RU2809161C2 - Compounds containing mutant kras sequence and lipids and their use - Google Patents
Compounds containing mutant kras sequence and lipids and their use Download PDFInfo
- Publication number
- RU2809161C2 RU2809161C2 RU2020132290A RU2020132290A RU2809161C2 RU 2809161 C2 RU2809161 C2 RU 2809161C2 RU 2020132290 A RU2020132290 A RU 2020132290A RU 2020132290 A RU2020132290 A RU 2020132290A RU 2809161 C2 RU2809161 C2 RU 2809161C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- linker
- compound
- sequence
- lipid
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 150
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 80
- 101150105104 Kras gene Proteins 0.000 title description 44
- 101000584612 Homo sapiens GTPase KRas Proteins 0.000 claims abstract description 96
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 claims abstract description 90
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 35
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 34
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 25
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 28
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 19
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 16
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 5
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 54
- 102200006539 rs121913529 Human genes 0.000 description 36
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 26
- SYOMXKPPFZRELL-ONGXEEELSA-N Val-Gly-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N SYOMXKPPFZRELL-ONGXEEELSA-N 0.000 description 21
- AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N Val-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC([O-])=O AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 20
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 18
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- 102200006531 rs121913529 Human genes 0.000 description 16
- 102200006540 rs121913530 Human genes 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 13
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 10
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 10
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 10
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- LLUXQOVDMQZMPJ-KKUMJFAQSA-N Cys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)CC1=CC=C(O)C=C1 LLUXQOVDMQZMPJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 8
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 4
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 4
- VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N odn 1826 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C(O1)CC(O)C1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC(C(O1)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)CC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 4
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N Ala-Cys-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 2
- VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N Ala-Val-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- PWNAWOCHVWERAR-UHFFFAOYSA-N Flumetralin Chemical compound [O-][N+](=O)C=1C=C(C(F)(F)F)C=C([N+]([O-])=O)C=1N(CC)CC1=C(F)C=CC=C1Cl PWNAWOCHVWERAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTBOEZICHOSJEE-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NTBOEZICHOSJEE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 229940126685 KRAS G12R Drugs 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- GUVMFDICMFQHSZ-UHFFFAOYSA-N N-(1-aminoethenyl)-1-[4-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[hydroxy-[[3-[hydroxy-[[3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy]phosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy]phosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-2-[[hydroxy-[2-(hydroxymethyl)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-2-yl]-5-methylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC1=C(C(=O)NC(N)=C)N=CN1C1OC(COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CO)C(OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)C1 GUVMFDICMFQHSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 102220402997 c.12G>T Human genes 0.000 description 2
- QUWFSKKBMDKAHK-SBOJBMMISA-A chembl2103793 Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CO)[C@@H](O)C1 QUWFSKKBMDKAHK-SBOJBMMISA-A 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 235000021190 leftovers Nutrition 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001863 phosphorothioyl group Chemical group *P(*)(*)=S 0.000 description 2
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 2
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102200006532 rs112445441 Human genes 0.000 description 2
- 102200006537 rs121913529 Human genes 0.000 description 2
- 102200006538 rs121913530 Human genes 0.000 description 2
- 102200006541 rs121913530 Human genes 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N Ala-Gly-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- LJADEBULDNKJNK-IHRRRGAJSA-N Lys-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LJADEBULDNKJNK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 101710091439 Major capsid protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101150110932 US19 gene Proteins 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 101150014604 cpg-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical group [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- -1 flavoring Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- IRGSDUKBHFNZBP-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-n'-(5-sulfanylidene-1,2,4-dithiazolidin-3-yl)methanimidamide Chemical compound CN(C)C=NC1NC(=S)SS1 IRGSDUKBHFNZBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005853 oncogenic activation Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Список последовательностейList of sequences
Настоящая заявка содержит список последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Указанная копия ASCII, созданная ______________, имеет название __________________________ и имеет размер _______ байт.This application contains a sequence listing that has been submitted electronically in ASCII format and is incorporated herein by reference in its entirety. The specified ASCII copy created by ______________ is named __________________________ and has a size of _______ bytes.
Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for creating the invention
Белки RAS являются важными компонентами клеточных сигнальных путей. Онкогенная активация белков RAS путем мутации часто обнаруживается при нескольких типах рака, включая рак поджелудочной железы. По-прежнему существует потребность в новых и более эффективных методах лечения рака.RAS proteins are important components of cellular signaling pathways. Oncogenic activation of RAS proteins by mutation is frequently found in several types of cancer, including pancreatic cancer. There continues to be a need for new and more effective cancer treatments.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые можно использовать в методах терапии.The present invention provides compounds that can be used in therapies.
Соответственно, в первом аспекте изобретение обеспечивает соединение, включающее мутантную последовательность KRAS и липид, где мутантная последовательность KRAS конъюгирована с липидом при помощи линкера, и (i) линкер включает один или несколько полиэтиленгликолевых блоков, (ii) липид представляет собой 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), и (iii) мутантная последовательность KRAS включает или состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29) и YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).Accordingly, in a first aspect, the invention provides a compound comprising a mutant KRAS sequence and a lipid, wherein the mutant KRAS sequence is conjugated to the lipid by a linker, and (i) the linker includes one or more polyethylene glycol blocks, (ii) the lipid is 1,2-distearoyl -sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DSPE), and (iii) the mutant KRAS sequence includes or consists of an amino acid sequence selected from the group consisting of YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29) and YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO :thirty).
Во втором аспекте изобретение обеспечивает соединение, включающее мутантную последовательность KRAS и липид, где мутантная последовательность KRAS конъюгирована с липидом при помощи линкера, и (i) линкер включает один или несколько полиэтиленгликолевых блоков, (ii) липид представляет собой 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), и (iii) мутантная последовательность KRAS включает или состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22) и CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).In a second aspect, the invention provides a compound comprising a mutant KRAS sequence and a lipid, wherein the mutant KRAS sequence is conjugated to the lipid by a linker, and (i) the linker includes one or more polyethylene glycol blocks, (ii) the lipid is 1,2-distearoyl-sn -glycero-3-phosphoethanolamine (DSPE), and (iii) the mutant KRAS sequence includes or consists of an amino acid sequence selected from the group consisting of CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), CYKLVVVGARGVGKSALTI ( SEQ ID NO:3), CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22) and CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7 ).
В одном варианте осуществления первого и второго аспектов настоящего изобретения мутантная последовательность KRAS, на ее N-конце, конъюгирована с линкером через цистеин-малеимидную связь.In one embodiment of the first and second aspects of the present invention, the mutant KRAS sequence, at its N-terminus, is conjugated to a linker via a cysteine-maleimide bond.
В другом варианте осуществления первого и второго аспектов настоящего изобретения линкер включает 48 повторяющихся звеньев полиэтиленгликоля.In another embodiment of the first and second aspects of the present invention, the linker includes 48 polyethylene glycol repeating units.
В дополнительном варианте осуществления первого и второго аспектов настоящего изобретения мутантная последовательность KRAS, на ее N-конце, конъюгирована со следующей структурой:In a further embodiment of the first and second aspects of the present invention, the mutant KRAS sequence, at its N-terminus, is conjugated to the following structure:
. .
В третьем аспекте изобретение обеспечивает композицию, включающую одно или несколько соединений первого и второго аспектов настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.In a third aspect, the invention provides a composition comprising one or more compounds of the first and second aspects of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
В одном варианте осуществления третьего аспекта настоящего изобретения композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), или соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).In one embodiment of the third aspect of the present invention, the composition includes (1) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), (2) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), (3) a compound comprising amino acid sequence YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), (4) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), (5) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), (6) a compound, comprising the amino acid sequence YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), or a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29), and (7) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).
В одном варианте осуществления третьего аспекта настоящего изобретения композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).In one embodiment of the third aspect of the present invention, the composition includes (1) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), (2) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), (3) a compound comprising amino acid sequence YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), (4) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), (5) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), (6) a compound, comprising the amino acid sequence YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), and (7) a compound comprising the amino acid sequence YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).
В другом варианте осуществления третьего аспекта настоящего изобретения композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), или соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).In another embodiment of the third aspect of the present invention, the composition includes (1) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), (2) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), (3) a compound comprising amino acid sequence CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), (4) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), (5) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), (6) a compound, comprising the amino acid sequence CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), or a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22), and (7) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).
В другом варианте осуществления третьего аспекта настоящего изобретения композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).In another embodiment of the third aspect of the present invention, the composition includes (1) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), (2) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), (3) a compound comprising amino acid sequence CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), (4) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), (5) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), (6) a compound, comprising the amino acid sequence CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), and (7) a compound comprising the amino acid sequence CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).
В некоторых вариантах осуществления в композицию включено 700 мкг каждого соединения.In some embodiments, 700 μg of each compound is included in the composition.
В дополнительном варианте осуществления третьего аспекта настоящего изобретения композиция дополнительно включает соединение, состоящее из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:In a further embodiment of the third aspect of the present invention, the composition further includes a compound consisting of the nucleotide sequence 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8), which, at its 5' end, is linked or linked by a linker to the following lipid :
, ,
или его солью, где Х представляет собой О или S. В одном варианте осуществления нуклеотидная последовательность связана с липидом. В другом варианте осуществления все межнуклеозидные группы, соединяющие нуклеозиды в 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), представляют собой фосфоротиоаты.or a salt thereof, where X is O or S. In one embodiment, the nucleotide sequence is linked to a lipid. In another embodiment, all internucleoside groups connecting the nucleosides in 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8) are phosphorothioates.
