RU2823164C2 - Соединение пептидной природы, обладающее способностью связываться с псма, способ его получения и применения - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а также молекулярной биологии и относится к новому классу соединений, которые являются кандидатами средств, для доставки лекарственных или диагностических соединений (агентов) для диагностики, в том числе радиодиагностики, или лечения онкологических заболеваний, в том числе радиотерапии. Предложено соединение пептидной природы, обладающее способностью связываться с ПСМА, общей формулы (I), где значения R¹-R⁵ раскрыты в формуле изобретения, способ получения соединения формулы (I), его применение для получения конъюгата и конъюгат соединения формулы (I) со средством для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген. Соединения могут быть использованы для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими ПСМА, например, такими как клетки рака предстательной железы, и обладают высокой аффинностью и селективностью действия в отношении клеток, экспрессирующих ПСМА, что позволяет использовать их для лечения заболеваний, связанных с высокой экспрессией ПСМА, с меньшей дозировкой при избирательном действии на раковые клетки, не затрагивая здоровые клетки. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл., 56 ил.

Description

Область техники

Изобретение относится к области органической и медицинской химии, а также молекулярной биологии и касается нового класса соединений, которые могут быть использованы в качестве средств для доставки лекарственных или диагностических соединений (агентов) для диагностики или лечения онкологических заболеваний. В частности, диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими ПСМА, такими как клетки рака предстательной железы.

Уровень техники

Рак предстательной железы (РПЖ) сложное и биологически неоднородное заболевание, являющееся одним из наиболее широко распространенных видов онкологических патологий среди мужчин в России и во всем мире. Несмотря на то, что рак простаты является одним из немногих медленно растущих видов злокачественных опухолей, он становится потенциально смертельным при метастазировании. Из-за высокой смертности и болезненности, связанной с прогрессированием заболевания, крайне необходимо развитие новых способов и средств направленной терапии. Поэтому при разработке современных лекарственных средств нацеливание и доставка терапевтических и диагностических агентов на область опухоли может рассматриваться как одна из важнейших задач.

Одним из прогрессивных направлений в разработке эффективных методов лечения рака простаты является создание методов адресной доставки лекарственных средств -направленный транспорт лекарственного вещества в заданную область организма, органа или клетки. Преимуществами такого подхода является уменьшение побочных эффектов и вводимой дозы для улучшения качества диагностики и терапии данного заболевания. В терапии и диагностике рака простаты возможна направленная доставка в ткани опухоли и в ее метастазы за счет взаимодействия с простатическим специфическим мембранным антигеном (ПСМА) - трансмембранным гликопротеином, локализованном на поверхности клеток простаты и суперэкспрессирующемуся в опухолевых клетках. На сегодняшний день предложен ряд низкомолекулярных соединений, селективно связывающихся с ПСМА и имеющих потенциал для использования их в качестве адресных агентов, среди которых самыми перспективными являются производные мочевины (DUPA и DCL).

Избирательное нацеливание радиофармацевтических средств на раковые клетки для визуализации или для терапевтических целей представляет собой сложную задачу.

Из уровня техники известно соединение для образования радионуклидного комплекса, содержащего радиоактивный металл, для визуализации опухолевой ткани, экспрессирующей ПСМА, а также способ его получения и применения для визуализации (патент RU2532912C2 «Технеций- и рений-бис(гетероарильные) комплексы и методы их применения для ингибирования PSMA», 20.11.2014). Известное соединение включает лиганд на основе производного мочевины, линкер и хелаторный фрагмент для связывания с радионуклидом.

Из уровня техники также известно соединение для образования комплекса с технеция-99 м/рения для диагностики/лечения рака предстательной железы, а также способ его получения (патент RU2692126C1 «Способ получения производного мочевины с хелатным центром, тропного к простатическому специфичному мембранному антигену для связывания технеция-99 м/рения для диагностики/лечения рака предстательной железы», 13.02.2018). Указанное соединение на основе производного мочевины с хелатным центром, тропного к простат-специфичному мембранному антигену для связывания технеция-99м/рения 188/186 для диагностики рака предстательной железы, включающий получение конъюгата ингибитора простат-специфичного мембранного антигена (ПСМА) с хелатирующим агентом на основе сукциимидного эфира ω-бис(пиридин-2-илметил)амино)алифатических кислот, заключающийся в том, что в качестве ингибитора ПСМА используют (3S,7S,25S,28S)-33-амино-25,28-дибензил-5,13,20,23,26,29-гексаоксо-4,6,12,29,24,27,30-гептаазатриоктан-1,3,7-трикарбоновую кислоту, а в качестве хелатирующего агента сукцинимид-1-ил 6-(бис(пиридин-2-ил метил)амино)гексаноат.

Одним из примеров радиофармацевтических конъюгатов на основе лигандов ПСМА является пример из RU2730507C1, однако данная структура представляет собой соединение, не содержащее длинный гидрофобный линкер для повышения аффинности к ПСМА.

Наиболее близким к заявляемому соединению является простат-специфический антиген для терапии рака предстательной железы, соединения характеризуются наличием в структуре мочевины на основе глутаминовой кислоты и лизина (DCL) различных галогензамещенных бензиловых производных при ε-положении лизина и в структуре линкера, в виде дипептида из ароматических аминокислот фенилаланина и\или тирозина, а также его бром-замещенных аналогов, с различной конфигурацией оптического центра аминокислот (Патент RU2697519C1). Представленные в данной работе соединения, обладают высокой аффиннцостью к ПСМА, однако данные показатели являются недостаточно высокими.

Синтетическая схема, приведенная в RU2697519C1, заключающаяся в синтезе тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда формулы (2):

с последующим алкилированием полученного тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда с получением соединения формулы (II):

где X, Y, Z независимо друг от друга представляют собой F, Cl, Br, Н

с последующим ацилированием производными азида бутаной или пентановой или гексановой кислот с получением азидного производного алкилированного производного ПСМА-лиганда с дальнейшей реакцией восстановления азида до аминогруппы в присутствии трифенилфосфина и воды в растворе ТГФ или в растворе метанола с использованием водорода в присутствии палладия на углероде в качестве катализатора и получением соединения формулы (III):

где X, Y, Z представляют собой Р, Cl, Br, Н, n=3-5,

которое модифицируют янтарным ангидридом в присутствии диизопропилэтиламина или триэтиламина, с получением производного соединения ацилированного янтарным ангидридом, далее осуществляют получение дипептидов производных ароматических аминокислот, представляющих собой фенилаланил-фенилаланин или фенилаланил-тирозин формулы (IV), для связывания с модиф ицированным фрагментом линкера,

затем получают реакцией ацилирования производным соединения (III), ацилированного янтарным ангидридом, дипептида формулы (IV) тритретбутил производное коньюгата радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера, включающего фрагменты 6-аминогексановой или 5-аминопентановой или 4-аминобутановой кислот, фрагмент фенилаланина или его производное, фрагмент тирозина или его производное общей формулы (V):

где n=3-5;

X, Y, Z независимо друг от друга представляют собой F, Cl, Br, Н;

R=ОН, Н;

R₁=H, Br

с последующим удалением тритретбутильных защитных групп соединения формулы (VI) с получением ковалентно-связанных ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера общей формулы (I) занимает ориентировочно от 20 до 24 рабочих дней.

Технической проблемой, решаемой заявялемым изобретением, является разработка новых средств доставки диагностических или терапевтических средств, включающих ПСМА-лиганд с линкером, с высокой степенью селективности действия, а также разработка способа его получения.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом заявляемой группы изобретений является высокая аффинность и селективность действия заявляемых соединений в отношении клеток, экспрессирующих ПСМА. Например, для соединения 127 (X₁=H, Х₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, L-Phe-L-Tyr(3-NO₂)), (IC₅₀ (127)=1.5±1.0 нМ; IC₅₀ (ZJ-43)=11±3 нМ; IC₅₀ (2-РМРА)=80±24 нМ; IC₅₀ («Соединение 70» RU2697519C1, X₁=H, Х₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, L-Phe-L-Tyr;)=9±3 нМ).

Данные соединения позволяют расшить арсенал перспективных кандитатов для разработки лекарственных и диагностических средств для лечения заболеваний, связанных с высокой экспрессией ПСМА, с меньшей дозировкой при избирательном действии на раковые клетки, не затрагивая здоровые клетки.

Заявляемый способ получения соединений является более экологичным и безопасным, а также времяэкономичным, со средним общим временем получения ПСМА-связывающего лиганда до 15 - 17 рабочих дней (от 20 до 24 по прототипу).

Технический результат достигается средством для доставки лекарственного или диагностического агента, представляющим собой ковалентно-связанные ПСМА-связывающий лиганд на основе производного мочевины структуры DCL и модифицированный гидрофобный пептидный линкер, включающий фрагменты 6-аминогексановой, фрагмент фенилаланина, фрагмент тирозина или его производное, общей формулы:

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой NO₂, ОМе, OEt, ОН, СООН, N(Me)₂, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=ОН, Н; R₂=Н, ОН; R₃=Н, Br; NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

Также поставленная задача решается способом получения заявляемого средства, включающим получение тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда формулы (2):

с последующим алкилированием полученного тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда с получением соединения общей формулы (II):

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина.

с последующим получением соединения, содержащего алкилированное тритретбутил производное ПСМА-лиганда и фрагмент линкера общей формулы (III):

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина.

которое модифицируют янтарным ангидридом, с получением производного соединения ацилированного янтарным ангидридом, общей формулы (IV):

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина.

далее осуществляют сборку пептидной последовательности на полимерной подложке дипептидов производных ароматических аминокислот, для связывания с модифицированным фрагментом линкера, общей формулы (V):

где R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Cl, OtBu, Br; NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

После проводят реакцию пептидного синтеза с последующим снятием с полимерного носителя с получением тритретбутильного производного лиганда ПСМА общей формулы (VI)

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутствие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Cl, OtBu, Br; NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

затем получают тритретбутил производное радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера общей формулы (VII):

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутствие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Cl, OtBu, Br; NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

с последующим удалением тритретбутильных защитных групп соединения формулы (VII) с получением ковалентно-связанныых ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера общей формулы (I).

При этом получение алкилированного тритретбутил производного ПСМА-лиганда осуществляют путем восстановительного аминирования замещенными бензальдегидами, а получение соединения формулы (III) проводят путем ацилирования производными азидогексановой кислот с получением азидного производного с последующей реакцией восстановления азида до аминогруппы. Реакцию восстановления азида до аминогруппы проводят в присутствии трифенилфосфина и воды в растворе ТГФ при нагревании. Модификацию янтарным ангидридом фрагмента линкера, представляющего собой алкильный фрагмент, осуществляют реакцией ацилирования янтарным ангидридом аминогруппы в присутствии ненуклиофильных оснований, в качестве которых используют диизопропилэтиламин. Получение пептидных последовательностей осуществляют на полимерной подложке с использованием Fmoc-защищенной аминокислоты (2 мол. экв., относительно емкости смолы для твердофазного пептидного синтеза) и агентов сочетания HBTU/HOBt/DIPEA (HBTU (2 мол. экв., относительно емкости смолы для твердофазного пептидного синтеза), HOBt (0.5 мол. экв., относительно емкости смолы для твердофазного пептидного синтеза) и DIPEA (3 мол. экв. относительно емкости смолы для твердофазного пептидного синтеза)) в ДМФА. Объдинение производного (IV) с дипепетидом выполняют в присутствии HBTU/HOBt/DIPEA в ДМФА. В дальнейшем удаляя соединение (VI) с полимерного носителя раствором ТФУ (0.75%) в ДХМ в течение 15 минут. Присоединение 3-аминопропилазида к соединению (VI) осуществляется с использованием системы реагентов HBTU/HOBt/DIPEA в ДМФА, а удаление тритретбутильных защитных групп проводят в присутствии в системе ТФУ/ДХМ/H2O/ТИПС (46.25%/46.25%/5%/2.5%) в течение 3 часов.

Технический результат достигается применением заявляемого средства для образования конъюгата с лекарственным или диагностическим агентом. При этом лекарственные или диагностические агенты являются средствами для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими ПСМА, таким как рак предстательной железы.

Технический результат также достигается конъюгатом заявляемого соединения со средством для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген, содержащий лекарственный или диагностический агент, общей формулы (XIII):

где

X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, Cl, ОСН₃, ОС₂Н₅, СООН, ОН, N(CH₃)₂;

R₁, R₂ независимо друг от друга представляют собой ОН, Н; R₃=ОН, NO₂, Br, Н, Cl; R₄ = лекарственный или диагностический агент.

При этом конъюгат представляет собой соединение, выбранное из группы:

Также технический результат достигается конъюгатом заявляемого соединения со средством для диагностики заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген, содержащий диагностический агент общей формулы (XIIII), в качестве которого используют хелатирующие радиоизотопы.

где

X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, Cl, ОСН₃, ОС₂Н₅, СООН, ОН, N(CH₃)₂

R₁, R₂ независимо друг от друга представляют собой ОН, Н; R₃=ОН, NO₂, Br, Н, Cl; R₄ = агент, хелатирующий радиоизотопы.

При этом конъюгат представляет собой соединение, выбранное из группы:

Общая схема синтеза заявляемого средства для доставки лекарственного или диагностического агента представлена на фиг. 1-7.

При сборке пептидной последовательности, входящей в состав линкера, использовался твердофазный метод сборки на полимерной подложке, что позволяет проводить синтез соединений в автоматическом режиме, также избегать трудоемкой хроматографической очистки на каждом элементарном акте сборки пептидной последовательности, и таким образом снизить количество необходимых растворителей и элементов, для очистки. В качестве полимерной подложки для пептидной сборки использовалась 2-хлортритильная смола, которая позволяет осуществлять синтез полностью защищенных пептидных последовательностей, что в свою очередь облегчает их модификацию, увеличивает чистоту получаемых промежуточных соединений, что увеличивает выходы реакции на последующих стадиях, а также суммарные выходы конечных соединений, и таким образом снижает количество используемых расходных элементов (растворителей, реагентов, наполнителей для хроматографии и т.д.). Так же использование в качестве строительных блоков Fmoc-аминокислот вместо ВОС-производных при синтезе линкера позволяет избежать использования коррозионной и токсичной трифторуксусной кислоты в больших количествах.

Ключевой особенностью заявляемого соединения является наличие в структуре длинного гидрофобного линкера с ароматическими фрагментами дополнительных функциональных заместителей, наличие которых, способствует лучшему связыванию заявляемого средства с белковой мишенью, за счет вовлечения дополнительных взаимодействий между соединением и гидрофобными карманами в структуре гидрофобного туннеля белковой мишени а также подбор комбинации конфигураций ассиметрических центров аминокислот, также обеспечивающих оптимальное связывание с целевой мишенью.

Краткое описание чертежей

Изобретение поясняется следующими чертежами.

На фиг. 1-7 представлена общая схема синтеза заявляемого средства.

На фиг. 8 представлена общая схема синтеза конъюгатов заявляемого средства с флуоресцентной меткой SulfoCy5.

На фиг. 9 предсттавлена общая схема синтеза конъюгатов заявляемого средства с терапевтическим препаратом ММАЕ.

На фиг. 10-14 представлена общая схема синтеза конъюгатов заявляемого средства с хелатирующим агентом DOTA.

На фиг. 15 представлена структура полученных конъюгатов заявляемого средства с флуоресцентной меткой SulfoCy5.

На фиг. 16 представлена структура полученных конъюгатов заявляемого средства с хелатирующим агентом DOTA.

На фиг. 17 представлены результаты исследования визуализации клеточных линий LNCaP конъюгатами 141-144 из растворов различных концентраци (40 нМ, 150 нМ, 400 нМ). Контроль автофлуоресценция клеточных линий LNCaP.

На фиг. 18 представлены графики накопления и интернализации ⁶⁸Ga-содержащих конъюгатов 165-169 на клеточной культуре 22Rvl.

На фиг. 19 представлены графики сравнение накопления ⁶⁸Ga-содержащего конъюгата 167 и PSMA-617 на клеточных культурах 22Rvl и РС-3.

На фиг. 20 представленны результаты биологических исследований in vitro конъюгатов 145 и PSMA-MMAE с на клеточных линиях 22Rvl, LNCaP и РС-3.

На фиг. 21 показан ¹H-ЯМР спектр соединения 107.

На фиг. 22 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 107.

На фиг. 23 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 107.

На фиг. 24 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 136.

На фиг. 25 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 136.

На фиг. 26 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 141.

На фиг. 27 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 141.

На фиг. 28 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 141.

На фиг. 29 показан ¹H-ЯМР спектр соединения 145.

На фиг. 30 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 145.

На фиг. 31 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 145.

На фиг. 32 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 148.

На фиг. 33 показан ¹³С-ЯМР спектр соединения 148.

На фиг. 34 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 148.

На фиг. 35 представлен масс-спектр соединения 148.

На фиг. 36 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 148.

На фиг. 37 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 152.

На фиг. 38 показан ¹³С-ЯМР спектр соединения 152.

На фиг. 39 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 152.

На фиг. 40 представлен масс-спектр соединения 152.

На фиг. 41 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 152.

На фиг. 42 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 157.

На фиг. 43 показан ¹³С-ЯМР спектр соединения 157.

На фиг. 44 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 157.

На фиг. 45 представлен масс-спектр соединения 157.

На фиг. 46 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 157.

На фиг. 47 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 162.

На фиг. 48 показан ¹³С-ЯМР спектр соединения 162.

На фиг. 49 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 162.

На фиг. 50 представлен масс-спектр соединения 162.

На фиг. 51 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 162.

На фиг. 52 показан ¹Н-ЯМР спектр соединения 167.

На фиг. 53 показан ¹³С-ЯМР спектр соединения 167.

На фиг. 54 представлена хроматограмма ВЭЖХ-МС соединения 167.

На фиг. 55 представлен масс-спектр соединения 167.

На фиг. 56 представлен масс-спектр выскокого разрешения соединения 167.

Осуществление изобретения

Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.

«ПСМА (PSMA)» - трансмембранный гликопротеид II типа с массой - 100 кДа, состоящий из 750 аминокислот. Данный белок состоит из короткого внутриклеточного участка (1-18 аминокислоты), трансмембранного домна (19-43 аминокислоты) и большого внеклеточного домена (44-750 аминокислоты). Данный белок обладает высокой экспрессией в тканях предстательной железы, в связи с этим является перспективной мишенью для адресной доставки.

В заявляемом техническом решении под средством для доставки лекарственного или диагностического агента, представляющее собой ковалентно-связанные ПСМА-связывающий лиганд и модифицированный гидрофобный пептидный линкер, включающий фрагменты 6-аминогексановой или 5-аминопентановой или 4-аминобутановой кислот, фрагмент фенилаланина, фрагмент тирозина или его производное. Термин «конъюгат» в заявляемом техническом решении означает соединение включающее средство для доставки с лекарственным или диагностическим агентом.

PBS - натрий-фосфатный буфер

FBS фетальная телячья сыворотка

РуВОР - бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфоний гексафторфосфат

THF - тетрагидрофуран

ВОС₂О - ди-третбутил дикарбонат

ОФЭКТ - однофотонная эмиссионная компьютерная томография

МРТ магнитно-резонансная томография

ПЭТ/КТ - позитронно-эмиссионная компьютерная томография

DCM (ДХМ) - дихлор метан

Et₃N - триэтиламин

Cbz - бензилоксикарбонил

МеОН - метанол

EtOAc - этилацетат

Et₂O (ДЭК) - диэтиловый эфир

MeCN - ацетонитрил

Р.Е. (П.Э.) - петролейный эфир

DOTA(t-Bu)3COOH - три-третбутиловый эфир 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты

ММАЕ - монометилауристатин

tBu - третбутил

РуВОР - бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфоний гексафторфосфат

DIPEA - диизопропилэтиламин

Ph₃P - трифенилфосфин

THF (ТГФ)- тетрагидрофуран

Phe=F, фенилаланин

Tyr=Y, тирозин

HBTU - 3-[Бис(диметиламино)метилиумил]-3Н-бензотриазол-1-оксид гексафторфосфат

HOBt - гидроксибензотриазол

DMF (ДМФА) - диметилформамид

Et₂NH - диэтиламин

Fmoc - 9-флуоренилметоксикарбонил

2-СТС - 2-хлортритильная смола

TFA (ТФУ)- трифторуксусная кистота

TIPS (ТИПС)- триизопропилсилан

NHS N-гидроксисукцинимид

S.A. - янтарный ангидрид

DMSO - диметилсульфоксид

SPPS - твердофазный метод синтеза

m, n - обозначения для 2 форм ротационных изомеров, m/n=3/2

a, b - диастереотопные протоны

HPLC (ВЭЖХ) высокоэффективная жидкостная хроматография

LCMS (ВЭЖХ-МС) - высокоэффективная жидкостная хроматография - масс-спектрометрия;

TLC(TCX) - тонкослойная хроматография

NMR (ЯМР) - ядерный магнитный резонанс

«IC₅₀» (ПК₅₀) - концентрация соединения, при которой наблюдается 50% ингибирование ферментативной активности.

Все используемые реагенты являются коммерчески доступными, выпаривание растворителя осуществляли с использованием роторного испарителя, при пониженном давлении при температуре бани примерно 50°С; контроль за ходом реакции осуществляли при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ), и время реакции указано только для иллюстрации; структуру и чистоту всех выделенных соединений подтверждали, по меньшей мере, одним из следующих методов: ТСХ (пластины для ТСХ с предварительно нанесенным силикагелем 60 F₂₅₄ Merck), масс-спектрометрия или ядерный магнитный резонанс (ЯМР). Выход продукта приведен только для иллюстрации. Колоночную флэш-хроматографию осуществляли, используя Merck силикагель 60 (230-400 меш ASTM). Масс-спектры высокого разрешения (HRMS) зарегистрированы на спектрометре Bruker microTOF II. ВЭЖХ для анализа образцов проводиллось на системе Shimadzu Prominence LC-20 с конвекционной колонкой и коллектором фракций, соединенным с одиночным квадрупольным масс-спектрометром Shimadzu LCMS-2020 с двойным источником ионизации DUIS-ESI-APCl. В качестве аналитической и препаративной колонки использовалась Phenomenex Luna 3u C18 100А. Спектры ЯМР регистрировали на приборах Bruker Avance-400 (рабочая частота 400.1 и 100.6 МГц для ¹Н и ¹³С, соответственно) и Agilent 400-MR (рабочая частота 600.0 и 150 МГц для ¹Н и ¹³С, соответственно), используя дейтерированный хлороформ (99,8% D) или ДМСО (99,9% D) в качестве растворителя, если не указано иное, относительно тетраметилсилана (TMS) в качестве внутреннего стандарта, миллионных долях (м.д.); обычные используемые сокращения следующие: s - синглет, d - дублет, t - триплет, q - квартет, m - мультиплет, br. - широкий и так далее.

В некоторых вариантах воплощения, опухолевые клетки могут экспрессировать PSMA, такие как клетки опухоли предстательной железы или метастазированные клетки опухоли предстательной железы. В других вариантах воплощения, опухоль можно лечить путем прицельного действия на прилегающие или расположенные рядом клетки, которые экспрессируют PSMA. Например, можно прицельно воздействовать на сосудистые клетки, в которых возникает ангиогенез, связанный с опухолью. По существу, все солидные опухоли экспрессируют PSMA в неоваскулатуре. Поэтому способы по настоящему изобретению можно использовать для лечения практически всех солидных опухолей, включая опухоль легкого, почечно-клеточную, глиобластому, поджелудочной железы, мочевого пузыря, саркому, меланому, молочной железы, толстой кишки, зародышевых клеток, феохромоцитому, пищевода и желудка. Также, в соответствии с настоящим изобретением можно лечить некоторые доброкачественные поражения и ткани, включая эндометрий, шванному и хронической пептической язвы пищевода (синдром Баррета).

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местно). Клиническая дозировка средства, содержащего соединение общей формулы (I), у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и био доступно ста активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента.

В качестве лиганда выступает соединение, представляющее собой аналог переходного состояния субстрата (NAAG) и являющегося ПСМА-вектором на основе производного мочевины структуры DCL, включая модификацию ε-аминогруппы лизина в лиганде ПСМА с использованием различных бензиловых производных, способствующих улучшению связывания с белковой мишенью.

В качестве пептидной последовательности для получения высокоспецифичного вектора PSMA мы синтезировали дипептиды ароматической природы. Было показано что наличие в составе линкера дипептидных фрагментов на основе аминокислот Phe и/или Tyr улучшает связывание с рецептором. Кроме того, дипептидная природа линкеров может улучшить биоразлагаемость и снизить несистемную токсичность векторов PSMA [Kularatne SA, Venkatesh С, Santhapuram HKR, Wang K, Vaitilingam B, Henne WA, Low PS. Synthesis and Biological Analysis of Prostate-Specific Membrane Antigen-Targeted Anticancer Prodrugs. J Med Chem 2010; 53(21):7767-7777, DOI: 10.1021/jm100729b. Dubowchik GM, Firestone RA, Padilla L, Willner D, Hofstead SJ, Mosure K, Knipe JO, Lasch SJ, Trail PA. Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates: Model Studies of Enzymatic Drug Release and Antigen-Specific in Vitro Anticancer Activity. Bioconjug Chem 2002; 13(4):855-869, DOI: 10.1021/bc025536j.]

Способ синтеза заявляемых соединений заключается в следующем.

Сначала получают тритретбутиловое производное ПСМА-связывающего лиганда формулы (2):

Соединение формулы (2) может быть получено известным из уровня техники способом (Ryan P. Murelli, Andrew X. Zhang, Julien Michel, William L. Jorgensen, David A. Spiege. Chemical Control Over Immune Recognition: A Class of Antibody-Recruiting Molecules (ARMs) that Target Prostate Cancer. J. AM. CHEM. SOC. 2009, 131, 17090-17092). Затем полученное тритретбутиловое производное ПСМА-связывающего лиганда алкилируют с получением соединения формулы (II). Реакцию алкилирования проводят путем восстановительного аминирования замещенными бензальдегидами (Jan Tykvart, Jirř i Schimer, Jitka Bařinková, Petr Pachl, Lenka Poštová-Slavětinská, Pavel Majer, Jan Konvalinka, Pavel Šácha. Rational design of urea-based glutamate carboxypeptidase II (GCPII) inhibitors as versatile tools for specific drug targeting and delivery. Bioorg Med Chem. 2014, 22(15):4099-108.)

где X₁, X₂, Х₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина.

Получение соединения формулы (III) проводят путем ацилирования производными 6-азидогексановой кислоты) с последующей реакцией восстановления азида до аминогруппы, при этом реакцию восстановления азида до аминогруппы проводят в присутствии трифенилфосфина и воды в растворе ТГФ или в растворе метанола с использованием водорода в присутствии палладия на углероде в качестве катализатора.

Реакцию ацилирования проводят в среде полярного апротонного растворителя растворяют исходный амин (II), азидо-кислоту и ненуклеофильное основание, взятые из расчета, что на 1 мольный эквивалент амина берут по меньшей мере 1 мольный эквивалент азидокислоты и основания, а также не менее 100 мольных эквивалента полярного апротонного растворителя, к полученной смеси при перемешивании добавляют по меньшей мере 1 мольный эквивалент РуВОР, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре до исчезновения исходного амина (II). Далее из полученную реакционной смеси удаляется растворитель при пониженном давлении, и целевой полупродукт выделяется с помощью колоночной хроматографии (Puriflach SILICA-HP 120G, 50 мкм, градиент от 100% петролейного эфира до 100% ЕЮАс в течение 30 мин, скорость потока=50 мл/мин). Верхняя граница используемых реагентов не ограничивается, т.к. избыток какого-либо реагента не уменьшает выходов реакций, однако при большом избытке может понадобиться дополнительная очистка продуктов реакций.

Далее реакцию восстановления азидо-группы до амино-группы в среде ТГФ/вода с содержанием воды по меньшей мере 10 об.% в которой растворяют полученное азидо-производное и трифенилфосфин, взятые из расчета, что на 1 мольный эквивалент азидо-производного берут по меньшей мере 1,5 мольных эквивалента трифенилфосфина, а также не менее 50 мольных эквивалентов смеси растворителей (ТГФ/вода) из расчета на воду. Реакционную смесь нагревали при температуре не менее 45°С до исчезновения исходного азидо-производного. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Очистку проводили методом колоночной хроматографии (триэтиламин: хлористый метилен: метанол; от 1%:98%:1%до 1%:89%:10%).

Предпочтительно в качестве азидо-кислот использовать азидо- бутановую или пентановую или гексановую кислоты.

Предпочтительно в качестве полярного апротонного растворителя использовать ДМФА или ДМСО.

Предпочтительно в качестве ненуклеофильного основания использовать диизопропилэтиламин или триэтиламин.

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутствие заместителя при ε-NH группе лизина.

Модификация янтарным ангидридом фрагмента линкера, представляющего собой алкильный фрагмент, включающий 3-5 атомов углерода с получением производного соединения (III), ацилированного янтарным ангидридом. При этом модификацию янтарным ангидридом фрагмента линкера, представляющего собой алкильный фрагмент, включающий 3-5 атомов углерода осуществляют реакцией ацилирования янтарным ангидридом аминогруппы в присутствии ненуклиофильных оснований. В качестве ненуклеофильных оснований используют диизопропилэтиламин или триэтиламин.

Реакция получения соединения (IV), заключалась в ацилировании янтарным ангидридом, процесс проводят в среде неполярного апротонного растворителя путем растворения исходного амина (III), янтарного ангидрида и ненуклеофильного основания, взятых из расчета, что на 1 мольный эквивалент амина берут по меньшей мере 1 мольный эквивалент янтарного ангидрида и ненуклефильного основания, а также не менее 100 мольных эквивалента неполярного апротонного растворителя, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре до исчезновения исходного амина (III). Предпочтительно в качестве неполярного апротонного растворителя использовать дихлорметан или хлороформ. Предпочтительно в качестве ненуклеофильного основания использовать диизопропилэтиламин или триэтиламин.

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина.

Получение необходимой пептидной последовательности заключалось в сборке с применением SPPS на 2-Chlorotrityl chloride resin (2-СТС resin) на полимерной подложке из полистирола сшитого с 1% дивинилбензола, размером 100-200 mesh. По своей химической сути выбранная последовательность реакций представляет собой классическую схему пептидного синтеза: 1) иммобилизация N-замещенной аминокислоты на твердофазную подложку; 2) снятие защитной группы; 3) модификация NH₂-группы аминокислоты (стадии 2 и 3 повторяются необходимое количество раз для сборки необходимой пептидной последовательности); 4) удаление модифицированной аминокислотной последовательности с подложки.

Использование 2-СТС позволяет применять концепцию Fmoc SPPS и свести к минимуму побочные реакции; помимо этого, она позволяет сохранять лабильные к кислотам функциональные группы нетронутыми, так как снятие аминокислотной последовательности со смолы протекает в мягких условиях [Behrendt R, White Р, Offer J. Advances in Fmoc Solid-Phase Peptide Synthesis. J Pept Sci 2016; 22(1):4-27, DOI: 10.1002/psc.2836.]

Синтез дипептидов проиллюстрирован на схеме.

Первый этап заключался в активации смолы

Все растворители для проведения реакции и очистки берутся в количесве 10 мл на 1 г смолы. 2-хлортритил-хлоридная смола (2-СТС) (100-200 mesh, емкость 1,2-1,4 ммоль/г) перемешивалась в ДХМ в течении 10 минут. После этого к раствору добавлялось 3 мольных эквивавлента хлористого тионила и через 3-4 минуты каталитическое количество ДМФА. Раствор перемешивался в течении 4 часов при температуре 40°С. После активации смолу промывали 3 раза по 1 минуте ДМФА, затем 3 раза по одной минуте ДХМ.

Второй этап: присоединение первого аминокислотнгого остатка

Активированная смола перемешивалась в ДМФА в течение 5 минут. После этого была добавлена первая Fmoc-защищенная аминокислота (2 мол. экв.) относительно верхней границы емкости смолы) и DIPEA (10 экв). Далее реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. По окончании реакции излишки растворителя удалялись из реактора, а полученная смесь промывалась три раза по 5 минут метанолом, три раза по 1 минуте ДХМ, три раза по 1 минуте ДМФА и два раза по 1 минуте ДХМ.

Третий этап: Снятие Fmoc-защитной группы

Смолу промывали два раза по 1 минуте ДМФА. После этого было добавлен 20% раствор 4-метилпиперидина в ДМФА. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут. Затем растворитель удаляли, а полученную смесь промывали два раза по 1 минуте ДМФА и три раза по 1 минуте ДХМ. Данную процедуру повторяли дважды.

Четвертый этап: Присоединение второго аминокислотнгого остатка

Смолу промыли два раза по 1 минуте ДМФА. Затем добавили ДМФА, Fmoc-защищенную аминокислоту (2 экв.), HOBt (0.5 экв.), HBTU (2 экв.) и DIPEA (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов, после чего растворитель удалялся, а смолу промывали три раза по 1 минуте ДМФА и три раза по 1 минуте ДХМ. Далее проводили снятие Fmoc-защитной группы аналогично как описано на третьем этапе.

Далее проводили реакцию пептидного синтеза с последующим снятием с полимерного носителя с получением тритретбутильного производного лиганда ПСМА общей формулы (VI)

Далее проводили реакцию пептидного синтеза с закрепленному на смоле 2-СТС дипептидом (V) при помощи активирующих агентов HOBt/HBTU/DIPEA. После этого модифицированный пептид удаляли с полимерной подложки обработкой DCM/TFA по методике (DCM/TFA - 99,25%/0,75.% V/V в течение 15 минут, при таких условиях снятия TFA не затрагивает групп лабильных к кислотам - C(O)OtBu).

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Br, Cl, OtBu, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

Ацилирование соединения (VI)

Все растворителей для проведения реакции и очистки берутся в количесве 10 мл на 1 г смолы

Смолу с нанесенным дипептидом промывали два раза по 1 минуте ДМФА. Затем добавили ДМФА, соединение (VI) (1.2 экв.), HOBt (0.5 экв.), HBTU (2 экв.) и DIPEA (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов, после чего растворитель удалялся, а смолу промывали три раза по 1 минуте ДМФА и три раза по 1 минуте ДХМ.

Снятие фрагмента лиганда со смолы

Смолу промыли два раза по 1 минуте ДХМ. После этого был добавлен 0,5% раствора трифторуксусной кислоты в ДХМ. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут. Процедуру повторяли дважды. Полученный фильтрат упарили на роторном испарителе и несколько раз переупарили из хлористого метилена. Соединение далее очищали методом обращеннофазовой колоночной хроматографии с элюентом ацетонитрил: вода (Interchim Puriflash, С18-НР, 15μ, 25g, от 10% ацетонитрила до 100% ацетонитрила за 20 минут, скорость потока 20 мл/мин). Расчет выхода конечного соединения проводили исходя из максимальной емкости смолы.

Получение тритретбутил производного соединения радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера проводили/осуществляли реакцией образования амидной связи между (VI) и 3-аминопропилазидом с получением (VII):

Данная реакция осуществлялась добавлением смеси активирующих агентов HBTU/HOBt и третичного амина (DIPEA), к смеси исходных кислоты и амина; Применяя этот метод к реакции соединения (VI) с и NH₂(CH₂)₃N₃, мы получили индивидуальный стереоизомер желаемого вещества (VII).

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутствие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Br, Cl, OtBu, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

Векторный фрагмент (VI) (1 экв) растворяли в DMF, затем добавили DIPEA (2 экв), 3-аминопропилазид (АЛА) (1,5 экв), после добавили HBTU (1,5 экв), HOBt (1 экв). Смесь перемешивалась в течение 16 часов. После окончания реакции удалили растворитель, сухой остаток растворяли в хлористом метилене и промывали дважды водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. Удаляли растворитель при пониженном давлении. Дальнейшую очистку проводили с помощью метода колоночной хроматографии с элюентом DCM-MeOH (Interchim Puriflash 15ц 25g, от 2% до 20% метанола в течение 30 минут, скорость потока - 20 мл/мин).

Получение соединения радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера, общей формулы (I) осуществляли путем удаления тритретбутильных защитных групп соединения формулы (8). В раствор трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) растворяли (1 экв.) соединения (VII) и перемешивали 3 часа при комнатной температуре. Растворитель удалили при пониженном давлении. Полученное вещество переупаривали 3 раза из ДХМ. К полученному маслянистому осадку добавляли диэтиловый эфир, в результате чего выделился белый аморфный продукт. Диэтиловый эфир декантировали, процедуру повторяли еще 2 раза. Далее продукт очищали с помощью метода обращеннофазовой колоночной хроматографии, в качестве эклюента использовались 0,1% раствор трифторуксусной кислоты в воде: ацетонитрил (Puriflash С18-НР, 15μ, 20g, элюент: система ацетонитрил-0,1% раствор трифторуксусной кислоты в воде: от 10% ацетонитрила до 100% за 20 минут).

Таким образом, в результате последовательности реакций по схемы превращения был осуществлен синтез линкера (1), который использован в последующем для получения высокоспецифичных ПСМА-векторов. Разработанные методы синтеза отличаются экологичностью, хорошими выходами целевых продуктов, высокой селективностью процессов и не требуют применения специальной аппаратуры или реагентов.

