RU2813699C2 - Плазминоген для лечения и профилактики микротромбоза - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к области медицины и касается профилактики и лечения тромботических явлений. Предлагается применение Glu-плазминогена в качестве активного соединения для получения фармацевтической композиции для профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм, причем тромботические явления представляют собой микротромбы кровеносных сосудов диаметром менее 0,5 мм. Предлагается также способ профилактики или лечения тромботического явления у пациента, в котором пациенту вводят достаточное количество Glu-плазминогена и в котором пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм, причем тромботические явления представляют собой микротромбы кровеносных сосудов диаметром менее 0,5 мм. Применение Glu-плазминогена эффективно для профилактики или лечения указанных выше тромботических явлений у пациента. 2 н. и 48 з.п. ф-лы, 12 табл., 7 пр., 17 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбы. Настоящее изобретение также относится к плазминогену (PLG) для применения в способе лизиса микротромбов и профилактики микротромбов у пациента, страдающего врожденным или приобретенным дефицитом плазменогена (PLG).

Тромботические явления, в частности микротромбы, могут вызвать серьезные проблемы со здоровьем. Например, коронарные инфаркты, инсульт и тромбоэмболия легочной артерии являются одними из основных причин смерти в развитых странах. Поэтому существует острая необходимость лечить и предотвращать тромботические явления. В частности, микротромбы, т.е. тромботические явления небольшого размера, в частности, возникающие в капиллярной системе, у пациента сложно поддаются лечению.

Формирование микротромботического явления может иметь различные причины, такие как, например, хирургическое вмешательство, такое как сосудистая хирургия (например, операция коронарного шунтирования), наличие эндопротеза (т.е. установка инородных тел/имплантатов или трансплантатов, например, эндопротез кровеносных сосудов/васкулярный) или травматическое повреждение при стенозе. Известно множество других причин.

Лечение тромбозов обычно заключается в приеме лекарственных средств. Чтобы предотвратить увеличение тромба, проводят ингибирование антикоагуляции. Используются препараты гепарина или ингибиторы фактора Ха. Когда рост сгустка прекращается, организм может начать убирать повреждение. Организм, как правило, разрушает сгусток и пытается снова освободить вены (восстановить их кровоснабжение). Это, как правило, занимает несколько дней, недель или даже месяцев, чем больше поражены участки венозной системы, тем дольше. При расщеплении сгустка и регенерации вен выделяются вещества, повышающие свертываемость крови.

В это время особенно высок риск возобновления/повторения тромботического явления. Поэтому часто избегают приема дополнительных антикоагулянтов. 4-гидроксикумарины, такие как фенпрокумон, варфарин или этилбискумацетат, используются в течение около от трех до шести месяцев. Применение кумаринов, как правило, требует регулярных анализов крови и особого внимания, потому что препараты предотвращают тромбоз, но также повышают склонность к кровотечению. Прежде всего, риск кровотечения из-за антикоагулянтной терапии все еще остается нерешенной проблемой в повседневной клинической практике. Несмотря на антитромботическую терапию, остаточная коагуляция при вышеуказанных заболеваниях все еще необходима. Во-первых, это необходимо для заживления ран после всех операций, чтобы остановить кровотечение в раны. Сам сгусток является основой для инвазии клеток, необходимых для восстановления тканей (фибробластов). Они используют фибриновую сеть, чтобы зажать рану, чтобы построить новые волокна коллагена, чтобы восстановить (построить) новую ткань. Заживление ран, как правило, проходит в через четыре фазы:

Фаза I - Фаза гемостаза: представляет собой процесс закрытия раны посредством свертывания. Гемостаз начинается при утечке крови из организма. Первой стадией гемостаза является сужение кровеносных сосудов для ограничения кровотока. Затем тромбоциты слипаются, чтобы закрыть разрыв в стенке кровеносного сосуда. Наконец, происходит коагуляция, которая укрепляет пробку тромбоцитов нитями фибрина, которые подобны молекулярному связывающему агенту. Стадия гемостаза заживления раны происходит очень быстро. Тромбоциты прикрепляются к поверхности субэндотелия в течение нескольких секунд после разрыва эпителиальной стенки кровеносного сосуда. После этого первые нити фибрина начинают слипаться примерно через шестьдесят секунд. Когда возникает фибриновая сетка, кровь превращается из жидкости в гель посредством прокоагулянтов и высвобождения протромбина. Образование тромба или сгустка удерживает тромбоциты и эритроциты в области раны. Тромб в целом важен на стадиях заживления ран, но становится проблемой, если он отделяется от стенки сосуда и проходит через систему кровообращения, что может вызвать инсульт, тромбоэмболию легочной артерии или сердечный приступ. Известно, что более быстрая деградация фибринового сгустка характеризует пациентов с центральной тромбоэмболией легочной артерии с низким риском рецидива периферической эмболии (см. Kupis et al, Scientific Reports, 2019, 9: 72).

Фаза II - Фаза воспаления: Воспаление представляет собой вторую стадию заживления раны, которая начинается сразу после травмы, когда из поврежденных кровеносных сосудов выходит транссудат (состоящий из воды, соли и белка), вызывая локальный отек. Воспаление контролирует кровотечение и предотвращает инфицирование. Накопление жидкости позволяет заживающим и восстанавливающим клеткам перемещаться к месту раны.

Во время воспалительной фазы поврежденные клетки, патогены и бактерии удаляются из области раны. Эти лейкоциты, факторы роста, питательные вещества и ферменты вызывают отек, жар, боль и покраснение, обычно наблюдаемые на этой стадии заживления раны. Воспаление является естественной частью процесса заживления ран и проблематично только при длительном или чрезмерном воздействии.

Фаза III - Фаза пролиферации: Фаза пролиферации заживления раны происходит, когда рана восстанавливается новой тканью, состоящей из коллагена и внеклеточного матрикса. В фазе пролиферации рана сокращается по мере образования новых тканей. Кроме того, необходимо построить новую сеть кровеносных сосудов, чтобы грануляционная ткань могла быть здоровой и получать достаточно кислорода и питательных веществ. Миофибробласты заставляют рану сокращаться, захватывая края раны и стягивая их вместе с помощью механизма, аналогичного механизму гладкомышечных клеток. На стадиях здорового состояния заживления раны грануляционная ткань имеет розовый или красный цвет и неровную текстуру. Кроме того, здоровая грануляционная ткань не кровоточит. Темная грануляционная ткань может быть признаком инфекции, ишемии или плохой перфузии. В заключительной фазе стадии пролиферации заживления раны эпителиальные клетки повторно покрывают рану. Важно помнить, что эпителизация происходит быстрее, если раны остаются влажными и увлажненными. Как правило, при наложении окклюзионных или полуокклюзионных повязок в течение 48 часов после травмы они будут поддерживать правильную влажность тканей для оптимизации эпителизации.

Фаза IV - Фаза созревания: также называемая стадией ремоделирования заживления ран, фаза созревания происходит, когда коллаген ремоделируется из типа III в тип I, и рана полностью закрывается. Клетки, которые использовались для восстановления раны, но которые больше не нужны, удаляются апоптозом или запрограммированной гибелью клеток. Когда коллаген откладывается в ходе фазы пролиферации, он дезорганизован и рана становится толстой. В ходе фазы созревания коллаген выравнивается по линиям натяжения, а вода реабсорбируется, поэтому волокна коллагена могут располагаться ближе друг к другу и сшиваться. Поперечное сшивание коллагена уменьшает толщину рубца, а также делает кожный покров раны более прочным. Как правило, ремоделирование начинается примерно через 21 день после травмы и может продолжаться в течение года или более. Даже при сшивании зажившие участки раны по-прежнему слабее, чем неповрежденная кожа, обычно имея только 80% прочности на разрыв от неповрежденной кожи.

Стадии заживления ран представляют собой сложный и непростой процесс. Отсутствие прогресса в стадиях заживления ран может привести к хроническим ранам. Факторами, ведущими к хроническим ранам, являются заболевания вен, инфекции, диабет и нарушение обмена веществ у пожилых людей. Несмотря на антикоагулянтную терапию, остаточная коагуляционная активность необходима для процесса заживления ран, а также для фибринолиза, который проходит параллельно с фазой пролиферации и созревания.

Большинство антикоагулянтов, известных в данной области техники, имеют серьезные недостатки и часто вызывают значительный риск для здоровья. Проблемы, касающиеся коагуляции, могут быть вызваны, например, неизвестной печеночной недостаточностью или передозировкой антикоагулянтных лекарственных средств. В настоящее время нет фокусировки на фибринолитический сайт. Наблюдение за обеими сторонами может помочь улучшить результаты лечения. Желательно улучшенное лечение.

Используемый в настоящее время tPA (тканевый активатор плазминогена или uРА (урокиназный)) применяется как непрямая терапия, требующая по меньшей мере нормального уровня плазминогена (PLG). tPA, как правило, активирует плазминоген (PLG) в плазмин. Он используется для растворения уже сформированного тромба, который может вызвать дополнительные повреждения тканей. Терапия может потерпеть неудачу, если имеется недостаточное количество плазминогена (PLG). Это было обнаружено примерно у трети всех пациентов при «лизисной терапии» (Stubblefield WB, Alves NJ, Rondina MT, Kline JA: Variable Resistance to Plasminogen (PLG) Activator Initiated Fibrinolysis for Intermediate-Risk Pulmonary Embolism. PLoS One. 2016 Feb 11; 11 (2): e0148747. doi: 10.1371/journal.pone.0148747. eCollection 2016.; Cullis JO, Chisholm M, AckeryDM: Unresolved pulmonary embolism: the role of fibrinolysis. Nucl Med Commun. 1993 Jan; 14 (1): 4-7).

Смеси разных типов плазминогена (PLG) также имеют существенные недостатки при введении пациенту.

В WO 2018/162754 раскрывается, что Glu-плазминоген может быть получен из плазмы крови и фракций плазмы, в частности из криосупернатантной плазмы, из криосупернатантной плазмы, обедненной посредством одной или двух стадий абсорбции (F IX/PCC или ингибитор C1-эстеразы), пасты I-II-III или пасты октановой кислоты и может служить эффективным фармацевтическим средством для лечения пациента, страдающего или подверженного риску развития омертвения органа.

В US 5597800 раскрывается лечение отека мозга с помощью Lys-плазминогена. Также описаны общие заместительные терапии введения плазминогена (PLG) (см. Shapiro et al., Blood, 2018, 131:1301-1310; Schott et al., The New England Journal of Medicine, 1998, 339: 1679-1686).

В WO 2017/077380 раскрывается восполняющую терапию плазмиом (плазминогеном). Этот документ не раскрывает профилактику или лечение микротромбов диаметром менее 1 мм. Более того, WO 2017/077380 не относится к Glu-плазминогену в контексте настоящего изобретения, поскольку плазмин (плазминоген), используемый в контексте WO 2017/077380, обладает значительной протеолитической активностью. В этом контексте WO 2017/077380 раскрывает, что плазминоген, используемый в изобретении согласно этому документу, разрушает фибрин (см. WO 2017/077380, стр. 25, строки 24 и 25, и стр. 30, строка 24). Напротив, Glu-плазминоген в контексте настоящего изобретения, в отличие от плазмина и Lys-плазминогена, (по существу) не имеет протеолитической активности.

В ЕР А 3395359 раскрывается способ профилактики и/или устранения артериального и венозного тромбоза у субъекта. Этот документ также не раскрывает профилактику или лечение микротромбов диаметром менее 1 мм. Кроме того, ЕР А 3395359 не относится к Glu-плазминогену. Напротив, плазминоген (PLG), как указано в ЕР А 3395359, обладает протеолитической активностью, тогда как Glu-плазминоген в контексте настоящего изобретения (по существу) не обладает протеолитической активностью. ЕР А 3395359 относится к белкам длиной 810 аминокислот, таких как плазминоген (PLG), то есть белок, отличный от Glu-плазминогена.

Однако до сих пор особенно сложно лечить и предотвращать микротромбы, т.е. тромботические явления небольшого размера диаметром менее 1 мм. Средства лечения тромбов в основном ориентированы на лечение тромбов большого размера после того, как они возникли. Однако также существует необходимость в профилактике тромботических явлений, а также лечения и профилактики микротромботических явлений у пациента.

Экспериментальным образом неожиданно было обнаружено, что плазминоген (PLG), в частности Glu-плазминоген, может быть очень эффективным для применения в способе профилактики или лечения тромботических явлений, в частности образования микротромбов, у пациента.

Настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG), в частности Glu-плазминогену, для применения в способе профилактики или лечения тромботического явления у пациента. Более конкретно, настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм.

Другими словами, настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где указанному пациенту вводят достаточное количество плазминогена (PLG), в частности Glu-плазминогена. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где указанному пациенту вводят достаточное количество плазминогена (PLG), и где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики микротромботического явления у пациента, где у пациента есть риск развития микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к плазминоген (PLG) для применения в способе лечения микротромботического явления у пациента, где пациент страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм.

Как правило, пациент страдает от или имеет риск развития множества микротромбов. Пациент страдает от или имеет риск развития по меньшей мере 10, по меньшей мере 50, по меньшей мере 100 микротромбов в ходе тромботического явления.

Согласно настоящему изобретению тромботическое явление представляет собой микротромб. В контексте настоящего изобретения термин "микротромб" (множество "микротромбов") можно понимать в самом широком смысле как любой тромб, имеющий максимальный диаметр в одном из пространственных направлений менее 1 мм (миллиметр), предпочтительно менее 0,9 мм, менее 0,8 мм, менее 0,7 мм, менее 0,6 мм, менее 0,5 мм, менее 0,4 мм, менее 0,3 мм, менее 0,2 мм или менее 0,1 мм. Следует понимать, что диаметр остальных пространственных направлений может необязательно независимо друг от друга быть больше или меньше. В целом будет понятно, что максимальным диаметром является теоретическая длина разреза при теоретическом разрезании микротромба, где он имеет наибольшую пространственную протяженность в этом направлении. Микротромб также может представлять собой нарушение микрокоагуляции.

Соответственно, согласно предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение также относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики или лечения микротромбоза у пациента.

Предпочтительно, микротромб имеет максимальные диаметры в двух из трех пространственных направлений менее 1 мм, предпочтительно менее 0,9 мм, менее 0,8 мм, менее 0,7 мм, менее 0,6 мм, менее 0,5 мм, менее 0,4 мм, менее 0,3 мм, менее 0,2 мм или менее 0,1 мм. Следует понимать, что диаметр оставшегося пространственного направления может необязательно быть больше или меньше.

Предпочтительно микротромб имеет максимальные диаметры во всех трех пространственных направлениях менее 3 мм, предпочтительно менее 2,5 мм, менее 2 мм, менее 1,5 мм, менее 1 мм или менее 0,5 мм, в частности при одновременном наличии максимальных диаметров в двух из трех пространственных направлений менее 1 мм, предпочтительно менее 0,9 мм, менее 0,8 мм, менее 0,7 мм, менее 0,6 мм, менее 0,5 мм, менее 0,4 мм, менее 0,3 мм, менее 0,2 мм или менее 0,1 мм.

Предпочтительно микротромб имеет максимальную плоскость среза менее 2 мм² (квадратный миллиметр), предпочтительно менее 1,5 мм², менее 1 мм², менее 0,9 мм², менее 0,8 мм², менее 0,7 мм², менее 0,6 мм², менее 0,5 мм², менее 0,4 мм², менее 0,3 мм², менее 0,2 мм² или менее 0,1 мм². В целом будет понятно, что максимальной плоскостью среза является теоретическая площадь поверхности среза при теоретическом разрезании микротромб там, где он имеет наибольшую пространственную протяженность.

На основе указанного выше, согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление представляет собой тромб кровеносного сосуда, имеющий диаметр менее 1 мм. Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление представляет собой тромб кровеносного сосуда имеющий диаметр менее 0,9 мм, менее 0,8 мм, менее 0,7 мм, менее 0,6 мм, менее 0,5 мм, менее 0,4 мм, менее 0,3 мм, менее 0,2 мм или менее 0,1 мм.

Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление представляет собой тромб капилляра. Согласно предпочтительному варианту осуществления микротромбы представляют собой микротромбы капилляров.

В общем, настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG) и его производным или комбинациям (Glu-плазминоген, Lys-плазминоген и/или плазмин). Структура и функция системы плазминоген (PLG)/плазмин в общем известны (см. Aisina and Mukhametova, Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2014, 40: 590-605).

Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) в контексте настоящего изобретения представляет собой Glu-плазминоген. Поэтому, в контексте настоящего изобретения, плазминоген (PLG) может быть уточнен как представляющий собой Glu-плазминоген. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой Lys-плазминоген. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой комбинацию Glu-плазминогена и Lys-плазминогена. В контексте настоящего изобретения Lys-плазминоген и Glu-плазминоген могут быть комбинированы в любой вариации. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой комбинацию Glu-плазминогена и Lys-плазминогена и одного или нескольких других производных плазминогена (PLG). В контексте настоящего изобретения Lys-плазминоген м Glu-плазминоген и одно или несколько других производных плазминогена (PLG) могут быть комбинированы в любой вариации.

Glu-плазминоген представляет собой профермент плазменного происхождения. Известно, что Glu-плазминоген (по существу) не обладает протеолитической активностью.

Предпочтительно вводимая пациенту композиция плазминогена (предпочтительно содержащая Glu-плазминоген) не имеет (по существу) протеолитической активности.

Такое (существенное) отсутствие протеолитической активности можно понимать в самом широком смысле, как обычно понимает специалист в данной области техники. Предпочтительно ферментативная активность вводимой пациенту композиции Glu-плазминогена и/или плазминогена (предпочтительно содержащей Glu-плазминоген) ниже 70 единиц (Ед, т.е., мкмоль/мин) на 1,0 г/л общего содержания белка, или ниже 10, ниже 9, ниже 8, ниже 7, ниже 6, ниже 5, ниже 2, ниже 1, ниже 0,5, ниже 0,1 или ниже 0,01 Ед на 1,0 г/л общего содержания белка. В этом контексте протеолитическую активность можно определить любыми способами. Например, это может быть активность, определенная с помощью анализа протеолитической активности S 2288 (Chromogenix). Альтернативно, она также может быть определена как разложение фибрина до D-димеров. Удельную ферментативную активность плазмина можно определить как разложение фибрина до D-димеров. Предпочтительно протеолитическая активность композиции Glu-плазминогена и/или плазминогена (предпочтительно содержащей Glu-плазминоген), вводимой пациенту, ниже предела обнаружения анализа.

Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция плазминогена, вводимая пациенту, содержит Glu-плазминоген при чистоте по меньшей мере 90% (мас./мас.), по меньшей мере 95% (мас./мас.), по меньшей мере 97% (мас./мас.), по меньшей мере 98% (мас./мас.), по меньшей мере 99% (мас./мас.), по меньшей мере 99,5% (мас./мас.), по меньшей мере 99,7% (мас./мас.), по меньшей мере 99,8% (мас./мас.) или по меньшей мере 99,9% (мас./мас.), на основе общего содержания белка.

Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция плазминогена (предпочтительно содержащая Glu-плазминоген), вводимая пациенту, не содержит или содержит только очень низкое содержание эндотоксина ниже 1 МЕ/мл, ниже 0,5 МЕ/мл, ниже 0,1 МЕ/мл, ниже 0,05 МЕ/мл или ниже 0,01 МЕ/мл (как определено в эндохромном анализе endosafe лизата амебоцитов Limulus (LAL) согласно European Pharmacopeia (версия 5.0), глава 2.6.14).

Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция плазминогена (предпочтительно содержащая Glu-плазминоген), вводимая пациенту, не содержит или содержит только очень низкое содержание иммуноглобулинов ниже 5 г/л, ниже 2 г/л, ниже 1 г/л, ниже 0,5 г/л или ниже 0,1 г/л иммуноглобулинов (как определено в нефелометрическом анализе).

Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция плазминогена (предпочтительно содержащая Glu-плазминоген), вводимая пациенту, не содержит или содержит только очень низкое содержание Lys-плазминогена. Согласно предпочтительному варианту осуществления композиция плазминогена (предпочтительно содержащая Glu-плазминоген), вводимая пациенту, не содержит или содержит только очень низкое содержание альбумина.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает приобретенным дефицитом плазминогена (PLG), вызванным повышенным потреблением плазминогена (PLG), снижением биосинтеза Glu-плазминогена или сочетанием того и другого. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает приобретенным дефицитом Glu-плазминогена, вызванным повышенным потреблением Glu-плазминоген, сниженным биосинтезом Glu-плазминогена или сочетанием того и другого.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает приобретенным дефицитом плазминогена (PLG). Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает приобретенным дефицитом плазминогена (PLG), вызванным повышенным потреблением плазминогена (PLG) (потребление гипофибринолиза). Потребление плазминогена (PLG) может быть связано с преобразованием плазминогена (PLG) в плазмин. Это может иметь любую причину, например, длительную активацию фибринолитической системы, например, из-за образования сгустка и/или повреждения одного или нескольких кровеносных сосудов во внутренней оболочке.

Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой Glu-плазминоген, и пациент страдает приобретенным дефицитом Glu-плазминогена. Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой Glu-плазминоген, и пациент страдает приобретенным дефицитом Glu-плазминогена, вызванным повышенным потреблением Glu-плазминогена.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает сниженным биосинтезом плазминогена (PLG). Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает сниженным биосинтезом Glu-плазминогена. Например, такой сниженный биосинтез может быть вызван сниженной экспрессией информационной рибонуклеиновой кислоты (мРНК), кодирующей плазминоген (PLG), в частности Glu-плазминоген, ошибочным сплайсингом такой мРНК, сниженной трансляцией мРНК в соответствующий полипептид, ускорением внутриклеточной деградации мРНК и/или соответствующего полипептида или комбинации двух или более из них.

В контексте настоящего изобретения термины «увеличенный» и «уменьшенный» относятся к сравнению со средним значением для здоровой популяции. Предпочтительно «увеличенный» может быть значением, которое на по меньшей мере 5%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 50% или в по меньшей мере 2 раза выше, чем в среднем у здоровой популяции. Предпочтительно «уменьшенное» может быть значением, которое на по меньшей мере 5%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 25% или по меньшей мере 50% ниже, чем в среднем у здоровой популяции.

В контексте настоящего изобретения приобретенный дефицит (Glu-)плазминогена может пониматься в самом широком смысле как нехватка (Glu-)плазминогена, как например, приобретенная в ходе жизни пациентов. Таким образом, такой дефицит (Glu-)плазминогена отличается от врожденного дефицита (Glu-)плазминогена. Предпочтительно, приобретенный дефицит (Glu-)плазминогена вызван повышенным потреблением плазминогена (PLG). Такое потребление плазминогена (PLG) может быть вызвано событиями в организме пациента, как описано в настоящем документе.

Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG), в контексте настоящего изобретения, имеет более низкую протеолитическую активность, чем плазмин. Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG), в контексте настоящего изобретения, имеет низкую протеолитическую активность или не имеет ее. Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG), в контексте настоящего изобретения, не имеет (по существу) протеолитической активности. Высокая протеолитическая активность может быть вызвана активными ферментами, такими как tPA, плазмин или другими активными протеазами, которые предпочтительно улавливаются в процессе очистки. Другими словами, плазминоген (PLG), в контексте настоящего изобретения, предпочтительно (по существу) не содержит протеолитический ингредиент. Плазминоген (PLG), в контексте настоящего изобретения, предпочтительно (по существу) не содержит tPA, плазмин или другие активные протеазы.

Селективное использование Glu-плазминогена особенно выгодно в контексте настоящего изобретения. Свертывание крови уравновешивается двумя ингибиторами, антитромбином III и кофактором гепарина II. Образовавшиеся фибриновые сгустки удаляются только путем активации фибринолитической системы. Активация фибринолитической системы зависит от активации плазмина. Плазма человека содержит плазминоген (PLG) в нескольких формах активации, начиная с Glu-плазминогена (нативный), Lys-плазминогена (слегка активирован) и плазмина в активированной форме. Активация нативного Glu-плазминогена через uPA, tPA в Glu-плазмин у здорового индивидуума является ключевым механизмом (Strieker, R.В.; Wong, Activation of plasminogen (PLG) by tissue plasminogen (PLG) activator on normal and thrombasthenic platelets: effects on surface proteins and platelet aggregation. Blood 1986, S. 275 280).

