلسل حمض نووي محسن" لأغراض الاختراع الحالي يتعلق بتسلسل تم تعديله للتعبير في خلية مضيفة عن طريق تهيئة تسلسل الحمض النووي البادئ/ غير المعدل. يرمز تسلسل الحمض النووي المحسن لبروتين له نفس تسلسل الحمض الأميني مثل
البروتين الذي يتم الترميز له بواسطة التسلسل غير المعدل. طور مقدمو الطلب تسلسلات محسنة ترمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ (انظر على سبيل المثال تعريف التسلسل رقم 1 و4 والشكل1). وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم تسلسل عديد النيوكليوتيد (مثلاً تسلسل عديد النيوكليوتيد يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎(NCC‏ يشتمل على تسلسل يتم اختياره من تسلسل
0 حمض نووي وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل حمض نووي وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل حمض نووي ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jad)‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Silas‏ مع) الحمض النووي لتعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل حمض نووي ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jd)‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل ‎(pe‏ الحمض النووي لتعريف التسلسل رقم: 1؛ وتسلسل حمض نووي ذو
5 تماثل على الأقل 797 مع ‎leo)‏ سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تمائل مع) الحمض النووي لتعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل حمض نووي ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) الحمض النووي لتعريف التسلسل رقم: 4). وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم طريقة لإنتاج هرمون ‎hCG‏ مؤتلف في خلية؛
0 يشتمل على زراعة الخلية في وسط مناسب وحصاد البروتين المؤتلف ‎(NCB)‏ من الخلية المذكورة و/ أو الوسط المذكور (مثلاً حصاد ‎NCG‏ المؤتلف من الجزءِ الطافي من مزرعة ‎Cun (Aa‏ تشتمل الخلية (الخلية المضيفة) على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسلة ‎all‏ الخاصة بهرمون 706 يتم اختياره من: تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو ‎ils‏ على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو
5 تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل ذو ‎Bla‏ على الأقل
7 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تمائل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل ‎(pe‏ تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف
التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jia‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Jil‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4).
0 يفضل أن يكون تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ليس عبارة عن التسلسل المودع تحت الرقم 811007338. يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين تكميلي ‎CDNA‏ مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لترانسفيراز ‎Wl‏ 2؛ 3 سياليل؛ على سبيل المثال تسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 3. يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة بيتا الخاصة بهرمون
‎hCG 5‏ على سبيل المثال التسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 2. يمكن أن تتضمن الطريقة خطوة أو خطوات أخرى لتنقية ‎hCG‏ المؤتلف الذي تم الحصول عليه من الخلية المذكورة و/ أو الوسط المذكور (مثلاً تنقية 1706 المؤتلف من الجزء الطافي من مزرعة الخلية). ‎(Sa‏ أن تكون الخلية (المضيفة) عبارة عن؛ على سبيل المثال» خلية ‎PER.CO®‏ خلية 0 + خلية 61-55؛ وما إلى ذلك. يفضل أن تكون الخلية عبارة عن خلية ‎PER.CO®‏
‏0 مثل خلية ‎PER.CO®‏ المودعة لدى المجموعة الأوروبية للمستنبتات الخلوية الموثئقة ‎ECACC‏ ‏تحت الرقم 96022940. وفقاً للاختراع الحالي في جانب ‎«AT‏ تم تقديم طريقة لإنتاج ‎hCG‏ مؤتلف في خلية؛ تشتمل على زراعة الخلية في وسط مناسب وحصاد البروتين المؤتلف ‎(hCG)‏ من الخلية المذكورة و/ أو الوسط المذكور (مثلاً حصاد ‎HCG‏ المؤتلف من الجزء الطافي من مزرعة الخلية)؛ حيث تكون الخلية
‏5 عبارة عن خلية ‎PER.CO®‏ (مثل خلية ‎PER.CO®‏ المودعة لدى المجموعة الأوروبية
للمستنبتات الخلوية الموثقة ‎ECACC‏ تحت الرقم 96022940( تشتمل على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ يمكن اختيار تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ مما يلي: تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل ‎(JB)‏ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم:
1)؛ تسلسل ذو ‎ila‏ على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jal‏ على الأقل 798 أو على الأقل 9 تماثل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎«Jal‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على
0 الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 790 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو ‎Bla‏ على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Jil‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎(Jha‏ على الأقل 8 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4). يفضل أن يكون
5 تسلسل (الحمض النووي) الذي يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ليس عبارة عن التسلسل المودع تحت الرقم 811007338. يمكن أن تشتمل الخلية ‎Lad‏ على حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين تكميلي ‎CDNA‏ مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل» على سبيل المثال تسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 3. يمكن أن تشتمل الخلية أيضاً على تسلسل (حمض نووي) مدمج في الجينوم الخاص بها يرمز لسلسة بيتا الخاصة بهرمون
‎hCG 20‏ على سبيل المثال التسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم: 2. يمكن أن تتضمن الطريقة خطوة أو خطوات أخرى لتنقية ‎hCG‏ المؤتلف الذي تم الحصول عليه من الخلية المذكورة و/ أو الوسط المذكور (مثلاً تنقية 1706 المؤتلف من الجزء الطافي من مزرعة الخلية). يشير المصطلح "خلية مضيفة" لأغراض الاختراع الحالي إلى أي خلية تستخدم بشكل شائع للتعبير أي نسخ وترجمة تسلسلات الأحماض النووية لإنتاج على سبيل المثال بولي ببتيدات. على وجه
‏5 التتحديد؛ المصطلح "خلية مضيفة" أو "كائن" يتعلق بالكائنات بدائية النوى؛ حقيقيات النواة الدنياء
النباتات أو خلايا الحشرات أو أنظمة زراعة ‎WIA‏ التدييات. يفضل» أن تكون خلية المضيفة عبارة عن خلية ثديية؛ ويفضل أكثر أن تكون الخلية المضيفة عبارة عن خلية بشرية ويفضل أكثر حتى أن تكون عبارة عن خلية ‎PERCE®‏ ‏يقصد من المصطلح "جزيء حمض نووي مؤتلف" ضمن معنى الاختراع الحالي أن يشتمل على جميع أنواع جزيئات الحمض النووي التي يمكن إدخالها في خلية مضيفة وتؤثر على التعبير عن تسلسل الحمض النووي المحتوى داخل جزيء الحمض النووي المؤتلف. يتضمن المصطلح؛ على سبيل المثال؛ نواقل البلازميد والنواقل الفيروسية ‎(Ao)‏ سبيل المثال؛ نواقل الفيروسة الغدانية؛ ونواقل الفيروسة البطيئة؛ ونواقل الفيروسات الرجعية)؛ على النحو المعروف جيداً في الفن. وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء مقدم جزيء حمض نووي مؤتلف يشتمل على تسلسل حمض 0 نووي (أول) يرمز لسلسلة ألفا خاصة بهرمون ‎hCG‏ حيث يتم اختيار تسلسل الحمض النووي (الأول) من تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل ذو ‎ila‏ على الأقل 797 مع (على سبيل ‎J‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Sila‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ 5 تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 9 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع ‎le)‏ سبيل ‎(Jbl‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تمائل مع) 0 تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل ‎(ae‏ تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ يفضل أن يكون جزيء الحمض النووي المؤتلف وفقا لهذا الجانب من الاختراع ‎al‏ يشتمل على كلا تسلسل حمض نووي محسن يرمز لسلسلة ‎ll‏ لهرمون 106 بشري وتسلسل حمض نووي يرمز لسلسلة بيتا لهرمون ‎NOG‏ بصورة مفضلة؛ يكون تسلسل الحمض 5 النووي (الأول) تحت سيطرة معزز نشط في الخلية المضيفة. يفضل أن يشتمل جزيء الحمض
النووي المؤتلف أيضا على تسلسل حمض نووي ثاني يرمز لسلسلة بيتا لهرمون ‎(Sar hCG‏ أن يكون تسلسل الحمض النووي الثاني الذي يرمز لسلسلة بيتا لهرمون ‎hCG‏ عبارة عن التسلسل وفقا لتعريف التسلسل رقم 2. يمكن أن يكون تسلسل الحمض النووي الثاني تحت سيطرة معزز منفصل نشط في خلية مضيفة. يمكن أن يكون تسلسل الحمض النووي الأول و/ أو تسلسل الحمض النووي الثاني تحت سيطرة معزز فيروسي ‎Sia)‏ معزز الفيروس المضخم للخلايا 01/1/16). وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم خلية مضيفة تتضمن أو تشتمل على جزيء حمض نووي مؤتلف على النحو المذكور أعلاه (مثلاً خلية مضيفة تشتمل على جزيء حمض نووي مؤتلف يشتمل على تسلسل حمض نووي (أول) يرمز لسلسلة ألفا الخاصة بهرمون ‎hCG‏ حيث 0 يتم اختيار تسلسل الحمض النووي (الأول) من تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1)؛ تسلسل ذو ‎Bila‏ على الأقل 797 مع (على سبيل المثال؛ على الأقل 798 أو على الأقل 799 تماثل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبل المثال» على الأقل 798 أو على الأقل 799 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 (على سبيل المثال؛ تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 796.5 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4)؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎Jul‏ على الأقل 798 أو على الأقل 799 ‎Sila‏ مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4 ‎le)‏ سبيل المثال؛ 0 تسلسل ذو تطابق تسلسل على الأقل 797 مع (على سبيل ‎Jal‏ على الأقل 798 أو على الأقل 9 تطابق تسلسل مع) تسلسل تعريف التسلسل رقم: 4). وجد مقدمو الطلب أن الخلايا (الخلايا المضيفة)؛ وخطوط الخلايا المدمجة في هذه الخلايا المضيفة؛ وجزيئات الحمض النووي المؤتلف؛ والبولي نيوكليوتيدات وطرق الاختراع يمكن أن تنتج 6 مؤتلف عالي الناتج والنقاء (مثلاً ذو سلسلة بيتا حرة قليلة).
‎Tag‏ للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم هرمون ‎hCG‏ مؤتلف ‎"ThCG'")‏ أو ‎(TechCG"‏ ‏يتضمن ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ألفا 2« 3 وألفا 2 6« حيث يتم إنتاج ‎hCG‏ المؤتلف في خلية على النحو الموصوف والمطالب به هنا. يمكن أن يكون ‎HCG‏ المؤتلف ذو محتوى حمض سياليك (معبر عنه من حيث نسبة مولات حمض السياليك إلى مولات البروتين) يتراوح بين 12 مول/ مول إلى 20 مول/ مول؛ على سبيل المثال من 12 مول/ مول إلى 15.5 مول/ مول على سبيل المثال من 12 مول/ مول إلى 14.9 مول/ مول. يمكن أن يكون 106 (أو تحضير ‎(hCG‏ 53 محتوى حمض سياليك يتراوح بين 12.5 مول/ مول إلى 14.5 مول/ مول؛ على سبيل المثال محتوى حمض سياليك يتراوح بين 12.8 مول/ مول إلى 13.2 ‎[Use‏ مول. يمكن أن يكون 106 (أو تحضير ‎(hCG‏ وفقاً للاختراع ذو محتوى حمض سياليك 13 مول/ مول. 0 في أمثلة الاختراع» يمكن أن يكون 1706 موجود باعتباره شكل إسوي مفرد أو كخليط من الأشكال الإسوية. يتضمن ‎hCG‏ المؤتلف (أو تحضير ‎(TCG‏ الناتج بواسطة طرق وخلايا الاختراع ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ألفا 2» 3 وألفا 2 6. بذكر عبارة (ارتباط مجموعة حمض سياليك) يُقصد مقدار بقايا السياليك الموجودة على تركيبات الكريوهيدرات الخاصة بهرمون ‎DCG‏ يعني (ارتباط 5 مجموعة حمض سياليك عند ألفا 2 3) ارتباط مجموعة حمض سياليك عند الموقع 2؛ 3 (كما هو معروف جيداً في الفن)؛ وبعني (ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ألفا ¢2 6) ارتباط مجموعة حمض سياليك عند الموقع 2؛ 6 (معروف جيداً ‎Lad‏ في الفن). بالتالي؛ في هذه الوثيقة؛ العبارة 1 لإجمالي ارتباط مجموعة حمض سياليك يمكن أن يكون عبارة عن ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ألفا 2 3" تشير إلى 7 لإجمالي عدد بقايا حمض السياليك الموجود في هرمون ‎hCG‏ ‏0 التي ارتبطت بحمض السياليك في الموقع 2؛ 3. العبارة "7 لإجمالي ارتباط مجموعة حمض سياليك عبارة عن ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ‎Wl‏ 2 6" تشير إلى 7 لإجمالي عدد بقايا حمض السياليك الموجود في هرمون 706 التي ارتبطت بحمض السياليك في الموقع 2؛ 6. العبارة "7 لإجمالي ارتباط مجموعة حمض سياليك عبارة عن ارتباط مجموعة حمض سياليك عند ألفا 2( 8" تشير إلى 7 لإجمالي عدد بقايا حمض السياليك الموجود في هرمون 06" التي 5 ارتبطت بحمض السياليك في الموقع 2؛ 8.