Также в данной синтетической схеме использовался твердофазный метод сборки пептидной последовательности, который имеет ряд преимуществ по отношению к жидкофазному методу сборки, а именно: 1) сторогая стереоселективность протекания реакций пептидного синтеза с получением оптически чистого продукта, что важно, для представленных соединений 2) снижение времени получения соединений, за счет ускорения очистки промежуточных соединений (очистка производится промывкой и фильтрацией аминокислотной последовательности, закрепленной на полимерной подложке) 3) возможность автоматизации и проведения реакций с использованием пептидного синтезатора

В таблице приведено сравнение 2 синтетических схем с выходами по исходным аминокислотам

Таким образом, оптимальная методика стереоселективного синтеза молекулярных платформ на основе полипептидов для направленной доставки терапевтических и/или диагностических агентов к рецептору ПСМА включает в себя 12 (8) стадий для диагностических конъюгатов, в отличие от 13 (10) стадий, представленных ранее, заключающаяся в твердофазной сборке пептидной последовательности линкера, соединении полипептида с векторным фрагментом, последующем присоединении 3-аминопропилазида в оптимизированных условиях, и заключительном удалении защитных групп. Также позволяет снизить среднее количество необходимых рабочих дней для получения целевого соединения с 22 (от 20 до 24) до 16 (от 15 до 17).

Применение соединения общей формулы (I) заключается в получении конъюгата с лекарственным или диагностическим агентом. При этом для получения конечных конъюгатов (с лекарственным или диагностическим препаратом) проводится реакция азид-алкинового циклоприсоединения, между заявляемым соединением (средство доставки, ПСМА-лиганд с ликером), содержащим в своем составе азидо-группу, и доставляемой молекулой (лекарственным или диагностическим средством) (Kolb, Н.С., Finn, М.G. and Sharpless, К.В. (2001), Click Chemistry: Diverse Chemical Function from a Few Good Reactions. Angewandte Chemie International Edition, 40: 2004-2021.; Hartmuth С Kolb, K.Barry Sharpless, The growing impact of click chemistry on drug discovery, In Drug Discovery Today, Volume 8, Issue 24, 2003, Pages 1128-1137, ISSN 1359-6446,). В случае отсутствия у доставляемой молекулы фрагмента терминальной тройной связи в структуре, она должна быть модифицирована химически таким образом, чтобы полученное производное содержало терминальную тройную связь. Специалисту в данной области техники известно, каким образом возможно осуществление такой модификации. Конъюгат может быть представлен общей структурной формулой

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, СООН, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=ОН, Н; R₂=Н, ОН; R₃=Н, Br, Cl, ОН, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D. Y = лекарственный или диагностический агент.

Альтернативная схема синтеза конъюгатов заключается в создании амидной связи между линкером и лекарственным или диагностическим агентом, что в свою очередь упрощает введение необходимого фрагмента, не имеющего в своем составе терминальной алкиновой группы, но обладающего карбоксильной группой. Для получения подобных конъюгатов необходимо введение фрагмента имеющего в своем составе аминогруппу по аналогии с соединением (VIII) (Замена N₃ на NH₂).

Для этого предполагается осуществление следующей синтетической схемы:

На первоначальном этапе к производному (VI) в количестве 1 экв. посредством реакции сочетания присоединяли фрагмент FmocNH(CH₂)₃NH₃ ⁺TFA^- в количестве 1.1 экв. в DMF при добавлении DIPEA 2,5 экв., а затем, HOBt (1 экв.), HBTU (1.5 экв.) в качестве агентов активации. Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и преупарили с DCM дважды. Далее остаток растворили в DCM и провели экстракцию; 1) Н₂О (2*30 мл), 2) насыщенным раствором NaCl (2*30 мл). Затем органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель. Остаток очищали с помощью метода колоночной хроматографии (Puriflash на колонке (15μ 40g)); элюент: DCM(100%)/MeOH(0%)=>DCM(90%)/MeOH(10%) в течение 30 минут, после МеОН (100%) в течение 5 минут. Производное (IX) получали в виде бледно-желтого аморфного вещества.

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Br, Cl, OtBu, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

В дальнейшем необходимо провести удаление Fmoc защитной группы. В отношении второй реакции на основании литературных данных можно использовать различные системы для удаления Fmoc группы Et₂NH, морфолин, 4-метилпиперидин и др. в различных растворителях - DMF, MeCN, DCM, МеОН и др. [Isidro-Llobet, A., Alvarez, М., & Albericio, F. (2009). Amino acid-protecting groups. Chemical reviews, 109(6), 2455-2504.] Нами была выбрана система Et₂NH-DMF, по той причине, что после реакции легко можно будет удалить Et₂NH из реакционной смеси, DMF был выбран в качестве растворителя, как наиболее подходящий для растворения подобных соединений.

Производное (IX) (1 экв.) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. Et₂NH на 10 мл DMF) и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%)=>H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение (X) было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества.

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Br, Cl, OtBu, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D.

На следующем этапе необходимо также провести реакцию создания амидной связи. Реакция пептидного синтеза с диагностическим или терапевтическим агентом, имеющем в своем составе карбоксильную группу и производным (X).

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, NO₂, ОМе, OEt, ОН, COOtBu, N(Me)₂, Cl, или отсутствие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=OtBu, Н; R₂=Н, OtBu; R₃=Н, Br, Cl, OtBu, NO₂. * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D. Y = терапевтический или диагностический агент.

На заключительном этапе защитные трет-бутильные группы полученных конъюгатов были удалены под действием системы, содержащей трифторуксусную кислоту. Было установлено время, за которое произойдет полное снятие защитных трет-бутильных групп, при этом конкурирующие побочные процессы не успеют произойти в мере, недопустимой для получения чистого соединения. Для этого использовалась система TFA/TIPS/H₂O 1). Триизопропилсилан (TIPS) необходим для выведения из реакционной смеси трет-бутильных катионов, образующихся в ходе реакции, а вода для гидролиза трифторуксусного ангидрида, всегда присутствующего в трифторуксусной кислоте в качестве примеси. Таким образом было получено соединенияе (XII).

где X₁, Х₂, Х₃, Х₄ независимо друг от друга представляют собой Н, Br, Cl, СООН, N(Me)₂, или отсутсвие заместителя при ε-NH группе лизина. R₁=ОН, Н; R₂=Н, ОН. R₃=Н, Br, Cl, ОН, NO₂ * - обозначение стереоцентров с меняющейся конфигурацией L и D. Y=терапевтический или диагностический агент.

В случае ацидофобности вводимого терапевтического или диагностического агента, возможно первоначальное проведение удаления защитных трет-бутильных групп, с последующим введением активированной формы терапевтического или диагностического агента. В случае отсутствия у доставляемой молекулы фрагмента активированной карбоксильной группы в структуре (к примеру NHS-активированный эфир = NHS-C(O)-Y), она должна быть модифицирована химически таким образом, чтобы полученное производное содержало активированную карбоксильную группу. Специалисту в данной области техники известно, каким образом возможно осуществление такой модификации.

В заявляемом техническом решении раскрыты соединения (средства доставки), способные связываться с ПСМА, нацеливаться на ПСМА для доставки средств диагностики, визуализации и терапевтических (лекарственных средств). Также раскрыты соединения и, способы получения и их применение для диагностики, визуализации и лечения заболеваний, вызванных патогенными популяциями клеток, которые экспрессируют или сверхэкспрессируют ПСМА. Как показали проведенные эксперименты заявляемые средства доставки проявляют высокую аффинность в отношении ПСМА, образованные комплексы заявляемого средства доставки с терапевтическим агентом являются эффективными в лечении заболеваний, вызванных патогенными клетками, которые экспрессируют ПСМА, такими как клетки рака предстательной железы.

Применение заявляемого соединения для получения конъюгата с лекарственным или диагностическим агентом.

В качестве лекарственного (терапевтического) средства (агента) могут быть использованы любые молекулы, способные модулировать или модифицировать клеточную функцию. В качестве лекарственных средств могут быть использованы пептиды, олигопептиды, ретроинвертированные олигопептиды, белки, аналоги белка, апопротеины, гликопротеины, ферменты, коферменты, ингибиторы ферментов, аминокислоты и их производные, рецепторы и другие мембранные белки, антигены и антитела против них; гаптены и антитела против них; гормоны, липиды, фосфолипиды, липосомы; токсины; антибиотики; бета-блокаторы; противораковые средства, в том числе химиотерапевтические средства; простагландины и аналоги простогландинов; противовоспалительные вещества; иммуносупрессоры, иммуностимуляторы; минеральные и питательные добавки.

В качестве лекарственных (терапевтических) средств используют соединения, которые являются цитотоксическими, усиливают проницаемость опухоли, ингибируют пролиферацию опухолевых клеток, стимулируют апоптоз, снижают противоапоптическую активность в целевых клетках, применяются для лечения заболеваний, вызванных инфекционными агентами, усиливают эндогенный иммунный ответ, направленный на патогенные клетки, или применимы для лечения болезненного состояния, вызванного патогенными клетками. Такие химиотерапевтические средства могут функционировать при помощи любого из большого разнообразия механизмов действия. Например, цитотоксические соединения могут нарушать любой из целого ряда клеточных механизмов, которые важны для выживания клетки и/или клеточной пролиферации и/или вызывают клеточную смерть или апоптоз. Химиотерапевтические средства включают, но не ограничивают, следующие соединения: адренокортикоиды, кортикостероиды, алкилирующие средства, антиадрогены, антиэстрогены, андрогены, акламицин и производные акламицина, эстрогены, антиметаболиты, такие как цитозинарабинозид, аналоги пурина, аналоги пиримидина, метотрексат, бисульфан, карбоплатина, хлорамбуцил, цисплатин и др. соединения платины, тамоксифен, таксол, паклитаксел, производные паклитаксела, циклофосфамид, дауномицин, ризоксин, растительные алкалоиды, преднизолон, гидроксимочевина, тенипозид, митомицины, дискодермолиды, ингибиторы микротрубочек, эпотилоны, тубулизины, циклопропилбенз[е]индолон, втор-циклопропилбенз[е]индолон, O-Ас-втор-циклопропилбенз[е]индолон, блеомицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, виндезин, винорелбин и их аналоги и производные), азотистые иприты, нитрозомочевины, колхицин и его производные,тритилцистеин, галикондрин В, доластатины, аманитины, камптотецин и его производные, гелданамицин и его производные, эстрамустин, нокодазол, МАР4, колцемид, противовоспалительные средства, ингибиторы пептидной и петидомиметической передачи сигнала, рапамицин, эверолимус, сиролимус, криптофицин, бортезомиб, тиобортезомиб, аминоптерин, цитостатические препараты тубулизин, доцетаксел, монометил аурисатин Е, эрибулин, испинесиб, доксорубицин, даунорубицин, верукарин, дидемнин В, гелданомицин, пурваланол А, испинезид, будесонид, дазатиниб, эпотилон, майтанзины, ингибиторы тирозинкиназы, амфотерицин В, ацикловир, трифлуридин, ганцинкловир, зидовудин, рибавирин и т.п. В качестве средств визуализации могут быть использованы без ограничения, флуоресцентные средства, такие как Oregon Green (например, Oregon Green 488, Oregon Green 514 и т.п.), AlexaFluor (например, AlexaFluor 488, AlexaFluor 647 и т.п.), флуоресцеин и родственные аналоги, флуоресцентные средства BODIPY (например, BODIPY F1, BODIPY 505 и т.п.), родаминовые флуоресцентные средства (тетраметилродамин и т.п.), флуоресцентные средства DyLight (например, DyLight 680, DyLight 800 и т.п.); циановые красители (например Heptamethine IR-780, Heptamethine IR-808, IRDye® 800CW, DY-675, DY-676, DY-677, DY-678, Су 3, Cy5, Cy7, Cy 3.5, Cy5.5, Cy7.5, SulfoCy3, SulfoCy5, SulfoCy7, SulfoCy3.5, SulfoCy5.5, SulfoCy7.5 и т.п). Следует принимать во внимание, что конъюгаты терапевтических или диагностических средств с заявляемыми соединениями (средствами доставки) можно применять отдельно или в комбинации с другими соединениями, подходящими для диагностики, визуализации и/или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими ПСМА, а также в комбинации с другими соединениями, которые вводят для лечения других симптомов заболевания, например, паллиативные средства, действие которых сфокусировано на облегчении симптомов заболевания и/или побочных эффектов терапевтического режима, но не является лечебным. Например, паллиативное лечение включает болеутоляющие средства, средства против тошноты и средства против рвоты.

В качестве диагностического/терапевтического средства (агента) могут быть использованы радиоактивные изотопы, такие как радиоактивные изотопы металла, координированные в хелатную группу, например, технеций, рений, галлий, гадолиний, индий, медь, лютеций, актиний, тербий и т.п., в том числе, изотопы ¹¹¹In, ^99mTc, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, и т.п. Хелатные группы, используемые для координации изотопов, могут представлять собой трипептид или тетрапептид формулы:

где R независимо выбирают из Н, аликила, гетероарила, циклоалкила, гетороциклила, алкенила, алкинила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и т.п., каждый из которых необязательно замещен.Также хелатирующий агент, способный связывать радиоактивный металл в условиях радиомечения, где хелатная функциональная группа агента нацеливания может быть выбрана из группы, включающей: DOTA, DOTAGA, TRITA, D03A-Nprop, DTPA, tetra-tBu-DTPA, p-SCN-Bz-DTPA, MX-DTPA, CHX-DTPA, NOTA, TACN, TACN-TM, H3NOKA, NODASA, NODAGA, NOTP, NOTPME, PrP9, TRAP, - NOPO, TETA, HBED, DFO, EDTA, 6SS, B6SS, PLED, TAME, YM103, NTP(PRHP)3, H2dedpa, H2dp-bb-NCS, H2dp-N-NCS; (4,6- MeO 2sal)₂-BAPEN и цитрат. В

Также в качестве средства для визуализации могут быть использованы, без ограничения, ПЭТ-средства визуализации (например, ¹⁸F, ¹¹C, ⁶⁴Cu, ⁶⁵Cu и т.п.) и FRET-средства визуализации (например, ⁶⁴Cu, ⁶⁵Cu и т.п.).

Изобретение относится к применению заявляемого соединения для введения субъекту, нуждающемуся в диагностической визуализации. Субъектом для диагностики предпочтительно является млекопитающее, предпочтительно человек.

Для получения изображения клеток/тканей, экспрессирующих ПСМА, т.е. опухолевых клеток или тканей, меченных заявляемым соединением, используют детектор излучения, например, детектора γ-излучения. Для улучшения визуализации предпочтительно использовать методики построения томографического изображения, такие как однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ) или позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ). Выбор и использование таких детекторов излучения находится в пределах квалификации среднего специалиста в данной области техники.

Следует понимать, что заявляемые соединения могут быть использованы в комбинации с любыми другими способами диагностики рака, включая способы с применением других уже разработанных диагностических и/или терапевтических средств и используя рентгеновскую компьютерную томографию (КТ), магнитно-резонансная томография (МРТ), функциональная магнитно-резонансная томография (фМРТ), однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), оптическая визуализация и ультразвук.

Терапевтически эффективное количество соединения или композиции согласно изобретению выбирают в количестве, достаточном для получения желаемого радиотерапевтического эффекта. При определении дозы для диагностической визуализации во внимание необходимо принимать удельную активность используемого радионуклидного металла. Предпочтительно в качестве металлов использовать трехзарядные катионы металлов, выбранные из ¹¹¹In, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁹⁰Y, ¹⁰⁹Pb, ²⁰³Pb, ¹⁰⁵Rh, ¹⁷⁷Lu, ²¹³Bi, ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ¹⁵³Sm, ¹⁸⁸Re, ¹⁶¹Tb и ²²⁵Ac.

Как правило, стандартная доза для введения обладает радиоактивностью приблизительно от 0,01 мКи до приблизительно 300 мКи, предпочтительно от 10 мКи до приблизительно 200 мКи. Для раствора для инъекций предпочтительная стандартная доза составляет приблизительно от 0,01 мл до приблизительно 10 мл. После, например, внутривенного введения, визуализация органа или опухоли in vivo может происходить в пределах от нескольких минут до нескольких часов, после того как меченный радиоактивным изотопом реагент был введен субъекту. Обычно, достаточное количество вводимой дозы будет накапливаться в целевой ткани, которая будет отображаться в течение приблизительно 1-4 часов. Для обнаружения опухолевых клеток или тканей in vitro количество соединения и/или композиции может варьироваться от приблизительно 1 нг/л до приблизительно 1000 мкг/л. Предпочтительнее количество составляет от приблизительно 1 мкг/л до приблизительно 100 мкг/л.

Соединение и/или композиции могут вводиться парентерально, внутримышечно, внутрибрюшинно или любым другим способом, обеспечивающим возможность доставки соединения и/или композиции к клеткам/тканям, экспрессирующим ПСМА. Например, соединение и/или композиции можно вводить субъекту в виде болюса или медленного вливания путем внутривенного впрыскивания. Для этих целей предпочтительно использовать стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки заявляемых соединений и/или композиций. Заявляемые соединения и/или композиции предпочтительно являются стерильными. Стерилизацию можно осуществлять любым известным из уровня техники способом.

Парентеральное введение означает способы введения, отличные от энтерального и местного введения, как правило, путем инъекции, и включает, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, интраорбитальную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и интрастернальную инъекции и инфузии.

Дозу соединений в соответствии с настоящим изобретением определяет лечащий врач на основании специфических параметров пациента, таких как возраст, масса тела, пол, тяжесть заболевания и т.п.Доза составляет предпочтительно от 0,00001 до 100 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,001 до 50 мг/кг массы тела, и наиболее предпочтительно от 0,01 до 10 мг/кг массы тела.

Термин «фармацевтически приемлемый» относится к нетоксическому материалу, который не взаимодействует с действием активного компонента фармацевтической композиции. "Фармацевтически приемлемый носитель" относится к биосовместимому раствору, который в достаточной степени имеет такие характеристики, как стерильность, p[Eta], изотоничность, стабильность и подобные, и может включать любые растворители, разбавители, включая стерильный физиологический раствор, раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор декстрозы для инъекций, раствор декстрозы и хлорида натрия для инъекций, содержащий лактат раствор Рингера для инъекций и другие водные буферные растворы, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические вещества и подобные. Фармацевтически приемлемый носитель также может содержать стабилизаторы, консерванты, антиоксиданты или другие добавки, которые хорошо известны специалистам в данной области, или другой наполнитель, известный из уровня техники.

Концентрация агента для визуализации или терапевтического агента в указанном радиологическом носителе должна быть достаточной для обеспечения удовлетворительной визуализации. Например, при применении водного раствора доза составляет приблизительно от 1,0 до 100 милликюри. Однако фактическая вводимая пациенту доза для целей визуализации определяется лечащим врачом. Указанный агент для визуализации или терапевтический агент должен вводиться таким образом, чтобы оставаться в организме пациента в течение приблизительно от 1 часа до 10 дней, хотя приемлемыми являются и более длительные, и более короткие периоды времени. Таким образом, могут подготавливаться удобные для применения ампулы, содержащие от 1 до 10 мл водного раствора.

Визуализация может быть выполнена обычным способом, например путем введения достаточного количества композиции для визуализации для обеспечения адекватной визуализации и последующего сканирования с помощью подходящего аппарата для визуализации или сканирования, такого как томограф или гамма-камера. Способ визуализации определенной области у пациента включает следующие этапы: а) введение пациенту диагностически эффективного количества соединения в комплексе с радионуклидом; б) экспонирование области организма пациента в сканирующем устройстве; и с) получение изображения указанной области организма пациента.

Ниже представлено более подробное описание заявляемого изобретения. Настоящее изобретение может подвергаться различным изменениям и модификациям, понятным специалисту на основе прочтения данного описания. Такие изменения не ограничивают объем притязаний.

Пример

К раствору соединения 1 (1.0 г., 1.61 ммоль) в метаноле (30 мл) было добавлено 100 мг 10% Pd/C. Реакция проводилась в атмосфере водорода (р=1 атм.). Контроль окончания реакции проводился с помощью тонкослойной хроматографии. По окончании реакции полученная реакционная смесь была отфильтрована через диатомитовый порошок Celite. Растворитель был удален при пониженном давлении. Таким образом, соединение (2) было выделено в виде постепенно кристаллизующейся желтой маслянистой жидкости, выход составил 0.762 г (97%).

Выделено в виде желтоватого маслянистого вещества, выход составил 0,41 г (68%).

Общая методика реакции восстановительного аминирования.

К раствору соединения 2 (1 экв) в метаноле добавили соответствующий бензальдегид (1 экв) и перемешивали 12 ч. Далее порционно добавили боргидрид натрия (1,5 экв) и перемешивали 1,5 часа. Далее удалили 2/3 растворителя и добавили 1М NaOH. Раствор экстрагировали DCM, органическую фракцию промыли насыщенным раствором хлорида натрия. Сушили над Na₂SO₄. Дальнейшее выделение проводили с помощью колоночной хроматографии (Interchim Puriflash 15μ 40g, От 4% метанола до 20% метанола за 20 минут, скорость потока 20 мл/мин, элюент: DCM/MeOH).

Соединение 3

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 2-нитробензальдегида (310 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 3 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 60% (770 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 4

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 3-нитробензальдегида (332 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 4 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 72% (920 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 5

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 4-нитробензальдегида (310 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 5 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 55% (707 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 6

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 2-метоксибензальдегида (279 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 6 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 58% (718 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 7

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 4-метоксибензальдегида (279 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 7 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 62% (776 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 8

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 4-этоксибензальдегида (308 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 8 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 33% (425 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 9

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 4-(трет-бутокси)формилбензальдегида (423 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 9 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 78% (1084 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 10

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 4-гидроксибензальдегида (200 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 10 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 60% (582 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 11

Из соединения 2 (1.000 мг.; 2.05 мМ), 4-диметиламинобензальдегида (306 мг; 2.05 мМ) в 60 мл метанола в присутствии бор гидрида натрия 115 мг (3,075 ммоль) было получено соединение 11 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 82% (1043 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 12

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 3,4-диметоксибензальдегида (283 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 12 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 66% (863 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 13

Из соединения 2 (1000 мг, 2,051 ммоль), 2,5-диметоксибензальдегида (341 мг, 2,051 ммоль) в 60 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 116 мг (3,077 ммоль) было получено соединение 13 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 73% (1017 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования)

Соединение 14

Из соединения 2 (400 мг, 0,82 ммоль), 3-хлорбензальдегида (115 мг, 0.82 ммоль) в 20 мл метанола в присутствии боргидрида натрия 47 мг (1,23 ммоль) было получено соединение 14 в виде бецветного маслянистого вещества с выходом 77% (387 мг). (См. Общая методика реакции восстановительного аминирования).

Общая методика проведения реакции ацилирования вторичного амина.

Вторичный амин (1 экв) растворили в DMF и добавили DIPEA (2 экв) и 6-азидогексановую кислоту (1,5 экв). К полученной смеси добавили РуВОР (1,2 экв), полученную реакционную смесь перемешивали 12 часов. После окончания реакции удалили растворитель при пониженном давлении. Сухой остаток растворили в DCM и провели экстракцию 1) H₂O и 2) насыщенным раствором NaCl. Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После растворитель удалили при пониженном давлении. Дальнейшую очистку проводили с помощью колоночной хроматографии (Interchim Puriflash 15μ 40g, скорость потока 20 мл/мин), используя следующий градиент: от 5% EtOAc до 100% за 30 минут.

Соединение 15

Из соединения 3 (629 мг, 1,01 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (238 мг, 1,515 ммоль), DIPEA (355 мкл, 2,02 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (631 мг, 1,212 ммоль) было получено соединение 15 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 65% (502 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 16

Из соединения 4 (915 мг, 1,469 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (346 мг, 2,203 ммоль), DIPEA (510 мкл, 2,938 ммоль) в 60 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (917 мг, 1,763 ммоль) было получено соединение 16 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 73% (812 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 17

Из соединения 5 (412 мг, 0,661 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (156 мг, 0,992 ммоль), DIPEA (230 мкл, 1,322 ммоль) в 30 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (413 мг, 0,793 ммоль) было получено соединение 17 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 85% (427 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 18

Из соединения 6 (647 мг, 1,064 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (251 мг, 1,596 ммоль), DIPEA (370 мкл, 2,128 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (664 мг, 1,277 ммоль) было получено соединение 18 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 83% (658 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 19

Из соединения 7 (726 мг, 1,194 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (281 мг, 1,791 ммоль), DIPEA (420 мкл, 2,388 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (745 мг, 1,433 ммоль) было получено соединение 19 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 83% (737 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 20

Из соединения 8 (366 мг, 0,589 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (139 мг, 0,884 ммоль), DIPEA (205 мкл, 1,178 ммоль) в 30 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (368 мг, 0,707 ммоль) было получено соединение 20 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 80% (360 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 21

Из соединения 9 (1000 мг, 1,476 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (348 мг, 2,214 ммоль), DIPEA (515 мкл, 2,952 ммоль) в 60 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (922 мг, 1,771 ммоль) было получено соединение 21 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 95% (1140 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 22

Из соединения 10 (593 мг, 1 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (220 мг, 1,5 ммоль), DIPEA (350 мкл, 2 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (624 мг, 1,2 ммоль) было получено соединение 22 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 67% (490 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 23

Из соединения 11 (500 мг, 0.8 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (189 мг, 1,2 ммоль), DIPEA (279 мкл, 1.6 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (500 мг, 0.96 ммоль) было получено соединение 23 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 78% (474 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 24

Из соединения 12 (789 мг, 1,237 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (291 мг, 1,855 ммоль), DIPEA (430 мкл, 2,474 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (772 мг, 1,484 ммоль) было получено соединение 24 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 85% (816 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 25

Из соединения 13 (915 мг, 1,469 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (346 мг, 2,203 ммоль), DIPEA (510 мкл, 2,938 ммоль) в 60 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (917 мг, 1,763 ммоль) было получено соединение 25 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 79% (919 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 26

Из соединения 14 (909 мг, 1.484 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (350 мг, 2,23 ммоль), DIPEA (517 мкл, 2.968 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (927 мг, 1.78 ммоль) было получено соединение 26 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 90% (1002 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Соединение 27

Из соединения 2 (768 мг, 1.57 ммоль), 6-азидогексановой кислоты (371 мг, 2,36 ммоль), DIPEA (547 мкл, 3.14 ммоль) в 40 мл диметилформамида в присутствии реагента РуВОР (980 мг, 1.88 ммоль) было получено соединение 27 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 79% (777 мг). (см. Общая методика реакции ацилирования вторичного амина).

Общая методика проведения реакции Штаудингера

К раствору азида (1 экв) в смеси ТГФ/Н₂О (5/1) был добавлен трифенилфосфин (2 экв) и перемешивали 6 часов при температуре 60°С. Далее удалили растворитель при пониженном давлении. Дальнейшую очистку проводили с помощью колоночной хроматографии с элюентом хлористый DCM (1% Et3N)-MeOH (Interchim Puriflash 15μ 40 g, скорость потока 20 мл/мин), используя следующий градиент: от 0% МеОН до 10% в течение 30 минут.

Соединение 28

Из соединения 15 (522 мг, 0,685 ммоль в 60 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (316 мг, 1,37 ммоль) было получено соединение 28 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 80% (403 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 29

Из соединения 16 (573 мг, 0,752 ммоль) в 60 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (395 мг, 1,504 ммоль) было получено соединение 29 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 96% (530 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 30

Из соединения 17 (400 мг, 0,525 ммоль в 24 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (275 мг, 1,05 ммоль) было получено соединение 30 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 97% (373 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 31

Из соединения 18 (594 мг, 0,796 ммоль) в 60 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (418 мг, 1,592 ммоль) было получено соединение 31 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 61% (350 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 32

Из соединения 19 (537 мг, 0,719 ммоль) в 24 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (377 мг, 1,438 ммоль) было получено соединение 32 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 91% (471 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 33

Из соединения 20 (275 мг, 0,361 ммоль) в 18 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (189 мг, 0,722 ммоль) было получено соединение 33 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 64% (170 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 34

Из соединения 21 (1073 мг, 1,314 ммоль) в 60 мл смеси ТГФ/H₂O в присутствии Ph₃P (689 мг, 2,628 ммоль) было получено соединение 34 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 75% (782 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 35

Из соединения 22 (423 мг, 0,578 ммоль) в 24 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (300 мг, 1,156 ммоль) было получено соединение 35 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 63% (256 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 36

Из соединения 23 (1.191 г; 1.567 ммоль) в 24 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (822 мг; 3,134 ммоль) было получено соединение 36 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 96% (1105 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 37

Из соединения 24 (696 мг, 0,896 ммоль) в 60 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (470 мг, 1,792 ммоль) было получено соединение 37 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 90% (608 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 38

Из соединения 25 (684 мг, 0,881 ммоль) в 60 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (462 мг, 1,762 ммоль) было получено соединение 38 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 77% (508 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 39

Из соединения 26 (159 мг, 0,212 ммоль) в 20 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (111 мг, 1,762 ммоль) было получено соединение 39 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 78% (120 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Соединение 40

Из соединения 27 (768 мг, 1,045 ммоль) в 20 мл смеси ТГФ/Н₂О в присутствии Ph₃P (548 мг, 2,09 ммоль) было получено соединение 40 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 78% (578 мг). (см. Общая методика реакции по Штаудингеру).

Общая методика реакции ацилирования янтарным ангидридом

К раствору амина (1 экв) в DCM добавили DIPEA (1.5 экв) и янтарный ангидрид (1.01 экв). Реакционная смесь перемешивалась в течение 6 часов. После чего был добавлен МеОН (1 экв) и система перемешивалась в течение 1 часа. Далее удалили растворитель при пониженном давлении. Остаток растворили в DCM, дальнейшую очистку проводили с помощью экстракции 1) Н₂О 2) 0.1М HCl. Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель при пониженном давлении.

Соединение 41

Из соединения 28 (354 мг, 0,481 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (49 мг, 0,486 ммоль) в присутствии DIPEA (126 мкл, 0,722 ммоль) было получено соединение 41 в виде желтого порошка с выходом 38% (153 мг). (см. Общая методика).

Соединение 42

Из соединения 29 (463 мг, 0,630 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (64 мг, 0,636 ммоль) в присутствии DIPEA (165 мкл, 0.945 ммоль) было получено соединение 42 в виде желтого порошка с выходом 72% (378 мг). (см. Общая методика).

Соединение 43

Из соединения 30 (365 мг, 0,496 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (50 мг, 0,501 ммоль) в присутствии DIPEA (130 мкл, 0,744 ммоль) было получено соединение 43 в виде желтого порошка с выходом 88% (365 мг). (см. Общая методика).

Соединение 44

Из соединения 31 (343 мг, 0,476 ммоль) в 10 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (48 мг, 0,481 ммоль) в присутствии DIPEA (124 мкл, 0,714 ммоль) было получено соединение 44 в виде бесцветного порошка с выходом 83% (324 мг). (см. Общая методика).

Соединение 45

Из соединения 32 (184 мг, 0,255 ммоль) в 10 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (26 мг, 0,258 ммоль) в присутствии DIPEA (67 мкл, 0,383 ммоль) было получено соединение 45 в виде бесцветного порошка с выходом 80% (168 мг). (см. Общая методика).

Соединение 46

Из соединения 33 (187 мг, 0,254 ммоль) в 10 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (26 мг, 0,257 ммоль) в присутствии DIPEA (66 мкл, 0,381 ммоль) было получено соединение 46 в виде бесцветного порошка с выходом 95% (201 мг). (см. Общая методика).

Соединение 47

Из соединения 34 (688 мг, 0,870 ммоль) в 30 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (88 мг, 0,879 ммоль) в присутствии DIPEA (227 мкл, 1,740 ммоль) было получено соединение 47 в виде белого порошка с выходом 84% (654 мг). (см. Общая методика).

Соединение 48

Из соединения 35 (512 мг, 0,724 ммоль) в 30 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (73 мг, 0,732 ммоль) в присутствии DIPEA (189 мкл, 1,086 ммоль) было получено соединение 48 в виде белого порошка с выходом 89% (520 мг). (см. Общая методика).

Соединение 49

Из соединения 36 (540 мг, 0,68 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (69 мг, 0,69 ммоль) в присутствии DIPEA (178 мкл, 1,02 ммоль) было получено соединение 49 в виде белого порошка с выходом 95% (562 мг). (см. Общая методика).

Соединение 50

Из соединения 37 (608 мг, 0,810 ммоль) в 25 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (82 мг, 0,818 ммоль) в присутствии DIPEA (212 мкл, 1,215 ммоль) было получено соединение 50 в виде бесцветного порошка с выходом 72% (494 мг). (см. Общая методика).

Соединение 51

Из соединения 38 (454 мг, 0,605 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (61 мг, 0,611 ммоль) в присутствии DIPEA (158 мкл, 0.908 ммоль) было получено соединение 51 в виде белого порошка с выходом 85% (410 мг). (см. Общая методика).

Соединение 52

Из соединения 39 (834 мг, 1.15 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (116 мг, 1.16 ммоль) в присутствии DIPEA (300 мкл, 1.725 ммоль) было получено соединение 52 в виде белого порошка с выходом 98% (930 мг). (см. Общая методика).

Соединение 53

Из соединения 40 (484 мг, 0.806 ммоль) в 20 мл ДХМ добавили янтарный ангидрид (81 мг, 0.814 ммоль) в присутствии DIPEA (140 мкл, 1.725 ммоль) было получено соединение 53 в виде белого порошка с выходом 92% (519 мг). (см. Общая методика).

Общая методика получения лигандов без фрагмента 3-аминопропилазида твердофазным методом

1) Активация смолы

2-хлортритил-хлоридная смола (2-СТС) (100-200 mesh, емкость 1,2-1,4 ммоль/г, 500 мг) перемешивалась в 5 мл хлористого метилена в течении 10 минут. После этого к раствору добавлялось 130 мкл хлористого тионила и через 3-4 минуты каталитическое количество ДМФА. Раствор перемешивался в течении 4 часов при температуре 40°С. После активации смолу промывали 3 раза по 1 минуте 5 мл ДМФА, затем 3 раза по одной минуте 5 мл хлористого метилена.

2) Присоединение первого аминокислотнгого остатка

Активированная смола перемешивалась в 5 мл ДМФА в течение 5 минут. После этого была добавлена первая Fmoc-защищенная аминокислота (2 экв. относительно верхней границы емкости смолы) и DIPEA (10 экв). Далее реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. По окончании реакции излишки растворителя удалялись из реактора, а полученная смесь промывалась три раза по 5 минут 5 мл метанола, три раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена, три раза по 1 минуте 5 мл ДМФА и два раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена.

3) Снятие Fmoc-защитной группы

Смолу промывали два раза по 1 минуте 5 мл ДМФА. После этого было добавлено 5 мл 20% раствора 4-метилпиперидина в ДМФА. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут. Затем растворитель удаляли, а полученную смесь промывали два раза по 1 минуте 5 мл ДМФА и три раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена. Данную процедуру повторяли дважды.

4) Присоединение второго аминокислотнгого остатка

Смолу промыли два раза по 1 минуте 5 мл ДМФА. Затем добавили 5 мл ДМФА, Fmoc-защищенную аминокислоту (2 экв.), HOBt (0.5 экв.), HBTU (2 экв.) и DIPEA (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов, после чего растворитель удалялся, а смолу промывали три раза по 1 минуте 5 мл ДМФА и три раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена. Далее проводили снятие Fmoc-защитной группы аналогично как описано в пункте 3 данной методики.

5) Присоединение соединения IV

Смолу промыли два раза по 1 минуте 5 мл ДМФА. Затем добавили 5 мл ДМФА, соединение IV (1.2 экв.), HOBt (0.5 экв.), HBTU (2 экв.) и DIPEA (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов, после чего растворитель удалялся, а смолу промывали три раза по 1 минуте 5 мл ДМФА и три раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена.

6) Снятие фрагмента лиганда со смолы

Смолу промыли два раза по 1 минуте 5 мл хлористого метилена. После этого было добавлено 5 мл 0,5% раствора трифторуксусной кислоты в ДХМ. Полученную смесь перемешивали в течение 15 минут. Процедуру повторяли дважды. Полученный фильтрат упарили на роторном испарителе и несколько раз переупарили из хлористого метилена. Соединение далее очищали методом обращеннофазовой колоночной хроматографии с элюентом ацетонитрил: вода (Interchim Puriflash, С18-НР, 15μ, 25g, от 10% ацетонитрила до 100% ацетонитрила за 20 минут, скорость потока - 20 мл/мин). Расчет выхода конечного соединения проводили исходя из максимальной емкости смолы.

Соединение 54

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 41 (351 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 41, было получено соединение 54 в виде бледно-желтого масла с выходом 76% (300 мг).

Соединение 55

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 42 (351 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 42, было получено соединение 55 в виде бледно-желтого масла с выходом 69% (273 мг).

Соединение 56

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 43 (351 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 43, было получено соединение 56 в виде бледно-желтого масла с выходом 67% (265 мг).

Соединение 57

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 44 (345 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 44, было получено соединение 57 в виде бледно-желтого масла с выходом 55% (214 мг).

Соединение 58

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 45 (345 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 45, было получено соединение 58 в виде бледно-желтого масла с выходом 61% (238 мг).