Стрептокиназа или урокиназа используются в терапевтических целях для достижения тромболизиса при различных тромбогенных явлениях (Kunamneni, A.; Durvasula, R. Streptokinase-A Drug for Thrombolytic Therapy: A Patent Review. Recent advances in cardiovascular drug discovery 2014, S. 106 121; Takada, Akikazu; Takada, Yumiko, Activation pathway of Glu-plasminogen to Lys-plasmin by urokinase. Thrombosis research 1982, S. 671-677). Фибринолиз запускается из-за активации плазминогена (PLG), что приводит к расщеплению плазминогена (PLG) на плазмина [Wohl, R.С.; Kinetics of activation of human plasminogen (PLG) by different activator species at pH 7.4 and 37 degrees C, The Journal of Biological Chemistry 1980, S. 2005-2013]. Таким образом, известны три различных механизма активации [Fredenburgh, J.С.; Nesheim, М.Е. Lys-plasminogen is значительный intermediate in the activation of Glu-plasminogen during fibrinolysis in vitro. The Journal of Biological Chemistry 1992, S. 26150 26156]. Плазминоген (PLG) обладает высокой аффинностью связывания с клетками эндотелия и фибриновыми сгустками. Дополнительное связывание тканевого активатора (tPA) плазминогена (PLG) приводит к активации и формированию плазмина. Последний механизм иллюстрируется связыванием плазминогена (PLG) на поверхности клетки, который активируется tPA в плазмин [Strieker, R.В.; Wong, Activation of plasminogen (PLG) by tissue plasminogen (PLG) activator on normal and thrombasthenic platelets: effects on surface proteins and platelet aggregation. Blood 1986, S. 275-280]. Эта терапия может быть успешной только в том случае, если целевой для лекарственного средства плазминоген (PLG) достаточно доступен в кровообращении и сайте тромба в достаточном количестве.

Плазминоген (PLG) представляет собой зимоген, который после частичного расщепления активаторами плазминогена (PLG), такими как тканевый активатор плазминогена (PLG) [tPA] или урокиназный активатор плазминогена (PLG) [uРА], преобразуется в протеолитически активную форму, плазмин [РМ]. РМ является ключевым белком фибринолитической системы, так как он может разлагать фибрин, присутствующий в фибриновых сгустках, продукте коагуляции, до растворимых продуктов/фрагментов разложения фибрина, что приводит к растворению сгустка. Образование плазмина происходит преимущественно на поверхности фибрина, что предлагает сайты связывания для плазминогена (PLG) и tPA. Это связывание стимулирует активацию плазминогена (PLG), но также локализует действие плазмина на участки образования фибрина, что способствует эффективному лизису сгустка. Активированный плазмин представляет собой ключевой фермент фибринолитической системы. Таким образом, пока плазмин связан с матрицей фибринового сгустка, он не ингибируется контрольным ингибитором альфа-2-антиплазмином (А2АР), но высвобождаемый плазмин мгновенно ингибируется. Свободный плазмин имеет очень короткий период полураспада в плазме 0,1 сек. Период полураспада Glu-плазминогена и альфа-2-антиплазмина (А2АР) составляет 50 часов. Напротив, Lys78-плазминоген (PLG) имеет период полураспада только 20 часов [Fredenburgh, J.С.; Nesheim, М.Е. Lys-plasminogen is a significant intermediate in the activation of Glu-plasminogen during fibrinolysis in vitro. The Journal of Biological Chemistry 1992, S. 26150 26156]. Плазмин проявляет преимущественное расщепление на карбоксильной стороне остатков лизина и аргинина с более высокой селективностью, чем трипсин. Превращает полимеризованный фибрин в растворимые продукты [Castellino, Francis J.; Ploplis, Victoria A. Structure and function of the plasminogen (PLG)/plasmin system. Thrombosis and Haemostasis 2005, S. 647-654].

В контексте настоящего изобретения термин «пациент» может пониматься в самом широком смысле как любое живое существо, которым является, в первую очередь, любое животное, более предпочтительно млекопитающее, включая человека, в частности человека. Следует понимать, что плазминоген (PLG), как правило, относится к тому же виду, что и пациент, подлежащий лечению, во избежание нежелательных иммуногенных побочных реакций. Необязательно, пациент также может страдать или может подвергаться риску развития нарушения, выбранного из группы, состоящей из органной недостаточности (например, органной недостаточности почек (например, острого повреждения/недостаточности почек (AKI), сердца, легких, головного мозга и вены), обструктивного заболевания артерий, нарушения микроциркуляции, генерализованного тромбогеморрагического синдрома (DIC) и сочетания двух или более из них, с конечным результатом недостаточности конкретного органа.

В контексте настоящего изобретения генерализованный тромбогеморрагический синдром (DIC) может представлять собой микроциркуляцию. Тогда он также может быть обозначен как генерализованная внутрисосудистая микрокоагуляция.

Пациент может страдать или не страдать системным заболеванием. В контексте настоящего изобретения термин «страдающий от» может пониматься в самом широком смысле, означающем, что у пациента развилось патологическое состояние, связанное с нарушением, связанным с тромботическим явлением. Этот пациент предпочтительно получает лечение плазминогеном (PLG). Необязательно, пациент может страдать состоянием, выбранным из группы, состоящей из органной недостаточности, тромботического явления, обструктивного заболевания артерий, микро циркуляции, генерализованного тромбогеморрагического синдрома (DIC-синдром) и комбинации двух или более из них, в частности, органной недостаточностью, т.е., такое нарушение есть у пациента. Согласно предпочтительному варианту осуществления термин «страдающий от» в контексте настоящего изобретения может пониматься в самом широком смысле, означающем, что у пациента развилось патологическое состояние, связанное с тромботическим явлением. Пациент, страдающий нарушением, необязательно, но может необязательно иметь медицинские симптомы, такие как, например, один или несколько симптомов, выбранных из группы, состоящей из нарушений кислотно-основного равновесия (например, респираторный алкалоз или лактоацидоз), олигурии (даже анурия), гипергликемии, повышенной потребности в инсулине, тахипноэ, гипокапнии, гипоксемии, дисфункции печени, гематологического нарушения, азотемии, нарушения свертываемости и ишемического колита.

Как указано выше, настоящее изобретение также относится к профилактике тромботического явления. У таких пациентов риск развития (микро)тромботических нарушений значительно снижается посредством плазминогена (PLG). Термин «имеется риск развития» означает, что у пациента повышенная вероятность получить тромботическое явление по сравнению со средней вероятностью для популяции того же вида. Более предпочтительно риск по меньшей мере в 5 раз увеличивается, еще более предпочтительно риск по меньшей мере в 10 раз увеличивается, еще более предпочтительно риск по меньшей мере в 100 раз увеличивается, даже более предпочтительно по меньшей мере в 1000 раз увеличивается.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики или лечения тромботических явлений у пациента, где указанный пациент страдает нарушением, выбранным из группы, состоящей из органной недостаточности, тромботического явления, обструктивного заболевания артерий, микроциркуляции, генерализованного тромбогеморрагического синдрома (DIC) и сочетания двух или нескольких из них, в частности органной недостаточностью.

В контексте настоящего изобретения тромботическим явлением может быть любое образование тромба внутри кровеносного сосуда. Такое тромботическое явление может затруднить кровоток по кровеносной системе. Это может привести к некрозу ткани, снабжаемой кровеносным сосудом (также обозначаемому как некроз). Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление может быть выбрано из группы, состоящей из тромбоза глубоких вен (DVT, например, в ногах, тромбоз тазовых вен), тромбоза при эмболии (например, хронической или острой эмболии органа (например, легочной эмболии/эмболия легких)), тромбоза при инфаркте (например, инфаркт миокарда, почек, инсульты, окклюзия вены сетчатки), тромбоза при генерализованном тромбогеморрагическом синдроме (DIC) и тромбоцитопенического акроангиотромбоза (ТТР).

Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление представляет собой приобретенное тромботическое явление. Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление связано с дефицитом плазминогена (PLG) (например, приобретенный дефицит плазменогена (PLG), временный дефицит плазминогена (PLG) или хронический дефицит плазменогена (PLG)). Такой дефицит плазминогена (PLG) может быть необязательно вызван постоянным потреблением плазминогена (PLG) в кровотоке, (частично) закрытом атеросклеротическими бляшками или закрытом до стеноза артерий или других кровеносных сосудов. Такой дефицит плазминогена (PLG) можно просто наблюдать либо путем измерения активности плазмина (после активации, например, урокиназой), либо с помощью количественного иммунного обнаружения плазминогена (PLG).

Плазминоген (PLG) может быть использован как средство прямого лечения. Используемый в настоящее время tPA (тканевый активатор плазминогена (PLG) или uРА (урокиназный)) используется в качестве непрямой терапии, требующей по меньшей мере нормального уровня плазминогена (PLG). tPA может активировать плазминоген (PLG) в плазмин. Это может быть использовано для растворения уже сформированного тромба, что может вызвать последующие дополнительные повреждения тканей. Низкие уровни плазминогена (PLG) в этих случаях могут быть вызваны потреблением белка плазминогена (PLG), в частности белка Glu-плазминогена, in vivo. Было обнаружено, что у пациента с микротромботическими явлениями часто наблюдается низкая концентрация плазминогена (PLG) в плазме в течение первых 48 часов после (микро)тромботического явления. После инъекции плазминогена (PLG) общий уровень плазминогена (PLG) увеличился за период времени в экспериментальной мышиной модели. Вполне вероятно, что он может вести себя аналогичным образом у других млекопитающих, включая человека. Кроме того, не только измерение плазминогена (PLG) может быть решающим, но и количество альфа-2-антиплазмина. Повышенное количество альфа-2-антиплазмина может ингибировать доступные молекулы плазминогена (PLG). Кроме того, в этом случае инъекция плазминогена (PLG) может уравновесить высокую концентрацию альфа-2-антиплазмина и может привести к улучшению в течение критических первых 48 часов состояния.

Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление представляет собой тромб кровеносного сосуда почки, имеющий диаметр менее 1 мм. Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическим явлением является тромб кровеносного сосуда, имеющий диаметр менее 1 мм, то есть капилляра почки. Соответственно, согласно предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение также относится к плазминогену (PLG) для применения в способе профилактики или лечения микротромбоза в почке пациента.

Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов. Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов, приводящий к тромбозу. Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов, приводящий к тромбозу крупных кровеносных сосудов. Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов, приводящий к эмболизации. Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов, приводящий к эмболизации крупных кровеносных сосудов. Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития микротромбов, приводящий к тромбозу или эмболизации крупных кровеносных сосудов.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент имеет риск развития или страдает от патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из стеноза артерий, вен, артериол, венул, капилляров, или спазмов в артериях, венах, артериолах, венулах, капиллярах, приводящих к таким заболеваниям, как липопротеиновая (а) анемия, дефицит железа, дефицит витамина D, дефицит витамина K, дефицит витамина Н, анемия, гомоцистеинемия, дефицит белка Z, эмболия, инсульт, инфаркт миокарда, носовое кровотечение, гиперменорея, синдром фон Виллебранда, Синдром Жильбера, нарушение функции печени, антифосфолипидный синдром, мигрень, дисфункция щитовидной железы, прерывание беременности, терапевтические неудачи лизисной терапии с использованием активаторов плазминогена (PLG) и комбинации двух или более из них.

Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента более низкий уровень плазминогена (PLG) в крови, в частности Glu-плазминогена, чем уровень плазминогена (PLG) в крови, в частности Glu-плазминоген, обнаруживаемый у популяции того же вида.

Такой более низкий уровень плазминогена (PLG) в крови, в частности Glu-плазминогена, может быть вызван любой причиной. Согласно предпочтительному варианту осуществления более низкий уровень плазминогена (PLG) в крови, в частности Glu-плазминогена, вызван одной или несколькими причинами, выбранными из группы, состоящей из высокого физиологического или патологического потребления плазминогена (PLG), в частности Glu-плазминогена, высокой скорости выведения плазминогена (PLG), низкого уровня экспрессии плазминогена (PLG) и присутствия высоких уровней одного или нескольких ингибиторов плазминогена (PLG), в частности Glu-плазминогена.

Необязательно, образование микротромбов может быть вызвано состоянием гиперкоагуляции, присутствующим в течение некоторого времени, что приводит к потреблению плазминогена (PLG) (в частности плазминогена (PLG)), или может быть вызвано гипофибринолитическим состоянием, вызванным непрерывным развитием микро- и/или макротромбов или присутствуют и того и другого, что необязательно может привести к потреблению плазминогена (PLG).