6 أ(أو تحضير ‎(thCG‏ الذي يتم إنتاجه بواسطة الطرق والخلايا وفقاً للاختراع يمكن أن يملك 1 إلى 799 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا ‎thCG . 2‏ (أو تحضير ‎(ThCG‏ الذي يتم إنتاجه بواسطة الطرق والخلايا وفقاً للإختراع يمكن أن يملك 71 إلى 790 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 3. 106 (أو تحضير ‎(hCG‏ وفقاً للاختراع يمكن أن يملك 710 أو أكثر من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 32 على سبيل المثال» يمكن أن يكون من 710 إلى 790 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2؛ 3. على سبيل المثال» يمكن أن يكون 20 أو 30 أو 40 أو 45؛ أو 50؛ أو 55؛ أو 60« أو 70« أو 80 أو 290 أو أكثر من إجمالي الارتباط بحمض 0 السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 3. يمكن أن يكون من 745 إلى 780 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 32 على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون من 750 إلى 770 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك ‎Ble‏ عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 3؛ على سبيل المثال» يمكن أن يكون من 755 إلى 765 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 3. يمكن أن 5 يتضمن ‎hCG‏ (أو تحضير 2006) ارتباط بحمض السياليك عند ‎Wh‏ 2» 3 بمقدار يتراوح بين 5 إلى 795 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك؛ على سبيل المثال» من 70 إلى 790 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك؛ على سبيل المثال» من 85 إلى 790 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك. ‎hCG‏ (أو تحضير ‎(TCG‏ الذي يتم إنتاجه بواسطة الطرق والخلايا وفقاً للاختراع يمكن أن يملك 0 21 إلى 799 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2( . 1066 (أو تحضير ‎(hCG‏ وفقاً للاختراع ‎(Sa‏ أن يملك 75 إلى 750 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 6. على سبيل ‎(JE‏ ‏يمكن أن يكون من 5 إلى 7245؛ على سبيل المثال من 6 إلى 740؛ على سبيل المثال من 7 إلى £230 على سبيل المثال من 8 إلى 720 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط 5 بحمض السياليك عند ألفا 2< 6. يمكن أن يتضمن ‎TCG‏ (أو تحضير 106) ارتباط بحمض
السياليك عند ألفا 2؛ 6 بمقدار يتراوح بين 20 -775 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك؛ على سبيل المثال» 730 -760 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك؛ على سبيل المثال» 735 = من إجمالي الارتباط بحمض السياليك. يمكن أن يتضمن 0166 (أو تحضير ‎(hCG‏ ‏ارتباط بحمض السياليك عند ‎Wl‏ 2 6 بمقدار يتراوح بين 5 إلى 735 من إجمالي الارتباط
5 بحمض السياليك؛ على سبيل المثال؛ من 710 إلى 720 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك. على سبيل المثال» 755-11 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك يمكن أن يكون عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 6. 6 )4 تحضير ‎(hCG‏ الذي يتم إنتاجه بواسطة الطرق والخلايا وفقاً للإختراع يمكن أن يتضمن اختياريا أيضا ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2« 8. ‎rhCG‏ (أو تحضير ‎(rhCG‏ وفقاً
0 للاختراع يمكن أن يملك 75 أو أقل من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2؛ 8؛ على سبيل المثال» يمكن أن يكون من 0 إلى 74؛ ‎Dae‏ 0.1- 4 من إجمالي الارتباط بحمض السياليك عبارة عن ارتباط بحمض السياليك عند ‎Wl‏ 2؛ 8. يمكن ألا يملك ‎thCG‏ (أو تحضير ‎(thCG‏ وفقاً للاختراع أي ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2؛ 8.
066 (أو تحضير ‎(thCG‏ الذي يتم إنتاجه بواسطة الطرق والخلايا وفقاً ‎pad‏ يمكن أن قد يكون ذو محتوى حمض سياليك (مقدار الارتباط بحمض السياليك لكل جزيء هرمون ‎(hCG‏ ‎Ble‏ عن (على أساس كتلة البروتين بدلاً من كتلة البروتين بالإضافة إلى الكريوهيدرات) 76 أو أكثر (مثلاً يتراوح بين 76 ‎L155‏ مثلاً بين 77 ‎Nia S13‏ بين 78 7212 مثلاً بين 711 و7215؛ مثلاً بين 712 و714) من حيث الكتلة.
0 يمكن أن يتم إنتاج أو التعبير عن 106 (أو تحضير ‎(hCG‏ في خط خلية بشرية؛ على سبيل ‎Jil‏ ¢ خط خلية ‎(PER.CO®‏ خط خلية 111080 وما إلى ذلك. يمكن أن يتم إنتاج أو التعبير عن ‎ThCG‏ (أو تحضير ‎(ThCG‏ في خط خلية مشتق من إنسان أو خط خلية بشري معدل على سبيل المثال خط خلية مشتق من ‎PER.CO®‏ أو خط خلية ‎PER.CO®‏ معدل؛ أو خط خلية 111080 معدل أو خط خلية مشتق من 111080 وما إلى ذلك. في مثال مفضل يتم
5 إنتاج أو التعبير عن 706 في خط خلية ‎PER.CO®‏ أو خط خلية مشتق من ‎PER.CO®‏ أو
خط خلية©088.06_معدل. سوف يتضمن 706"الذي يتم إنتاجه أو التعبير عنه في خط خلية بشرية (مثلا خط خلية ‎(PER.CO®‏ خط خلية ‎(HT1080‏ خط خلية 61-55) بعض أحماض سياليك مرتبطة عند ألفا 2« 6 (ارتباط بحمض السياليك ‎Wl‏ 2« 6) مزودة بواسطة نشاط ترانسفيراز سياليل داخلي المنشأً (من خط الخلية) وسوف يتضمن بعض من أحماض سياليك مرتبطة عند ألفا 2 3 (ارتباط بحمض السياليك ألفا ¢2 3) مزودة بواسطة نشاط ترانسفيراز سياليل داخلي المنشأ
(من خط الخلية). يمكن أن يتم تعديل خط الخلية باستخدام ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل. بصورة بديلة أو بالإضافة إلى ذلك يمكن أن يتم تعديل خط الخلية باستخدام ترانسفيراز ألفا 2؛ 6 سياليل. يمكن أن ‎bata‏ ذلك طريقة الإنتاج (ويجعلها ‎ST‏ فعالية) نظرا ‎GY‏ استخدام والتحكم في وسط نمو الخلية على سبيل المثال للحفاظ على الارتباط بحمض السياليك يمكن أن يكون أقل حرجاً من حالة
0 استخدام العمليات المعروفة. يمكن أيضاً أن تكون الطريقة أكثر فعالية نظرا لإنتاج 11606 قاعدي قليل مقارنة مع إنتاج منتجات 2066 المعروفة؛ يتم إنتاج 706 أكثر حمضية وبصبح فصل/ ‎thCG ally)‏ القاعدي ‎Agua Ji‏ يمكن إنتاج ‎thCG‏ باستخدام ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل؛ يُنتج على سبيل المثال باستخدام خط خلية بشرية معدل باستخدام ترانسفيراز ألفا 2؛ 3 سياليل. يمكن أن يتضمن ‎ThCG‏ أحماض
5 سياليك مرتبطة عند ألفا 2» 6 (ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 6) مقدم بواسطة نشاط ترانسفيراز سياليل داخلي المنشاً. يمكن إنتاج ‎thCG‏ باستخدام ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل و/ أو ترانسفيراز ألفا 2 6 سياليل؛ يُنتج على سبيل المثال باستخدام خط خلية بشرية معدل باستخدام ترانسفيراز ألفا 2» 3 سياليل و/ أو ترانسفيراز ألفا 2؛ 6 سياليل. وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم ‎hCG‏ مؤتلف أو تحضير ‎hCG‏ مؤتلف على
0 النحو الموصوف هنا يتم إنتاجه أو التعبير ‎die‏ بواسطة الطرق الموصوفة هنا. يحتوي تركيب 1706 على أنصاف جليكان. يمكن أن يحدث التفرع وينتج ‎die‏ أن يملك الجليكان 1 أو 2 أو 3 أو 4 أو أكثر من بقايا سكر طرفي أو "هوائيات" كما هو معروف جيداً في الفن. يمكن أن يكون ‎thCG‏ وفقاً لجوانب من الاختراع ذو مركبات جليكان ذات تركيبات جليكان أحادية الهوائي و/ أو ثنائية الهوائي و/ أو ثلاثية الهوائيات و/ أو رباعية الهوائيات. يمكن أن يتضمن
5 0606 تركيبات جليكان أحادية الهوائي و/ أو ثنائية الهوائي و/ أو ثلاثية الهوائيات و/ أو ‎ely‏
الهوائيات؛ على سبيل المثال بمقادير نسبية على النحو التالي: 0.1 إلى 73 أحادية الهوائي؛ 765 إلى 785 ثنائية الهوائي؛ 15 إلى 725 ثلاثية الهوائي و0.5 إلى 71.5 رباعية الهوائي (مثلاً على النحو الموضح بواسطة تحليل ‎WAX‏ لمركبات الجليكان المشحونة. وفقاً للاختراع الحالي في جانب آخرء تم تقديم تركيبة صيدلانية تشتمل على ‎hCG‏ مؤتلف ‎(thCG) 5‏ ذو ارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 3 وارتباط بحمض السياليك عند ألفا 2 6؛
حيث يتم إنتاج ‎hCG‏ المؤتلف بواسطة الطرق و/ أو الخلايا المفصح عنها هنا. يمكن أن يكون ذو محتوى حمض سياليك (معبر عنه من حيث نسبة مولات حمض السياليك إلى مولات البروتين) يتراوح بين 12 مول/ مول إلى 15.5 مول/ مول؛ على سبيل المثال» 12 مول/ مول إلى 9 مول/ مول (مثلا على النحو المذكور أعلاه). يمكن أن يكون ‎ThCG‏ ذو محتوىي حمض
0 سياليك يتراوح بين 12.5 مول/ مول إلى 14.5 مول/ مول؛ على سبيل ‎(Jal‏ ذو ‎gine‏ حمض سياليك يتراوح بين 12.8 مول/ مول إلى 13.2 مول/ مول. بصورة مفضلة؛ يكون ‎ICG‏ وفقاً للاختراع ذو محتوى حمض سياليك 13 مول/ مول. يمكن أن تشتمل التركيبة الصيدلانية أيضاً على ‎FSH‏ و/ أو ‎LH‏ ‏يمكن الحصول على ‎FSH‏ بواسطة أي وسيلة معروفة في الفن. يتضمن ‎FSH‏ على النحو
5 المستخدم هنا ‎FSH‏ مؤتلف و1ا5 مشتق من الإنسان. يمكن تنقية ‎FSH‏ المشتق من الإنسان من أي مصدر مناسب (مثلاً البول) بواسطة أي من الطرق المعروفة في الفن. يمكن أن يكون ‎FSH‏ عبارة عن ‎FSH‏ مؤتلف -على سبيل المثال يتم التعبير عنه في خط خلية بشرية. طرق تنقية والتعبير عن ‎FSH‏ المؤتلف معروفة جيداً في الفن. يمكن الحصول على ‎LH‏ بواسطة أي وسيلة معروفة في الفن. يتضمن ‎LH‏ على النحو المستخدم هنا ‎LH‏ مؤتلف 5 ‎LH‏ مشتق من
0 الإنسان. يمكن تنقية ‎LH‏ المشتق من الإنسان من أي مصدر مناسب (مثلاً البول) بواسطة أي من الطرق المعروفة في الفن. طرق تنقية والتعبير عن ‎LH‏ المؤتلف معروفة جيداً في الفن. يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية لمعالجة؛ أو معدة للاستخدام في معالجة؛ العقم ‎Sie‏ للاستخدام على سبيل المثال في تقنيات المساعدة على الإنجاب؛ أو الإباضة المستحثة؛ أوالإمناء داخل الرحم. يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية لبدء؛ أو معدة للاستخدام في بدء؛ النضج النهائي/
التبويض وتكوين الجسم الأصفرء تحفيز التطور الجرببي لدى النساء اللاتي يعانين من عوز ‎FSH‏ ‎cals LH‏ و/ أو في الدعم الأصفري (0111/0006). يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية لتحفيز أو معدة للاستخدام في تحفيز؛ التطور أحادي الجريب في غياب الإباضة لدى النساء من النوع الثاني وفقا لتصنيف منظمة الصحة العالمية (مثلا ‎thCG‏ مع ‎((TLH‏ لتعزيز الاستجابة متعددة الجريب مع شروع ‎1١١‏ في المرضى الذين يخضعون لفرط تحفيز مبيضي مراقب ‎COH‏ (مثلا
6 مع ‎¢(TLH‏ ولتكملة فرط التحفيز المبيضي ‎Chall‏ لتحسين معدلات الانغراس/ الحمل (مثلا ‎thCG‏ مع ‎¢("LH‏ و/ أو زيادة معدلات الحمل في تقنيات المساعدة على الإنجاب. يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية للوقاية؛ أو معدة للاستخدام في الوقاية؛ من الإجهاض» و/ أو الوقاية من الابتسار. يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية لمعالجة؛ أو معدة للاستخدام في معالجة؛ الانتباذ
0 البطاني الرحمي. يمكن استخدام التركيبة الصيدلانية على سبيل المثال في الدواعي الطبية حيث تستخدم تحضيرات هرمون ‎hCG‏ المعروفة. يقدم الاختراع ‎Load Mal‏ استخدام 17606 و/ أو تحضير من ‎hCG‏ ‏موصوف هنا (وفقاً لجوانب الاختراع) لمعالجة؛ أو في تصنيع دواء؛ لمعالجة العقم. يمكن أن تتم صياغة المركبات الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي في تركيبات معروفة جيداً لتناسب
5 أي طريق لإعطاء الدواء مثلاً عن طريق الفم أو عن طريق المستقيم أو عن طريق الحقن أو عن طريق الأدمة (مثلاً تقنية اللاصقات)؛ عبر الوريد؛ داخل العضلات؛ أو تحت الجلد؛ أو داخل الصهريج؛ أو داخل المهبل؛ أو داخل الصفاق؛ أو موضعيا (مساحيق؛ مراهم أو قطرات) أو كرذاذ شدقي أو داخل الأنف. تشتمل التركيبة النموذجية على حامل مقبول صيدلانياً مثل محلول مائي؛ سواغات غير سامة؛ بما في ذلك أملاح ومواد حافظة ومحاليل منظمة وما شابه ذلك على النحو
0 الموصوف في ‎Remington’s Pharmaceutical Sciences fifteenth edition (Matt‏ ‎Publishing Company, 1975),‏ الصفحات 1405 إلى 1412 و 87-1461 و ‎the‏ ‎national formulary XIV fourteenth edition (American Pharmaceutical‏ ‎«Association, 1975)‏ وغيرها. أمثلة على الحوامل الصيدلانية المائية والحوامل غير المائية المناسبة؛ المخففات أو المذيبات أو السواغات تتضمن الماء؛ الإيثانول» مركبات بوليول (مثل
5 الجليسرول؛ بروبيلين جليكول؛ بولي إيثيلين جليكول؛ وما شابه ذلك)؛ كريوكسي ميثيل سيليولوز
وخلائط مناسبة منهاء زيوت خضروات ‎die)‏ زيت الزيتون)؛ وإسترات عضوية قابلة للحقن ‎ie‏
إيثيل أوليات. يمكن أن تحتوي تركيبات الاختراع الحالي ‎Lad‏ على مضافات مثل ولكن لا تقتصر
على مواد حافظة؛ عوامل مرطبة؛ عوامل مستحلبة؛ وعوامل تشتيت. يمكن أن تكون عوامل مضادة
للبكتيريا وعوامل مضادة للفطريات متضمنة لمنع نمو الميكرويات وتتضمن؛ على سبيل المثال؛ م- كريزول» كحول ‎ci‏ بارابين» كلوروبيوتانول؛ فينول» حمض السوربيك وما شابه ذلك. علاوة على
ذلك؛ يمكن أن يكون من المرغوب تضمين عوامل مساوية التوتر مثل السكرء كلوريد الصوديوم
وما شابه ذلك.
