Claims (48)
1. Выделенный полипептид flt 3-лиганда (flt 3-L).1. The selected flt 3-ligand polypeptide (flt 3-L).
2. Полипептид по п.1, представляющий собой мышиный flt-3L. 2. The polypeptide according to claim 1, which is a mouse flt-3L.
3. Полипептид по п.1, представляющий собой человеческий flt-3L. 3. The polypeptide according to claim 1, which is a human flt-3L.
4. Полипептид по п. 3, отличающийся тем, что он содержит аминокислоты 1-235 SEQ 1 D N:6. 4. The polypeptide under item 3, characterized in that it contains amino acids 1-235 SEQ 1 D N: 6.
5. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что он представляет собой растворимый flt 3-L. 5. The polypeptide according to claim 1, characterized in that it is a soluble flt 3-L.
6. Полипептид по п.5, отличающийся тем, что он содержит аминокислоты 28 - 160 млм 28-182 SEQ 1 D N:6. 6. The polypeptide according to claim 5, characterized in that it contains amino acids 28-160 ml 28-182 SEQ 1 D N: 6.
7. Полипептид по п.3, отличающийся тем, что он кодируется вставкой кДНК вектора SfHAVEO410 в клетках E.coli DH10B, с номером доступа АТСС 69382. 7. The polypeptide according to claim 3, characterized in that it is encoded by inserting the cDNA of the vector SfHAVEO410 in E. coli DH10B cells, with the access number ATCC 69382.
8. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая полипептид flt 3-L. 8. The selected DNA sequence encoding the flt 3-L polypeptide.
9. Выделенная последовательность ДНК по п.8, отличающаяся тем, что она кодирует мышиный полипептид flt 3-L. 9. The selected DNA sequence of claim 8, characterized in that it encodes a mouse flt 3-L polypeptide.
10. Выделенная последовательность ДНК по п.8, отличающаяся тем, что она кодирует человеческий полипептид flt 3-L. 10. The selected DNA sequence of claim 8, characterized in that it encodes a human flt 3-L polypeptide.
11. Выделенная последовательность ДНК по п.8, отличающаяся тем, что она кодирует аминокислотную последовательность 28-160 или 28-182 SEQ 1DN:6. 11. The selected DNA sequence of claim 8, characterized in that it encodes the amino acid sequence 28-160 or 28-182 SEQ 1DN: 6.
12. ДНК по п.8, отличающаяся тем, что она выбрана из группы состоящей из: (a) кДНК, происходящей из кодирующего района гена flt 3-L;
(b) последовательностей кДНК, выбранных из группы, состоящей из SEQ 1DN: 1 и SEQ 1DN:5;
(c) последовательностей ДНК, гибридизирующихся при умеренно строгих условиях с кДНК (a) или (b) и кодирующих flt 3-L;
(d) последовательностей ДНК, которые вследствие вырожденности генетического кода, кодируют полипептиды flt 3-L, имеющие аминокислотную последовательность полипептидов, кодируемых последовательностями ДНК (a), (b) или (c).12. DNA of claim 8, characterized in that it is selected from the group consisting of: (a) cDNA, originating from the coding region of the flt 3-L gene;
(b) cDNA sequences selected from the group consisting of SEQ 1DN: 1 and SEQ 1DN: 5;
(c) DNA sequences that hybridize under moderately stringent conditions with cDNA (a) or (b) and encoding flt 3-L;
(d) DNA sequences that, due to the degeneracy of the genetic code, encode flt 3-L polypeptides having the amino acid sequence of the polypeptides encoded by the DNA sequences (a), (b) or (c).
13. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность ДНК по п.8. 13. The expression vector containing the DNA sequence of claim 8.
14. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность ДНК по п.9. 14. The expression vector containing the DNA sequence of claim 9.
15. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность ДНК по п.10. 15. The expression vector containing the DNA sequence of claim 10.
16. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность ДНК по п.11. 16. The expression vector containing the DNA sequence of claim 11.
17. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность ДНК по п.12. 17. Expressing the vector containing the DNA sequence indicated in paragraph 12.
18. Клетка-хозяин, трансфицированная или трансформированная экспрессирующим вектором по п.13. 18. A host cell transfected or transformed with an expression vector according to claim 13.
19. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная экспрессирующим вектором по п.14. 19. A host cell transformed or transfected with the expression vector of claim 14.
20. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная экспрессирующим вектором по п.15. 20. A host cell transformed or transfected with the expression vector of Claim 15.
21. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная экспрессирующим вектором по п.16. 21. A host cell transformed or transfected with the expression vector of claim 16.
22. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная экспрессирующим вектором по п.17. 22. A host cell transformed or transfected with the expression vector of claim 17.
23. Способ получения полипептида flt 3-L, предусматривающий культивирование клетки-хозяина п.18 при условиях, способствующих экспрессии, и извлечение полипептида из культуральной среды. 23. The method of producing flt 3-L polypeptide, which involves culturing the host cell of claim 18 under conditions conducive to expression, and removing the polypeptide from the culture medium.
