RU2804076C1 - Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток - Google Patents
Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2804076C1 RU2804076C1 RU2022129367A RU2022129367A RU2804076C1 RU 2804076 C1 RU2804076 C1 RU 2804076C1 RU 2022129367 A RU2022129367 A RU 2022129367A RU 2022129367 A RU2022129367 A RU 2022129367A RU 2804076 C1 RU2804076 C1 RU 2804076C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cultivation
- medium
- cell cultures
- continuous cell
- saline solution
- Prior art date
Links
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 title 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 title 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims abstract description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000003583 cytomorphological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в вирусологических лабораториях, при проведении исследований, а также на биокомбинатах, при производстве вакцин. Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток содержит в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25% сухого порошка ферментативного гидролизата мяса норок, растворённого в солевом растворе. Получена нетоксичная среда полноценного аминокислотного содержания, используемая для культивирования и обеспечения роста разных перевиваемых линий клеток. 1 табл.
Description
Изобретение относится к вирусологии и биотехнологии и может быть использовано в вирусологических лабораториях при проведении исследований, а также на биокомбинатах, при производстве вакцин. Предлагается в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов для перевиваемых культур клеток вместо среды Игла-МЕМ использовать 0,25% раствор ферментативного гидролизата машечной массы тушек норки на солевом раствором Эрла.
Из уровня техники известна питательная среда для культивирования перевиваемых клеток Игла-МЕМ на солевым раствором Эрла, которая производится из сухого порошка различных фирм («HyClone» USA, «Biolodical Industry» Israel и др.). Основным недостатком этой среды является необходимость использования высокоочищенных синтетических аминокислот, тестированных в культуре клеток, что обусловливает ее высокую стоимость.
В заявленной среде источником питательных веществ и ростовых факторов для перевиваемой культуры клеток является изготовленный промышленным путем ЗАО «Биопрогресс» РФ, по разработанной нами оригинальной технологии, ферментный гидролизат мышечной массы норок.
Гидролизат содержит 18 аминокислот, в том числе незаменимые аминокислоты - аргинин (4,54 %), валин (3,72%), гистидин (1,85%), изолейцин (5,4%), лизин (5,35%), метионин (1,55%), треонин (3,31 %), триптофан (1,21%), фениламин (2,70%), а такжевосемь заменимых аминокислот. Микроэлементный состав гидролизата представлен 18 микроэлементами, в том числе эссенциальными йод, медь, цинк, железо, кобальт.
Целью изобретения является получение доступной питательной среды без использования зарубежных компонентов и обладающей невысокой себестоимостью.
Техническим результатом заявленного изобретения является простота приготовления среды, отсутствие токсичности, полноценность аминокислотного содержания, и ее использование для культивирования обеспечивает рост разных перевиваемых линий клеток.
Заявленный технический результат достигается за счет того, что питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток содержит в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25 % сухого порошка ферментного гидролизата мяса норок, растворенного в солевом растворе Эрла. При помощи гидрокарбоната натрия раствор доводят до pH 7,4. Затем раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, и перед применением вносят сыворотку крови КРС в пропорции, рекомендованной для конкретной культуры клеток.
Изобретение иллюстрируются результатами сравнительного изучения роста перевиваемых линий клеток на известной и экспериментальной среде. При этом были использованы следующие линии перевиваемых культур клеток из коллекции ФГБНУ ФИЦВиМ:
ВНК-21\13 - перевиваемая линия клеток почки новорожденного сирийского хомяка;
ППК-66б - монослойно-суспензионная клональная сублиния перевиваемых клеток почки эмбрион свиньи;
ПО (ВНИИВВиМ) - перевиваемая линия клеток почки овцы.
Оценку токсичности и ростовых свойств сравниваемых питательных сред проводили в монослойных культурах указанных перевиваемых линий клеток методом последовательных пересевов в течение пяти пассажей при посевной плотности 100 ± 10 тысяч клеток\мл.
Сыворотку крови КРС в исследуемую и контрольную среды добавляли в соответствии с паспортными характеристиками и требованиями каждой культуры клеток.
Результаты сравнительной оценки токсичности и ростовых свойств опытной среды 0,25% ферментативного гидролизата мышц норок и контрольной среды Игла-МЕМ приведены в таблице 1.
| Таблица № 1 | ||||||
| № п\п |
Наименование ПЛК | Питатель ная среда |
Количес тво пассажей |
Срок формирования моно слоя (час) | Индекс пролифе-рации (ИП) |
Цитоморфологическая характе ристика |
| 1 | ВНК-21\13 (Англия) |
0,25% фермента тивный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла |
5 | 24 | 3,00±0,12 | Соответ ствует паспортной характеристике |
| Игла-МЕМ на солевом раствореЭрла КОНТРОЛЬ |
5 | 24 | 2,90±0,19 | Соответствует паспортной характеристике | ||
| 2 | ППК-66б | 0,25% фермента тивный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла |
5 | 48 | 2.80±0,20 | Соответствует паспортной характеристике |
| Игла-МЕМ на солевом растворе Эрла КОНТРОЛЬ |
5 | 48 | 2,75±0,12 | Соответствует паспорт ной характеристике |
||
| 3 | ПО (ВНИИВВиМ) | 0,25% ферментативный гидролизат мяса норок на солевом растворе Эрла | 5 | 48 | 2,20±0,23 | Соответствует паспортной характеристике |
| Игла-МЕМ на солевом растворе Эрла КОНТРОЛЬ |
5 | 48 | 2,30±0,10 | Соответствует паспорт ной характе ристике |
||
Анализ таблицы № 1 свидетельствует о том, что экспериментальная среда с 0,25% ферментативного гидролизата мышечной массы норок на солевом растворе Эрла нетоксична для перевиваемых линий клеток. Ростовые свойства перевиваемых культур клеток (срок формирования монослоя и индекс пролиферации) в экспериментальной среде соответствуют таковым в контрольной среде Игла-МЕМ.
