RU2807732C1

RU2807732C1 - RECOMBINANT STRAIN MYCOBACTERIUM BOVIS rBCG-1 BASED ON VACCINE STRAIN MYCOBACTERIUM BOVIS BCG STRAIN RUSSIA 368

Info

Publication number: RU2807732C1
Application number: RU2022115096A
Authority: RU
Inventors: Анна Владимировна Гончаренко; Дмитрий Сергеевич Карпов; Дарья Константиновна Армянинова; Нонна Игоревна Надолинская; Мария Сергеевна Котлярова; Михаил Владимирович Замахаев; Евгений Валерьевич Усачев; Владимир Алексеевич Гущин; Артем Петрович Ткачук; Михаил Сергеевич Шумков; Сергей Михайлович Юдин; Валентин Владимирович Макаров; Валериан Сергеевич Шадрин
Filing date: 2022-06-03
Publication date: 2023-11-21

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: vaccine strain of Mycobacterium bovis rBCG-1 is proposed, containing an artificial operon encoding the protectively significant proteins Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, the yeast degradation signal Rpn4 under the secretion signal Ag85a and β-subunit of cholera toxin CtxB.

EFFECT: invention ensures formation of immunity to protective antigens of tuberculosis that are absent in BCG.

1 cl

Description

Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и медицинской микробиологии и представляет штамм Mycobacterium bovis rBCG-1, содержащий искусственный оперон, кодирующий протективно значимые белки Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, дрожжевой сигнал деградации Rpn4 и β-субъединицу холерного токсина (CtxB). Получен генно-инженерным методом из штамма Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 путем введения в геном генов протективных антигенов ESAT-6, CFP-10, гена дрожжевого сигнала деградации Rpn4 и гена CtxB. ESAT6 и CFP10 являются важными протективными антигенами Mycobacterium tuberculosis. Сигнал секреции Ag85a обеспечивает секрецию химерного белка Rpn4-CFP10-ESAT6- CtxB. Rpn4 является транскрипционным фактором, контролирующим синтез протеасом, первые 80 аминокислотных остатков которого обеспечивают связывание и протеосомную деградацию. Введение сигнала протеасомной деградации на N-конец химерного белка должно способствовать презентации антигенов в составе MHC-1-комплекса гистосовместимости после фагоцитирования клеток рекомбинантного штамма rBCG-1 макрофагами. Презентация в составе MHC-I является важной для формирования протективного иммунного ответа на внутриклеточные патогены.The invention relates to biotechnology, genetic engineering and medical microbiology and represents a strain of Mycobacterium bovis rBCG-1 containing an artificial operon encoding the protectively significant proteins Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, the yeast degradation signal Rpn4 and the β-subunit of cholera toxin (CtxB) . Obtained by genetic engineering from the Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 by introducing into the genome the genes for the protective antigens ESAT-6, CFP-10, the yeast degradation signal gene Rpn4 and the CtxB gene. ESAT6 and CFP10 are important protective antigens of Mycobacterium tuberculosis. The Ag85a secretion signal ensures the secretion of the chimeric protein Rpn4-CFP10-ESAT6-CtxB. Rpn4 is a transcription factor that controls proteasome synthesis, the first 80 amino acid residues of which mediate binding and proteasomal degradation. The introduction of a proteasomal degradation signal at the N-terminus of the chimeric protein should facilitate the presentation of antigens as part of the MHC-1 histocompatibility complex after phagocytosis of cells of the recombinant rBCG-1 strain by macrophages. Presentation within MHC-I is important for the formation of a protective immune response to intracellular pathogens.

Туберкулез остается одной самой частой причиной смерти от бактериальной инфекции. 9,0-11,1 миллионов человек ежегодно заболевают и около 1,5 миллиона в год умирают от этой инфекции. Ситуацию усугубляет распространение антибиотикоустойчивых штаммов, наибольшее количество которых обнаруживается в Индии, Китае и России. Очевидно, самым эффективным путем борьбы с туберкулезом является вакцинация. Единственная аттенуированная вакцина BCG хорошо защищает от туберкулеза детей, однако в отношении взрослых ее эффективность крайне низка. Общая эффективность вакцины BCG против туберкулеза, составляет около 50% с экстремальными колебаниями от 0% до 80% между различными полевыми испытаниями (Rocheetat, 1995).Tuberculosis remains the single most common cause of death from bacterial infection. 9.0-11.1 million people become ill each year and about 1.5 million die each year from this infection. The situation is aggravated by the spread of antibiotic-resistant strains, the largest numbers of which are found in India, China and Russia. Obviously, the most effective way to combat tuberculosis is vaccination. The only attenuated vaccine, BCG, provides good protection against tuberculosis in children, but its effectiveness in adults is extremely low. The overall effectiveness of the BCG vaccine against tuberculosis is about 50% with extreme variations from 0% to 80% between different field trials (Rocheetat, 1995).

Поэтому предпринимаются попытки создания новых вариантов вакцинных штаммов.Therefore, attempts are being made to create new variants of vaccine strains.

Повысить эффективность вакцины BCG поможет введение в геном вакцинного штамма генов, кодирующих протективно значимые антигены ESAT-6, CFP-10 Mycobacterium tuberculosis, отсутствующие у BCG, в виде химерных генов с дрожжевым сигналом деградации в протеасомах Rpn4 для улучшения презентации антигенов и β-субъединицей холерного токсина для усиления неспецифического иммунного ответа.The effectiveness of the BCG vaccine will be increased by introducing into the genome of the vaccine strain genes encoding protectively significant antigens ESAT-6, CFP-10 Mycobacterium tuberculosis, which are absent in BCG, in the form of chimeric genes with a yeast degradation signal in the Rpn4 proteasome to improve the presentation of antigens and the β-subunit of cholera toxin to enhance a nonspecific immune response.

Рекомбинантные вакцинные штаммы для профилактики туберкулеза описаны в следующих патентах.Recombinant vaccine strains for the prevention of tuberculosis are described in the following patents.

Патент (РФ) RU 2342400 C2Patent (RF) RU 2342400 C2

Леандер Гроде (DE), Стефан Г.Е. Кауфман (DE), Бэрбель Раупах (DE), Юрген Хесс (DE).Leander Grode (DE), Stefan G.E. Kaufmann (DE), Bärbel Raupach (DE), Jürgen Hess (DE).

