RU2802057C1

RU2802057C1 - Способ выделения пептидов из гидролизата отходов от фармацевтической переработки пантов оленей

Info

Publication number: RU2802057C1
Application number: RU2023104247A
Authority: RU
Inventors: Зоя Александровна Литвинова; Николай Михайлович Мандро
Filing date: 2023-02-27
Publication date: 2023-08-22

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ, включающий смешивание отходов от фармацевтической переработки пантов оленей с искусственным желудочным соком в соотношении 1:10, выдерживание в термостате при температуре 40-45°С в течение четырех дней, фильтрацию надосадочной жидкости, отделение полипептидов с использованием 10% трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, отделение олигопептидов из надосадочной жидкости с использование 1,5% раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, добавление к осадку 0,9% раствора хлорида натрия, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, отделение осадка от раствора, высушивание осадка в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, тиндализацию. Изобретение позволяет увеличить выход концентрированных пептидов в виде сухого вещества с высокой чистотой целевого продукта.

Description

Изобретение относится к биохимии, а именно к выделению пептидов из гидролизата отходов фармацевтической переработки пантов оленей.

Известен способ получения пантолизата (RU 2112396 C1, А23 J 1/10, 3/34, A 61K 35/32) путем гидролиза отходов от фармацевтической переработки пантов оленей в искусственном желудочном соке в термостате при температуре 38-42°С в течение четырех дней, фильтрацией надосадочной жидкости и кипячением фильтрата, добавлением резорцина из расчета 5,0 г на 1 л.

Недостатки данного способа связаны с коротким сроком хранения препарата при низких температурах в условиях холодильника. Кроме того, конечный продукт получается недостаточно чистым.

Задача исследования заключается в увеличении объема выхода концентрированных пептидов в виде сухого вещества с высокой чистотой целевого продукта.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что из гидролизата извлекаются пептиды путем добавления раствора трихлоруксусной кислоты с последующим центрифугированием, диализом, очисткой пептидов гель-хроматографией и высушиванием в сушильном шкафу, тиндализацией.

Способ получения пептидов предусматривает смешивание отходов от фармацевтической переработки пантов оленей с искусственным желудочным соком в соотношении 1:10, выдерживание в термостате при температуре 40-45°С в течение четырех дней, фильтрацию надосадочной жидкости, отделение полипептидов с использованием 10% раствора трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, отделение олигопептидов из надосадочной жидкости с использованием 1,5% раствора трихлоруксусной кислоты из расчета 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, добавление к осадку 0,9% раствора хлорида натрия в соотношении 1:10, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, очистку пептидов гель-хроматографией на сефадексе G-25 с порогом проницаемости до 5000 Да, высушивание целевого продукта в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, тиндализацию. Изобретение позволяет получить сухой концентрат пептидов из гидролизата отходов от фармацевтической переработки пантов оленей с повышенной чистотой целевого продукта.

Способ получения пептидов осуществляют следующим образом.

Для получения пантолизата измельченные отходы от производства пантокрина смешивают с искусственным желудочным соком в соотношении 1:10, помещают в термостат при 40-45°С на четыре дня, перемешивают 1 раз в сутки в течение 2-3 минут, затем фильтруют. К фильтрату для осаждения белка добавляют 10% раствор трихлоруксусной кислоты из расчета 1:4. Осадок белка отделяют от раствора центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин. К надосадочной жидкости добавляют 1,5% раствор трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4 с дальнейшим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин. К осадку добавляют 0,9% раствор хлорида натрия из расчета 1:10. Для дальнейшей очистки белки подвергают диализу с целью полного удаления растворов трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодиевой пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1 часа. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором. Очистку пептидов проводят гель-хроматографией путем пропускания через колонку, заполненную сефадексом G-25 с проницаемостью до 5000 Да, при температуре +4°С и давлении не более 0,5 атм. Высушивание осуществляют в сушильном шкафу при температуре 40-45°С. Тиндализацию проводят двукратно с интервалом 24 часа при температуре 40-45°С в течение часа. Препарат взвешивают, хранят в стеклянных емкостях. Выход препарата составляет 50-60 г на 1 л. Белок представляет собой аморфный порошок кремового цвета.

Экспериментальные исследования по изучению влияния пептидов из гидролизата отходов фармпереработки пантов оленей на иммунитет телят проводили в производственных условиях. По принципу аналогов были сформированы подопытная и контрольная группы животных по 10 голов в каждой. Телятам подопытной группы с первого дня жизни ежедневно три раза в день за 30 минут до кормления выпаивали 200 мл 5% раствора пептидов в течение девяти дней. Животным контрольной группы препарат не применяли. Отбор проб крови у телят осуществляли из ярёмной вены по общепринятой методике на девятый и 18-й дни их жизни.

Применение препарата с первых дней жизни телят способствовало повышению уровня общего белка в сыворотке крови. На девятый день различие с контролем составило 18,49%. Содержание общего белка в сыворотке крови опытных животных на 18-й день превышало фоновые значения на 13,30%. Максимальная эффективность использования организмом молодняка препарата, богатого иммунными белками, проявилось достоверным повышением уровня иммуноглобулинов. На девятый день различие с контрольными показателями составило 8,66%, на 18-й день - 13,60%.

За период наблюдения в контрольной и подопытной группах были больные и павшие телята. Сохранность в подопытной группе составило 97,6%, тогда как в контроле - 84,0%.

Исходя из вышеизложенного, следует, что применение пептидного препарата из гидролизата отходов фармпереработки пантов оленей (пантолизат) в профилактических целях способствует повышению иммунитета телят и повышает их сохранность.

Claims

Способ получения пептидов предусматривает смешивание отходов от фармацевтической переработки пантов оленей с искусственным желудочным соком в соотношении 1:10, выдерживание в термостате при температуре 40-45°С в течение четырех дней, фильтрацию надосадочной жидкости, отделение пептидов с использованием 10% раствора трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4 с дальнейшим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин, внесение к надосадочной жидкости 1,5% раствора трихлоруксусной кислоты из расчета 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, добавление к осадку 0,9% раствора хлорида натрия в соотношении 1:10, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, очистку пептидов гель-хроматографией на сефадексе G-25 с порогом проницаемости до 5000 Да при температуре +4°С и давлении не более 0,5 атм, высушивание целевого продукта в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, двукратную тиндализацию с интервалом 24 часа при температуре 40-45°С в течение часа.