В четвертом аспекте изобретение обеспечивает способ лечения рака у пациента, при этом способ включает введение пациенту композиции согласно третьему аспекту настоящего изобретения.In a fourth aspect, the invention provides a method of treating cancer in a patient, the method comprising administering to the patient a composition according to the third aspect of the present invention.
В одном варианте осуществления четвертого аспекта настоящего изобретения способ дополнительно включает введение адъюванта, такого как адъювант, включающий CpG нуклеотидную последовательность (например, 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’; SEQ ID NO:8).In one embodiment of the fourth aspect of the present invention, the method further comprises administering an adjuvant, such as an adjuvant comprising a CpG nucleotide sequence (eg, 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'; SEQ ID NO:8).
В некоторых вариантах осуществления вводят 0,1 мг, 0,5 мг или 2,5 мг адъюванта.In some embodiments, 0.1 mg, 0.5 mg, or 2.5 mg of adjuvant is administered.
В одном варианте осуществления четвертого аспекта настоящего изобретения способ дополнительно включает введение пациенту соединения, состоящего из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:In one embodiment of the fourth aspect of the present invention, the method further comprises administering to the patient a compound consisting of the nucleotide sequence 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8), which, at its 5' end, is linked or linked by a linker to the following lipid:
, ,
или его солью, где Х представляет собой О или S. В одном варианте осуществления нуклеотидная последовательность связана с липидом. В одном варианте осуществления вводят 0,1 мг, 0,5 мг или 2,5 мг соединения.or a salt thereof, where X is O or S. In one embodiment, the nucleotide sequence is linked to a lipid. In one embodiment, 0.1 mg, 0.5 mg, or 2.5 mg of the compound is administered.
В другом варианте осуществления все межнуклеозидные группы, соединяющие нуклеозиды в 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), представляют собой фосфоротиоаты. In another embodiment, all internucleoside groups connecting the nucleosides in 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8) are phosphorothioates.
В одном варианте осуществления четвертого аспекта настоящего изобретения рак представляет собой рак поджелудочной железы, рак легкого или рак толстой кишки.In one embodiment of the fourth aspect of the present invention, the cancer is pancreatic cancer, lung cancer or colon cancer.
В пятом аспекте изобретение обеспечивает набор, включающий (i) соединение по любому из пунктов 1-5 или композицию по любому из пунктов 6-8 и (ii) соединение, состоящее из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:In a fifth aspect, the invention provides a kit comprising (i) a compound of any one of
, ,
или его солью, где Х представляет собой О или S. В одном варианте осуществления нуклеотидная последовательность связана с липидом. В другом варианте осуществления все межнуклеозидные группы, соединяющие нуклеозиды в 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), представляют собой фосфоротиоаты.or a salt thereof, where X is O or S. In one embodiment, the nucleotide sequence is linked to a lipid. In another embodiment, all internucleoside groups connecting the nucleosides in 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8) are phosphorothioates.
ОпределенияDefinitions
“Карбонил” в контексте настоящей заявки относится к группе -C(O)-.“Carbonyl” in the context of this application refers to the group -C(O)-.
“Карбоксилат” в контексте настоящей заявки относится к группе -C(O)-OH или ее соли.“Carboxylate” as used herein refers to the group -C(O)-OH or a salt thereof.
В контексте настоящей заявки “конъюгированный” относится к ковалентному связыванию мутантной последовательности KRAS с линкером и, необязательно, дополнительному ковалентному связыванию линкера с липидом. В различных примерах ковалентные связи, соединяющие линкер с мутантной последовательностью KRAS или с липидом, могут быть ковалентной связью между атомом серы и sp 3-гибридизированным атомом углерода в сукцинимиде, между атомом азота и атомом углерода карбонила, или между атомом кислорода и атомом фосфора тиофосфорила или фосфорила. В различных примерах каждый из последовательности KRAS и липида может содержать группу для связывания с комплементарной группой в линкере. Например, полипептид KRAS может включать атом серы (например, атом серы в цистеиновом остатке), связанный с комплементарной группой, например сукцинимидом, в линкере. Связь между атомом серы в полипептиде KRAS и сукцинимидом в линкере может быть образована реакцией тиола (например, тиола в цистеиновом остатке) в полипептиде KRAS и малеимида в линкере. Альтернативно, полипептид KRAS может включать атом азота или карбонильную группу, связанные с карбонильной группой или атомом азота, соответственно, в линкере. Связь между карбонильной группой и атомом азота может быть образована реакцией между амином или карбоксилатом в полипептиде KRAS и карбоксилатом или амином, соответственно, в линкере.As used herein, “conjugated” refers to covalently linking the mutant KRAS sequence to a linker and, optionally, further covalently linking the linker to a lipid. In various examples, the covalent bonds connecting the linker to the mutant KRAS sequence or to the lipid may be a covalent bond between a sulfur atom and an sp 3 -hybridized carbon atom in succinimide, between a nitrogen atom and a carbonyl carbon atom, or between an oxygen atom and a phosphorus atom of a thiophosphoryl or phosphoryl. In various examples, the KRAS and lipid sequences may each contain a group for coupling to a complementary group in the linker. For example, a KRAS polypeptide may include a sulfur atom (eg, a sulfur atom in a cysteine residue) linked to a complementary group, such as succinimide, in a linker. The bond between the sulfur atom in the KRAS polypeptide and the succinimide in the linker can be formed by the reaction of a thiol (eg, a thiol in a cysteine residue) in the KRAS polypeptide and a maleimide in the linker. Alternatively, the KRAS polypeptide may include a nitrogen atom or a carbonyl group linked to a carbonyl group or nitrogen atom, respectively, in a linker. The bond between the carbonyl group and the nitrogen atom can be formed by the reaction between the amine or carboxylate in the KRAS polypeptide and the carboxylate or amine, respectively, in the linker.
“Липид” представляет собой любое из группы органических соединений, жирных на ощупь, нерастворимых в воде и растворимых в органических растворителях, и обычно включает жирные кислоты и их производные. Одним из примеров липида, используемого в изобретении, является 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE).“Lipid” is any of a group of organic compounds that are oily to the touch, insoluble in water and soluble in organic solvents, and generally include fatty acids and their derivatives. One example of a lipid used in the invention is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DSPE).
“Линкер” в контексте настоящей заявки относится к одновалентной или двухвалентной группе, в которой одна валентность ковалентно связана с одной биологически функциональной группой, а другая валентность ковалентно связана с другой биологически функциональной группой. В одном примере линкер соединяет последовательность KRAS с липидом, как указано выше. Необязательно, такой линкер может включать один или несколько полиэтиленгликолевых блоков. В другом примере линкер соединяет нуклеотидную последовательность, например, CpG олигонуклеотида, с липидом (например, -P(X)(OH)-O-CH(CH2NHCO-(CH2)16-CH3)2 или его солью, где Х представляет собой О или S, как описано в настоящей заявке). Такие линкеры могут необязательно включать один или несколько нуклеотидов, например динуклеотид (например, GG).“Linker” as used herein refers to a monovalent or divalent group in which one valency is covalently linked to one biologically functional group and the other valency is covalently linked to another biologically functional group. In one example, the linker connects the KRAS sequence to a lipid, as described above. Optionally, such a linker may include one or more polyethylene glycol blocks. In another example, a linker connects a nucleotide sequence, for example, a CpG oligonucleotide, to a lipid (for example, -P(X)(OH)-O-CH(CH 2 NHCO-(CH 2 ) 16 -CH 3 ) 2 or a salt thereof, where X represents O or S as described herein). Such linkers may optionally include one or more nucleotides, such as a dinucleotide (eg, GG).
“Фармацевтически приемлемый носитель” в контексте настоящей заявки относится к носителю, способному суспендировать или растворять активное соединение и который является нетоксичным и не вызывает воспаление у субъекта (например, пациента), которому его вводят. Кроме того, фармацевтически приемлемый носитель может включать фармацевтически приемлемую добавку, такую как консервант, антиоксидант, ароматизатор, эмульгатор, краситель или эксципиент, известную или используемую в области формулирования лекарственных препаратов, которая не оказывает значительного влияния на терапевтическую эффективность биологической активности активного вещества и которая нетоксична для субъекта.“Pharmaceutically acceptable carrier” as used herein refers to a carrier capable of suspending or dissolving the active compound and which is non-toxic and does not cause inflammation in the subject (eg, patient) to whom it is administered. In addition, the pharmaceutically acceptable carrier may include a pharmaceutically acceptable additive, such as a preservative, antioxidant, flavoring, emulsifier, coloring agent or excipient, known or used in the art of drug formulation, which does not significantly affect the therapeutic efficacy of the biological activity of the active substance and which is non-toxic for the subject.
“Фосфорил” в контексте настоящей заявки относится к группе -P(O)(ORA)(ORB), где RA представляет собой H и RB представляет собой валентность.“Phosphoryl” as used herein refers to the group -P(O)(OR A )(OR B ), where R A represents H and R B represents valence.
“Полиэтиленгликоль” в контексте настоящей заявки относится к блоку -(OCH2CH2)n-, где n представляет собой количество повторяющихся звеньев и является целым числом от 2 до 50 (например, 24 или 48).“Polyethylene glycol” as used herein refers to the -(OCH 2 CH 2 ) n - block, where n is the number of repeat units and is an integer from 2 to 50 (eg, 24 or 48).
“Тиол” в контексте настоящей заявки относится к группе -SH.“Thiol” as used herein refers to the -SH group.
“Тиофосфорил” в контексте настоящей заявки относится к группе -P(S)(ORA)(ORB), где RA представляет собой H и RB представляет собой валентность.“Thiophosphoryl” as used herein refers to the group -P(S)(OR A )(OR B ), where R A represents H and R B represents valency.