Описана дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, которая является продуцентом слитого полипептида - содержит рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый полипептид, включающий в себя как минимум один домен из полипептида, который способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих, и домен выхода из фаголизосом.A urease-deficient Mycobacterium cell is described, which is a producer of a fusion polypeptide - it contains a recombinant nucleic acid molecule encoding a fusion polypeptide, including at least one domain from a polypeptide that is capable of inducing an immune response in mammals, and a phagolysosome escape domain.

Патент (РФ) RU 2186109 C2Patent (RF) RU 2186109 C2

Маргарет А. Лиу, Донна Монтгомери, Джеффри Улмер, Жан Контен, Крис Юижен.Margaret A. Liu, Donna Montgomery, Jeffrey Ulmer, Jean Conten, Chris Huijen.

В изобретении предлагается полипептид, кодирующийся в цистроне, связанном с промотором транскрипции CMV. Первый цистрон содержит промотор транскрипции CMV и представляет ген, кодирующий микобактериальный белок 85А или В, или С. Указанный ген связан контрольной последовательностью, причем последняя содержит терминатор и промотор транскрипции BGH или JRES. Контрольная последовательность может быть связана со вторым цистроном, представляющим ген, кодирующий GM-CSF, IL-12, интерферон или член семейства В7 Т-клеточных костно-стимулирующих белков.The invention provides a polypeptide encoded in a cistron associated with the CMV transcriptional promoter. The first cistron contains the CMV transcriptional promoter and represents a gene encoding mycobacterial protein 85A or B or C. This gene is linked by a control sequence, the latter containing a terminator and a BGH or JRES transcriptional promoter. The control sequence may be associated with a second cistron representing a gene encoding GM-CSF, IL-12, interferon, or a member of the B7 family of T-cell bone-stimulating proteins.

Патент (РФ) RU 2337707 C2Patent (RF) RU 2337707 C2

Маркус А. Хорвиц (US), Гюнтер Харт (US), Майкл В. Туллиус (US).Markus A. Horwitz (US), Gunther Hart (US), Michael W. Tullius (US).

Представлены иммуногенные композиции, включающие рекомбинантные аттенюированные внутриклеточные патогены, например бациллу Кальмета-Герена (BCG). Иммуногенная композиция включает, в частности, BCG, содержащую последовательность внехромосомной нуклеиновой кислоты, которая включает ген, кодирующий крупный внеклеточный белок микобактерий размером 23,5, 30 и/или 32 кДа, при этом крупный внеклеточный неслитый белок микобактерий сверхэкспрессируется и секретируется. Вариантом иммуногенной композиции является композиция, содержащая рекомбинантную BCG с регулируемым ростом.Immunogenic compositions are provided that include recombinant attenuated intracellular pathogens, such as Bacillus Calmette-Guerin (BCG). The immunogenic composition includes, in particular, a BCG containing an extrachromosomal nucleic acid sequence that includes a gene encoding a large extracellular mycobacterial protein of size 23.5, 30 and/or 32 kDa, wherein the large extracellular unfused mycobacterial protein is overexpressed and secreted. A variant of the immunogenic composition is a composition containing recombinant growth-controlled BCG.

Патент (CIIIA)US 6924118 В2Patent (CIIIA)US 6924118 B2

Marcus A. Horwitz, Gunter Harth, Michael V. Tullius.Marcus A. Horwitz, Gunter Harth, Michael V. Tullius.

Предложены иммуногенные композиции, содержащие рекомбинантные аттенуированные внутриклеточные патогены, которые были трансформированы для экспрессии рекомбинантных иммуногенных антигенов того же или других внутриклеточных патогенов. Типичные иммуногенные композиции включают, но не ограничиваются ими, аттенуированные рекомбинантные микобактерий, экспрессирующие основные внеклеточные негибридные белки микобактерий и/или других внутриклеточных патогенов. Предлагаются другие варианты реализации, в которых рекомбинантный аттенуированный внутриклеточный патоген является ауксотрофным.Immunogenic compositions are provided that contain recombinant attenuated intracellular pathogens that have been transformed to express recombinant immunogenic antigens of the same or other intracellular pathogens. Exemplary immunogenic compositions include, but are not limited to, attenuated recombinant mycobacteria expressing the essential extracellular non-fusion proteins of mycobacteria and/or other intracellular pathogens. Other embodiments are provided in which the recombinant attenuated intracellular pathogen is auxotrophic.

Патент (США) US 8287886 B2US Patent US 8287886 B2

Carlos Martin, Montanes Brigitte, Gicquel Esther, Perez Herran, Jesus Gonzalo, Asensio Ainhoa, Arbues Arribas.Carlos Martin, Montanes Brigitte, Gicquel Esther, Perez Herran, Jesus Gonzalo, Asensio Ainhoa, Arbues Arribas.

Изобретение относится к выделенному микроорганизму рода Mycobacterium, отличающемуся тем, что в нем инактивирован ген Rv0757, что дает фенотип PhoP-, и инактивирован второй ген, что предотвращает продукцию DIM (фенотип DIM-). Кроме того, настоящее изобретение относится к применению указанного микроорганизма для получения вакцины для иммунизации или профилактики туберкулеза.The invention relates to an isolated microorganism of the genus Mycobacterium, characterized in that the Rv0757 gene is inactivated, which gives the PhoP- phenotype, and the second gene is inactivated, which prevents the production of DIM (DIM- phenotype). In addition, the present invention relates to the use of said microorganism for the production of a vaccine for immunization or prevention of tuberculosis.

Патент (ЕС) ЕР 0706571 В1Patent (EU) EP 0706571 B1

Ase Bengaard, Andersen Peter, Andersen Kare, Haslov Anne, Lund SorensenAse Bengaard, Andersen Peter, Andersen Kare, Haslov Anne, Lund Sorensen

Изобретение относится к секретируемым антигенам микобактерий, способным вызывать ранние (в течение 4 дней) иммунологические ответы от клеток Т-хелперов в виде высвобождения гамма-интерферона у иммунных животных с памятью после заражения микобактериями туберкулезного комплекса.The invention relates to secreted mycobacterial antigens capable of inducing early (within 4 days) immunological responses from T-helper cells in the form of the release of interferon gamma in immune animals with memory after infection with Mycobacterium tuberculosis complex.

Патент (США) US 5955077 AUS Patent US 5955077 A

Peter Andersen, Ase Bengaard, Andersen Kaare, Haslov Anne, Lund Sorensen.Peter Andersen, Ase Bengaard, Andersen Kaare, Haslov Anne, Lund Sorensen.