Соединение 59

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 46 (350 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 46, было получено соединение 59 в виде бледно-желтого масла с выходом 72% (284 мг).

Соединение 60

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фениаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 47 (375 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 47, было получено соединение 60 в виде бледно-желтого масла с выходом 74% (307 мг).

¹Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆ δ):

12.71 (br.s., 1H, F6COOH), 8.32-8.22 (br.d., 1H, F5NHmn), 8.11-8.00 (br.d., 1H, F6NHmn), 7.91-7.80 (m, 2H, X8Hdn+X8Hdm), 7.79 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.75 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk), 7.34-7.11 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.35-6.19 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.67-4.52 (m, 2H, X8Han+X8Ham), 4.52-4.45 (m, 1H, F6Ha), 4.44-4.36 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ha), 3.20 (t, J=7.3 Hz, n) & 3.16 (t, J=7.3 Hz, m) (2H, K2He), 3.10-3.03 (m, 1H, F6Hb(a)), 3.02-2.89 (m, 4H, F6Hb(b)+X3Hemn+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.35 (t, J=7.4 Hz, X3Ham), 2.30-2.10 (m, X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.71-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.53 (s, 9H, tBu), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H,tBu).

Соединение 61

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 48 (339 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 48, было получено соединение 61 в виде бледно-желтого масла с выходом 62% (239 мг).

Соединение 62

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 49 (339 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 49, было получено соединение 62 в виде желтого масла с выходом 63% (249 мг).

Соединение 63

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 50 (357 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 50, было получено соединение 63 в виде бледно-желтого масла с выходом 65% (260 мг).

Соединение 64

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 51 (357 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 51, было получено соединение 64 в виде бледно-желтого масла с выходом 68% (273 мг).

Соединение 65

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 47 (375 г, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 47, было получено соединение 65 в виде бледно-желтого масла с выходом 58% (244 мг).

Соединение 66

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 41 (351 мг, 0,42 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 41, было получено соединение 66 в виде бледно-желтого масла с выходом 70% (281 мг).

Соединение 67

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-D-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 67 в виде желтоватого масла с выходом 74% (308 мг).

Соединение 68

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-3-Br-L-тирозина (376 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-D-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено 216 мг соединения 68 в виде желтоватого масла с выходом 69% (293 мг).

Соединение 69

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-3-NO₂-L-тирозина (352 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено 216 мг соединения 69 в виде желтоватого масла с выходом 75% (309 мг).

Соединение 70

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-3-NO₂-L-тирозина (352 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-D-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено 216 мг соединения 70 в виде желтоватого масла с выходом 71% (293 мг).

Соединение 71

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-O'Bu-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено 216 мг соединения 71 в виде желтоватого масла с выходом 82% (370 мг).

Соединение 72

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-O'Bu-D-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 72 в виде желтоватого масла с выходом 85% (376 мг).

Соединение 73

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-O'Bu-L-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-D-тирозина (322 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 73 в виде желтоватого масла с выходом 70% (310 мг).

Соединение 74

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-O'Bu-L-тирозина (321 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-L-тирозина (321 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 53 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 53, было получено соединение 74 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 75

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-D-4-Br-фенилалнина (326 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-D-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 75 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 76

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-2-Br-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-2-Br-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 76 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 77

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-3-Br-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 77 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 78

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-4-Br-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (326 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 78 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 79

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc- O'Bu-L-тирозина (282 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 79 в виде желтоватого масла с выходом 54% (194 мг).

Соединение 80

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc- O'Bu-L-3-O'Bu-гидрокси-тирозина (371 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-O'Bu-D-тирозина (321 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 80 в виде желтоватого масла с выходом 57% (210 мг).

Соединение 81

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc-L-3-С1-тирозина (345 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 52 (375 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 52, было получено соединение 81 в виде желтоватого масла с выходом 46% (170 мг).

Соединение 82

Из 2-СТС смолы (250 мг, 0,300-0,350 ммоль), Fmoc- O'Bu-3-NO₂-L-тирозина (352 мг, 0,700 ммоль), DIPEA (600 мкл, 3,500 ммоль) для присоединения первой аминокислоты, Fmoc-L-фенилаланина (271 мг, 0,700 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения второй аминокислоты и соединения 47 (405 мг, 0,455 ммоль), HBTU (261 мг, 0,700 ммоль), HOBt (24 мг, 0,175 ммоль) и DIPEA (180 мкл, 1,050 ммоль) для присоединения соединения 47, было получено соединение 82 в виде желтоватого масла с выходом 46% (170 мг).

Общая методика присоединения 3-аминопропилазида.

Векторный фрагмент VI (1 экв) растворили в DMF, затем добавили DIPEA (2 экв), аминопропилазид (АПА) (1,5 экв), после добавили HBTU (1,5 экв), HOBt (1 экв). Смесь перемешивалась в течение 16 часов. После окончания реакции удалили растворитель, сухой остаток растворили в хлористом метилене и промыли дважды водой и насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. Удалили растворитель при пониженном давлении. Дальнейшую очистку проводили с помощью метода колоночной хроматографии с элюентом DCM-MeOH (InterchimInterchim Puriflash 15μ 25g, от 2% до 20% метанола в течение 30 минут, скорость потока - 20 мл/мин).

Соединение 83

Из соединения 54 (187 мг, 0,165 ммоль), АПА (25 мг, 0,248 ммоль), DIPEA (57 мкл, 0,33 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (94 мг, 0,248 ммоль) и HOBt (22 мг, 0,165 ммоль) было получено соединение 83 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 55% (110 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 84

Из соединения 55 (270 мг, 0,239 ммоль), АПА (36 мг, 0,359 ммоль), DIPEA (84 мкл, 0,478 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (136 мг, 0,359 ммоль) и HOBt (32 мг, 0,239 ммоль) было получено соединение 84 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 65% (190 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 85

Из соединения 56 (270 мг, 0,239 ммоль), АПА (36 мг, 0,359 ммоль), DIPEA (84 мкл, 0,478 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (136 мг, 0,359 ммоль) и HOBt (32 мг, 0,239 ммоль) было получено соединение 85 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 36% (104 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 86

Из соединения 57 (269 мг, 0,241 ммоль), АПА (36 мг, 0,362 ммоль), DIPEA (84 мкл, 0,482 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (136 мг, 0,362 ммоль) и HOBt (32 мг, 0,241 ммоль) было получено соединение 86 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 62% (182 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 87

Из соединения 58 (229 мг, 0,205 ммоль), АПА (31 мг, 0,308 ммоль), DIPEA (72 мкл, 0,41 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (117 мг, 0,308 ммоль) и HOBt (28 мг, 0,205 ммоль) было получено соединение 87 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 42% (104 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 88

Из соединения 58 (299 мг, 0,265 ммоль), АПА (40 мг, 0,398 ммоль), DIPEA (92 мкл, 0,53 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (151 мг, 0,398 ммоль) и HOBt (36 мг, 0,265 ммоль) было получено соединение 88 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 35% (113 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 89

Из соединения 60 (400 мг, 0,337 ммоль), АПА (51 мг, 0,506 ммоль), DIPEA (117 мкл, 0,674 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (192 мг, 0,506 ммоль) и HOBt (46 мг, 0,337 ммоль) было получено соединение 89 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 39% (167 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 90

Из соединения 61 (181 мг, 0,164 ммоль), АПА (25 мг, 0,246 ммоль), DIPEA (57 мкл, 0,328 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (93 мг, 0,246 ммоль) и HOBt (22 мг, 0,164 ммоль) было получено соединение 90 в виде бесцветного маслянистого вещества с выходом 47% (76 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 91

Из соединения 62 (243 мг, 0,215 ммоль), АПА (32 мг, 0,323 ммоль), DIPEA (75 мкл, 0,43 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (123 мг, 0,323 ммоль) и HOBt (29 мг, 0,215 ммоль) было получено соединение 91 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 46% (120 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 92

Из соединения 63 (269 мг, 0,235 ммоль), АПА (35 мг, 0,353 ммоль), DIPEA (82 мкл, 0,47 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (134 мг, 0,353 ммоль) и HOBt (32 мг, 0,235 ммоль) было получено соединение 92 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 55% (160 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 93

Из соединения 64 (254 мг, 0,222 ммоль), АПА (33 мг, 0,333 ммоль), DIPEA (82 мкл, 0,47 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (126 мг, 0,333 ммоль) и HOBt (30 мг, 0,222 ммоль) было получено соединение 93 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 30% (81 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 94

Из соединения 65 (405 мг, 0,337 ммоль), АПА (51 мг, 0,506 ммоль), DIPEA (117 мкл, 0,674 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (192 мг, 0,506 ммоль) и HOBt (46 мг, 0,337 ммоль) было получено соединение 94 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 23% (98 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 95

Из соединения 66 (340 мг, 0,297 ммоль), АПА (45 мг, 0,446 ммоль), DIPEA (103 мкл, 0,594 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (169 мг, 0,446 ммоль) и HOBt (40 мг, 0,297 ммоль) было получено соединение 95 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 71% (238 мг). (см. Общая методика синтеза).

Соединение 96

Из соединения 67 (120 мг, 0,099 ммоль), АПА (15 мг, 0,149 ммоль), HOBt (13 мг, 0,099 ммоль), HBTU (57 мг, 0,15 ммоль) и DIPEA (35 мкл, 0,2 ммоль) было получено соединение 96 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 95% (121 мг).

Соединение №97

Из соединения 68 (251 мг, 0,207 ммоль), АПА (31 мг, 0,31 ммоль), HOBt (28 мг, 0,207 ммоль), HBTU (118 мг, 0,31 ммоль) и DIPEA (72 мкл, 0,414 ммоль) было получено соединение 97 в виде желтоватого маслянистого вещества с выходом 75% (201 мг).

Соединение 98

Из соединения 69 (250 мг, 0,303 ммоль), АПА (46 мг, 0,454 ммоль), HOBt (41 мг, 0,303 ммоль), HBTU (172 мг, 0,454 ммоль) и DIPEA (105 мкл, 0,606 ммоль) было получено соединение 98 в виде желтоватого маслянистого вещества с выходом 87% (333 мг).

Соединение 99

Из соединения 70 (358 мг, 0,303 ммоль), АПА (46 мг, 0,454 ммоль), HOBt (41 мг, 0,303 ммоль), HBTU (172 мг, 0,454 ммоль) и DIPEA (105 мкл, 0,606 ммоль) было получено соединение 99 в виде желтоватого маслянистого вещества с выходом 71% (273 мг).

Соединение 100

Из соединения 71 (160 мг, 0,126 ммоль), АПА (19 мг, 0,190 ммоль), HOBt (21 мг, 0,152 ммоль), HBTU (58 мг, 0,152 ммоль) и DIPEA (32 мкл, 0,189 ммоль) было получено соединение 100 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 77% (130 мг).

Соединение 101

Из соединения 72 (183 мг, 0,145 ммоль), АПА (21 мг, 0,217 ммоль), HOBt (23 мг, 0,174 ммоль), HBTU (66 мг, 0,174 ммоль) и DIPEA (37 мкл, 0,217 ммоль) было получено соединение 101 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 95% (186 мг).

Соединение 102

Из соединения 73 (200 мг, 0,162 ммоль), АПА (24 мг, 0,243 ммоль), HOBt (26 мг, 0,195 ммоль), HBTU (74 мг, 0,195 ммоль) и DIPEA (42 мкл, 0,243 ммоль) было получено соединение 102 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 83% (181 мг).

Соединение 103

Из соединения 74 (342 мг, 0,333 ммоль), АПА (50 мг, 0,5 ммоль), DIPEA (116 мкл, 0,666 ммоль) в 10 мл DMF в присутствии реагентов HBTU (190 мг, 0,5 ммоль) и HOBt (45 мг, 0,333 ммоль) было получено соединение 103 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 45% (166 мг).

Соединение 104

Из соединения 75 (320 мг, 0,288 ммоль), АПА (43 мг, 0,432 ммоль), HOBt (47 мг, 0,347 ммоль), HBTU (131 мг, 0,347 ммоль) и DIPEA (74 мкл, 0,432 ммоль) было получено соединение 104 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 43% (157 мг).

Соединение 105

Из соединения 76 (367 мг, 0,320 ммоль), АПА (48 мг, 0,480 ммоль), HOBt (52 мг, 0,385 ммоль), HBTU (146 мг, 0,385 ммоль) и DIPEA (83 мкл, 0,480 ммоль) было получено соединение 105 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 91% (373 мг).

Соединение 106

Из соединения 77 (400 мг, 0,350 ммоль), АПА (53 мг, 0,525 ммоль), HOBt (57 мг, 0,420 ммоль), HBTU (159 мг, 0,420 ммоль) и DIPEA (90 мкл, 0,525 ммоль) было получено соединение 106 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 98% (417 мг).

Соединение 107

Из соединения 78 (306 мг, 0,255 ммоль), АПА (38 мг, 0,383 ммоль), HOBt (42 мг, 0,306 ммоль), HBTU (116 мг, 0,306 ммоль) и DIPEA (66 мкл, 0,383 ммоль) было получено соединение 107 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 83% (181 мг).

Соединение 108

Из соединения 79 (178 мг, 0,149 ммоль), АПА (23 мг, 0,224 ммоль), HOBt (24 мг, 0,179 ммоль), HBTU (68 мг, 0,179 ммоль) и DIPEA (52 мкл, 0,298 ммоль) было получено соединение 108 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 75% (144 мг).

Соединение 109

Из соединения 80 (349 мг, 0,3039 ммоль), АПА (46 мг, 0,456 ммоль), HOBt (61 мг, 0,454 ммоль), HBTU (172 мг, 0,454 ммоль) и DIPEA (105 мкл, 0,605 ммоль) было получено соединение 109 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 64% (240 мг).

Соединение 110

Из соединения 81 (73 мг, 0,0649 ммоль), АПА (10 мг, 0,0974 ммоль), HOBt (10 мг, 0,0779 ммоль), HBTU (30 мг, 0,0974 ммоль) и DIPEA (17 мкл, 0,0974 ммоль) было получено соединение 110 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 54% (83 мг).

Соединение 111

Из соединения 82 (140 мг, 0,1683 ммоль), АПА (24 мг, 0,243 ммоль), HOBt (26 мг, 0,195 ммоль), HBTU (74 мг, 0,195 ммоль) и DIPEA (42 мкл, 0,243 ммоль) было получено соединение 111 в виде желтого маслянистого вещества с выходом 83% (181 мг).

Общая методика снятия три-трет-бутильных защитных групп

В раствор трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) растворили tBu-лиганд VII (1 экв.) и перемешивали 3 часа при комнатной температуре. Растворитель удалили при пониженном давлении. Полученное вещество переупарили 3 раза из ДХМ. К полученному маслянистому осадку добавили диэтиловый эфир, в результате чего выделился белый аморфный продукт. Диэтиловый эфир декантировали, процедуру повторили еще 2 раза. Далее продукт очищали с помощью метода обращеннофазовой колоночной хроматографии, в качестве эклюента использовались 0,1% раствор трифторуксусной кислоты в воде: ацетонитрил (Puriflash С18-НР, 15 μ, 20g, элюент: система ацетонитрил-0,1% раствор трифторуксусной кислоты в воде: от 10% ацетонитрила до 100% за 20 минут).

Соединение 112

Из соединения 83 (100 мг, 82,47 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 112 в виде белого порошка с выходом 48% (41 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 12.50 (уш.с, 2Н, СООН), 8.16-8.34 (м, 2Н, Ph), 8.01-8.13 (м, 1H, Ph), 7.90-7.96 (м, 1H, Ph), 7.65-7.77 (м, 1H, NH), 7.47-7.60 (м, 2Н, NH), 7.16-7.29 (м, 11Н, Ph+NH), 6.28-6.32 (м, 2Н, NH), 4.74-4.89 (м, 2Н, СН₂), 4.29-4.41 (м, 2Н, СН), 3.99-4.07 (м, 2Н, СН), 3.21-3.24 (м, 6Н, СН₂), 3.03-3.12 (м, 5Н, СН₂), 2.88-2.96 (м, 3Н, СН₂), 2.60-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.38-2.42 (м, 1Н, СН₂), 2.30-2.35 (м, 2Н, СН₂), 2.19-2.24 (м, 3Н, СН₂), 2.07-2.17 (м, 2Н, СН₂), 1.87-1.88 (м, 1Н, СН₂), 1.67-1.72 (м, 1Н, СН₂), 1.55-1.63 (м, 3Н, СН₂), 1.49-1.51 (м, 3Н, СН₂), 1.35-1.43 (м, 4Н, СН₂), 1.14-1.28 (м, 6Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 173.93 (СООН), 173.05 (СООН), 171.74 (СООН), 171.20 (СООН), 170.83 (СООН), 157.35 (С(О)),155.19 (Ph), 149.93 (Ph), 147.84 (Ph), 141.01 (Ph), 138.01 (Ph), 137.89 (Ph), 134.08 (Ph), 129.88 (Ph),128.99 (Ph),128.20 (Ph),128.10 (Ph),126.34 (Ph),121.91 (Ph), 55.13 (CH), 54.50 (CH), 52.21 (CH₂), 48.14 (CH), 36.72 (CH₂), 35.90 (CH₂), 31.79 (CH₂), 30.69 (CH₂), 30.07 (CH₂), 28.98 (CH₂), 28.10 (CH₂), 27.90 (CH₂), 27.69 (CH₂), 26.23 (CH₂), 24.72 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅N₁₁O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1044.4785, найдено: 1044.4791; m/z рассчитано для [M-Na^-] 1042.4629, найдено: 1042.4662.

Соединение 113

Из соединения 84 (96 мг, 79,18 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 113 в виде белого порошка с выходом 56% (87 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 8.33-8.36 (м, 1H, NH), 8.18-8.22 (м, 1Н, NH), 8.06-8.12 (м, 1Н, Ph), 7.94-8.01 (м, 2Н, NH), 7.56-7.64 (м, 3Н, Ph),7.12-7.26 (м, 10Н, Ph), 6.30-6.34 (м, 2Н, NH), 4.57-4.67 (м, 2Н, СН₂), 4.36-4.37 (м, 2Н, СН), 4.26 (м, 2Н, СН), 3.20-3.23 (м, 6Н, СН₂), 3.00-3.11 (м, 6Н, СН₂), 2.86-2.96 (м, 4Н, СН₂), 2.60-2.66 (м, 2Н, СН₂), 2.34-2.36 (м, 3Н, СН₂), 2.14-2.26 (м, 5Н, СН₂), 1.87-1.89 (м, 1H, СН₂), 1.69-1.72 (м, 1Н, СН₂), 1.55-1.57 (м, 3Н, СН₂), 1.49-1.53 (м, 4Н, СН₂), 1.37-1.42 (м, 3Н, СН₂), 1.15-1.29 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 173.93 (СООН), 173.05 (СООН), 171.74 (СООН), 171.20 (СООН), 170.83 (СООН), 157.35 (С(О)), 155.19 (С(О)), 149.93 (Ph), 147.84 (Ph), 141.01 (Ph), 138.01 (Ph), 137.89 (Ph), 134.08 (Ph), 129.88 (Ph), 128.99 (Ph), 128.20 (Ph), 128.10 (Ph), 126.34 (Ph), 121.91 (Ph), 55.13 (CH), 54.50 (CH), 52.21 (CH₂), 48.14 (CH), 36.72 (CH₂), 35.90 (CH₂), 31.79 (CH₂), 30.69 (CH₂), 30.07 (CH₂), 28.98 (CH₂), 28.10 (CH₂), 27.90 (CH₂), 27.69 (CH₂), 26.23 (CH₂), 24.72 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅N₁₁O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1044.4785, найдено: 1044.4771; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1066.4605, найдено: 1066.4610; m/z рассчитано для [М-H^-] 1042.4629, найдено: 1042.4642.

ИК (см^-1):3288, 2934, 2101, 1723, 1637, 1533, 1455, 1440, 1350, 1256, 1211, 1025, 700.

Соединение 114

Из соединения 85 (96 мг, 79,18 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 114 в виде белого порошка с выходом 20% (17 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 8.30 (д, J=6.8 Гц 1Н, NH), 8.21 (д, J=8.7 Гц, 1H, NH), 8.16 (д, J=8.6 Гц, 2Н, Ph), 7.91-7.96 (м, 1Н, NH), 7.57-7.60 (м, 1H, NH), 7.43 (д, J=8.6 Гц, 2Н, Ph), 7.14-7.28 (м, 10Н, Ph), 6.27-6.33 (м, 2Н, NH), 4.58-4.69 (м, 2Н, СН₂), 4.26-4.41 (м, 3Н, СН), 4.01-4.11 (м, 3Н, СН+СН₂), 3.15-3.24 (м, 5Н, СН₂), 3.01-3.10 (м, 5Н, СН₂), 2.88-2.97 (м, 3Н, СН₂), 2.61-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.30-2.38 (м, 4Н, СН₂), 2.14-2.25 (м, 5Н, СН₂), 1.89-1.93 (м, 1H, СН₂), 1.66-1.74 (м, 1H, СН₂), 1.55-1.63 (м, 3Н, СН₂), 1.42-1.51 (м, 5Н, СН₂), 1.36-1.41 (м, 3Н, СН₂), 1.18-1.32 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 174.96 (СООН), 174.18 (СООН), 173.75 (СООН), 172.81 (СООН), 172.29 (СООН),172.22 (СООН),171.59 (СООН),171.11 (СООН), 170.70 (СООН), 157.27 (С(О)), 146.88 (Ph), 146.73 (Ph), 146.51 (Ph), 146.37 (Ph), 138.06 (Ph), 138.00 (Ph), 129.22 (Ph), 129.03 (Ph), 128.38 (Ph), 128.19 (Ph), 128.08 (Ph), 127.56 (Ph),126.32 (Ph), 126.26 (Ph),123.86 (Ph),123.53 (Ph), 54.98 (CH), 54.41 (CH), 52.10 (CH₂),51.67 (CH₂), 48.17 (CH), 47.64 (CH₂), 38.65 (CH₂), 37.06 (CH₂), 36.82 (CH₂), 35.88 (CH₂), 31.90 (CH₂), 31.81 (CH₂), 30.66 (CH₂), 30.54 (CH₂), 29.93 (CH₂), 29.06 (CH₂), 28.17 (CH₂), 27.76 (CH₂), 27.56 (CH₂), 26.30 (CH₂), 26.21 (CH₂), 24.67 (CH₂), 22.32 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅N₁₁O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1044.4785, найдено: 1044.4797; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1066.4605, найдено: 1066.4628; m/z рассчитано для [М+K⁺] 1082.4344, найдено: 1082.4357; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1042.4629, найдено: 1042.4641.

Соединение 115

Из соединения 86 (187 мг, 156 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 115 в виде белого порошка с выходом 25% (40 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 8.32-8.35 (м, 1H, NH), 8.18-8.22 (м, 1Н, NH), 7.93-7.96 (м, 1Н, NH), 7.58-7.59 (м, 1H, Ph), 7.14-7.25 (м, 10Н, Ph), 6.86-7.00 (м, 3Н, Ph), 6.28-6.30 (м, 2Н, NH), 4.28-4.41 (м, 4Н, СН+СН₂), 3.99-4.08 (м, 2Н, СН₂), 3.77-3.78 (м, 3Н, ОСН₃), 3.16-3.24 (м, 6Н, СН₂), 3.01-3.06 (м, 4Н, СН₂), 2.88-2.98 (м, 3Н, СН₂), 2.61-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.31-2.33 (м, 2Н, СН₂), 2.16-2.25 (м, 5Н, СН₂), 1.86-1.89 (м, 1H, СН₂), 1.69-1.72 (м, 1H, СН₂), 1.55-1.59 (м, 3Н, СН₂), 1.44-1.52 (м, 3Н, СН₂), 1.37-1.42 (м, 2Н, СН₂), 1.25-1.33 (м, 3Н, СН₂), 1.15-1.22 (м, 3Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.92 (СООН), 174.60 (СООН), 174.23(СООН), 171.98 (СООН), 171.52 (СООН), 171.11 (СООН), 157.67 (С(О)), 157.20 (С(О)Х 138.45 (Ph), 138.38 (Ph), 129.42 (Ph), 128.57 (Ph), 128.47 (Ph), 126.71 (Ph), 126.65 (Ph), 55.68 (ОСН₃), 55.44 (CH), 55.00 (CH), 54.85 (CH₂), 48.55 (CH), 47.31 (CH₂), 46.32 (CH₂), 37.41 (CH₂), 37.16 (CH₂), 36.27 (CH₂), 28.55 (CH₂), 28.13 (CH₂), 26.71 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₁H₆₈N₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1029.5040, найдено: 1029.5030; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1051.4860, найдено: 1051.4848; m/z рассчитано для [М-H^-] 1027.4884, найдено: 1027.4896.

ИК (см^-1):3285, 2926, 2856, 2098, 1721, 1635, 1545, 1494, 1455, 1242, 1024, 752, 700.

Соединение 116

Из соединения 87 (104 мг, 86,85 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 116 в виде белого порошка с выходом 80% (72 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 8.18-8.38 (м, 2Н, NH), 7.56-7.99 (м, 2Н, NH), 7.16-7.28 (м, 7Н, Ph), 7.11-7.13 (м, 3Н, Ph), 7.06-7.08 (м, 2Н, Ph), 6.82-3.89 (м, 2Н, Ph), 6.30-6.32 (м, 2Н, NH), 4.33-4.41 (м, 4Н, СН+СН₂), 4.24-4.25(м, 2Н, СН), 3.96-4.04 (м, 5Н, СН₂), 3.18-3.22 (м, 4Н, СН₂), 3.12-3.15 (м, 2Н, СН₂), 3.04-3.07 (м, 5Н, СН₂), 2.93-3.01 (м, 3Н, СН₂), 2.85-2.90 (м, 2Н, СН₂), 2.59-2.65 (м, 2Н, СН₂), 2.29-2.35 (м, 2Н, СН₂), 2.26-2.27 (м, 2Н, СН₂), 2.21-2.24 (м, 3Н, СН₂), 2.15-2.16(м, 1H, СН₂), 1.83-1.87 (м, 1H, СН₂), 1.71-1.72 (м, 1H, СН₂), 1.55-1.58 (м, 3Н, СН₂), 1.44-1.48 (м, 4Н, СН₂), 1.35-1.39 (м, 2Н, СН₂), 1.27-1.33 (м, 2Н, СН₂), 1.19-1.23 (м, 4Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.64 (СООН), 174.30 (СООН), 174.04 (СООН), 171.77 (СООН), 171.21 (СООН), 170.85 (СООН), 158.43 (С(О)), 137.97 (Ph), 137.84 (Ph), 130.24 (Ph), 128.98 (Ph), 128.22 (Ph), 128.12 (Ph), 127.76 (Ph), 126.33 (Ph), 114.08 (Ph), 113.78 (Ph), 59.48 (СН), 55.14 (CH), 55.08 (CH₂), 55.04 (CH₂), 54.52 (CH), 54.26 (CH₂), 48.14 (CH), 35.92 (CH₂), 30.67 (CH₂), 30.18 (CH₂), 28.08 (CH₂), 26.23 (CH₂), 24.75 (CH₂), 24.62 (CH₂), 22.36 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₁H₆₈N₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1029.5040, найдено: 1029.5001; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1051.4860, найдено: 1051.4882; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1027.4884, найдено: 1027.4893.

ИК (см^-1):3291, 2935, 2098, 1722, 1635, 1549, 1513, 1455, 1247, 1026, 701.

Соединение 117

Из соединения 88 (114 мг, 93,27 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 117 в виде белого порошка с выходом 10% (10 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 8.18-8.37 (м, 1Н, NH), 7.58-7.96 (м, 1Н, NH), 7.14-7.28 (м, 10Н, Ph), 7.05-7.10 (м, 2Н, Ph), 6.81-6.89 (м, 2Н, Ph), 6.30-6.31 (м, 2Н, NH), 4.38-4.42 (м, 2Н, СН₂+СН), 4.28 (м, 1H, СН), 4.01-4.05 (м, 2Н, СН), 3.94-3.98 (м, 2Н, СН₂), 3.22-3.28 (м, 5Н, СН₂), 3.14-3.17 (м, 3Н, СН3), 2.97-3.08 (м, 6Н, СН₂), 2.88-2.92 (м, 2Н, СН₂), 2.62-2.77 (м, 2Н, СН₂), 2.26-2.35 (м, 3Н, СН₂), 2.16-2.24 (м, 4Н, СН₂), 1.82-1.90 (м, 1H, СН₂), 1.72-1.74 (м, 3Н, СН₂), 1.56-1.59 (м, 3Н, СН₂), 1.48-1.50 (м, 4Н, СН₂), 1.38-1.40 (м, 2Н, СН₂), 1.27-1.30 (м, 4Н, СН₂), 1.19-1.22 (м, 4Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.59 (СООН), 174.24 (СООН), 173.93 (СООН), 171.77 (СООН), 171.58 (СООН), 171.13 (СООН), 170.74 (СООН), 157.70 (С(O)),157.55 (С(О)), 157.24 (С(О)), 138.08 (Ph), 138.01 (Ph), 130.22 (Ph), 129.52 (Ph), 129.16 (Ph), 129.04 (Ph), 128.94 (Ph), 128.39 (Ph), 128.19 (Ph), 128.08 (Ph), 127.75 (Ph), 126.32 (Ph), 126.25 (Ph), 114.54 (Ph), 114.25 (Ph), 62.99 (CH₂), 62.93 (СЩ), 55.05 (CH), 54.46 (CH), 53.96 (CH₂), 52.22 (CH₂),51.90 (CH₂), 48.16 (CH), 38.60 (CH₂), 37.04 (CH₂), 36.84 (CH₂), 35.87 (CH₂), 32.40 (CH₂), 31.83 (CH₂), 30.69 (CH₂), 30.40 (CH₂), 29.03 (CH₂), 28.16 (CH₂), 27.99 (CH₂), 26.27 (CH₂), 24.78 (CH₂), 22.42 (CH₂), 14.70 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₂H₇₀N₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1043.5197, найдено: 1043.5194;m/z рассчитано для [М-Н^-] 1041.5040, найдено: 1041.5050.

Соединение 118

Из соединения 89 (154 мг, 121 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 118 в виде белого порошка с выходом 20% (25 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 12.52 (уш.с, 2Н, СООН), 8.18-8.33 (м, 2Н, Ph), 7.86-7.96 (м, 2Н, Ph), 7.57-7.59 (м, 1H, NH), 7.15-7.29 (м, 10Н, Ph), 6.28-6.34 (м, 2Н, NH), 4.53-4.60 (м, 2Н, СН), 4.26-4.39 (м, 2Н, СН), 4.03-4.17 (м, 2Н, СН₂), 3.09-3.26 (м, 7Н, СН₂), 3.03-3.11 (м, 4Н, СН₂), 2.89-2.95 (м, 2Н, СН₂), 2.61-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.33-2.36 (м, 3Н, СН₂), 2.16-2.25 (м, 4Н, СН₂), 1.89-1.91 (м, 1Н, СН₂), 1.67-1.72 (м, 1H, СН₂), 1.56-1.58 (м, 2Н, СН₂), 1.37-1.51 (м, 6Н, СН₂), 1.22-1.26 (м, 4Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.59 (СООН), 174.56 (СООН), 174.24 (СООН), 173.95 (СООН), 173.31 (СООН), 172.47 (СООН), 171.90 (СООН), 171.29 (СООН), 170.95 (СООН), 167.35 (С(О)), 167.26 (С(О)), 157.43 (С(О)), 143.65 (Ph), 143.19 (Ph), 137.93 (Ph), 137.76 (Ph), 129.77 (Ph), 129.67 (Ph), 129.47 (Ph), 129.33 (Ph), 129.00 (Ph), 128.97 (Ph), 128.24 (Ph), 128.16 (Ph),127.34 (Ph),126.44 (Ph),126.41 (Ph), 55.23 (CH), 54.57 (CH), 52.15 (CH₂), 51.72 (CH₂), 48.09 (CH), 36.81 (CH₂), 36.63 (CH₂), 35.93 (CH₂), 31.60 (CH₂), 31.65 (CH₂), 30.58 (CH₂), 30.46 (CH₂), 29.91 (CH₂), 28.89 (CH₂), 28.80 (CH₂), 28.03 (CH₂), 27.68 (CH₂), 27.47 (CH₂), 26.21 (CH₂), 26.13 (CH₂), 24.67 (CH₂), 24.51 (CH₂), 22.47 (CH₂), 22.29 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₁H₆₆N₁₀O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1043.4833, найдено: 1043.4860; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1041.4676, найдено: 1041.4684.

Соединение 119

Из соединения 90 (68 мг, 66,99 мкмоль) и 3 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 119 в виде белого порошка с выходом 15% (10 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.38 (уш.с, 2Н, СООН), 8.31 (д, J=6.9 Гц 1Н, NH), 8.16-8.18 (м, 1H, NH), 7.93-7.94 (м, 1H, NH), 7.57-7.59 (м, 1Н, NH), 7.15-7.28(м, 10Н, Ph), 6.97 (дд, J=10.4 Гц, 8.6 Гц, 2Н, Ph), 6.66-6.73 (м, 2Н, Ph), 6.27-6.33 (м, 2Н, NH), 4.34-4.37 (м, 3Н, СН+СН₂), 4.29 (м, 1H, СН), 4.01-4.09 (м, 2Н, СН), 3.22-3.24 (м, 2Н, СН₂), 3.14 (м, 2Н, СН₂), 2.98-3.07 (м, 6Н, СН₂), 2.88-2.93 (м, 2Н, СН₂), 2.61-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.28-2.34 (м, 3Н, СН₂), 2.16-2.25 (м, 5Н, СН₂), 1.89-1.92 (м, 1H, СН₂), 1.67-1.70 (м, 1Н, СН₂), 1.57-1.58 (м, 3Н, СН₂), 1.48-1.50 (м, 4Н, СН₂), 1.31-1.38 (м, 3Н, СН₂), 1.18-1.24 (м, 4Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.49 (СООН), 174.18 (СООН), 173.77 (СООН), 172.85 (СООН), 172.81 (СООН), 171.69 (СООН), 171.58 (СООН), 171.11 (СООН), 170.71 (СООН), 157.28 (С(O)), 156.51 (С(O)), 156.34 (С(О)), 138.06 (Ph), 138.00 (Ph), 129.03 (Ph), 128.97 (Ph), 128.53 (Ph), 128.19 (Ph), 128.08 (Ph), 127.77 (Ph), 126.32 (Ph), 126.26 (Ph), 115.44 (Ph), 115.13 (Ph), 54.99 (CH), 54.42 (CH), 52.17 (CH₂), 51.70 (CH₂), 48.17 (CH), 38.66 (CH₂), 37.06 (CH₂), 36.81 (CH₂), 35.88 (CH₂), 31.81 (CH₂), 30.68 (CH₂), 30.53 (CH₂), 29.99 (CH₂), 29.05 (CH₂), 28.17 (CH₂), 27.63 (CH₂), 26.32 (CH₂), 24.79 (CH₂), 24.68 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₆N₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1015.4884, найдено: 1015.4850; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1037.4703, найдено: 1037.4682; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1013.4727, найдено: 1013.4738.

ИК (см^-1):3296, 2936, 2099, 1722, 1634, 1615, 1549, 1516, 1454, 1227, 411.

Соединение 120

Из соединения 91 (80 мг, 66 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 120 в виде белого порошка с выходом 88% (60 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д): 13.00-11.6 (уш.с, 3Н, СООН), 8.42-8.27 (м, 1Н, C(O)NH), 8.22-8.06 (м, 1H, C(O)NH), 8.00-7.89 (м, 1H, C(O)NH), 7.84-7.53 (м, 1Н, C(O)NH), 7.33-7.18 (м, 7H, Ar+NH +), 7.18-7.11 (м, 4Н, Ar), 7.11-7.02 (м, 2Н, Ar), 7.02-6.84 (м, 2Н, Ar), 6.43-6.20 (м, 2Н, C(O)NH(urea)), 4.45-4.34 (м, 3Н, СН 2 +СН), 4.34-4.23 (м, 1H, СН), 4.15-3.96 (м, 2Н, СН), 3.29-3.19 (м, 2Н, СН 2), 3.19-3.02 (м, 5Н, СН 2), 3.02-2.96 (м, 2Н, СН 2), 2.96-2.91 (м, 6Н, N(CH 3)2), 2.91-2.84(м, 1H, СН 2), 2.82-2.70 (м, 1H, СН 2), 2.70-2.42 (м, 3Н, СН 2), 2.37-2.14(м, 8Н, СН 2), 1.96-1.83 (м, 1H, СН 2), 1.77-1.65 (м, 1Н, СН 2), 1.65-1.53 (м, 3Н, СН 2), 1.53-1.42 (м, 4Н, СН 2), 1.42-1.30 (м, 3Н, СН 2), 1.30-1.10 (м, 5Н, СН₂)

ESI-HRMS: для C₅₂H₇₁N₁₁O₁₂: m/z рассчитано для [М+Н⁺] 1042.5356, найдено: 1042.5356.

