RU2800471C1 - Pveal3-10h10ch plasmid genetic construct, strain of cho-k1-10h10ch recombinant cell line and 10h10ch chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus produced by the indicated strain of cho-k1-10h10ch cell line - Google Patents
Pveal3-10h10ch plasmid genetic construct, strain of cho-k1-10h10ch recombinant cell line and 10h10ch chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus produced by the indicated strain of cho-k1-10h10ch cell line Download PDFInfo
- Publication number
- RU2800471C1 RU2800471C1 RU2022126714A RU2022126714A RU2800471C1 RU 2800471 C1 RU2800471 C1 RU 2800471C1 RU 2022126714 A RU2022126714 A RU 2022126714A RU 2022126714 A RU2022126714 A RU 2022126714A RU 2800471 C1 RU2800471 C1 RU 2800471C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- 10h10ch
- coordinates
- borne encephalitis
- nucleotide sequence
- encephalitis virus
- Prior art date
Links
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 title claims abstract description 32
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims abstract description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 6
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 claims description 6
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 claims description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 claims description 3
- 241000963438 Gaussia <copepod> Species 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 claims description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 claims description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 2
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 claims description 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 claims description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 claims description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 claims description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 abstract description 15
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 abstract description 12
- 208000020329 Zika virus infectious disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 abstract description 10
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 3
- 241000120645 Yellow fever virus group Species 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 3
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 3
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 3
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 3
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010001413 Adult T-cell lymphoma/leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000710884 Powassan virus Species 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 208000009714 Severe Dengue Diseases 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- 208000001455 Zika Virus Infection Diseases 0.000 description 2
- 208000035332 Zika virus disease Diseases 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229950006925 emicizumab Drugs 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229950004101 inotuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100028990 C-X-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000035537 Cypridina noctiluca Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 241000012249 Dendrolimus spectabilis Species 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 108010041308 Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010054261 Flavivirus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000017891 HER2 positive breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 241000711557 Hepacivirus Species 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000916050 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000807236 Human cytomegalovirus (strain AD169) Membrane glycoprotein US3 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 201000006165 Kuhnt-Junius degeneration Diseases 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000351643 Metapneumovirus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000682735 Pegivirus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000027190 Peripheral T-cell lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000006043 T cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 208000031672 T-Cell Peripheral Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241001529801 Tick-borne flavivirus Species 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000011226 adjuvant chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000002137 anti-vascular effect Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 201000002950 dengue hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 201000009892 dengue shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 201000003445 large cell neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010234 longitudinal analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 1
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 208000020968 mature T-cell and NK-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241000724775 unclassified viruses Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000007501 viral attachment Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960001515 yellow fever vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к плазмидной генетической конструкции pVEAL3-10H10ch, штамму рекомбинантной клеточной линии СНО-K1-10H10ch и химерному антителу 10H10ch против вируса клещевого энцефалита, продуцируемое указанным штаммом клеточной линии СНО-K1-10H10ch и может быть использовано в генной инженерии, биотехнологии и медицине.SUBSTANCE: invention relates to pVEAL3-10H10ch plasmid genetic construct, CHO-K1-10H10ch recombinant cell line strain and 10H10ch chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus, produced by said CHO-K1-10H10ch cell line strain and can be used in genetic engineering, biotechnology and medicine.
Уровень техники.The level of technology.
Семейство Flaviviridae представлено четырьмя родами объединяющих 89 видов вирусов. Наиболее изученным является род Flavivirus насчитывающий 53 вида, Hepacivirus - 14 видов, Pegivirus - 11 видов, и Pestivirus - 11 видов, а также более 51 некласифицированных вирусов. Некоторые представители рода Flavivirus имеют ареал распространения охватывающий 5 континентов. Один из таких вирусов, вирус денге вызывающий геморрагическую лихорадку денге или шоковый синдром денге (Neufeldt CJ., et al., 2018, Begum F, et al., 2019). Тяжелое течение этого заболевания характеризуется повреждением тканей и капилляров, что приводит к 500 тыс. ежегодных госпитализаций с летальностью около 5% (Kyle JL., et al. 2008). Кроме вируса денге опасение вызывает ежегодный рост заболеваемости обусловленный другими представителями рода Flavivirus такими как вирус Западного Нила (WNV), вирус клещевого энцефалита (TBEV), вирус японского энцефалита (JEV) (Neufeldt CJ., et al., 2018), вирус Зика (ZIKV) (Basarab M, et al 2016, Aubry F, et al., 2021). Известны примеры создания высокоэффективных вакцин против флавивирусов. Это инактивированные вакцины против JEV и TBEV, аттенуированная вакцина против YFV (Fox J. P. et al. 1948, Durbin A., Wilder-Smith A, 2017, Monath TP 2005). Многочисленные попытки создания вакцины против лихорадки денге наткнулись на существенные трудности, включая феномен антитело-зависимого усиления (antybody-dependent enhancement, ADE) (Baykov IK, et al., 2014, Yu L, et al. 2017, Priyamvada L, et al., 2016).The Flaviviridae family is represented by four genera comprising 89 virus species. The best-studied genus is Flavivirus with 53 species, Hepacivirus with 14 species, Pegivirus with 11 species, and Pestivirus with 11 species, as well as over 51 unclassified viruses. Some representatives of the genus Flavivirus have a distribution area covering 5 continents. One such virus is dengue virus, which causes dengue hemorrhagic fever or dengue shock syndrome (Neufeldt CJ., et al., 2018, Begum F, et al., 2019). The severe course of this disease is characterized by damage to tissues and capillaries, which leads to 500 thousand annual hospitalizations with a mortality rate of about 5% (Kyle JL., et al. 2008). In addition to the dengue virus, there is concern about the annual increase in the incidence caused by other representatives of the Flavivirus genus, such as West Nile virus (WNV), tick-borne encephalitis virus (TBEV), Japanese encephalitis virus (JEV) (Neufeldt CJ., et al., 2018), Zika virus ( ZIKV) (Basarab M, et al. 2016, Aubry F, et al., 2021). Examples of highly effective vaccines against flaviviruses are known. These are inactivated vaccines against JEV and TBEV, an attenuated vaccine against YFV (Fox J. P. et al. 1948, Durbin A., Wilder-Smith A, 2017, Monath TP 2005). Numerous attempts to create a vaccine against dengue fever have encountered significant difficulties, including the phenomenon of antibody-dependent enhancement (antybody-dependent enhancement, ADE) (Baykov IK, et al., 2014, Yu L, et al. 2017, Priyamvada L, et al. , 2016).