Термины “лечить”, “лечение” и “лечащий” относятся к терапевтическим подходам, цель которых устранить, облегчить, нормализовать, подавить, замедлить или остановить прогрессирование или тяжесть состояния, связанного с заболеванием или расстройством, например раком. Эти термины включают уменьшение или облегчение по меньшей мере одного неблагоприятного эффекта или симптома состояния, заболевания или расстройства. Лечение обычно является “эффективным”, если один или несколько симптомов или клинических маркеров уменьшаются, или если индуцируется желаемый ответ (например, специфический иммунный ответ). Альтернативно, лечение является “эффективным”, если прогрессирование заболевания замедляется или останавливается.The terms “treat,” “treating,” and “treating” refer to therapeutic approaches that aim to eliminate, alleviate, normalize, suppress, slow, or stop the progression or severity of a condition associated with a disease or disorder, such as cancer. These terms include reduction or alleviation of at least one adverse effect or symptom of a condition, disease or disorder. Treatment is usually “effective” if one or more symptoms or clinical markers are reduced, or if a desired response (eg, a specific immune response) is induced. Alternatively, treatment is “effective” if disease progression is slowed or stopped.
Настоящее изобретение обеспечивает несколько преимуществ. Например, при включении групп DSPE, некоторые соединения по настоящему изобретению связываются с эндогенным альбумином у субъектов, которым их вводят, что усиливает доставку соединений в лимфатические узлы субъектов. Это облегчает индукцию терапевтического иммунного ответа против последовательностей KRAS соединений, что приводит к эффективному лечению рака.The present invention provides several advantages. For example, when DSPE moieties are included, certain compounds of the present invention bind to endogenous albumin in the subjects to whom they are administered, thereby enhancing delivery of the compounds to the lymph nodes of the subjects. This facilitates the induction of a therapeutic immune response against KRAS compound sequences, leading to effective cancer treatment.
Другие особенности и преимущества изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, чертежей и формулы изобретения.Other features and advantages of the invention will be apparent from the following detailed description, drawings and claims.
Описание чертежейDescription of drawings
Фиг. 1 показывает, что амфифильный KRas (aKRas) в комбинации с амфифильным CpG (aCpG) активировал спленоциты, в то время как растворимый KRas в комбинации с aCpG и контрольные группы, включающие необработанные и растворимые KRas и polyIC (pIC), не активировали.Fig. 1 shows that amphiphilic KRas (aKRas) in combination with amphiphilic CpG (aCpG) activated splenocytes, while soluble KRas in combination with aCpG and controls including untreated and soluble KRas and polyIC (pIC) did not.
Фиг. 2 показывает, что как aKRas G12R, так и G12V в комбинации с aCpG активировали спленоциты, в то время как ни растворимый KRas ни G12R в комбинации с aCpG и контрольные группы, включающие необработанные и растворимые KRas G12V и pIC, не активировали.Fig. 2 shows that both aKRas G12R and G12V in combination with aCpG activated splenocytes, while neither soluble KRas nor G12R in combination with aCpG and controls including untreated and soluble KRas G12V and pIC did not.
Фиг. 3 показывает KRas-специфический CD8+ T-клеточный ответ для мышей, иммунизированных комбинацией aKRas G12D и aCpG, но не для растворимого KRas G12D в комбинации с CpG или растворимого KRas дикого типа в комбинации с CpG.Fig. 3 shows the KRas-specific CD8 + T cell response for mice immunized with a combination of aKRas G12D and aCpG, but not for soluble KRas G12D in combination with CpG or soluble wild-type KRas in combination with CpG.
Фиг. 4 показывает KRas-специфический CD8+ T-клеточный ответ (9-меры) и CD8+ или CD4+T-клеточный ответ (18-мер) для мышей, иммунизированных комбинацией aKRas G12D и aCpG, но не для растворимого KRas G12D в комбинации с CpG или необработанной контрольной группы.Fig. 4 shows KRas-specific CD8+T cell response (9-mers) and CD8+or CD4+T cell response (18-mer) for mice immunized with aKRas G12D and aCpG combination, but not for soluble KRas G12D plus CpG or untreated controls.
Фиг. 5 показывает, что вакцины на основе амфифильного KRas (Amph-KRAS) и амфифильного CpG (Amph-CpG) вызывают превосходные эндогенные T-клеточные ответы по сравнению с вакцинами на основе растворимого KRas, на что указывает повышенное продуцирование цитокинов спленоцитами в анализе определения концентрации цитокинов на основе микросфер. Растворимый KRAS G12D=YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO: 23); Amph-KRAS G12D=DSPE-амидо-dPEG24-амидо-dPEG24-CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO: 1); KRAS G12D 18-мер=YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23); CBA=анализ для определения концентрации цитокинов на основе микросфер; IFN=интерферон; IL=интерлейкин; KRAS=саркома крыс Кирстена.Fig. 5 shows that amphiphilic KRas (Amph-KRAS) and amphiphilic CpG (Amph-CpG) vaccines induce superior endogenous T cell responses compared to soluble KRas vaccines, as indicated by increased cytokine production by splenocytes in a cytokine concentration assay based on microspheres. Soluble KRAS G12D=YKLVVVGA D GVGKSALTI (SEQ ID NO: 23); Amph-KRAS G12D=DSPE-amido-dPEG24-amido-dPEG24- C YKLVVVGA D GVGKSALTI (SEQ ID NO: 1); KRAS G12D 18-mer=YKLVVVGA D GVGKSALTI (SEQ ID NO:23); CBA=microbead-based cytokine concentration assay; IFN=interferon; IL=interleukin; KRAS=Kirsten rat sarcoma.
Фиг. 6 показывает структуру амфифильного пептида G12D 4-21 (SEQ ID NO:1).Fig. 6 shows the structure of amphiphilic peptide G12D 4-21 (SEQ ID NO:1).
Фиг. 7 показывает структуру амфифильного CpG-7909. Все сахара представляют собой дезоксирибозу. Все межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоаты. Структура представлена в виде натриевой соли.Fig. 7 shows the structure of amphiphilic CpG-7909. All sugars are deoxyribose. All internucleoside bonds are phosphorothioates. The structure is presented in the form of a sodium salt.
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые можно использовать в методах терапии. Каждое из соединений настоящего изобретения включает мутантную последовательность KRAS (например, например, любую из SEQ ID NO:1-7 и 22; см. Таблицу 1 ниже, или, например, любую из SEQ ID NO:23-30, см. Таблицу 2 ниже) и липид (например, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE)). Эти фрагменты (мутантная последовательность KRAS и липид) связаны друг с другом при помощи линкера, например, линкера, включающего один или несколько полиэтиленгликолевых блоков. В одном примере линкер представляет собой:The present invention provides compounds that can be used in therapies. Each of the compounds of the present invention includes a mutant KRAS sequence (e.g., for example, any of SEQ ID NOs: 1-7 and 22; see Table 1 below, or, for example, any of SEQ ID NO: 23-30, see Table 2 below) and lipid (
. .
В конкретном примере мутантная последовательность KRAS (например, любая из SEQ ID NO:1-7 или 22 или, например, любая из SEQ ID NO:23-30) связана на N-конце через Cys остаток с линкером, а линкер связан с липидом, где линкер представляет собой:In a specific example, a mutant KRAS sequence (e.g., any of SEQ ID NOs: 1-7 or 22 or, e.g., any of SEQ ID NOs: 23-30) is linked at the N-terminus via a Cys residue to a linker, and the linker is linked to a lipid , where the linker is:
, ,
и липид представляет собой:and the lipid is:
, ,
или его соль.or its salt.
Настоящее изобретение также обеспечивает композиции, которые включают одно или несколько соединений по настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Необязательно, композиции могут включать семь различных соединений, как описано выше, где каждое из семи различных соединений включает разную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:1-7 и 23 или SEQ ID NO:23-30. Композиции, включающие подгруппы (например, 2, 3, 4, 5 или 6) этих соединений, также включены в изобретение. Различные соединения, включенные в композиции по настоящему изобретению, могут необязательно включать одинаковые или отличные друг от друга последовательности KRAS, линкеры и/или липиды.The present invention also provides compositions that include one or more compounds of the present invention together with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. Optionally, the compositions may include seven different compounds as described above, wherein each of the seven different compounds comprises a different sequence selected from SEQ ID NO:1-7 and 23 or SEQ ID NO:23-30. Compositions comprising subgroups (eg, 2, 3, 4, 5 or 6) of these compounds are also included in the invention. The various compounds included in the compositions of the present invention may optionally include the same or different KRAS sequences, linkers and/or lipids.
Композиции по настоящему изобретению можно использовать в способах индукции иммунных ответов на KRAS последовательности соединений. Соответственно, композиции могут быть указаны как иммуногенные или вакцинные композиции. Таким образом, композиции, необязательно, могут включать один или несколько адъювантов, или их можно вводить с одним или несколькими адъювантами. В одном примере используемый адъювант может включать CpG олигонуклеотид (например, 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’; SEQ ID NO:8; CpG-7909), который на 5’-конце связан или соединен при помощи линкера с липидом, таким, как следующий:The compositions of the present invention can be used in methods of inducing immune responses to KRAS sequence compounds. Accordingly, the compositions may be referred to as immunogenic or vaccine compositions. Thus, the compositions may optionally include one or more adjuvants, or they may be administered with one or more adjuvants. In one example, the adjuvant used may include a CpG oligonucleotide (e.g., 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'; SEQ ID NO:8; CpG-7909) that is 5'-terminated or linked by a linker to a lipid such as the following :
, ,
или его соль, где Х представляет собой О или S. Предпочтительно, X представляет собой S.or a salt thereof, wherein X is O or S. Preferably, X is S.