Соединение 121

Из соединения 92 (155 мг, 126 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 121 в виде белого порошка с выходом 32% (43 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.50-12.59 (уш.с, 1H, СООН), 8.19-8.32 (м, 2Н, NH), 7.58-7.95 (м, 2Н, NH), 7.14-7.26 (м, 10Н, Ph), 6.83-6.91 (м, 2Н, Ph), 6.63-6.89 (м, 2Н, Ph), 6.24-6.33 (м, 2Н, NH), 4.39-4.43 (м, 3Н, СН+СН₂), 4.29 (м, 1H, СН), 4.02-4.07 (м, 2Н, СН), 3.68-3.70 (м, 6Н, ОСН₃), 3.16-3.26 (м, 5Н, СН₂), 3.00-3.10 (м, 8Н, СН₂), 2.88-2.94(м, 2Н, СН₂), 2.61-2.67 (м, 1H, СН₂), 2.30-2.34 (м, 3Н, СН₂), 2.21-2.23 (м, 4Н, СН₂), 2.16 (м, 1H, СН₂), 1.86-1.89 (м, 1H, СН₂), 1.71 (м, 2Н, СН₂), 1.57-1.58 (м, 3Н, СН₂), 1.47-1.51 (м, 5Н, СН₂), 1.21-1.25 (м, 4Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.95 (СООН), 174.60 (СООН), 174.20 (СООН), 173.25 (СООН), 172.24 (СООН), 171.97 (СООН), 171.51 (СООН), 171.11 (СООН), 157.66 (С(O)), 138.44 (Ph), 138.38 (Ph), 129.42 (Ph), 128.57 (Ph), 128.46 (Ph), 126.71 (Ph), 126.65 (Ph), 111.89 (Ph), 55.91 (ОСН₃), 55.82 (ОСН₃), 55.76 (CH), 55.42 (CH), 54.82 (CH₂), 48.52 (CH), 41.91 (CH₂), 37.22 (CH₂), 36.26 (CH₂), 31.06 (CH₂), 30.98 (CH₂), 30.44 (CH₂), 28.55 (CH₂), 28.14 (CH₂), 28.09 (CH₂), 26.70 (CH₂), 26.38 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₂H₇₀N₁₀O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н⁺] 1059.5146, найдено: 1059.5098; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1081.4965, найдено: 1081.5015; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1057.4989, найдено: 1057.4996.

ИК (см^-1):3299, 2936, 2098, 1725, 1636, 1549, 1515, 1454, 1258, 1235, 1024, 747, 701.

Соединение 122

Из соединения 93 (96 мг, 79,18 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 122 в виде белого порошка с выходом 20% (17 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 8.20-8.37 (м, 2Н, Ph), 7.60-7.96 (м, 2Н, Ph), 7.16-7.27 (м, 10Н, Ph), 6.74-6.90 (м, 1H, NH),6.30-6.52 (м, 2Н, NH), 4.29-4.39 (м, 3Н, СН), 4.00-4.06 (м, 2Н, СН+CH₂), 3.72 (с, 2Н, ОСН₃), 3.64 (д, J=8 Гц, 3Н, ОСН₃), 3.21-3.24 (м, 3Н, СН₂), 3.17 (м, 2Н, СН₂),3.01-3.10 (м, 3Н, СН₂), 2.94-3.01 (м, 3Н, СН₂), 2.87-2.91 (м, 2Н, СН₂), 2.61-2.72 (м, 2Н, СН₂), 2.30-2.35 (м, 3Н, СН₂), 2.16-2.22 (м, 4Н, СН₂), 1.98-2.02 (м, 1H, СН₂), 1.83-1.88 (м, 1H, СН₂), 1.69-1.74 (м, 1H, СН₂), 1.55-1.60 (м, 3Н, СН₂), 1.42-1.49 (м, 4Н, СН₂), 1.32-1.40 (м, 4Н, СН₂), 1.14-1.24 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, 5, м.д.): 174.72 (СООН), 174.35 (СООН), 173.97 (СООН), 172.87 (СООН), 171.98 (СООН),171.88 (СООН),171.61 (СООН),171.15 (СООН),170.75 (СООН), 157.28 (С(О)), 153.20 (Ph), 153.12 (Ph), 151.03 (Ph), 150.86 (Ph), 138.08 (Ph), 138.00 (Ph), 129.03 (Ph), 128.20 (Ph), 128.08 (Ph), 126.92 (Ph), 126.41 (Ph), 126.32 (Ph), 126.27 (Ph), 111.66 (Ph), 111.43 (Ph), 79.33 (OCH3), 79.00 (OCH3), 78.67 (ОСН₃),55.73 (CH), 55.67 (CH₂), 55.33 (CH₂), 55.22 (CH₂),55.07 (CH₂), 54.45 (CH), 52.38 (CH₂), 51.91 (CH₂), 48.14 (CH),38.60 (CH₂), 38.33 (CH₂), 37.00 (CH₂), 36.81 (CH₂), 35.86 (CH₂), 35.38 (CH₂), 32.11 (CH₂), 31.86 (CH₂), 30.74 (CH₂), 30.66 (CH₂), 30.53 (CH₂), 30.32 (CH₂), 29.04 (CH₂), 28.87 (CH₂), 28.15 (CH₂), 27.93 (CH₂), 26.28 (CH₂), 26.21 (CH₂), 25.08 (CH₂), 24.82 (CH₂), 24.56 (CH₂), 22.69 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₂H₇₀N₁₀O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1059.5146, найдено: 1092.5146; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1057.4989, найдено: 1057.4994.

Соединение 123

Из соединения 94 (90 мг, 70,12 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 123 в виде белого порошка с выходом 40% (30 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 12.53 (уш.с, 2Н, СООН), 8.09-8.31 (м, 2Н, Ph), 7.86-7.93 (м, 3Н, Ph), 7.55-7.58 (м, 1H, NH), 7.27-7.29 (м, 2Н, Ph), 7.20-7.23 (м, 2Н, Ph), 7.15-7.17 (м, 3Н, Ph), 6.98-7.02 (м, 2Н, Ph),6.64-6.65 (м, 2Н, NH), 6.28-6.33 (м, 2Н, NH), 4.53-4.61 (м, 2Н, СН₂), 4.27-4.29 (м, 3Н, СН), 4.01-4.07 (м, 3Н, СН₂+СН), 3.17-3.25 (м, 4Н, СН₂), 2.98-3.09 (м, 3Н, СН₂), 2.89-2.95 (м, 3Н, СН₂), 2.76-2.81 (м, 1H, СН₂), 2.62-2.67 (м, 1Н, СН₂), 2.28-2.35 (м, 3Н, СН₂), 2.18-2.25 (м, 4Н, СН₂), 1.89-1.91 (м, 1H, СН₂), 1.67-1.71 (м, 1H, СН₂), 1.54-1.63 (м, 3Н, СН₂), 1.37-1.53 (м, 6Н, СН₂), 1.22-1.26 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.54 (СООН), 174.50 (СООН), 174.21 (СООН), 173.78 (СООН), 172.81 (СООН),172.12 (СООН), 171.58 (СООН), 171.07 (СООН),170.88 (СООН), 167.22 (С(О)), 167.14 (С(0)),157.29 (Ph), 155.83 (Ph), 143.79 (Ph), 138.01 (Ph), 129.96 (Ph), 129.47 (Ph), 129.05 (Ph), 128.08 (Ph), 127.39 (Ph), 126.47 (Ph), 126.26 (Ph), 114.97 (Ph), 55.00 (CH), 54.82 (CH), 52.25 (CH₂), 52.12 (CH₂),51.65 (CH₂),48.15 (CH), 47.49 (CH₂), 38.65 (CH₂), 36.85 (CH₂), 36.26 (CH₂), 35.84 (CH₂), 31.89 (CH₂), 31.78 (CH₂), 30.66 (CH₂), 30.54 (CH₂), 29.91 (CH₂), 29.05 (CH₂), 28.95 (CH₂), 28.17 (CH₂), 27.77 (CH₂), 27.53 (CH₂), 26.30 (CH₂), 26.22 (CH₂), 24.72 (CH₂), 24.58 (CH₂), 22.53 (CH₂), 22.36 (CH₂).

ESI-HRMS: для C₅₁H₆₆N₁₀O₁₅: m/z рассчитано для [M+H⁺] 1059.4787, найдено: 1059.4821; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1057.4631, найдено: 1041.4636.

ИК (см^-1): 3307, 2938, 2100, 1716, 1635, 1615, 1558, 1516, 1234, 1208, 1177, 751, 701. Соединение 124

Из соединения 95 (550 мг, 0,448 ммоль) и 10 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 124 в виде белого порошка с выходом 32% (152 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 8.39-8.28 (м, 1H, NH), 8.19-8.00 (м, 2Н, NH+Ar), 8.00-7.88 (м, 1H, NH), 7.80-7.63 (м, 1H, Ar), 7.62-7.45 (м, 2Н, NH+Ar), 7.29-7.11 (м, 6Н, Ph+Ar), 7.06-6.94 (м, 2Н, Tyr), 6.74-6.58 (м, 2Н, Tyr), 6.41-6.22 (м, 2Н, NH), 4.99-4.66 (м, 2Н, СН₂), 4.39-4.21 (м, 2Н, СН), 4.15-3.96 (м, 2Н, СН), 3.30-3.18 (м, 4Н, СН₂), 3.12-2.86 (м, 6Н, СН₂), 2.86-2.73 (м, 1H, СН₂), 2.72-2.60 (м, 1H, СН₂), 2.46-2.10 (м, 8Н, СН₂), 1.96-1.83 (м, 1Н, СН₂), 1.78-1.66 (м, 1H, СН₂), 1.66-1.10 (м, 14Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.59 (COOHn), 174.56 (COOHm), 174.26 (СООН), 173.87 (СООН), 172.85 (CONHn), 172.83 (CONHm), 172.60 (CONHn), 172.58 (CONHm), 171.60 (CONHm), 171.57 (CONHn), 171.10 (CONH), 170.93 (CONHm), 170.90 (CONHm), 157.30 (urea), 155.87 (TyrAr), 148.20 (Arm), 147.75 (Am), 138.05 (Phe), 134.41 (Arm), 133.79 (Am), 133.71 (Am), 133.61 (Am), 129.98 (TyrAr), 129.96 (Arm), 129.08 (Phe), 128.10 (Phe), 128.01 (TyrAr), 126.28 (Phe), 125.43(Arn), 124.81 (Arm), 118.54 (Am), 118.16 (Arm), 115.00 (TyrAr), 55.05 (CH), 54.86(CH), 52.67(CHn), 52.30 (CHm), 51.76 (CH), 49.28 (CH₂n), 48.18 (CH₂), 47.74 (CH₂m), 45.81 (CH₂m), 44.37 (CH₂n), 38.71 (CH₂), 38.60 (CH₂), 36.89 (CH₂), 36.32 (CH₂), 35.87 (CH₂), 32.05 (CH₂), 31.89 (CH₂), 31.84 (CH₂), 30.69 (CH₂), 30.56 (CH₂), 30.06 (CH₂), 29.07 (CH₂), 28.95 (CH₂), 28.20 (CH₂), 27.71 (CH₂), 26.32 (CH₂), 26.17 (CH₂), 24.63 (CH₂), 22.63 (CH₂), 22.46 (CH₂).

Соединение 125

Из соединения 96 (121 мг, 0,095 ммоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 125 в виде белого порошка с выходом 56% (56 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.45 (уш.с, 3Н, СООН), 9.13 (уш.с, 1Н, ОН), 8.31-8.35 (м, 1Н, NHC(O)), 8.03 (д, J=6.80 Hz, 1Н, NHC(O)), 7.89-7.96 (м, 1Н, NHC(O)), 7.74-7.83 (м, 1Н, NHC(O)), 7.25-7.40 (м, 2Н, Ar), 7.09-7.25 (м, 7Н, Ar), 6.85 (д, J=7.62Hz, 2Н, Ar), 6.57 (д, J=7.67Hz, 2Н, Ar), 6.25-6.36 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.54 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.46 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.35-4.39 (м, 1Н, СН), 4.21-4.30 (м, 1Н, СН), 3.98-4.12 (м, 2Н, СН), 3.20-3.27 (м, 2Н, СН₂), 3.09-3.19 (м, 3Н, СН₂), 3.02-3.08 (м, 1Н, СН₂), 2.89-2.99 (м, 3Н, СН₂), 2.69-2.82 (м, 1Н, СН₂), 2.58 -2.68 (м, 1Н, СН₂), 2.29-2.39 (м, 2Н, СН₂), 2.13-2.27 (м, 6 Н, СН₂), 1.85-1.96 (м, 1Н, СН₂), 1.70 (br. s., 1Н), 1.54-1.76 (м, 4 Н, СН₂), 1.31-1.49 (м, 7Н, СН₂), 1.10-1.31 (м, 5Н, СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 12.2 мин.

ESI-MS: для C₅₀H₆₅ClN₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1049.45, найдено: 1049.45.

Соединение 126

Из соединения 97 (140 мг, 0,108 ммоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 126 в виде белого порошка с выходом 35% (35 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.36 (уш.с, 3Н, СООН), 10.01 (уш.с, 1Н, ОН), 8.44-8.33 (м., 1Н, NHC(O)), 8.11-8.03 (м, 1Н, NHC(O)), 8.01-7.94 (м, 1Н, NHC(O)), 7.82-7.72 (м, 2Н, NHC(О)+Ar), 7.43-7.25 (м, 3Н, Ar), 7.25-7.05 (м, 7Н, Ar), 7.04-6.97 (м, 1Н, Ar), 6.81 (д, J=8.24Hz, 1H, Ar), 6.39-6.22 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.55 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.47 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.44-4.36 (м, 1Н, СН), 4.36-4.27 (м, 1Н, СН), 4.14 -3.98 (м, 2Н, СН), 3.29 (m, J=6.83Hz, 2Н, CH₂-N3), 3.25-3.03 (м, 4 Н, СН₂), 3.02-2.90 (м, 2Н, СН₂), 2.90-2.82 (м, 1Н, СН₂), 2.82-2.74 (м, 1Н, СН₂), 2.69-2.60 (м, 1Н, СН₂),), 2.60-2.52 (м, 1Н, СН₂), 2.40-2.13 (м, 8 Н, СН₂), 1.98-1.85 (м, 1Н, СН₂), 1.77-1.67 (м, 1Н, СН₂), 1.67- 1.57 (м, 3Н, СН₂), 1.56-1.11 (м, 11Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.53 (С(О)), 174.50 (С(О)), 174.21 (С(О)), 173.77 (С(О)), 172.16 (С(О)), 171.80 (С(О)), 171.17 (С(О)), 170.64 (С(О)), 157.27 (NHC(O)), 150.90 (Ar), 141.24 (Ar), 140.84 (Ar), 137.88 (Ar), 136.45 (Ar), 136.08 (Ar), 133.40 (Ar), 133.04 (Ar), 130.25 (Ar), 129.10 (Ar), 127.92 (Ar), 127.20 (Ar), 126.84 (Ar), 126.16 (Ar), 126.09 (Ar), 125.45 (Ar), 118.90 (Ar), 54.28 (СН), 54.04 (СН), 51.65 (СН), 48.25 (СН₂), 38.53 (СН₂), 37.35 (СН₂), 36.27 (СН₂), 35.91 (СН₂), 31.87 (СН₂), 31.79 (СН₂), 30.68 (СН₂), 30.62 (СН₂), 29.91 (СН₂), 29.12 (СН₂), 28.23 (СН₂), 27.80 (СН₂), 27.55 (СН₂), 26.25 (СН₂), 26.16 (СН₂), 24.74 (СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 97.7%, t_R = 12,46 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₄BrClN₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1127.3599, найдено: 1127.3644

Соединение 127

Из соединения 98 (250 мг, 0,198 ммоль) и 10 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 127 в виде желтого порошка с выходом 65% (142 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.49 (уш.с, 3Н, СООН), 10.75 (уш.с, 1Н, ОН), 8.43 (д, J=8.80 Hz, 1Н, NHC(O)), 8.10 (д, J=7.83Hz, 1Н, NHC(O)), 7.96 -8.02 (м, 1Н, NHC(O)), 7.72-7.77 (м, 1Н, NHC(O)), 7.32-7.41 (м, 2Н, Ar), 7.25-7.32 (м, 1Н, Ar), 7.18-7.25 (м, 1Н, Ar), 7.11-7.18 (м, 4 Н, Ar), 7.04-7.11 (м, 3Н, Ar), 7.00 (д, J=8.50 Hz, 1Н, Ar), 6.25-6.35 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.54 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.46 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.32-4.42 (м, 2Н, СН), 3.98-4.13 (м, 2Н, СН), 3.29 (m, J=6.69 Hz, 2Н, СН₂), 3.13-3.23 (м, 3Н, СН₂), 3.03-3.13 (м, 2Н, СН₂), 2.89-3.02 (м, 3Н, СН₂), 2.68-2.80 (м, 2Н, СН₂), 2.52 -2.60 (м, 1Н, СН₂), 2.29-2.38 (м, 2Н, СН₂), 2.13-2.29 (м, 6 Н, СН₂), 1.85-1.96 (м, 1Н, СН₂), 1.66-1.76 (м, 1Н, СН₂), 1.56-1.66 (м, 3Н, СН₂), 1.46-1.56 (м, 3Н, СН₂), 1.39-1.46 (м, 2Н, СН₂), 1.31- 1.39 (м, 1Н, СН₂), 1.16-1.31 (м, 4 Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.53 (С(О)), 174.50 (С(О)), 174.21 (С(О)), 173.77 (С(О)), 172.16 (С(О)), 171.80 (С(О)), 171.17 (С(О)), 170.64 (С(О)), 157.27 (NHC(O)), 150.90 (Ar), 141.24 (Ar), 140.84 (Ar), 137.88 (Ar), 136.45 (Ar), 136.08 (Ar), 133.40 (Ar), 133.04 (Ar), 130.25 (Ar), 129.10 (Ar), 127.92 (Ar), 127.20 (Ar), 126.84 (Ar), 126.16 (Ar), 126.09 (Ar), 125.45 (Ar), 118.90 (Ar), 54.28 (CH), 54.04 (CH), 51.65 (CH), 48.25 (CH₂), 38.53 (CH₂), 37.35 (CH₂), 36.27 (CH₂), 35.91 (CH₂), 31.87 (CH₂), 31.79 (CH₂), 30.68 (CH₂), 30.62 (CH₂), 29.91 (CH₂), 29.12 (CH₂), 28.23 (CH₂), 27.80 (CH₂), 27.55 (CH₂), 26.25 (CH₂), 26.16 (CH₂), 24.74 (CH₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 3,9 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₄ClN₁₁O₁₅: m/z рассчитано для [M+H]⁺: 1094.4345, найдено: 1094.4349; m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1116.4164, найдено: 1116.4183.

Соединение 128

Из соединения 99 (250 мг, 0,198 ммоль) и 10 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 128 в виде желтого порошка с выходом 65% (142 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 12.44 (уш.с, 3Н, СООН), 10.76 (уш.с, 1H, ОН), 8.48-8.39 (м., 1Н, NHC(O)), 8.15-8.07 (м, 1Н, NHC(O)), 8.04-7.95 (м, 1Н, NHC(O)), 7.84-7.72 (м, 2Н, NHC(O)+Ar), 7.43-7.26 (м, 3Н, Ar), 7.26-7.10 (м, 5Н, Ar), 7.10-7.05 (м, 2Н, Ar), 7.04-6.97 (д, J=8.47Hz, 1Н, Ar), 6.39-6.22 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.55 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.47 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.44-4.32 (м, 2Н, СН), 4.15-3.98 (м, 2Н, СН), 3.30 (m, J=6.83Hz, 2Н, CH₂-N3), 3.25-3.03 (м, 4 Н, СН₂), 3.03-2.89 (м, 3Н, СН₂), 2.81-2.68 (м, 2Н, СН₂), 2.60-2.51 (м, 1Н, СН₂), 2.40-2.13 (м, 8 Н, СН₂), 1.98-1.85 (м, 1Н, СН₂), 1.77-1.67 (м, 1Н, СН₂), 1.67-1.57 (м, 3Н, СН₂), 1.56-1.11 (м, 11Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.53 (С(О)n), 174.50 (С(О)m), 174.20 (С(О)), 173.78 (С(О)), 172.20 (С(О)), 171.77 (С(О)), 171.18 (С(О)), 171.16 (С(О)), 171.08 (С(О)), 170.90 (С(О)), 157.29 (NHC(O)NH), 152.23 (С(ОН)), 141.23 (Ar), 140.83 (Ar), 137.97 (Ar), 133.40 (Ar), 133.34 (Ar), 133.05 (Ar), 130.63 (Ar), 130.27 (Ar), 130.13 (Ar), 129.50 (Ar), 129.19 (Ar), 127.95 (Ar), 127.20 (Ar), 127.15 (Ar), 126.85 (Ar), 126.31 (Ar), 126.18 (Ar), 126.09 (Ar), 124.98 (Ar), 115.94 (Ar), 108.87 (Ar), 54.42 (CH), 54.25 (CH), 52.26 (CH), 52.14 (CH), 51.66 (CH), 49.64 (CH₂), 48.26 (CH₂-N₃), 47.16 (CH₂), 46.88 (CH₂), 45.33 (CH₂), 38.54 (CH₂), 38.47 (CH₂), 37.41 (CH₂), 36.42 (CH₂), 35.89 (CH₂), 32.30 (CH₂), 31.87 (CH₂), 31.80 (CH₂), 30.71 (CH₂), 30.66 (CH₂), 29.92 (CH₂), 29.12 (CH₂), 28.99 (CH₂), 28.25 (CH₂), 27.80 (CH₂), 27.55 (CH₂), 26.76 (CH₂), 26.25 (CH₂), 26.16 (CH₂), 24.75 (CH₂), 24.60 (CH₂), 22.50 (CH₂), 22.34 (CH₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 3,69 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₄ClN₁₁O₁₅: m/z рассчитано для [M+H]⁺: 1094.4345, найдено: 1094.4342; m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1116.4164, найдено: 1116.4159.

Соединение 129

Из соединения 100 (103 мг, 0,076 ммоль) и 4 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 129 в виде белого порошка с выходом 56% (45 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.51 (уш.с, 3Н, СООН), 9.19 (уш.с, 2Н, ОН), 8.25 (д., J=7.28 Hz, 1Н, NHC(O)), 8.07 (д., J=8.62Hz, 1Н, NHC(O)), 7.89 -7.99 (м, 1Н, NHC(O)), 7.47-7.56 (м, 1Н, NHC(O)), 7.26-7.41 (м, 2Н, Ar), 7.19-7.24 (м, 1Н, Ar), 7.09-7.17 (м, 1Н, Ar), 6.91-7.04 (м, 4 Н, Ar), 6.59 (д., J=8.38 Hz, 2Н, Ar), 6.64 (д., J=8.31Hz, 2Н, Ar), 6.24-6.37 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.54 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.46 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.22-4.31 (м, 1Н, СН), 4.13-4.22 (м, 1Н, СН), 3.98-4.13 (м, 2Н, СН), 3.12-3.26 (м, 4 Н, СН₂), 2.88-3.10 (м, 5Н, СН₂), 2.71-2.83 (м, 2Н, СН₂), 2.28-2.40 (м, 4 Н, СН₂), 2.11-2.28 (м, 5Н, СН₂), 1.85-1.95 (м, 1Н, СН₂), 1.65-1.75 (м, 1Н, СН₂), 1.53-1.65 (м, 3Н, СН₂), 1.46-1.53 (м, 3Н, СН₂), 1.33-1.46 (м, 3Н, СН₂), 1.11-1.33 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.52 (С(О)), 174.22 (С(О)), 173.79 (С(О)), 172.81 (С(О)), 172.15 (С(О)), 171.58 (С(О)), 171.20 (С(О)), 170.88 (С(О)), 157.28 (NHC(O)NH), 155.81 (С(ОН)), 155.75 (С(ОН)), 141.23 (Ar), 140.83 (Ar), 133.39 (Ar), 133.04 (Ar), 130.62 (Ar), 130.26 (Ar), 129.97 (Ar), 128.11 (Ar), 128.05 (Ar), 127.19 (Ar), 126.85 (Ar), 126.30 (Ar), 126.08 (Ar), 124.97 (Ar), 114.95 (Ar), 114.87 (Ar), 55.45 (СН), 54.77 (СН), 52.13 (СН), 51.63 (СН), 48.14 (СН₂), 47.14 (СН₂), 46.86 (СН₂), 36.10 (СН₂), 35.82 (СН₂), 31.79 (СН₂), 30.65 (СН₂), 30.53 (СН₂), 29.90 (СН₂), 29.06 (СН₂), 28.95 (СН₂), 28.16 (СН₂), 27.79 (СН₂), 27.53 (СН₂), 26.76 (СН₂), 26.29 (СН₂), 24.72 (СН₂), 24.59 (СН₂), 22.34 (СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 11,6 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅ClN₁₀O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1065.4443, найдено: 1065.4493, m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1087.4262, найдено: 1087.4320.

Соединение 130

Из соединения 101 (185 мг, 0,137 ммоль) и 9 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 130 в виде белого порошка с выходом 67% (98 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 9.16 (уш.с, 2Н, ОН), 8.23 (д.д., J=8.31, 3.61Hz, 1Н, NHC(O)), 8.01 (д, J=7.70 Hz, 1Н, NHC(O)), 7.85-7.92 (м, 1Н, NHC(O)), 7.73-7.84 (м, 1Н, NHC(O)), 7.26-7.41 (м, 2Н, Ar), 7.19-7.24 (м, 1Н, Ar), 7.08 -7.19 (м, 1Н, Ar), 6.98 (д, J=8.38 Hz, 2Н, Ar), 6.87 (д, J=8.38 Hz, 2Н, Ar), 6.54-6.65 (м, 4 Н, Ar), 6.25-6.37 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.54 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.46 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.21 -4.33 (м, 2Н, СН₂), 3.97-4.13 (м, 2Н, СН₂), 3.04-3.22 (м, 5Н, СН₂), 2.89-3.02 (м, 2Н, СН₂), 2.84 (д.д., J=13.66, 4.74Hz, 1Н, СН₂), 2.59-2.68 (м, 1Н, СН₂), 2.44-2.46 (м, 1Н, СН₂), 2.29-2.38 (м, 1Н, СН₂), 2.12-2.29 (м, 6 Н, СН₂), 1.83-1.96 (м, 1Н, СН₂), 1.64-1.77 (м, 1Н, СН₂), 1.56-1.63 (м, 3Н, СН₂), 1.31-1.54 (м, 5Н, СН₂), 1.16-1.31 (м, 5Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.50 (С(О)), 174.21 (С(О)), 173.80 (С(О)), 172.22 (С(О)), 171.82 (С(О)), 171.23 (С(О)), 171.16 (С(О)), 171.09 (С(О)), 157.30 (NHC(O)NH), 155.80 (С(ОН)), 155.69 (С(ОН)), 141.21 (Ar), 140.82 (Ar), 133.40 (Ar), 133.05 (Ar), 130.63 (Ar), 130.27 (Ar), 130.12 (Ar), 130.09 (Ar), 128.08 (Ar), 128.03 (Ar), 127.18 (Ar), 126.85 (Ar), 126.29 (Ar), 126.07 (Ar), 124.98 (Ar), 114.85 (Ar), 114.81 (Ar), 54.71 (СН), 54.63 (СН), 52.26 (СН), 52.14 (СН), 51.67 (СН), 48.23 (СН₂), 47.16 (СН₂), 46.88 (СН₂), 45.31 (СН₂), 38.55 (СН₂), 36.77 (СН₂), 36.42 (СН₂), 35.86 (СН₂), 31.87 (СН₂), 31.78 (СН₂), 30.73 (СН₂), 30.65 (СН₂), 29.94 (СН₂), 29.10 (СН₂), 28.98 (СН₂), 28.20 (СН₂), 27.78 (СН₂), 27.56 (СН₂), 26.24 (СН₂), 26.16 (СН₂), 24.74 (СН₂), 24.59 (СН₂), 22.49 (СН₂), 22.33 (СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 97%, t_R = 11,6 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅ClN₁₀O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1065.4443, найдено: 1065.4467, m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1087.4262, найдено: 1087.4293.

Соединение 131

Из соединения 102 (181 мг, 0,134 ммоль) и 8 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 131 в виде белого порошка с выходом 53% (76 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 12.45 (уш.с, 3Н, СООН), 9.14 (уш.с, 2Н, ОН), 8.22-8.27 (м, 1Н, NHC(O)), 7.98-8.05 (м, 1Н, NHC(O)), 7.85-7.92 (м, 1Н, NHC(O)), 7.73-7.84 (м, 1Н, NHC(O)), 7.25-7.35 (м, 2Н, Ar), 7.19-7.24 (м, 1Н, Ar), 7.09-7.17 (м, 1Н, Ar), 6.97 (д, J=6.96 Hz, 2Н, Ar), 6.87 (д, J=7.24Hz, 2Н, Ar), 6.55-6.64 (м, 4Н, Ar), 6.26-6.34 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.54 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.46 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.23-4.32 (м, 2Н, СН), 3.98-4.11 (м, 2Н, СН), 3.22-3.28 (м, 2Н, СН₂), 3.12-3.22 (м, 2Н, СН₂), 3.03-3.11 (м, 2Н, СН₂), 2.89 -3.02 (м, 3Н, СН₂), 2.79-2.87 (м, 1Н, СН₂), 2.60-2.69 (м, 2Н, СН₂), 2.30-2.37 (м, 1Н, СН₂), 2.16-2.27 (м, 7Н, СН₂), 1.85-1.94 (м, 1Н, СН₂), 1.64-1.76 (м, 1Н, СН₂), 1.55-1.62 (м, 3Н, СН₂), 1.44-1.54 (м, 3Н, СН₂), 1.39 -1.43 (м, 2Н, СН₂), 1.32-1.38 (м, 2Н, СН₂), 1.10-1.29 (м, 5Н, СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 11.7 мин.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅ClN₁₀O₁₁: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1065.4443, найдено: 1065.4487, m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1087.4262, найдено: 1087.4310.

Соединение 132

Из соединения 103 (48 мг, 43,27 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 132 в виде белого порошка с выходом 95% (38 мг).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д.): 174.59 (СООН), 174.23 (СООН), 173.78 (СООН), 172.78 (CONH), 171.88 (CONH), 171.60 (CONH), 171.20 (CONH), 170.90 (CONH), 157.33 (urea), 156.79 (Tyr), 155.83 (Tyr), 129.97 (Tyr), 129.94 (Tyr), 128.11 (Tyr), 128.07 (Tyr), 114.97 (Tyr), 114.89 (Туг), 54.77 (СН), 54.54 (СН), 52.30 (СН₂), 51.67 (СН₂), 48.17 (CH₂-N3), 38.62 (СН₂), 38.32 (СН₂), 36.81 (СН₂), 36.27 (СН₂), 35.85 (CH₂-NH), 35.40 (СН₂), 31.83 (СН₂), 30.71 (СН₂), 30.68 (СН₂), 29.92 (СН₂), 28.90 (СН₂), 28.19 (СН₂), 27.56 (СН₂), 26.24 (СН₂), 25.10 (СН₂), 22.69 (СН₂).

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₅N₁₁O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н⁺] 1044.4785, найдено: 1044.4797; m/z рассчитано для [M+Na⁺] 1066.4605, найдено: 1066.4628; m/z рассчитано для [М+K⁺] 1082.4344, найдено: 1082.4357; m/z рассчитано для [М-Н^-] 1042.4629, найдено: 1042.4641.

Соединение 133

Из соединения 104 (157 мг, 12,25 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 133 в виде белого порошка с выходом 43% (59 мг).

Спектр ЯМР ¹Н NMR 12.40 (br.s, 3Н, СООН), 8.31-8.41 (m, 1Н, NH), 8.19 (d, J=8.44Hz, 1Н, NH) 8.11 (d, J=6.69 Hz, 1H, Ph), 7.92-7.98 (m, 1H, Ph), 7.81 (d, J=4.77Hz, 1H, Ph), 7.55-7.62 (m, 1H, Ph), 7.24-7.40 (m, 3H, Ph), 7.13-7.24 (m, 8 H, Ar+NH+), 7.09 (s, 1H, Ph), 6.31 (d, J=8.28 Hz, 2H, C(O)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.37 (d, J=9.05Hz, 1H, CH), 3.97-4.10 (m, 2H, CH), 3.12-3.23 (m, 6 H, N(CH 3) 2), 3.06 (m, 2H, CH₂), 2.99 (m, 4H, CH₂), 2.75 (d, J=13.08 Hz, 1H, CH₂), 2.32 (d, J=5.14Hz, 1H, CH₂), 2.21 (m, 4H, CH₂), 1.87-1.90 (m, 1H, CH₂), 1.71 (d, J=10.09 Hz, 1H, CH₂), 1.60 (m., 2H, CH₂), 1.49 (m, 5H, CH₂), 1.22 (br. s., 4H, CH₂). ВЭЖХ: 100% в положительных ионах.

ESI-HRMS: для C₅₀H₆₄ClBrN₁₀O₁₂: m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1133,3474, найдено 1133,3479.

Соединение 134

Из соединения 105 (352 мг, 27,48 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 134 в виде белого порошка с выходом 45% (139 мг).

Спектр ¹H 12.44 (br. s., 1Н, СООН), 8.30 (d, J=7.21Hz, 1Н, NH), 8.22 (d, J=8.44Hz, 1H, NH), 7.94 (br. s., 1H, NH), 7.66 (d, J=5.62Hz, 1H, Ph), 7.40 (d, J=17.30 Hz, 2H, Ph), 7.26-7.37 (m, 2H, Ph), 7.19-7.25 (m, 5H, Ph), 7.15 (d, J=3.24Hz, 4H, Ph), 6.31 (dd, J=15.89, 8.01Hz, 2H, C(O)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.38 (d, J=5.69 Hz, 1H, CH), 4.28 (br. s., 1H, CH), 4.08 (br. s., 1H, CH), 4.03 (br. s., 1H, CH), 3.21 -3.28 (m, 3H, CH₂), 3.16 (m, 3H, CH₂), 3.07 (d, J=11.74Hz, 3H, CH₂), 3.00 (m, 2H, CH₂), 2.90 (m, 2H, CH₂), 2.63-2.71 (m, 1H, CH₂), 2.33 (d, J=8.31Hz, 4H, CH₂), 2.12-2.27 (m, 5H, CH₂), 1.91 (d, J=6.97Hz, 1H, CH₂), 1.70 (m, 1H, CH₂), 1.59 (m, 3H, CH₂), 1.51 (m, 7H, CH₂), 1.22 (m, 5H, CH₂).

ВЭЖХ: 100% в положительных ионах.

HRMS (ESI): для C₅₀H₆₄ClBrN₁₀O₁₂: m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1133,3474, найдено 1133,3486.

Соединение 135

Из соединения 106 (388 мг, 32,36 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 135 в виде белого порошка с выходом 75% (56 мг).

Спектр ¹Н 12.44 (br. s., 1Н, СООН), 8.30 (d, J=7.21Hz, 1Н, NH), 8.22 (d, J=8.44Hz, 1H, NH), 7.94 (br. s., 1H, NH), 7.66 (d, J=5.62Hz, 1H, Ph), 7.40 (d, J=17.30 Hz, 2H, Ph), 7.26-7.37 (m, 2H, Ph), 7.19-7.25 (m, 5H, Ph), 7.15 (d, J=3.24Hz, 4H, Ph), 6.31 (dd, J=15.89, 8.01Hz, 2H, C(0)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.38 (d, J=5.69 Hz, 1H, CH), 4.28 (m, 1H, CH), 4.08 (m, 1H, CH), 4.03 (m, 1H, CH), 3.21-3.28 (m, 3H, CH₂), 3.16 (m, 3H, CH₂), 3.07 (d, J=11.74Hz, 3H, CH₂), 3.00 (m., 2H, CH₂), 2.90 (m, 2H, CH₂), 2.63-2.71 (m, 1H, CH₂), 2.33 (d, J=8.31Hz, 4H, CH₂), 2.12-2.27 (m, 5H, CH₂), 1.91 (d, J=6.97Hz, 1H, CH₂), 1.70 (m, 1H, CH₂), 1.59 (m, 3H, CH₂), 1.51 (m, 7H, CH₂), 1.22 (m, 5H,CH₂).

ВЭЖХ: 100% в положительных ионах.

HRMS (ESI): для C₅₀H₆₄ClBrN₁₀O₁₂: m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1133,3474, найдено 1133,3497.

Соединение 136

Из соединения 107 (235 мг, 18,38 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 136 в виде белого порошка с выходом 12% (25 мг).

Спектр ¹Н 12.50 (br. s., 2Н, СООН), 8.29 (d, J=7.03Hz, 1Н, NH), 8.19 (d, J=8.44Hz, 1H, NH), 7.94 (t, J=4.77Hz, 1H, NH), 7.61 (d, J=4.83Hz, 1H, Ph), 7.45 (d, J=7.76 Hz, 2H, Ph), 7.28-7.37 (m, 2H, Ph), 7.17-7.24 (m, 4H, Ph), 7.16 (d, J=2.81Hz, 4H, Ph), 6.25-6.34 (m, 2H, C(O)NH(urea)), 4.46 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.36 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.30 (m., 1H, CH), 4.04-4.11 (m, 1H, CH), 3.25 (d, J=18.28 Hz, 5H, CH), 3.17 (d, J=11.37Hz, 2H, CH₂), 3.08 (m, 2H, CH₂), 3.01 (m, 3H, CH₂), 2.91 (d, J=17.42Hz, 3H, CH₂), 2.25-2.37 (m, 4H, CH₂), 2.11-2.25 (m, 4H, CH₂), 1.84-1.95 (m, 1H, CH₂), 1.64-1.74 (m, 1H, CH₂), 1.59 (m, 3H, CH₂), 1.50 (m, 4H, CH₂), 1.38 (m, 3H, CH₂), 1.28 (m, 2H, CH₂), 1.22 (m, 2H, CH₂), 1.17 (m, 1H, CH₂) (Фиг. 24)

HRMS (ESI) для для C₅₀H₆₄ClBrN₁₀O₁₁: m/z рассчитано для [M+H]⁺: 1095.3701, найдено: 1095.3517 (Фиг. 25).