Внимание к моноклональным антителам резко возрастает с каждым годом. Их высокоспецифичное нацеливание на антигены может обеспечить очень эффективное лечение, а появление адресных агентов позволяет разрабатывать терапевтические агенты нового поколения. За последние годы наблюдается увеличения количество моноклональных антител на фармакологическом рынке, а также увеличение доли человеческих и гуманизированных антител в общем количестве антител. Биспецифические антитела (Asano R, et al., 2012, Carlring J, et al 2011, Satt A, et al., 2018, Asano R, et al. 2018, Li J, et al., 2018), конъюгаты антитело-лекарственное средство (Smith I, et al 2007), антитела с модифицированными гликозилированием (Yamane-Ohnuki N, et al., 2004, Busse WW, et a., 2010, Yamamoto K, et al., 2010, Ishida T, et al., 2012) и фрагменты антител (Asano R, et al 2012, Ferrara N, et al 2006) в настоящее время рассматриваются как продукты следующего поколения. Некоторые биспецифические антитела и конъюгаты антитело-лекарственное средство уже представлены на рынке, например, эмицизумаб (Oldenburg J, et al 2017) гемтузумаб озогамицин (Jen EY, et al., 2018), инотузумаб озогамицин (Choudhry A, et al., 2017) и брентуксимаб ведотин (de Claro RA, et al., 2012).Attention to monoclonal antibodies is increasing dramatically every year. Their highly specific targeting of antigens can provide very effective treatment, and the advent of targeted agents allows the development of new generation therapeutic agents. In recent years, there has been an increase in the number of monoclonal antibodies in the pharmacological market, as well as an increase in the share of human and humanized antibodies in the total number of antibodies. Bispecific antibodies (Asano R, et al., 2012, Carlring J, et al 2011, Satt A, et al., 2018, Asano R, et al. 2018, Li J, et al., 2018), antibody drug conjugates agent (Smith I, et al 2007), glycosylation-modified antibodies (Yamane-Ohnuki N, et al., 2004, Busse WW, et a., 2010, Yamamoto K, et al., 2010, Ishida T, et al. , 2012) and antibody fragments (Asano R, et al 2012, Ferrara N, et al 2006) are currently considered next generation products. Some bispecific antibodies and antibody drug conjugates are already on the market, e.g. emicizumab (Oldenburg J, et al 2017) gemtuzumab ozogamicin (Jen EY, et al., 2018), inotuzumab ozogamicin (Choudhry A, et al., 2017) and brentuximab vedotin (de Claro RA, et al., 2012).
Одни из феноменов связанных с гуморальным иммунитетом, находящихся в центре внимание, в настоящее время является феномен широкой реактивности. Это явление, было подробно изучено на примере ВИЧ-1. (Muster Т. et al. 1993, Buchacher A. et al. 1994, Montefiori D.C. et al. 1996), Широкореактивные антитела помимо ВИЧ-инфицированных также были обнаружены у больных с другими вирусными заболеваниями такие как вирусы гриппа, Эбола, ласса, флавивирусы, метапневмовирус и другие (Walker L.M.,et al 2018). Найдены они была так же у людей перенесших флавивирусные инфекции, подобные антитела способны связываться не только с разными изолятами одного вируса, но и с родственными вирусами (Barba-Spaeth G. et al. 2016). Использование подобных антител в качестве терапевтических препаратов в случае флавивирусов, однако, может быть осложнено феноменом антитело-зависимого усиления инфекции (ADE) (Миронов А. Н., и др., 2013, Dejnirattisai W. et al. 2010, Dejnirattisai W. et al. 2016, Demina A.V. et al. 2018). В качестве примера можно рассмотреть лихорадки денге (DENV1-4) и Зика (ZIKV), которые являются флавивирусами, переносимыми комарами. Моноклональные антитела и плазма от DENV-иммунных доноров способны как нейтрализовать, так и усиливать ZIKV, и наоборот (Montoya M. et al. 2018, Fernandez E. et al. 2017). Поэтому в случае флавивирусов, создание эффективных и безопасных препаратов требует не только наличия антиген-распознающей области направленной на консервативный участок поверхностных белков, но специальных усилий по предотвращению возможного ADE-эффекта.One of the phenomena associated with humoral immunity, which is currently in the focus of attention, is the phenomenon of broad reactivity. This phenomenon has been studied in detail using HIV-1 as an example. (Muster T. et al. 1993, Buchacher A. et al. 1994, Montefiori D.C. et al. 1996), In addition to HIV-infected patients, broadly reactive antibodies have also been found in patients with other viral diseases such as influenza viruses, Ebola, Lassa, flaviviruses , metapneumovirus and others (Walker L.M., et al 2018). They were also found in people who had flavivirus infections, such antibodies are able to bind not only to different isolates of the same virus, but also to related viruses (Barba-Spaeth G. et al. 2016). The use of such antibodies as therapeutic drugs in the case of flaviviruses, however, may be complicated by the phenomenon of antibody-dependent infection enhancement (ADE) (Mironov A. N., et al., 2013, Dejnirattisai W. et al. 2010, Dejnirattisai W. et al. al. 2016, Demina A.V. et al. 2018). Examples include dengue (DENV1-4) and Zika (ZIKV), which are mosquito-borne flaviviruses. Monoclonal antibodies and plasma from DENV-immune donors are able to both neutralize and enhance ZIKV, and vice versa (Montoya M. et al. 2018, Fernandez E. et al. 2017). Therefore, in the case of flaviviruses, the creation of effective and safe preparations requires not only the presence of an antigen-recognizing region directed to a conserved region of surface proteins, but special efforts to prevent a possible ADE effect.