في بعض الحالات؛ لإعطاء تأثير ممتد المفعول؛ يكون من المرغوب إبطاء امتصاص ‎hCG‏
(والمواد المكونات النشطة الأخرى؛ إذا كانت موجودة) من الحقن تحت الجلد أو داخل العضل.
0 يمكن تحقيق ذلك عن طريق استخدام معلق سائل من مادة بلورية أو غير متبلرة شحيحة الذويان في الماء. يعتمد معدل امتصاص ‎hCG‏ إذن على معدل انحلاله والذي يمكن أن يعتمد بدوره على حجم البلورة والشكل البلوري. بصورة بديلة؛ يتم تحقيق الامتصاص المؤجل لشكل توليفة ‎hCG‏ ‏المعطاة عن طريق الحقن من خلال إذابة أو تعليق توليفة 706 في سواغ زيتي. ‎(Sar‏ عمل أشكال مدخرة ‎ALE‏ للحقن عن طريق تكوين شبكات دقيقة التمحفظ من 106 (وعوامل أخرى إذا
5 كانت موجودة) في بوليمرات قابلة للتحلل الحيوي مثل بولي أكتيد بولي جليكوليد. يمكن التحكم في معدل إطلاق هرمون ‎hCG‏ اعتماداً على نسبة هرمون 06" إلى البوليمر وطبيعة البوليمر المحدد المستخدم. تتضمن أمثلة على بوليمرات أخرى قابلة للتحلل الحيوي بولي فينيل بيروليدون؛ بولي (أورسو إسترات) بولي (أنهيدريدات) وما إلى ذلك. يتم تحضير الصيغ المدخرة ‎ALG‏ للحقن أيضاً عن طريق احتجاز هرمون 706 في ليبوزومات أو مستحلبات دقيقة متوافقة مع أنسجة الجسم.
يمكن تعقيم الصيغ القابلة للحقن على سبيل المثال عن طريق الترشيح من خلال مرشح مثبت للبكتيرياء أو عن طريق إدماج عوامل معقمة في هيئة تركيبات صلبة معقمة يمكن أن تذوب أو تتشتت في ماء معقم أو وسط معقم آخر قابل للحقن قبل الاستخدام مباشرةً. يمكن أن يتم إمداد الصيغ القابلة للحقن في أي حاوية مناسبة مثلاً قنينة؛ محقنة معبأة ‎cline‏ خراطيش حقن؛ وما شابه ذلك.
— 1 2 — يمكن أن يتم إمداد الصيغ ‎Sie)‏ الصيغ القابلة للحقن) باعتبارها منتج ذو تركيبات صيدلانية تحتوي على هرمون ‎hCG‏ (اختيارياً مع ‎LH FSH‏ وما إلى ذلك). إذا كان هناك أكثر من مكون نشط واحد (أي ‎hCG‏ ومثلا ‎FSH‏ أو ‎(LH‏ يمكن أن يكون ذلك مناسباً للإعطاء بصورة منفصلة أو مع بعضها. إذا تم الإعطاء بصورة منفصلة؛ يمكن أن يكون الإعطاء تتابعي. يمكن أن يتم إمداد المنتج في أي عبوة مناسبة. على سبيل ‎(JER‏ يمكن أن يحتوي المنتج على عدد من المحاقن أو القنينات المعبأة مسبقا التى تحتوي على إما 006 أو ‎FSH‏ أو توليفة من كلا هرمون ‎FSH‏ ‎.hCG‏ يمكن أن تتم تعبئة المحاقن أو القنينات في عبوة منفطة أو وسيلة أخرى للحفاظ على التعقيم. يمكن أن يحتوي المنتج بصورة اختيارية على تعليمات لاستخدام صيغ ‎hCG‏ و ‎FSH‏ ‏يتم ضبط الأس الهيدروجيني والتركيز المضبوط للمكونات المختلفة في التركيبة الصيدلانية وفقاً 0 ا لممارسات التقليدية فى المجال. انظر ‎GOODMAN and GILMAN’s THE‏ ‎PHARMACOLOGICAL BASIS FOR THERAPEUTICS, 7th ed‏ في نموذج مفضل» يتم تقديم تركيبات الاختراع في صورة تركيبات للإعطاء عن طريق الحقن. الطرق العامة ‎.SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, supra, at pages 780-820‏ يمكن أن يتم تقديم التركيبات القابلة للحقن في صيغ سائلة أو كمادة صلبة والتيى سوف يتم خلطها مع وسط معقم قابل للحقن قبل الإعطاء مباشرةً. في أحد ‎oz all‏ يتم تقديم التركيبات القابلة للحقن فى شكل جرعة واحدة لتسهيل إعطاء وتجانس ‎de yall‏ . شرح مختصر للرسومات سوف يتم الآن وصف الاختراع الحالي بتفصيل أكبر بالإشارة إلى الأمثلة التالية ولوحات الرسم 0 المرفقة والتي بها: الشكل 1 يوضح الحمض النووي وتسلسلات حمض أميني مشتقة من تسلسل ألفا 706 المحسن؛ الشكل 2 يوضح الحمض النووي وتسلسلات حمض أميني مشتقة من تسلسل بيتا ‎hCG‏
— 2 2 — الشكل 3 يوضح الحمض النووي وتسلسلات حمض أميني مشتقة من ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل ‎«ST3GAL4‏ ‏الشكل 4 يوضح خريطة بلازميد خاصة بناقل تعبير ‎tphCGalpha/beta‏ ‏الشكل 5 يوضح ناقل تعبير ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل (5136/81-4). الشكل 6 يوضح تحديد الأشكال الإسوية الخاصة بهرمون ‎hCG‏ بواسطة التركيز متساوي التكهرب مصبوغة باستخدام ‎Coomassie Blue‏ في تركيبات وفقاً للاختراع (المسارات 4 و5 و6 و7 15 ميكرو جرام لكل مسار)؛ التركيبة المشتقة من مبيض هامستر صيني من الفن السابق؛ أوفيتريل (المسار 2 15 ميكرو جرام)؛ ومنتج بولي بشري تم الحصول عليه من مرأة حامل نوفاريل (المسار 3 5 1 ميكرو جرام)؛
0 الشكل 7 يقارن تركيز هرمون ‎hCG‏ (ألفا-بيتا ‎(hCG‏ وسلسلة بيتا حرة (بيتا ‎(hCG‏ تم إنتاجها باستخدام خلايا الاختراع بما في ذلك التسلسل النووي "المحسن" الخاص بوحدة ‎Wl‏ الفرعية مقارنةً مع تركيز ‎hCG‏ (ألفا-بيتا ‎(WCC‏ وسلسلة بيتا حرة (بيتا ‎(MCG‏ الذي تم إنتاجه في خلايا مثال مقارن يتضمن النمط البري ‎WT‏ للوحدة الفرعية ألفا؛ الوصف التفصيلى:
5 الأمثظة من 1 إلى 7 استعراض لعملية تطوير خط الخلية تم نقل المادة الوراثية لبلازميد مفرد يحمل سلاسل ‎ling Wl‏ لهرمون ‎hCG‏ كل منها يتحكم به معزز فيروس مضخم للخلايا ‎CMVie‏ منفصل في خلايا ‎PER.CO®‏ عن طريق التخريم الكهربائي.
هذا البلازميد يحمل مجموعة جينات مقاومة النيومايسن (الشكل 4( مما يسمح بتحديد ناقلات المادة الوراثية باستخدام 4148© (6808610610). تم تمديد تجميعات ناقلات المادة الوراثية ثم تعريضها لاستنساخ محدود التخفيف في أطباق ذات 96 تجويف تحت تحديد 6418. تم تمديد
— 3 2 — الخطوط النسيلية وتم تحديد المستعمرات عالية التعبير على أساس عيار 706 في ‎gall‏ الطافى من مزرعة الخلية. تم اختيار خمس نسائل قيادية على أساس الإنتاجية العالية ثم تم بعد ذلك نقل مادة وراثية إلى كل منها باستخدام بلازميد ثاني يعبر عن جين ترانسفيراز ألفا 2؛ 3 سياليل 5136/84 بالإضافة إلى واسم تحديد هيجرومايسن (الشكل 5). تم تمديد كل من التجميعات الخمس الخاصة بنقل المادة الوراثية وتم تقييم الأجزاء الطافية من مزارع الخلايا من حيث تركيز ‎hCG‏ والحرائك الدوائية في الخلية الحية. تم بعد ذلك تعربض التجميعات الواعدة إلى دورة أخرى من الاستنساخ محدود التخفيف. تم تمديد النسائل الناتجة وتم تقييم الأجزاء الطافية من مزارع الخلايا من حيث تركيز ‎hCG‏ والجلاكتوز 0 المكشوف على بروتين 706 (بواسطة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم باستخدام الليكتين ‎(lectin ELISA‏ تم إخضاع تلك التي كانت ‎ld‏ مستوى منخفض من الجلاكتوز المكشوف إلى مقايسات أخرى بما في ذلك الحرائك الدوائية في الخلية الحية. تم تقييم النسائل ‎all‏ أنتجت ‎hCG‏ ‏ذو أنماط حرائك دوائية ‎ie‏ ¢ وكانت ذات جلاكتوز مكشوف قليل وعبرت عن البروتين عند مستويات عالية واختيارها لخواص الإنتاجية والنمو. 5 المثال 1: اختيار التسلسل ونواقل البلازميد منطقة ترميز الجين الخاص بعديد الببتيد ألفا ‎hCG‏ موضحة فى الشكل 1. مشار فيما يلى إلى منطقة ترميز الجين الخاص بتسلسل عديد الببتيد ألفا ‎hCG‏ باسم تعريف التسلسل رقم 1. تم استخدام منطقة ترميز الجين الخاص بعديد الببتيد بيتا ‎hCG‏ وفق ‎Fiddes and‏ ‎Goodman (1980)‏ هذا التسلسل ‎gage‏ باعتباره ‎NP_000728‏ وهو متسق مع تسلسلات البروتين الخاصة ب ‎.CGbeta7 3 « CGbetal 5 «CGbeta3‏ مشار إلى هذا التسلسل فيما يلى باعتباره تعريف التسلسل رقم 2. تم استخدام منطقة ترميز الجين الخاص ببيتا جلاكتوزيد ألفا 2 3- ترانسفيراز سياليل 4 (ترانسفيراز ألفا 2< 3 سياليل» ‎(ST3GALS‏ وفق )1994( ‎Kitagawa and Paulson‏ التسلسل مودع باعتباره ‎L23767‏ ومشار إليه فيما يلي باعتباره تعريف التسلسل رقم: 3
— 2 4 —
تم استخدام اثنين من البلازميد: ‎PCG (JV‏ ويعبر تعبير مشترك عن سلاسل ألفا وبيتا ‎hCG‏ ‏والثاني يعبر عن جين ترانسفيراز سياليل 5136814. مثال 2ا: تأليف ناقل التعبير عن ‎hCG‏ ‏6 حعبارة عن سلسلة ألفا اصطناعية من هرمون ‎hCG‏ تم تحسينها لاستخدام الرامزة في
خلايا ثديية تتضمن ببتيد إشارة ألفا ‎hCG‏ الأصلى. يمكن أن يتم تعديلها وراثياً بواسطة الطرق المعروفة جيداً فى الفن. تم تضخيم تسلسل ترميز عديد ببتيد ‎hCG Wl‏ (تعريف التسلسل رقم: 1) وعديد ببتيد بيتا ‎hCG‏ ‎(NP_000728)‏ تعريف التسلسل رقم 2) بواسطة تفاعل البوليمراز المتسلسل باستخدام الطرق المعروفة جيداً في الفن (انظر على سبيل المثال تطبيق براءة الاختراع الدولية المنشورة باعتبارها
0 2011/042688). تم هضم ‎DNA‏ الخاص ‎phCG Wh‏ باستخدام ‎BamHI‏ وا06ل1 وإدماجه فى مواقع ‎Nhel , BamHI‏ على ‎Jal‏ تعبير تديى موجه بواسطة الفيروس المضخم للخلايا ‎(Crucell vector pcDNA3002Neo) CMV‏ وضع ذلك الجين في التوجيه الصحيح للتعبير الموجه بواسطة معزز ‎CMVie‏ مع إشارة نازلة لهرمون النمو البقري بولي أ ‎polyA‏ 8611. تم هضم جين بيتا ‎hCG‏ الأصلي ‎Ly‏ في ذلك ببتيد الإشارة الأصلي بواسطة إنزيمات الاقتطاع ‎Ascl‏
‎Hpals 5‏ وإدماجه في مواقع ‎Ascl‏ و1081 بحيث سوف تتم قيادة التعبير بواسطة معزز ‎CMVie‏ ‏ثاني مع إشارة نازلة إضافية لهرمون النمو البقري بولي أ ‎.BGH polyA‏ تضمن الهيكل الأساسي للناقل أيضاً واسم مقاومة نيومايسين وكذلك عناصر لازمة للتحديد والتنسخ في الخلايا بدائية النواة. تم تضخيم الناقل وتحديد تسلسله باستخدام الطرق العامة المعروفة في الفن. تسلسلات ‎hCG Wl‏ المحسن وسلاسل بيتا الأصلية (ذات النمط البري) معطاة في الأشكال 1 و2 على الترتيب.