Изобретение относится к новым секретируемым антигенам из микобактерий, способным вызывать ранние (в течение 4 дней) иммунологические ответы от клеток Т-хелперов в виде высвобождения гамма-интерферона у иммунных животных памяти после заражения микобактериями туберкулезного комплекса. Также раскрыты фрагменты нуклеиновой кислоты, кодирующие антигены, а также способы иммунизации животных / людей и способы диагностики туберкулеза.The invention relates to new secreted antigens from mycobacteria, capable of inducing early (within 4 days) immunological responses from T-helper cells in the form of the release of interferon gamma in immune memory animals after infection with Mycobacterium tuberculosis complex. Also disclosed are nucleic acid fragments encoding antigens, as well as methods for immunizing animals/humans and methods for diagnosing tuberculosis.

Патент (Канада) СА 2301879 СPatent (Canada) CA 2301879 C

Stefan Н.Е. Kaufmann, Jurgen Hess.Stefan N.E. Kaufmann, Jurgen Hess.

Настоящее изобретение относится к новым рекомбинантным вакцинам, обеспечивающим защитный иммунитет против туберкулеза. Кроме того, настоящее изобретение относится к новым рекомбинантным молекулам нуклеиновой кислоты, векторам, содержащим указанные молекулы нуклеиновой кислоты, клеткам, трансформированным указанными молекулами нуклеиновой кислоты, и полипептидам, кодируемым указанными молекулами нуклеиновой кислоты.The present invention relates to new recombinant vaccines that provide protective immunity against tuberculosis. Furthermore, the present invention relates to novel recombinant nucleic acid molecules, vectors containing said nucleic acid molecules, cells transformed with said nucleic acid molecules, and polypeptides encoded by said nucleic acid molecules.

Патент (Испания) ES 2447032 T3Patent (Spain) ES 2447032 T3

Avigdor Shafferman, Anat Zvi, Naomi Ariel, John Fulkerson, Ronggai Sun, Rosemary Chang, Jerald C. Sadoff.Avigdor Shafferman, Anat Zvi, Naomi Ariel, John Fulkerson, Ronggai Sun, Rosemary Chang, Jerald C. Sadoff.

Рекомбинантная бактерия M. bovis Calmette-Guerin (BCG), в которой по меньшей мере один ген DosR-регулона. Указанная BCG содержит по меньшей мере две последовательности нуклеиновой кислоты, отличающиеся друг от друга, каждая из которых кодирует один или несколько генов, которые сверхэкспрессируются, включая указанные две последовательности нуклеиновых кислот: i) первая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая по меньшей мере один антиген Mycobacterium tuberculosis (Mtb); и ii) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере один антиген Mtb для реактивации или дереактивации Mtb, который не является антигеном DosR.Recombinant bacterium M. bovis Calmette-Guerin (BCG) containing at least one DosR regulon gene. Said BCG contains at least two nucleic acid sequences, different from each other, each of which encodes one or more genes that are overexpressed, including said two nucleic acid sequences: i) a first nucleic acid sequence encoding at least one Mycobacterium tuberculosis antigen (Mtb); and ii) a second nucleic acid sequence encoding at least one Mtb antigen for reactivating or deactivating Mtb that is not a DosR antigen.

Патент (Япония) ЕР 1535627 В1Patent (Japan) EP 1535627 B1

Mitsuo Honda, Kazuhiro Matsuo, Masaru Kanekiyo, Duanthanorm Promkhatkaew.Mitsuo Honda, Kazuhiro Matsuo, Masaru Kanekiyo, Duanthanorm Promkhatkaew.

Рекомбинантная вакцина BCG, полученная путем трансформации экспрессирующим вектором, несущим полинуклеотид, кодирующий антигенный белок, причем эта рекомбинантная вакцина BCG состоит из полинуклеотида модифицированного типа, содержащего полинуклеотид, имеющий третье основание каждого из его кодонов, замещенного G или С, без изменения типа аминокислоты.A recombinant BCG vaccine produced by transformation with an expression vector carrying a polynucleotide encoding an antigenic protein, wherein the recombinant BCG vaccine consists of a modified type of polynucleotide containing a polynucleotide having the third base of each of its codons substituted with G or C, without changing the type of amino acid.

Созданный нами рекомбинантный штамм Mycobacterium bovis rBCG-1 отличается тем, что он создан на основе Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 и в его состав входит уникальная композиция Rpn4, ESAT-6, CFP-10, CtxB под сигналом секреции sigAg85a.The recombinant strain Mycobacterium bovis rBCG-1 we created is distinguished by the fact that it is based on Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 and contains a unique composition of Rpn4, ESAT-6, CFP-10, CtxB under the secretion signal sigAg85a.

Назначение изобретения- вакцинный штамм. Техническим результатом при использовании штамма rBCG-1 для иммунизации является формирование иммунитета к протективным антигенам туберкулеза, отсутствующим в BCG.The purpose of the invention is a vaccine strain. The technical result when using the rBCG-1 strain for immunization is the formation of immunity to protective tuberculosis antigens that are absent in BCG.

Получение плазмиды pMV-ProChimerPreparation of plasmid pMV-ProChimer

Кодонный состав нуклеотидной последовательности sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB полипептида был оптимизирован для экспрессии в BCG. Последовательность гена химерного белка sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB синтезирована и клонирована в вектор pMV306hsp по сайтам рестрикции EcoRI и HindIII в результате чего была получена плазмида pMV-ProChimer.The codon composition of the nucleotide sequence of the sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB polypeptide was optimized for expression in BCG. The gene sequence of the chimeric protein sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB was synthesized and cloned into the pMV306hsp vector at EcoRI and HindIII restriction sites, resulting in the pMV-ProChimer plasmid.

Получение рекомбинантного штамма Mycobacterium bovis rBCG-1Preparation of the recombinant strain Mycobacterium bovis rBCG-1

Штамм получен путем введения в хромосому BCG плазмиды pMV-ProChimer, содержащей гены протективных антигенов ESAT-6, CFP-10 и гена β-субъединицы холерного токсина в виде моноцистрона в комбинации с фактором деградации в протеасомах Rpn4 на N-конце под сигналом секреции Ag85a. Плазмида pMV-ProChimer введена в штамм методом электропорации согласно протоколу Parish Т. Mycobacterial protocols, Third Edition.The strain was obtained by introducing the pMV-ProChimer plasmid into the BCG chromosome, containing the genes of the protective antigens ESAT-6, CFP-10 and the cholera toxin β-subunit gene in the form of a monocistron in combination with the proteasome degradation factor Rpn4 at the N-terminus under the Ag85a secretion signal. Plasmid pMV-ProChimer was introduced into the strain by electroporation according to the protocol of Parish T. Mycobacterial protocols, Third Edition.