Ближайшие аналоги.closest analogues.
Известно получение (VanBlargan L. A. et al. Broadly neutralizing monoclonal antibodies protect against multiple tick-borne flaviviruses // Journal of Experimental Medicine. - 2021. - T. 218. - №. 5. - C. e20210174.) панели из 21 антитела против вируса Повассан. Панель антител получали при помощи инфицирования мышей POWV SPO или получавших мРНК-вакцина POWV, и в дальнейшем выделяли 84, гибридомы продуцирующие антитела против вируса Повассан, при помощи проточной цитометрии и скрининга на основе ИФА с инфицированными клетками и рекомбинантным оболочечным белком вируса Повассан. Однако при проверке на перекрестную реактивность этих антител было обнаружено, что антитела способны взаимодействовать с родственными флавивирусами, а также некоторые из них взаимодействуют с петлей слияния.A panel of 21 antibodies against Powassan virus. An antibody panel was generated by infecting mice with POWV SPO or receiving the POWV mRNA vaccine, and 84 hybridomas producing anti-Powassan virus antibodies were further isolated by flow cytometry and ELISA-based screening with infected cells and recombinant Powassan virus envelope protein. However, when testing for cross-reactivity of these antibodies, it was found that the antibodies are able to interact with related flaviviruses, and some of them interact with the fusion loop.
Известна разработка Yong-Qiang Deng с коллегами по получению человеческого антитела против вируса клещевого энцефалита с помощью метода гибдридомных технологий, а эпитоп охарактеризован при помощи фаговой пептидной библиотеки (Deng Y. Q. et al. A broadly flavivirus cross-neutralizing monoclonal antibody that recognizes a novel epitope within the fusion loop of E protein // PloS one. - 2011. - T. 6. - №. 1. - с. e16059.). В этом исследовании было установлено, что новое МКА, обозначенное как МКА 2A10G6, обладает широкой перекрестной реактивностью с DENV 1-4, YFV, WNV, JEV и TBEV. Широкая кроссреактивность достигалась за счет взаимодействия с эпитопом в высококонсервативном пептиде петли слияния флавивируса, мотиве 98DRXW101. Функциональные исследования показали, что 2A10G6 блокирует инфекцию на этапе после прикрепления вируса (Deng Y. Q. et al. 2011).The development of Yong-Qiang Deng et al. A broadly flavivirus cross-neutralizing monoclonal antibody that recognizes a novel epitope within the fusion loop of E protein // PloS one. - 2011. - V. 6. - No. 1. - p. e16059.). In this study, the new mAb, designated mAb 2A10G6, was found to have broad cross-reactivity with DENV 1-4, YFV, WNV, JEV, and TBEV. Broad cross-reactivity was achieved by interacting with an epitope in a highly conserved flavivirus fusion loop peptide, motif 98DRXW101. Functional studies have shown that 2A10G6 blocks infection at the stage after virus attachment (Deng Y. Q. et al. 2011).
Наиболее близким аналогом (прототипом) является рекомбинантная плазмидная днк pclm4/hygro-14d5, кодирующая полипептид со свойствами легкой цепи химерного антитела против вируса клещевого энцефалита, и рекомбинантная плазмидная днк pchm2-14d5, кодирующая полипептид со свойствами тяжелой цепи химерного антитела против вируса клещевого энцефалита, а также химерное антитело, обеспечивающее экстренную профилактику клещевого энцефалита у мышей (патент РФ №2550252, МПК С 12N 15/63, опубл. 10.05.2015 г.). Рекомбинантная плазмидная ДНК pCLm4/hygro-14D5, кодирующая полипептид со свойствами легкой цепи химерного антитела против вируса клещевого энцефалита имеет размер 6232 п.н., молекулярную массу 4,11 МДа и фрагмент NheI/ApaI размером 741 п.н., содержащий искусственный ген, кодирующий гибридный белок, в котором вариабельный домен легкой цепи мышиного моноклонального антитела 14D5, осуществляющего протекцию против вируса клещевого энцефалита, соединен с константным доменом каппа-цепи антител человека. Рекомбинантная плазмидная ДНК pCHm2-14D5, кодирующая полипептид со свойствами тяжелой цепи химерного антитела против вируса клещевого энцефалита имеет размер 6765 п.н., молекулярную массу 4,47 МДа и фрагмент NheI/XbaI размером 1433 п.н., содержащий искусственный ген, кодирующий гибридный белок, в котором вариабельный домен тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 14D5, осуществляющего протекцию против вируса клещевого энцефалита, соединен с константными CH1-CH2-CH3-доменами IgG1 человека. Химерное антитело, способное связывать белок E вируса клещевого энцефалита и обеспечивающее экстренную профилактику клещевого энцефалита у мышей, включающее полипептиды со свойствами легкой и тяжелой цепей химерного антитела класса IgG1/каппа, полученное совместной трансфекцией клеток млекопитающих рекомбинантными плазмидными ДНК pCLm4/hygro-14D5 и pCHm2-14D5. Константа аффинности химерного антитела к рекомбинантному гликопротеину E составляет около 6,0⋅10-11 M. Полученное химерное антитело ch14D5, введенное в дозировке 1 мг на кг веса животного, обеспечивает экстренную профилактику мышей от вирусного клещевого энцефалита, что делает возможным использование химерного антитела ch14D5 в качестве основы для создания лекарственных препаратов для лечения вирусного клещевого энцефалита.The closest analogue (prototype) is recombinant plasmid DNA pclm4/hygro-14d5 encoding a polypeptide with the properties of a light chain of a chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus, and recombinant plasmid DNA pchm2-14d5 encoding a polypeptide with the properties of a heavy chain of a chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus, as well as a chimeric antibody that provides emergency prevention of tick-borne encephalitis in mice (RF patent No. 2550252, IPC C 12N 15/63, publ. 05/10/2015). Recombinant plasmid DNA pCLm4/hygro-14D5 encoding a polypeptide with