‏0 جميع المستعمرات المختارة لتحديد التسلسل احتوت على التسلسلات الصحيحة وفقاً لتعريف التسلسل رقم 1 و تعريف التسلسل رقم 2. تم اختيار البلازميد ‎phCG A+B‏ لنقل المادة الوراثية (الشكل 4). المثال 2ب: تأليف ناقل تعريف 513:
— 5 2 — يتم التعبير عن جين 5136/84 في 0513. تم تضخيم تسلسل ترميز بيتا جلاكتوزيد ألفا 2 3- ترانسفيراز سياليل 4 ‎L23767 «ST3)‏ تعريف التسلسل رقم 3 الشكل 6 بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام توليفة المشرع ‎.2,3STrev 4 2,3STIw‏ ‎2,3STfw 5’-CCAGGATCCGCCACCATGTGTCCTGCAGGCTGGAAGC-3’‏ ‎2,3STrev 5’-TTTTTTTCTTAAGTCAGAAGGACGTGAGGTTCTTG-3> 5‏
تم هضم ‎ST3 DNA‏ الناتج باستخدام إنزيمات الاقتطاع ‎BamHI‏ و ‎Aflll‏ وإدماجه في مواقع ‎BamHI‏ و ‎Aflll‏ على ناقل التعبير ‎ill‏ الموجه بواسطة الفيروس المضخم للخلايا ‎CMV‏ الذي يحمل واسم مقاومة هيجرومايسين ‎(Vector pcDNA3O02Neo)‏ بحيث يكون موضعه في اتجاه نازل لمعزز ‎CMVie‏ واتجاه صاعد لتسلسل هرمون النمو البقري بولى أ ‎polyA‏ 8611. تضمن
0 الهيكل الأساسي للناقل أيضاً واسم مقاومة هيجرومايسين وكذلك عناصر لازمة للتحديد والتنسخ في الخلايا بدائية النواة. تم تضخيم الناقل وتحديد تسلسله على النحو الموصوف سابقا. احتوت النسيلة ‎pST3# 1‏ (الشكل 5( على التسلسل الصحيح وفقا لتعريف التسلسل رقم 3 وتم اختيارها ‎Jaa‏ ‏المادة الوراثية. ‎Je‏ 3: تقل المادة الوراثية للبلازميد
تتم جعل البلازميد 00606 (الشكل 4)؛ الذي به موقع انالا واحد موجود في جين بيتا لاكتاماز البدائي» خطيا مع ‎(New England Biolabs Cat.
No.
R0150) Pvul‏ تم نقل المادة الوراثية ‎DNA‏ الخاصة بالبلازميد الذي أصبح خطيا إلى خلايا ‎PER.CO®‏ كما يلي. تم الحفاظ على مزارع ‎Wall‏ في وسط ‎PERMAB‏ كامل ‎(CD4PERMAB (Hyclone Cat.‏ ‎No.
SH30871.01)‏ تم تكميله باستخدام جلوتامين يساري إلى تركيز نهائي 3 مل مول
‎Pluronic F68 (Invitrogen Cat.
No. 25030-123( 0‏ عند تركيز نهائي 1 جرام/ لتر ‎(Invitrogen Cat.
No. 24040-032)‏ في قوارير إيرلنماير سعة 250 مل. تم الحفاظ على الخلايا فى حاضنة اهتزازية ‎(Kuhner Climo-shaker ISF1-X)‏ تم ضبطها عند 100 دورة في الدقيقة؛ 75 ثاني أكسيد الكريون و37 درجة مئوية؛ لمدة 14 يوم على الأقل قبل نقل المادة
الوراثية. قبل نقل المادة الوراثية بمدة 48 ساعة؛ تم نقل الخلايا إلى وسط جديد عند كثافة 0.5 في 610 خلية/ مل. في اليوم المحدد لنقل المادة الوراثية؛ تم حساب عدد ‎LIAN‏ في جهاز ‎Beckman Coulter‏ ‎ViCell XR‏ لتحديد كثافة الخلايا وللتأكد من أن الحيوية > 790. تم حصاد الخلايا بواسطة الطرد المركزي وإعادة تعليقها في وسط ‎PERMAB‏ جديد قبل خلطها مع ‎DNA‏ 0006 خطي.
تم تعريض خليط الحمض النووي ‎DNA‏ والخلايا لصدمة كهريائية في حجرة جهاز تخريم كهربائي مضبوط عند 250 فولت لمدة 5 مل ثانية؛ قبل أن يتم نقله بسرعة إلى 10 مل من وسط ‎PERMAB‏ مدفاً مسبقاً. تم تكرار هذه العملية إجمالي 6 مرات وتم تجميع جميع ناقلات المواد الوراثية الست في قارورة مزرعة أنسجة واحدة 175 سم2. تم وضع القارورة في جهاز تحضين
0 ساكن مضبوط عند 37 درجة مئوية؛ 5 7 ثاني أكسيد الكربون. بعد 48 ساعة؛ تمت إعادة تعليق الخلايا في الحجم المناسب من ‎PERMAB‏ انتقائي (وسط ‎PERMAB‏ كامل + ‎125)G418‏ ‏ميكرو ‎(do faba‏ لبعطي ‎ZS‏ خلايا حية 0.5 ‎x‏ 610/ مل. تم تمرير مزرعة التجميعة مرتين في الأسبوع؛ مع الحفاظ على الخلايا عند كثافة 0.3 في 610 خلية/ مل في وسط انتقائي حتى زادت نسبة ‎WAN‏ الحية إلى ‎AST‏ من 750. عند هذه النقطة؛ تم
5 تقل الخلايا إلى مزارع اهتزازية في قوارير إيرلنماير سعة 250 مل. بعد عدة أسابيع في المزرعة الاهتزازية؛ تم أخذ عينة من الجزءِ الطافي من التجميعة ومقايستها من حيث تركيز ‎hCG‏ بمجرد ما تم تأكيد أن التجميعة كانت إيجابية التعبير عن ‎hCG‏ تم تحضير الخلايا للاستنساخ محدود التخفيف. تم تحضير معلق من الخلايا عند 0.3 خلية حية/ مل في وسط ‎PERMAB‏ مكمل بواسطة -6©
0 418 عند 125 ميكرو جرام/ مل. تم توزيع معلق الخلايا في أطباق زراعة أنسجة ذات قاعدة مسطحة ومقسمة إلى 96 تجويف عند 200 ميكرو لتر/ تجويف وتم تحضينها في جو رطب عند 37 درجة مثوية؛ 75 ثاني أكسيد الكريون ‎(Binder CB150)‏ تم فحص الأطباق بصورة منتظمة باستخدام ‎Genetix Clone Select Imager‏ لتتبع نمو الخلايا في كل تجويف.
بعد أسبوعين؛ تم تحديد 535 تجويف احتوت على مستعمرات ‎dads WIA‏ النمو. تم أخذ عينة الأجزاء الطافية من هذه التجاويف ومقايستها من حيث ‎hCG‏ باستخدام مجموعة أدوات تجارية ‎(DRG diagnostics HCG ELISA Cat.
No.
EIA1469)‏ على أساس نتائج هذه المقايسات؛ تم نقل إجمالي 162 مستعمرة إلى أطباق ذات 24 تجويف تحتوي على 0.5 ‎[de‏ ‏5 تجويف من وسط ‎PERMAB‏ انتقائي. عندما كانت الخلايا في التجاويف تقارب الاحتشاد؛ تم أخذ
عينة من الجزءِ الطافي من كل من التجاويف وعددها 162 ومقايستها من حيث مستويات ‎hCG‏ ‏على أساس هذه النتائج؛ تم اختيار 91 من أفضل خطوط الخلايا تعبيراً للتمديد في قوارير 1-25. نمت خطوط الخلايا هذه مرة أخرى وقاريت الاحتشاد؛ عند هذه النقطة؛ تم أخذ عينة من الأجزاء الطافية ومقايستها من حيث ‎hCG‏ على النحو المذكور أعلاه. على أساس هذه النتائج؛ تم تمديد
0 أفضل 58 من خطوط الخلايا تعبيراً في قوارير 1-75. تم إجراء تحليل معدل الإنتاج النوعي على كل من خطوط الخلايا هذه وعددها 58 بواسطة الطرق المعروفة في الفن وتم التعبير عن الإنتاجية النوعية بوحدات بيكو جرام/ خلية/ يوم. بالتالي» في هذا المثال تم نقل المادة الوراثية من بلازميد يدمج سلاسل ‎Wl‏ وبيتا ‎hCG‏ إلى خلايا ‎PER.CO®‏ وتم تحديد ناقلات المادة الوراثية باستخدام وسط يحتوي على ‎.G418‏ تم فحص
مستعمرات الخلايا النامية من حيث تركيز 706 في ‎gall‏ الطافي وتم تمديد تلك التي تعبر عن ‎Le‏ مستوى بعد ذلك. بعد دورات لاحقة من التمديد والفحص» تم اختيار 20 نسيلة التي عبرت عن ‎hCG‏ لدراسات النمو والإنتاجية. على أساس نتائج هذه الدراسات؛ تم اختيار 5 نسائل ‎Jal‏ ‏المادة الوراثية باستخدام بلازميد ثاني يدمج الجين 51365781-4. مثال 4 نقل المادة الوراثية باستخدام بلازميد ‎plasmid pST3‏ جا ‎١3‏ 5.
0 تتم توليد نسائل مستقرة على النحو الموصوف سابقاً في المثال 3. تم اختيار أفضل خمس نسائل تم إنتاجها بواسطة الطريقة على النحو الموصوف في المثال 3 لنقل المادة الوراثية باستخدام البلازميد 0513 ‎ST3GAL4 plasmid‏ (انظر المثال 2؛ الشكل 3 و5). تم إجراء نقل المادة الوراثية بواسطة التخريم الكهريائي باستخدام نفس الطريقة الموصوفة في المثال 3 ‎Lad‏ عدا أنه تم تحديد ناقلات المادة الوراثية في وسط ‎PERMAB‏ كامل مكمل بواسطة
— 2 8 —
هيجرومايسين عند 5 . 0 ميكرو جرام/ مل ‎Ya‏ من 8 1 ‎G4‏ . باستخدام هذا الطريقة؛ تم الحصول على 5 تجميعات تعبر عن ‎hCG‏ ‏تم تقييم عينات من الأجزاء الطافية من تجميعات نقل المادة الوراثية في نموذج حرائك دوائية في جرذ وعلى أساس هذه البيانات إلى جانب البيانات من مقايسة الارتباط باللكتين ‎RCA-lectin‏
قياس الجلاكتوز المكشوف على سلاسل ‎(hCG‏ تم اختيار تجميعة واحدة لعملية أخرى للاستتساخ محدود التخفيف بواسطة الطرق المعروفة فى الفن . أنتج هذا الاستنساخ بالتخفيف أكثر من 600 نسيلة تم فحص كل منها أيضاً من حيث تعبير 6 ودرجة الجلاكتوز المكشوف على النحو المقاس باستخدام الارتباط بالليكتين ‎RCA-lectin‏ ‏تم تمديد النسائل ذات أقل مستويات من الجلاكتوز المكشوف أيضاً وتم إخضاع العينات إلى تحليل
0 الحرائك الدوائية في الخلية الحية والبيانات المؤيدة للارتباط بالليكتين. تم أيضاً تقييم خمس نسائل مشتقة من تجميعة واحدة من حيث خواص النمو والإنتاجية. تم تمديد كل من هذه النسائل وتم عمل بنك خلايا لتخزين البذور بعد إجراءات الحفظ بالبرودة القياسية. تمت إذابة مخزون من بنك خلايا تخزين البذور ووجد أنه حي.