Выросшие в присутствии гигромицина колонии содержали в хромосоме интегрированный вектор pMVProChimer.The colonies grown in the presence of hygromycin contained an integrated vector pMVProChimer in the chromosome.

Для оценки эффективности трансляции целевого белка был проведен иммуноблоттинг в формате Dot blot со специфическими антителами. Были взяты образцы биомассы исходного штамма BCG, клеток rBCG-1 и супернатанта rBCG-1. Из них получили грубые клеточные экстракты, которые затем нанесли на нитроцеллюлозную мембрану. В качестве первичных антител использовали моноклональные антитела anti-ESAT-6. Результаты иммуноблоттинга показали присутствие рекомбинантного химерного белка в белковом экстракте рекомбинантного штамма rBCG-1.To assess the efficiency of translation of the target protein, immunoblotting was performed in Dot blot format with specific antibodies. Biomass samples of the original BCG strain, rBCG-1 cells, and rBCG-1 supernatant were collected. From these, crude cell extracts were obtained, which were then applied to a nitrocellulose membrane. Anti-ESAT-6 monoclonal antibodies were used as primary antibodies. The results of immunoblotting showed the presence of a recombinant chimeric protein in the protein extract of the recombinant strain rBCG-1.

--->--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru" <ST26SequenceListing nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru"

dtdVersion="V1_3" fileName="rBCG-1-seqList.xml" softwareName="WIPO dtdVersion="V1_3" fileName="rBCG-1-seqList.xml" softwareName="WIPO

Sequence" softwareVersion="2.2.0" productionDate="2023-02-20">Sequence" softwareVersion="2.2.0" productionDate="2023-02-20">

</ApplicationIdentification> </ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>https://www.fips.ru/registers-doc-view/fips_s <ApplicantFileReference>https://www.fips.ru/registers-doc-view/fips_s

ervlet?DB=RUPAT&DocNumber=2022115096&TypeFile=html</ApplicantFervlet?DB=RUPAT&DocNumber=2022115096&TypeFile=html</ApplicantF

ileReference>ileReference>

<ApplicationNumberText>2022115096/10(0311679)</ApplicationNumberText <ApplicationNumberText>2022115096/10(0311679)</ApplicationNumberText

>>

</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное <ApplicantName languageCode="ru">Federal state

бюджетное учреждение «Центр стратегического планирования и управления budgetary institution "Center for Strategic Planning and Management

медико-биологическими рисками здоровью» Федерального medical and biological health risks" of the Federal

медико-биологического агентства</ApplicantName>Medical and Biological Agency</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Federal State Budgetary Institution "Centre <ApplicantNameLatin>Federal State Budgetary Institution "Centre

for Strategic Planning and Management of Biomedical Health for Strategic Planning and Management of Biomedical Health

Risks" of the Federal Medical Biological Risks" of the Federal Medical Biological

Agency</ApplicantNameLatin>Agency</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Рекомбинантный штамм Мycobacterium <InventionTitle languageCode="en">Recombinant Mycobacterium strain

bovis rBCG-1 на основе вакцинного штамма Мycobacterium bovis BCG bovis rBCG-1 based on the Mycobacterium bovis BCG vaccine strain

strain Russia 368</InventionTitle>strain Russia 368</InventionTitle>

<INSDSeq_length>10535</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>10535</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..10535</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..10535</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatat <INSDSeq_sequence>tagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatat

atggagttccgagatctaaacagaactcagtctttaaaagaactagggctcaaaaccggatccgagcacaatggagttccgagatctaaacagaactcagtctttaaaagaactagggctcaaaaccggatccgagcaca

aggagggtgattgaactgattaggctggatcattctcaaactccgggtaacgttgttattatgttaatttaggagggtgattgaactgattaggctggatcattctcaaactccgggtaacgttgttattatgttaattt

attgtaaaacttagcatggagagcgtatttcatcgaacctttttgcataagagaagtgtaaaactttacgattgtaaaacttagcatggagagcgtatttcatcgaacctttttgcataagagaagtgtaaaactttacg

atttgttgacgagatcaaacaagactctgaatctaatcagtggattacttaccttaagcggttcaattttatttgttgacgagatcaaacaagactctgaatctaatcagtggattacttaccttaagcggttcaatttt

gtcgatgctcgtgattgggaggatgcactcagtgagtgattccctcgtccttgggatcttgttccgggaagtcgatgctcgtgattgggaggatgcactcagtgagtgattccctcgtccttgggatcttgttccgggaa

acgggcaacaatctctttaagctcttcttgattctcacgcagggcattcacacaatgacgatctaacttgacgggcaacaatctctttaagctcttcttgattctcacgcagggcattcacacaatgacgatctaacttg

ccatcgctgaccattttttccagttccaatagggcatgaggaatggattgcgcttgtttataagggcgatccatcgctgaccattttttccagttccaatagggcatgaggaatggattgcgcttgtttataagggcgat

gtgcggtcagggcatcaaagatgttcgcgaccgctataatgcgtgctgggataggaatttggtcactgacgtgcggtcagggcatcaaagatgttcgcgaccgctataatgcgtgctgggataggaatttggtcactgac

tagaccaaatggatagccgctgccatccaaaaattcatggtgataagccatgatttctcgcaaaacggcctagaccaaatggatagccgctgccatccaaaaattcatggtgataagccatgatttctcgcaaaacggcc

aaacaaggatggtgaggtgtacctagctttgcaatcacttcattgagtaaatcaatgccgtattcaatataaacaaggatggtgaggtgtacctagctttgcaatcacttcattgagtaaatcaatgccgtattcaatat

ggttatgaacttgctctttttcatggttggccagtgaagcgcgtttttgcagaaggtcggctggcaaggcggttatgaacttgctctttttcatggttggccagtgaagcgcgtttttgcagaaggtcggctggcaaggc

caatttcccaagatcatggcaagtggcaaactggctgatgttttctatgagctcatcatcgagcgcataccaatttcccaagatcatggcaagtggcaaactggctgatgttttctatgagctcatcatcgagcgcatac

tgatctgcgacatcgagtgcgatgatccgcgcgtaacggctgatccgctctttatgttgcttgatgtgaatgatctgcgacatcgagtgcgatgatccgcgcgtaacggctgatccgctctttatgttgcttgatgtgaa