Соединение 137

Из соединения 108 (144 мг, 0,113 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 137 в виде белого порошка с выходом 49% (59 мг).

Спектр ¹Н 12.43 (br. s, 3Н, СООН), 9.16 (s, 1Н, ОН), 8.22 8.28 (m, 1Н, NH), 8.10-8.18 (m, 1Н, NH), 7.90-8.02 (m, 1Н, NH), 7.50-7.58 (m, 1Н, Ph), 7.25-7.38 (m, 3Н, Ph), 7.06-7.24 (m, 6 Н, Ph), 6.93 (d, J=7.67Hz, 2H, Ph), 6.58 (d, J=6.96 Hz, 2H, Ph), 6.24-6.36 (m, 2H, C(O)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.45 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.32-4.40 (m, 1H, CH), 4.13-4.21 (m, 1H, CH), 3.97-4.12 (m, 2H, CH₂), 3.11 -3.27 (m, 5H, CH₂), 2.95-3.10 (m, 5H, CH₂), 2.84 2.93 (m, 1H, CH₂) 2.72 2.81 (m, 1H, CH₂), 2.27 2.41 (m, 4H, CH₂), 2.10-2.26 (m, 4H, CH₂), 1.84- 1.96 (m, 1H, CH₂), 1.54-1.75 (m, 4H, CH₂), 1.34-1.52 (m, 7H, CH₂), 1.10-1.33 (m, 5H, CH₂).

ВЭЖХ: 100% в положительных ионах, 100% в отрицательных ионах.

HRMS (ESI) для для C₅₀H₆₅ClN₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н]⁺: 1149.4494, найдено: 1149.4524, m/z рассчитано для [M+Na]⁺: 1071.4313, найдено: 1071.4360.

Соединение 138

Из соединения 109 (240 мг, 19,45 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 138 в виде белого порошка с выходом 10% (15 мг).

Спектр ¹Н 12.52 (br. s, 2Н, СООН), 9.35 (s., 1Н, ОН), 8.36 (d, J=7.85Hz, 1Н, NH), 8.16 (d, J=9.05Hz, 1H, NH), 7.91 (d, J=3.07Hz, 1H, Ph), 7.74-7.82 (m, 1H, Ph), 7.25-7.35 (m, 2H, Ph), 7.16-7.24 (m, 4H, Ph), 7.13 (t, J=7.74Hz, 4H, Ph), 6.73 (s, 1H, NH), 6.31 -6.29 (m, 2H, C(0)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s., 1H, NCH₂Ar), 4.27-4.40 (m, 2H, CH), 3.96-4.13 (m, 2H, CH), 3.14-3.22 (m, 3H, CH₂), 3.11 (m, 1H, CH₂), 3.06 (m, 1H, CH₂), 2.62-2.70 (m, 2H, CH₂), 2.57 (m, 1H, CH₂), 2.34 (d, J=14.59 Hz, 2H, CH₂), 2.16 -2.27 (m, 7H, CH₂), 1.90 (m, 1H, CH₂), 1.71 (m, 1H, CH₂), 1.60 (d, J=5.85Hz, 4H, CH₂), 1.49 (m, 3H, CH₂), 1.43 (m, 3H, CH₂), 1.33 (br. s., 1H), 1.29 (m, 2H, CH₂), 1.22 (m, 3H, CH₂), 1.14 (m, 1H, CH₂)

Соединение 139

Из соединения 110 (80 мг, 61,14 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25: 46.25: 5: 2.5) было получено соединение 139 в виде белого порошка с выходом 66% (48 мг).

Спектр ¹H 12.46 (br. s., 2Н, СООН), 9.96 (s, 1Н, ОН), 8.29 (d, J=7.40 Hz, 1Н, NH), 8.14 (d, J=8.31Hz, 1H, NH), 7.88-7.96 (m, 1H, NH), 7.63 (d, J=5.69 Hz, 1H, Ph), 7.26-7.40 (m, 2H, Ph), 7.19-7.25 (m, 3H, Ph), 7.16 (d, J=3.67Hz, 5H, Ph), 6.95-6.99 (m, 1H, Ph), 6.85 (d, J=8.19 Hz, 1H, Ph), 6.26-6.35 (m, 2H, C(0)NH(urea)), 4.54 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.30 (m, 2H, CH), 3.99-4.11 (m, 2H, CH), 3.22-3.28 (m, 3H, CH₂), 3.16 (m, 2H, CH₂), 2.97-3.11 (m, 4H, CH₂), 2.86-2.97 (m, 3H, CH₂), 2.78 (d, J=13.69 Hz, 1H, CH₂), 2.68 (d, J=13.51Hz, 1H, CH₂), 2.33 (d, J=9.60 Hz, 4H, CH₂), 2.15-2.27 (m, 5H, CH₂), 1.90 (d, J=5.26 Hz, 1H, CH₂), 1.70 (m, 1H, CH₂), 1.59 (m, 3H, CH₂), 1.50 (d, J=7.64Hz, 3H, CH₂), 1.34-1.46 (m, 3H, CH₂), 1.19-1.32 (m, 4H, CH₂), 1.15 (m, 1H, CH₂).

ВЭЖХ: 100% в положительных ионах.

HRMS (ESI): для C₅₀H₆₄Cl₂N₁₀O₁₃: m/z рассчитано для [M+H]⁺: 1105,3928, найдено 1105,3923.

Соединение 140

Из соединения 111 (110 мг, 82,83 мкмоль) и 5 мл смеси трифторуксусной кислоты, ДХМ, дистиллированной воды и триизопропилсилана (46.25 : 46.25 : 5 : 2.5) было получено соединение 140 в виде белого порошка с выходом 73% (67 мг).

Спектр ¹H 12.57 (br. s., 3Н, СООН), 10.78 (s, 1Н, ОН), 8.16-8.27 (m, 2Н, NH), 7.92 (d, J=8.06 Hz, 2Н, NH), 7.86 (d, J=8.22Hz, 2H, Ph), 7.73 (m, 1H, Ph), 7.68 (t, J=5.34Hz, 1H, Ph), 7.40 (dd, J=9.43, 3.01Hz, 1H, Ph), 7.27 (d, J=8.22Hz, 2H, Ph), 7.20 (d, J=6.52Hz, 2H, NH), 7.16 (m., 3H, Ph), 7.03 (d, J=8.39 Hz, 1H, Ph), 6.25-6.35 (m, 2H, C(0)NH(urea)), 4.61 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.53 (s, 1H, NCH₂Ar), 4.31-4.39 (m, 1H, CH), 4.28 (m, 1H, CH), 4.04-4.11 (m, 2H, CH), 3.21-3.30 (m, 3H, CH₂), 3.13-3.21 (m, 2H, CH₂), 3.09 (m, 2H, CH₂), 3.01 (m, 3H, CH₂), 2.91 (m, 1H, CH₂), 2.88 (m, 1H, CH₂), 2.66 (t, J=13.35Hz, 1H, CH₂), 2.37 (m, 3H, CH₂), 2.21 (m, 6 H, CH₂), 1.89 (m, 1H, CH₂), 1.71 (m, 1H, CH₂), 1.56 (m, 3H, CH₂), 1.52 (d, J=6.14Hz, 4H, CH₂), 1.36 (m, 3H, CH₂), 1.30 (m, 2H, CH₂), 1.22 (m, 3H, CH₂), 1.13 (m, 1H, CH₂).

Общая методика получения флуоресцентных конъюгатов

Флуоресцентный краситель Sulfo-Cy5-alkyne (1 экв.) и соответсвующие соединения 112 или 118 или 129 или 127 (1.05 экв.) были растворены в смеси ДМФА/H₂O (3:1). Реакцию проводили в атмосфере аргона. Далее к раствору был добавлен CuSO¬4*5H₂O (0.4 экв.) и аскорбат натрия (1.2 экв.). Смесь перемешивали в течение 24 часов. После в систему добавили ЭДТА (0.8 экв.) и перемешивали 3 часа. Реакционную смесь фильтровали от ЭДТА и удаляли при пониженном давлении растворитель. Целевое соединение выделяли методом обращеннофазовой колоночной хроматографии (Puriflash С18-НР, 15μ, 20g, элюент: ацетонитрил / 0,1% раствор трифторуксусной кислоты в воде: от 10% ацетонитрила до 100% за 12 минут, 100% ацетонитрила 5 минут).

Соединение 141

Из соединения 112 (47 мг, 0,045 ммоль), Sulfo-Cy5-alkyne (31 мг, 0,043 ммоль), CuSO₄*H₂0 (4 мг, 0,017 ммоль), NaAsc (10 мг, 0,051 ммоль) и ЭДТА (13 мг, 0,034 ммоль) получили соединение 141 в виде темно-синего аморфного порошка с выходом 92% (68 мг).

Спектр ЯМР ¹Н δ ppm 8.34 (br. s., 1Н, NH), 8.30 (br. s., 1H, NH), 8.25 (br. s., 1H, OH), 8.17 (t, J=7.32Hz, 1H, Ar), 8.01 (d, J=8.11Hz, 1H, Ar), 7.92 (m, 1H, Ar), 7.87 (s, 1H, NH), 7.80 (m, 2H, Ar), 7.60-7.69 (m, 4H, Ar), 7.45-7.56 (m, 1H, Ar), 7.11-7.33 (m, 7H, Ar), 6.54 (t, J=12.41Hz, 1H, NH), 6.27 (t, J=15.13Hz, 2H, C(O)NH(urea)), 4.37 (m, 1H, NCH₂Ar), 4.30 (m, 1H, NCH₂Ar), 4.20-4.26 (m, 2H, CH), 3.96-4.09 (m, 2H, CH), 3.23 (m, 1H, CH), 3.01-3.09 (m, 3H), 2.89 (d, J=13.87Hz, 4H, CH₂), 2.56-2.68 (m, 2H, CH₂), 2.39 (t, J=6.60 Hz, 1H, CH₂), 2.33 (m, 1H, CH₂), 2.27 (m, 2H, CH₂), 2.22 (dd, J=15.57, 7.89 Hz, 2H, CH₂), 2.13 (m, 2H, CH₂), 1.81-1.94 (m, 4H, CH₂), 1.52 (d, J=8.28 Hz, 6 H, CH₂), 1.37 (m, 4H, CH₂), 1.32 (m, 3H, CH₂), 1.18-1.27 (m, 4H, CH₂) (Фиг. 26)

ВЭЖХ-МС: чистота 98.8%, t_R = 3,96 мин (Фиг. 28)

ESI-HRMS: для C₈₅H₁₀₆N₁₄O₂₁S₂: m/z рассчитано для [M-2H]^2- 860.34765, найдено: 860.3483 (Фиг. 27)

Соединение 142

Из соединения 118 (31 мг, 29.7 мкмоль), Sulfo-Cy5-alkyne (20 мг, 28.3 мкмоль), CuSO₄*H₂O (3 мг, 11.3 мкмоль), NaAsc (7 мг, 34 мкмоль) и ЭДТА (8.4 мг, 22.64 мкмоль) получили соединение 142 в виде темно-синего аморфного порошка с выходом 50% (24 мг).

Спектр ЯМР ¹Н δ ppm 8.25 (d, J=7.29 Hz, 1Н, NH), 7.82-7.94 (m, 2Н, NH), 7.80 (m, 1Н, Ar), 7.63 (d, J=8.66 Hz, 1Н, Ar), 7.20-7.31 (m, 3Н, Ar), 7.16 (d, J=10.91Hz, 3Н, Ar), 6.26 (t, J=14.63Hz, 2Н, C(0)NH(urea)),), 4.53 (s., 1Н, NCH₂Ar), 4.38 (s., 1H, NCH₂Ar), 4.31 (s., 1H, CH), 4.24 (m, 2H, CH), 4.05 (br. s., 2H), 3.18 (d, J=14.52Hz, 1H, CH), 2.96 -3.07 (m, 2H, CH), 2.89 (d, J=8.55Hz, 1H, CH₂), 2.34 (m., 1H, CH₂), 2.14-2.26 (m, 1H, CH₂), 1.79-1.89 (m, 1H, CH₂), 1.52 (d, J=12.66 Hz, 2H, CH₂), 1.19-1.38 (m, 2H, CH₂)

ВЭЖХ-МС: чистота 99.1%, t_R = 3,16 мин.

ESI-HRMS: для C₈₆H₁₀₇N₁₃O₂₁S₂: m/z рассчитано для [M-2H]^2- = 859.8500, найдено: = 859.8503.

Соединение 143

Из соединения 129 (34 мг, 0,032 ммоль), Sulfo-Cy5-alkyne (22 мг, 0,0304 ммоль), CuSO₄*H₂O (3 мг, 0,012 ммоль), NaAsc (7.2 мг, 0,036 ммоль) и ЭДТА (9 мг, 0,024 ммоль) получили соединение 143 в виде темно-синего аморфного порошка с выходом 87% (47 мг).

Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 8.21-8.42 (м, 3Н, NH), 8.05 (д, J=7.87Hz, 1Н, NH), 7.76-7.97 (м, 3Н, Ar), 7.63 (д, J=7.38 Hz, 2Н, Ar), 7.18-7.41 (м, 3Н, Ar), 6.90-7.17 (м, 3Н, Ar), 6.53-6.70 (м, 3Н, Ar), 6.18-6.41 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.39 -4.59 (м, 3Н, NCH₂Ar), 4.24 (д, J=4.99 Hz, 3Н, СН), 4.01-4.10 (м, 5Н, СН₂), 3.10-3.18 (м, 1Н, СН₂), 2.87-3.09 (м, 3Н, СН₂), 2.76-2.81 (м, 1Н, СН₂), 2.13-2.40 (м, 4 Н, Ch2), 2.02-2.12 (м, 1Н, СН₂), 1.79-1.96 (м, 2Н, СН₂), 1.55-1.69 (м, 10 Н, СН₂), 1.06-1.58 (м, 11Н, СН₂).

Спектр ЯМР ¹³С (101 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 174.50, 174.21, 173.78, 172.82, 172.19, 171.94, 171.57, 171.28, 171.05, 157.30, 155.80, 155.73, 154.24, 145.23, 144.99, 144.80, 142.77, 142.10, 141.22, 140.47, 133.04, 130.26, 129.97, 128.08, 128.02, 127.19, 126.07, 122.97, 119.88, 114.97, 114.87, 110.11, 103.68, 52.16, 51.66, 48.90, 46.89, 36.20, 34.93, 34.14, 31.76, 30.67, 29.91, 29.75, 29.05, 27.51, 27.12, 26.93, 26.28, 25.75, 24.85.

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 13,4 мин.

ESI-HRMS: для C₈₅H₁₀₆ClN₁₃O₂₁S₂: m/z рассчитано для [М+2K]²⁺ 891.8230, найдено: 891.8261.

Соединение 144

Из соединения 127 (60 мг, 0,055 ммоль), Sulfo-Cy5-alkyne (37,5 мг, 0,052 ммоль), CuSO₄*H₂O (5,5 мг, 0,022 ммоль), NaAsc (13 мг, 0,066 ммоль) и ЭДТА (18 мг, 0,045 ммоль) получили соединение 144 в виде темно-синего аморфного порошка с выходом 80% (78 мг).

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМО-d6, δ, м.д.): 8.22-8.40 (м, 3Н, NH), 8.17-8.19 (м, 1Н, NH), 8.01 (д, J=8.11Hz, 1Н, Ar), 7.92 (м, 1Н, Ar), 7.87 (с, 1Н, Ar), 7.78-7.83 (м, 2Н, Ar), 7.58-7.72 (м, 3Н, Ar), 7.45-7.58 (м, 1Н, Ar), 7.09-7.34 (м, 10 Н, Ar), 6.54 (m, J=12.41Hz, 1Н, NH), 6.20-6.38 (м, 2Н, NHC(O)NH), 4.88 (с, 1Н), 4.73 (с, 1Н, NCH₂Ar), 4.38 (д. J=5.81Hz, 1Н, NCH₂Ar), 4.30 (с, 1Н, СН), 4.22-4.24 (м., 4 Н, СН), 4.00-4.06 (м., 4 Н, СН), 3.15-3.23 (м., 3Н, СН₂), 2.90-3.01 (м., 4 Н, СН₂), 2.88-2.91 (м, 3Н, СН₂), 2.56-2.69 (м, 1Н), 2.38-2.40 (м, 1Н, СН), 2.26-2.36 (м, 2Н, СН₂), 2.19-2.25 (м, 3Н, СН₂), 2.10-2.17 (м, 1Н, СН₂), 2.01-2.09 (м, 2Н, СН₂), 1.80-1.86 (м, 3Н, СН₂), 1.67 (m, 14 Н, СН₂), 1.49-1.55 (м, 6 Н, СН₂), 1.27-1.44 (м, 5Н, СН₂), 1.12-1.23 (м, 4 Н, СН₂).

ВЭЖХ-МС: чистота 99%, t_R = 4,7 мин.

ESI-MS: для C₈₅H₁₀₅ClN₁₄O₂₂S₂: m/z рассчитано для [М+2Н]²⁺ 887.34, найдено: 888.05, m/z рассчитано для [М-2Н]^2- 885.33, найдено: 888.05. Соединение 145

В смеси 10 мл диметилформамида и 3,5 мл деионизованной воды растворили модифицированный монометилауристатин (60 мг, 0,049 ммоль), а также соединения 127 (57 мг, 0,052 ммоль). К полученному раствору прибавили CuSO4-5H₂O (5 мг, 0,019 ммоль) и NaAsc (12 мг, 0,059 ммоль). Реакцию проводили в инертной атмосфере аргона, перемешивали раствор в течение 24 ч при комнатной температуре. После окончания реакции, добавили ЭДТА (15 мг, 0.0375 ммоль) и перемешивали 2 часа. Растворители упарили при пониженном давлении. Дальнейшую очистку проводили с помощью препаративной обращенно-фазовой хроматографии (градиент от 10/90 до 100/0 ацетонитрил/вода, в течение 20 минут, хроматографическая колонка Puriflash-C18-HP, 12 г, 15 мкм). Получили продукта в виде белого аморфного вещества с выходом 37% (35 мг).

Спектр ЯМР ¹Н 5 ppm 10.77 (s, 1Н, ОН), 9.99 (br. s., 1Н, ОН), 8.18-8.37 (m, 1Н, NH), 8.15 (d, J=5.93Hz, 1Н, NH), 8.09 (m, 1Н, NH), 7.87 (t, J=9.71Hz, 1H, Ar), 7.81 (s, 1H, Ar), 7.75 (m, 1H, Ar), 7.63 (d, J=7.68 Hz, 1H, Ar), 7.56 (m., 1H, Ar), 7.39 (d, J=10.71Hz, 1H, Ar), 7.28 (m., 3H, Ar), 7.11-7.23 (m, 3H, Ar), 7.02 (d, J=8.88 Hz, 1H, Ar), 6.26-6.36 (m, 1H, NHC(O)NH), 5.98 (br. s., 1H, NHC(0)NH₂), 5.42 (br.s., 1H, NH₂) 5.03 (m., 1H, CH₂C(O)O), 4.54 (s., 1H, NCH₂Ar), 4.46 (s., 1H, NCH₂Ar), 4.32-4.42 (m, 2H, CH), 4.18 -4.27 (m, 2H, CH), 3.92-4.12 (m, 1H, CH), 3.14-3.24 (m, 4H, CH₂), 3.10 (m, 1H, CH₂), 2.98 (d, J=14.72Hz, 3H, CH₂), 2.80-2.89 (m, 2H, CH₂), 2.61-2.70 (m, 1H, CH₂), 2.57 (t, J=7.38 Hz, 1H, CH₂), 2.30-2.39 (m, 1H, CH₂), 2.16-2.28 (m, 3H, CH₂), 1.87 (m, 1H, CH₂), 1.79 (m., 1H, CH₂), 1.63-1.74 (m, 1H, CH₂), 1.49 (m., 3H, CH3), 1.22 (m., 2H, CH3), 0.95-1.05 (m, 2H, CH₂), 0.80 (m, 6 H, CH3), 0.75 (m, 4H, CH₂) (Фиг. 29).

ВЭЖХ-МС: чистота 100%, t_R = 7,6 мин, (Фиг. 31)

ESI-MS: для C₁₁₄H₁₆₄ClN₂₁O₂₈: m/z рассчитано для [M+H]⁺ 2309,16705, найдено: 2309,1781, (Фиг. 30)

Получение соединений с хелатирующим агентом DOTA

Соединение 146

К дипептиду на смоле 2-СТС NH₂-F5F6 (1 экв.; 0,342 ммоль) в 5 мл DMF в реакторе добавили 53 (1,2 экв.; 288 мг; 0,41 ммоль), HOBt (0,5 экв.; 25 мг; 0,171 ммоль), HBTU (2 экв.; 260 мг; 0.684 ммоль), DIPEA (3 экв.; 179 мкл; 1,03 ммоль). Смесь перемешивалась 4 ч. Далее удалили растворитель фильтрацией на пористом фильтре реактора и смолу промывали трижды DMF (5 мл), трижды DCM (5 мл), затем сушили от следов растворителей. После к смоле добавили систему DCM/TFA (99,25%-0,75%) 10 мл и оставили при перемешивании на 15 минут, после раствор отфильтровали от смолы. Растворитель удалили при пониженном давлении и остаток переупарили с DCM. После очищали методом колоночной хроматографии (Puriflash на колонке PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O(80%)/MeCN(20%) => H₂O(0%)/MeCN(100%) в течение 15 минут, после MeCN(100%) в течение 5 минут. Соединение 146 было получено в виде белого аморфного вещества (236 мг, выход 69%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

12.72 (br.s., 1H, F6COOH), 8.27 (d, J=7.3 Hz, 2H, F5NH), 8.06 (d, J=8.6 Hz, 1H, F6NH), 7.78 (t, J=5.5Hz, 1H, X3NHk), 7.73 (t, J=5.5Hz, 1H, K2NHk), 7.31-7.12 (m, 10H, Ph+Ph), 6.30 (d, J=8.4Hz, 1H, K2NH), 6.26 (d, J=8.3Hz, 1H, E1NH), 4.48 (ddd, J=12.6, 8.6, 4.0 Hz, 1H, F6Ha), 4.41 (td, J=8.3, 5.3Hz, 1H, F5Ha), 4.03 (ddd, J=13.6, 8.3, 5.2Hz, 1H, E1 Ha), 3.94 (ddd, J=13.6, 8.4, 5.8 Hz, 1H, K2Ha), 3.07 (dd, J=14.1, 3.6 Hz, 1H, F6Hb(a)), 3.02-2.90 (m, 6H,F6Hb(b)+X3He+K2He+F5Hb(a)), 2.65 (dd, J=13.7, 10.4Hz, 1H, F5Hb(b)), 2.30-2.10 (m, 6H, X4Hb+E1Hg+X4Ha), 2.00 (t, J=7.3Hz, 2H, Х3На), 1.92-1.79 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.55-1.49 (m, 1H, K2Hb(b)), 1.49-1.42 (m, 2H, X3Hb), 1.42-1.30 (m, 31H, tBu+X3Hd+K2Hd), 1.29-1.16 (m, 4H, K2Hg+X3Hg).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.76 (F6C), 172.30 (K2C), 171.94 (X3C), 171.87 (E1C), 171.46 (E1Cd), 171.43 (X4Cg), 171.36 (F5C), 171.16 (X4C), 157.15(U), 138.12 (F6Cg), 137.57 (F5Cg), 129.18 (F6Cd+F5Cd), 128.24 (F6Ce), 128.00 (F5Ce), 126.47 (F6Ck), 126.19 (F5Ck), 80.62 (E1tBu), 80.32 (K2tBu), 79.77 (E1dtBu), 53.67 (F5Ca), 53.62 (F6Ca), 53.06 (K2Ca), 52.18 (EICa), 38.49 (Х3Се), 38.24 (K2Ce), 37.34 (F5Cb), 36.61 (F6Cb), 35.43 (Х3Са), 31.81 (K2Cb), 30.91 (E1Cg), 30.82 (X4Ca), 30.74 (X4Cb), 28.95 (X3Cd), 28.89 (K2Cd), 27.76 (tBuE1), 27.67 (tBuK2+tBuE1d+E1Cb), 26.22 (X3Cg), 25.12 (X3Cb), 22.55 (K2Cg).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₅₂H₇₈N₆O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н⁺]⁺: 995.57, найдено: 995.60

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₂H₇₈N₆O₁₃ - [M+H⁺]⁺: 995.5700, найдено: 995.5673

Соединение 147

К дипептиду на смоле 2-СТС NH₂-F5F6 (1 экв.; 0,342 ммоль) в 7 мл DMF в реакторе добавили соединение IV, с заместителями X₁=H, X₂=H, Х₃=Br, Х₄=Н (1,2 экв.; 357 мг; 0,410 ммоль), HOBt (0,5 экв.; 25 мг; 0,171 ммоль), HBTU (2 экв.; 260 мг; 0.684 ммоль), DIPEA (3 экв.; 179 мкл; 1,03 ммоль). Смесь перемешивалась 4 ч. Далее удалили растворитель фильтрацией на пористом фильтре реактора и смолу промывали трижды DMF (7 мл), трижды DCM (7 мл), затем сушили от следов растворителей. После к смоле добавили систему DCM/TFA (99,25%-0,75%) 10 мл и оставили при перемешивании на 15 минут, после раствор отфильтровали от смолы. Растворитель удалили при пониженном давлении и остаток переупарили с DCM. После очищали методом колоночной хроматографии (Puriflash на колонке PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O(80%)/MeCN(20%) => H₂O(0%)/MeCN(100%) в течение 15 минут, после MeCN(100%) в течение 5 минут. Соединение 147 было получено в виде белого аморфного вещества (280 мг, выход 70%).

¹Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

12.71 (br.s., 1H, F6COOH), 8.30-8.22 (br.d., 1H, FSNHmn), 8.09-8.01 (br.d., 1H, F6NHmn), 7.78 (t, J=5.4Hz, m) & 7.75 (t, J=5.4Hz, n) (1H, X3NHk), 7.55 (d, J=8.2Hz, n) & 7.49 (d, J=8.2Hz, m) (2H, X8Hd, m+n), 7.29-7.08 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.35-6.19 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.53-4.44 (m, X8Han+F6Ha+X8Ham), 4.44-4.36 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1 Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ha), 3.20 (t, J=7.3Hz, m) & 3.15 (t, J=7.3Hz, m) (2H, K2He), 3.11-3.02 (m, 1H, F6Hb(a)), 3.02-2.90 (m, 4H, F6Hb(b)+X3Hemn+F5Hb(a)), 2.71-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.35 (t, J=7.4Hz, X3Ham), 2.30-2.10 (m, X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Ha/7), 1.92-1.80 (m, 1Н, E1Hb(a)), 1.71-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H,tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.76 (F6C), 172.25 (K2C(n)), 172.21 (K2C(m)), 172.11 (Х3С(n)), 172.03 (X3C(m)), 171.93 (E1C), 171.46 (E1Cd), 171.42 (X4Cg(mn)), 171.36 (F5C(mn)), 171.17 (X4C(m)), 171.16 (X4C(n)) 157.15 (U(m)), 157.13 (U(n)), 138.12 (F6Cg), 138.00 (X8Cb(m)), 137.57 (F5Cg), 137.51 (X8Cb(n)), 131.57 (X8Cd(n)), 131.25 (X8Cd(m)), 129.73 (X8Cg(m)), 129.18 (F6Cd+F5Cd), 128.67 (X8Cg(n)), 128.23 (F6Ce), 127.99 (F5Ce), 126.46 (F6Ck), 126.18 (F5Ck), 120.17 (X8Ce(n)), 119.95 (X8Ce(m)), 80.59 (E1tBu), 80.42 (K2tBu(m)), 80.33 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 53.67 (F5Ca), 53.62 (F6Ca), 52.99 (K2Ca(n)), 52.85 (K2Ca(m)), 52.19 (E1Ca(m)), 52.18 (E1Ca(n)), 49.59 (X8Ca(n)), 46.95 (X8Ca(m)), 46.67 (K2Ce(m)), 45.12 (K2Ce(n)), 38.52 (X3Ce(m)), 38.47 (Х3Се(n)), 37.33 (F5Cb), 36.61 (F6Cb), 32.35 (Х3Са(n)), 31.99 (X3Ca(m)), 31.83 (K2Cb), 30.93 (E1Cg), 30.82 (X4Ca), 30.75 (X4Cb), 29.11 (X3Cd(m)), 29.03 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.67 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.64 (tBuE1d+E1Cb), 26.72 (K2Cd(n)), 26.30 (X3Cg(m)), 26.20 (X3Cg(n)), 24.75 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(и)), 22.46 (K2Cg(n)) 22.27 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₅₉H₈₃BrN₆O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н⁺]+: 1165,53, найдено: 1165,45HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₉H₈₃BrN₆O₁₃ - [М+Н⁺]+: 1165,5274, найдено: 1165,5320

Соединение 148

К дипептиду на смоле 2-СТС NH₂-F5F6 (1 экв.; 0,54 ммоль) в 7 мл DMF в реакторе добавили 52 (1,2 экв.; 535 мг; 0,648 ммоль), HOBt (0,5 экв.; 37 мг; 0,27 ммоль), HBTU (2 экв.; 410 мг; 1,08 ммоль), DIPEA (3 экв.; 282 мкл; 1,62 ммоль). Смесь перемешивалась 4 ч. Далее удалили растворитель фильтрацией на пористом фильтре реактора и смолу промывали трижды DMF (7 мл), трижды DCM (7 мл), затем сушили от следов растворителей. После к смоле добавили систему DCM/TFA (99,25% - 0,75%) 11 мл и оставили при перемешивании на 15 минут, после раствор отфильтровали от смолы. Растворитель удалили при пониженном давлении и остаток переупарили с DCM. После очищали методом колоночной хроматографии (Puriflash на колонке PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O(80%)/MeCN(20%) => H₂O(0%)/MeCN(100%) в течение 15 минут, после MeCN(100%) в течение 5 минут. Соединение 148 было получено в виде белого аморфного вещества (460 мг, выход 76%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

12.71 (br.s., 1H, F6COOH), 8.30-8.22 (br.d., 1H, F5NHmn), 8.09-8.03 (br.d., 1Н, F6NHmn), 7.79 (t, J=5.4Hz, m) & 7.75 (t, J=5.4Hz, n) (1H, X3NHk), 7.40 (t, J=7.7Hz, X8Hdn), 7.36-7.29 (m, X8Hew+X8Hdm+X8Hem), 7.29-7.08 (m, 12H, F6He+F6Hd+X8Htmw+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.37-6.18 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.55 (s, Х8Наи), 4.53-4.44 (m, F6Ha+X8Ham), 4.44-4.36 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1 Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ha), 3.22 (t, J=7.3Hz, n) & 3.17 (t, J=7.3Hz, m) (2H, K2He), 3.11-3.02 (m, 1H, F6Hb(a)), 3.02-2.90 (m, 4H, F6Hb(b)+X3Hemw+F5Hb(a)), 2.71-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.35 (t, J=7.4Hz, X3Ham), 2.30-2.10 (m, X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.71-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu). (Фиг. 32)

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.77 (F6C), 172.25 (K2C(n)), 172.21 (K2C(m)), 172.14 (Х3С(n)), 172.12 (X3C(m)), 171.93 (E1C), 171.45 (E1Cd), 171.42 (X4Cg(mn)), 171.37 (F5C(mw)), 171.16 (X4C(m)), 171.15 (X4C(n)) 157.15 (U(m)), 157.14 (U(n)), 141.19 (X8Cb(m)), 140.78 (X8Cb(n)), 138.13 (F6Cg), 137.57 (F5Cg), 133.44 (Х8СВД), 133.09 (X8Ck(m)), 130.61 (X8Cd(n)), 130.25 (X8Cd(m)), 129.18 (F6Cd+F5Cd), 128.23 (F6Ce), 127.99 (F5Ce), 127.22 (X8Ct(m)), 127.16 (X8Ce(n)), 126.87 (X8Ce(m)), 126.45 (F6Ck), 126.32 (X8Ct(n)), 126.18 (F5Ck), 126.07 (X8Cg(m)), 124.96 (X8Cg(n)X 80.58 (E1tBu), 80.41 (K2tBu(m)), 80.32 (K2tBu(n)), 79.76 (E1dtBu), 53.67 (F5Ca), 53.63 (F6Ca), 53.00 (K2Ca(n)), 52.87 (K2Ca(m)), 52.19 (EICa), 49.61 (X8Ca(n)), 47.10 (X8Ca(m)), 46.80 (K2Ce(m)), 45.20 (K2Ce(n)), 38.53 (X3Ce(m)), 38.47 (Х3Се(и)), 37.34 (F5Cb), 36.61 (F6Cb), 32.33 (Х3Са(n)), 31.95 (X3Ca(m)), 31.83 (K2Cb), 30.93 (E1Cg), 30.82 (X4Ca), 30.75 (X4Cb), 29.12 (X3Cd(m)), 29.02 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.66 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.63 (tBuE1d+E1Cb), 26.72 (K2Cd(n)), 26.29 (X3Cg(m)), 26.19 (X3Cg(n)), 24.76 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(n)), 22.44 (K2Cg(n) 22.27 (K2Cg(m)).(Фиг. 33)

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме (Фиг. 34)

ESI-MS C59H83CIN6O13: m/z рассчитано для [М+Н⁺]⁺: 1119.58, найдено: 1119.45 (Фиг. 35)

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₉H₈₃ClN₆O₁₃ - [М+Н⁺]⁺: 1119.5779, найдено: 1119.5746 (Фиг. 36)

Соединение 149

К дипептиду на смоле 2-СТС NH₂-F5F6 (1 экв.; 0,46 ммоль) в 7 мл DMF в реакторе добавили IV, с заместителями X₁=H, Х₂=Н, Х₃=Н, X₄=H (1,2 экв.; 437 мг; 0,552 ммоль), HOBt (0,5 экв.; 34 мг; 0,23 ммоль), HBTU (2 экв.; 349 мг; 0,92 ммоль), DIPEA (3 экв.; 240 мкл; 1,32 ммоль). Смесь перемешивалась 4 ч. Далее удалили растворитель фильтрацией на пористом фильтре реактора и смолу промывали трижды DMF (7 мл), трижды DCM (7 мл), затем сушили от следов растворителей. После к смоле добавили систему DCM/TFA (99,25%-0,75%) 10 мл и оставили при перемешивании на 15 минут, после раствор отфильтровали от смолы. Растворитель удалили при пониженном давлении и остаток переупарили с DCM. После очищали методом колоночной хроматографии (Puriflash на колонке PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O(80%)/MeCN(20%) => H₂O(0%)/MeCN(100%) в течение 15 минут, после MeCN(100%) в течение 5 минут. Соединение 149 было получено в виде белого аморфного вещества (306 мг, выход 61%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

12.71 (br.s., 1H, F6COOH), 8.32-8.22 (br.d., 1H, FSNHmn), 8.11-8.00 (br.d., 1H, F6NHmn), 7.79 (t, J=5.4Hz, m) & 7.75 (t, J=5.4Hz, n) (1H, X3NHk), 7.39-7.08 (m, 15H, 7.38-7.11 (m. 15H, X8Hd«+X8Hdm+X8Hem+X8Hen+X8Hgmn+F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd), 6.35-6.19 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.53 (s, X8Ham), 4.52-4.45 (m, F6Ha+X8Ham), 4.44-4.36 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1 Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ha), 3.20 (t, J=7.3Hz, n) & 3.14 (t, J=7.3Hz, m) (2H, K2He), 3.10-3.03 (m, 1H, F6Hb(a)), 3.02-2.89 (m, 4H, F6Hb(b)+X3Hemn+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.33 (t, J=7.4Hz, X3Ham), 2.30-2.10 (m, X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.71-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.76 (F6C), 172.25 (K2C(n)), 172.21 (К2С(m)+X3C(n)), 172.10 (X3C(m)), 171.93 (E1C), 171.46 (E1Cd), 171.42 (X4Cg(mn)), 171.36 (F5C(mn)), 171.16 (X4C(m)), 171.14 (X4C(n)) 157.13 (X4C(n)), 138.42 (X8Cb(m)), 138.12 (F6Cg), 137.95 (X8Cb(n)), 137.56 (F5Cg), 129.18 (F6Cd+F5Cd), 128.70 (X8Cd(n)), 128.38 (X8Cd(m)), 128.23 (F6Ce), 127.99 (F5Ce), 127.44 (X8Cg(m)), 127.16 (X8Ce(n)), 126.89 (X8Ce(m)), 126.46 (F6Ck), 126.36 (X8Cg(n)), 126.18 (F5Ck),80.60 (E1tBu), 80.41 (K2tBu(m)), 80.32 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 53.66 (F5Ca), 53.62 (F6Ca), 53.00 (K2Ca(n)), 52.88 (K2Ca(m)), 52.18 (E1Ca), 50.18 (Х8Са(n)), 47.35 (X8Ca(m)), 46.49 (K2Ce(m)), 45.14 (K2Ce(n)), 38.52 (X3Ce(m)), 38.46 (Х3Се(n)), 37.33 (F5Cb), 36.60 (F6Cb), 32.38 (Х3Са(n)), 32.01 (X3Ca(m)), 31.81 (K2Cb), 30.92 (E1Cg), 30.81 (X4Ca), 30.74 (X4Cb), 29.11 (X3Cd(m)), 29.01 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.66 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.64 (tBuE1d+E1Cb), 26.74 (K2Cd(n)), 26.31 (X3Cg(m)), 26.21 (X3Cg(n)), 24.81 (X3Cb(m)), 24.64 (X3Cb(n)), 22.47 (K2Cg(n)) 22.30 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₅₉H₈₄N₆O₁₃: m/z рассчитано для [М+Н⁺]+: 1085,62, найдено: 1085,60

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₉H₈₄N₆O₁₃ - [М+Н⁺]⁺: 1085,6169, найдено: 1085,6158

Соединение 150

К раствору соединения 146 (1 экв.; 236 мг; 0,237 ммоль) в 5 мл DMF добавили TFA*NH₂(CH₂)₃NHFmoc (1.1 экв.; 107 мг; 0,26 ммоль), DIPEA (2,5 экв.; 103 мкл; 0,592 ммоль) в 10 мл DMF, а затем, HOBt (1 экв.; 32 мг; 0,237 ммоль), HBTU (1.5 экв.; 135 мг; 0,355 ммоль). Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении. Далее остаток высадили в H₂O и промыли H₂O*2 (5 мл). Осадок очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 20 минут после MeCN (100%) в течение 40 минут. Соединение 150 было получено в виде бледно-желтого аморфного вещества (272 мг, выход 90%).