24. Способ получения полипептида flt 3-L, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п.19 при условиях, способствующих экспрессии, и извлечение полипептида из культуральной среды. 24. A method of producing a flt 3-L polypeptide, comprising culturing the host cell of claim 19 under conditions that promote expression, and removing the polypeptide from the culture medium.
25. Способ получения полипептида flt 3-L, предусматривающий культивирование клетки-хозяина п.20 при условиях, способствующих экспрессии, и извлечение полипептида из культуральной среды. 25. A method of producing a flt 3-L polypeptide, which comprises culturing the host cell of claim 20 under conditions that promote expression, and removing the polypeptide from the culture medium.
26. Способ получения полипептида flt 3-L, предусматривающий культивирование клетки-хозяина п.21 при условиях, способствующих экспрессии, и извлечение полипептида из культуральной среды. 26. A method of producing a flt 3-L polypeptide, which involves culturing the host cell of claim 21 under conditions that promote expression, and removing the polypeptide from the culture medium.
27. Способ получения полипептида flt 3-L, предусматривающий культивирование клетки-хозяина п.22 при условиях, способствующих экспрессии, и извлечение полипептида из культуральной среды. 27. The method of obtaining flt 3-L polypeptide, which involves culturing the host cell of claim 22 under conditions that promote expression, and removing the polypeptide from the culture medium.
28. Антитело, иммунореактивное с полипептидом flt 3-L. 28. Antibody immunoreactive with flt 3-L polypeptide.
29. Антитело по п.28, отличающееся тем, что оно является моноклональным антителом. 29. The antibody according to claim 28, characterized in that it is a monoclonal antibody.
30. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество полипептида flt 3-L п.1 и фармацевтически приемлемые носитель, наполнитель или разбавитель. 30. A pharmaceutical composition comprising an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1 and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество полипептида flt 3-L п.3 и фармацевтически приемлемые носитель, наполнитель или разбавитель. 31. A pharmaceutical composition containing an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 3 and a pharmaceutically acceptable carrier, vehicle or diluent.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество полипептида flt 3-L п.5 и фармацевтически приемлемые носитель, наполнитель или разбавитель. 32. A pharmaceutical composition containing an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 5 and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.
33. Способ проведения аутологической трансплантации в больном, получающим цитовосстановительную терапию, предусматривающий:
(a) сбор гемопоэтических клеток-предшественников или стволовых клеток из больного перед цитовосстановительной терапией; и
(b) введение собранных клеток больному после цитовосстановительной терапии;
причем способ дополнительно включает по меньшей мере одну из следующих стадий:
(i) введение эффективного количества flt 3-L больному для увеличения количества циркулирующих клеток-предшественников или стволовых клеток перед их сбором;
(ii) размножение клеток-предшественников или стволовых клеток ex vivo путем контактирования их с эффективным количеством flt 3-L; и
(iii) введение эффективного количества flt 3-L больному для облегчения приживления трансплантированных клеток-предшественников или стволовых клеток в больном.33. A method of conducting autologous transplantation in a patient receiving cytotoxicity therapy, including:
(a) collecting hematopoietic progenitor cells or stem cells from a patient prior to cytoplasmic therapy; and
(b) administering the collected cells to the patient after cyto-restoration therapy;
moreover, the method further includes at least one of the following stages:
(i) administering an effective amount of flt 3-L to the patient to increase the number of circulating progenitor cells or stem cells before they are collected;
(ii) propagation of progenitor cells or stem cells ex vivo by contacting them with an effective amount of flt 3-L; and
(iii) administering an effective amount of flt 3-L to the patient to facilitate engraftment of the transplanted progenitor cells or stem cells in the patient.
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что flt 3-L применяют в комбинации с цитокином, выбранным из группы, состоящей из CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF/1L-3 - слитых белков, L1F и FGF и их последовательных или совместных комбинаций. 34. The method of claim 33, wherein flt 3-L is used in combination with a cytokine selected from the group consisting of CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L- 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11, 1L-12, 1L-13, 1L- 14, 1L-15, GM-CSF / 1L-3 - fusion proteins, L1F and FGF, and their sequential or joint combinations.
35. Способ по п.34, отличающийся тем, что flt 3-L применяют в комбинации с цитокином, выбранным из группы, состоящей из GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-3 и слитых белков GM-CSF/1L-3. 35. The method according to clause 34, wherein flt 3-L is used in combination with a cytokine selected from the group consisting of GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-3 and GM-CSF fusion proteins / 1L-3.
36. Среды для размножения гемопоэтических клеток, содержащие среды для выращивания клеток и эффективное количество полипептида flt 3-L п.1. 36. Media for reproduction of hematopoietic cells, containing media for growing cells and an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1.
37. Способ трансфекции экзогенного гена в недифференцированную ("раннюю") гемопоэтическую клетку, предусматривающий стадии:
(a) культивирование недифференцированных клеток в средах, содержащих эффективное количество полипептида flt 3-L; и
(b) трансфекцию культивируемых клеток из стадии (a) экзогенным геном.37. A method for transfecting an exogenous gene into an undifferentiated ("early") hematopoietic cell, comprising the steps of:
(a) cultivation of undifferentiated cells in media containing an effective amount of the flt 3-L polypeptide; and
(b) transfection of cultured cells from stage (a) to an exogenous gene.