CpG олигонуклеотид может быть непосредственно связан с липидом. Альтернативно, линкер, связанный с CpG олигонуклеотидом и с липидом, может представлять собой GG. В CpG олигонуклеотиде все межнуклеозидные группы представляют собой фосфоротиоаты (например, все межнуклеозидные группы в соединении могут быть фосфоротиоатами).The CpG oligonucleotide can be directly linked to a lipid. Alternatively, the linker associated with the CpG oligonucleotide and the lipid may be GG. In a CpG oligonucleotide, all internucleoside groups are phosphorothioates (eg, all internucleoside groups in a compound may be phosphorothioates).
Соединения и композиции по изобретению можно использовать в методах терапии. В частности, KRAS последовательности соединений могут вызывать иммунный ответ на KRAS, который экспрессируется в некоторых раковых клетках. Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает способы лечения рака у субъекта (например, пациента-человека) путем введения субъекту одного или нескольких соединений или композиций по изобретению. Настоящее изобретение также включает способы индуцирования иммунного ответа против KRAS у субъекта (например, пациента-человека) путем введения субъекту одного или нескольких соединений или композиций по изобретению. В различных примерах рак выбран из группы, состоящей из рака поджелудочной железы, рака легкого и рака толстой кишки. Необязательно, способы по изобретению могут также включать введение соединения или композиции по настоящему изобретению в комбинации со вторым (или дополнительным) другим подходом к лечению.The compounds and compositions of the invention can be used in therapies. In particular, KRAS compound sequences can induce an immune response to KRAS, which is expressed in some cancer cells. Accordingly, the present invention provides methods for treating cancer in a subject (eg, a human patient) by administering to the subject one or more compounds or compositions of the invention. The present invention also includes methods for inducing an anti-KRAS immune response in a subject (eg, a human patient) by administering to the subject one or more compounds or compositions of the invention. In various examples, the cancer is selected from the group consisting of pancreatic cancer, lung cancer, and colon cancer. Optionally, the methods of the invention may also include administering a compound or composition of the present invention in combination with a second (or additional) other treatment approach.
Настоящее изобретение также обеспечивает наборы, каждый из которых содержит, например, первый сосуд, который включает одно или несколько соединений по изобретению, необязательно вместе со вторым сосудом, который включает адъювант, такой как адъювант, описанный в настоящей заявке.The present invention also provides kits, each of which contains, for example, a first bottle that includes one or more compounds of the invention, optionally together with a second bottle that includes an adjuvant, such as the adjuvant described herein.
(SEQ ID NO:1-7 и 22) Table 1
(SEQ ID NO:1-7 and 22)
масса (Да)Mol.
mass (Yes)
или
G12T 4-21G12C 4-21
or
G12T 4-21
или
CYKLVVVGA TG VGKSALTIYKLVVVGA CG VGKSALTI
or
CYKLVVVGA TG VGKSALTI
1919
19
Для каждого из “Amph-Пептидов” указанных в Таблице 1, липид поли(этиленгликоль) фрагмент был конъюгирован через малеимид (MAL) - цистеин связывание с пептидом с использованием следующего синтона:For each of the “Amph-Peptides” listed in Table 1, a lipid poly(ethylene glycol) moiety was conjugated via maleimide (MAL)-cysteine binding to the peptide using the following synthon:
DSPE-амидо-dPEG24-амидо-dPEG24-MALDSPE-amido-dPEG24-amido-dPEG24-MAL
(SEQ ID NO:23-30) table 2
(SEQ ID NO:23-30)
G12T 4-21G12C 4-21 or
G12T 4-21
или
YKLVVVGA TG VGKSALTIYKLVVVGA CG VGKSALTI
or
YKLVVVGA TG VGKSALTI
1818
18
Соединение по настоящему изобретению можно получить из мутантного полипептида KRAS, предшественника линкера и липида с использованием способов, известных в данной области. В некоторых вариантах предшественник линкера сначала связывают с липидом, например, следующим образом:The compound of the present invention can be prepared from a mutant KRAS polypeptide, linker and lipid precursor using methods known in the art. In some embodiments, the linker precursor is first linked to a lipid, for example, as follows:
Условия реакции амидирования известны в данной области, например, типичные условия амидирования включают использование реагентов, таких как EDC/DMAP, HATU/HOAt или HBTU/HOAt. Альтернативно, карбоксилат можно заменить O-сукцинимидным сложным эфиром, сложным пентрафторфениловым эфиром или сложным тетрафторфениловым эфиром. Затем можно осуществить взаимодействие продукта этой реакции с мутантным полипептидом KRAS, например, следующим образом:The amidation reaction conditions are known in the art, for example, typical amidation conditions include the use of reagents such as EDC/DMAP, HATU/HOAt or HBTU/HOAt. Alternatively, the carboxylate may be replaced by an O-succinimide ester, a pentrafluorophenyl ester, or a tetrafluorophenyl ester. The product of this reaction can then be reacted with the mutant KRAS polypeptide, for example, as follows:
Реакцию 1,4-присоединения можно осуществить в подходящем растворителе, например полярном органическом растворителе или воде.The 1,4-addition reaction can be carried out in a suitable solvent, such as a polar organic solvent or water.
Альтернативно, соединение по изобретению можно получить следующим образом. Предшественник линкера сначала можно связать с липидом, например, следующим образом:Alternatively, the compound of the invention can be prepared as follows. The linker precursor can first be linked to a lipid, for example as follows:
Затем можно осуществить взаимодействие продукта с аминогруппой (например, N-концевым амином) в мутантном полипептиде KRAS с образованием соединения по настоящему изобретению:The product can then be reacted with an amino group (e.g., the N-terminal amine) in the mutant KRAS polypeptide to form the compound of the present invention:
CpG олигонуклеотид может быть связан непосредственно или при помощи линкера с липидом. Эти соединения могут быть получены с использованием обычной фосфорамидитной химии, известной в данной области. В некоторых примерах CpG олигонуклеотид или CpG олигонуклеотид, который на своем 5’-конце связан с GG, можно подвергнуть взаимодействию со следующим соединением:The CpG oligonucleotide can be linked directly or via a linker to a lipid. These compounds can be prepared using conventional phosphoramidite chemistry known in the art. In some examples, a CpG oligonucleotide, or a CpG oligonucleotide that is linked to a GG at its 5' end, can be reacted with the following compound:
с получением промежуточного соединения, которое после окисления (например, методами фосфитного окисления, известными в данной области, например, с использованием сульфирующего агента, такого как 3-((N, N-диметиламинометилиден)амино)-3H-1,2,4-дитиазол-5-тиона) и гидролиза цианоэтильной группы может дать соединение, состоящее из CpG олигонуклеотида, который на 5’-конце связан или соединен при помощи линкера с липидом:to produce an intermediate which, after oxidation (e.g., by phosphite oxidation methods known in the art, e.g., using a sulfonating agent such as 3-((N,N-dimethylaminomethylidene)amino)-3H-1,2,4- dithiazole-5-thione) and hydrolysis of the cyanoethyl group can give a compound consisting of a CpG oligonucleotide, which at the 5' end is linked or linked by a linker to a lipid:
, ,
или его солью,or its salt,
где Х представляет собой О или S.where X represents O or S.
ДозированиеDosing
Доза каждого вводимого KRAS пептида может находиться в диапазоне от 100 до 5000 мкг на пептид (например, 700 мкг/пептид, что дало бы дозу пептида 4900 мкг для группы из 7 пептидов).The dose of each KRAS peptide administered can range from 100 to 5000 μg per peptide (eg, 700 μg/peptide, which would give a peptide dose of 4900 μg for a group of 7 peptides).
Если адъювант вводят с KRAS пептидом, доза адъюванта может достигать, в расчете на массу тела, 0,48 мг/кг. Примеры схем дозирования показаны ниже в Таблице 3.If the adjuvant is administered with KRAS peptide, the adjuvant dose can reach, based on body weight, 0.48 mg/kg. Examples of dosing regimens are shown below in Table 3.
Следующие примеры представлены для более полного понимания настоящего изобретения. Эти примеры предназначены только для иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничивающие каким-либо образом объем изобретения.The following examples are presented to provide a more complete understanding of the present invention. These examples are intended to be illustrative only and should not be construed as limiting in any way the scope of the invention.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
Пример 1: Амфифильный KRas G12D вызывает иммунный ответ Example 1: Amphiphilic KRas G12D Induces an Immune Response
Определяли эффективность мутантных последовательностей растворимого KRas (KRas) или амфифильного KRas (aKRas) (Фиг. 6) и амфифильного CpG адъюванта (aCpG) для получения иммунного ответа. В этих экспериментах использовали в пять раз больше aCpG, чем амфифильного KRas, поскольку эксперименты с увеличением дозы CpG показали, что эта доза может быть более эффективной.The effectiveness of soluble KRas (KRas) or amphiphilic KRas (aKRas) (Figure 6) and amphiphilic CpG adjuvant (aCpG) mutant sequences to elicit an immune response was determined. In these experiments, five times more aCpG was used than amphiphilic KRas, since experiments with increasing the dose of CpG indicated that this dose may be more effective.
План эксперимента включал следующие 4 группы мышей C57BL/6, иммунизированных перечисленными соединениями (n=5 для каждой группы):The experimental design included the following 4 groups of C57BL/6 mice immunized with the listed compounds (n=5 for each group):
1. KRas G12D+aCpG1. KRas G12D+aCpG
2. aKRas G12D+aCpG2. aKRas G12D+aCpG
3. KRas G12D+pIC3. KRas G12D+pIC
4. Без иммунизации4. No immunization
PolyIC (pIC) использовали как эталонный адъювант в качестве контроля.PolyIC (pIC) was used as a reference adjuvant as a control.