the properties of a light chain of a chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus has a size of 6232 bp, a molecular weight of 4.11 MDa and a 741 bp NheI/ApaI fragment containing an artificial gene , encoding a fusion protein in which the variable domain of the light chain of the mouse monoclonal antibody 14D5, which protects against tick-borne encephalitis virus, is connected to the constant domain of the kappa chain of human antibodies. Recombinant plasmid DNA pCHm2-14D5 encoding a polypeptide with the properties of a heavy chain of a chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus has a size of 6765 bp, a molecular weight of 4.47 MDa and a NheI/XbaI fragment of 1433 bp containing an artificial gene encoding a hybrid protein in which the variable domain of the heavy chain of the mouse monoclonal antibody 14D5, which provides protection against tick-borne encephalitis virus, is connected to the constant C H 1-C H 2-C H 3 domains of human IgG1. A chimeric antibody capable of binding the E protein of tick-borne encephalitis virus and providing emergency prevention of tick-borne encephalitis in mice, including polypeptides with the properties of light and heavy chains of a chimeric IgG1/kappa antibody, obtained by co-transfection of mammalian cells with recombinant plasmid DNA pCLm4/hygro-14D5 and pCHm2- 14D5. The affinity constant of the chimeric antibody to recombinant glycoprotein E is about 6.0⋅10 -11 M. The resulting chimeric antibody ch14D5, administered at a dosage of 1 mg per kg of animal weight, provides emergency prevention of mice from viral tick-borne encephalitis, which makes it possible to use the chimeric antibody ch14D5 as a basis for the creation of drugs for the treatment of viral tick-borne encephalitis.
Однако в прототипе не исследована функциональная активность химерного антитела ch14D5 в отношении других флавивирусов (Зика, денге, Западного Нила, желтой лихорадки).However, the prototype did not investigate the functional activity of the chimeric antibody ch14D5 against other flaviviruses (Zika, dengue, West Nile, yellow fever).
Техническим результатом заявляемого изобретения является получение химерного полноразмерного человеческого антитела 10H10ch против вируса клещевого энцефалита, продуцируемого рекомбинантным штаммом клеточной линии яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch, и обладающего широкой перекрестной функциональной активностью в отношении вирусов клещевого энцефалита, Зика, денге, Западного Нила, желтой лихорадки.The technical result of the claimed invention is to obtain a chimeric full-length human antibody 10H10ch against tick-borne encephalitis virus produced by a recombinant strain of the Chinese hamster ovary cell line CHO-K1-10H10ch, and having broad cross-functional activity against tick-borne encephalitis, Zika, dengue, West Nile, yellow fever.
Технический результат достигается созданием интегративного плазмидного вектора pVEAL3-10H10ch, обеспечивающего экспрессию и секрецию антитела 10Н10 против вируса клещевого энцефалита в клетках млекопитающих, имеющего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, размер 6523 п.н. и содержащего в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 1, следующие элементы:The technical result is achieved by creating an integrative plasmid vector pVEAL3-10H10ch, which provides the expression and secretion of the antibody 10H10 against tick-borne encephalitis virus in mammalian cells, having the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1, size 6523 bp. and containing in accordance with the physical and genetic map presented in Fig. 1, the following items:
- 5'SB с координатами 88-368 п.н. и 3'SB с координатами 4573-4850 п.н. - сайт связывания транспозазы SB100;- 5'SB with coordinates 88-368 b.p. and 3'SB with coordinates 4573-4850 b.p. - SB100 transposase binding site;
- CMV promoter, имеющего координаты с 734 по 937 п.н., - область промотора CMV;- CMV promoter, having coordinates from 734 to 937 bp, - region of the CMV promoter;
- 176 - нуклеотидная последовательность, кодирующая гибридный лидерный пептид люциферазы (Cypridina noctiluca) и фиброина (Dendrolimus spectabilis), обеспечивающая экспорт белка из клетки и имеющая координаты с 1023 по 1085 п.н.;- 176 - nucleotide sequence encoding a hybrid leader peptide of luciferase (Cypridina noctiluca) and fibroin (Dendrolimus spectabilis), which ensures protein export from the cell and has coordinates from 1023 to 1085 bp;
- 10H10-VL - нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельный фрагмент легкой цепи антитела 10Н10 и имеющая координаты с 1086 по 1421 п.н.;- 10H10-VL - nucleotide sequence encoding the variable fragment of the light chain of the 10H10 antibody and having coordinates from 1086 to 1421 bp;
- CL - нуклеотидная последовательность, кодирующая константную часть легкой цепи антитела и имеющая координаты с 1422 по 1742 п.н.;- CL - nucleotide sequence encoding the constant part of the antibody light chain and having coordinates from 1422 to 1742 bp;
- Furin - нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт протеолиза клеточной протеазы фурина и имеющая координаты с 1743 по 1754 п.н.;- Furin - nucleotide sequence encoding the proteolysis site of the cellular furin protease and having coordinates from 1743 to 1754 bp;
- Р2А - нуклеотидная последовательность, кодирующая саморасщепляющийся пептид р2а и имеющая координаты с 1755 по 1811 пл.;- P2A - nucleotide sequence encoding the self-cleaving peptide p2a and having coordinates from 1755 to 1811 squares;
- GL - нуклеотидная последовательность, кодирующая лидерную последовательность gaussia luciferase и имеющая координаты с 1812 по 1862 п.н.;- GL - nucleotide sequence encoding the leader sequence of gaussia luciferase and having coordinates from 1812 to 1862 bp;