gccagtgttcgggagattgagtttcaatttggtgcacatggtcaaccaactgatggatcaaggcgtattcgccagtgttcgggagattgagtttcaatttggtgcacatggtcaaccaactgatggatcaaggcgtattc

accacagatggattgttggatgagcgataaataggtttctagccgttcaacgactgacgcagaaaaataaaccacagatggattgttggatgagcgataaataggtttctagccgttcaacgactgacgcagaaaaataa

tggctcattgaagcgttaaaaaataggaaaccgacgaaggtgtgttgatcaaaaacgggtttcactaacgtggctcattgaagcgttaaaaaataggaaaccgacgaaggtgtgttgatcaaaaacgggtttcactaacg

aagagcaatattgctgttccagcaaccagcggttatgaggtgtatggcttttggcttgattcgcgagatcaagagcaatattgctgttccagcaaccagcggttatgaggtgtatggcttttggcttgattcgcgagatc

gtgaataatgcgcagtgcaccggactctttgctctgttgtaaagagggtaagttcgcgagtggtaactcagtgaataatgcgcagtgcaccggactctttgctctgttgtaaagagggtaagttcgcgagtggtaactca

taatgcacaaagtcatgactgaccggagagctgtcggcacaggttttaatcgagtctttcttctcatcgttaatgcacaaagtcatgactgaccggagagctgtcggcacaggttttaatcgagtctttcttctcatcgt

acagagcgaatgaaatcctttggacatcaggcagctctaccctaattttctcgagcatattggttaaataacagagcgaatgaaatcctttggacatcaggcagctctctaccctaattttctcgagcatattggttaaata

ggtatttagcgaacccaccgatgggtaatagcgaaactgaccgactttgggttgcatctgcatatcaccgggtatttagcgaacccaccgatgggtaatagcgaaactgaccgactttgggttgcatctgcatatcaccg

cccttccttgctagctactcattaagtttagacaaggttttgtggattgccgcattagggcggtgcttttcccttccttgctagctactcattaagtttagacaaggttttgtggattgccgcattagggcggtgctttt

ctatgtctgttttactactcgaggtctgttttactactcgatcacatcccgttgctttttagattaagccctatgtctgttttactactcgaggtctgttttactactcgatcacatcccgttgctttttagattaagcc

gctgagcacacccaataacaaggcgctccccaccatgccaattaaaggaagtcgcaagactttaaacaaggctgagcacacccaataacaaggcgctccccaccatgccaattaaaggaagtcgcaagactttaaacaag

aagaagccgactaatagggctgcccaatcgagtggggcatgtactgtgctactccaaacgggttgatataaagaagccgactaatagggctgcccaatcgagtggggcatgtactgtgctactccaaacgggttgatata

aggcggcgagcagtaaaccgaccacacaggcgtttactccttgcatggctcctgcaactttcgggcgctgaggcggcgagcagtaaaccgaccacacaggcgtttactccttgcatggctcctgcaactttcgggcgctg

agccaatgccgaccaatttttgagtacgccgagtagcaataaaaaaccggggagaaacacggctaaggttagccaatgccgaccaatttttgagtacgccgagtagcaataaaaaaccggggagaaacacggctaaggtt

gcgattaaagcgccaaccacgggcatctctggtgtcagcacatagccaaggtaagtggctaaggtaaacagcgattaaagcgccaaccacgggcatctctggtgtcagcacatagccaaggtaagtggctaaggtaaaca

ttgggcccggcaccgcttgggctgccgcgtaacccgtcagaaattgatcggtcgataggctgtcacctaattgggcccggcaccgcttgggctgccgcgtaacccgtcagaaattgatcggtcgataggctgtcacctaa

ggcattttgtagcaagggaagaaccacatgaccgccaccaaacactaagcttcctgcttggaagaaatggggcattttgtagcaagggaagaaccacatgaccgccaccaaacactaagcttcctgcttggaagaaatgg

ccaaacaactcaaccagcggtgagcttgcagccaatagcggcagcccgagtaataaacttgcaaagagcaccaaacaactcaaccagcggtgagcttgcagccaatagcggcagcccgagtaataaacttgcaaagagca

gcagtgaaagccaagaggggtgaaaaacctcgagcgcagaagacggtttcggcgctaagcgggcttggccgcagtgaaagccaagaggggtgaaaaacctcgagcgcagaagacggtttcggcgctaagcgggcttggcc

gaccaatgcggcaagcagtaacaccgcaaattgggtgagtaaactgggtgccagcgtaatcgcaaccgcagaccaatgcggcaagcagtaacaccgcaaattgggtgagtaaactgggtgccagcgtaatcgcaaccgca

gtaagaacacataaccctgcagtaaggcgttgctgacaaaaattgcgatacatggttaaacaagcatcgggtaagaacacataaccctgcagtaaggcgttgctgacaaaaattgcgatacatggttaaacaagcatcgg

ccaccactatgatcgcgagtagcttcaagccatgaatcacttgttcaaacagtggggtatcaaggagatgccaccactatgatcgcgagtagcttcaagccatgaatcacttgttcaaacagtggggtatcaaggagatg

actactcagccccgcaagcagcagcatgatgagcacggagggaagggtaaaaccgagaaacgctgcccaaactactcagccccgcaagcagcagcatgatgagcacggagggaagggtaaaaccgagaaacgctgcccaa

gcgccagccagaccaccacgatgataaccaatcgcaaaaccaacttggctagaaccggggccaggaaggagcgccagccagaccaccacgatgataaccaatcgcaaaaccaacttggctagaaccggggccaggaagga

actggctcagtgccacaaattgtgcatattcttgctcgctaacccagcgtaatttctcaacaaaggtgtgactggctcagtgccacaaattgtgcatattcttgctcgctaacccagcgtaatttctcaacaaaggtgtg

gcgaaagtaacctatatgtgcggctggcccaccaaaactcacccatccgagagcaaaaaaagttctaaaagcgaaagtaacctatatgtgcggctggcccaccaaaactcacccatccgagagcaaaaaaagttctaaaa

atcgttagcataatgatctgaagtcatccgtaatcaatggaaggtcaacatccgtaggagcataggttatatcgttagcataatgatctgaagtcatccgtaatcaatggaaggtcaacatccgtaggagcataggttat

ggagagtcaaagcgcagaacaactccgaatgtgtaaaaaattacaccattatgatggcaatcgtatgaatggagagtcaaagcgcagaacaactccgaatgtgtaaaaaattacaccattatgatggcaatcgtatgaat