Адъювант, а также исходные растворы пептидов растворяли в H2O. Конечные инъекции разбавляли 1X PBS (фосфатно-солевой буферный раствор).The adjuvant as well as the peptide stock solutions were dissolved in H 2 O. The final injections were diluted with 1X PBS (phosphate buffered saline).
Используемые aKRas пептиды представляли собой последовательности 18-меров мутантных последовательностей с заменой G12D (аминокислоты 4-21 дикого типа → YKLVVVGAGGVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). Для каждой инъекции использовали 20 мкг в 100 мкл.The aKRas peptides used were 18-mer G12D substitution mutant sequences (wild type amino acids 4-21 → YKLVVVGA G GVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). For each injection, 20 μg in 100 μl was used.
Используемая aCpG последовательность представляла собой последовательность CpG1826 (5’-tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:10) с двумя гуанинами, добавленными на 5’-конце (5’-gg tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:11), при концентрации 5 нмоль на каждую 100 мкл инъекцию. CpG1826 является оптимальной мышиной последовательностью, в то время как CpG7909 оптимальна для людей и малоактивна у мышей. CpG1826 и CpG7909 относятся к одному и тому же классу CpG (класс B) и обычно имеют сходные профили активности у своих соответствующих видов.The aCpG sequence used was the sequence CpG1826 (5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:10) with two guanines added at the 5' end (5'-gg tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:11), with concentration of 5 nmol for each 100 μl injection. CpG1826 is the optimal murine sequence, while CpG7909 is optimal in humans and has little activity in mice. CpG1826 and CpG7909 belong to the same class of CpGs (class B) and generally have similar activity profiles in their respective species.
Использовали 50 мкг pIC на каждую 100 мкл инъекцию.50 μg pIC was used for each 100 μl injection.
Примирующую иммунизацию осуществляли подкожно (п/к) в основание хвоста (день 0), с одной бустерной дозой через 2 недели (день 14). Осуществляли ELISpot анализ на секретирующие IFNγ спленоциты, используя стандартные протоколы, через 8 дней после введения бустерной дозы (день 21). Спленоциты (106 клеток/лунка) активировали при помощи 5мкг/лунка последовательности G12D 1 18-мер (aa4-21) → YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1). Как показано на Фиг. 1, aKRas в комбинации с aCpG активировал спленоциты, в то время как при использовании растворимого KRas в комбинации с aCpG, а также в необработанных и обработанных растворимым KRas и pIC контрольных группах активация отсутствовала.Priming immunization was given subcutaneously (SC) at the base of the tail (day 0), with one booster dose 2 weeks later (day 14). An ELISpot assay for IFNγ-secreting splenocytes was performed using standard protocols 8 days after the booster dose (day 21). Splenocytes (10 6 cells/well) were activated with 5 μg/well of the
Пример 2: Амфифильный KRas G12R и G12V вызывают иммунный ответ Example 2: Amphiphilic KRas G12R and G12V induce an immune response
Определяли эффективность дополнительных мутантных последовательностей растворимого KRas (KRas) или амфифильного KRas (aKRas) и амфифильного CpG адъюванта (aCpG) или растворимого CpG (CpG) для получения иммунного ответа.The effectiveness of additional mutant sequences of soluble KRas (KRas) or amphiphilic KRas (aKRas) and amphiphilic CpG adjuvant (aCpG) or soluble CpG (CpG) to produce an immune response was determined.
План эксперимента включал следующие 7 групп мышей C57BL/6, иммунизированных перечисленными соединениями (n=5 для каждой группы):The experimental design included the following 7 groups of C57BL/6 mice immunized with the listed compounds (n=5 for each group):
1. KRas G12R+CpG1. KRas G12R+CpG
2. KRas G12V+CpG2. KRas G12V+CpG
3. KRas G12R+pIC3. KRas G12R+pIC
4. KRas G12V+pIC4. KRas G12V+pIC
5. aKRas G12R+aCpG5. aKRas G12R+aCpG
6. aKRas G12V+aCpG6. aKRas G12V+aCpG
7. Без иммунизации7. No immunization
Адъювант, а также исходные растворы пептидов растворяли в H2O. Конечные инъекции разбавляли 1X PBS.The adjuvant as well as the peptide stock solutions were dissolved in H 2 O. The final injections were diluted 1X with PBS.
Используемые пептиды aKRas представляли собой последовательности 18-меров мутантных последовательностей с заменами G12R/V (SEQ аминокислоты 4-21 дикого типа → YKLVVVGAGGVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). Использовали 20 мкг в 100 мкл для каждой инъекции.The aKRas peptides used were 18-mer mutant sequences with G12R/V substitutions (SEQ amino acids 4-21 wild type → YKLVVVGA G GVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). 20 μg in 100 μl was used for each injection.
Используемая aCpG последовательность представляла собой последовательность CpG1826 (5’-tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:10) с двумя гуанинами, добавленными на 5’-конце (5’-gg tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:11), при концентрации 5 нмоль для каждой 100 мкл инъекции.The aCpG sequence used was the sequence CpG1826 (5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:10) with two guanines added at the 5' end (5'-gg tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:11), with concentration of 5 nmol for each 100 μl injection.
Использовали 50 мкг pIC для каждой 100 мкл инъекции.50 μg pIC was used for each 100 μl injection.
Примирующую иммунизацию осуществляли подкожно (п/к) в основание хвоста, с одной бустерной дозой через 2 недели (день 14).Priming immunization was given subcutaneously (SC) at the base of the tail, with one booster dose after 2 weeks (day 14).
Осуществляли анализ ELISpot на секретирующие IFNγ спленоциты, используя стандартные протоколы, через 7 дней после введения бустерной дозы (день 21). Спленоциты (106 клеток/лунка) активировали при помощи 5 мкг/лунка либо: последовательности G12V 18-мера (aa4-21) → YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2) или последовательности G12R 18-мера (aa4-21) → YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3).An ELISpot assay for IFNγ-secreting splenocytes was performed using standard protocols 7 days after the booster dose (day 21). Splenocytes (10 6 cells/well) were activated with 5 μg/well of either the G12V 18-mer sequence (aa4-21) → YKLVVVGA V GVGKSALTI (SEQ ID NO:2) or the G12R 18-mer sequence (aa4-21) → YKLVVVGA R GVGKSALTI (SEQ ID NO:3).
Как показано на Фиг. 2, и aKRas G12R и G12V в комбинации с aCpG активировали спленоциты, в то время как при использовании растворимого KRasG12R или G12V в комбинации с aCpG, а также в необработанных и обработанных растворимым KRas и pIC контрольных группах активация отсутствовала.As shown in FIG. 2, both aKRas G12R and G12V in combination with aCpG activated splenocytes, while there was no activation when using soluble KRasG12R or G12V in combination with aCpG, as well as in untreated and treated with soluble KRas and pIC control groups.
Пример 3: Амфифильный KRas G12D вызывает CD8+ T-клеточные иммунные ответы Example 3: Amphiphilic KRas G12D Induces CD8 + T Cell Immune Responses
У мышей B6 дикого типа трудно вызвать Kras-специфический CD8+ T-клеточный ответ. Мышей B6, трансгенных по гену HLA человека, A2.1, иммунизировали либо растворимыми, либо амфифил-конъюгированными формами антигена KRas G12D, а также адъювантом (CpG или aCpG). Известно, что аллель A2.1 усиливает у людей ответы на KRas пептиды.It is difficult to induce a Kras-specific CD8 + T cell response in wild-type B6 mice. B6 mice transgenic for the human HLA gene, A2.1, were immunized with either soluble or amphiphile-conjugated forms of KRas G12D antigen, as well as an adjuvant (CpG or aCpG). The A2.1 allele is known to enhance responses to KRas peptides in humans.
План эксперимента включал следующие 4 группы B6 HLA-A2.1 Tg мышей, иммунизированных перечисленными соединениями (n=5 для каждой группы):The experimental design included the following 4 groups of B6 HLA-A2.1 Tg mice immunized with the listed compounds (n=5 for each group):
1. KRas дикого типа+CpG1. Wild type KRas+CpG
2. KRas 12D+CpG2. KRas 12D+CpG
3. aKRas 12D+aCpG3. aKRas 12D+aCpG
4. Без иммунизации4. No immunization
Адъювант, а также исходные растворы пептидов растворяли в H2O. Конечные инъекции разбавляли 1X PBS.The adjuvant as well as the peptide stock solutions were dissolved in H 2 O. The final injections were diluted 1X with PBS.
Используемые пептиды aKRas представляли собой последовательности 18-меров мутантных последовательностей с заменой G12D (аминокислоты 4-21 дикого типа → YKLVVVGAGGVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). Использовали 20 мкг в 100 мкл для каждой инъекции.The aKRas peptides used were 18-mer G12D substitution mutant sequences (wild type amino acids 4-21 → YKLVVVGA G GVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). 20 μg in 100 μl was used for each injection.
Используемая aCpG последовательность представляла собой последовательность CpG1826 (5’-tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:10) с двумя гуанинами, добавленными на 5’-конце (5’-gg tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:11), при концентрации 5 нмоль для каждой 100 мкл инъекции.The aCpG sequence used was the sequence CpG1826 (5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:10) with two guanines added at the 5' end (5'-gg tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:11), with concentration of 5 nmol for each 100 μl injection.