Ингибитором плазмина (плазминогена) может быть любое химическое соединение, ингибирующее активность плазмин (плазминогена) и/или снижающее уровень плазминогена (PLG) в крови. Например, ингибитором плазминогена (PLG) может быть альфа-2-антиплазмин. Это дополнительно описано в WO 2018/162754. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент характеризуется тем, что:

(a) соотношение альфа-2-антиплазмина и плазминогена (PLG) (предпочтительно плазминогена (PLG)), обнаруживаемое в крови пациентов по меньшей мере в 1,1 раз выше по сравнению со средним соотношением, обнаруживаемым у популяции того же вида, и/или

(b) уровень плазминогена (PLG) (предпочтительно плазминогена (PLG)) в крови пациента на по меньшей мере 1% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида.

Предпочтительно, соотношение альфа-2-антиплазмина и плазминогена (PLG) (предпочтительно плазминоген (PLG)), обнаруживаемое в крови пациента, в по меньшей мере 1,15 раз выше, более предпочтительно по меньшей мере 1,2 раз выше, в частности по меньшей мере 1,25 раз выше, по сравнению со средним соотношением, обнаруживаемым у популяции того же вида.

Предпочтительно уровень плазминогена (PLG) (предпочтительно плазминоген (PLG)) в крови пациента на по меньшей мере 2% (мол./мол.) ниже, более предпочтительно по меньшей мере 5% (мол./мол.) ниже, в частности по меньшей мере 10% (мол./мол.), по меньшей мере 20% (мол./мол.), по меньшей мере 30% (мол./мол.), по меньшей мере 40% (мол./мол.) или по меньшей мере 50% (мол./мол.) ниже, по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида.

Согласно предпочтительному варианту осуществления уровень плазминогена (PLG) в крови пациента определен, и в случае, когда определенный уровень плазминогена (PLG) на по меньшей мере 10% (мол./мол.)), по меньшей мере 20% (мол./мол.), по меньшей мере 30% (мол./мол.), по меньшей мере 40% (мол./мол.) или по меньшей мере 50% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида, пациенту вводят достаточное количество плазминогена (PLG) для профилактики или лечения тромботического явления.

У пациента могут быть или отсутствовать какие-либо клинические симптомы. У пациента могут быть или отсутствовать ишемические области. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, что приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения плазминогена (PLG) указанному пациенту.

Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) представляет собой Glu-плазминоген, и пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту.

В этом случае, предпочтительно, введение плазминогена (PLG) в соответствии с настоящим изобретением может по меньшей мере частично предотвратить или растворить тромботический сгусток. В этом случае, предпочтительно, введение плазминогена (PLG) в соответствии с настоящим изобретением может по меньшей мере частично предотвратить некроз. Такой некроз из-за недостаточного кровоснабжения пораженного участка также может быть обозначен как омертвение.

Инфаркт может пониматься в самом широком смысле как отмирание ткани (некроз) из-за недостаточного кровоснабжения пораженного участка.

Тромботическое явление может быть вызвано любой причиной. Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление вызвано инфарктом, гиперхолестеринемией или и тем, и другим.

Кроме того, закупорка артериального пути тромбами может привести к инфаркту в последовательном пути в зависимых органах (головном мозге, сердце, почках, желудочно-кишечном тракте и т.д.). Согласно предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление вызвано инфарктом, вызванным любой причиной, типичной в патогенезе инфаркта, разрывом атеросклеротической бляшки, содержащей кристаллы холестерина, вызванные гиперхолестеринемией, или и тем и другим.

Инфаркт может пониматься в самом широком смысле как смерть ткани (некроз) из-за недостаточной подачи крови и кислорода к пораженному участку. Инфаркт может быть любым инфарктом, таким как, например, инфаркт миокарда, инфаркт почки, инсульт и т.д.

Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление вызвано по меньшей мере одним из следующего: хирургическое вмешательство, такое как сосудистая хирургия (например, операция коронарного шунтирования), эндопротезирование (т.е. введение инородных тел, например, эндопротез кровеносного сосуд/сосудистый эндопротез), аневризма, стеноз и травматические повреждения. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления тромботическое явление связано с раком, травмой, отсутствием движений, ожирением, курением, гормональными противозачаточными средствами, беременностью и периодом после родов, антифосфолипидным синдромом и некоторыми генетическими состояниями. Генетические факторы риска могут включать дефицит антитромбина, белка С и белка S, а также лейденовскую мутацию фактора V, а также прием системных противозачаточных средств, особенно в сочетании с курением, гиподинамией, особенно длительным лежанием в больном состоянии, ожирением, обезвоживанием (эксиккоз), раком, тромбозом в прошлом, беременностью.

Пациент может страдать одним тромботическим явлением или несколькими тромботическими явлениями. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает более чем одним тромботическим явлением. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления пациент страдает одним тромботическим явлением.

Плазминоген (PLG) может быть получен из любого источника. Он может быть получен из коммерческого источника или может быть получен любыми средствами. Например, он может быть получен как описано в WO 2018/162754. Он может быть получен из плазмы крови и фракций плазмы, в частности из криосупернатантной плазмы, из криосупернатантной плазмы, обедненной посредством одной или двух стадий абсорбции (F ГХ/РСС или ингибитор С1-эстеразы), пасты I-II-III или пасты октановой кислоты, как описано в WO 2018/162754.

Плазминоген (PLG) может быть введен пациенту любым способом. Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) вводят пациенту системно. Согласно предпочтительному варианту осуществления плазминоген (PLG) вводят пациенту путем введения, выбранным из группы, состоящей из внутривенной (i.v.), внутриартериальной (i.a.), внутричерепной (i.e.), внутрибрюшинной (i.p.), внутримышечной (i.m.) и подкожной (s.c.) инъекции, в частности, путем введения, выбранным из группы, состоящей из внутривенной (i.v.), внутримышечной (i.m.) и подкожной (s.c.) инъекции. Альтернативно или дополнительно фармацевтическая композиция может также быть подходящей для других способов введения, таких как, например, назальное или транедермальное введение.

Для введения плазминоген (PLG) может быть включен в фармацевтическую композицию, т.е. объединен с по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем. Термины «фармацевтическая композиция» и «фармацевтический состав» могут пониматься как взаимозаменяемые. В контексте настоящего изобретения термины «фармацевтически приемлемый носитель», «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество», «носитель» и «вспомогательное вещество» могут пониматься взаимозаменяемо в самом широком смысле как любое вещество, которое может поддерживать фармакологическое восприятие плазминогена (PLG). Такая фармацевтическая композиция может быть готова к использованию и может предпочтительно быть жидким составом, в частности, частью для инъекции. Форма для хранения также может быть жидкой, но также может быть высушенной формой (например, порошком, таким как порошок, включающим высушенный или лиофилизированный плазминоген (PLG)), или может быть пастой, сиропом и т.п. Необязательно, высушенная форма, паста или сироп могут быть растворены или эмульгированы перед введением пациенту.

Фармацевтически приемлемый носитель, например, может быть выбран из перечня, состоящего из водного буфера, физиологического раствора, воды, диметилсульфоксида (DMSO), этанола, растительного масла, парафинового масла или комбинаций двух или более из них. Кроме того, фармацевтически приемлемый носитель может необязательно содержать один или несколько детергентов, один или несколько пенообразователей (например, лаурилсульфат натрия (SLS), доцеилсульфат натрия (SDS)), один или несколько красителей (например, пищевой краситель), один или несколько витаминов, одну или несколько солей (например, соли натрия, калия, кальция, цинка), один или несколько увлажнителей (например, сорбит, глицерин, маннит, пропиленгликоль, полидекстроза), один или несколько ферментов, один или несколько консервантов (например, бензойная кислота, метилпарабен), один или несколько антиоксидантов, один или несколько травяных и растительных экстрактов, один или несколько стабилизаторов, один или несколько хелатирующих агентов (например, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) и/или один или несколько медиаторов поглощения (например, полиэтиленимин (PEI), проникающий в клетки пептид (СРР), домен трансдукции белка (PTD), антимикробный пептид и тому подобное).

Настоящее изобретение также относится к единице дозы фармацевтической композиции, используемой в контексте лечения или профилактики согласно настоящему изобретению. Например, настоящее изобретение может относиться к контейнеру однократной дозы или к многократной лекарственной форме.

Диапазон доз можно отрегулировать в соответствии с предполагаемым использованием. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз при дозе плазминогена (PLG) в интервале от 0,.01 до 100 мг/кг массы ела.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз при дозе плазминогена (PLG) в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз при дозе плазминогена (PLG) в интервале от 0,01 до 0,1 мг/кг массы тела, от 0,05 до 0,5 мг/кг массы тела, от 0,1 до 1 мг/кг массы тела, от 0,5 до 5 мг/кг массы тела, от 1 до 10 мг/кг массы тела или от 1 до 100 мг/кг массы тела.

Согласно предпочтительному варианту осуществления однократная доза, вводимая внутривенно находится в интервале от 0,01 до 1 мг/кг. Предпочтительно, однократная доза, вводимая внутривенно находится в интервале от 0,02 до 0,9 мг/кг, от 0,03 до 0,8 мг/кг, от 0,04 до 0,7 мг/кг, от 0,05 до 0,5 мг/кг, от 0,1 до 0,4 мг/кг или от 0,25 до 0,35 мг/кг.

Согласно предпочтительному варианту осуществления однократная доза, вводимая внутримышечно находится в интервале от 0,05 до 10 мг/кг. Предпочтительно, однократная доза, вводимая внутримышечно находится в интервале от 0,1 до 9 мг/кг, от 0,2 до 8 мг/кг, от 0,3 до 7 мг/кг или от 0,5 до 5 мг/кг.

Согласно предпочтительному варианту осуществления однократная доза, вводимая подкожно находится в интервале от 0,1 до 100 мг/кг. Предпочтительно, однократная доза, вводимая подкожно находится в интервале от 0,5 до 90 мг/кг, от 1 до 80 мг/кг, от 2 до 70 мг/кг или от 5 до 50 мг/кг.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз за 24 часа после наступления тромботического явления. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз за двенадцать часов или по меньшей мере за шесть, пять или четыре часа после наступления тромботического явления.

Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят в течение одной недели до того, как он подвергнется событию высокого риска развития тромботического явления.

В другом альтернативном предпочтительном варианте осуществления пациенту вводят на регулярной основе, когда существует риск развития тромботического явления.

В контексте настоящего изобретения термин «на регулярной основе» может пониматься в самом широком смысле как продолжающийся в течение периода времени по меньшей мере неделю, по меньшей мере месяц, по меньшей мере шесть месяцев или по меньшей мере год.

Таким событием высокого риска развития тромботического явления может быть любое событие, повышающее риск у пациента получить тромботическое явление. Согласно предпочтительному варианту осуществления таким событием является хирургическое вмешательство.

В этом контексте хирургическим вмешательством может быть любое хирургическое вмешательство, в частности сосудистая хирургия. В контексте настоящего изобретения сосудистую хирургию можно понимать в самом широком смысле как операцию, выбранную из операции шунтирования (например, операции коронарного шунтирования), эндопротеза (т.е. введения инородных тел, например, эндопротез кровеносных сосудов/васкулярный), в случае аневризмов, стенозные травмы и последующие хирургические вмешательства на сосудах. В этих случаях также может существовать риск повторного тромбоза, вызванного поверхностями раны внутри кровеносного сосуда, эндопротезом и т.д. Они могут активировать каскад коагуляции, приводящий к образованию тромба. Чтобы закрыть эти риски после активации каскада свертывания, профилактическое введение плазминогена (PLG) неожиданно оказалось успешным.

Другие дополнительные или альтернативные факторы риска развития тромботического явления могут включать: рак, травму, отсутствие движений, ожирение, курение, гормональные противозачаточные средства, беременность и период после родов, антифосфолипидный синдром и определенные генетические состояния. Генетические факторы риска могут включать дефицит антитромбина, белка С и белка S, а также лейденовскую мутацию фактора V. Основной механизм может включать в себя некоторую комбинацию снижения скорости кровотока, повышенной тенденции к свертыванию и повреждения стенки кровеносного сосуда.

К другим дополнительным или альтернативным факторам риска развития тромботического явления могут относиться пероральные контрацептивы («таблетки», особенно в данном случае с пониженным содержанием эстрогена или без эстрогена), особенно в сочетании с курением, недостаточной физической активностью, особенно длительным пребыванием в больном состоянии, ожирением, обезвоживание (эксиккоз), раком, тромбозом в прошлом, беременностью. Чаще всего от тромбоза глубоких вен страдают ноги. Тогда говорят о тромбозе верхней или нижней вены ноги. Если поражены и икра, и подколенная ямка, и бедро, это называется многоуровневым тромбозом. Тромбоз тазовых вен встречается реже, но более опасен из-за размера сосуда и более высокого риска тромбоэмболии легочной артерии. У беременных женщин есть риск тромбоза тазовых вен, когда сгусток может раствориться после родов из-за отсутствия сжатия матки и может привести к тромбоэмболии легочной артерии, которая может быть фатальной. Еще одним осложнением тромбоза как такового и DVT, в частности, является генерализованный тромбогеморрагический синдром (DIC).