Список литературы
1. Абрамов П.Н. Белковые гидролизаты в профилактике метаболических нарушений у пушных зверей / П.Н. Абрамов, Н.А. Слесаренко, С. В. Позябин [и др.]. - Москва : ЗооВетКнига, 2022. - 184 с.
2. Дьяков Л.П. Живая клетка в культуре. Москва: Спутник, 2009. - 656 с.
3. Патент РФ № 2546252 C2, МПК A23K 1/10. Способ получения белкового гидролизата из мясного или мясокостного сырья тушек норок для парентерального питания: № 2013116939/10 от 15.04.2013; опубл. 10.04.2015 / А.И. Албулов, В.Н. Денисенко, А.Я. Самуйленко [и др.]; Заявитель Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук.
4. Юрков С.Г., Колбасова О.Л. и др. Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ. Покров, Россельхозакадемия, ВНИИВВиМ, 2010; 89 с.
Claims (1)
- Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток, содержащая в качестве источника питательных веществ и ростовых факторов 0,25% сухого порошка ферментативного гидролизата мяса норок, растворённого в солевом растворе с конечной pH среды, доведённой до значения 7,4 при помощи раствора гидрокарбоната натрия и последующей стерилизации методом мембранной фильтрации и внесения перед применением сыворотки крови КРС.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2804076C1 true RU2804076C1 (ru) | 2023-09-26 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2673718C1 (ru) * | 2018-01-22 | 2018-11-29 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2673718C1 (ru) * | 2018-01-22 | 2018-11-29 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Питательная среда для культивирования перевиваемых клеточных линий млекопитающих |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Инструкция по применению питательной среды Игла МЕМ жидкой, 18.12.2006. РОГОВ РОМАН ВАСИЛЬЕВИЧ, Технология получения белкового гидролизата из мышечной ткани норок и оценка его эффективности в свиноводстве, автореферат диссертации, Щелково, 2012, с., весь документ. FLACZYK, E., Technologycal and nutritional aspects of protein hydrolyzates. Part I: Preparation and chemical characterization / E. Flaczyk // Przem. Spozyw. 1997. V. 51. N 3. P. 6-31. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS60500400A (ja) | 組織培養培地 | |
| Joshi et al. | To evaluate lab scale cultivation of Spirulina by using different substrates and to evaluate its chlorophyll and protein content | |
| RU2804076C1 (ru) | Питательная среда для культивирования перевиваемых культур клеток | |
| RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| CN104186431A (zh) | 一种利用单细胞蛋白一步食物链高密度养殖卤虫的方法 | |
| RU2662172C2 (ru) | Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды | |
| RU2213779C2 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
| RU2245362C2 (ru) | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба | |
| KR20230077644A (ko) | 도축 부산물에서 유래한 FBS(fetal bovine serum) 대체제 활용 배양육의 생산 방법 | |
| RU2443428C1 (ru) | Способ изготовления аллергена для дифференциальной диагностики парааллергических реакций у крупного рогатого скота на ппд туберкулин для млекопитающих | |
| RU2575797C2 (ru) | Биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов | |
| RU2460774C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2020153C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата и питательная среда для культивирования клеток эукариотов | |
| RU2525637C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза | |
| RU2506309C2 (ru) | Способ культивирования миобластов in vitro для получения биомассы миоцитов для пищевых целей | |
| RU2473906C1 (ru) | Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения l-форм микобактерий | |
| RU2710718C1 (ru) | Способ модификации пролиферативной активности клеточных культур млекопитающих | |
| RU2797013C1 (ru) | Способ повышения эффективности культивирования в условиях in vitro каллусной культуры Базилика Обыкновенного (Ocimum basilicum) | |
| RU2301256C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона | |
| US7074612B2 (en) | Insect cell primary culture medium, extracellular matrix, and process of preparing an insect culture cell line in a short period of time using the medium and matrix | |
| RU2826008C1 (ru) | Способ повышения продуктивности кроликов при одновременном улучшении качества мяса | |
| RU2425871C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| CN118370247B (zh) | 一种提高香港巨牡蛎在高盐条件下存活率的方法 | |
| Devi Maliga et al. | Effect of different plant growth regulators on callus induction in leaf and stem explants of Oxystelma esculentum (LF) R. Br. ex Schltes | |
| Plotnikova et al. | The method of activation of animal cells cultures in vitro for the reproduction of viruses |