- 10H10-VH - нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельный фрагмент тяжелой цепи антитела 10Н10 и имеющая координаты с 1866 по 2201 п.н.;- 10H10-VH - nucleotide sequence encoding the variable fragment of the heavy chain of the 10H10 antibody and having coordinates from 1866 to 2201 bp;
- СН1-3 - нуклеотидная последовательность, кодирующая константную цепь антитела человека IgG1 (СН1-СН2-СН3) и имеющая координаты с 2215 по 3191 п.н.;- CH1-3 - nucleotide sequence encoding the constant chain of the human IgG1 antibody (CH1-CH2-CH3) and having coordinates from 2215 to 3191 bp;
- EMCV IRES - участок внутренней посадки рибосомы, имеющий координаты с 3210 по 3784 п.н.;- EMCV IRES - site of internal landing of the ribosome, having coordinates from 3210 to 3784 bp;
- PuroR - нуклеотидная последовательность, кодирующая фактор устойчивости к антибиотику пуромицину и имеющая координаты с 3797 по 4396 п.н.;- PuroR - nucleotide sequence encoding the antibiotic resistance factor puromycin and having coordinates from 3797 to 4396 bp;
- SV40 poly (A) signal - последовательность для стабилизации мРНК-транскриптов за счет полиаденилирования, имеющая координаты с 4431 по 4552 п.н.;- SV40 poly (A) signal - sequence for stabilization of mRNA transcripts due to polyadenylation, having coordinates from 4431 to 4552 bp;
- cat promoter - синтетический бактериальный промотер, имеющий координаты с 4934-5036 п.н.;- cat promoter - synthetic bacterial promoter with coordinates from 4934-5036 bp;
- KanR - нуклеотидная последовательность, кодирующая фактор устойчивости к антибиотику канамицину и имеющая координаты с 5037 по 5852 п.н.;- KanR - nucleotide sequence encoding the antibiotic resistance factor kanamycin and having coordinates from 5037 to 5852 bp;
- ori - участок начала репликации, имеющий координаты с 5915 по 6502 п.н.- ori - site of the origin of replication, having coordinates from 5915 to 6502 bp.
Интегративный плазмидный вектор pVEAL3-10H10ch позволяет осуществить высокую и стабильную экспрессию химерного рекомбинантного полноразмерного антитела.The integrative plasmid vector pVEAL3-10H10ch allows high and stable expression of the chimeric recombinant full-length antibody.
Технический результат достигается также созданием рекомбинантного штамма клеточной линии яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch продуцента рекомбинантного химерного антитела 10H10ch против вируса клещевого энцефалита, содержащего интегративный плазмидный вектор pVEAL3-10H10ch, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, обеспечивающий экспрессию и секрецию полноразмерного человеческого антитела 10H10ch и депонированный под номером 325 в коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.The technical result is also achieved by creating a recombinant strain of the Chinese hamster ovary cell line CHO-K1-10H10ch producing a recombinant chimeric antibody 10H10ch against tick-borne encephalitis virus containing an integrative plasmid vector pVEAL3-10H10ch having the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, which ensures the expression and secretion of a full-sized human antibodies 10H10ch and deposited under the number 325 in the collection of cell cultures of the FBSI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor.
Указанный технический результат достигается также получением химерного антитела 10H10ch против вируса клещевого энцефалита, продуцируемого рекомбинантным штаммом клеточной линии яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch по п. 2, имеющего аминокислотные последовательности вариабельных фрагментов тяжелой цепи SEQ ID NO: 2 и легкой цепи SEQ ID NO: 3, и предназначенного для создания терапевтических препаратов против вируса клещевого энцефалита.The specified technical result is also achieved by obtaining a 10H10ch chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus produced by a recombinant strain of the Chinese hamster ovary cell line CHO-K1-10H10ch according to claim 2, having the amino acid sequences of the variable fragments of the heavy chain SEQ ID NO: 2 and the light chain SEQ ID NO : 3, and intended for the creation of therapeutic drugs against the tick-borne encephalitis virus.
Изобретение поясняется графическими материалами, представленными на фиг. 1, 2. На фиг. 1 изображена физическая и генетическая карта универсального рекомбинантного вектора pVEAL3-10H10ch. На фиг. 2. представлены результаты иммуноферментного анализа взаимодействия моноклонального химерного антитела 10H10ch с рекомбинантным фрагментом белка вируса клещевого энцефалита.The invention is illustrated by the graphical materials presented in Fig. 1, 2. In Figs. 1 shows the physical and genetic map of the universal recombinant vector pVEAL3-10H10ch. In FIG. Figure 2 shows the results of an enzyme-linked immunosorbent assay of the interaction of the monoclonal chimeric antibody 10H10ch with a recombinant protein fragment of the tick-borne encephalitis virus.
Для лучшего понимания сущности предлагаемого изобретения ниже приведены примеры его осуществления. Все стандартные генно-инженерные и микробиологические манипуляции, а также амплификацию и секвенирование ДНК проводили по известным методикам (Маниатис Т., и др., 1984, Гловер Д. 1988, Saiki R.K. et al. 1988, Sanger F. et al. 1977).For a better understanding of the essence of the invention, examples of its implementation are given below. All standard genetic engineering and microbiological manipulations, as well as DNA amplification and sequencing, were carried out according to known methods (Maniatis T., et al., 1984, Glover D. 1988, Saiki R.K. et al. 1988, Sanger F. et al. 1977) .