Пациенту можно вводить плазминоген (PLG) по любой схеме приема.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней. Предпочтительно, пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени по меньшей мере неделя, в течение по меньшей мере двух недель, в течение по меньшей мере четырех недель, в течение по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят внутривенно плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, по меньшей мере недели, в течение по меньшей мере двух недель, в течение по меньшей мере четырех недель, в течение по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. В этом контексте однократная доза может быть однократной доза в любом диапазоне доз. Согласно предпочтительному варианту осуществления введение однократной доза может быть в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг тела. В настоящем документе описаны другие предпочтительные диапазоны доз.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, где введением является внутривенное введение, где внутривенное введение может представлять собой однократную дозу в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела. В настоящем документе описаны другие предпочтительные диапазоны доз.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно, где введением является внутриартериальное введение, в частности внутриартериальное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно введением является внутричерепное ведение, в частности внутричерепное ведение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз каждые два дня в течение периода времени трех или более дней. Предпочтительно, пациенту вводят плазминоген (PLG) каждые два дня в течение периода времени по меньшей мере недели, в течение по меньшей мере двух недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят внутримышечно или внутривенно, в частности внутримышечно, плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, по меньшей мере недели, в течение по меньшей мере двух недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. В этом контексте однократной дозой может быть однократная доза любом диапазоне доз. Согласно предпочтительному варианту осуществления введение однократной дозы может быть в каждом случае в интервале от 0,05 до 10 мг/кг массы тела. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз в день в течение периода времени трех или более дней, где введением является внутримышечное введение, где внутримышечное введение однократной дозы в каждом случае может быть в интервале от 0,05 до 10 мг/кг массы тела. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз каждую неделю в течение периода времени трех или более недель. Предпочтительно, пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз каждую неделю в течение периода времени по меньшей мере двух недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят подкожно плазминоген (PLG) один раз каждую неделю в течение периода времени трех или более недель, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере двух месяцев или по меньшей мере года. В этом контексте однократной дозой может быть однократная доза в любом диапазоне доз. Согласно предпочтительному варианту осуществления введение однократной дозы в каждом случае лежит в интервале от 0,1 до 100 мг/кг массы тела. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят плазминоген (PLG) один раз каждую неделю в течение периода времени трех или более недель, где введением является подкожное введение однократной дозы в интервале от 0,1 до 100 мг/кг массы тела. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят дозу подходящую для замещения не более 15% от нормального количества плазминогена (PLG) в плазме. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят дозу подходящую для замещения не более 10% от нормального количества плазминогена (PLG) в плазме. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят дозу подходящую для замещения не более 5% от нормального количества плазминогена (PLG) в плазме. Другие предпочтительные диапазоны доз описаны в настоящем документе.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят один раз в день в течение периода времени от трех до семи дней и затем вводят один раз каждые два дня в течение периода времени трех или более дней. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят один раз в день в течение периода времени от трех до семи дней и затем вводят один раз в неделю в течение периода времени трех или более недель. Согласно альтернативному предпочтительному варианту осуществления пациенту вводят один раз в день в течение периода времени от трех до семи дней и затем вводят один раз каждые два дня в течение периода времени трех или более дней и затем вводят один раз в неделю в течение периода времени трех или более недель.

Перед введением может быть определен уровень плазминогена (PLG) в крови пациента. В случае если определенный уровень плазминогена (PLG) по меньшей мере на 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида, пациенту может быть введено достаточное количество плазминогена (PLG) для профилактики или лечение тромботического явления.

Соответственно, согласно предпочтительному варианту осуществления пациенту:

(а) вводят плазминоген (PLG) по меньшей мере один раз при дозе плазминогена (PLG) в интервале от 0,01 до 100 мг/кг массы тела в ходе периода лечения и затем

(b) уровень плазминогена (PLG) в крови пациента определен на стадии (i), и, когда определенный уровень плазминогена (PLG) на по меньшей мере 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида, пациенту вводят достаточное количество плазминогена (PLG) для профилактики или лечения тромботического явления на следующей стадии (ii), и необязательно

(c) стадии (i) и (ii) проводят повторно до тех пор, пока уровень плазминогена (PLG), определенный на стадии (i), на по меньшей мере 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруживаемым у популяции того же вида.

В настоящем документе описаны другие предпочтительные диапазоны доз и интервалы лечения.

Период лечения представляет собой период продолжительности соответствующего лечения, такого как, например, (микро)хирургическое вмешательство, и короткое последующее время, например, до одного дня, до двух дней, до недели или до месяца после соответствующего лечения.

Пациент может страдать или не страдать заболеванием. Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает тромбозом глубоких вен, тромбозом тазовых вен, тромбоэмболией легочной артерии, омертвением любого органа, окклюзией вены сетчатки, генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), тромбоцитопеническим акроангиотромбозом (ТТР), сочетанием ангиопатии с тромботическим явлением в пути капиллярного потока, в частности диабетической ангиопатией, тромбофлебитом или комбинацией двух или более из них.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), острым повреждением почек (AKI), сепсисом или комбинацией двух или более из них.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC). Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает острым повреждением почек (AKI). Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент страдает сепсисом.

Согласно предпочтительному варианту осуществления у пациента есть риск развития тромботического явления, состоящий в том, что указанный пациент страдает атеросклерозом или стенозом артерий, был подвержен или подвергается хирургическому вмешательству, в частности хирургии сосудов (включая реконструкцию сосуда (также известную как сосудистая реконструкция) и/или шунтирование), и/или имеет эндопротез (например, эндопротез кровеносного сосуда/сосудистый эндопротез). Шунтирование может также включать трансплантацию сосудов (также известную как пересадка сосудов). Согласно предпочтительному варианту осуществления пациент, страдающий тромботическим явлением, одновременно страдает или ранее страдал атеросклерозом или стенозом артерий, подвергался или подвергается хирургической операции, в частности хирургии сосудов [включая реконструкцию сосуда (также известную как сосудистая хирургия и/или шунтирование], и/или имеет эндопротез (например, эндопротез кровеносного сосуда/сосудистый эндопротез).

Следующие ниже примеры и чертежи предназначены для предоставления иллюстративных вариантов осуществления настоящего изобретения, описанного и заявленного в настоящем документе. Эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Следующие чертежи, примеры и формула изобретения дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает уменьшение скорости клубочковой фильтрации (GFR), выраженное как изменение в процентах относительно необработанных мышей, у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина (СС); у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина и затем введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена через 4 часа после введения холестерина (CC+Glu-P); и у мышей, которым введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена (PBS+Glu-P), в каждом случае через 24 часа.

Фиг. 2 показывает уменьшение скорости клубочковой фильтрации (GFR), выраженное как скорость потока в мкл/мин, у необработанных мышей (Исходный уровень); у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина (СС); у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина и затем введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена через 4 часа после введения холестерина (CC+Glu-P); и у мышей, которым введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена (PBS+Glu-p), в каждом случае через 24 часа.

Фиг. 3 показывает размер инфаркта, выраженный в процентах от всей почки, у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина (СС); у мышей, которым введено 10 мг/кг холестерина и затем введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена через 4 часа после введения холестерина (CC+Glu-P); и у мышей, которым введено 132 мкл композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена (PBS+Glu-p), в каждом случае через 24 часа.

Фиг. 4 показывает частоту в процентах диагностики среди пациентов со сниженным уровнем плазминогена (PLG) (n=600) пациентов, имеющих дефицит плазминогена (PLG) (черный) и не имеющих дефицит плазминогена (PLG) (серый).

Фиг. 5 показывает активность альфа-2-антиплазмина (А2АР) у разных групп пациентов (без заболевания/контрольная популяция (Norm), липопротеин(А) (LpA), дефицит железа (Iron), дефицит витамина D (VitD), дефицит витамина K (VitK), дефицит витамина Н (VitH), анемия (Anaem), уровень гомоцистеина (Hcys), дефицит белка Z (PZ), тромбоз (Thromb), эмболия (Emb), инсульт (Stroke), инфаркт миокарда (Ml), эпитаксии (Epist), гиперменорея (ИМ), синдром фон Виллебранда (vWS), Синдром Жильбера (Meul), заболевания печени (Li), антифосфолипидные заболевания (APL), мигрень (Migr), заболевания щитовидной железы (Thyr), прерывание беременности (Abort)).

Фиг. 6 показывает активность плазминогена (PLG) у разных групп пациентов (сокращения такие же, как на Фиг. 5).

Фиг. 7 показывает (основанное на активности) соотношение альфа-2-антиплазмин: плазминоген (PLG) (А2АР/PLG) у разных групп пациентов (сокращения такие же, как на Фиг. 5).

Фиг. 8 показывает активность плазминогена (PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с острым повреждением/недостаточностью почек (AKI).

Фиг. 9 показывает активность альфа-2-антиплазмина (А2АР) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с острым повреждением/недостаточностью почек (AKI).

Фиг. 10 показывает (основанное на активности) соотношение альфа-2-антиплазмин: плазминоген (PLG) (A2AP/PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с острым повреждением/недостаточностью почек (AKI).

Фиг. 11 показывает активность плазминогена (PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC).

Фиг. 12 показывает активность альфа-2-антиплазмина (А2АР) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC).

Фиг. 13 показывает (основанное на активности) соотношение альфа-2-антиплазмин: плазминоген (PLG) (A2AP/PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC).

Фиг. 14 показывает активность плазминогена (PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с сепсисом (Сепсис).

Фиг. 15 показывает активность альфа-2-антиплазмина (А2АР) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с сепсисом (Сепсис).

Фиг. 16 показывает (основанное на активности) соотношение альфа-2-антиплазмин: плазминоген (PLG) (А2АР/PLG) у контрольной популяции (CP) по сравнению с группой пациентов с сепсисом (Сепсис).

Фиг. 17 показывает результаты диагностического исследования для приобретенного дефицит плазменогена (PLG). В данном случае измеряется процент активности плазминогена (PLG). В данном случае 40% пациентов с острое повреждение почек (AKI) и 62% пациентов с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC) показали статистически значимый дефицит плазминогена (PLG) по сравнению с контрольной популяцией (CP).

Примеры

Получение препаратов Glu-плазминогена

Glu-плазминоген получали, как описано в экспериментальном примере 1 в WO 2018/162754, с чистотой >95% (мас./мас.) на основе общего содержания белка. Препарат Glu-плазминогена человека содержал 1256 мкг/мл Glu-плазминогена (по данным иммуноферментного анализа, ELISA).

Общее содержание белка в указанном препарате составляло 1259 мкг/мл (по данным анализа белка Брэдфорда). Соответственно, чистота Glu-плазминогена составила >99,7 мас. %, исходя из общего содержания белка. Высокая чистота была также подтверждена электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE)

Протеолитическая активность Glu-плазминогена (согласно стандартизированному анализу протеолитической активности S 2288 (Chromogenix), относящемуся к общему содержанию белка, единиц/1,0 г/л общего содержания белка) была обнаружена ниже предела обнаружения.

Препарат человеческого Glu-плазминогена содержал лишь незначительный уровень эндотоксина <<1 МЕ/мл (как определено в эндохромном анализе endosafe лизата амебоцитов Limulus (LAL) согласно European Pharmacopeia (версия 5.0), глава 2.6.14), и <0,35 г/л IgG, <0,05 г/л IgA и <0,35 г/л IgM (каждый определяется нефелометрическим анализом). Альбумин (по результатам определения полихроматической конечной точки) и Lys-плазминоген (по данным вестерн-блоттинга) не обнаруживались.

В другом анализе на биоактивность концентрация человеческого Glu-плазминогена была установлена на уровне 200 мкг/мл, а затем он был активирован до плазмина. Это соответствует диапазону концентраций, встречающемуся в крови в природе. Протеолитическая активность полученного раствора плазмина определялась с помощью пептидного субстрата плазмина, меченного пара-нитрофенолом (pNP-меченый). Было обнаружено, что протеолитическая активность плазмина находится в диапазоне 109% по сравнению с активностью, естественным образом встречающегося в плазме крови плазмина, протеолитической активностью которого была нормализована до 100%. Поэтому было обнаружено, что человеческий Glu-плазминоген был полностью биологически активным и мог быть превращен в полностью активный плазмин.