¹Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

8.29 (d, J=7.4Hz, 1H, F5NH), 8.17 (d, J=8.3Hz, 1H, F6NH), 7.95-7.90 (m, 1H, X3NHk), 7.88 (d, J=7.4Hz, 2H, FmocHt), 7.76-7.70 (m, 1H, K2NHk), 7.67 (d, J=7.4Hz, 2H, FmocHd), 7.60-7.52 (m, 1H, X7NH), 7.40 (t, J=7.4Hz, FmocHk), 7.36-7.09 (m, FmocHe+X7NHd+Ph+Ph), 6.36-6.17 (m, 2H, K2NH+E1NH), 4.44-4.35 (m, 1H, F6Ha), 4.35-4.24 (m, 3H, F5Ha+FmocHa), 4.20 (t, J=6.9 Hz, FmocHb), 4.08-3.98 (m, 1H, E1 Ha), 3.98-3.89 (m, 1H, K2Ha), 3.11-2.81 (m, 11H, F6Hb(a)+X3He+X7Ha+K2He+X7Hg+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 6H, X4Hb+X4Ha(a)+E1Hg+X4Ha(b), 2.00 (t, J=7.3Hz, 2H, Х3На), 1.92-1.79 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.61 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+K2Hb(b)+X3Hb+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.87 (X4Cg), 172.32 (K2C), 171.96 (X3C), 171.94 (E1C), 171.64 (X4C), 171.50 (E1Cd), 171.18 (F5C), 170.74 (F6C), 157.21 (U), 156.17 (C(O)Fmoc), 143.97 (FmocCg), 140.81 (FmocCte), 138.16 (F6Cg), 138.05 (F5Cg), 129.07 (F6Cd+F5Cd), 128.21 (F6Ce), 128.10 (F5Ce), 127.67 (FmocCk), 127.12 (FmocCt), 126.33 (F6Ck), 126.28 (F5Ck), 125.20 (FmocCe), 120.17 (FmocCd), 80.66 (E1tBu), 80.35 (K2tBu), 79.80 (E1dtBu), 65.36 (FmocCa), 55.04 (F5Ca), 54.45 (F6Ca), 53.11 (K2Ca), 52.22 (E1Ca), 46.83 (FmocCb), 38.63 (Х3Се), 38.29 (K2Ce), 37.93 (X7Cg), 37.11 (F5Cb), 36.85 (F6Cb), 36.44 (X7Ca), 35.46 (ХЗСа), 31.83 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.74 (X4Ca), 30.61 (X4Cb), 29.23 (X7Cb), 28.91 (X3Cd+K2Cd), 27.76 (tBuE1), 27.67 (tBuK2+tBuE1d+E1Cb), 26.26 (X3Cg), 25.13 (X3Cb), 22.58 (K2Cg).

По результатам LCMS 98.5% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₇₀H₉₆N₈O₁₄: m/z рассчитано для [M+Na⁺]⁺: 1295.69, найдено: 1295.65HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₇₀H₉₆N₈O₁₄ - [M+Na⁺]⁺: 1295.6938, найдено: 1295.6973

Соединение 151

К раствору соединения 147 (1 экв.; 280 мг; 0,240 ммоль) в 10 мл DMF добавили TFA*NH₂(CH₂)₃NHFmoc (1.1 экв.; 109 мг; 0,264 ммоль), DIPEA (2,5 экв.; 96 мкл; 0,553 ммоль) в 10 мл DMF, а затем, HOBt (1 экв.; 32 мг; 0,402 ммоль), HBTU (1.5 экв.; 137 мг; 0,36 ммоль). Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и преупарили с DCM дважды. Далее остаток растворили в 30 мл DCM и провели экстракцию; 1) Н₂О (2*30 мл), 2) brine (2*30 мл). Затем органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель. Остаток очищали с помощью метода колоночной хроматографии (Puriflash на колонке (15μ 40g)); элюент: DCM(100%)/MeOH(0%) => DCM(90%)/MeOH(10%) в течение 30 минут, после МеОН (100%) в течение 5 минут. Соединение 151 было получено в виде бледно-желтого аморфного вещества (330 мг, выход 88%).

¹Н ЯМР (400 MHz, DMSO-d6, δ):

8.34-8.24 (br.d., 1H, F5NHmn), 8.21-8.12 (m. 1H, F6NHmn), 7.96-7.83 (m. 3H, X3NHkmn+FmocHt), 7.67 (d, J=7.5Hz, 2H, FmocHd), 7.60-7.44 (m, 3H, X7NH+X8Hdmn), 7.40 (t, J=7.5Hz, 2H, FmocHk), 7.31 (t, J=7.5Hz, 2H, FmocHe), 7.30-7.08 (m, 13H, F6He+F6Hd+F5He+X7NHd+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgw), 6.35-6.20 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.54 (s, n) & 4.47 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.44-4.35 (m, 1H, F6Ha), 4.35-4.25 (m, 3H, F5Ha+FmocHa), 4.20 (t, J=6.9 Hz, 1H, FmocHb), 4.08-3.99 (m, 1H, E1 Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Hamw), 3.17 (t, J=7.3Hz, n) & 3.13 (t, J=7.3Hz, m) (2H, K2He, m+n), 3.11-2.85 (m, 9H, F6Hb(a)+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.59 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbm/7+E1Hg+X4Ham/7+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d6, δ):

172.85 (X4Cg(n)), 172.82 (X4Cg(m)), 172.26 (К2ОД), 172.22 (K2C(m)), 172.13 (Х3С(n)), 172.05 (X3C(m)), 171.95 (E1C), 171.61 (X4C(mn)), 171.48 (E1Cd), 171.15 (F5C), 170.71 (F6C), 157.19 (U(m)), 157.17 (U(n)), 156.15 (C(O)Fmoc), 143.96 (FmocCg), 140.77 (FmocCte), 138.14 (F6Cg), 138.04 (F5Cg), 137.99 (X8Cb(m)), 137.48 (X8Cb(n)), 131.57 (XSCd(n)), 131.25 (X8Cd(m)), 129.72 (X8Cg(m)), 129.06 (F6Cd+F5Cd), 128.66 (X8Cg(n)), 128.19 (F6Ce), 128.09 (F5Ce), 127.66 (FmocCk), 127.11 (FmocCt), 126.32 (F5Ck), 126.27 (F6Ck), 125.19 (FmocCe), 120.16 (FmocCd+X8Ce(n)), 119.97 (X8Ce(m)), 80.62 (E1tBu), 80.45 (K2tBu(m)), 80.36 (K2ffiu(n)), 79.80 (E1dtBu), 65.35 (FmocCa), 55.01 (F5Ca(n)), 54.94 (F5Ca(m)), 54.43 (F6Ca), 53.02 (K2Ca(n)), 52.87 (K2Ca(m)), 52.22 (EICa), 49.61 (X8Ca(n)), 46.98 (X8Ca(m)), 46.81 (FmocCb), 46.68 (K2Ce(m)), 45.16 (K2Ce(n)), 38.67 (X3Ce(m)), 38.63 (Х3Се(n)), 37.92 (X7Cg), 37.10 (F5Cb), 36.84 (F6Cb), 36.42 (X7Ca), 32.37 (ХЗСа(и)), 32.01 (X3Ca(m)), 31.84 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.70 (X4Ca), 30.60 (X4Cb), 29.22 (X7Cb), 29.06 (X3Cd(m)), 28.99 (X3Cd(n)), 27.76 (tBuE1), 27.67 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.64 (tBuE1d+E1Cb), 26.72 (K2Cd(n), 26.35 (X3Cg(m)), 26.26 (X3Cg(n)), 24.75 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(n)), 22.47 (K2Cg(n)) 22.27 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₇₇H₁₀₁BrN₈O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н⁺]⁺: 1443,67, найдено: 1443,6

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₇₇H₁₀₁BrN₈O₁₄ - [М+Н]⁺ 1443.6679, найдено: 1443.6661

Соединение 152

К раствору соединения 148 (1 экв.; 300 мг; 0,268 ммоль) в 10 мл DMF добавили TFA*NH₂(CH₂)₃NHFmoc (1.1 экв.; 121 мг; 0,294 ммоль), DIPEA (2,5 экв.; 117 мкл; 0,67 ммоль) в 10 мл DMF, а затем, HOBt (1 экв.; 36 мг; 0,268 ммоль), HBTU (1.5 экв.; 152 мг; 0,402 ммоль). Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и преупарили с DCM дважды. Далее остаток растворили в 30 мл DCM и провели экстракцию; 1) H₂O (2*30 мл), 2) brine (2*30 мл). Затем органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель. Остаток очищали с помощью метода колоночной хроматографии (Puriflash на колонке (15μ 40g)); элюент: DCM(100%)/MeOH(0%) => DCM(90%)/MeOH(10%) в течение 30 минут, после МеОН (100%) в течение 5 минут. Соединение 152 было получено в виде бледно-желтого аморфного вещества (330 мг, выход 88%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.35-8.25 (br.d., 1Н, F5NHmn), 8.22-8.13 (m, 1H, F6NHmn), 7.93 (t, J=5.4 Hz, X3NHkm), 7.91-7.84 (m, X3NHkn+FmocHt), 7.67 (d, J=7.5 Hz, 2H, FmocHd), 7.60-7.52 (m, 1H, X7NH), 7.45-7.35 (m, FmocHk+X8Hdn), 7.35-7.08 (m, X8Hen+FmocHe+X8Hdm+X8Hem+X7NHd+F6He+F6Hd+X8Htmn+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.36-6.21 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.54 (s, n) & 4.47 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.44-4.36 (m, 1H, F6Ha), 4.36-4.25 (m, 3H, F5Ha+FmocHa), 4.20 (t, J=6.9 Hz, 1H, FmocHb), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Hamn), 3.21 (t, J=7.3 Hz, n) & 3.16 (t, J=7.3 Hz, m) (2H, K2He, m+n), 3.11-2.84 (m, 9H, F6Hb(a)+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu). (Фиг. 37)

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.79 (X4Cg(n)), 172.76 (X4Cg(m)), 172.24 (K2C(n)), 172.20 (K2C(m)), 172.15 (Х3С(n)), 172.13 (X3C(m)), 171.92 (E1C), 171.57 (X4C(mn)), 171.45 (E1Cd), 171.11 (F5C), 170.67 (F6C) 157.15 (U(mn)), 156.12 (C(O)Fmoc), 143.94 (FmocCg), 141.16 (X8Cb(m)), 140.77 (X8Cb(n)+FmocCte), 138.12 (F6Cg), 138.02 (F5Cg), 133.44 (X8Ck(n)), 133.09 (X8Ck(m)), 130.59 (X8Cd(n)), 130.23 (X8Cd(m)), 129.04 (F6Cd+F5Cd), 128.16 (F6Ce), 128.06 (F5Ce), 127.63 (FmocCk), 127.21 (X8Ct(m)), 127.15 (Х8Се(n)), 127.09 (FmocCt), 126.86 (X8Ce(m)), 126.29 (F6Ck+X8Ct(n)), 126.24 (F5Ck), 126.05 (X8Cg(m)), 125.17 (FmocCe), 124.95 (X8Cg(n)), 120.13 (FmocCd), 80.59 (E1tBu), 80.42 (K2tBu(m)), 80.33 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 65.32 (FmocCa), 54.94 (F5Ca), 54.40 (F6Ca), 53.01 (K2Ca(n)), 52.87 (K2Ca(m)), 52.20 (E1Ca), 49.62 (Х8Са(n)), 47.11 (X8Ca(m)), 46.80 (FmocCb+K2Ce(m)), 45.19 (K2Ce(n)), 38.65 (X3Ce(m)), 38.60 (Х3Се(n)), 37.90 (X7Cg), 37.11 (F5Cb), 36.82 (F6Cb), 36.39 (X7Ca), 32.32 (Х3Са(n)), 31.95 (X3Ca(m)), 31.82 (K2Cb), 30.93 (E1Cg), 30.69 (X4Ca), 30.58 (X4Cb), 29.20 (X7Cb), 29.05 (X3Cd(m)), 28.96 (X3Cd(n)), 27.74 (tBuE1), 27.65 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.62 (tBuE1d+E1Cb), 26.69 (K2Cd(n)), 26.31 (X3Cg(m)), 26.22 (X3Cg(n)), 24.73 (X3Cb(m)), 24.60 (X3Cb(n)), 22.43 (K2Cg(n)) 22.25 (K2Cg(m)). (Фиг. 38)

По результатам LCMS 100% в положительном режиме. (Фиг. 39)

ESI-MS C₇₇H₁₀₁ClN₈O₁₄: m/z рассчитано для [М+Н⁺]⁺: 1397.72, найдено: 1397.65 (Фиг. 40)

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₇₇H₁₀₁ClN₈O₁₄ - [М+Н]⁺ 1397.7199, найдено: 1397.7210 (Фиг. 41)

Соединение 153

К раствору соединения 148 (1 экв.; 306 мг; 0,282 ммоль) в 10 мл DMF добавили TFA*NH₂(CH₂)₃NHFmoc (1.1 экв.; 127 мг; 0,31 ммоль), DIPEA (2,5 экв.; 123 мкл; 0,705 ммоль) в 10 мл DMF, а затем, HOBt (1 экв.; 38 мг; 0,282 ммоль), HBTU (1.5 экв.; 161 мг; 0,423 ммоль). Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и преупарили с DCM дважды. Далее остаток растворили в 30 мл DCM и провели экстракцию; 1) H₂O (2*30 мл), 2) brine (2*30 мл). Затем органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель. Остаток очищали с помощью метода колоночной хроматографии (Puriflash на колонке (15μ 40g)); элюент: DCM(100%)/MeOH(0%) => DCM(90%)/MeOH(10%) в течение 30 минут, после МеОН (100%) в течение 5 минут. Соединение 153 было получено в виде бледно-желтого аморфного вещества (356 мг, выход 92%).

¹h ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.34-8.25 (br.d., IH, F5NHmn), 8.21-8.12 (m, IH, F6NHmn), 7.96-7.84 (m, 3H, X3NHkmn+FmocHt), 7.67 (d, J=7.5 Hz, 2H, FmocHd), 7.60-7.51 (m, 1H, X7NH), 7.40 (t, J=7.5 Hz, 2H, FmocHk), 7.31 (t, J=7.5 Hz, 2H,), 7.37-7.08 (m, 18H, X8Hdn+FmocHe+X8Hdm+X8Hem+X8Hen+X7NHd+X8Hgmn+F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd), 6.33-6.21 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.51 (s, n) & 4.47 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.44-4.35 (m, 1H, F6Ha), 4.35-4.24 (m, 3H, F5Ha+FmocHa), 4.20 (t, J=6.9 Hz, 1H, FmocHb), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Hamn), 3.17 (t, J=7.3 Hz, n) & 3.13 (t, J=7.3 Hz, m) (2H, K2He, m+n), 3.11-2.85 (m, 9H, F6Hb(a)+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.59 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.73-1.60 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.83 (X4Cg(n)), 172.80 (X4Cg(m)), 172.26 (K2C(n)), 172.21 (K2C(m)+Х3С(n)), 172.08 (X3C(m)), 171.93 (E1C(m)), 171.90 (Е1С(n)), 171.58 (X4C(mn)), 171.46 (E1Cd), 171.13 (F5C), 170.68 (F6C), 157.15 (U), 156.12 (C(O)Fmoc), 143.95 (FmocCg), 140.78 (FmocCte), 138.40 (X8Cb(m)), 138.14 (F6Cg), 138.04 (F5Cg), 137.92 (X8Cb(n)), 129.05 (F6Cd+F5Cd), 128.68 (X8Cd(n)), 128.37 (X8Cd(m)), 128.17 (F6Ce), 128.07 (F5Ce), 127.64 (FmocCk), 127.44 (X8Cg(m)), 127.09 (FmocCt), 127.15 (X8Ce(n)), 126.88 (X8Ce(m)), 126.35 (X8Cg(n)), 126.29 (F6Ck), 126.25 (F5Ck), 125.18 (FmocCe), 120.14 (FmocCd), 80.60 (E1tBu), 80.41 (K2tBu(m)), 80.32 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 65.32 (FmocCa), 54.99 (F5Ca(n)), 54.94 (F5Ca(m)), 54.41 (F6Ca), 53.02 (K2Ca(n)), 52.88 (K2Ca(m)), 52.19 (E1Ca), 48.66 (Х8Са(n)), 47.36 (X8Ca(m)), 46.80 (FmocCb), 46.48 (K2Ce(m)), 45.15 (K2Ce(n)), 38.66 (X3Ce(m)), 38.60 (X3Ce(n)), 37.91 (X7Cg), 37.09 (F5Cb), 36.83 (F6Cb), 36.40 (X7Ca), 32.38 (Х3Са(n)), 32.02 (X3Ca(m)), 31.83 (K2Cb), 30.92 (E1Cg), 30.70 (X4Ca), 30.57 (X4Cb), 29.21 (X7Cb), 29.06 (X3Cd(m)), 28.96 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.65 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.63 (tBuE1d+E1Cb), 26.74 (K2Cd(n)), 26.35 (X3Cg(m)), 26.26 (X3Cg(n)), 24.79 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(n)), 22.48 (K2Cg(n)) 22.30 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 84% в положительном режиме, 90% в отрицательном режиме

ESI-MS C₇₇H₁₀₂N₈O₁₄: m/z рассчитано для [M+H⁺]⁺: 1363,76, найдено: 1363,75

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₇₇H₁₀₂N₈O₁₄ - [M+H]⁺ 1363.7588, найдено: 1363.7565

Соединение 154

К раствору соединения 60 (1 экв.; 300 мг; 0,253 ммоль) в 10 мл DMF добавили TFA*NH₂(CH₂)₃NHFmoc (1.1 экв.; 114 мг; 0,278 ммоль), DIPEA (2,5 экв.; 110 мкл; 0,632 ммоль) в 10 мл DMF, а затем, HOBt (1 экв.; 34 мг; 0,253 ммоль), HBTU (1.5 экв.; 150 мг; 0,38 ммоль). Смесь перемешивали 12 часов в инертной атмосфере. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и преупарили с DCM дважды. Далее остаток растворили в 30 мл DCM и провели экстракцию; 1) H₂O (2*30 мл), 2) brine (2*30 мл). Затем органическую фракцию сушили над Na₂SO₄. После удалили растворитель. Остаток очищали с помощью метода колоночной хроматографии (Puriflash на колонке (15μ 40g)); элюент: DCM(100%)/MeOH(0%) => DCM(90%)/MeOH(10%) в течение 30 минут, после МеОН (100%) в течение 5 минут. Соединение 154 было получено в виде бледно-желтого аморфного вещества (331 мг, выход 89%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.33-8.25 (br.d., 1H, F5NHmn), 8.21-8.12 (m, 1H, F6NHmn), 7.97-7.80 (m, 3H, X3NHkmn+FmocHt+X8Hdn+X8Hdm), 7.67 (d, J=7.5 Hz, 2H, FmocHd), 7.59-7.51 (m, 1H, X7NHmn), 7.40 (t, J=7.5 Hz, 2H, FmocHk), 7.31 (t, J=7.5 Hz, 2H, FmocHe), 7.29-7.08 (m, 13H, F6He+F6Hd+F5He+X7NHd+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.35-6.20 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.65-4.47 (m, 2H, Х8На(mn)), 4.44-4.35 (m, 1H, F6Ha), 4.35-4.24 (m, 3Н, F5Ha+FmocHa), 4.20 (t, J=6.9 Hz, 1H, FmocHb), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Hamn), 3.17 (t, J=7.3 Hz, n) & 3.14 (t, J=7.3 Hz, m) (2H, K2He, m+n), 3.11-2.85 (m, 9H, F6Hb(a)+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.59 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.52 (s, 9H, tBu), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.83 (X4Cg(n)), 172.79 (X4Cg(m)), 172.24 (K2C(n)), 172.19 (K2C(m)), 172.15 (X3C(n)), 172.07 (X3C(m)), 171.92 (E1C), 171.58 (Х4С(mn)), 171.45 (E1Cd), 171.12 (F5C), 170.67 (F6C), 164.82 (X8Ck(m)), 164.74 (X8Ck(n)), 157.16 (U(m)), 157.14 (U(n)), 156.12 (C(O)Fmoc), 143.95 (FmocCg), 143.75 (X8Cb(m)), 143.27 (X8Cb(n)), 140.77 (FmocCte), 138.13 (F6Cg), 138.03 (F5Cg), 130.28 (Х8Се(n)), 130.00 (X8Ce(m)), 129.48 (X8Cd(n)), 129.18 (X8Cd(m)), 129.04 (F6Cd+F5Cd), 128.16 (F6Ce), 128.06 (F5Ce), 127.63 (FmocCk), 127.44 (X8Cg(m)), 127.09 (FmocCt), 126.49 (X8Cg(n)), 126.28 (F5Ck), 126.25 (F6Ck), 125.17 (FmocCe), 120.14 (FmocCd), 80.66 (X8tBu(n)), 80.56 (E1tBu+X8tBu(m)), 80.41 (K2tBu(m)), 80.33 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 65.32 (FmocCa), 54.93 (F5Ca(mn)), 54.40 (F6Ca), 52.98 (K2Ca(n)), 52.83 (K2Ca(m)), 52.20 (E1Ca), 50.08 (Х8Са(n)), 47.42 (X8Ca(m)), 46.80 (FmocCb+K2Ce(m)), 45.32 (K2Ce(n)), 38.65 (X3Ce(m)), 38.59 (Х3Се(n)), 37.90 (X7Cg), 37.09 (F5Cb), 36.82 (F6Cb), 36.39 (X7Ca), 32.38 (X3Ca(n)), 32.00 (X3Ca(m)), 31.81 (K2Cb), 30.93 (E1Cg), 30.68 (X4Ca), 30.57 (X4Cb), 29.20 (X7Cb), 29.04 (X3Cd(m)), 28.99 (X3Cd(n)), 27.80 (tBuX8), 27.74 (tBuE1), 27.64 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.62 (tBuE1d+E1Cb), 26.71 (K2Cd(n)), 26.34 (X3Cg(m)), 26.26 (X3Cg(n)), 24.74 (X3Cb(m)), 24.59 (X3Cb(n)), 22.46 (K2Cg(n)) 22.25 (K2Cg(m)).

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₈₂H₁₁₀N₈O₁₆ - [M+H]⁺ 1463,8113, найдено: 1463,8122

Соединение 155

Соединение 150 (1 экв.; 252 мг; 0,198 ммоль) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. of Et₂NH, 10 мл DMF). и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 155 было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества (194 мг, выход 84%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.35 (d, J=7.4 Hz, 1H, F5NH), 8.19 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NH), 7.95 (t, J=5.4 Hz, 1H, X3NHk), 7.74 (t, J=5.5 Hz, 1H, K2NHk), 7.72-7.60 (m, 4H, X7NH+X7NH3+d), 7.33-7.12 (m, 10H, Ph+Ph), 6.36-6.21 (m, 2H, K2NH+E1NH), 4.42-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.25 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.89 (m, 1H, K2Ha), 3.22-3.11 (m, 1H, X7Hg(a)), 3.11-2.81 (m, 8H, F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He+K2He+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.78-2.61 (m, 3H, X7Ha+F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 6H, X4Hb+X4Ha(a)+E1Hg+X4Ha(b), 2.01 (t, J=7.3 Hz, 2H, Х3На), 1.92-1.79 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.61 (m, 4H, E1Hb(b)+X7Hb+K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, K2Hb(b)+X3Hb+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

173.05 (X4Cg), 172.34 (K2C), 171.98 (Х3С), 171.96 (Е1С), 171.71 (Х4С), 171.51 (E1Cd), 171.32 (F5C), 171.24 (F6C), 159.09 (C(O)TFA), 158.73 (C(O)TFA), 158.37 (C(O)TFA), 158.01 (C(O)TFA), 157.24 (U), 138.11 (F6Cg), 138.05 (F5Cg), 129.07 (F6Cd+F5Cd), 128.27 (F6Ce), 128.14 (F5Ce), 126.41 (F6Ck), 126.32 (F5Ck), 117.18 (CF₃), 114.30 (CF₃), 80.65 (E1tBu), 80.34 (K2tBu), 79.80 (E1dtBu), 55.20 (F5Ca), 54.57 (F6Ca), 53.13 (K2Ca), 52.23 (E1Ca), 38.64 (Х3Се), 38.30 (K2Ce), 36.94 (F5Cb), 36.83 (F6Cb), 36.72 (X7Cg), 35.81 (Х7Са), 35.45 (Х3Са), 31.83 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.73 (X4Ca), 30.59 (X4Cb), 28.93 (X3Cd), 28.91 (K2Cd), 27.77 (tBuE1), 27.68 (tBuK2+tBuE1d+E1Cb), 27.23 (X7Cb), 26.28 (X3Cg), 25.14 (X3Cb), 22.61 (K2Cg).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₅₅H₈₆N₈O₁₂: m/z рассчитано для [M+H⁺]⁺: 1051.64, найдено: 1051.60

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₅H₈₆N₈O₁₂ - [М+Н]⁺ 1051.6438, найдено: 1051.6437

Соединение 156

Соединение 151 (1 экв.; 322 мг; 0,223 ммоль) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. of Et₂NH, 10 мл DMF) и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 156 было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества (272 мг, выход 91%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.35 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NHmn), 8.24-8.12 (br.d, 1H, F6NHmn), 7.95 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.92 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.76-7.60 (m, 4H, X7NHd+X7NH), 7.55 (d, J=8.2 Hz, n) & 7.49 (d, J=8.2 Hz, m) (2H, X8Hd, m+n), 7.32-7.09 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.37-6.21 (m, 2H, K2NHm+K2NHn+E1NHm+E1NHn), 4.51 (s, n) & 4.44 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.42-4.33 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.25 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.25-3.11 (m, 3H, K2Hemn+X7Hg(a)), 3.11-2.85 (m, 6H, F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.78-2.61 (m, 3H, X7Ha+F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.73-1.61 (m, 3H, X7Hb+E1Hb(b)), 1.61-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.35 (m, 27H, tBu).

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

173.02 (X4Cg(n)), 172.99 (X4Cg(m)), 172.27 (K2C(n)), 172.23 (K2C(m)), 172.12 (Х3С(n)), 172.05 (X3C(m)), 171.95 (E1C), 171.67 (X4C(mn)), 171.48 (E1Cd), 171.29 (F5C), 171.19 (F6C), 158.68 (C(O)TFA), 158.33 (C(O)TFA), 157.21 (U(m)), 157.19 (U(n)), 138.09 (F5Cg(mn)), 138.02 (X8Cb(m)+F6Cg(mn)), 137.63 (X8Cb(n)), 131.58 (X8Cd(n)), 131.26 (X8Cd(m)), 129.73 (X8Cg(m)), 129.05 (F6Cd+F5Cd), 128.66 (X8Cg(n)), 128.24 (F6Ce), 128.11 (F5Ce), 126.38 (F5Ck), 126.30 (F6Ck), 120.19 (X8Ce(n)), 119.97 (X8Ce(m)), 117.59 (CF₃), 114.67 (CF3), 80.59 (E1tBu), 80.41 (K2tBu(m)), 80.33 (K2tBu(n)), 79.78 (E1dtBu), 55.14 (F5Ca), 54.56 (F6Ca), 53.03 (K2Ca(n)), 52.89 (K2Ca(m)), 52.23 (E1Ca), 49.59 (Х8Са(n)), 47.00 (X8Ca(m)), 46.70 (K2Ce(m)), 45.17 (K2Ce(n)), 38.68 (X3Ce(m)), 38.63 (X3Ce(n)), 36.93 (F5Cb), 36.80 (F6Cb), 36.69 (X7Cg), 35.79 (X7Ca), 32.37 (X3Ca(n)), 32.01 (X3Ca(m)), 31.80 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.70 (X4Ca), 30.57 (X4Cb), 29.07 (X3Cd(m)), 29.00 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.66 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.64 (tBuE1d+E1Cb), 27.20 (X7Cb), 26.72 (K2Cd(n)), 26.35 (X3Cg(m)), 26.27 (X3Cg(n)), 24.75 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(n)), 22.48 (K2Cg(n)) 22.29 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₆₂H₉₁BrN₈O₁₂: m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 610.30, найдено: 611.1

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₂H₉₁BrN₈O₁₂ - [M+H]⁺ 1221,5997, найдено: 1221,6024

Соединение 157

Соединение 152 (1 экв.; 200 мг; 0,143 ммоль) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. of Et₂NH, 10 мл DMF). и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 157 было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества (160 мг, выход 87%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.37 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NHmn), 8.23-8.15 (br.d, 1H, F6NHmn), 8.00 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.97 (t, J=5.4 Hz, n)) (1H, X3NHk, m+n), 7.82 (br.s, 3H, X7NHd), 7.77-7.69 (m, 1H, X7NH), 7.42-7.09 (m, 14H, X8Hdn+X8Hen+X8Hdm+X8Hem+F6He+F6Hd+X8Htmn+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.39-6.23 (m, 2H, K2NHm+K2NHn+E1NHm+E1NHn), 4.55 (s, n) & 4.47 (s, m) (2Н, X8Ha, m+n), 4.43-4.33 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.26-3.11 (m, 3H, K2Hemn+X7Hg(a)), 3.11-2.85 (m, 6H, F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.78-2.61 (m, 3H, X7Ha+F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.73-1.61 (m, 3H, X7Hb+E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu). (Фиг. 42)

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.91 (X4Cg(n)), 172.88 (X4Cg(m)), 172.24 (K2C(n)), 172.20 (K2C(m)), 172.15 (X3C(n)), 172.13 (X3C(m)), 171.92 (E1C), 171.61 (Х4С(mn)), 171.46 (E1Cd), 171.23 (F5C), 171.09 (F6C), 157.18 (U(m)), 157.16 (U(n)), 141.18 (X8Cb(m)), 140.78 (X8Cb(n)), 138.08 (F6Cg), 138.02 (F5Cg), 133.41 (X8Ck(n)), 133.07 (X8Ck(m)), 130.61 (X8Cd(n)), 130.25 (X8Cd(m)), 129.05 (F6Cd+F5Cd), 128.20 (F6Ce), 128.07 (F5Ce), 127.20 (X8Ct(m)), 127.15 (X8Ce(n)), 126.86 (X8Ce(m)), 126.34 (F6Ck), 126.31 (X8Ct(n)), 126.25 (F5Ck), 126.06 (X8Cg(m)), 124.97 (X8Cg(n)), 80.55 (E1tBu), 80.38 (K2tBu(m)), 80.30 (K2tBu(n)), 79.77 (E1dtBu), 55.10 (F5Ca), 54.53 (F6Ca), 53.01 (K2Ca(n)), 52.88 (K2Ca(m)), 52.19 (E1Ca), 49.62 (Х8Са(n)), 47.10 (X8Ca(m)), 46.81 (K2Ce(m)), 45.22 (K2Ce(n)), 38.64 (X3Ce(m)), 38.58 (X3Ce(n)), 36.92 (F5Cb), 36.79 (F6Cb), 36.58 (X7Cg), 35.81 (X7Ca), 32.33 (X3Ca(n)), 31.95 (X3Ca(m)), 31.79 (K2Cb), 30.92 (E1Cg), 30.66 (X4Ca), 30.57 (X4Cb), 29.05 (X3Cd(m)), 28.97 (X3Cd(n)), 27.75 (tBuE1), 27.66 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.63 (tBuE1d), 27.57 (E1Cb), 27.09 (X7Cb), 26.70 (K2Cd(n)), 26.32 (X3Cg(m)), 26.23 (X3Cg(n)), 24.74 (X3Cb(m)), 24.60 (X3Cb(n)), 22.45 (K2Cg(n)) 22.26 (K2Cg(m)). (Фиг. 43)

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме (Фиг. 44)

ESI-MS C₆₂H₉₁ClN₈O₁₂: m/z рассчитано для [М+Н⁺]⁺: 1175.65, найдено: 1175.6 (Фиг. 45)

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₂H₉₁ClN₈O₁₂ - [М+Н]⁺ 1175,6518, найдено: 1175.6520 (Фиг. 46)

Соединение 158

Соединение 153 (1 экв.; 350 мг; 0,257 ммоль) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. of Et₂NH, 12 мл DMF) и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 158 было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества (308 мг, выход 96%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.37 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NHmn), 8.24-8.16 (m, 1H, F6NHmn), 7.97 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.94 (t, J=5.4 Hz, n)) (1H, X3NHk, m+n), 7.76-7.62 (m, 4H, X7NHd+X7NH), 7.38-7.11 (m, 15H, X8Hdn+X8Hdm+X8Hem+X8Hen X8Hgmn+F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd), 6.37-6.20 (m, 2H, K2NHm+K2NHn+E1NHm+E1NHn), 4.52 (s, n) & 4.48 (s, m) (2Н, X8Ha, m+n), 4.42-4.33 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.24-3.11 (m, 3H, K2Hemn+X7Hg(a)), 3.11-2.85 (m, 6H, F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.78-2.61 (m, 3H, X7Ha+F5Hb(b)), 2.40-2.12 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.78 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.73-1.58 (m, 3H, X7Hb+E1Hb(b)), 1.58-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

173.14 (X4Cg(n)), 173.11 (X4Cg(m)), 172.33 (K2C(n)), 172.20 (K2C(m)+X3C(n)), 172.21 (X3C(m)), 172.03 (E1C(n)), 172.00 (E1C(m)), 171.76 (X4C(mn)), 171.54 (E1Cd), 171.36 (F5C), 171.27 (F6C), 158.77 (C(O)TFA), 158.41 (C(O)TFA), 157.28 (U(n)), 157.26 (V(m)), 138.45 (X8Cb(m)), 138.13 (F6Cg), 138.05 (F5Cg), 137.98 (X8Cb(n)), 129.09 (F6Cd+F5Cd), 128.76 (X8Cd(n)), 128.45 (X8Cd(m)), 128.29 (F6Ce), 128.17 (F5Ce), 127.49 (X8Cg(m)), 127.23 (Х8Се(n)), 126.96 (X8Ce(m)), 126.42 (X8Cg(n)+F6Ck), 126.36 (F5Ck), 117.56 (CF₃), 114.64 (CF3), 80.66 (E1tBu), 80.47 (K2tBu(m)), 80.39 (K2tBu(n)), 79.84 (E1dtBu), 55.23 (F5Ca), 54.63 (F6Ca), 53.10 (K2Ca(n)), 52.97 (K2Ca(m)), 52.27 (E1Ca), 50.20 (X8Ca(n)), 47.45 (X8Ca(m)), 46.58 (K2Ce(m)), 45.24 (K2Ce(n)), 38.74 (Х3Се(m)), 38.69 (Х3Се(n)), 36.95 (F5Cb), 36.83 (F6Cb), 36.74 (X7Cg), 35.84 (X7Ca), 32.45 (X3Ca(n)), 32.10 (Х3Са(m)), 31.85 (K2Cb), 30.98 (E1Cg), 30.75 (X4Ca), 30.62 (X4Cb), 29.11 (X3Cd(m)), 29.02 (X3Cd(n)), 27.80 (tBuE1), 27.71 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.69 (tBuE1d), 27.24 (E1Cb), 27.09 (X7Cb), 26.79 (K2Cd(n)), 26.41 (X3Cg(m)), 26.32 (X3Cg(n)), 24.85 (X3Cb(m)), 24.69 (X3Cb(n)), 22.55 (K2Cg(n)) 22.36 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS (m/z) C₆₂H₉₂N₈O₁₂: рассчитано для [M+H⁺]⁺: 1141.69, найдено: 1141.7