5 يعرف الرحلان الكهريائى على أنه انتقال الجزيئات المشحونة من خلال مذيب بواسطة مجال كهريائي. سوف تعتمد قدرة الجزيء الحيوي على الانتقال من خلال مجال كهريائي على قوة المجال» صافي الشحنة على الجزيء»؛ حجم وشكل الجزيء؛ والقوة الأيونية وخواص الوسط التي تهاجر الجزيئات من خلاله. التركيز متساوي التكهرب عبارة عن تقنية رحلان كهربائي لفصل البروتينات على أساس نقطة
0 تساوي الكهربية الخاصة بها. نقطة تساوي الكهربية عبارة عن الأس الهيدروجيني الذي عنده البروتين لا يملك أي صافي شحنة ولن ‎ale‏ في المجال الكهربائي. يغير محتوى حمض السياليك في الأشكال الأسوية لهرمون 106 نقطة تساوي الكهربية بدقة لكل شكل إسوي وهو أمر يمكن استغلاله باستخدام هذه التقنية لتصور الأشكال الإسوية ل ‎hCG‏ 063.06 من كل نسيلة.
تم تحليل نقاط تساوي الكهريائية الخاصة بالأشكال الإسوية لهرمون 706 المنتج من 063.06 باستخدام التركيز متساوي التكهرب. تم إنتاج ‎hCG‏ 063.06 على النحو الموصوف في المثال 6. تم فصل عينات ‎hCG‏ 063.06 على هلام التركيز متساوي التكهرب ‎Novex® IEF Gels‏ يحتوي على 75 بولي أكريلاميد تحت ظروف أصلية على تدرج أس هيدروجيني 7-3 في محلول كهربي مذبذب ذو أس هيدروجيني 7-3. تمت رؤية البروتينات باستخدام صبغ ‎Coomassie‏ ‎Blue‏ باستخدام الطرق المعروفة جيداً في الفن. يوضح الشكل 6 تحديد الأشكال الإسوية الخاصة بهرمون ‎hCG‏ بواسطة التركيز متساوي التكهرب المصبوغ باستخدام008ا8 ‎Coomassie‏ في تركيبات منتجة وفقاً للاختراع تم إنتاجها من 0 خطوط الخلايا المستنسخة المؤلفة بواسطة الطريقة الموضحة في المثال 6 (المسارات 4 و5 و6 و7 15 ميكرو جرام لكل مسار)؛ التركيبة المشتقة من مبيض هامستر صيني من الفن السابق؛ أوفيتريل (المسار 2 15 ميكرو جرام)؛ ومنتج بولي بشري تم الحصول عليه من مرأة حامل نوفاريل (المسار 3 15 ميكرو جرام)؛ تمثل النطاقات أشكال إسوية لهرمون 106 تحتوي على أعداد مختلفة من جزيبئات حمض السياليك. يشير الشكل 6 إلى أن ‎hCG‏ المؤتلف المشتق من 5 خط خلية بشرية المعدل باستخدام ترانسفيراز ألفا 2» 3 سياليل (التركيبات وفقاً للإختراع) أكثر حمضية من الأوفتريل و ‎ACG‏ البولي من ‎shall‏ الحامل. الشكل 7 يقارن بين تركيز ‎hCG‏ (ألفا- بيتا ‎hCG‏ ) وسلسلة بيتا الحرة (بيتا ‎(hCG‏ المنتجة باستخدام ‎WIA‏ الاختراع (أي؛ باستخدام خطوط ‎WAY‏ المؤلفة بواسطة الطريقة الموضحة في الأمثلة من 1 إلى 4) والتي تتضمن الوحدة الفرعية ألفا 'المحسنة' مقارنة مع تركيز ‎hCG‏ (ألفا- 0 بيتا ‎(hCG‏ وسلسلة بيتا الحرة (بيتا ‎(hCG‏ المنتجة في خلايا مثال مقارن تتضمن الوحدة الفرعية ألفا ذات النمط البري ‎WT‏ يوضح الشكل 7 أن خلايا الاختراع تعبر عن مقادير عالية من ‎hCG‏ ‏وقليل من الوحدة الفرعية بيتا الحرة الزائدة. بمعنى آخرء تحسن حاصل ونقاء ‎NCG‏ المؤتلف المنتج بواسطة خلايا وطرق الاختراع بصورة ملحوظة.
— 0 3 — يشير الجدول أ إلى النسبة المئوية للوحدات الفرعية بيتا ‎hCG‏ الحرة فى عينات شبه منقاة من دفعات متنوعة من ‎hCG‏ المنتج باستخدام ‎WIA‏ الاختراع ‎gl)‏ باستخدام خطوط ‎LAY‏ المؤلفة بواسطة الطرق الموضحة في الأمثلة من 1 إلى 4) ‎Allg‏ تتضمن الوحدة الفرعية ألفا 'المحسنة" ‎(“Opt. alpha hCG”)‏ مقارنة مع النسبة المئوية للوحدات الفرعية ‎hCG‏ بيتا الحرة في عينات شبه منقاة من ‎HCG‏ المنتج في خلايا مثال مقارن تتضمن الوحدة الفرعية ألفا من النمط البري ‎(“WT alpha hCG”)‏ على النحو المحدد بواسطة الاستشراب السائل رفيع الإنجاز ‎.Hydrophobic Phenyl-5PW HPLC‏ يوضح الجدول أ أن خلايا الاختراع تعبر عن مقادير عالية من ‎hCG‏ ومقدار أقل أيضا -من الوحدة الفرعية بيتا الحرة الزائدة (710.6-5.7) مقارنة مع الخلايا التي تتضمن الوحدة الفرعية ألفا 0 من النمط البري (766-64). ‎AT Jaa‏ ¢ تحسن حاصل ونقاء ‎NCC‏ المؤتلف المنتج بواسطة خلايا وطرق الاختراع بصورة ملحوظة. الجدول أ 7 8-006 حرة النسيلة ‎(PHE — 5PW)‏ ألفا ‎hCG‏ من النمط البري 64.1 ‎(1G2)‏ ‏ألفا ‎hCG‏ من النمط البري (162) 3 °° ' م | ’ ا
— 1 3 — المثال 6 استعراض الإنتاج والتنقية تم تكوين إجراء لإنتاج ‎hCG‏ مؤتلف في خلايا ‎PER.CO‏ تمت زراعتها في معلق في وسط خالي من مصل الدم. الإجراء موصوف أدناه وتم تطبيقه على العديد من خطوط خلايا ‎PER.C6‏ ‏المنتجة لهرمون ‎hCG‏ ‏5 تم تحضير 606 المؤتلف من نسيلة منقول إليها المادة الوراثية لترانسفيراز ألفا 2؛ 3 سياليل
باستخدام طرق الأمثلة من 1 إلى 4 الموصوفة أعلاه. تمت تنمية الخلايا في قوارير اهتزازية في وسط ‎6GRO (SAFC)‏ حتى تم الوصول إلى كثافة خلايا 1 ‎x‏ 610 إلى 3 ‎x‏ 610 خلية/ مل. تم نقل الخلايا إلى مفاعل حيوي ذو خزان زجاجي سعة 5 لتر مزود بخفاق بكثافة حوالي 1 في 610 خلية/ مل. عمل المفاعل الحيوي في وضع
0 التروية باستخدام أوساط ‎.(Lonza) Proper]‏ بعد ‎(alld‏ تمت تنقية 1106 الناتج باستخدام خطوات التنقية فائقة الدقة؛ الاستشراب بأسر تبادل الأنيون والكاتيون» الاستشراب الكاره للماء والاستشراب ذو الألفة الكاذبة؛ بواسطة الطرق المعروفة في الفن. أثناء جميع إجراءات الاستشراب؛ تم تأكيد وجود 106 مؤتلف متفاعل ‎Lelie‏ بواسطة مقايسة
الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم )1469 ‎(DRG EIA‏ والتركيز متساوي التكهرب (المثال 5). المثال 7 ‎(gine‏ حمض السياليك حمض السياليك عبارة عن كربوهيدرات مرتبط بالبروتين يعتبر أحادي السكاريد ويوجد في توليفة مع أحاديات السكاريد الأخرى مثل الجلاكتوز» المانوز» غلوكوزامين» غلاكتوزامين والفوكوز. تم قياس ‎lea)‏ حمض السياليك على ‎CG‏ المنقى وفقاً للإختراع باستخدام طريقة تعتمد على طريقة
.Stanton et. al. (J.
Biochem.
Biophys.
Methods. 30 (1995), 37 - 48) 0
— 2 3 — تم قياس ‎Alaa)‏ محتوى حمض السياليك لعينات ‎hCG‏ المؤتلف الخاص بخلايا ‎Per.Co‏ المعدل باستخدام ترانسفيراز ألفا 2 3 سياليل (الذي تم إنتاجه بواسطة طرق الأمثلة 4 و6) والنتائج موضحة في الجدول 1 أدناه (معبر عنها من حيث نسبة مولات حمض السياليك إلى مولات البروتين). المثال 8 مقايسة بيولوجية لهرمون ‎hCG‏ وفقاً لدستور الأدوية الأمريكي تم إجراء مقايسة بيولوجية لتحديد النشاط النوعي لهرمون 706 لكل من عينات الجدول 1 أدناه. تم قياس النشاط وفقاً لدستور الأدوية الأمريكى ‎(USP Monographs: Chorionic‏ ‎Gonadotropin, USPC Official 8/1/09-11/30/09(‏ باستخدام أوفيتريل كمعيار. أوفيتريل له نشاط بيولوجي 26000 وحدة دولية/ مل جرام 2005 ‎(Curr Med Res Opin.‏ ‎Dec; 21(12): 1969 — 76) 0‏ كان حد القبول أكبر من 21000 وحدة دولية ‎ACG‏ مل جرام. موضح في الجدول 1النشاط البيولوجي لعينات هرمونات 06" المؤتلفة المشتقة من خط خلية بشرية تم تعديلها وراثياً باستخدام ترانسفيراز ألفا 2؛ 3 سياليل. جدول 1 ‎EERE‏ ‏السياليك ‎(SA)‏ ‏(ميكرو مول حمض ]13 13 13 13 13 15 سياليك/ ميكرو مل ‎(hCG‏ ‏26 ‏الفعالية وحدة دولية/ | 2536 2490 25009 3 256457 62 ملجم 3 4 3
— 3 3 — 7 الفعالية (أوفيتيريل 10 0 وحدة دولية/ | 97.5 | 96.2 95.8 94.7 98.6 .2 ملجم) 4 (SA) ‏السياليك‎ (ميكرو مول حمض ‎14١‏ 14 13 13 13 سياليك/ ميكرو مل (hCG الفعالية وحدة دولية/ 2722 2653 24230 | 1 26142 ملجم 7 9 7 الفعالية (أوفيتيريل 26000 وحدة دولية/ | 104.7 ]100.5 | 102 101 93.2 ملجم) على النحو الموضح أعلاه؛ الفاعلية مشابهة؛ ويمكن أن تكون أعلى من» أوفيتريل (انظر على سبيل ‎JEN‏ العينة 7). المراجع ‎Andersen CY, Westergaard LG, and van Wely M. (2004). FSH isoform‏ composition of commercial gonadotrophin preparations: a neglected 5 aspect? Reprod Biomed Online. 9(2), 231-236.
Bassett RM, and Driebergen R. (2005). Continued improvements in the quality and consistency of follitropin alfa, recombinant human FSH.
Reprod Biomed Online. 10(2), 169-177.
— 3 4-
D’Antonio M., Borrelli F. , Datola A., Bucci R. , Mascia M. , Polletta P.,
Piscitelli D., and Papoian R. (1999) Biological characterization of recombinant human follicle stimulating hormone isoforms. Human
Reproduction 14, 1160-1167
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1979) Isolation, cloning and 5 sequence analysis of the cDNA for the alpha-subunit of human chorionic gonadotropin. Nature, 281, 351-356.
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1980) The cDNA for the beta-subunit of human chorionic gonadotropin suggests evolution of a gene by readthrough into the 37-00130582160 region. Nature, 286, 684-387. 10
Kagawa Y, Takasaki 5, Utsumi J, Hosoi K, Shimizu H, Kochibe N, and
Kobata A. (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of natural human interferon—beta 1 and recombinant human interferon—beta 1 produced by three different mammalian cells. J Biol
Chem. 263(33), 17508-17515. 5
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. (1951) Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 193(1), 265- 75.
Lowry, PJ, McLean, C, Jones RL and Satgunasingam N. (1976)
Purification of anterior pituitary and hypothalamic hormones Clin Pathol 0
Suppl (Assoc Clin Pathol). 7, 16-21.
Royle L, Radcliffe CM, Dwek RA and Rudd PM (20006) Methods in
Molecular Biology, ed | Brockhausen—Schutzbach (Humana Press), 347:
Glycobiology protocols, 125-144.
— 3 5 —
Steelman SL, and Pohley FM. (1953) Assay of the follicle stimulating hormone based on the augmentation with human chorionic gonadotropin.
Endocrinology. 53(6), 604-616.
Svensson EC, Soreghan B, and Paulson JC. (1990) Organization of the beta—galactoside alpha 2,6-sialyltransferase gene. Evidence for the 5 transcriptional regulation of terminal glycosylation. J Biol Chem. 265(34):20863-20868.
Takeuchi M, Takasaki S, Miyazaki H, Kato T, Hoshi S, Kochibe N, and
Kobata A (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of human erythropoietins purified from urine and the culture 0 medium of recombinant Chinese hamster ovary cells. J Biol Chem. 263(8), 3657-3663.