Пример 1

Животная модель (Индукция микротромбы у мышей кристаллами холестерина.)

Запуск образования микротромбое в почках

Мышам вводили холестерин (СС) путем инъекции 10 мг/кг, 100 мкл/мышь в кровеносный сосуд, ведущий к почке. Момент времени инъекции считался нулевым моментом времени (0 часов). Было обнаружено, что холестерин приводит к образованию сгустков в более мелких сосудах почек, в частности в капиллярах почек.

Лечение плазминогеном (PLG)

Glu-плазминоген получали, как описано в экспериментальном примере 1 в WO 2018/162754, с чистотой >95% (мас./мас.). Свойства были такими, как описано выше. Некоторые мыши остались без лечения. Тем, кого лечили, вводили внутривенную (i.v.) инъекцию 132 мкл/мышь композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена в физиологическом растворе с фосфатным буфером, через 4 часа после введения холестерина. Введение физиологического раствора с фосфатным буфером через 4 часа после введения холестерина использовали в качестве контрольной группы без лечения. В качестве дополнительной контрольной группы инъекцию PBS вместо СС и инъекцию 132 мкл/мышь композиции, содержащей 65 мкг/мл Glu-плазминогена в фосфатно-солевом буфере, анализировали через 4 часа

Получение результатов

Через 24 часа после введения холестерина определяли скорость клубочковой фильтрации (GFR). Кроме того, размер инфаркта в почке определяли путем окрашивания трифенилтетразолия хлоридом (ТТС) ткани почек. Кроме того, умерщвленных мышей исследовали гистологически, например, посредством определения балльной оценки повреждения канальцев (PAS), повреждения эндотелия (CD31) и фильтрации нейтрофильных иммуноцитов.

Результаты и выводы

Количественные результаты представлены как Фиг. 1-3. Было обнаружено, что введение холестерина вызывает микротромбы. Они также были обнаружены при гистологическом исследовании почки мышей через 24 часа. Было обнаружено, что эти микротромбы оказывают значительное влияние на скорость клубочковой фильтрации (GFR) (см. Фиг. 1 и 2, образцы, содержащие холестерин (СС)), и вызывают некроз более половины (50%) ткани почек (см. Фиг. 3, образцы, содержащие только холестерин (СС)). Было обнаружено, что введение только (Glu-)плазминогена не оказывает значительного влияния на скорость клубочковой фильтрации (GFR) (см. Фиг. 1 и 2, справа). Он также не восстанавливает скорость клубочковой фильтрации (GFR), вызванную микротромбами, вызванными введением холестерина (см. Фиг. 1 и 2, образцы, содержащие холестерин (СС) и (Glu-)плазминоген (Glu Р).

Однако введение (Glu-)плазминогена эффективно предотвращает некроз ткани (см. Фиг. 3, образцы, содержащие холестерин (СС) и (Glu-)плазминоген (Glu Р).

Некроз уменьшился вдвое по сравнению с некрозом, обнаруженным при введении только холестерина. Таким образом, (Glu-)плазминоген эффективно уменьшает размер инфаркта.

Эти результаты показывают, что введение (Glu-)плазминогена приводит к эффективному лечению и профилактике у пациентов, страдающих (микро)тромбами.

(Glu-)плазминоген, полученный согласно настоящему изобретению, обладает удивительно высокой и превосходной фибринолитической активностью при (микро)тромботических явлениях. Не привязываясь к этой теории, предполагается, что (Glu-)плазминоген устраняет существующие микротромбы и может использоваться для профилактики микро- и/или макротромботических явлений. Такие (микро)тромботические явления часто являются причиной инфарктов, таких как, например, инфаркты миокарда, инсульты, а также инфаркты почек, окклюзия вены сетчатки, тромбоцитопенический акроангиотромбоз и т.д.

Пример 2

Клинические ситуации с приобретенным дефицитом плазменогена (PLG), вызванные потреблением плазминогена (PLG).

В целом, приобретенный дефицит плазминогена (PLG) можно ожидать в условиях, вызывающих повышенное потребление плазминогена (PLG), в частности Glu-плазминогена. Это, вероятно, можно найти при любом виде тромботических явлений, имеющих более длительную историю, например, при атеросклерозе. Повреждение внутренних кровеносных сосудов, внутренней оболочки, может длиться более длительный период времени. Это сначала приведет к постоянной, но незначительной активации системы свертывания, постоянно преобразующей фибриноген в фибрин. Пока не образуется сгусток, закрывающий весь диаметр кровеносных сосудов, кровоток не нарушен. Такой сгусток может постоянно активировать фибринолитическую систему. Здесь плазминоген (PLG) (например, Glu-плазминоген) будет превращен в плазмин и, следовательно, плазминоген (PLG) (например, Glu-плазминоген) будет потребляться. В настоящее время существует два терапевтических подхода: во-первых, до тех пор, пока не образуется закупоривающий сгусток, достаточно подавления коагуляции, например, антагонистами витамина K. Когда образуется сгусток (что может привести, например, к инфаркту миокарда, инсульту и т.д.), в настоящее время возможна только тромболитическая терапия. Как правило, она проводится при активации плазминоген (PLG) tPA, uPA или стрептокиназой.

Использование одного из трех лекарственных средств требует наличия нацеленного на фермент плазминогена (PLG). Однако в случае описанного приобретенного дефицит плазменогена (PLG) мишень для лизисной терапии больше не существует. Неожиданно было обнаружено, что в этом случае, а также в случае любых других приобретенных недостатков плазминогена (PLG) (например, Glu-плазминоген) замена этого белка может способствовать спасению жизни этих пациентов.

Когда образуются тромбы, плазминоген (PLG) (например, Glu-плазминоген) из плазмы будет израсходован из-за локальной активации. Чем выше количество фибрина, расположенного либо в одном большом макротромбе, либо во многих местах в микротромбах, особенно во время события, обостряющегося в течение более длительного времени, тем выше потребление плазминогена (PLG), как правило. Это может привести к переходному приобретенному дефициту плазменогена (PLG), склоняющему ситуацию к гипофибринолитическому и, следовательно, протромботическому состоянию (см. Фиг. 4). Снижение уровня плазминогена (PLG) было показано при нескольких состояниях, включая сепсис, заболевание печени, инфаркт миокарда, аргентинскую геморрагическую лихорадку, а также после терапии L-аспарагиназой, тромболитической терапии и хирургического вмешательства. Из-за важной роли белка в фибринолизе пониженный уровень плазминогена (PLG) может поставить под угрозу способность организма расщеплять фибрин и, таким образом, предрасполагать его к тромбозам/тромботическим заболеваниям.

Таким образом было обнаружено, что причиной тромботического заболевания может быть гиперкоагуляция или гипофибринолиз. Текущие методы лечения направлены на (гипер-)коагуляцию только с использованием гепарина, варфарина или F.X антагонистов.

Неожиданно было обнаружено, что потребление плазминогена (PLG) приводит к гипофибринолизу, который можно также назвать временным приобретенным дефицитом плазминогена (PLG) (например, Glu-плазминогена). Таким образом, было обнаружено, что лечение приобретенного временного дефицита плазминогена (PLG) (например, Glu-плазминогена) способно устранить тромботическое заболевание. Диагностические исследования заболеваний с высокой распространенностью и угрожающих жизни состояний подтвердили этот вывод.

Пример 2.1

Острое повреждение/недостаточность почек (AKI)

Почка является одним из органов, поражаемых при полиорганной недостаточностью, также называемой «синдромом полиорганной дисфункции (MODS)».

Это определяется как наличие измененной функции органа у пациента, который тяжело болен и гомеостаз которого не может поддерживаться без вмешательства. MODS в конечном итоге может привести к синдрому полиорганной недостаточности (MOFS) и смерти. Острое повреждение легких (ALI) и острый респираторный дистресс-синдром (ARDS) являются частыми проявлениями MODS или MOFS. Однако другие состояния, помимо сепсиса, могут вызывать MODS, включая травмы, ожоги и тяжелый геморрагический шок. Множественные органные дисфункции, крайнее положение конца континуума, представляют собой возрастающие степени физиологических нарушений в отдельных органах (т.е. процессы, а не события). Изменение функции органа может широко варьироваться, от легкой степени дисфункции органа до явной органной недостаточности (см. Полиорганная недостаточность сепсиса, синдром системного воспалительного ответа (SIRS), синдром токсического шока и септический тромбофлебит).

При острой почечной недостаточности микроциркуляция в почках снижается таким образом, что моча больше не образуется. Это позволяет объективно оценить функцию почек и их восстановление.

У пациентов с острым повреждением/недостаточностью почек (AKI) и патогенезом в течение более длительного периода времени уровни плазминогена (PLG) оказались довольно низкими по сравнению с пациентами без сосудистого генеза. Исследование, посвященное этому, было проведено совместно с отделением клинической химии (IKC) университетской клиники Мангейма. До марта 2018 г. были собраны образцы цитратной плазмы от 77 пациентов, которые хранили при температуре ниже -40°С. Все образцы были измерены партиями на плазминоген (PLG) и альфа-2-антиплазмин на анализаторе BCS ХР (SIEMENS Healthcare) в лаборатории, сертифицированной по стандарту DIN EN ISO 15189. Группа из 53 здоровых доноров плазмы использовалась в качестве контроля при тех же условиях. Результаты оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни.

В первом валидационном исследовании были отобраны пациенты с острой внутрипочечной почечной недостаточностью в отделении клинической химии (IKC), Мангейм, с последующими критериями сети острых повреждений почек (AKIN). Ключевые параметры: повышение креатинина до 1,5-кратного стандартного значения в сочетании с уменьшением выработки мочи.

Схема исследования острого повреждения/недостаточности почек (AKI)

- Параметры: Альфа-2-антиплазмин (А2-АР), плазминоген (PLG), активность

Соотношение R=А2-АР/плазминоген (PLG) в образцах крови, используемое для стандартной диагностики

- 77 пациентов с острым повреждением/недостаточностью почек (AKI)

- 53 контрольной популяции (здоровые доноры крови) (CP)

Результаты были проанализированы с помощью теста Манна-Уитни и показали:

- Значительный (**) приобретенный дефицит плазменогена (PLG) у AKI пациентов

- Значительный (** приобретенный дефицит альфа-2-антиплазмин у AKI пациентов

- Нет существенной разницы в соотношении (по активности) (A2AP/PLG)

Таблица 1. Обобщенные результаты активности плазминогена (PLG) у пациентов с AKI по сравнению с контролем

Проанализированный перечень	Данные
Колонка A	CP-плазминоген (PLG) (контрольная группа)
Колонка B	AKI-Плазминоген (PLG) (группа пациентов с AKI)
Тест Манна-Уитни:
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0031
Суммарное р-значение	**
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Да
Значение р для одно- или двухсторонней критической области	двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	4096, 4420
U-критерий Манна-Уитни	1417

Критерий Манна-Уитни острого повреждения/недостаточности почек (AKI) показал значительное отличие активности плазминогена (PLG). Р=0,0031 у пациентов (Ptx-77) и контрольной группы (СР-53). Результаты показаны на Фиг. 8.

Таблица 2. Обобщенные результаты активности альфа-2-антиплазмина у пациентов с AKI по сравнению с контролем

Проанализированный перечень	Данные
Колонка A	CP-альфа-2-антиплазмин (контрольная группа)
Колонка B	AKI-альфа-2-антиплазмин (группа пациентов с AKI)
Тест Манна-Уитни:
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0011
Суммарное р-значение	**
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Да
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	4160, 4355
U-критерий Манна-Уитни	1352

Критерий Манна-Уитни острой почечной недостаточности показал значительное различие в активности альфа-2-антиплазмина. Р=0,0011 у пациентов (Ptx-77) и контрольной группы (СР-53). Результаты показаны на Фиг. 9.

Таблица 3. Обобщенные результаты соотношения альфа-2-антиплазмина и плазминогена (PLG) у AKI пациентов по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	Данные
Колонка A	CP-соотношение (контрольная группа)
Колонка B	AKI-соотношение (группа пациентов с AKI)
Тест Манна-Уитни:
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,1241
Суммарное р-значение	Ns
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	нет
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	3147, 5369
U-критерий Манна-Уитни	1716

Критерий Манна-Уитни острой почечной недостаточности не показал значительное различие соотношения (на основе активности) (A2AP/PLG; Р=0,1241) у пациентов (Ptx-77) и в контрольной группе (СР-53). Результаты показаны на Фиг. 10.