tgattcagaaatagaaaaattgggtcaatatcgacctctatttaaattgtggaaacgtttacacaattggtgattcagaaatagaaaaattgggtcaatatcgacctctatttaaattgtggaaacgtttacacaattgg

tgagtggttcacagaatcggtgtttgaaagtttgttagacttttttgcatctgcagcatgtcatcattcctgagtggttcacagaatcggtgtttgaaagtttgttagacttttttgcatctgcagcatgtcatcattcc

tattcaaagctgcgaatcttattgaatgacttctttactcctcggcttgagggtagtaattaaagaggagtattcaaagctgcgaatcttattgaatgacttctttactcctcggcttgagggtagtaattaaagaggag

aaatactagatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgaaatactagatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctg

tttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttatttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggtta

catcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgcatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatg

agcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtgttgacgccgggcaagagcaactcggtcagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtgttgacgccgggcaagagcaactcggtc

gccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatgggccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatgg

catgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctg

acaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttg

atcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgcagcaatatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgcagcaat

ggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagacggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagac

tggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgtggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctg

ataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctc

ccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgag

ataggtgcctcactgattaagcattggtaacgtctaggagtaagtagcggccgcgggagattagaagaatataggtgcctcactgattaagcattggtaacgtctaggagtaagtagcggccgcgggagattagaagaat

gagtgtgatcgctaaacaaatgacctacaaggtttatatgtcaggcacggtcaatggacactactttgaggagtgtgatcgctaaacaaatgacctacaaggtttatatgtcaggcacggtcaatggacactactttgag

gtcgaaggcgatggaaaaggtaagccctacgagggggagcagacggtaaagctcactgtcaccaagggcggtcgaaggcgatggaaaaggtaagccctacgagggggagcagacggtaaagctcactgtcaccaagggcg

gacctctgccatttgcttgggatattttatcaccacagtgtcagtacggaagcataccattcaccaagtagacctctgccatttgcttgggatattttatcaccacagtgtcagtacggaagcataccattcaccaagta

ccctgaagacatccctgactatgtaaagcagtcattcccggagggctatacatgggagaggatcatgaacccctgaagacatccctgactatgtaaagcagtcattcccggagggctatacatggggagaggatcatgaac

tttgaagatggtgcagtgtgtactgtcagcaatgattccagcatccaaggcaactgtttcatctaccatgtttgaagatggtgcagtgtgtactgtcagcaatgattccagcatccaaggcaactgtttcatctaccatg

tcaagttctctggtttgaactttcctcccaatggacctgtcatgcagaagaagacacagggctgggaacctcaagttctctggtttgaactttcctcccaatggacctgtcatgcagaagaagacacaggctgggaacc

caacactgagcgtctctttgcacgagatggaatgctgctaggaaacaactttatggctctgaagttagaacaacactgagcgtctctttgcacgagatggaatgctgctaggaaacaactttatggctctgaagttagaa

ggaggcggtcactatttgtgtgaatttaaaactacttacaaggcaaagaagcctgtgaagatgccagggtggaggcggtcactatttgtgtgaatttaaaactacttacaaggcaaagaagcctgtgaagatgccaggt

atcactatgttgaccgcaaactggatgtaaccaatcacaacaaggattacacttcggttgagcagtgtgaatcactatgttgaccgcaaactggatgtaaccaatcacaacaaggattacacttcggttgagcagtgtga

aatttccattgcacgcaaacctgtggtcgcctaacaggagtagttgaaaaatgtacgccgtagagcaaagaatttccatgcacgcaaacctgtggtcgcctaacaggagtagttgaaaaatgtacgccgtagagcaaag

gcgttattggcttgttgcttcgcgtattcaagaggatcttatgcgcaacttctccgatattcttcttagcgcgttattggcttgttgcttcgcgtattcaagaggatcttatgcgcaacttctccgatattcttcttagc

caagattggcaaaacccgcacatcgttaaatggcactgccgtacaccccatgttcctttgcacagttatccaagattggcaaaacccgcacatcgttaaatggcactgccgtacaccccatgttcctttgcacagttatc

gcactgagcaggaggctcgtttggatgttggggggaatcgccaatctctaaatggtcagtggcggtttgcgcactgagcaggaggctcgtttggatgttggggggaatcgccaatctctaaatggtcagtggcggtttgc

tctgtttgagaagccagaagcggttgagcctgcggtgatagacccggatttcgatgatagcgcttgggcgtctgtttgagaagccagaagcggttgagcctgcggtgatagacccggatttcgatgatagcgcttgggcg

cacattcctgtaccgagtaactggcagatgcaaggctttgataagccgatttacaccaatatccaatatccacattcctgtaccgagtaactggcagatgcaaggctttgataagccgatttacaccaatatccaatatc

catttgcggatcggccgccttacgtgccgcaagataatccaaccggctgttatcgccaccgttttacactcatttgcggatcggccgccttacgtgccgcaagataatccaaccggctgttatcgccaccgttttacact

ggaaaaacaagcgctaaccgagtccattcgcattgtatttgatggggtcaattcggcatttcatctgtggggaaaaacaagcgctaaccgagtccattcgcattgtatttgatggggtcaattcggcatttcatctgtgg

tgcaatggtcattgggtcggttattcgcaagatagccgcttgcctgccgagtttgagttaaccccttatctgcaatggtcattgggtcggttattcgcaagatagccgcttgcctgccgagtttgagttaaccccttatc

tacaagagggtgaaaacctgttggtggccatggtgctgcgctggtctgatggctcttatttggaagaccatacaagaggtgaaaacctgttggtggccatggtgctgcgctggtctgatggctcttatttggaagacca

agatatgtggtggctgagtggcatctttcgcgatgtgtatctctaccgcaagccgatactcgcgattgaaagatatgtggtggctgagtggcatctttcgcgatgtgtatctctaccgcaagccgatactcgcgattgaa

gatttttttatccgcactgaattagatgcgctttatcaacacgctgaattgcgagtagaaacacgcttaagatttttttatccgcactgaattagatgcgctttatcaacacgctgaattgcgagtagaaacacgcttaa

gccaagtgactcgccatcatcaagtgcaagtggctttattcgatgcacaaggtgaatgcgtggcgcgttcgccaagtgactcgccatcatcaagtgcaagtggctttattcgatgcacaaggtgaatgcgtggcgcgttc