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₂H₉₂N₈O₁₂- [M+H]⁺ 1141.6907, найдено: 1141.6904

Соединение 159

Соединение 33 (1 экв.; 330 мг; 0,225 ммоль) растворили в системе Et₂NH/DMF (25 экв. of Et₂NH, 10 мл DMF) и перемешивали 30 минут в инертной атмосфере, после удалили растворитель при пониженном давлении и переупарили с DCM трижды. Остаток очищали методом обращенно-фазовой колоночной хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0025 (15μ 40g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (80%)/MeCN(20%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 154 было получено как соль *TFA в виде белого аморфного вещества (261 мг, выход 86%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.37 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NHmn), 8.25-8.15 (m, 1H, F6NHmn), 7.97 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.94 (t, J=5.4 Hz, n)) (1H, X3NHk, m+n), 7.91-7.80 (m, 2H, X8Hdn+X8Hdm), 7.76-7.60 (m, 4H, X7NHd+X7NH), 7.35-7.08 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.38-6.20 (m, 2H, K2NHm+K2NHn+E1NHm+E1NHn), 4.61 (s, n) & 4.54 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.43-4.33 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.88 (m, 2H, E1Ha+K2Ham+K2Han), 3.27-2.86 (m, 9H, K2Hemn+X7Hg(a)+F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.78-2.59 (m, 3H, X7Ha+F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.78 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.71-1.58 (m, 3H, X7Hb+E1Hb(b)), 1.58-1.54 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.53 (s, 9H, tBu), 1.54-1.10 (m, 11H, X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

173.07 (X4Cg(n)), 173.03 (X4Cg(m)), 172.29 (K2C(n)), 172.24 (K2C(m)), 172.21 (X3C(n)), 172.14 (X3C(m)), 171.97 (E1C(mn)), 171.70 (X4C(mn)), 171.50 (E1Cd), 171.32 (F5C), 171.22 (F6C), 164.87 (X8Ck(m)), 164.79 (X8Ck(n)), 158.68 (C(O)TFA), 158.33 (C(O)TFA), 157.24 (U(m)), 157.21 (U(n)), 143.79 (X8Cb(m)), 143.33 (X8Cb(n)), 138.10 (F6Cg), 138.03 (F5Cg), 130.32 (X8Ce(n)), 130.04 (X8Ce(m)), 129.52 (X8Cd(n)), 129.22 (X8Cd(m)), 129.06 (F6Cd+F5Cd), 128.26 (F6Ce), 128.14 (F5Ce), 127.48 (X8Cg(m)), 126.53 (X8Cg(n)), 126.40 (F6Ck), 126.32 (F5Ck), 117.48 (CF₃), 80.72 (X8tBu(n)), 80.59 (X8tBu(m)), 80.61 (E1tBu), 80.44 (K2tBu(m)), 80.36 (K2tBu(n)), 79.81 (E1dtBu), 55.19 (F5Ca), 54.58 (F6Ca), 53.03 (K2Ca(n)), 52.88 (K2Ca(m)), 52.24 (E1Ca), 50.12 (X8Ca(n)), 47.49 (X8Ca(m)), 46.87 (K2Ce(m)), 45.38 (K2Ce(n)), 38.70 (X3Ce(m)), 38.64 (X3Ce(n)), 36.95 (F5Cb), 36.80 (F6Cb), 36.71 (X7Cg), 35.81 (X7Ca), 32.42 (X3Ca(n)), 32.03 (X3Ca(m)), 31.80 (K2Cb), 30.96 (E1Cg), 30.72 (X4Ca), 30.58 (X4Cb), 29.08 (X3Cd(m)), 29.03 (X3Cd(n)), 27.83 (tBuX8), 27.77 (tBuE1), 27.67 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.65 (tBuE1d+E1Cb), 27.22 (X7Cb), 26.74 (K2Cd(n)), 26.38 (X3Cg(m)), 26.29 (X3Cg(n)), 24.78 (X3Cb(m)), 24.63 (X3Cb(n)), 22.50 (K2Cg(n)) 22.29 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS (m/z) C₆₇H₁₀₀N₈O₁₄: рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 621.38, найдено: 621.75

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₂H₉₂N₈O₁₂ - [М+Н]⁺ 1241,7432, найдено: 1241,7437

Соединение 160

К раствору DOTA(tBu)₃-COOH (1 экв; 33 мг; 57.49 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили DIPEA (3 экв; 30 мкл; 172.5 мкмоль), HOBt (1 экв; 7.8 мг; 57.49 мкмоль), HBTU (1.6 экв; 35 мг; 92 мкмоль), после смесь перемешивалась в течение 30 минут, затем добавили соединение 155 (1 экв; 67 мг; 57.49 мкмоль) и реакционная смесь перемешивалась 12 часов. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и остаток растворили в DCM (15 мл), и провели экстракцию: 1) H₂O (1*15 мл), 2) NaHCO₃ (2*15 мл). 2) brine (1*15 мл). Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄, после удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт высадили Р.Е. (3 мл). Соединение 160 было получено в виде бело-желтого порошка (91 мг, выход 99%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.34 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NH), 8.17 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NH), 8.08 (t, J=5.4 Hz, 1H, X7NHd), 7.95 (t, J=5.4 Hz, 1H, X3NHk), 7.74 (t, J=5.5 Hz, 1H, K2NHk), 7.57 (t, J=5.4 Hz, 1H, X7NH), 7.32-7.11 (m, 10H, Ph+Ph), 6.35-6.20 (m, 2H, K2NH+E1NH), 4.44-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.98 (m, 1H, E1Ha), 3.98-3.90 (m, 1H, K2Ha), 3.80-1.60 (br.m, 24H, DOTA), 3.22-2.81 (m, 11H, X7Hg(a)+F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He+K2He+X7Ha+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 6H, X4Hb+X4Ha(a)+E1Hg+X4Ha(b), 2.01 (t, J=7.3 Hz, 2H, X3Ha), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.55-1.12 (m, 13H, X7Hb+K2Hb(b)+X3Hb+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg), 1.43 (s, 9H, 22), 1.41 (s, 18H, 18+26), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.97 (X4Cg), 172.64 (1), 172.33 (K2C), 172.27 (16+24), 171.97 (X3C+E1C), 171.67 (X4C), 171.52 (E1Cd), 171.44 (20), 171.16 (F5C), 170.74 (F6C), 157.22 (U), 138.15 (F6Cg), 138.07 (F5Cg), 129.05 (F6Cd+F5Cd), 128.24 (F6Ce), 128.14 (F5Ce), 126.38 (F6Ck), 126.33 (F5Ck), 81.17 (21), 81.04 (17+25), 80.70 (E1tBu), 80.39 (K2tBu), 79.85 (E1dtBu), 55.90 (2), 55.40 (19), 55.28 (15+23), 55.14 (F5Ca), 54.41 (F6Ca), 53.11 (K2Ca), 52.22 (E1Ca), 39.50 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 38.64 (Х3Се), 38.32 (K2Ce), 37.09 (F5Cb), 36.81 (F6Cb), 36.63 (X7Cg), 36.38 (X7Ca), 35.45 (X3Ca), 31.83 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.76 (X4Ca), 30.60 (X4Cb), 28.96 (X7Cb), 28.93 (X3Cd), 28.88 (K2Cd), 27.79 (tBuE1), 27.70 (22), 27.65 (18+26+tBuK2), 27.63 (tBuE1d+E1Cb), 26.27 (X3Cg), 25.13 (X3Cb), 22.59 (K2Cg).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₈₃H₁₃₆N₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 803.5 найдено: 804.1

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₃₃H₁₃₆N₁₂O₁₉ - [M+Na]⁺ 1627.9937, найдено: 1627.9967.

Соединение 161

К раствору DOTA(tBu)₃-COOH (1 экв; 37 мг; 63.7 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили DIPEA (3 экв; 33 мкл; 191 мкмоль), HOBt (1 экв; 8.6 мг; 63.7 мкмоль), HBTU (1.6 экв; 39 мг; 102 мкмоль), после смесь перемешивалась в течение 30 минут, затем добавили соединение 156 (1 экв; 85 мг; 63.7 мкмоль) и реакционная смесь перемешивалась 12 часов. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и остаток растворили в DCM (15 мл), и провели экстракцию: 1) H₂O (1*15 мл), 2) NaHCO₃ (2*15 мл). 2) brine (1*15 мл). Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄, после удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт высадили Р.Е. (3 мл). Соединение 161 было получено в виде бело-желтого порошка (112 мг, выход 99%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.34 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NH), 8.17 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NHmn), 8.11-8.03 (m, 1H, X7NHd) 7.96 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.93 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.60-7.44 (m, 3H, X7NH+X8Hd(n)+X8Hd(m)), 7.32-7.09 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.35-6.20 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.50 (s, n) & 4.43 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.42-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.80-1.60 (br.m, 24H, DOTA), 3.25-3.10 (m, 4H, K2Hemn+X7Hg), 3.11-2.85 (m, 7H, F6Hb(a)+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.42 (s, 9H, 22), 1.40 (s, 18H, 18+26), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.98 (X4Cg(n)), 172.96 (X4Cg(m)), 172.63 (1), 172.27 (K2C(n)), 172.24 (16+24), 172.23 (K2C(m)), 172.13 (X3C(n)), 172.06 (X3C(m)), 171.95 (E1C), 171.65 (X4C(mn)), 171.49 (E1Cd), 171.42 (20), 171.14 (F5C), 170.71 (F6C), 157.20 (U(m)), 157.19 (U(n)), 138.15 (F5Cg(mn)), 138.06 (F6Cg(mn)), 138.01 (X8Cb(m)), 137.52 (X8Cb(n)), 131.59 (X8Cd(n)), 131.27 (X8Cd(m)), 129.74 (X8Cg(m)), 129.04 (F6Cd+F5Cd), 128.68 (X8Cg(n)), 128.22 (F6Ce), 128.12 (F5Ce), 126.34 (F5Ck), 126.32 (F6Ck), 120.19 (X8Ce(n)), 119.97 (X8Ce(m)), 81.14 (21), 81.02 (17+25), 80.64 (E1tBu), 80.47 (K2tBu(m)), 80.38 (K2tBu(n)), 79.83 (E1dtBu), 55.89 (2), 55.39 (19), 55.28 (15+23), 55.14 (F5Ca), 54.41 (F6Ca), 53.02 (K2Ca(n)), 52.87 (K2Ca(m)), 52.21 (E1Ca), 49.64 (X8Ca(n)), 47.00 (X8Ca(m)), 46.70 (K2Ce(m)), 45.19 (K2Ce(n)), 39.50 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 38.68 (X3Ce(m)), 38.64 (X3Ce(n)), 37.11 (F5Cb), 36.78 (F6Cb), 36.61 (X7Cg), 36.37 (X7Ca), 32.37 (X3Ca(n)), 32.01 (X3Ca(m)), 31.84 (K2Cb), 30.94 (E1Cg), 30.74 (X4Ca), 30.59 (X4Cb), 29.08 (X3Cd(m)), 29.00 (X3Cd(n)), 28.96 (X7Cb), 27.76 (tBuE1), 27.68 (22), 27.64 (18+26+tBuK2+K2Cd(m)), 27.62 (tBuE1d+(E1Cb), 26.72 (K2Cd(n)), 26.37 (X3Cg(m)), 26.27 (X3Cg(n)), 24.75 (X3Cb(m)), 24.62 (X3Cb(n)), 22.48 (K2Cg(n)) 22.27 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме.

ESI-MS C₉₀H₁₄₁BrN₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+CH₃CN+2H⁺]²⁺: 907.98, найдено: 907,45

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₉₀H₁₄₁BrN₁₂O₁₉ - [M+Na]⁺ 1797.9498, найдено: 1797.9537.

Соединение 162

К раствору DOTA(tBu)₃-COOH (1 экв; 41 мг; 72 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили DIPEA (3 экв; 38 мкл; 216 мкмоль), HOBt (1 экв; 10 мг; 72 мкмоль), HBTU (1.6 экв; 44 мг; 115 мкмоль), после смесь перемешивалась в течение 30 минут, затем добавили соединение 157 (1 экв; 93 мг; 72 мкмоль) и реакционная смесь перемешивалась 12 часов. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и остаток растворили в DCM (15 мл), и провели экстракцию: 1) H₂O (1*15 мл), 2) NaHCO₃ (2*15 мл). 2) brine (1*15 мл). Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄, после удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт высадили Р.Е. (3 мл). Соединение 162 было получено в виде бело-желтого порошка (123 мг, выход 99%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.33 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NH), 8.16 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NHmn), 8.07 (t, J=5.5 Hz, X7NHd) 7.95 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.92 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.61-7.51 (m, 1H, X7NH), 7.42-7.09 (m, 14H, X8Hdn+X8Hen+X8Hdm+X8Hem+F6He+F6Hd+X8Htmn+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.35-6.21 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.55 (s, n) & 4.47 (s, m) (2Н, X8Ha, m+n), 4.44-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.34-4.24 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.67-3.56 (m, 2H, 2), 3.80-1.60 (br.m, 22H, DOTA), 3.25-3.10 (m, 4H, K2Hemn+X7Hg), 3.11-2.85 (m, 7H, F6Hb(a)+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.43 (s, 9H, 22), 1.41 (s, 18H, 18+26), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu). (Фиг. 47)

¹³С ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

173.00 (X4Cg(n)), 172.96 (X4Cg(m)), 172.23 (K2C(n)), 172.19 (K2C(m)), 172.10 (X3C(nm)), 171.91 (E1C), 171.61 (X4C(mn)), 171.44 (E1Cd), 171.11 (F5C), 170.72 (F6C), 169.65 (уш. пик, 16+24), 165.98 (уш. пик, 20), 164.88 (уш. пик, 1), 158.89 (C(O)TFA), 158.53 (C(O)TFA), 158.17 (C(O)TFA), 157.81 (C(O)TFA),157.15 (U(m)), 157.13 (U(n)), 141.17 (X8Cb(m)), 140.76 (X8Cb(n)), 138.14 (F6Cg), 138.04 (F5Cg), 133.42 (X8Ck(n)), 133.07 (X8Ck(m)), 130.58 (X8Cd(n)), 130.22 (X8Cd(m)), 128.98 (F6Cd+F5Cd), 128.16 (F6Ce), 128.08 (F5Ce), 127.18 (X8Ct(m)), 127.14 (X8Ce(n)), 126.85 (X8Ce(m)), 126.28 (F6Ck+X8Ct(n)), 126.26 (F5Ck), 126.05 (X8Cg(m)), 124.96 (X8Cg(n)), 120.08 (CF₃), 117.18 (CF3), 114.27 (CF₃), 111.37 (CF3), 83.44 (21), 81.27 (17+21), 80.55 (E1tBu), 80.38 (K2tBu(m)), 80.30 (K2tBu(n)), 79.75 (E1dtBu), 55.16 (F5Ca), 54.58 (уш. пик, 2), 54.38 (F6Ca+19), 53.29 (уш. пик, 15+23), 53.01 (K2Ca(n)), 52.87 (K2Ca(m)), 52.19 (E1Ca), 50.79 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 49.60 (X8Ca(n)), 48.30 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 47.83 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 47.10 (X8Ca(m)), 46.80 (K2Ce(m)), 45.21 (K2Ce(n)), 38.65 (X3Ce(m)), 38.58 (X3Ce(n)), 37.02 (F5Cb), 36.71 (F6Cb+X7Cg), 36.52 (X7Ca), 32.31 (X3Ca(n)), 31.93 (X3Ca(m)), 31.79 (K2Cb), 30.91 (E1Cg), 30.71 (X4Ca), 30.54 (X4Cb), 29.05 (X3Cd(m)), 28.96 (X3Cd(n)), 28.68 (X7Cb), 27.72 (tBuE 1+18+22+26), 27.63 (tBuK2+K2Cd(m)), 27.61 (tBuE1d), 27.57 (E1Cb), 26.69 (K2Cd(n)), 26.31 (X3Cg(m)), 26.22 (X3Cg(n)), 24.72 (X3Cb(m)), 24.57 (X3Cb(n)), 22.44 (K2Cg(n)) 22.25 (K2Cg(m)). (Фиг. 48)

По результатам LCMS 100% в положительном режиме. (Фиг. 49)

ESI-MS C₉₀H₁₄₁ClN₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 865.5, найдено: 866.2 (Фиг. 50)

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₉₀H₁₄₁ClN₁₂O₁₉ - [M+H]⁺ 1730,0197, найдено: 1730,0195. (Фиг. 51)

Соединение 163

К раствору DOTA(tBu)₃-COOH (1 экв; 30 мг; 52.38 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили DIPEA (3 экв; 27 мкл; 157.14 мкмоль), HOBt (1 экв; 7 мг; 52.38 мкмоль), HBTU (1.6 экв; 32 мг; 83.81 мкмоль), после смесь перемешивалась в течение 10 минут, затем добавили соединение 158 (1 экв; 65.8 мг; 52.38 мкмоль) и реакционная смесь перемешивалась 12 часов. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и остаток растворили в DCM (15 мл), и провели экстракцию: 1) H₂O (1*15 мл), 2) NaHCO₃ (2*15 мл). 2) brine (1*15 мл). Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄, после удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт высадили Р.Е. (3 мл). Соединение 163 было получено в виде бело-желтого порошка (87 мг, выход 99%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.32 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NH), 8.16 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NHmn), 8.07 (t, J=5.5 Hz, X7NHd), 7.96 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.93 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.61-7.51 (m, 1H, X7NH), 7.38-7.10 (m, 15H, X8Hdn+X8Hdm+X8Hem+X8Hen X8Hgmn+F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd), 6.33-6.22 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.52 (s, n) & 4.48 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.44-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.33-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.80-1.60 (br.m, 24H, DOTA), 3.25-3.10 (m, 4H, K2Hemn+X7Hg), 3.10-2.85 (m, 7H, F6Hb(a)+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.72-1.62 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.62-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.43 (s, 9H, 22), 1.41 (s, 18H, 18+26), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.94 (X4Cg(m)), 172.90 (X4Cg(n)), 172.60 (1), 172.24 (K2C(n)+(X3C(n)), 172.22 (16+24), 172.22 (K2C(m)+(X3C(m)), 171.92 (E1C(m)), 171.90 (E1C(n)), 171.61 (X4C(mn)), 171.46 (E1Cd), 171.39 (20), 171.10 (F5C), 170.66 (F6C), 157.17 (U(m)), 157.15 (U(n)), 138.40 (X8Cb(m)), 138.14 (F6Cg), 138.06 (F5Cg), 137.93 (X8Cb(n)), 129.02 (F6Cd+F5Cd), 128.70 (X8Cd(n)), 128.38 (X8Cd(m)), 128.19 (F6Ce), 128.09 (F5Ce), 127.44 (X8Cg(m)), 127.17 (Х8Се(n)), 126.90 (X8Ce(m)), 126.35 (X8Cg(n)), 126.32 (F6Ck), 126.29 (F5Ck), 81.11 (21), 80.99 (17+25), 80.60 (E1tBu), 80.41 (K2tBu(m)), 80.33 (K2tBu(n)), 79.79 (E1dtBu), 55.86 (2), 55.37 (19), 55.26 (15+23), 55.13 (F5Ca), 54.38 (F6Ca), 53.02 (K2Ca(n)), 52.88 (K2Ca(m)), 52.19 (E1Ca), 50.19 (X8Ca(n)), 47.37 (X8Ca(m)), 46.48 (K2Ce(m)), 45.23 (K2Ce(n)), 39.50 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 38.67 (X3Ce(m)), 38.61 (X3Ce(n)), 37.09 (F5Cb), 36.76 (F6Cb), 36.57 (X7Cg), 36.34 (X7Ca), 32.38 (X3Ca(n)), 32.02 (X3Ca(m)), 31.82 (K2Cb), 30.92 (E1Cg), 30.71 (X4Ca), 30.56 (X4Cb), 29.07 (X3Cd(m)), 28.95 (X3Cd(n)+X7Cb), 27.77 (tBuE1), 27.66 (22), 27.62 (18+26+tBuK2+K2Cd(m)+tBuE1d+(E1Cb), 26.73 (K2Cd(n)), 26.36 (X3Cg(m)), 26.25 (X3Cg(n)), 24.79 (X3Cb(m)), 24.61 (X3Cb(n)), 22.48 (K2Cg(n)) 22.30 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 92% в положительном режиме.

ESI-MS C₉₀H₁₄₂N₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+CH₃CN+2H⁺]²⁺: 867.95, найдено: 867.95

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₉₀H₁₄₂N₁₂O₁₉ - [M+H]⁺ 1719.0439, найдено: 1719.0426.

Соединение 164

К раствору DOTA(tBu)₃-COOH (1 экв; 30 мг; 56.84 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили DIPEA (3 экв; 30 мкл; 170.52 мкмоль), HOBt (1 экв; 7.7 мг; 56.84 мкмоль), HBTU (1.6 экв; 34 мг; 89.73 мкмоль), после смесь перемешивалась в течение 10 минут, затем добавили соединение 159 (1 экв; 77 мг; 56.84 мкмоль) и реакционная смесь перемешивалась 12 часов. Далее удалили растворитель при пониженном давлении и остаток растворили в DCM (15 мл), и провели экстракцию: 1) Н₂О (1*15 мл), 2) NaHCO₃ (2*15 мл). 2) brine (1*15 мл). Органическую фракцию сушили над Na₂SO₄, после удалили растворитель при пониженном давлении. Продукт высадили Р.Е. (3 мл). Соединение 164 было получено в виде бело-желтого порошка (98 мг, выход 99%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.34 (d, J=7.3 Hz, 1H, F5NH), 8.21-8.12 (m, 1H, F6NHmn), 8.07 (t, J=5.5 Hz, X7NHd), 7.96 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.92 (t, J=-5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.88 (d, J=8.2 Hz, n) & 7.83 (d, J=8.2 Hz, m) (2H, X8Hd, m+n), 7.60-7.51 (m, 1H, X7NH), 7.32-7.10 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.34-6.22 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.69-4.47 (m, 2H, X8Han+X8Ham), 4.45-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.34-4.23 (m, 1H, F5Ha), 4.08-3.99 (m, 1H, E1Ha), 3.99-3.90 (m, 1H, K2Ham+K2Han), 3.80-1.60 (br.m, 24H, DOTA), 3.25-3.10 (m, 4H, K2Hemn+X7Hg), 3.10-2.85 (m, 7H, F6Hb(a)+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.92-1.80 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.71-1.60 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.60-1.55 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.53 (s, 9H, tBuX8), 1.55-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n), 1.43 (s, 9H, 22), 1.40 (s, 18H, 18+26), 1.40-1.34 (m, 27H, tBu).

¹³C ЯМР (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

172.91 (X4Cg(n)), 172.88 (X4Cg(m)), 172.57 (1), 172.21 (K2C(n)), 172.18 (16+24), 172.17 (K2C(m)), 172.09 (X3C(n)), 172.03 (X3C(m)), 171.90 (Е1С), 171.58 (Х4С(mn)), 171.43 (E1Cd), 171.36 (20), 171.07 (F5C), 170.63 (F6C), 164.80 (X8Ck(m)), 164.71 (X8Ck(n)), 157.13 (U(m)), 157.11 (U(n)), 143.75 (X8Cb(m)), 143.29 (X8Cb(n)), 138.13 (F6Cg), 138.04 (F5Cg), 130.26 (Х8Се(n)), 129.98 (X8Ce(m)), 129.46 (X8Cd(n)), 129.16 (X8Cd(m)), 129.00 (F6Cd+F5Cd), 128.16 (F6Ce), 128.07 (F5Ce), 127.43 (X8Cg(m)), 126.48 (X8Cg(n)), 126.28 (F6Ck), 126.26 (F5Ck), 81.09 (21), 80.96 (17+25), 80.67 (X8tBu(n)), 80.55 (X8tBu(m)+E1tBu), 80.39 (K2tBu(m)), 80.31 (K2tBu(n)), 79.76 (E1dtBu), 55.83 (2), 55.34 (19), 55.26 (15+23), 55.08 (F5Ca), 54.34 (F6Ca), 52.96 (K2Ca(n)), 52.80 (K2Ca(m)), 52.18 (E1Ca), 50.02 (X8Ca(n)), 47.40 (X8Ca(m)), 46.79 (K2Ce(m)), 45.32 (K2Ce(n)), 39.50 (набор уш. пиков, DOTAcyclic), 38.64 (X3Ce(m)), 38.57 (X3Ce(n)), 37.07 (F5Cb), 36.76 (F6Cb), 36.57 (X7Cg), 36.37 (X7Ca), 32.36 (X3Ca(n)), 31.97 (X3Ca(m)), 31.79 (K2Cb), 30.90 (E1Cg), 30.69 (X4Ca), 30.54 (X4Cb), 29.05 (X3Cd(m)), 28.93 (X3Cd(n)+X7Cb), 27.80 (tBuX8), 27.73 (tBuE1), 27.64 (22), 27.62 (18+26+tBuK2+K2Cd(m)), 27.58 (tBuE1d+E1Cb), 26.71 (K2Cd(n)), 26.33 (X3Cg(m)), 26.25 (X3Cg(n)), 24.73 (X3Cb(m)), 24.57 (X3Cb(n)), 22.45 (K2Cg(n)) 22.24 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 85% в положительном режиме.

ESI-MS C₉₅H₁₅₀N₁₂O₂₁:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 898.56, найдено: 898,95

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₉₅H₁₅₀N₁₂O₂₁- [M+H]⁺ 1796,1111, найдено: 1796,1141.

Соединение 165

Соединение 160 (1 экв; 90 мг; 56 мкмоль) растворили в смеси, состоящей из TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2.5%, V=4 мл). Смесь перемешивали 5 часов. Далее удалили растворитель. Продукт высадили ДЭК и промыли дважды ДЭК (2 мл). После остаток очищали с помощью метода обращенно-фазовой хромато графин (Puriflash PF-15C18AQ-F0012 (15μ 20g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (90%)/MeCN(10%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 165 было получено в виде белого порошка (70 мг, выход 72%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.46-8.34 (m, 2H, X7NHd+F5NH), 8.19 (d, J=8.3 Hz, 1H, F6NH), 7.98 (t, J=5.4 Hz, 1H, X3NHk), 7.77 (t, J=5.5 Hz, 1H, K2NHk), 7.59 (t, J=5.4 Hz, 1H, X7NH), 7.32-7.11 (m, 10H, Ph+Ph), 6.39-6.25 (m, 2H, K2NH+E1NH), 4.43-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.30-4.22 (m, 1H, F5Ha), 4.15-3.95 (m, 4H, E1Ha+K2Ha+2), 3.95-3.82 (m, 2H, 19), 3.70-3.20 (set of broad m, 12H, 15+23+Hcyclic), 3.20-2.81 (m, 19H, X7Hg(a)+Hcyclic F6Hb(a)+X7Hg(b)+X3He+X7H(a)+K2He+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.68-2.58 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 6H, X4Hb+X4Ha(a)+E1Hg+X4Ha(b), 2.01 (t, J=7.3 Hz, 2H, Х3На), 1.97-1.85 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.77-1.67 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.67-1.59 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.59-1.49 (m, 3H, X7Hb+K2Hb(b)), 1.49-1.10 (m, 10H, X3Hb+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg).

¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

174.71 (K2C), 174.34 (E1C), 173.90 (E1Cd), 173.17 (X4Cg), 172.11 (X3C), 171.89 (broad peak, 16+24), 171.78 (X4C), 171.31 (F5C), 170.97 (F6C), 168.74 (broad peak, 20), 165.36 (broad peak, 1), 158.69 (C(O)TFA), 158.34 (C(O)TFA), 157.48 (U), 138.20 (F6Cg), 138.06 (F5Cg), 129.11 (F6Cd+F5Cd), 128.32 (F6Ce), 128.21 (F5Ce), 126.46 (F6Ck), 126.41 (F5Ck), 117.48 (CF₃), 114.57 (CF₃), 55.30 (F5Ca), 54.76 (broad peak, 2), 54.53 (F6Ca), 54.01 (broad peak, 19), 52.62 (broad peak, 15+23), 52.41 (K2Ca), 51.79 (E1Ca), 50.65 (set of broad peaks, DOTAcyclic), 48.41 (set of broad peaks, DOTAcyclic), 48.01 (set of broad peaks, DOTAcyclic), 38.70 (X3Ce), 38.43 (K2Ce), 37.04 (F5Cb), 36.83 (F6Cb+X7Cg), 36.65 (X7Ca), 35.48 (X3Ca), 31.88 (K2Cb), 30.78 (X4Ca), 30.65 (X4Cb), 30.01 (E1Cg), 28.95 (X3Cd+K2Cd), 28.74 (X7Cb), 27.61 (E1Cb), 26.31 (X3Cg), 25.18 (X3Cb), 22.77 (K2Cg).

По результатам LCMS 97,46% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₅₉H₈₈N₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 635.32, найдено: 635.55

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₅₉H₈₈N₁₂O₁₉ - [M+2H]²⁺ 635.3217, найдено: 635.3228.

Соединение 166

Соединение 161 (1 экв; 109 мг; 61.4 мкмоль) растворили в смеси, состоящей из TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2.5%, V=4 мл). Смесь перемешивали 5 часов. Далее удалили растворитель. Продукт высадили ДЭК и промыли дважды ДЭК (2 мл). После остаток очищали с помощью метода обращенно-фазовой хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0012 (15μ 20g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (90%)/MeCN(10%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 166 было получено в виде белого порошка (70 мг, выход 60%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.49-8.34 (m, 2H, X7NHd+F5NHmn), 8.23-8.13 (m, 1H, F6NHmn), 8.04-7.92 (m, 1H, X3NHkmn), 7.65-7.56 (m, 1H, X7NH), 7.54 (d, J=8.2 Hz, n) & 7.48 (d, J=8.2 Hz, m) (2H, X8Hd, m+n), 7.31-7.09 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.41-6.26 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.50 (s, n) & 4.43 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.42-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.31-4.21 (m, 1H, F5Ha), 4.15-3.96 (m, 4H, E1Ha+K2Ha+2), 3.96-3.86 (br.m, 2H, 19), 3.67-3.50 (br.m, 4H, 15+23), 3.41-3.22 (br.m, 8H, Hcyclic), 3.22-2.83 (m, 19H, K2Hemn+F6Hb(a)+Hcyclic+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.98-1.85 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.77-1.67 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.67-1.58 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n).

¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

174.66 (K2C(n)), 174.62 (K2C(m)), 174.33 (E1C(mn)), 173.91 (E1Cd), 173.18 (X4Cg(n)), 173.14 (X4Cg(m)), 172.29 (X3C(n)), 172.24 (X3C(m)), 171.89 (уш.пик 16+24), 171.78 (Х4С(mn)), 171.32 (F5C), 170.97 (F6C), 168.96 (уш.пик, 20), 166.43 (уш.пик, 1), 158.61 (C(O)TFA), 158.29 (C(O)TFA), 157.47 (U), 138.20 (F5Cg(mn)), 138.11 (X8Cb(m)), 138.07 (F6Cg(mn)), 137.63 (X8Cb(n)), 131.67 (X8Cd(n)), 131.35 (X8Cd(m)), 129.81 (X8Cg(m)), 129.12 (F6Cd+F5Cd), 128.75 (X8Cg(n)), 128.31 (F6Ce), 128.22 (F5Ce), 126.46 (F5Ck), 126.41 (F6Ck), 120.25 (X8Ce(n)), 120.03 (X8Ce(m)), 118.20 (CF₃), 115.25 (CF3), 55.27 (F5Ca), 54.74 (уш.пик, 2), 54.55 (F6Ca), 54.06 (уш.пик, 19), 52.66 (уш.пик, 15+23), 52.38 (K2Ca(n)), 52.25 (K2Ca(m)), 51.80 (E1Ca), 50.64 (набор уш.пиков, DОТАцикл.), 49.74 (Х8Са(n)), 48.16 (набор уш.пиков, DОТАцикл), 47.13 (X8Ca(m)), 46.87 (K2Ce(m)), 45.37 (K2Ce(n)), 38.78 (X3Ce(m)), 38.72 (X3Ce(n)), 37.07 (F5Cb), 36.83 (F6Cb+X7Cg), 36.65 (X7Ca), 32.42 (X3Ca(n)), 32.03 (X3Ca(m)), 31.87 (K2Cb), 30.79 (X4Ca), 30.65 (X4Cb), 30.03 (E1Cg), 29.14 (X3Cd(m)), 29.05 (X3Cd(n)), 28.75 (X7Cb), 27.84 (K2Cd(m)), 27.61 (E1Cb), 26.83 (K2Cd(n)), 26.39 (X3Cg(m)), 26.31 (X3Cg(n)), 24.81 (X3Cb(m)), 24.69 (X3Cb(n)), 22.63 (K2Cg(n)) 22.45 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 97,48% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₆₆H₉₃BrN₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 719.29, найдено: 720.40

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₆H₉₃BrN₁₂O₁₉ - [M+2H]²⁺ 719.3004, найдено: 719.3016.

Соединение 167

Соединение 162 (1 экв; 80 мг; 44.17 мкмоль) растворили в смеси, состоящей из TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2.5%, V=3 мл). Смесь перемешивали 5 часов. Далее удалили растворитель. Продукт высадили ДЭК и промыли дважды ДЭК (2 мл). После остаток очищали с помощью метода обращенно-фазовой хромато графин (Puriflash PF-15C18AQ-F0012 (15μ 20g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (90%)/MeCN(10%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 167 было получено в виде белого порошка (54 мг, выход 66%).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, δ):

8.44-8.28 (m, 2H, X7NHd+F5NHmn), 8.24-8.11 (m, 1H, F6NHmn), 7.98 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.95 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.67-7.54 (m, 1H, X7NH), 7.42-7.10 (m, 14H, X8Hdn+X8Hen+X8Hdm+X8Hem+F6He+F6Hd+X8Htmn+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgmn), 6.40-6.25 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.55 (s, n) & 4.47 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.44-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.34-4.24 (m, 1H, F5Ha), 4.13-4.04 (m, 1H, E1Ha), 4.05-3.91 (m, 3H, K2Ha+2), 3.89-3.76 (br.m, 2H, 19), 3.67-3.50 (br.m, 4H, 15+23), 3.41-3.22 (br.m, 8H, Hcyclic), 3.22-2.83 (m, 19H, K2Hemn+F6Hb(a)+Hcyclic+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.60 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.97-1.85 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.77-1.67 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.67-1.58 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n). (Фиг. 52)

¹³С ЯМР (100 МГц, DMSO-d₆, δ):

174.55 (K2C(n)), 174.51 (K2C(m)), 174.22 (E1C(n)), 174.21 (E1C(m)), 173.79 (E1Cd), 172.97 (X4Cg(n)), 172.93 (X4Cg(m)), 172.22 (X3C(nm)), 171.75 (уш.пик 16+24), 171.63 (X4C(mn)), 171.19 (F5C), 170.83 (F6C), 169.21 (уш.пик, 20), 165.73 (уш.пик, 1), 158.27 (C(O)TFA), 157.96 (C(O)TFA), 157.34 (U), 141.24 (X8Cb(m)), 140.83 (X8Cb(n)), 138.12 (F6Cg), 138.01 (F5Cg), 133.43 (X8Ck(n)), 133.08 (X8Ck(m)), 130.64 (X8Cd(n)), 130.28 (X8Cd(m)), 129.04 (F6Cd+F5Cd), 128.21 (F6Ce), 128.12 (F5Ce), 127.20 (X8Ct(m)), 127.17 (Х8Се(n)), 126.87 (X8Ce(m)), 126.35 (F6Ck), 126.30 (X8Ct(n)+F5Ck), 126.10 (X8Cg(m)), 125.00 (X8Cg(n)), 118.68 (CF₃), 115.70 (CF3), 55.09 (F5Ca), 54.77 (уш.пик, 2), 54.44 (F6Ca), 54.10 (уш.пик, 19), 52.96 (уш.пик, 15+23), 52.30 (K2Ca(n)), 52.19 (K2Ca(m)), 51.71 (E1Ca), 50.63 (набор уш. пиков, DОТАцикл.), 49.67 (Х8Са(n)), 48.56 (набор уш.пиков, DОТАцикл), 47.21 (X8Ca(m)), 46.92 (K2Ce(m)), 45.35 (K2Ce(n)), 38.69 (X3Ce(m)), 38.62 (X3Ce(n)), 37.04 (F5Cb), 36.80 (F6Cb), 36.65 (X7Cg), 36.54 (X7Ca), 32.32 (X3Ca(n)), 31.91 (X3Ca(m)), 31.81 (K2Cb), 30.73 (X4Ca), 30.58 (X4Cb), 29.95 (E1Cg), 29.08 (X3Cd(m)), 28.97 (X3Cd(n)), 28.70 (X7Cb), 27.82 (K2Cd(m)), 27.57 (E1Cb), 26.77 (K2Cd(n)), 26.31 (X3Cg(m)), 26.23 (X3Cg(n)), 24.74 (X3Cb(m)), 24.60 (X3Cb(n)), 22.53 (K2Cg(n)) 22.37 (K2Cg(m)). (Фиг. 53)

По результатам LCMS 98,28% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме (Фиг. 54)

ESI-MS C₆₆H₉₃ClN₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 697.33, найдено: 697.90 (Фиг. 55)

HRMS (m/z, ESI): рассчитано для C₆₆H₉₃ClN₁₂O₁₉ - [M+2H]⁺ 697.3257, найдено: 697.3284 (Фиг. 56)

Соединение 168

Соединение 163 (1 экв; 84 мг; 49.52 мкмоль) растворили в смеси, состоящей из TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2.5%, V=3 мл). Смесь перемешивали 5 часов. Далее удалили растворитель. Продукт высадили ДЭК и промыли дважды ДЭК (2 мл). После остаток очищали с помощью метода обращенно-фазовой хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0012 (15μ 20g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (90%)/MeCN(10%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 168 было получено в виде белого порошка (65 мг, выход 72%).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, δ):

8.46-8.30 (m, 2Н, X7NHd+F5NHmn), 8.24-8.12 (m, 1H, F6NHmn), 7.98 (t, J=5.4 Hz, m) & 7.95 (t, J=5.4 Hz, n) (1H, X3NHk, m+n), 7.65-7.53 (m, 1H, X7NH), 7.39-7.08 (m, 15H, X8Hdn+X8Hdm+X8Hem+X8Hen X8Hgmn+F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd), 6.41-6.25 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.52 (s, n) & 4.47 (s, m) (2Н, X8Ha, m+n), 4.44-4.34 (m, 1H, F6Ha), 4.32-4.21 (m, 1H, F5Ha), 4.15-3.96 (m, 4H, E1Ha+K2Ha+2), 3.96-3.86 (br.m, 2H, 19), 3.67-3.50 (br.m, 4H, 15+23), 3.41-3.22 (br.m, 8H, Hcyclic), 3.22-2.83 (m, 19H, K2Hemn+F6Hb(a)+Hcyclic+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.58 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.97-1.84 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.76-1.65 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.65-1.57 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.57-1.10 (1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n).