Вакцину вводили самкам мышей подкожно с двух сторон в основание хвоста, по 50 мкл на каждую сторону. Две бустерные дозы вводили с двухнедельными интервалами.The vaccine was administered to female mice subcutaneously on both sides at the base of the tail, 50 μl on each side. Two booster doses were administered at two-week intervals.
Осуществляли анализ внутриклеточного окрашивания цитокинов (ICS) мононуклеарных клеток периферической крови (PBMCs) на IFNγ и анализ ELISpot на секретирующие IFNγ спленоциты, используя стандартные протоколы, через 7 дней после второй и третьей бустерной дозы, соответственно.Intracellular cytokine staining (ICS) assays for peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) for IFNγ and ELISpot assays for IFNγ-secreting splenocytes were performed using standard protocols 7 days after the second and third booster dose, respectively.
PBMC/Спленоциты (106 клеток/лунка и 2×106 клеток/лунка) активировали при помощи 5мкг/лунка либо SEQ ID NO:1, либо одной из SEQ ID NO:12-20, как показано ниже:PBMC/Splenocytes (10 6 cells/well and 2 x 10 6 cells/well) were activated with 5 μg/well of either SEQ ID NO:1 or one of SEQ ID NO:12-20 as shown below:
Специфические мутантные пептиды вводят только мышам, иммунизированным соответствующим 18-мером.Specific mutant peptides are administered only to mice immunized with the corresponding 18-mer.
Фиг. 3 показывает KRas-специфический CD8+ T-клеточный ответ для мышей, иммунизированных комбинацией aKRas G12D и aCpG, но не для растворимого KRas G12D в комбинации с CpG или растворимого KRas дикого типа в комбинации с CpG.Fig. 3 shows the KRas-specific CD8 + T cell response for mice immunized with a combination of aKRas G12D and aCpG, but not for soluble KRas G12D in combination with CpG or soluble wild-type KRas in combination with CpG.
Пример 4: Анализ для определения более высокой концентрации антигена и различных интервалов дозирования Example 4: Assay to Determine Higher Antigen Concentration and Different Dosing Intervals
Концентрацию антигена увеличивали с 20 мкг до 50 мкг, и испытывали двухнедельные (bw) или недельные (w) интервалы между введением доз.The antigen concentration was increased from 20 μg to 50 μg, and two-week (bw) or weekly (w) dosing intervals were tested.
План эксперимента включал следующие 5 группы мышей C57BL/6, иммунизированных перечисленными соединениями (n=5 для каждой группы):The experimental design included the following 5 groups of C57BL/6 mice immunized with the listed compounds (n=5 for each group):
1. KRas 12D+CpG1826 (bw)1. KRas 12D+CpG1826 (bw)
2. KRas 12D+CpG1826 (w)2. KRas 12D+CpG1826 (w)
3. aKRas 12D+aCpG1826 (bw)3. aKRas 12D+aCpG1826 (bw)
4. aKRas 12D+aCpG1826 (w)4. aKRas 12D+aCpG1826 (w)
5. Без иммунизации5. No immunization
Адъювант, а также исходные растворы пептидов растворяли в H2O. Конечные инъекции разбавляли 1X PBS.The adjuvant as well as the peptide stock solutions were dissolved in H 2 O. The final injections were diluted 1X with PBS.
Используемые пептиды aKRas представляли собой последовательности 18-меров мутантных последовательностей с заменой G12D (аминокислоты 4-21 дикого типа → YKLVVVGAGGVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). Использовали 50 мкг в 100 мкл для каждой инъекции.The aKRas peptides used were 18-mer G12D substitution mutant sequences (wild type amino acids 4-21 → YKLVVVGA G GVGKSALTI (SEQ ID NO:9)). Used 50 μg in 100 μl for each injection.
Используемая aCpG последовательность представляла собой последовательность CpG1826 (5’-tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:10) с двумя гуанинами, добавленными на 5’-конце (5’-gg tccatgacgttcctgacgtt-3’; SEQ ID NO:11), при концентрации 5 нмоль для каждой 100 мкл инъекции.The aCpG sequence used was the sequence CpG1826 (5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:10) with two guanines added at the 5' end (5'-gg tccatgacgttcctgacgtt-3'; SEQ ID NO:11), with concentration of 5 nmol for each 100 μl injection.
Примирующую иммунизацию осуществляли подкожно (п/к) в основание хвоста, с одной бустерной дозой через 2 недели.Priming immunization was given subcutaneously (SC) at the base of the tail, with one booster dose after 2 weeks.
ELISpot анализ на IFNγ и CBA анализ (цитометрическое определение концентрации цитокинов на основе микросфер) на IL6, IL10, IL12, TNFα, IFNγ и MCP1 осуществляли на спленоцитах, используя стандартные протоколы, через 7 дней после введения бустерной дозы. Спленоциты (106 клеток/лунка) активировали при помощи 5мкг/лунка либо SEQ ID NO:1, либо одной из SEQ ID NO:12-21, как показано ниже:ELISpot assay for IFNγ and CBA assay for IL6, IL10, IL12, TNFα, IFNγ and MCP1 were performed on splenocytes using standard protocols 7 days after the booster dose. Splenocytes (10 6 cells/well) were activated with 5 μg/well of either SEQ ID NO:1 or one of SEQ ID NO:12-21, as shown below:
Специфические мутантные пептиды вводили только мышам, иммунизированным соответствующим 18-мером.Specific mutant peptides were administered only to mice immunized with the corresponding 18-mer.
Отдельные планшеты готовили для стимуляций либо короткими (9-мер и 10-мер), либо длинными (17-мер и 18-мер) пептидами. Клетки от контрольных мышей “Без иммунизации” стимулировали всеми стимулами.Separate plates were prepared for stimulation with either short (9-mer and 10-mer) or long (17-mer and 18-mer) peptides. Cells from control “No immunization” mice were stimulated with all stimuli.
Фиг. 4 показывает KRas-специфический CD8+ T-клеточный ответ (9-меры) и CD8+ или CD4+T-клеточный ответ (18-мер) для мышей, иммунизированных комбинацией aKRas G12D и aCpG, но не для растворимого KRas G12D в комбинации с CpG или необработанного контроля.Fig. 4 shows KRas-specific CD8+T cell response (9-mers) and CD8+or CD4+T cell response (18-mer) for mice immunized with the combination of aKRas G12D and aCpG, but not for soluble KRas G12D in combination with CpG or untreated control.
Пример 5: Дальнейший анализ амфифилов KRAS Example 5: Further Analysis of KRAS Amphiphiles
Как описано в приведенных выше примерах, потенциальная иммуногенность вакцины на основе мутантного KRAS пептида - амфифила с aCpG адъювантом была продемонстрирована на мышиной модели C57BL/6. Эти и дальнейшие исследования кратко описаны в Таблице 4, и они демонстрируют, что, хотя исторически у мышей были более слабые иммунологические ответы, чем у людей, на мутантные KRAS пептиды из-за видовых различий в связывании MHC,As described in the above examples, the potential immunogenicity of the mutant KRAS peptide amphiphile vaccine with an aCpG adjuvant was demonstrated in the C57BL/6 mouse model. These and further studies are summarized in Table 4 and demonstrate that although mice have historically had weaker immunological responses than humans to mutant KRAS peptides due to species differences in MHC binding,
● подкожное введение мутированных KRAS Amph-Пептидов (G12D (Фиг. 6), G12R и G12V) эффективно для индукции KRAS-специфических Т-клеток селезенки у мышей, как определено при помощи ELISPOT и анализа для определения концентрации цитокинов на основе микросфер (Фиг. 1, Фиг. 2, Фиг. 4 и Фиг. 5)● Subcutaneous administration of mutated KRAS Amph Peptides (G12D (Figure 6), G12R and G12V) is effective in inducing KRAS-specific splenic T cells in mice, as determined by ELISPOT and microsphere-based cytokine concentration assay (Figure 6). 1, Fig. 2, Fig. 4 and Fig. 5)
● мутированные KRAS Amph-Пептиды (G12D, G12R и G12V) в сочетании с aCpG в качестве адъюванта более эффективны для индукции KRAS-специфических T-клеток селезенки, чем мутированные KRAS пептиды в сочетании либо с растворимым CpG, либо с полиинозиновой:полицитидиловой кислотой (poly IC) в качестве адъюванта (Фиг. 1, Фиг. 2 и Фиг. 5) и● mutated KRAS Amph-Peptides (G12D, G12R and G12V) in combination with aCpG as an adjuvant are more effective in inducing KRAS-specific splenic T cells than mutated KRAS peptides in combination with either soluble CpG or polyinosinic:polycytidylic acid ( poly IC) as an adjuvant (Figure 1, Figure 2 and Figure 5) and
мутированные KRAS Amph-Пептиды (G12D) в сочетании с aCpG более эффективны, чем растворимые KRAS пептиды в сочетании с растворимым CpG, для индукции как CD4-, так и CD8-клеточных ответов, что продемонстрировано посредством ответа эффекторных цитокинов при повторной стимуляции либо длинными (18-мер), либо минимальными (9-мер) пептидными эпитопами (Фиг. 4).Mutated KRAS Amph Peptides (G12D) in combination with aCpG are more effective than soluble KRAS peptides in combination with soluble CpG in inducing both CD4 and CD8 cell responses, as demonstrated by effector cytokine responses upon repeated stimulation or long ( 18-mer) or minimal (9-mer) peptide epitopes (Figure 4).
1) KRAS G12D+CpG;
2) Amph-KRAS G12D+aCpG;
3) KRAS G12D+Poly IC;
4) Без лечения
KRAS пептиды (амфифильные или растворимые) дозировали при 20 мкг; aCpG-1826 при 5 нмоль; и Poly IC при 50 мкг; исходные растворы растворяли в воде, а растворы конечной дозы - в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS).