Пример 1. Конструирование рекомбинантной плазмиды pVEAL3-10H10ch, обеспечивающей синтез и секрецию химерного антитела 10Н10 против вируса клещевого энцефалита.Example 1. Construction of the recombinant plasmid pVEAL3-10H10ch, which provides the synthesis and secretion of the 10H10 chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus.
На основе вектора pVEAL3 получали интеграционный вектор pVEAL3-10H10ch (фиг. 1), содержащий последовательности вариабельных легкой (SEQ ID NO: 3) и тяжелой (SEQ ID NO: 2) цепи антитела 10H10ch. Последовательность гена, кодирующего тяжелую цепь 10H10ch (GenBank OK483332) и последовательность гена, кодирующего легкую цепь 10H10ch (GenBank OL448869) извлекали из базы данных GenBank и проводили оптимизацию кодонного состава для клеток СНО при помощи инструмента Gene Optimizer (https://www.thermofisher.com/ru/en/home/life-science/cloning/gene-synthesis/geneart-gene-synthesis/geneoptimizer.html).Based on the pVEAL3 vector, an integration vector pVEAL3-10H10ch (Fig. 1) containing the variable light (SEQ ID NO: 3) and heavy (SEQ ID NO: 2) sequences of the 10H10ch antibody was obtained. The 10H10ch heavy chain gene sequence (GenBank OK483332) and the 10H10ch light chain gene sequence (GenBank OL448869) were extracted from the GenBank database and codon optimization for CHO cells was performed using the Gene Optimizer tool (https://www.thermofisher. com/ru/en/home/life-science/cloning/gene-synthesis/geneart-gene-synthesis/geneoptimizer.html).
Итоговая нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:1) содержит последовательности, кодирующие сигнальный пептид 176, константную часть легкой цепи антитела, сайт протеолиза клеточной протеазы фурина, саморасщепляющийся пептид р2а, лидерную последовательность gaussia luciferase, и константную часть тяжелой цепи антитела (СН1), а также сайты гидролиза рестриктаз NheI и BstX I и синтезировали на заказ в ООО «ДНК-синтез».The final nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) contains sequences encoding signal peptide 176, an antibody light chain constant, a furin cellular protease proteolysis site, a p2a self-cleaving peptide, a gaussia luciferase leader, and an antibody heavy chain constant (CH1), and also sites of hydrolysis of restriction endonucleases NheI and BstX I and were synthesized to order at OOO DNA-sintez.
Для получения рекомбинантной плазмиды pVEAL3-10H10ch в вектор pVEAL3 встраивали синтезированную нуклеотидную последовательность 10H10ch. Последовательности олигонуклеотидных праймеров, использованных для сборки плазмиды pVEAL3-10H10ch, представлены в таблице 1.To obtain the recombinant plasmid pVEAL3-10H10ch, the synthesized 10H10ch nucleotide sequence was inserted into the pVEAL3 vector. The sequences of the oligonucleotide primers used to assemble the pVEAL3-10H10ch plasmid are shown in Table 1.
С помощью ПЦР была амплифицирована нуклеотидная последовательность 10H10ch. ПЦР проводили с использованием ПЦР-амплификатора «БИС» фирмы ООО БИС-Н (Россия). Реакционная смесь объемом 50 мкл, содержащая 2 мкг ДНК (плазмида pGH-10H10), 10 пкМ каждого праймера (10H10-pVL3_F и 10H10-BstXI_R) (таблица 1), 10 мкл 5х Q5 реакционного буфера, 10 мкл 5xQ5 High GC Enhancer, смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (дАТФ, дЦТФ, дТТФ, дГТФ по 2,5 мМ) и 0.5 ед. Q5 High-Fidelity ДНК-полимеразы, реакцию осуществляли при следующих параметрах: 10 с - 98°С, 20 с - 61°С, 30 с - 72°С (30 циклов). Готовые ПЦР-продукты были выделены и очищены из геля с помощью набора «Gel Extraction Kit» фирмы Qiagen (Германия) в соответствии с инструкцией производителя.The 10H10ch nucleotide sequence was amplified by PCR. PCR was performed using a PCR cycler "BIS" from OOO BIS-N (Russia). 50 µl reaction mixture containing 2 µg DNA (plasmid pGH-10H10), 10 pM of each primer (10H10-pVL3_F and 10H10-BstXI_R) (Table 1), 10 µl 5x Q5 reaction buffer, 10 µl 5xQ5 High GC Enhancer, mix deoxynucleotide triphosphates (dATP, dCTP, dTTP, dGTP 2.5 mM each) and 0.5 units. Q5 High-Fidelity DNA polymerase, the reaction was carried out at the following parameters: 10 s - 98°C, 20 s - 61°C, 30 s - 72°C (30 cycles). The finished PCR products were isolated and purified from the gel using the Gel Extraction Kit from Qiagen (Germany) in accordance with the manufacturer's instructions.