Пример 2.2

Генерализованный тромбогеморрагический синдром (DIC)

Валидационное исследование пациентов с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC) было проведено Департаментом клинической химии (IKC), Мангейм. Пациенты с DIC были идентифицированы по уровням D-димеров и внутренним критериям.

Схема исследования DIC:

- Параметры: альфа-2-антиплазмин (А2-АР), активность плазминогена (PLG). D-димеры, соотношение R=А2-АР/плазминоген (PLG) в образцах крови, используемое для стандартной диагностики 13 пациентов с DIC (DIC)

- 53 контрольная популяция (CP)

Результаты были проанализированы с помощью теста Манна-Уитни и показали:

- Значительный (**) приобретенный дефицит плазменогена (PLG) у пациентов с DIC

- Отсутствие приобретенного дефицита альфа-2-антиплазмина у пациентов с DIC

- Значительное различие (***) соотношения (на основе активности) (A2AP/PLG) --> увеличенное ингибирование фибринолиза

Таблица 4. Обобщенные результаты активности плазминогена (PLG) у пациентов с DIC по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	PLG
Колонка A	CP-плазминоген (PLG) (контрольная группа)
Колонка B	DIC-плазминоген (PLG) (группа пациентов с DIC)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0013
Суммарное р-значение	**
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Да
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	2256, 519
U-критерий Манна-Уитни	288,0

Критерий Манна-Уитни для DIC показал значительное различие активности плазминогена (PLG). Р=0,0013 у пациентов (Ptx-13) и контрольной группы (СР-53). Результаты проиллюстрированы на Фиг. 11.

Таблица 5. Обобщенные результаты активности альфа-2-антиплазмина у пациентов с DIC по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	A2-AP
Колонка A	CP-альфа-2-антиплазмин (контрольная группа)
Колонка B	DIC-альфа-2-антиплазмин (группа пациентов с DIC)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0730
Суммарное р-значение	Ns
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Нет
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	2138, 637,5
U-критерий Манна-Уитни	406,5

Критерий Манна-Уитни для DIC не показал значительное различие активности альфа-2-антиплазмина. Р=0,073 у пациентов (Ptx-13) и контрольной группы (СР-53). Результаты проиллюстрированы на Фиг. 12.

Таблица 6. Обобщенные результаты соотношения альфа-2-антиплазмина и плазминогена (PLG) у пациентов с DIC по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	Соотношение для DIC
Колонка A	CP-соотношение (контрольная группа)
Колонка B	DIC- соотношение (группа пациентов с DIC)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	< 0,0001
Суммарное р-значение	***
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Да
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	1634, 1141
U-критерий Манна-Уитни	203,0

Критерий Манна-Уитни для DIC показал значительное увеличение (на основе активности) соотношения (на основе активности) (A2AP/PLG; Р<0,0001) у пациентов (Ptx-13), чем в контрольной группе (СР-53). Результаты проиллюстрированы на Фиг. 13.

Таким образом, в исследовании 53 индивидуумов из (здоровой) контрольной популяции (CP), 77 пациентов с острым повреждением почек (AKI) и 21 пациент с генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), 40% пациентов с AKI и 62% пациентов с DIC показали статистически значимый дефицит плазминогена (PLG) по сравнению с контрольной популяцией (CP). В данном исследовании критерий Манна-Уитни показал средний межквартильный интервал р>0,003 для CP по сравнению с AKI и>0,001 для CP по сравнению с DIC. Результаты проиллюстрированы на Фиг. 17.

Пример 2.3

Сепсис

Валидационное исследование пациентов с сепсисом проводилось в Отделении клинической химии (IKC), Мангейм (идентификация по D-димерам и внутренним критериям).

Схематическое представление анализа сепсиса:

- Параметры: альфа-2-антиплазмин (А2АР), активность плазминогена (PLG), соотношение R=А2-АР/плазминоген (PLG), РСТР, DD в образцах крови, также используются для стандартной диагностики.

- 9 пациентов с сепсисом (сепсис)

- 53 контрольной популяции (CP)

Результаты анализировали посредством теста Манна-Уитни и они показали:

- Значительный (*) приобретенный дефицит плазменогена (PLG) у пациентов с сепсисом

- Нет приобретенного дефицита альфа-2-антиплазмина у пациентов с сепсисом

- Нет значительной разницы в соотношении (на основе активности) (A2AP/PLG)

Таблица 7. Обобщенные результаты активности плазминогена (PLG) у пациентов с сепсисом по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	Сепсис-PLG
Колонка A	CP-плазминоген (PLG) (контрольная группа)
Колонка B	Сепсис-плазминоген (PLG) (группа пациентов с сепсисом)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0377
Суммарное р-значение	*
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Да
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	1774, 179
U-критерий Манна-Уитни	134,0

Критерий Манна-Уитни показал значительное различие активности плазминогена (PLG). Р=0,0377 у пациентов (Ptx-9) и контрольной группы (СР-53). Результаты проиллюстрированы на Фиг. 14.

Таблица 8. Обобщенные результаты активности альфа-2-антиплазмина у пациентов с сепсисом по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	Сепсис-A2AP
Колонка A	CP-альфа-2-антиплазмин (контрольная группа)
Колонка B	Сепсис-Альфа-2-антиплазмин (группа пациентов с сепсисом)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,0704
Суммарное р-значение	Ns
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Нет
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	1761, 192,5
U-критерий Манна-Уитни	147,5

Критерий Манна-Уитни не показал значительное различие активности альфа-2-антиплазмина: Р=0,0704 у пациентов (Ptx-9) и контрольной группы (СР-53). Результаты проиллюстрированы на Фиг. 15.

Таблица 9. Обобщенные результаты соотношения альфа-2-антиплазмина и плазминогена (PLG) у пациентов с сепсисом по сравнению с контрольной группой

Проанализированный перечень	Сепсис-соотношение
Колонка A	CP-соотношение (контрольная группа)
Колонка B	Сепсис-соотношение (группа пациентов с сепсисом)
Тест Манна-Уитни
Р-значение (Аппроксимация Гаусса)	0,2182
Суммарное р-значение	Ns
Значительно ли отличаются средние значения? (P < 0,05)	Нет
Значение р для одно- или двухсторонней критической области?	Двухсторонней
Сумма баллов в колонке A,B	1608, 345,5
U-критерий Манна-Уитни	176,5

Критерий Манна-Уитни показал не значительное, но увеличенное соотношение (на основе активности) (A2AP/PLG; Р=0,2182) у пациентов (Ptx-13) по сравнению с контрольной группой (СР-53). Результаты представлены на Фиг. 16.

Пример 2.4

Контрольная популяция

Исходные данные: измерение плазминогена (PLG) и А2АР в контрольной популяции (CP), плазма здоровых доноров из центра плазмы.

Контрольные диапазоны могут быть определены в контрольной популяции PLG: 90% - 144%; А2АР: 97% - 119%; и соотношение: 0,80-1,25.

Таблица 10. Нормализованная активность плазминогена (PLG) и A2AP контролей (нормализованная до средней активности 100%)

Контроли	№	PLG	A2AP	Соотношение
	1	101,3	105,1	1,04
5 из 50 индивидуумов = > 1,26	2	94,4	97,3	1,03
	3	107,3	97,1	0,90
	4	103,7	107,3	1,03
	5	103,8	108,9	1,05
	6	100,4	105,9	1,05
	7	96,3	101,4	1,05
	8	81,6	103,3	1,27
	9	95	94,9	1,00
	10	147,9	114,1	0,77
	11	120,8	113	0,94
	12	122	108,3	0,89
	13	116,5	98,5	0,85
	14	99,6	110,5	1,11
	15	100,9	98,3	0,97
	16	120,1	101,5	0,85
	17	107,6	108,7	1,01
	18	112,4	118,9	1,06
	19	96,7	106	1,10
	20	123,4	117,4	0,95
	21	100,9	107,4	1,06
	22	91,3	97	1,06
	23	123,4	117,4	0,95
	24	100,9	107,4	1,06
	25	91,3	97	1,06
	26	141,1	112	0,79
	27	110,9	108	0,97
	28	145,5	115,9	0,80
	29	100,1	106,7	1,07
	30	100,7	107,3	1,07
	31	149,5	118,9	0,80
	32	130,4	118,9	0,91
	33	95,7	97,9	1,02
	34	108	107,8	1,00
	35	91,1	115,2	1,26
	36	141,3	118,9	0,84
	37	111,3	105,6	0,95
	38	126,3	106,5	0,84
	39	97,2	112,6	1,16
	40	112,3	112,3	1,00
	41	89,3	108,8	1,22
	42	97,5	97,4	1,00
	43	107,6	106	0,99
	44	95,1	96,9	1,02
	45	117,3	118,9	1,01
	46	94	93,7	1,00
	47	128,2	113,7	0,89
	48	85,9	108,5	1,26
	49	106,4	106,7	1,00
	50	123,7	103,4	0,84
	51	133,4	111,5	0,84
	52	115,4	107,4	0,93
	53	118,6	118,3	1,00
Среднее		110,06	107,52	0,99
Стандартное отклонение		16,65	7,19	0,12
М		81,60	93,70	0,77
Max		149,50	118,90	1,27
Диапазон		67,90	25,20	0,49
MW + 2SD		143,36	121,89	1,23
MW – 2SD		76,76	93,14	0,75
VK		15,13%	6,69%	11,95%
80% перцентиль		<89,57	< 96,915	< 0,80
120% перцентиль		> 144,84	>118,9	>1,25

Пример 2.5

Диагностика у пациентов с приобретенными дефицитами плазминогена (PLG), вызванными потреблением плазминогена (PLG).

В Centrum fur Blutgerinnungsstorungen und Transfusionsmedizin (CBT) Bonn, в общей сложности 6000 (из неострых состояний в рамках лечения терапевтом (врачи общей практики/семейные практики)) пациентов с измеренными уровнями плазминогена (PLG), все уровни со сниженным плазминогеном. (PLG) уровни были отобраны и проанализированы (n=700 {11,6%]). Проанализирована частота диагностирования среди пациентов со сниженным уровнем плазминогена (PLG). Было обнаружено много диагностических совпадений, когда дефицит плазминогена (PLG) не ожидался. Результаты показаны на Фиг. 4 и в Таблице 11. Проспективное исследование в СВТ проводят для подтверждения этих выводов. Параллельно проводят проспективное исследование у острых пациентов с таким же диагнозом.

Таблица 11 описывает коэффициент корреляции из линейной регрессии R²=r. Это было выполнено в компьютерной программе Microsoft Excel (с использованием функции «KORREL» в немецкой версии) путем сопоставления каждых двух параметров друг с другом. Это указывает на наличие статистической взаимосвязи между двумя параметрами. Предполагалось, что коэффициент корреляции г, представляющий собой -0,5>r<0,5, указывает на отсутствие или слабую корреляцию. Коэффициенты корреляции г от -1,0 до -0,5 или от 0,5 до 1,0 указывают на значительную корреляцию. Таким образом, была только значительная корреляция для PLG с Соотношением и для Быстро с Активир. Белок С.

В Таблице 11 показаны следующие параметры: PLG: плазминоген [Ед/мл]; Быстро [с]; тромбиновое время [с]; АРТТ: активированное частичное тромбопластиновое время [с]; Активир. белок С=активированный белок С [Ед./мл]; АРС соотношение: резистентность активированного белка С [%]; АТШ=антитромбин III [%]; А2АР: альфа-2-антиплазмин [%]; соотношение (A2AP/PLG), PAI-1: ингибитор активатора плазминогена-1 [нг/мл], РАР комплекс: комплекс плазминоген-антиплазмин; D-димер: D-димер; PLT=тромбоциты [×10⁶/мкл]; CRP: С-реактивный белок [мкг/мл]

Таблица 12. Результаты р-значений для различных групп пациентов

Заболевание	Аббревиатура	P-значение	N
липопротеиновая (а) анемия	LpA	< 0,0001	119
дефицит железа	Iron	< 0,0001	55
дефицит витамина D	VitD	< 0,0001	37
дефицит витамина K	VitK	< 0,0001	21
анемия	Anaem	< 0,0001	56
гомоцистеинемия	Hcys	< 0,0001	45
дефицит бека Z	PZ	< 0,0001	21
тромбоз	Thromb	< 0,0001	81
эмболия	Emb	< 0,0001	86
инсульт	Stroke	< 0,0005	9
дефицит витамина H	VitH	< 0,0001	87
инфаркт миокарда	MI	n.s.	3
носовое кровотечение	Epist	< 0,0001	71
гиперменорея	HM	< 0,0001	61
синдром фон Виллебранда	vWS	< 0,0001	54
Синдром Жильбера	Meul	< 0,0001	21
заболевания печени	Li	< 0,0001	29
антифосфолипидный синдром	APL	< 0,0001	51
мигрень	Migr	< 0,0001	29
заболевания щитовидной железы	Thyr	< 0,0001	41
прерывание беременности	Abort	< 0,0001	158
No / контрольная популяция	Norm	n/A	55

В этом исследовании плазминоген (PLG) был определен как независимый параметр. Не было никакой корреляции ни с одним другим параметром из системы свертывания или фибринолитической системы, за исключением слабой корреляции с (основанным на активности) соотношением (А2АР / PLG) (где плазминоген (PLG) присутствует). Поэтому в этом исследовании присутствовало лишь несколько пациентов с острым инфарктом миокарда. Выбранная популяция пациентов (с низким уровнем плазминогена (PLG)) показала нормальные уровни А2АР.