Объем дозы: 100 мкл, разделенные для введения в виде подкожной инъекции (п/к) с обеих сторон основания хвоста (по 50 мкл на место инъекции)4 groups:
1) KRAS G12D+CpG;
2) Amph-KRAS G12D+aCpG;
3) KRAS G12D+Poly IC;
4) No treatment
KRAS peptides (amphiphilic or soluble) were dosed at 20 μg; aCpG-1826 at 5 nmol; and Poly IC at 50 μg; initial solutions were dissolved in water, and final dose solutions were dissolved in phosphate-buffered saline (PBS).
Dose volume: 100 µl divided for subcutaneous injection (SC) on both sides of the base of the tail (50 µl per injection site)
Прайм: День 0
Буст: День 14 ROA: p/c
Prime:
Boost: Day 14
Amph-пептид G12D+aCpG вызывал превосходные ответы Т-клеток селезенки по сравнению с растворимым G12D+растворимый CpG или Poly ICELISPOT (IFNγ) results:
Amph-peptide G12D+aCpG induced superior spleen T cell responses compared to soluble G12D+soluble CpG or Poly IC
1) KRAS G12R+CpG;
2) KRAS G12V+CpG
3) KRAS G12R+Poly IC;
4) KRAS G12V+Poly IC;
5) Amph-KRAS G12R+aCpG;
6) Amph-KRAS G12V+aCpG;
7) Без лечения
KRAS пептиды (амфифильные или растворимые) дозировали при 20 мкг; aCpG-1826 при 5 нмоль; и Poly IC при 50 мкг; исходные растворы растворяли в воде, а растворы конечной дозы в PBS.
Объем дозы: 100 мкл, разделенные для введения в виде подкожной инъекции (п/к) с обеих сторон основания хвоста (по 50 мкл на место инъекции)7 groups:
1) KRAS G12R+CpG;
2) KRAS G12V+CpG
3) KRAS G12R+Poly IC;
4) KRAS G12V+Poly IC;
5) Amph-KRAS G12R+aCpG;
6) Amph-KRAS G12V+aCpG;
7) No treatment
KRAS peptides (amphiphilic or soluble) were dosed at 20 μg; aCpG-1826 at 5 nmol; and Poly IC at 50 μg; initial solutions were dissolved in water, and final dose solutions were dissolved in PBS.
Dose volume: 100 µl divided for subcutaneous injection (SC) on both sides of the base of the tail (50 µl per injection site)
Прайм: День 0
Буст: День 14ROA: p/c
Prime:
Boost: Day 14
Последовательности KRAS пептидов более иммуногенны при конъюгировании с липидным фрагментом, чем растворимые пептидыELISPOT (IFNγ) results:
KRAS peptide sequences are more immunogenic when conjugated to a lipid moiety than soluble peptides
1) KRAS G12D+CpG (bw);
2) KRAS G12D+CpG (w);
3) Amph-KRAS G12D+aCpG (bw);
4) Amph-KRAS G12D+aCpG (w);
5) Без лечения
KRAS пептиды (амфифильные или растворимые) дозировали при 20 мкг; aCpG-1826 при 5 нмоль; и Poly IC при 50 мкг; исходные растворы растворяли в воде, а растворы конечной дозы в PBS.
Объем дозы: 100 мкл, разделенные для введения в виде подкожной инъекции (п/к) с обеих сторон основания хвоста (по 50 мкл на место инъекции)5 groups:
1) KRAS G12D+CpG (bw);
2) KRAS G12D+CpG (w);
3) Amph-KRAS G12D+aCpG (bw);
4) Amph-KRAS G12D+aCpG (w);
5) No treatment
KRAS peptides (amphiphilic or soluble) were dosed at 20 μg; aCpG-1826 at 5 nmol; and Poly IC at 50 μg; initial solutions were dissolved in water, and final dose solutions were dissolved in PBS.
Dose volume: 100 µl divided for subcutaneous injection (SC) on both sides of the base of the tail (50 µl per injection site)
2 дозы (прайм+буст) вводили животным, обрабатываемым раз в две недели (bw), и 3 дозы (прайм+2 буст-дозы) вводили животным, обрабатываемым еженедельно (w):
Прайм: День 0 (w и bw)
Буст: День 7 (w)
Буст: День 14 (w и bw)ROA: p/c
2 doses (prime + boost) were administered to animals treated biweekly (bw), and 3 doses (prime + 2 boost doses) were administered to animals treated weekly (w):
Prime: Day 0 (w and bw)
Boost: Day 7 (w)
Boost: Day 14 (w and bw)
Амфифилы вызывали эндогенные CD8 и CD4 T-клеточные ответы против мутантного KRAS у мышей C57BL/6, как определено методом ELISPOT (IFNγ) и/или в анализе определения концентрации цитокинов на основе микросфер (IFNγ, TNFα и IL-6)ELISPOT (IFNγ) and CBA results:
Amphiphiles induced endogenous CD8 and CD4 T cell responses against mutant KRAS in C57BL/6 mice as determined by ELISPOT (IFNγ) and/or bead-based cytokine concentration assays (IFNγ, TNFα, and IL-6)
Другие варианты осуществленияOther embodiments
Хотя изобретение было описано в связи с его конкретными вариантами осуществления, следует понимать, что оно допускает дальнейшие модификации, и настоящая заявка предназначена для охвата любых вариаций, применений или адаптаций изобретения, следуя, в целом, принципам изобретения, и включение таких отступлений от настоящего раскрытия входит в известную или обычную практику в области техники, к которой относится изобретение, и может применяться к существенным признакам, описанным выше.Although the invention has been described in connection with its specific embodiments, it should be understood that it is subject to further modifications, and the present application is intended to cover any variations, applications or adaptations of the invention, following generally the principles of the invention, and to include such departures from the present disclosure is within known or common practice in the field of technology to which the invention relates and may apply to the essential features described above.
Все публикации, патенты и патентные заявки включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте в той степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка были специально и индивидуально указаны для включения посредством ссылки во всей полноте.All publications, patents and patent applications are incorporated herein by reference in their entirety to the extent that each individual publication, patent or patent application had been specifically and individually indicated to be incorporated by reference in their entirety.
Некоторые варианты осуществления изобретения представлены в виде следующих отдельных пронумерованных параграфов.Certain embodiments of the invention are presented in the following separate numbered paragraphs.
1. Соединение, включающее мутантную последовательность KRAS и липид, где мутантная последовательность KRAS конъюгирована с липидом при помощи линкера, и (i) линкер включает один или несколько полиэтиленгликолевых блоков, (ii) липид представляет собой 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), и (iii) мутантная последовательность KRAS включает или состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29) и YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).1. A compound comprising a mutant KRAS sequence and a lipid, wherein the mutant KRAS sequence is conjugated to the lipid by a linker, and (i) the linker includes one or more polyethylene glycol blocks, (ii) the lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero- 3-phosphoethanolamine (DSPE), and (iii) the mutant KRAS sequence includes or consists of an amino acid sequence selected from the group consisting of YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO :25), YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29) and YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).
2. Соединение, включающее мутантную последовательность KRAS и липид, где мутантная последовательность KRAS конъюгирована с липидом при помощи линкера, и (i) линкер включает один или несколько полиэтиленгликолевых блоков, (ii) липид представляет собой 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), и (iii) мутантная последовательность KRAS включает или состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22) и CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).2. A compound comprising a mutant KRAS sequence and a lipid, wherein the mutant KRAS sequence is conjugated to the lipid by a linker, and (i) the linker includes one or more polyethylene glycol blocks, (ii) the lipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero- 3-phosphoethanolamine (DSPE), and (iii) the mutant KRAS sequence includes or consists of an amino acid sequence selected from the group consisting of CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO :3), CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22) and CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).
3. Соединение по пункту 1 или 2, где мутантная последовательность KRAS, на ее N-конце, конъюгирована с линкером через цистеин-малеимидную связь.3. The compound according to
4. Соединение по любому из пунктов 1-3, где линкер включает 48 повторяющихся звеньев полиэтиленгликоля.4. The compound according to any of paragraphs 1-3, where the linker includes 48 polyethylene glycol repeating units.
5. Соединение по пункту 1 или 2, где мутантная последовательность KRAS, на ее N-конце, конъюгирована со следующей структурой:5. The compound according to
6. Композиция, включающая одно или несколько соединений по любому из пунктов 1-5 и фармацевтически приемлемый носитель.6. A composition comprising one or more compounds according to any of claims 1-5 and a pharmaceutically acceptable carrier.
7. Композиция по пункту 6, где композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:23), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:24), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:25), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:26), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:27), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:28), или соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:29), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность YKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:30).7. The composition of
8. Композиция по пункту 6, где композиция включает (1) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGADGVGKSALTI (SEQ ID NO:1), (2) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAVGVGKSALTI (SEQ ID NO:2), (3) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGARGVGKSALTI (SEQ ID NO:3), (4) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAAGVGKSALTI (SEQ ID NO:4), (5) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGASGVGKSALTI (SEQ ID NO:5), (6) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGACGVGKSALTI (SEQ ID NO:6), или соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGATGVGKSALTI (SEQ ID NO:22), и (7) соединение, включающее аминокислотную последовательность CYKLVVVGAGDVGKSALTI (SEQ ID NO:7).8. The composition of
9. Композиция по любому из пунктов 6-8, где композиция дополнительно включает соединение, состоящее из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:9. The composition according to any one of claims 6-8, where the composition further includes a compound consisting of the nucleotide sequence 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8), which, at its 5' end, is linked or linked by linker with the following lipid:
, ,
или его солью,or its salt,
где Х представляет собой О или S.where X represents O or S.