Ulloa—Aguirre A, Midgley AR Jr, Beitins ‏ذا‎ and Padmanabhan V. (1995).
Follicle-stimulating isohormones: characterization and physiological relevance. Endocr Rev.16(6), 765-787. 5
Ulloa—-Aguirre A, Timossi C, Barrios—-de-Tomasi J, Maldonado A, and
Nayudu P. (2003). Impact of carbohydrate heterogeneity in function of follicle—stimulating hormone: studies derived from in vitro and in vivo models. Biol Reprod. 69(2), 379-389. ‏محسنة‎ hCG ‏ألفا‎ 20 (1 ‏محسنة (تعريف التسلسل رقم‎ hCG ‏تسلسل نيوكلوتيدات ألفا‎ 1 atggaCtact acCgGaaGta CgcCgcCatc ttCctggtGa cCCtgAGCgt gttCctgcaC
— 3 6 — 61 gtGetGeaCA GegeCcectga CgtgcaggaC tgecccCgaGt gecacCcetGea ggaaaacccC 121 ttettcAGee agecTggCgce ceccTatCcetG cagtgcatgg getgetgcett cAGCagagcC 181 taCcccacCc cCctGCggAG caagaaAacC atgCtggtGe aGaaAaacgt 5
GaccAGCGag 241 AGcacCtgct gCgtGgcCaa GAGCtaCaac CgggtGacCg tGatgggCgg
CttcaaGgtg 301 gagaaccaca cCgcCtgcca ctgcagCacC tgCtaCtaCc acaaGtcCt تسلسل بروتيئات ‎hCG WH‏ محسنة ‎MDYYRKYAAI FLVTLSVFLH VLHSAPDVQD CPECTLQENP‏ 1 ‎FFSQPGAPIL QCMGCCFSRA‏ ‎YPTPLRSKKT MLVQKNVTSE STCCVAKSYN RVTVMGGFKV‏ 61 ‎ENHTACHCST CYYHKS‏ بولي ببتيد بيتا غونادوتروفين مشيمي بشري رقم القيد 000728 0لا تسلسل نيوكلوتيدات بيتا ‎hCG‏ (تعريف التسلسل رقم 2) تسلسل النيوكلوتيدات ‎atggagatgt tccaggggct getgcetgttg ctgctgectga 08199929090 8‏ 1 61 tccaaggagc cgcttcggec acggtgccgce cccatcaatg ccaccctgge tgtggagaag 20 121 gagggctgce ccgtgtgcat caccgtcaac accaccatct gtgccggcta ctgccccace
181 atgacccgceg tgctgcaggg ggtcectgecg 66-10-6616 aggtggtgtg 88-1386006 241 gatgtgcgct tcgagtccat ccggcetecct ggetgeeccge geggegtgaa cceegtggte 301 tcctacgecg tggctctcag ctgtcaatgt gcactctgce gecgecageac cactgactge 361 9999910008 aggaccaccce cttgacctgt gatgaccccc gettccagga ctectettee 421 tcaaaggccc ctccceccag ccttccaagt ccatccecgac tcececggggece ctcggacace 5 481 ccgatcctcc cacaataa hCG ‏تسلسل بروتينات بيتا‎ 1 MEMFQGLLLL LLLSMGGTWA SKEPLRPRCR PINATLAVEK
EGCPVCITVN TTICAGYCPT
61 MTRVLQGVLP ALPQVVCNYR DVRFESIRLP GCPRGVNPVV 10
SYAVALSCQC ALCRRSTTDC
121 GGPKDHPLTC DDPRFQDSSS SKAPPPSLPS PSRLPGPSDT PILPQ 4 ‏ببيتا جلاكتوزيد ألفا 2 3- ترانسفيراز سياليل‎
L23767 ‏رقم القيد‎ )3 ‏تسلسل نيوكلوتيدات 5136/84 (تعريف التسلسل رقم:‎ 5 1 ATGTGTCCTG CAGGCTGGAA GCTCCTGGCC ATGTTGGCTC
TGGTCCTGGT CGTCATGGTG
61 TGGTATTCCA TCTCCCGGGA AGACAGGTAC ATCGAGCTTT
TTTATTTTCC CATCCCAGAG
— 3 8 — 121 AAGAAGGAGC CGTGCCTCCA GGGTGAGGCA GAGAGCAAGG
CCTCTAAGCT CTTTGGCAAC
181 TACTCCCGGG ATCAGCCCAT CTTCCTGCGG CTTGAGGATT
ATTTCTGGGT CAAGACGCCA
241 TCTGCTTACG AGCTGCCCTA TGGGACCAAG GGGAGTGAGG 5
ATCTGCTCCT CCGGGTGCTA
301 GCCATCACCA GCTCCTCCAT CCCCAAGAAC ATCCAGAGCC
TCAGGTGCCG CCGCTGTGTG
361 GTCGTGGGGA ACGGGCACCG GCTGCGGAAC AGCTCACTGG
GAGATGCCAT CAACAAGTAC 10 421 GATGTGGTCA TCAGATTGAA CAATGCCCCA GTGGCTGGCT
ATGAGGGTGA CGTGGGCTCC
481 AAGACCACCA TGCGTCTCTT CTACCCTGAA TCTGCCCACT
TCGACCCCAA AGTAGAAAAC
541 AACCCAGACA CACTCCTCGT CCTGGTAGCT TTCAAGGCAA 15
TGGACTTCCA CTGGATTGAG
601 ACCATCCTGA GTGATAAGAA GCGGGTGCGA AAGGGTTTCT
GGAAACAGCC TCCCCTCATC
661 TGGGATGTCA ATCCTAAACA GATTCGGATT CTCAACCCCT
TCTTCATGGA GATTGCAGCT 20 721 GACAAACTGC TGAGCCTGCC AATGCAACAG CCACGGAAGA
TTAAGCAGAA GCCCACCACG
— 3 9 — 781 GGCCTGTTGG CCATCACGCT GGCCCTCCAC CTCTGTGACT
TGGTGCACAT TGCCGGCTTT
841 GGCTACCCAG ACGCCTACAA CAAGAAGCAG ACCATTCACT
ACTATGAGCA GATCACGCTC
901 AAGTCCATGG CGGGGTCAGG CCATAATGTC TCCCAAGAGG 5
CCCTGGCCAT TAAGCGGATG
961 CTGGAGATGG GAGCTATCAA GAACCTCACG TCCTTCTGA 5736/84 ‏تسلسل بروتينات‎ 1 MCPAGWKLLA MLALVLVVMV WYSISREDRY IELFYFPIPE
KKEPCLQGEA ESKASKLFGN 10 61 YSRDQPIFLR LEDYFWVKTP SAYELPYGTK GSEDLLLRVL
AITSSSIPKN IQSLRCRRCV
121 VWVGNGHRLRN SSLGDAINKY DVVIRLNNAP VAGYEGDVGS
KTTMRLFYPE SAHFDPKVEN
181 NPDTLLVLVA FKAMDFHWIE TILSDKKRVR KGFWKQPPLI 5
WDVNPKQIRI LNPFFMEIAA
241 DKLLSLPMQQ PRKIKQKPTT GLLAITLALH LCDLVHIAGF
GYPDAYNKKQ TIHYYEQITL
301 KSMAGSGHNV SQEALAIKRM LEMGAIKNLT SF سلسلة ‎hCG Wi‏ محسنة تسلسل نيوكلوتيدات سلسلة ألفا ‎hCG‏ محسنة (تعريف التسلسل رقم: 4(
1 gcCcctgaCg tgcaggaCtg cccCgaGtge acCctGeagg aaaacccCtt cttcAGccag ccTggCgccc cTatCctGea gtgcatgggce tgctgceticA GCagagceCta 61
CcccacCccC 121 ctGCggAGca agaaAacCat gCtggtGecaG aaAaacgtGa ccAGCGagAG 5 cacCtgctgC 181 gtGgcCaaGA GCtaCaacCg ggtGacCgtG atgggCggCt tcaaGgtgga gaaccacacC 241 gcCtgecact gcagCacCtg CtaCtaCcac aaGtcCt تسلسل بروتينات سلسلة ألفا ‎hCG‏ محسنة ‎APDVQDCPEC TLQENPFFSQ PGAPILQCMG CCFSRAYPTP‏ 1 ‎LRSKKTMLVQ KNVTSESTCC‏ ‎VAKSYNRVTV MGGFKVENHT ACHCSTCYYH KS‏ 61 عديد ببتيد ‎hCG Wl‏ 10073386 ‏رقم القيد‎ 5 )5 ‏تسلسل نيوكلوتيدات ألفا 6 (تعريف التسلسل رقم:‎ 1 atggattact acagaaaata tgcagctatc tttctggtca cattgtcggt gtttctgcat 61 gttctecatt ccgctectga tgtgcaggat tgcccagaat gcacgctaca ggaaaaccca 121 ttettctccc ageecgggtge ceccaatactt cagtgcatgg getgetgcett ctctagagcea 181 tatcccactc cactaaggtc caagaagacg atgttggtcc aaaagaacgt cacctcagag 20
241 tccacttgct gtgtagctaa atcatataac agggtcacag taatgggggg tttcaaagtg 301 gagaaccaca cggcgtgcca ctgcagtact tgttattatc acaaatctta a hCG ‏تسلسل بروتينات ألفا‎ 1 MDYYRKYAAI FLVTLSVFLH VLHSAPDVQD CPECTLQENP
FFSQPGAPIL QCMGCCFSRA 5 61 YPTPLRSKKT MLVQKNVTSE STCCVAKSYN RVTVMGGFKV
ENHTACHCST CYYHKS

Claims (1)

  1. عناصر الحماية 1- عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ يشتمل على تسلسل حمض نووي ‎nucleic acid‏ 006 وفقا لتعريف التسلسل رقم: 1. 2- عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ يشتمل على تسلسل حمض نووي ‎nucleic acid‏ ‎sequence 5‏ وفقا لتعريف التسلسل رقم: 4. 3- عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ يشتمل على تسلسل حمض نووي ‎nucleic acid‏ ‎sequence‏ 53 تطابق تسلسل على الأقل 797 مع الحمض النووي ‎nucleic acid‏ الخاص بتعريف التسلسل رقم: 1. 10 4- عديد النيوكليوتيد 0070110160106 يشتمل على تسلسل حمض نووي ‎nucleic acid‏ ‎sequence‏ 53 تطابق تسلسل على الأقل 797 مع الحمض النووي ‎nucleic acid‏ الخاص بتعريف التسلسل رقم: 4. 5- خلية ‎cell‏ تتسم بأنها تشتمل على تسلسل مدمج في الجينوم ‎genome‏ الخاص بها يرمز لسلسلة ألفا ‎coding for the or chain‏ الخاصة بهرمون ‎hCG‏ يتم اختياره من: تسلسل ‎ly‏ ‏لتعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم: 1؛ تسلسل وفقاً لتعريف التسلسل رقم: 4؛ وتسلسل ذو تماثل على الأقل 797 مع تسلسل تعريف التسلسل رقم : 4 6>- خلية ‎cell‏ وفقا لعنصر الحماية 5 تتسم بأنها تشتمل ‎Lind‏ على حمض نووي ‎Sip)‏ منقوص الأكسجين تكميلي ‎cDNA Complementary nucleic acid‏ مدمج ‎integrated‏ في الجينوم 6 الخاص بها يرمز لترانسفيراز ألفا 2« 3 سياليل -81008-2,3 ‎encoding‏
    ‎.sialyltransferase‏
    — 3 4 — 7- خلية وفقا لعنصر الحماية 5 تتسم بأنها تشتمل أيضا على تسلسل حمض نووي ‎nucleic‏ ‎acid sequence‏ مدمج ‎integrated‏ في الجينوم ‎genome‏ الخاص بها يرمز لسلسة بيتا ‎B chain‏ الخاصة بهرمون ‎hCG‏ ‏5 8- طريقة لإنتاج بروتين ناتج ‎sage‏ الاتحاد الجيني ‎recombinant‏ في خلية ؛ تشتمل على زراعة خلية وفقا لعنصر الحماية 5 فى وسط مناسب ‎suitable medium‏ وحصاد ‎harvesting‏ ‏البروتين الناتج عن عودة الاتحاد الجيني ‎recombinant protein‏ من الخلية ‎cell‏ المذكورة و/ أو الوسط ‎medium‏ المذكور. ‎Gy dah -9 0‏ لعنصر الحماية 8 تتسم بأن البروتين المؤتلف هو هرمون ‎hCG‏ ناتج عودة الاتحاد الجينى ‎.recombinant‏
    ‎EY‏ . ا تي ‎Capa.‏ الها ‎PE SEE‏ اح ‎Et eh‏ ‎ONT‏ د ‎EE LEA Si‏ ‎PI DUC:‏ 7 متش لف ‎hi‏ :5 مجح كاحت ات لحا لا ات لت ا ا اه ما الى اا الال تتا صا ع ات تا ‎N 8 8 08 1 1 a 8 8 : 2 id 8 8 8 : 8 1‏ : 1 8 الاح انا ا تج مح مح لجح لوت ‎A‏ الما للح توحلا المت حا لح ما اق اهاي ام جاح حت انا رح اق لحرا لال لوي اا ااا احا اتاج لد فح لح لاض اا لمات حر ال ا الح حا ‎EC AXE CNY, ١ . et ١‏ د تللح جه احاح اناا ححا ااا رطنت اللا ‎ey‏ مجامج م مج ‎BN SENSE‏ اي ‎Ny or‏ :0 لجا الام ‎um‏ د لج اخ اع | اج الا 8 ‎SE Wa‏ اله ‎a 2 : Ps : RIE SER SN‏ لماج ا ا ا ‎SUD: SUN DUNE OU: JOE A SIE ASO: VNU Ee SOU AR DUE ON.