acaagccttacatacaggccagcgtgtagtggatgaaaaaggagcatggcacgataaaaccgaacacagtacaagccttacatacaggccagcgtgtagtggatgaaaaaggagcatggcacgataaaaccgaacacagt

ttagcgatttgctctccgacactgtggagtgatgaagcgccttatctttaccgctgcgtgatctgtttgcttagcgatttgctctccgacactgtggagtgatgaagcgccttatctttaccgctgcgtgatctgtttgc

ttgatgaagatggcgcgccgattgagtttgaaagtgcagcagtgggttttcgcaaagtagaaatcactcattgatgaagatggcgcgccgattgagtttgaaagtgcagcagtgggttttcgcaaagtagaaatcactca

gggactactgaagctcaatggtcagcccttgttgatccgcggggtgaaccgtcatgaacatcatcccgaagggactactgaagctcaatggtcagcccttgttgatccgcggggtgaaccgtcatgaacatcatcccgaa

ttggggcatgtgatggatgaagcaagcatgcgccgcgatattgaattgatgaaacagcataatttcaatgttggggcatgtgatggatgaagcaagcatgcgccgcgatattgaattgatgaaacagcataatttcaatg

cggtgcgtaccgcccattaccccaatcatccgcgttggtacgaactgtgtgatgagtacggtttgtatgtcggtgcgtaccgcccattaccccaatcatccgcgttggtacgaactgtgtgatgagtacggtttgtatgt

ggtggatgaggccaatctcgaaacccacggccaatttccgatgagccgactttccaatgatccacaatggggtggatgaggccaatctcgaaacccacggccaatttccgatgagccgactttccaatgatccacaatgg

gtgaatgcctatttgcagcgcatgattggcatggtggagcgcgataaaaaccacccttgtgtgatcatttgtgaatgcctatttgcagcgcatgattggcatggtggagcgcgataaaaaccacccttgtgtgatcattt

ggtcgctcggcaatgaatcggggattggtaccaatcatcacgccatgtatcagtggacgaaacagcgcgaggtcgctcggcaatgaatcggggattggtaccaatcatcacgccatgtatcagtggacgaaacagcgcga

cccatcgcgtcctgtgcaatacgaagggggcggcgctaatacggcggcgaccgatattgtttgcccgatgcccatcgcgtcctgtgcaatacgaagggggcggcgctaatacggcggcgaccgatattgtttgcccgatg

tatgcgcgggtcgatcagcatcagccacatcctgcggttccaaaatatgcgctgaaaaattggatcagtttatgcgcgggtcgatcagcatcagccacatcctgcggttccaaaatatgcgctgaaaaattggatcagtt

tgccgcaggaaaaccgccccctcatcttgtgtgaatatgctcatgcgatgggcaacagcttgggcgcgtttgccgcaggaaaaccgccccctcatcttgtgtgaatatgctcatgcgatgggcaacagcttgggcgcgtt

ttataaatactggcaggcgtttcgtgagtttcctcgtctgcaaggtggctttatttgggattgggtcgatttataaatactggcaggcgtttcgtgagtttcctcgtctgcaaggtggctttatttgggattgggtcgat

cagggcatttccaaatgggatagcgaggggcgccactattggggctatggcggtgattttggcgatacgacagggcatttccaaatgggatagcgaggggcgccactattggggctatggcggtgattttggcgatacga

ttaacgatcgccaattctgcataaacggtttgctgttcccagatcgcacgccgcatccggcattacatgattaacgatcgccaattctgcataaacggtttgctgttcccagatcgcacgccgcatccggcattacatga

agtcaaaaaagtccagcagccgtaccagttttcgttgagctatcccaagctcaccattcacaatgagcgcagtcaaaaaagtccagcagccgtaccagttttcgttgagctatcccaagctcaccattcacaatgagcgc

ttgtttgcagcgctgccgctggagctggtagttagtgtgctatgcgatgggcaagagattaagcaagaacttgtttgcagcgctgccgctggagctggtagttagtgtgctatgcgatgggcaagagattaagcaagaac

gtctgccgcttgatattgcgccgcgcggcacaatcacgctggatttagcgtcgctgccaatgttgccagagtctgccgcttgatattgcgccgcgcggcacaatcacgctggatttagcgtcgctgccaatgttgccaga

gcatgaataccacctcaatgcagtcttattgtgtcgtgaggatcagccatggtctaacgcggggcactgcgcatgaataccacctcaatgcagtcttattgtgtcgtgaggatcagccatggtctaacgcggggcactgc

atcgctagtgagcagtggtgtttgcagccacgaagaagcatgttacctaaaatcacacacgctccgctgcatcgctagtgagcagtggtgtttgcagccacgaagaagcatgttacctaaaatcacacacgctccgctgc

ctcaatggcagcaagatggagataaggtgcgcatcgaggcggccaatcagcaatggcagtttaaccgccactcaatggcagcaagatggagataaggtgcgcatcgaggcggccaatcagcaatggcagtttaaccgcca

aactgggctattggagcagtggtggcaaaatggtcagcccgtattgagtgaaccgctgcgcgataactttaactgggctattggagcagtggtggcaaaatggtcagcccgtattgagtgaaccgctgcgcgataacttt

taccgcgcggtgctggataacgatattggtactagcgaagcgcagcatcttgacccgaacagctggatcgtaccgcgcggtgctggataacgatattggtactagcgaagcgcagcatcttgacccgaacagctggatcg

cacgttggcatgcggcgggcttagataagctgcgtgtggaatgtgacgatcttcgcgtcaccaccttgaacacgttggcatgcggcgggcttagataagctgcgtgtggaatgtgacgatcttcgcgtcaccaccttgaa

cgagagtgtcgaagtggtgatcgatgtcgcccattaccatcagcaagcgttagcgcttcgtacccgttggcgagagtgtcgaagtggtgatcgatgtcgcccattaccatcagcaagcgttagcgcttcgtacccgttgg

cgttaccaaatcttcggtgatgcgcgggtagaactgaatgttgaggtgatgctgtgttctgatttaccgccgttaccaaatcttcggtgatgcgcgggtagaactgaatgttgaggtgatgctgtgttctgatttaccgc

cgctgccaagagtggggttaacgctcgcattaccagtggcagaaaacccagtgtcttggtttggtcgcggcgctgccaagagtggggttaacgctcgcattaccagtggcagaaaacccagtgtcttggtttggtcgcgg