Предварительно наработанную и очищенную плазмиду pVEAL3 и готовый ПЦР-продукт обрабатывали эндонуклеазами рестрикции Nhe I, BstX I. Реакцию гидролиза проводили в условиях, рекомендованных производителем. С целью очистки линеаризованного вектора, плазмидную ДНК наносили на 1%-й агарозный гель и выделяли из геля с использованием набора «Gel Extraction Kit» фирмы Qiagen (Германия). Реакцию лигирования проводили с использованием ДНК-лигазы бактериофага Т4 («СибЭнзим», г. Новосибирск). Реакция проводилась при +4°С в течение ночи. Полученной лигазной смесью трансформировали компетентные клетки Е. coli штамм NebStable.The preliminarily generated and purified plasmid pVEAL3 and the finished PCR product were treated with restriction endonucleases Nhe I, BstX I. The hydrolysis reaction was carried out under the conditions recommended by the manufacturer. To purify the linearized vector, plasmid DNA was applied to a 1% agarose gel and isolated from the gel using the Gel Extraction Kit from Qiagen (Germany). The ligation reaction was performed using bacteriophage T4 DNA ligase (SibEnzyme, Novosibirsk). The reaction was carried out at +4°C overnight. The resulting ligation mixture was transformed into competent cells of E. coli strain NebStable.
Первичную проверку на наличие вставки проводили при помощи ПЦР с колонии. Разделение продуктов амплификации проводили в 1%-м агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием (0,5 мкг/мл).The primary check for the presence of the insert was performed using PCR from the colony. Amplification products were separated in 1% agarose gel followed by staining with ethidium bromide (0.5 μg/ml).
Положительные колонии, вносили в 5 мл среды LB с ампициллином (50 мкг/мл) и растили в течение ночи при 37°С при 170 об/мин. Затем плазмидную ДНК выделяли из бактериальных клеток с помощью коммерческих наборов DNAminikit фирмы «Qiagen» согласно рекомендациям производителя. Первичную структуру экспрессионного вектора подтверждали секвенированием. Секвенирование проводили по методу Сэнгера в ЦКП «Геномика» СО РАН (г. Новосибирск). В результате была получена рекомбинантная плазмида pVEAL3-10H10ch, обеспечивающей синтез химерного антитела 10Н10 против вируса клещевого энцефалита в одноцепочечном формате.Positive colonies were added to 5 ml of LB medium with ampicillin (50 μg/ml) and grown overnight at 37° C. at 170 rpm. Then, plasmid DNA was isolated from bacterial cells using DNAminikit commercial kits from Qiagen according to the manufacturer's recommendations. The primary structure of the expression vector was confirmed by sequencing. Sequencing was performed according to the Sanger method at the Center for Collective Use "Genomics" of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences (Novosibirsk). As a result, a recombinant plasmid pVEAL3-10H10ch was obtained, which provides the synthesis of a chimeric antibody 10H10 against tick-borne encephalitis virus in a single-stranded format.
Секвенирование плазмидной ДНК положительных клонов в районе встройки позволило отобрать клоны с отсутствием дефектов встраиваемых генов (вставки, делеции, замены), после чего из отобранных клонов была наработана и выделена целевая плазмидная ДНК.Sequencing of the plasmid DNA of positive clones in the region of the insert made it possible to select clones with no defects in the insert genes (inserts, deletions, substitutions), after which the target plasmid DNA was generated and isolated from the selected clones.
Пример 2. Трансфекция клеток СНО-K1 плазмидой pVEAL3-10H10ch и получение штамма-продуцента клеток яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch, продуцирующего химерное антитело 10H10ch против вируса клещевого энцефалитаExample 2. Transfection of CHO-K1 cells with plasmid pVEAL3-10H10ch and production of Chinese hamster ovary cell producer strain CHO-K1-10H10ch producing 10H10ch chimeric antibody against tick-borne encephalitis virus
Штамм клеток яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch получен на основе клеточной линии яичников китайского хомячка СНО-K1 с использованием разработанной конструкции pVEAL3-10H10ch. Клетки СНО-K1, растили в инкубаторе при 5% содержания СО2, 80%-ной влажности. При достижении 80% плотности монослоя проводили трансфекцию клеток с помощью Lipofectamine 3000 (ThermoFisher, США) в соответствии с инструкцией производителя. Трансфецировали клетки смесью плазмид pVEAL3-10H10ch и pCMV(CAT)T7-SB100, взятых в соотношении 1:10. Через 48 часов после трансфекции добавляли селективный антибиотик пуромицин в концентрации 2 мкг/мл. В течении 3-х дней наблюдалось активное отмирание основной массы клеток. На четвертый день клеточный пул был перенесен в 6-луночный культуральный планшет, так же с добавление селективного антибиотика. Через 2 дня достигался монослой. Полученный пул клеток был криоконсервирован, после чего было проведено клонирование с целью отбора индивидуальных клонов с высокой продукцией рекомбинантных антител. Клонирование выполнялось методом лимитирующих разведений в 96-луночных планшетах. Через 14 суток визуально отбирали лунки, содержащие единственный клон, для которых проводили отбор культуральной жидкости с целью оценки продуктивности клонов при помощи ИФА, из которых и получен заявляемый рекомбинантный штамм CHO-K1-10H10ch.The Chinese hamster ovary cell strain CHO-K1-10H10ch was derived from the Chinese hamster ovary cell line CHO-K1 using the pVEAL3-10H10ch construct. CHO-K1 cells were grown in an incubator at 5% CO 2 , 80% humidity. When the density of the monolayer reached 80%, the cells were transfected with Lipofectamine 3000 (ThermoFisher, USA) according to the manufacturer's instructions. Cells were transfected with a mixture of plasmids pVEAL3-10H10ch and pCMV(CAT)T7-SB100, taken in a ratio of 1:10. 48 hours after transfection, the selective antibiotic puromycin was added at a concentration of 2 μg/ml. Within 3 days, active death of the bulk of the cells was observed. On the fourth day, the cell pool was transferred to a 6-well culture plate, also with the addition of a selective antibiotic. A monolayer was reached after 2 days. The resulting pool of cells was cryopreserved, after which cloning was carried out in order to select individual clones with a high production of recombinant antibodies. Cloning was performed by the method of limiting dilutions in 96-well plates. After 14 days, the wells containing a single clone were visually selected, for which the culture liquid was selected to assess the productivity of the clones using ELISA, from which the claimed recombinant strain CHO-K1-10H10ch was obtained.