    AOE SOE: SOO‏ ا لح ل ل ل ل ‎UE I eC So i rs EO Ee SER EA IAS NR SR SASS AN‏ ااا ‎AC SO SER EER SER‏ ا ايا ‎TY RE SR: RRR SH He AER‏ ‎SRC JE CANES SEL ESE ON 3 SER EOI‏ اه © *# تاج« ا خدج ‎FOS SEHR‏ جتحا ججح ‎A RP EU‏ »م كر ايخ ‎SR SE SEE‏ اتاج ‎LICR J‏ م ‎RC ARE ANA SR HR EET DE ES Sh‏ ا ‎A‏ اا ‎RANE TR OR SR EG DS Se i‏ ‎RR RR ee ed‏ ا لد كا ‎Re‏ ما ان الي مل ا اا كا ‎BE EEE Sr‏ ات ما ‎EE‏ تا ‎EER‏ ‎B ¥ 0‏ 3 يح مجح ‎Y 3 % ? + H Fra 3 3 + Re‏ ? 0 3 : : جب ‎a‏ ‎UB a FREE PFET Ety ET 0 0 VITU EUV Strpps sto‏ 1 0ل تند ‎TE‏ تت ‎TOE TE A‏ تخ يت ‎ER ATT VG SS SE J TOR‏ ات اتاج تخد زات ‎EA CG TT CT‏ جد ‎La 0 SL‏ الا ا ‎J TT TITTY BN ET TTT ; TTT ; TITTY‏ 5 : مووي 5 ‎EE JU RS 7‏ كما ‎RO‏ دج ‎i J AS SI (RUE 1 J J AR HR‏ جح ب <> جح ‎RSET A‏ بد جحج احج ءاج ‎ES ER IRS‏ .م > ‎Rey‏ لي ما سج معنا لوا الس ل عا ‎Eo‏ حل حل الي الو م جل لاج ان ل سل اريت ا ا ردي لاوز اي لداجي الا اا ار الاي اج الات اح ا اح لمج ‎a‏ ‎sy,‏ ل ل ل ل ل ل ل الا اال ال اتا الم عدج الج لضن الج ااا ‎a i fm‏ اداح ا لل الح م لمشو د الح اد المح املد لدت اق لضت لا الا د الج ا را ل ا الح الج لل ا ال ةا ‎rrr‏ ا ا ااا لا ا اا اا اا لاا ا حي اا الات الا الم تج ا ا لا ف ل ل ‎TT‏ ل ‎TT‏ ا ل ا ل ل ا ا ا ا ل ا ا لني ل ل ل ‎TT‏ ل ‎TC ET ET‏ الع الل يه ا ليا الم الي اليا يعي ين ع امار اي را او مقن لض ويك ‎AC a‏ اليا ع ارين رك الوا يا ااه لاد ‎OR‏ لماي ا ا اذ 34ح ‎CR SE‏ احا دا حم حك عد جد كم اتج ابد 2 لا كلا كنا لمت انتج اجا خا ناتك خخ احج ‎SRE‏ لج اك مقا
    ‎EC TEES TR‏ ا ا ل ل ‎BIN‏ 7 الله ‎Way‏ ذا ‎Fs‏ ‏اي م ل ا مم م د امي ا اي لماع اا ل حت لو ا ل ا مح ا مح ال ا امت امسا ممع اماك لمحي ام لاو لاج ‎RSA‏ ال ا ‎A‏ ‎Sb‏ اده دين اا الي د اح لد ا ‎x x x x aaa ee Se 1 1‏ اما ‎af BRIBE SBA‏ .ااا 1 ‎fry‏ : 1 ‎rR SC.
    SSE CN NNEC SE SOU “NSE SSE > SNC SUN > COL: ER SU < SE NE: SE JRO: -SEUEE: RE Ce cE IE SSE.
    A SECU Ey‏ ‎A‏ ؟ج وج لج خة .يج ‎EA‏ جح جج نجه ؟ 2ج كاج جك ‎EL JEL TR‏ جح ةا ؟: و ‎RIE RI I BI‏ ب ‎RO‏ د 3 + ؟ ‎x‏ ‏اح رمديو لمي ‎x EATER SENTING‏ سمو موي ‎TTR WRT‏ اا و ل مسي ‎EN] LIT BESS HR BEDE THR‏ ا ‎WEEN‏ عي ‎gag‏ مودي ار ا لام ا امد ا ا ل را لضا د ردت رضي الم :نح اتات شتا ل الات اللا انيج ما الح اللا لاا اد الا لاس اا اا ااا الا لا ا ا ل ا الع الحا ا خا اع ا ا ا ا ا ا ا ات ا ا ا ل ا ا ا ال الا ا كالسا ال الجا ااا اا ااا ‎me‏ ‎ERR TE SE SB SE PI tr Gl‏ لح كم جود عا اج ‎SE USE I SETS) SRG J LER WS‏ 2 جح احج جد ”ع جع جلاع لخج يع مج اي ‎FTE‏ تج م ‎RE TRAE RE NCE SER FR EE EE WR I WEE a SE TE RE OO Nr i ER RR Re a‏ م تيج الى جا هال اي ‎SRP‏ أي ‎SE TI‏ ل جحي ال انها و اانا اجاج أن تيلاي ‎SPREE WEEN, MYVELPESIS TPMRNT‏ أن ناي جحت عاج نل نيا ما نجي الا جه الاج اانا جانيم ا ‎TT‏ اااي : : 3 ل شد ‎SA A‏ ا اا ‎TO I: TER‏ الع ‎AL I‏ اع ا ‎OE‏ ال ا ‎SE.
    TI:‏ اا از ااا ااا اا اا اق ا ا ‎SOE: ca‏ وا مدا ‎BACAR SUR OR JOSS SRC‏ بلجو :سيان ‎SEC Sa Sn‏ اا اا ‎J SO SA SEN GOR.
    UR‏ يات ‎Ye‏ بماد ااا جو او امي ااا نا ‎SAR SE | SI SS‏ لخد د 2ءك لخد جا ‎GNI‏ جع حك احج ‎SI‏ عد جد ‎SE JC SU‏ انم ‎ee SEE 0 ST CEI Lk SOR‏ لد اغبا #ب ‎RATE ORE IPC J‏ ‎a SER A EE Tal Se A‏ كي اااي ‎RR SHE ORE TRE‏ ييا لاج ‎FREER GRRE RE Sa EE‏ ‎A a EE RE‏ مادا لحت ل لات ال اح اما سات الا .0 كرا الكل ايح ااي مم ماه هج جه جع جع جع جع ع ع ع أ ع ع ع ع جع ع جع ع جع ع جع ع ع وج ع جع جع جع جع جع جع جع جع ع جع جع جع جع جع ع ةج ع ع جع ووو ووم لواحي ‎ARE TRAN‏ ب ب ب ب به هه ههه هه عأ هج هج ع لأ ع جع ع ع جع جع ع ع ع جع ع عع ع ع ع جع عجعج عجعج عجو ا ‎J‏ ا ل فز ‎I‏ يد يح احج لكو ره لج كب لايع بيعب كع بك ت ‎ERE ELS REE‏ يكحي ‎EEE EERE EE‏ لت حي اج ات مت رو اغا ‎EE RS‏ ا ‎RR‏ و حت ا ا ا ع ا ع ا ا ااه ا ع اك ا ‎TR‏ اح ‎AE‏ ا عا اه لع اه الم ع عع لصاوي رهجي ‎BEL Tw 7 = R SNE Rly 5 5‏ = ماه لمت تم جد دمن ا تدحت د ال د الت ا تتا الات تاه لا تتا لد لح ل ال ل ا الت د ا د ل 1 نت مد الا 1 ‎x po‏ 1 8 ا ا 4 ‎Seo‏ = ل ب 8 ‎Wn 8 RY‏ ب = اج .8 ‎ho 8 AYRE SE 1 2 bs‏ ‎iss‏ سويد امج لد و لحا مسي ادس اسدية حدة اممسوة الجووا امد اديه اسدا المسددة م اديه لح جو لا لح لين اديت الاح الما المت لان الات ال ا كر ال اكه اس ا أ ا الا تمد ل ‎RE EE‏ ع ل ‎RE‏ ا ل ا لان ‎FIAT‏ اد اللا ‎UR‏ ال ‎ER PEL‏
    الج اب ام لا ا ا ال لح نا راي اللخ باج لاعن و لج اا ا : 1 1 1ج الكل + 2 الببجببا بي ‎AAT‏ اموي 3 ‎APE‏ المينية ‎ARE Nae REIS‏ ”د +« ادبي ‎ATS‏ > ‎Nn ARE‏ لس م تان رات د لح المت ا حم لاا رس لت ا جد ا جد من اه اد حك الماع ا م اح الت مدل رايت مرا لاتحت لات ادن الات دي ال ل ل ا ال ا ل ا ل أ ات اتات ا ‎EE nr Ra‏ ال لتاق ا ااا ا ااا اساسا لتلا ا اا لاا لم سحا سالا سسا سلا اسلا لاا ا الا اتات ااا ‎I TFA‏ ل ‎REDE SAS ESR $5 £3‏ رجات ما دانم امن رح م لما راض ل جه لا للج رح لتحا ام الما المي رد د امار د وت تجا ‎I‏ ا الحا ل ا ا ل ماي اما ا ل ‎A EE A Ee SE SEE SE A EE ES Ee ASE A A EE a A ES A A A SA AS INAS‏ ا ‎I‏ ا ا ا اا ا اا ا اتا ان نت اا ا اا ا انا اا انا ا ان ا ا م ا و ل ال ا ا اي ايت لم ال ‎SBE‏ المي ا اج م التي الم ‎SUELO‏ ال ام ‎SER‏ ا الي اللا الم الي المت الي ال المي اي المي ا اميد الي اي ال د ل ل ل ا ارد ده لذ نا نا عا ل لد د عا لح نا عدانه لم لنت لانت لع دكت ال الت كد ال نادت لس أت حم أ م ات لد نان اد ان ‎EE‏ د ا ام ‎TI‏ الت الك مال حي لك ا كد نا المت حل امار م لمم را لهج ‎MK Ta‏ جين كرادت فل جوت اماي وجي ‎I‏ لج الود ترد ‎TA‏ رايد الي اح لكر د اموا ا حي را د ‎NIE‏ ادا لح ا ‎SA EE es‏ ا ا ا ا ا ا ا ا ا 4 ل ال ااا ااا ااا ااا اا اا ‎ET‏ ااا اا تيناج ال لاف لدانلا حجرالا علا بك لمح اج املك بحا الكل اعم اهل الحم لحك اهيا ليا لهي لكي ل الخد لحيها عي الك انل ليا هك جيه الوجاناك تجا امن الى اللحناية ارك وا للحم ومو د ات حو ‎A‏ ا امت اح ا لاحت ارات المي ‎EN AN XY RNR NIRA AR‏ ار لوت احم احا ‎ME‏ التو احلا ا كت د حا الما حا ‎NN‏ ‏ا ا ااا لتق ‎OU OER SO‏ تيج تخ تت تخ متت ‎Sn SiN‏ كر وي لو ا ارين ليمي وين امي لمي متحي ‎SUT‏ امي دا لومي المي الجن لد المي اكويية اي اي ‎LA‏ وني وي ين مين ‎EU‏ ايد المي ‎TE‏ ميم لمي امي تين اوح يي اي - ‎TU‏ الح ا ام معيو لوليا ب وات لاع الا ايا الوه اتا دوا يحو الوا امت ااا ند وا الوا واد اذا اسهد الا ناويد هيج واي رياح لمكي لي نم اليك توه عي ل لماه لجلا اسيك ون يك وكيا الام الال اير الكو مامت تاي لك ا جاه ا أي يا مانن يه كام علي باتك ع خاي متا مرا اماك لم مره اع لاقام اه ع أيه لماع ا لك ره نه ع اجات ع لمانا جا وان ا اميك م اااي يا جز رجه ال ل تي جاه اي ماما عات اوج غات وهاه ات اق تم على لمجا ا اماج لماي ‎Re‏ 0 ‎aa Rae‏ ل ا ال ع ا ا ال اا ا ا ا ااه اه ال ال حا اع ‎١‏ باق ‎RR RR A‏ ا ا ‎TN NA‏ ااانا ‎FR ID JV JC UL FC ER SI HR SP NR JPR RC SR FE CHE SR SU‏ نا الا اسيك لست ساسلا لالس ل رات سياه ‎Re a3‏ جا كايا و ما لراك اي الجا ‎FE i TR EE‏ ‎vd‏ لد اند م مر الحو لحت ‎NY NA NOR A‏ رحا الح اعت الح ان ارح زر الاح رج لاحت تيح حو او لوكت 0 ‎NI‏ لاا تح ا ديت ارايت ‎MEE YN‏ ات احا لح حت ل لح ال ‎SR ET‏ ‎en‏ م ين ات و سيت ار ليت ل و و ل ل ل ا اش ‎SS‏ اتات جاجح جح تباج حت جعي ‎Sol‏ ا اا ااا ‎J: J‏ اتا الم ل حي لو امي الم الم ديات الم اميا المي لمح ل المي مر :لم اميد امت مر مسرم مم تمي مارم لمات ممم الم ال رمي اميم تمع عمد ام ممم ص الم ل ا ل ل ل ا اللا ااه طاو لاوا اج ااه اليا كا ما و الج الاي ل ارا اح جع الما ل واه الور لا الا كياج لجا احج الك فته كحضا لك مك مكيل وك راك العامة اما اع اطي جاه روك دن الماش مج ‎NE‏ ارال ميجن وال اد اشح لاس ‎RSE‏ مدان الاي ‎ST‏ لحل اجن ار ضر دان لاج تجن الا لجان ‎I‏ لادان تحار الات قوعت لتر احج كات اجاح الجا دا الح عاد تجن عه ااي ا اا اتا ‎Ch‏ الح الحا ا ااا اتاج ااا اا ااا اا ااا ا ااا ااا ااا اس ااا اناج ان بسح نح اا ‎SURE SEE DEER: CEPR ESL SR CEE SES Yi‏ تت جات تا ساتت تاتتتي ب ‎JESU NCE‏ تن تكن تن يت شت هت سي ‎E0 CECE CU SEE SERENE JU EEE SEE‏ ‎EE A EE‏ ا الالو ‎EAE ERE‏ جو حورا جد عجو كر ا مح للج حت حا جا ‎EE‏ حك ار اح جح ‎EE‏ ‏ا ا ا ل ا ا ا ا م ل مم م المي يت امي المي امم مم اح حي المي المح حي الم اي المي مات الم المي اميه المي المت المي الي م المي حي اميت ام الم لوي ليت يت م ل ل ‎Ee Se