38. Способ переноса экзогенного гена млекопитающему, предусматривающий стадии:
(a) культивирование недифференцированных гемопоэтических клеток в средах, содержащих эффективное количество полипептида flt 3-L;
(b) трансфекцию культивируемых клеток из стадии (a) этим геном; и
(c) введение трансфицированных клеток млекопитающему.38. A method of transferring an exogenous gene to a mammal, comprising the steps of:
(a) cultivating undifferentiated hematopoietic cells in media containing an effective amount of flt 3-L polypeptide;
(b) transfection of cultured cells from (a) this gene; and
(c) administering the transfected cells to a mammal.
39. Способ стимуляции пролиферации Т-клеток в млекопитающем, предусматривающий введение этому млекопитающему эффективного количества полипептида flt 3-L п.1. 39. A method of stimulating T-cell proliferation in a mammal, comprising administering to this mammal an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1.
40. Способ стимуляции пролиферации клеток эритроидного направления дифференцировки в селезенке млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему эффективного количества полипептида flt 3-L п.1. 40. A method for stimulating the proliferation of erythroid cell differentiation in the spleen of a mammal, comprising administering to the mammal an effective amount of flt 3-L polypeptide of claim 1.
41. Способ по п.40, отличающийся тем, что он дополнительно предусматривает введение эффективного количества EPO. 41. The method according to p. 40, characterized in that it additionally provides for the introduction of an effective amount of EPO.
42. Способ лечения больного, имеющего симптомы миелодиспластического синдрома, предусматривающий введение больному эффективного количества полипептида flt 3-L п.1 и, иногда, эффективного количества одного или более факторов роста, выбранных из группы, состоящей из CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF/1L-3-слитых белков, L1F и FGF. 42. A method of treating a patient with symptoms of myelodysplastic syndrome, which involves administering to the patient an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1 and, sometimes, an effective amount of one or more growth factors selected from the group consisting of CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L- 11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF / 1L-3 fusion proteins, L1F and FGF.
43. Способ лечения больного, имеющего симптомы анемии, предусматривающий введение больному эффективного количества полипептида flt 3-L п.1 и, иногда, эффективного количества одного или более факторов роста, выбранных из группы, состоящей из CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF/1L-3-слитых белков, L1F и FGF. 43. A method of treating a patient with anemia symptoms, comprising administering to the patient an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1 and, sometimes, an effective amount of one or more growth factors selected from the group consisting of CSF-1, GM-CSF, SF , G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11 , 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF / 1L-3 fusion proteins, L1F and FGF.
44. Способ лечения больного, имеющего симптомы синдрома приобретенного иммунодефицита, предусматривающий введение больному эффективного количества полипептида flt 3-L п.1 и, иногда, эффективного количества одного или более факторов роста, выбранных из группы, состоящей из CSF-1, GM-CSF, SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L-11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF/1L-3-слитых белков, L1F и FGF. 44. A method of treating a patient with symptoms of acquired immunodeficiency syndrome, comprising administering to the patient an effective amount of the flt 3-L polypeptide of claim 1 and, sometimes, an effective amount of one or more growth factors selected from the group consisting of CSF-1, GM-CSF , SF, G-CSF, EPO, 1L-1, 1L-2, 1L-3, 1L-4, 1L-5, 1L-6, 1L-7, 1L-8, 1L-9, 1L-10, 1L -11, 1L-12, 1L-13, 1L-14, 1L-15, GM-CSF / 1L-3 fusion proteins, L1F and FGF.
45. Способ по п.44, отличающийся тем, что больной получает AZT-терапию. 45. The method of claim 44, wherein the patient receives AZT therapy.
46. Трансмембранное млекопитающее (кроме человека), все половые или соматические клетки которого содержат последовательность ДНК по п.8, введенную в это млекопитающее, или предшественник (предок) этого млекопитающего, на эмбриональной стадии. 46. A transmembrane mammal (except human), all sexual or somatic cells of which contain the DNA sequence of claim 8, introduced into this mammal, or the precursor (ancestor) of this mammal, at the embryonic stage.
47. Способ отделения клеток, имеющих рецептор flt 3 на их поверхности, от смеси клеток в суспензии, предусматривающий контактирование клеток в смеси с контактирующей поверхностью, имеющей на ней flt 3-связывающий белок, и разделение контактирующей поверхности и суспензии. 47. A method of separating cells having a flt 3 receptor on their surface, from a mixture of cells in suspension, involving contacting the cells in a mixture with a contacting surface having flt 3 binding protein on it, and separating the contacting surface and suspension.
48. Способ по п.47, отличающийся тем, что flt 3-связывающий белок представляет собой flt 3-L. 48. The method of claim 47, wherein the flt 3 binding protein is flt 3-L.