10. Композиция по пункту 6, где композиция включает 700 мкг каждого соединения.10. The composition of
11. Способ лечения рака у пациента, при этом способ включает введение пациенту композиции по любому из пунктов 6-10.11. A method of treating cancer in a patient, the method comprising administering to the patient a composition according to any one of claims 6-10.
12. Способ по пункту 11, где способ дополнительно включает введение адъюванта.12. The method according to claim 11, where the method further includes administering an adjuvant.
13. Способ по пункту 12, где адъювант включает CpG нуклеотидную последовательность.13. The method according to
14. Способ по пункту 13, где CpG нуклеотидная последовательность включает 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO: 8).14. The method of claim 13, wherein the CpG nucleotide sequence includes 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO: 8).
15. Способ по любому из пунктов 12-14, где вводят 0,1 мг, 0,5 мг или 2,5 мг адъюванта.15. The method according to any of paragraphs 12-14, where 0.1 mg, 0.5 mg or 2.5 mg of adjuvant is administered.
16. Способ по пункту 10, где способ дополнительно включает введение пациенту соединения, состоящего из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:16. The method of
, ,
или его солью,or its salt,
где Х представляет собой О или S.where X represents O or S.
17. Композиция по пункту 9 или способ по пункту 16, где нуклеотидная последовательность связана с липидом.17. The composition according to
18. Способ по пункту 16 или 17, где вводят 0,1 мг, 0,5 мг или 2,5 мг соединения, состоящего из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:18. The method according to claim 16 or 17, wherein 0.1 mg, 0.5 mg or 2.5 mg of a compound consisting of the nucleotide sequence 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8) is administered, which, on its 5'-end, linked or linked by a linker to the following lipid:
, ,
или его солью,or its salt,
где Х представляет собой О или S.where X represents O or S.
19. Способ по любому из пунктов 11-16 или 18, где рак представляет собой рак поджелудочной железы, рак легкого или рак толстой кишки.19. The method according to any one of claims 11-16 or 18, wherein the cancer is pancreatic cancer, lung cancer or colon cancer.
20. Способ по любому из пунктов 11-16 или 18, где все межнуклеозидные группы, соединяющие нуклеозиды в 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), представляют собой фосфоротиоаты.20. The method of any one of claims 11-16 or 18, wherein all internucleoside groups connecting the nucleosides in 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8) are phosphorothioates.
21. Набор, включающий (i) соединение по любому из пунктов 1-5 или композицию по любому из пунктов 6-8 и (ii) соединение, состоящее из нуклеотидной последовательности 5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’ (SEQ ID NO:8), которая, на ее 5’-конце, связана или соединена при помощи линкера со следующим липидом:21. A kit comprising (i) a compound of any of claims 1-5 or a composition of any of claims 6-8 and (ii) a compound consisting of the nucleotide sequence 5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (SEQ ID NO:8), which, at its 5' end, is linked or linked by a linker to the following lipid:
, ,
или его солью,or its salt,
где Х представляет собой О или S.where X represents O or S.
Другие варианты осуществления находятся в пределах следующей формулы изобретения.Other embodiments are within the scope of the following claims.
--->--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ LIST OF SEQUENCES
<110> VEDANTRA PHARMACEUTICALS, INC.<110> VEDANTRA PHARMACEUTICALS, INC.
<120> СОЕДИНЕНИЯ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ МУТАНТНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ KRAS И <120> COMPOUNDS CONTAINING A MUTANT KRAS SEQUENCE AND
ЛИПИД,LIPID,
И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ AND THEIR APPLICATIONS
<130> 51026-026WO2<130> 51026-026WO2
<140> PCT/US19/020404<140> PCT/US19/020404
<141> 2019-03-01<141> 2019-03-01
<150> US 62/637,879<150>US 62/637,879
<151> 2018-03-02<151> 2018-03-02
<160> 31<160> 31
<170> PatentIn version 3.5<170> Patent In version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 1<400> 1
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 2<210> 2
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 2<400> 2
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 3<210> 3
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 3<400> 3
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Arg Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Arg Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 4<210> 4
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 4<400> 4
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 5<210> 5
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 5<400> 5
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 6<210> 6
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 6<400> 6
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 7<210> 7
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 7<400> 7
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 8<210> 8
<211> 24<211> 24
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 8<400> 8
tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt
24 24
<210> 9<210> 9
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 9<400> 9
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 10<210> 10
<211> 20<211> 20
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 10<400> 10
tccatgacgt tcctgacgtt tccatgacgt tcctgacgtt
20 20
<210> 11<210> 11
<211> 22<211> 22
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 11<400> 11
ggtccatgac gttcctgacg tt ggtccatgac gttcctgacg tt
22 22
<210> 12<210> 12
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 12<400> 12
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 13<210> 13
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 13<400> 13
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu ThrLys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 5 10 151 5 10 15
IleIle
<210> 14<210> 14
<211> 10<211> 10
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 14<400> 14
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly ValLys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val
1 5 101 5 10
<210> 15<210> 15
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 15<400> 15
Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly ValLeu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val
1 515
<210> 16<210> 16
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 16<400> 16
Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val GlyVal Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly
1 515
<210> 17<210> 17
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 17<400> 17
Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly LysVal Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 515
<210> 18<210> 18
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 18<400> 18
Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys SerVal Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser
1 515
<210> 19<210> 19
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 19<400> 19
Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser AlaGly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 515
<210> 20<210> 20
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 20<400> 20
Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuAla Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 515
<210> 21<210> 21
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 21<400> 21
Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu ThrAsp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 515
<210> 22<210> 22
<211> 19<211> 19
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 22<400> 22
Cys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Thr Gly Val Gly Lys Ser AlaCys Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Thr Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr IleLeu Thr Ile
<210> 23<210> 23
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 23<400> 23
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 24<210> 24
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 24<400> 24
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 25<210> 25
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 25<400> 25
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Arg Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Arg Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 26<210> 26
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 26<400> 26
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 27<210> 27
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 27<400> 27
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 28<210> 28
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 28<400> 28
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 29<210> 29
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 29<400> 29
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Thr Gly Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Thr Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 30<210> 30
<211> 18<211> 18
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 30<400> 30
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala LeuTyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr IleThr Ile
<210> 31<210> 31
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction
<400> 31<400> 31
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp GlyLys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly
1 515
<---<---
Claims (56)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862637879P | 2018-03-02 | 2018-03-02 | |
| US62/637,879 | 2018-03-02 | ||
| PCT/US2019/020404 WO2019169332A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-03-01 | Compounds including a mutant kras sequence and a lipid and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020132290A RU2020132290A (en) | 2022-04-05 |
| RU2809161C2 true RU2809161C2 (en) | 2023-12-07 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6168778B1 (en) * | 1990-06-11 | 2001-01-02 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vascular endothelial growth factor (VEGF) Nucleic Acid Ligand Complexes |
| US20100074945A1 (en) * | 1996-04-19 | 2010-03-25 | The United States Of America, As Represented By | Mutated ras peptides for generation of cd8+ cytotoxic t lymphocytes |
| US7709002B1 (en) * | 1996-04-19 | 2010-05-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mutated ras peptides for generation of CD8+Cytotoxic T lymphocytes |
| US20120328701A1 (en) * | 2011-01-24 | 2012-12-27 | Anterios, Inc. | Nanoparticle compositions, formulations thereof, and uses therefor |
| US20140044755A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-02-13 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | RNAi PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR SUPPRESSING EXPRESSION OF KRAS GENE |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6168778B1 (en) * | 1990-06-11 | 2001-01-02 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vascular endothelial growth factor (VEGF) Nucleic Acid Ligand Complexes |
| US20100074945A1 (en) * | 1996-04-19 | 2010-03-25 | The United States Of America, As Represented By | Mutated ras peptides for generation of cd8+ cytotoxic t lymphocytes |
| US7709002B1 (en) * | 1996-04-19 | 2010-05-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mutated ras peptides for generation of CD8+Cytotoxic T lymphocytes |
| US20120328701A1 (en) * | 2011-01-24 | 2012-12-27 | Anterios, Inc. | Nanoparticle compositions, formulations thereof, and uses therefor |
| US20140044755A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-02-13 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | RNAi PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR SUPPRESSING EXPRESSION OF KRAS GENE |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20250009888A1 (en) | Compounds including a mutant kras sequence and a lipid and uses thereof | |
| CN101355928A (en) | Compositions and methods for cancer immunotherapy | |
| US12247052B2 (en) | CpG amphiphiles and uses thereof | |
| US10597732B2 (en) | Allogeneic autophagosome-enriched composition for the treatment of disease | |
| EP2351577A1 (en) | Methods to trigger, maintain and manipulate immune responses by targeted administration of biological response modifiers into lymphoid organs | |
| AU2016227629A1 (en) | Method | |
| RU2809161C2 (en) | Compounds containing mutant kras sequence and lipids and their use | |
| Li et al. | Cell membrane adhesive n-hexadecyl choline phosphate as vaccine delivery systems for anticancer immunotherapy | |
| KR102787353B1 (en) | Compounds comprising mutant KRAS sequences and lipids and uses thereof | |
| KR20250047830A (en) | Compounds including a mutant kras sequence and a lipid and uses thereof | |
| RU2823677C2 (en) | Cpg amphiphiles and applications thereof | |
| Marin et al. | Improved biodistribution and enhanced immune response of subunit vaccine using a nanostructure formed by self-assembly of ascorbyl palmitate | |
| Hauschild et al. | 4.2. 3 Strategies for Immunointervention in Malignant Melanoma Adjuvant Melanoma Therapy |