ae‏ اكه وما الوا الجا الوا ات جع لام جع اتش رط لكا الاي العا لاوا اجات الاي كماو مط الا لان ليما اط لكاي لاط ا لاو ا ولع ‎I‏ ‏دده اتاج للك ات د ا ‎RR‏ ان ‎A‏ ا حي ا وا ا جه ‎NER‏ ا ا لاس الما ان امي اسن لما ا ا ا وح رت ا ‎EN‏ ا ا ‎HRN RR‏ ‎SS 8‏ ل ال ا ا ل و أ اج ل ل ا ا ل ل ا ل ٌُ تت ااا اتا ااا اند نبا اس ا ند ‎Te‏ اا ‎TE SE SH ES‏ بج ‎SU: SOU SOU‏ تلك تخحستتكتنساتكتتكتتتتكتقكتتقكتحنقك مقتتتتقتتققتتتتتسعكق ‎NTS a NE AE Ne Sn Nel AS SE A Sh a Ne eee‏ ل abide tag al OT ‏ولا كوو‎ eS ‏الجر طم‎ (8 an Dl ‏عه ورقط‎ NN fe 2 ‏عديد إضاقة مجموعة الأديتيلء 03ج‎ All G8 ol ‏حرسين‎ "RGHRAY SS Saale ‏راشي‎ Eye Ne gt Higgs ‏عرزل ب م ل حي دالا امول وير‎ <5 amd : ; RE ERE ‏انمي‎ ‏ا الي اا ل ب‎ REN <3 5 ERR < > FCT ‏ين‎ La ‏إضاقة مجمرعة‎ pe Baba bh onde onl 5354 pA sede ‏البامي‎ ‎A LN AT ET AR ‏لح ل ا ا‎ at a A ST ICN a ea GER La 1 gee ‏بيتا فوقالوتزربين‎ ade Se BUG ‏مقي شري ا‎ pn Bed WB Be de RP x ‏ين ا الور ار ا ين ل ا‎ : LR 5 NEB ‏اجا‎ lad ‏وي‎ 1 ‏لعلو‎ aa ‏التؤرضق7-> تر اصع تر ألما كمه‎ «Ree * ‏د‎ pa ‏ختخض اجن‎ clan ¥ a dhe ‏ترصن تلت ميض« رانم‎ Late PROG Gull wad ‏تقل‎ <*© GEAR IE HG Ne GR EY ‏بن‎ 0 ‏ا‎ EE 1 [RSH NEE LER FUER 6 ‏ا متي‎ . CRY CRE adi en TREY 8413 ‏ا‎ RE ‏ل ا اح‎ CE ‏لمش ا‎ hem TECTURE ‏بترو‎ ‎CSE 388 ‏ا ب‎ SS ‏ا‎ 4 2922 EN 0 A 8 ‏با‎ Nas 8 ‏سي‎ ‎Sa py REN ny 8 pie SE en fea 8 ‏ا‎ iE a ‏مم اياطع‎ SE een ‏:ل‎ ‎8 3 Aap Ea Ns 0 ‏ال‎ ‎0 ‏وس‎ ‎po 8 = J ZN SR JERR ‏اا‎ Es a. ‏الس‎ Ua a : Wd aed JRE 2 0
    0 . 4 ‏ا‎ 8 Tre ‏اج‎ ‏شيط‎
    — 4 8 — (STICALAE dif To Wh doll ‏تعبير‎ B00 ‏الشاكل.‎ ‎ey ‎rane aa 4 > : ‏اح ج.‎ { 173 ‏بذ‎ ‎١ ‏ل‎ Wack ‏زم‎ ‎1" ‏8م ا مك روج واجد‎ 88 ’ % | 8 8 ‏ل‎ Food } : | h 2 os Re SEB mt I oe athe 0 8 Hyg
    — 9 4 — الشكل“ WS Foor foe A yy LL ‏اا‎ did dt LD No = ‏ا 1 ا ا‎ 0 ii - ‏إ:‎ ‏ا ا ا‎ = == ‏ا‎ ‎C- ‏اد‎ . Lo aaa TN Se . mmm . .
    ss. ‏ا‎ ‎oN ‎+ SEE = = aeeT 5 TT = BB
    Vs pee sew am) vo, bin Nn ‏ا ب‎ hCG = @ a a ; ‏ل‎ Tames ‏مسي تج «-ح_-دادايسمد0اا6٠ولمل ذايت”لل ””٠٠”ج”ج”<”( ؤإفإأئ0ل“ة ه (#(#و(ودائؤئسص سس ””“0شفظ””ظ”0”و#ظؤآظ‎ 4 ‏ا ا‎ Bn 0 ‏ا‎ ‏اك‎ Ema RR em me hove a Ne . J MEE ‏ا ا‎ << ‏ا اط مق‎ 3 FERRE EE ON 3 : Sa ale LL aa a Tt e—— Fi a A a ‏ا‎ ‎| = ‏ا‎ Ra Fi ha EE ha EE ae Ni pi ‏غونادوثر وفين مشيمي‎ wh ‏و فين مشيمي‎ Bali ‏ا دكي اا لكا ما مك‎ Now ‏ا‎ ‎Sines (BG) ‏دو لم بري بشرري‎ (RTE) oes
    لاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا ‎Sued Authority for intallentual Property‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § 8 ‎Ss o‏ + < م ‎SNE‏ اج > عي كي الج ‎TE I UN BE Ca‏ ‎a‏ ةا ‎ww‏ جيثة > ‎Ld Ed H Ed - 2 Ld‏ وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. ‎Ad‏ ‏صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ v=‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA517390029A 2015-04-24 2017-09-26 طريقة لإنتاج غونادوتروفين SA517390029B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15164965 2015-04-24
PCT/EP2016/059006 WO2016170113A1 (en) 2015-04-24 2016-04-22 Method of production of gonadotrophin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA517390029B1 true SA517390029B1 (ar) 2021-04-04

Family

ID=53002568

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517390029A SA517390029B1 (ar) 2015-04-24 2017-09-26 طريقة لإنتاج غونادوتروفين

Country Status (30)

Country Link
US (1) US10464984B2 (ar)
EP (1) EP3286209B1 (ar)
JP (1) JP6964519B2 (ar)
KR (1) KR102658666B1 (ar)
CN (2) CN107532172A (ar)
AU (1) AU2016251314B2 (ar)
CA (1) CA2975449A1 (ar)
CL (1) CL2017002661A1 (ar)
CO (1) CO2017011964A2 (ar)
DK (1) DK3286209T3 (ar)
EA (1) EA034022B1 (ar)
ES (1) ES2837111T3 (ar)
HR (1) HRP20201945T1 (ar)
HU (1) HUE051879T2 (ar)
IL (1) IL253694B (ar)
LT (1) LT3286209T (ar)
MA (1) MA41949B1 (ar)
MD (1) MD3286209T2 (ar)
MX (1) MX389908B (ar)
MY (1) MY185823A (ar)
PH (1) PH12017501585B1 (ar)
PT (1) PT3286209T (ar)
RS (1) RS61163B1 (ar)
SA (1) SA517390029B1 (ar)
SG (1) SG11201706832PA (ar)
SI (1) SI3286209T1 (ar)
TN (1) TN2017000328A1 (ar)
UA (1) UA124187C2 (ar)
WO (1) WO2016170113A1 (ar)
ZA (1) ZA201707136B (ar)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HRP20241171T1 (hr) 2017-09-01 2024-11-22 Ferring B.V. Pripravak za kontroliranu stimulaciju jajnika
CN108264549A (zh) * 2018-03-29 2018-07-10 北京伟杰信生物科技有限公司 重组绒促性素rhCG的制备方法及应用
DK3787667T3 (da) 2018-04-30 2025-06-16 Ferring Bv Sammensætning til kontrolleret ovariestimulation
CN110812366B (zh) * 2019-11-18 2023-11-17 珠海丽凡达生物技术有限公司 一种可用于激素补充的mRNA药物及其制备方法
CN113337562B (zh) * 2021-05-24 2022-06-03 宁波人健药业集团股份有限公司 使用CHO细胞高效发酵生产rhCG的方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6855544B1 (en) 1999-04-15 2005-02-15 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell
WO2001058493A1 (en) * 2000-02-11 2001-08-16 Maxygen Aps Conjugates of follicle stimulating hormones
US20030036181A1 (en) 2000-06-30 2003-02-20 Okkels Jens Sigurd Peptide extended glycosylated polypeptides
CN1194016C (zh) * 2000-12-29 2005-03-23 申庆祥 新的人绒毛膜促性腺激素－促黄体素融合蛋白及其制法和用途
CN101250531B (zh) * 2006-11-27 2013-04-24 株式会社Lg生命科学 一核苷酸序列、包含该序列的表达载体、该载体转化的动物细胞及利用该细胞生产人fsh的方法
TWI532495B (zh) * 2009-10-05 2016-05-11 菲瑞茵國際中心股份有限公司 藥學製劑
US8326547B2 (en) * 2009-10-07 2012-12-04 Nanjingjinsirui Science & Technology Biology Corp. Method of sequence optimization for improved recombinant protein expression using a particle swarm optimization algorithm
AU2010340358B2 (en) * 2009-12-21 2014-07-24 Pharmathene, Inc. Recombinant butyrylcholinesterases and truncates thereof
CN108949772A (zh) * 2012-04-02 2018-12-07 现代泰克斯公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
JP2015518704A (ja) 2012-04-02 2015-07-06 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 膜タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
CN103539862B (zh) * 2013-11-01 2015-04-01 广州联康生物科技有限公司 一种长效重组促卵泡激素及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
BR112017016895A2 (pt) 2018-03-27
MA41949A (fr) 2018-02-28
EA034022B1 (ru) 2019-12-19
ZA201707136B (en) 2022-03-30
UA124187C2 (uk) 2021-08-04
PH12017501585A1 (en) 2018-02-05
EP3286209A1 (en) 2018-02-28
PH12017501585B1 (en) 2024-02-14
MD3286209T2 (ro) 2021-04-30
RS61163B1 (sr) 2021-01-29
CO2017011964A2 (es) 2018-03-09
HUE051879T2 (hu) 2021-03-29
CN114107315B (zh) 2025-01-24
IL253694A0 (en) 2017-09-28
TN2017000328A1 (en) 2019-01-16
MY185823A (en) 2021-06-11
JP6964519B2 (ja) 2021-11-10
KR20170138390A (ko) 2017-12-15
ES2837111T3 (es) 2021-06-29
AU2016251314B2 (en) 2019-12-05
EP3286209B1 (en) 2020-11-25
JP2018512885A (ja) 2018-05-24
PT3286209T (pt) 2020-12-04
DK3286209T3 (da) 2020-12-21
KR102658666B1 (ko) 2024-04-17
US10464984B2 (en) 2019-11-05
MA41949B1 (fr) 2020-12-31
HRP20201945T1 (hr) 2021-02-05
CA2975449A1 (en) 2016-10-27
US20180127477A1 (en) 2018-05-10
CN114107315A (zh) 2022-03-01
LT3286209T (lt) 2021-02-25
MX389908B (es) 2025-03-20
EA201791724A1 (ru) 2018-04-30
CN107532172A (zh) 2018-01-02
CL2017002661A1 (es) 2018-03-23
SG11201706832PA (en) 2017-09-28
MX2017010884A (es) 2017-12-07
SI3286209T1 (sl) 2021-01-29
WO2016170113A1 (en) 2016-10-27
AU2016251314A1 (en) 2017-08-17
HK1246325A1 (en) 2018-09-07
IL253694B (en) 2021-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12234272B2 (en) Pharmaceutical preparation comprising recombinant HCG
SA517390029B1 (ar) طريقة لإنتاج غونادوتروفين
US9757469B2 (en) Pharmaceutical preparation
HK1246325B (en) Method of production of gonadotrophin
HK1194281A (en) Pharmaceutical preparation
HK1194281B (en) Pharmaceutical preparation
HK1174338B (en) Pharmaceutical preparation comprising recombinant hcg
HK1174338A (en) Pharmaceutical preparation comprising recombinant hcg