Claims (59)

1. Применение Glu-плазминогена в качестве активного соединения для получения фармацевтической композиции для профилактики или лечения тромботического явления у пациента, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм, причем тромботические явления представляют собой микротромбы кровеносных сосудов диаметром менее 0,5 мм.

2. Применение по п. 1, где пациент страдает приобретенным дефицитом Glu-плазминогена, вызванным повышенным потреблением Glu-плазминогена, сниженным биосинтезом Glu-плазминогена или комбинацией того и другого.

3. Применение по п. 1, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту.

4. Применение по п. 1, где Glu-плазминоген не обладает протеолитической активностью.

5. Применение по п. 1, где пациент страдает приобретенным дефицитом Glu- плазминогена.

6. Применение по п. 5, где приобретенный дефицит Glu-плазминогена вызван повышенным потреблением Glu-плазминогена.

7. Применение по п. 1, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, которые приводят к тромбозу или эмболизации крупных кровеносных сосудов.

8. Применение по п. 1, где пациент имеет риск развития или страдает от патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из стеноза артерий, вен, артериол, венул, капилляров, или спазмов в артериях, венах, артериолах, венулах, капиллярах, приводящих к таким заболеваниям, как липопротеиновая (а) анемия, дефицит железа, дефицит витамина D, дефицит витамина K, дефицит витамина H, анемия, гомоцистеинемия, дефицит белка Z, эмболия, инсульт, инфаркт миокарда, носовое кровотечение, гиперменорея, синдром фон Виллебранда, синдром Жильбера, нарушение функции печени, антифосфолипидный синдром, мигрень, дисфункция щитовидной железы, прерывание беременности, терапевтические неудачи лизисной терапии с использованием активаторов Glu-плазминогена (PLG) и комбинации двух или более из них.

9. Применение по п. 1, где пациент имеет более низкий уровень в крови Glu- плазминогена, чем уровень в крови Glu-плазминогена, обнаруженный у популяции того же вида.

10. Применение по п. 9, где более низкий уровень в крови Glu-плазминогена вызван одной или несколькими причинами, выбранными из группы, состоящей из высокого физиологического или патологического потребления Glu-плазминогена, высокой скорости выведения Glu-плазминогена, низкого уровня экспрессии Glu-плазминогена и присутствия высоких уровней одного или нескольких ингибиторов Glu-плазминогена.

11. Применение по п. 10, где более низкий уровень в крови Glu-плазминогена вызван высоким физиологическим или патологическим потреблением Glu-плазминогена.

12. Применение по п. 1, где микротромбы представляют собой микротромбы капилляров.

13. Применение по п. 1, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту.

14. Применение по п. 1, где пациент страдает более чем одним тромботическим явлением.

15. Применение по п. 1, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту, и более чем одним тромботическим явлением.

16. Применение по п. 1, где тромботическое явление вызвано инфарктом, вызванным любой причиной, типичной в патогенезе инфарктов.

17. Применение по п. 1, где тромботическое явление вызвано разрывом атеросклеротической бляшки, содержащей кристаллы холестерина, вызванные гиперхолестеринемией.

18. Применение по п. 1, где тромботическое явление вызвано инфарктом, вызванным любой причиной, типичной в патогенезе инфарктов, и разрывом атеросклеротической бляшки, содержащей кристаллы холестерина, вызванные гиперхолестеринемией.

19. Применение по п. 1, где тромботическое явление вызывает инфаркт.

20. Применение по п. 1, где пациент страдает тромбозом глубоких вен, тромбозом тазовых вен, тромбоэмболией лёгочной артерии, омертвением любого органа, окклюзией вены сетчатки, генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), тромбоцитопеническим акроангиотромбозом (TTP), сочетанием ангиопатии с тромботическим явлением в пути капиллярного потока, в частности диабетической ангиопатией, тромбофлебитом или комбинацией двух или более из них.

21. Применение по п. 1, где у пациента есть риск развития тромботического явления, состоящий в том, что указанный пациент страдает атеросклерозом или стенозом артерий, был подвержен хирургическому вмешательству, в частности шунтированию, или имеет эндопротез кровеносного сосуда.

22. Применение по любому из пп. 1 - 21, где пациент страдает генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), острым повреждением почек (AKI), сепсисом или комбинацией двух или более из них.

23. Способ профилактики или лечения тромботического явления у пациента, в котором пациенту вводят достаточное количество Glu-плазминогена и в котором пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, имеющих диаметры менее 1 мм, причем тромботические явления представляют собой микротромбы кровеносных сосудов диаметром менее 0,5 мм.

24. Способ по п. 23, где пациент страдает приобретенным дефицитом Glu-плазминогена, вызванным повышенным потреблением Glu-плазминогена, сниженным биосинтезом Glu-плазминогена или сочетанием того и другого.

25. Способ по п. 23, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту.

26. Способ по п. 23, где Glu-плазминоген не обладает протеолитической активностью.

27. Способ по п. 23, где пациент страдает приобретенным дефицитом Glu- плазминогена.

28. Способ по п. 27, где приобретенный дефицит Glu-плазминогена вызван повышенным потреблением Glu-плазминогена.

29. Способ по п. 23, где пациент имеет риск развития или страдает от микротромбов, которые приводят к тромбозу или эмболизации крупных кровеносных сосудов.

30. Способ по п. 23, где пациент имеет риск развития или страдает от патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из стеноза артерий, вен, артериол, венул, капилляров, или спазмов в артериях, венах, артериолах, венулах, капиллярах, приводящих к таким заболеваниям, как липопротеиновая (а) анемия, дефицит железа, дефицит витамина D, дефицит витамина K, дефицит витамина H, анемия, гомоцистеинемия, дефицит белка Z, эмболия, инсульт, инфаркт миокарда, носовое кровотечение, гиперменорея, синдром фон Виллебранда, синдром Жильбера, нарушение функции печени, антифосфолипидный синдром, мигрень, дисфункция щитовидной железы, прерывание беременности, терапевтические неудачи лизисной терапии с использованием активаторов Glu-плазминогена (PLG) и комбинации двух или более из них.

31. Способ по п. 23, где пациент имеет более низкий уровень в крови Glu-плазминогена, чем уровень в крови Glu-плазминогена, обнаруженный у популяции того же вида.

32. Способ по п. 31, где более низкий уровень в крови Glu-плазминогена вызван одной или несколькими причинами, выбранными из группы, состоящей из высокого физиологического или патологического потребления Glu-плазминогена, высокой скорости выведения Glu-плазминогена, низкого уровня экспрессии Glu-плазминогена и присутствия высоких уровней одного или нескольких ингибиторов Glu-плазминогена.

33. Способ по п. 32, где более низкий уровень в крови Glu-плазминогена вызван высоким физиологическим или патологическим потреблением Glu-плазминогена.

34. Способ по п. 23, где определяют уровень Glu-плазминогена в крови пациента и, когда определенный уровень Glu-плазминогена на по меньшей мере 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруженным у популяции того же вида, пациенту вводят достаточное количество Glu-плазминогена для профилактики или лечения тромботического явления.

35. Способ по п. 23, где микротромбы представляют собой микротромбы капилляров.

36. Способ по п. 23, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту.

37. Способ по п. 23, где пациент страдает более чем одним тромботическим явлением.

38. Способ по п. 23, где пациент страдает по меньшей мере одной ишемической областью, которая приводит к некрозу по меньшей мере части ткани без введения Glu-плазминогена указанному пациенту, и более чем одним тромботическим явлением.

39. Способ по п. 23, где тромботическое явление вызвано инфарктом, вызванным любой причиной, типичной в патогенезе инфаркта.

40. Способ по п. 23, где тромботическое явление вызвано разрывом атеросклеротической бляшки, содержащей кристаллы холестерина, вызванные гиперхолестеринемией.

41. Способ по п. 23, где тромботическое явление вызвано инфарктом, вызванным любой причиной, типичной в патогенезе инфаркта, и разрывом атеросклеротической бляшки, содержащей кристаллы холестерина, вызванные гиперхолестеринемией.

42. Способ по п. 23, где тромботическое явление вызывает инфаркт.

43. Способ по п. 23, где пациенту вводят Glu-плазминоген по меньшей мере один раз при дозе Glu-плазминогена в интервале от 0,01 до 100 мг/кг массы тела или от 0,01 до 1 мг/кг массы тела.

44. Способ по п. 23, где пациенту вводят Glu-плазминоген по меньшей мере один раз за 24 часа после наступления тромботического явления, в течение одной недели до того, как он подвергнется событию высокого риска развития тромботического явления, такого как хирургическое вмешательство, или вводится на регулярной основе, когда существует риск развития тромботического явления.

45. Способ по п. 23, где пациенту вводят Glu-плазминоген согласно одной из следующих схем введения:

(A) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз в день в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно где введением является внутривенное введение, в частности внутривенное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела;

(B) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз в день в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно где введением является внутриартериальное введение, в частности внутриартериальное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела;

(C) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз в день в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно где введением является внутричерепное введение, в частности внутричерепное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,01 до 1 мг/кг массы тела;

(D) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз каждые два дня в течение периода времени трех или более дней, предпочтительно где введением является внутримышечное введение, в частности внутримышечное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,05 до 10 мг/кг массы тела;

(E) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз каждую неделю в течение периода времени трех или более недель, предпочтительно где введением является подкожное введение, в частности подкожное введение однократной дозы в каждом случае в интервале от 0,1 до 100 мг/кг массы тела; или

(F) пациенту вводят Glu-плазминоген один раз в день в течение периода времени от трех до семи дней и затем вводят один раз каждые два дня в течение периода времени трех или более дней или один раз в неделю в течение периода времени трех или более недель.

46. Способ по п. 23, где пациенту вводят дозу, пригодную для замещения не более 15%, не более 10% или не более 5% от нормального количества Glu-плазминогена в плазменном компартменте.

47. Способ по п. 23, где пациенту:

(a) вводят Glu-плазминоген по меньшей мере один раз при дозе Glu-плазминогена в интервале от 0,01 до 100 мг/кг массы тела в ходе периода лечения, и затем

(b) уровень Glu-плазминогена в крови пациента определяют на стадии (i) и, когда определенный уровень Glu-плазминогена на по меньшей мере 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруженным у популяции того же вида, пациенту вводят достаточное количество Glu-плазминогена для профилактики или лечения тромботического явления на следующей стадии (ii), и необязательно

(c) стадии (i) и (ii) проводят повторно до тех пор, пока уровень Glu-плазминогена, определенный на стадии (i), на по меньшей мере 10% (мол./мол.) ниже по сравнению со средним уровнем, обнаруженным у популяции того же вида.

48. Способ по п. 23, где пациент страдает тромбозом глубоких вен, тромбозом тазовых вен, тромбоэмболией лёгочной артерии, омертвением любого органа, окклюзией вены сетчатки, генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), тромбоцитопеническим акроангиотромбозом (TTP), сочетанием ангиопатии с тромботическим явлением в пути капиллярного потока, в частности диабетической ангиопатией, тромбофлебитом или комбинацией двух или более из них.

49. Способ по п. 23, где у пациента есть риск развития тромботического явления, состоящий в том, что указанный пациент страдает атеросклерозом или стенозом артерий, был подвержен хирургическому вмешательству, в частности шунтированию, или имеет эндопротез кровеносного сосуда.

50. Способ по любому из пп. 23 - 49, где пациент страдает генерализованным тромбогеморрагическим синдромом (DIC), острым повреждением почек (AKI), сепсисом или комбинацией двух или более из них.