¹³С ЯМР (100 МГц, DMSO-d₆, δ):

174.65 (K2C(n)), 174.62 (K2C(m)), 174.32 (E1C(mn)), 173.90 (E1Cd), 173.19 (X4Cg(n)), 173.15 (X4Cg(m)), 172.26 (X3C(n)), 172.12 (X3C(m)), 171.88 (уш.пик 16+24), 171.78 (Х4С(m)), 171.76 (Х4С(n)), 171.32 (F5C), 170.96 (F6C), 168.76 (уш.пик, 20), 165.29 (уш.пик, 1), 158.67 (C(O)TFA), 158.35 (C(O)TFA), 157.45 (U), 138.52 (X8Cb(m)), 138.20 (F6Cg), 138.07 (F5Cg+X8Cb(n)), 129.11 (F6Cd+F5Cd), 128.80 (X8Cd(n)), 128.49 (X8Cd(m)), (128.31 (F6Ce), 128.21 (F5Ce), 127.53 (X8Cg(m)), 127.25 (Х8Се(n)), 126.99 (X8Ce(m)), 126.46 (X8Cg(n)+F6Ck), 126.41 (F5Ck), 118.86 (CF₃), 118.24 (CF₃), 55.27 (F5Ca), 54.74 (уш.пик, 2), 54.53 (F6Ca), 54.04 (уш.пик, 19), 52.64 (уш.пик, 15+23), 52.37 (K2Ca(n)), 52.26 (K2Ca(m)), 51.78 (E1Ca), 50.67 (набор уш.пиков, DОТАцикл.), 49.61 (X8Ca(n)), 48.41 (набор уш.пиков, DОТАцикл), 47.53 (X8Ca(m)), 46.67 (K2Ce(m)), 45.09 (K2Ce(n)), 38.78 (X3Ce(m)), 38.69 (X3Ce(n)), 37.06 (F5Cb), 36.82 (F6Cb+X7Cg), 36.64 (X7Ca), 32.46 (X3Ca(n)), 32.06 (X3Ca(m)), 31.84 (K2Cb), 30.77 (X4Ca), 30.65 (X4Cb), 30.02 (E1Cg), 29.14 (X3Cd(m)), 29.03 (X3Cd(n)), 28.74 (X7Cb), 27.82 (K2Cd(m)), 27.61 (E1Cb), 26.84 (K2Cd(n)), 26.31 (X3Cg(m)), 26.33 (X3Cg(n)), 24.87 (X3Cb(m)), 24.71 (X3Cb(n)), 22.64 (K2Cg(n)) 22.49 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 99,15% в положительном режиме, 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₆₆H₉₄N₁₂O₁₉:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 680.34, найдено: 680.7

HRMS (m/z, ESI): рассчитано для C₆₆H₉₄N₁₂O₁₉ - [M+H]⁺ 1359.6831, найдено: 1359.6857

Соединение 169

Соединение 164 (1 экв; 102 мг; 56.78 мкмоль) растворили в смеси, состоящей из TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2.5%, V=4 мл). Смесь перемешивали 5 часов. Далее удалили растворитель. Продукт высадили ДЭК и промыли дважды ДЭК (2 мл). После остаток очищали с помощью метода обращенно-фазовой хроматографии (Puriflash PF-15C18AQ-F0012 (15μ 20g), элюент: H₂O*TFA(0.1%) (90%)/MeCN(10%) => H₂O*TFA(0.1%) (0%)/MeCN(100%) в течение 30 минут после MeCN (100%) в течение 5 минут. Соединение 169 было получено в виде белого порошка (75 мг, выход 71%).

¹H ЯМР (400 MHz, DMSO-d₆, δ):

8.48-8.30 (m, 2H, X7NHd+F5NHmn), 8.22-8.13 (m, 1H, F6NHmn), 8.02-7.90 (m, 3H, X3NHkmn+X8Hd(n)+X8Hd(m)), 7.62-7.53 (m, 1H, X7NH), 7.32-7.08 (m, 12H, F6He+F6Hd+F5He+F6Hk+F5Hk+F5Hd+X8Hgm+X8Hgn), 6.41-6.26 (m, 2H, K2NH+E1NH, m+n), 4.61 (s, n) & 4.54 (s, m) (2H, X8Ha, m+n), 4.45-4.33 (m, 1H, F6Ha), 4.31-4.21 (m, 1H, F5Ha), 4.15-3.96 (m, 4H, E1Ha+K2Ha+2), 3.96-3.86 (br.m, 2H, 19), 3.67-3.50 (br.m, 4H, 15+23), 3.41-3.22 (br.m, 8H, Hcyclic), 3.22-2.83 (m, 19H, K2Hemn+F6Hb(a)+Hcyclic+X7Hg+X7Ha+X3He(mn)+F6Hb(b)+F5Hb(a)), 2.70-2.58 (m, 1H, F5Hb(b)), 2.40-2.10 (m, 8H, X3Ham+X4Hbmn+E1Hg+X4Hamn+X3Han), 1.98-1.85 (m, 1H, E1Hb(a)), 1.77-1.67 (m, 1H, E1Hb(b)), 1.66-1.58 (m, 1H, K2Hb(a)), 1.58-1.10 (1.54-1.10 (m, 13H, X7Hb+X3Hb+K2Hb(b)+X3Hd+K2Hd+K2Hg+X3Hg, m+n).

¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆, δ):

174.62 (K2C(n)), 174.58 (K2C(m)), 174.29 (E1C(mn)), 173.86 (E1Cd), 173.15 (X4Cg(n)), 173.10 (X4Cg(m)), 172.27 (X3C(n)), 172.22 (X3C(m)), 171.95 (уш.пик 16+24), 171.72 (X4C(mn)), 171.27 (F5C), 170.91 (F6C), 169.35 (уш.пик, 20), 167.29 (X8Ck(m)), 167.21 (X8Ck(n)), 166.06 (уш.пик, 1), 158.63 (C(O)TFA), 158.28 (C(O)TFA), 157.41 (U), 143.83 (X8Cb(m)), 143.38 (X8Cb(n)), 138.19 (F6Cg), 138.06 (F5Cg), 129.85 (X8Cd(n)), 129.77 (X8Ce(n)), 129.54 (X8Cd(m)), 129.47 (X8Ce(m)), 129.09 (F6Cd+F5Cd), 128.27 (F6Ce), 128.18 (F5Ce), 127.45 (X8Cg(m)), 126.52 (X8Cg(n)), 126.40 (F6Ck), 126.37 (F5Ck), 117.67 (CF₃), 114.75 (CF3), 55.24 (F5Ca), 54.88 (уш.пик, 2), 54.50 (F6Ca), 54.01 (уш.пик, 19), 52.29 (уш.пик, 15+23), 52.35 (K2Ca(n)), 52.22 (K2Ca(m)), 51.76 (E1Ca), 50.60 (набор уш.пиков, DОТАцикл.), 50.14 (X8Ca(n)), 48.38 (набор уш.пиков, DОТАцикл), 47.60 (X8Ca(m)), 47.01 (K2Ce(m)), 45.53 (K2Ce(n)), 38.75 (X3Ce(m)), 38.67 (X3Ce(n)), 37.05 (F5Cb), 36.79 (F6Cb+X7Cg), 36.61 (X7Ca), 32.40 (X3Ca(n)), 31.97 (X3Ca(m)), 31.83 (K2Cb), 30.76 (X4Ca), 30.63 (X4Cb), 30.00 (E1Cg), 29.13 (X3Cd(m)), 29.02 (X3Cd(n)), 28.72 (X7Cb), 27.85 (K2Cd(m)), 27.58 (E1Cb), 26.83 (K2Cd(n)), 26.38 (X3Cg(m)), 26.28 (X3Cg(n)), 24.78 (X3Cb(m)), 24.65 (X3Cb(n)), 22.60 (K2Cg(n)) 22.44 (K2Cg(m)).

По результатам LCMS 100% в положительном режиме; 100% в отрицательном режиме

ESI-MS C₆₇H₉₄N₁₂O₂₁:

m/z рассчитано для [M+2H⁺]²⁺: 702.34, найдено: 702.65

HRMS (m/z, ESI): рассчитано C₆₇H₉₄N₁₂O₂₁ - [M+2H]²⁺ 719.3004, найдено: 719.3016. Биологические испытания.

Использованные клеточные линии

LNCaP - андроген-чувствительная клеточная линия аденокарциномы человека, являются адгерентными эпителиальными клетками, растут в виде агрегатов и одиночных клеток. ПСМА-положительные.

Клетки линии LNCaP культивировались в среде RPMI с 10% FBS (Gibco), 1x Glutamax (Gibco) и 1x смесью пенициллин-стрептомицин (Gibco).

Получение ПСМА-содержащего клеточного экстракта.

Для суспендирования клеток с 25 см² флакона убирали культуральную среду, промывали клетки буфером PBS и инкубировали 5 минут с 0,25% трипсином (1 мл). Трипсин инактивировали полной культуральной средой (2 мл), промывали PBS, переносили 10⁶ клеток в пробирку и добавляли 500 мкл лизирующего буфера (0,5% Triton Х-100, 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 1x Proteinase Inhibition cocktail). Суспензию инкубировали 30 минут во льду и обрабатывали ультразвуком (7 раз по 7 сек с интервалами 20-30 сек) во льду во избежание перегрева. Центрифугировали 10 мин 1000g на 4°С и надосадочный раствор использовали в дальнейшем анализе.

Протокол проведения измерения активности ПСМА.

Анализ ингибирования препаратами ПСМА проводился по нерадиоактивному протоколу с детекцией высвобождаемого в ходе реакции глутамата. Экстракт клеток линии LNCaP (10 μL) смешивался с 2 μL препарата соответствующего разведения. Для первичного тестирования использовалась серия разведении препаратов 2 нМ-100 мкМ с шагом разведения 3-5 раз. К полученной смеси добавлялся 1 μL 100 μМ раствора NAAG. Полученная смесь инкубировалась 2 часа при 37°С. После инкубации смесь разводилась вдвое реакционным буфером (13 μL) из набора Amplex Red Glutamic Acid Kit (Molecular Probes Inc., Eugene) и добавлялась многокомпонентная реакционная смесь для детекции глутамата, приготовленная в соответствии с протоколом производителя (26 μL). Рабочий раствор Amplex Red: 5 мкл Amplex® Red reagent stock solution, 1,25 мкл HRP stock solution, 8 мкл L-glutamate oxidase, 2,5 мкл L-glutamate pyruvate transaminase, 0,5 мкл L-alanine, 483 мкл IX Reaction Buffer. Проводилась инкубация 1 час при 37°С. Флуоресценция резоруфина, полученного в результате сопряженных реакций глутамат-детектирующего набора детектировалась на планшетном мультидетекторе VICTORX5 (Perkin Elmer Inc.) при длине возбуждения 555 нм и детекции при 580 нм. В качестве контроля эндогенного уровня глутамата с заменой раствора NAAG на воду.

Оценка ингибирования

Препарат DCL трифторацетат представляет собой известную модификацию вещества DUPA с повышенной растворимостью и является генетическим предшественником большинства протестированных препаратов. Его ингибирующее действие аналогично DUPA и он использовался как контрольный ингибитор в последующих анализах.

Ниже приведено описание ингибирования ПСМА рецептора разработанными соединениями. Чем меньше IC₅₀ при ингибировании, тем лучше аффинность.

Наибольшее ингибирующее действие показало соединение формулы 127 с линкером, содержащим фрагмент L-Phe-L-(3-NO2)-Tyr между ядром ингибитора и арильным фрагментом и производным 3-хлорбензальдегида при ε-атоме азота лизина. Также более сильными ингибиторами, по сравнению с «соединением 70» и «соединением 64» RU 2697519 C1 являются соединения формулы: 1) X₁=H, X₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, D-Phe-L-Tyr(3-NO₂); 2).X₁=H, X₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, L-Tyr-L-Tyr; 3) X₁=H, X₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, D-Phe-L-Tyr(3-Br); 4) X₁=H, X₂=H, Х₃=СООН, Х₄=Н, L-Phe-L-Phe, 5) X₁=H, X₂=Cl, Х₃=Н, Х₄=Н, L-Phe-L-Phe(4-Br), 6) X₁=H, X₂=H, Х₃=СООН, Х₄=Н, L-Phe-L-Tyr(3-NO₂). В таблице 1 приведены концентрации половинного ингибирования IC₅₀ (нМ) ПСМА протестированными препаратами.

Соединения DCL, ZJ=43, 2-PMPA, «соединение 70» и «соединение 64» RU 2697519 C1 - соединения для сравнения, и соединения со значениями аффинности меннее 5 нМ 118, 126, 127, 128, 129, 134, 135, 136, 137, 139, 140 с одним ароматическим фрагментом при ε-NH₂ группе, с двумя ароматическими фрагментами в линкере соответственно, формулы которых представлены ниже.

Оценка токсичности конъюгата 145 Проведение тестов на цитотоксичность

При рутинном ведении клетки линии LNCaP, PC-3, 22Rvl культивировали в среде RPMI без фенолового красного с 10% FBS (Gibco), IxGlutamax (Gibco), 1x смесью пенициллин-стрептомицин (Gibco), 1x смесью витаминов для RPMI среды. Клетки культивировали в матрасиках Т25 в CO2 инкубаторе при 5% CO₂ и температуре 37°С до достижения 80% конфлюэнтного монослоя.

Проведение МТТ-теста (3-(4,5-диметилтриазол-2-ил)2,5-дифенил тетразолиум бромид - тест) был проведено в соответствии с методикой, опубликованной в статье Ferrari с соавторами. Через 24 часа после посева клеток к ним добавлялись химические препараты, разведенные в соответствующей культуральной среде. Для каждой концентрации препарата использовали три технических реплики. Далее клетки инкубировались 72 часа с препаратами при 37°С и 5%CO₂. Затем к клеткам прибавлялся МТТ до 0,5 г/л (использовался 10х кратный раствор в стандартном буфере PBS) и клетки инкубировались еще 2 часа. После инкубации среда отбиралась и осадок растворялся в 140 мкл ДМСО (ООО «Фармамед», Россия) в течении 15 минут при перемешивании на орбитальном шейкере (60 об/мин). Измеряли оптическую плотность каждой лунки при длине волны 565 нм. Каждый эксперимент проводился в трех репликах. Данные обрабатывали с помощью ПО -GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA), строя зависимости доза-ответ и определяя СС₅₀.

Результаты биологических исследований in vitro Биологические испытания полученных конъюгатов in vitro проводились на трех клеточных линиях: 22Rv1 (ПСМА+), LNCaP (ПСМА+) и РС-3 (ПСМА -) методом проточной цитофлуометрии. Результаты полученных исследований приведены ниже на Фиг. 20. В качестве конъюгата сравнения был взят конъюгат полученный на ранее разработанном лигандн ПСМА с дипептидным линкером L-Phe-L-Tyr, структура которого представлена ниже.

Исходя из полученных данных было обнаружено (Фиг. 20), что конъюгат 145 обладает цитотоксичностью относительно ПСМА-положительных клеточных линий, уменьшая высокотоксическое действие немодифицированного монометил ауристатина Е. Также можно наблюдать повышенную цитотоксичность конъюгата на ПСМА-положительных клеточных линиях 22Rv1 и LNCaP, в сравнении с ПСМА-отрицательно и клеточной линией PC-3. Если сравнивать с конъюгатом сравнения PSMA-MMAE на основе L-Phe-L-Tyr, на клеточной линии PC-3 (ПСМА неэкспрессирущая) можно видеть сопоставимые значения цитотоксичности. Для конъюгата PSMA-MMAE с дипептидной цепочкой L-Phe-L-Tyr значение IC₅₀ составляет 625±66,8 нМ, а для конъюгата с дипептидной цепочкой L-Phe-L-Tyr(3-NO₂) 145 657±105,7 нМ. Также сопоставимые результаты можно наблюдать на клеточной линии 22Rv1, которая является слабоэкспрессирущей ПСМА (67,27±10,45 нМ для L-Phe-L-Tyr и 103,1±11,6 для L-Phe-L-Tyr(3-NO₂)). Однако, на сильноэкспрессирущей линии LNCaP, можно видеть, что цитотоксичность нового конъюгата 145 превосходит конъюгат сравнения в 2 раза (30,67±3,31 нМ для L-Phe-L-Tyr и 17,74±1,58 для L-Phe-L-Tyr(3-NO₂)), что является хорошим показателем и говорит о хорошей селективности препарата.

Проточная цитофлуорометрия

Протокол проведения анализа на проточном цитофлюориметре.

Лунки 12-луночного планшета для дальнейшего культивирования LNCaP клеток покрывали L-полилизином (Sigma) в течении 1 часа, после чего промывали лунки PBS дважды.

Клетки (клеточные культуры LNCaP) рассаживали в 12-луночный планшет, в лунку помещали 2×105 клеток в 800 мкл среды RPMI, инкубировали в стандартных условиях культивирования в течение ночи. Далее клетки отмывали холодной средой RPMI, содержащей 1% фетальной бычьей сыворотки.

Для каждого коньюгата в анализ включали клетки LNCaP (три повторности).

Эксперимент проводили в трех повторностях как при частичном блокировании ПСМА (при внесении избытка анализируемого соединения), так и в эксперименте без дополнительной нагрузки избытком лиганда.

Избыток лиганда достигался внесением к клеткам 720 мкл среды RPMI (1% FBS), содержащей 400 мкМ (100-кратное превышение по концентрации) флуоресцентно немеченого лиганда тождественного по строению анализируемому, инкубацию проводили в стандартных условиях культивирования в течении 1 часа. В качестве образцов сравнения использовали лунки с клетками, в которые вносили 720 мкл среды RPMI (1% FBS), эти лунки с клетками также инкубировали в стандартных условиях культивирования в течении 1 часа. По истечению времени инкубации в каждую лунку вносили 80 мкл среды RPMI (1% FBS), содержащую анализируемый коньюгат в концентрации 40 мкМ для достижения конечной концентрации в лунке 4 мкМ. Проводили инкубацию в стандартных условиях культивирования в течении 30 минут. В качестве контрольных образцов включали клетки, которые инкубировали со средой RPMI (1% FBS) с эквивалентным содержанием DMSO в течении 30 мин.

Клетки снимали с поверхности пластика трипсинизацией, инактивацию трипсина проводили с использованием PBS, содержащего 10% FBS. Клетки центрифугировали и отмывали дважды в PBS (10% FBS), полученные клетки ресуспендировали в 500 мкл PBS и использовали далее для проточной цитофлуориметрии (Becton Dickinson FACSAria III).

В ходе эксперимента клеточные линии были обработаны растворами конъюгатов МА-476, 141, 142, 143, 144 (Фиг. 15) различной концентрации (4 нм, 40 нм, 150 нм), а после определена доля окрашенных клеток. Полученные данные представлены на Фиг. 17.

В результате для всех конъюгатов наблюдалось увеличение доли окрашенных клеток при увеличении концентрации исследуемого соединения. Также стоит отметить корреляцию аффинности исходных лигандов и доли окрашенных клеток: так наибольшую долю окрашенных клеток при всех концентрациях показал конъюгат 144, синтезированный на основе наиболее аффинного лиганда 127. При самой низкой концентрации (4 нм) доля окрашенных клеток конъюгатом 144 оказалась равной 63% против 58% для конъюгата МА-476 и 51% для конъюгата 143. В целом, накопление флуоресценции наблюдается для всей новой серии конъюгатов с увеличением концентрации. При концентрации в 150 нМ процент накопления находится в переделах 80-83%.

В соответствии с проведенными исследованиями по оценке накопления в клетках в зависимости от представленности ПСМА на поверхности клетки, показано; что коньюгат 144 является эффективными ПСМА-вектором.

Исследование проникновения полученных соединений через клеточную мембрану и их накопление в клетке

Соединения [⁶⁸Ga]Ga-165 - [⁶⁸Ga]Ga-169 (Фиг. 16) были получены с применением стандартных процедур, описанных в разделе Приготовление и контроль качества соединений, меченных ⁶⁸Ga

Определение радиохимической чистоты полученных препаратов было выполнено методами радио-ВЭЖХ и радио-ТСХ.

Радиохимическая чистота всех препаратов [⁶⁸Ga]Ga-165 - [⁶⁸Ga]Ga-169, используемых для биологических исследований, составляла ≥98%.

Для исследований рецепторного связывания in vitro использовали линии клеток рака предстательной железы человека (PSMA+) 22Rv1 и (PSMA-) РС-3. Полученные результаты представлены на Фиг. 18, 19.

Радиоактивность всех образцов, измеряли с помощью автоматического счетчика WIZARD2480 (PerkinE1mer). Рецептор-специфическое накопление рассчитывали по активности, связанной с клетками, и выражали как процент накопления активности на миллион клеток.

Наилучшие результаты среди исследованных соединений, а также по сравнению с ранее описанными конъюгатами PSMA I&T и и PSMA-617 продемонстрировал конъюгат 167 (X=m-Cl, L-Phe-L-Phe). Для конъюгата 167 наблюдалось увеличение доли накопления и степени интернализации во всех временных точках по сравнению с описанными в литературе PSMA I&T и PSMA-617 (структуры приведены ниже), которые находятся на заключительном этапе клинических испытаний и приняты в качестве средств диагностики РПЖ методом ПЭТ/КТ. При этом для соединения 167 накопление в клетках 22Rv1 приблизительно в 2 раза больше по сравнению с PSMA I&T и PSMA-617. Следует отметить, что конъюгат 169 (Х=СООН, -L-Phe-L-Phe), показавший наилучшее значение аффинности в предшествующих экспериментах, имеет самые худшие характеристики накопления в клетках 22Rv1 среди всех исследованных конъюгатов; это подтверждает, что исследования аффинности сами по себе не могут служить критерием для однозначного выбора наиболее перспективного лиганда, и для точного его определения необходимо проведение дополнительных исследований in vitro и in vivo.

По данным проведенных исследований по оценке накопления и интернализации соединений на различных клеточных линиях в зависимости от количества ПСМА-рецепторов на поверхности клетки показано, что коньюгат 167 является наиболее эффективным ПСМА-вектором, тогда как конъюгаты 165, 166, 168, 169 сопоставимы с ранее описанными соединениями PSMA I&T и PSMA-617.

Таким образом, была проведена разработка методов синтеза соединений для адресной доставки хелатирующих агентов к рецептору ПСМА. Показано, что оптимальным является синтетический путь получения целевых соединений при помощи твердофазного пептидного синтеза, с дальнейшим присоединением фрагмента NH₂(CH₂)₃NHFmoc, снятием Fmoc защиты с использованием Et₂NH и получением продукта с концевой NTb группой, его последующим сочетанием с хелатором DOTA и удалением трет-бутильных защит в системе TFA/TIPS/H₂O (95%/2.5%/2/5%) в течение 4 часов. Подобная синтетическая схема включает 13 стадий, с необходимостью хромато графического выделения на 8 этапах.

Осуществлен синтез серии конъюгатов 165-169 с хелатором DOTA. Оптимизированы условия получения и выделения целевых соединений, позволяющие получать заявленные вещества с высокими выходами (более 60%) на каждой стадии в виде индивидуальных стереоизомеров.

Проведено исследование физико-химических свойств полученных соединений с применением 8 методов: ¹H ЯМР; ¹³С ЯМР; ¹⁹F ЯМР; ВЭЖХ-МС; МСВР; 2D ЯМР (НМВС, HSQC, ROESY). В результате были полностью охарактеризованы все заявленные соединения и дано полное соотнесение сигналов в ЯМР спектрах.

Исследовано проникновение полученных соединений через клеточную мембрану и их накопление в клетке на клеточных линиях 22Rv1 (PSMA+) и PC-3(PSMA-). По результатам проведенных исследованияй по оценке накопления в клетках и интернализации в зависимости от количества ПСМА на поверхности клетки показано, что коньюгат 167 является наиболее эффективными ПСМА-вектором, тогда как конъюгаты 165, 166, 168, 169 сопоставимы с PSMA I&T и PSMA-617. Таким образом, коньюгат 167 представляется наиболее перспективным для его дальнейшего исследования in vivo. Приготовление и контроль качества соединений, меченных ⁶⁸Ga.

Соединения [⁶⁸Ga]Ga-165 - [⁶⁸Ga]Ga-169 были получены с применением стандартных процедур. Кратко: в пробирку типа эппендорф последовательно помещали 20 мкг прекурсора, водный раствор ацетата натрия (0,6 М, 500 мкл) и кондиционированный (очищенный и концентрированный) элюат генератора ⁶⁸Ge/⁶⁸Ga (430 мкл). Для регулирования значения рН использовалась соляная кислота с концентрацией 1,8 М (~ 70 мкл). Реакционная смесь инкубировалась при температуре 95°С в течение 15 минут. Радиоактивность препарата составляла 30-100 МБк, а рН 4,2-4,5.

Определение радиохимической чистоты полученных препаратов было выполнено методами радио-ВЭЖХ и радио-ТСХ. Основные системы для ТСХ: iTLC-SG/50 мМ H3Citraq; iTLC-SG/TФУaq 5% об.; iTLC-SG/CH₃OH-H₂O (1:1), 1 М CH₃COONH₄. Для ВЭЖХ использовались два метода, описанные в. Вкратце: использовалась система ВЭЖХ Knauer Smartline (Берлин, Германия), оснащенная радиометрическим детектором fLumo (Бертольд, Бад-Вильдбад, Германия) и обращенно-фазовыми колонками С18. Температура термостата колонки составляла 40°С. Метод 1: колонка 250 × 4,6 мм (Jupiter, Phenomenex Inc., Торранс, Калифорния, США); изократический поток (1,0 мл/мин): 25% водного раствора ТФУ 0,1%, 75% ацетонитрила. Метод 2: колонка 150 × 4,6 мм (Advanced Chromatography Technologies Ltd., Абердин, Великобритания) градиентный поток (1,2 мл/мин): 0-3-6-8-9-15 мин = 100-100-0-0- 100-100% А (А - 0,05 М лимонная кислота в воде, В - ацетонитрил). При необходимости (например, если после реакции мечения и контроля качества наблюдались пики, отличные от несвязанного/коллоидного ⁶⁸Ga), препараты были переведены в среду физиологического раствора с использованием картриджей С18 Sep Pak (Waters).

Радиохимическая чистота всех препаратов [⁶⁸Ga]Ga-165 - [⁶⁸Ga]Ga-169, используемых для биологических исследований, составляла ≥98%. Исследования in vitro [⁶⁸Ga]Ga-165 - [⁶⁸Ga]Ga-169

Для исследований рецепторного связывания in vitro использовали линии клеток рака предстательной железы человека (PSMA+) 22Rv1 и (PSMA-) РС-3. Клетки непрерывно культивировали в виде монослоев при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO₂, в среде Opti-MEM (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Для экспериментов in vitro субконфлюэнтные клетки собирали обработкой трипсином (0,05%) и EDTA (0,02%) в PBS.

Для исследований in vitro клетки высевали в шестилуночные планшеты (1×10⁶ клеток, жизнеспособность - 99%) и инкубировали при 37°С/5% CO₂ в течение суток с образованием субконфлюэнтных монослоев. В день эксперимента инкубационную среду удаляли и клетки дважды промывали сбалансированным соляным раствором Хэнкса (без содержания кальция, магния и фенолового красного). В каждую лунку добавляли 900 мкл физиологического раствора, и планшеты инкубировали при 37°С/5%CO₂ в течение 1 часа. Через 1 час в лунку добавляли меченый галлием-68 образец исследуемого соединения (100 мкл) в физиологическом растворе. После необходимого времени инкубации при 37°С супернатант каждой лунки собирали вместе с промывочным раствором (охлажденный фосфатный буфер, 2±1,0 мл). Для каждой временной точки эксперимент выполняли в трех повторностях. Радиоактивность всех образцов, включая исследуемое соединение, меченное ⁶⁸Ga, измеряли с помощью автоматического счетчика WIZARD2480 (PerkinE1mer). Рецептор-специфическое накопление рассчитывали по активности, связанной с клетками, и выражали как процент накопления активности на миллион клеток.

Claims (110)

1. Соединение пептидной природы, обладающее способностью связываться с ПСМА общей формулы (I)

где R₁ представляет собой H, OH;

R₂ представляет собой H, OH;

R₃ представляет собой H, OH, NO₂, Br;

R₄ представляет собой N₃, NH₂;

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOH, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

за исключением случаев, когда:

R₁ представляет собой H;

R₂ представляет собой H, OH;

R₃ представляет собой H, Br;

R₄ представляет собой N₃;

R₅ представляет собой , где X₄=H; X₁, X₂, X₃, независимо друг от друга представляют собой H, Cl;

* - оптические центры, имеющие L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

или

R₅ представляет собой , где X₁=X₃=X₄=H; X₂=Cl или X₁=X₂=X₃ = H; X₄=Cl;

R₁=OH; R₂= H; R₃= H; R₄= N₃; конфигурация оптических центров (*) – D-, L-;

R₁= H; R₂=OH; R₃=OH; R₄= N₃; конфигурация оптических центров (*) – L-, L-.

2. Соединение по п. 1, выбранное из группы:

3. Способ получения соединения по п. 1, характеризующийся тем, что включает синтез тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда формулы (2)

с последующим алкилированием полученного тритретбутилового производного ПСМА-связывающего лиганда с получением соединения формулы (II)

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂, с последующим получением соединения, содержащего алкилированное тритретбутил производное ПСМА-лиганда и фрагмент линкера, представляющего собой алкильный фрагмент, включающий 5 атомов углерода формулы (III)

R⁵ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)_2, который модифицируют янтарным ангидридом, с получением производного соединения, ацилированного янтарным ангидридом (IV)

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂,

далее осуществляют получение дипептидов, иммобилизованных на твердофазном носителе (2-CTC, 2-хлортритил хлоридная смола для пептидного синтеза) производных ароматических аминокислот, с различной конфигурацией оптического центра, для связывания с модифицированным фрагментом линкера,

где R₁=OtBu, Н; R₂=OtBu, Н; R₃=NO₂, Н, Br, OtBu,

затем получают тритретбутил производное конъюгата радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера, включающего фрагменты 6-аминогексановой кислоты, фрагмент фенилаланина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производное, фрагмент тирозина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производное общей формулы (Va)

где R₁ представляет собой OBu^t, Н;

R₂ представляет собой OBu^t, Br, H;

R₃ представляет собой NO₂, Br, Н, OBu^t;

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂,

с последующим удалением ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера, включающего фрагменты 6-аминогексановой кислоты, фрагмент фенилаланина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производное, фрагмент тирозина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производное с поверхности твердофазного носителя в присутствии трифторуксусной кислоты 0,5-1 % в дихлорметане с получением ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера общей формулы (VI), содержащего немодифицированную карбоксильную группу

где R₁, представляет собой OBu^t, Н;

R₂ представляет собой OBu^t, H;

R₃ представляет собой NO₂, Br, Н, OBu^t;

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂.

4. Способ получения конъюгата общей формулы XII, характеризующийся тем, что модификацию соединения (VI)

где R₁, представляет собой OBu^t, Н;

R₂ представляет собой OBu^t, H;

R₃ представляет собой NO₂, Br, Н, OBu^t;

R₅ представляет собой H или , где X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃),

для получения на его основе конъюгатов с хелатирующими агентами проводят через получение тритретбутил производного конъюгата радикала ПСМА-связывающего лиганда и модифицированного гидрофобного пептидного линкера, включающего фрагменты 6-аминогексановой кислоты, фрагмент фенилаланина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производного, фрагмента тирозина, с конфигурацией оптического центра L или D, или его производного, c фрагментом N-Fmoc-1,3 пропандиамина общей формулы (IX)

где R₁ представляет собой H, OBu^t; R₂ представляет собой H, OBu^t; R₃ представляет собой H, OBu^t, NO₂, Br; X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

с последующим удалением Fmoc защитной группы соединения формулы (IX) с получением соединения общей формулы (X)

где R₁ представляет собой H, OBu^t; R₂ представляет собой H, OBu^t; R₃ представляет собой H, OBu^t, NO₂, Br; X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

при этом дальнейшая реакция которого с производным хелатирующего агента приводит к соединению (XI)

где R₁ представляет собой H, OBu^t; R₂ представляет собой H, OBu^t; R₃ представляет собой H, OBu^t, NO₂, Br; X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOBu^t, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

R₄ представляет собой хелатирующий агент,

с последующим удалением трет-бутильных защитных групп соединения формулы (XI) позволяет получить конъюгат ПСМА-связывающего лиганда и хелатирующего агента (XII)

где R₁ представляет собой H, OH; R₂ представляет собой H, OH; R₃ представляет собой H, OH, NO₂, Br; X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOH, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

R₄ представляет собой хелатирующий агент.

5. Применение соединения по п. 1 для получения конъюгата с лекарственным или диагностическим агентом.

6. Применение по п. 5, характеризующееся тем, что лекарственный или диагностический агент является средством для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген.

7. Применение по п. 6, характеризующееся тем, что лекарственным агентом является монометил ауристатин Е.

8. Применение по п. 6, характеризующееся тем, что таким заболеванием является рак предстательной железы.

9. Конъюгат соединения по п. 1 со средством для диагностики или лечения заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген, содержащий лекарственный или диагностический агент, общей формулы (XIII)

где R₁ представляет собой H, OH;

R₂ представляет собой H, OH;

R₃ представляет собой H, OH, NO₂, Br;

R₄ представляет лекарственный агент, выбранный среди препаратов, применяемых для лечения онкологических заболеваний, или диагностический агент;

X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOH, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

за исключением случаев, когда:

R₁ представляет собой H;

R₂ представляет собой H, OH;

R₃ представляет собой H, Br;

R₄ представляет лекарственный агент, выбранный среди препаратов, применяемых для лечения онкологических заболеваний, или диагностический агент;

R₅ представляет собой , где X₄=H; X₁, X₂, X₃, независимо друг от друга представляют собой H, Cl;

* - оптические центры, имеющие L- или D-конфигурацию независимо друг от друга;

или

R₅ представляет собой , где X₁=X₃=X₄= H; X₂= Cl или X₁=X₂=X₃= H; X₄= Cl;

R₁ = OH; R₂ = H; R₃ = H; R₄ представляет лекарственный агент, выбранный среди препаратов, применяемых для лечения онкологических заболеваний, или диагностический агент; конфигурация оптических центров (*) – D-, L-;

R₁ = H; R₂ = OH; R₃ = OH; R₄ представляет лекарственный агент, выбранный среди препаратов, применяемых для лечения онкологических заболеваний, или диагностический агент; конфигурация оптических центров (*) – L-, L-.

10. Конъюгат по п. 9, выбранный из группы:

11. Конъюгат соединения по п. 1 со средством для диагностики заболеваний, вызванных клетками, экспрессирующими простатический специфический мембранный антиген, содержащий диагностический агент, общей формулы (XIIII), где в качестве диагностического агента используют хелатирующие радиоизотопы

где R₁ представляет собой H, OH;

R₂ представляет собой H, OH;

R₃ представляет собой H, OH, NO₂, Br;

R₄ агент, хелатирующий радиоизотопы;

X₁, X₂, X₃, X₄ независимо друг от друга представляют собой H, NO₂, Cl, OCH₃, OC₂H₅, COOH, OH, N(CH₃)₂;

* - оптические центры имеют L- или D-конфигурацию независимо друг от друга.

12. Конъюгат по п. 11, выбранный из группы:

Images