gccgcatgagaattatccggatcgtttgcaatcggcgcatgtggggcgatacaccgccacggtggatgaggccgcatgagaattatccggatcgtttgcaatcggcgcatgtggggcgatacaccgccacggtggatgag

ctgcatacaccgtacattttcccgagcgaaaatggtttgcgttgtgatactcgccagctacaagtgggcgctgcatacaccgtacattttcccgagcgaaaatggtttgcgttgtgatactcgccagctacaagtgggcg

ctttggtggtggaagggcattttcacttctcgctcagtcgctactcacaaacgatgttggataaagccaactttggtggtggaagggcattttcacttctcgctcagtcgctactcacaaacgatgttggataaagccaa

acacagcaacgagttggtggcgggcgataagtggtatctcaatctggatgcgcagcatatgggcgtgggcacacagcaacgagttggtggcgggcgataagtggtatctcaatctggatgcgcagcatatgggcgtgggc

ggcgatgattcgtggagccaaagtgtgcaccctgaatttttgctcactcagccgcactatcagtatcagcggcgatgattcgtggagccaaagtgtgcaccctgaatttttgctcactcagccgcactatcagtatcagc

tcaccttacgtgtgaaagcgtcatccccacaataagtcgaccgatgcccttgagagccttcaacccagtctcaccttacgtgtgaaagcgtcatccccacaataagtcgaccgatgcccttgagagccttcaacccagtc

agctccttccgagatctcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttcagctccttccgagatctcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttc

taaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaataaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaa

ggaagagtcctgaggcggaaagaaccagctgtggaatgtgtgtcagttagggtgtggaaagtccccaggcggaagagtcctgaggcggaaagaaccagctgtggaatgtgtgtcagttagggtgtggaaagtccccaggc

tccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccaggtgtggaaagtccccagtccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccaggtgtggaaagtccccag

gctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccatagtcccgcccctaacgctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccatagtcccgcccctaac

tccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaatttttttttccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaatttttttt

atttatgcagaggccgaggccgcctcggcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggagatttatgcagaggccgaggccgcctcggcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggag

gcctaggcttttgcaaagatcgatcaagagacaggatgaggatcgtttcgcatgattgaacaagatggatgcctaggcttttgcaaagatcgatcaagagacaggatgaggatcgtttcgcatgattgaacaagatggat

tgcacgcaggttctccggccgcttgggtggagaggctattcggctatgactgggcacaacagacaatcggtgcacgcaggttctccggccgcttgggtggagaggctattcggctatgactgggcacaacagacaatcgg

ctgctctgatgccgccgtgttccggctgtcagcgcaggggcgcccggttctttttgtcaagaccgacctgctgctctgatgccgccgtgttccggctgtcagcgcaggggcgcccggttctttttgtcaagaccgacctg

tccggtgccctgaatgaactgcaagacgaggcagcgcggctatcgtggctggccacgacgggcgttcctttccggtgccctgaatgaactgcaagacgaggcagcgcggctatcgtggctggccacgacgggcgttcctt

gcgcagctgtgctcgacgttgtcactgaagcgggaagggactggctgctattgggcgaagtgccggggcagcgcagctgtgctcgacgttgtcactgaagcgggaagggactggctgctattgggcgaagtgccggggca

ggatctcctgtcatctcaccttgctcctgccgagaaagtatccatcatggctgatgcaatgcggcggctgggatctcctgtcatctcaccttgctcctgccgagaaagtatccatcatggctgatgcaatgcggcggctg

catacgcttgatccggctacctgcccattcgaccaccaagcgaaacatcgcatcgagcgagcacgtactccatacgcttgatccggctacctgcccattcgaccaccaagcgaaacatcgcatcgagcgagcacgtactc

ggatggaagccggtcttgtcgatcaggatgatctggacgaagagcatcaggggctcgcgccagccgaactggatggaagccggtcttgtcgatcaggatgatctggacgaagagcatcaggggctcgcgccagccgaact

gttcgccaggctcaaggcgagcatgcccgacggcgaggatctcgtcgtgacccatggcgatgcctgcttggttcgccaggctcaaggcgagcatgcccgacggcgaggatctcgtcgtgacccatggcgatgcctgcttg

ccgaatatcatggtggaaaatggccgcttttctggattcatcgactgtggccggctgggtgtggcggaccccgaatatcatggtggaaaatggccgcttttctggattcatcgactgtggccggctgggtgtggcggacc

gctatcaggacatagcgttggctacccgtgatattgctgaagagcttggcggcgaatgggctgaccgcttgctatcaggacatagcgttggctacccgtgatattgctgaagagcttggcggcgaatgggctgaccgctt

cctcgtgctttacggtatcgccgctcccgattcgcagcgcatcgccttctatcgccttcttgacgagttccctcgtgctttacggtatcgccgctcccgattcgcagcgcatcgccttctatcgccttcttgacgagttc

ttctgagcgggactctggggttcgaaatgaccgaccaagcgacgcccaacctgccatcacgagatttcgattctgagcgggactctggggttcgaaatgaccgaccaagcgacgcccaacctgccatcacgagatttcga

ttccaccgccgccttctatgaaaggttgggcttcggaatcgttttccgggacgccggctggatgatcctcttccaccgccgccttctatgaaaggttgggcttcggaatcgttttccgggacgccggctggatgatcctc

cagcgcggggatctcatgctggagttcttcgcccaccctagggggaggctaactgaaacacggaaggagacagcgcggggatctcatgctggagttcttcgcccaccctagggggaggctaactgaaacacggaaggaga

caataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacggtgttgggtcgttcaataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacggtgttgggtcgtt

tgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggctgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggc

caatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcagcaatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcag

ccaacgtcggggcggcaggccctgccatagcctcaggttactcatatatactttagattgatttaaaactccaacgtcggggcggcaggccctgccatagcctcaggttactcatatatactttagattgatttaaaact

tcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgt

gagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttcgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttc

tgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagatgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaaga

gctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtggctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtg

tagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgt

taccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccgga

taaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacacctaaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacacc

gaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggt

atccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctatccggtaagcggcagggtcggaacaggagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatct

ttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcgg

agcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacaagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcaca

tgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgccatgcat</INSDSeq_sequtgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgccatgcat</INSDSeq_sequ

ence>ence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>

<---<---

Claims

Vaccine strain Mycobacterium bovis rBCG-1, containing an artificial operon encoding the protectively significant proteins Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, the yeast degradation signal Rpn4 under the secretion signal Ag85a and the β-subunit of cholera toxin CtxB.