Штамм депонирован 02.09.2022 г. в коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора под номером 325 (копия справки о депонировании прилагается).The strain was deposited on 09/02/2022 in the collection of the Federal Budgetary Institution of Science of the State Research Center of VB "Vector" of Rospotrebnadzor under the number 325 (a copy of the deposit certificate is attached).
Характеристика рекомбинантного штамма CHO-K1-10H10ch.Characterization of the recombinant strain CHO-K1-10H10ch.
Морфология: веретеновидные и эпителиоподобные клетки с круглыми ядрами, содержащими от 1 до 2 ядрышек.Morphology: spindle-shaped and epithelial-like cells with round nuclei containing 1 to 2 nucleoli.
Способ культивирования: монослойный.Cultivation method: monolayer.
Среда для культивирования: питательная среда DMEM/F-12 (1:1) - 90%, сыворотка крови плодов коровы - 10%.Culture medium: nutrient medium DMEM/F-12 (1:1) - 90%, fetal cow blood serum - 10%.
Температура культивирования: 37°С.Cultivation temperature: 37°C.
Посевная концентрация: 100 тыс. клеток в 1 мл.Seeding concentration: 100 thousand cells in 1 ml.
Метод снятия: 0,25% трипсин (1/3) и 0,02% версен (2/3).Removal method: 0.25% trypsin (1/3) and 0.02% versen (2/3).
Кратность рассева: 1:3.Sieving ratio: 1:3.
Частота пассирования: 3-4 суток.Passaging frequency: 3-4 days.
Условия криоконсервации: питательная среда DMEM/F-12 (1:1) - 50%, сыворотка крови плодов коровы - 40%, ДМСО - 10%.Cryopreservation conditions: nutrient medium DMEM/F-12 (1:1) - 50%, fetal cow blood serum - 40%, DMSO - 10%.
Режим замораживания: при температуре 4°С - 1 ч, минус 80°С - 12 ч, минус 196°С.Freezing mode: at a temperature of 4°C - 1 hour, minus 80°C - 12 hours, minus 196°C.
Условия хранения: в криопробирках в количестве 5 шт. хранится в жидком азоте при температуре минус 196°С.Storage conditions: in cryovials in the amount of 5 pcs. stored in liquid nitrogen at minus 196°C.
Номер пассажа в жидком азоте: 3.Passage number in liquid nitrogen: 3.
Жизнеспособность после криоконсервации: 85-90%.Viability after cryopreservation: 85-90%.
Маркерый признак: наличие в культуральной среде рекомбинантного антитела 10Н10 размером ~55 кДа, подтверждается с помощью белкового электрофореза и иммуноблотинга. Область применения: биотехнология.Marker sign: the presence in the culture medium of the recombinant antibody 10H10 with a size of ~55 kDa is confirmed by protein electrophoresis and immunoblotting. Scope: biotechnology.
Пример 3. Иммуноферментный анализ взаимодействия моноклонального химерного антитела 10H10ch с рекомбинантными фрагментами оболочечных белков флавивирусовExample 3 Enzyme ImmunoAssay of the Interaction of the Monoclonal Chimeric Antibody 10H10ch with Recombinant Flavivirus Envelope Protein Fragments
В качестве антигена использовали рекомбинантные фрагменты оболочечных белков вирусов клещевого энцефалита, Зика, денге, Западного Нила, желтой лихорадки (TEF, ZEF, DEF, WEF, YF соответственно) в концентрации 200 нг/лунка, его сорбировали в лунках 96-луночного планшета в фосфатно-солевом буфере (PBS) (Greiner bio one, Германия) при 4°С в течение ночи. Затем отмывали буфером PBST (0.1% р-р Tween-20 в PBS) и блокировали 1% раствором казеина в буфере PBST в течение 1 часа при комнатной температуре. После этого образцы вносили в последовательном разведении, начиная с 1/1000 до 1/8000, и инкубировали в течение 1 часа при 37°С. Затем добавляли для рекомбинантного химерного антитела 10Н10 - конъюгат (Goat a Hum IgG-per Sigma - 1/5000), для нативного антитела (положительного контроля) - конъюгат (Goat a mouse IgG-per Sigma - 1/5000) разбавленные в 1% блокирующем растворе казеина, с пероксидазой хрена (США). После каждого этапа проводили трехкратную отмывку несвязавшихся белков буфером PBST 0,1%. Затем вносили раствор субстрата ТМВ (Amresco, США) и инкубировали в течение 10 минут, реакцию терминировали раствором 1Н HCl и сразу измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на ИФА-ридере (Varioska LUX, Thermo Scientific, США).Recombinant fragments of envelope proteins of tick-borne encephalitis, Zika, dengue, West Nile, yellow fever viruses (TEF, ZEF, DEF, WEF, YF, respectively) at a concentration of 200 ng/well were used as an antigen; buffered saline (PBS) (Greiner bio one, Germany) at 4°C overnight. Then it was washed with PBST buffer (0.1% Tween-20 solution in PBS) and blocked with 1% casein solution in PBST buffer for 1 hour at room temperature. After that, the samples were made in serial dilution, starting from 1/1000 to 1/8000, and incubated for 1 hour at 37°C. Then, for the recombinant chimeric antibody 10H10 - conjugate (Goat a Hum IgG-per Sigma - 1/5000), for native antibody (positive control) - conjugate (Goat a mouse IgG-per Sigma - 1/5000) diluted in 1% blocking casein solution, with horseradish peroxidase (USA). After each step, unbound proteins were washed three times with 0.1% PBST buffer. Then a TMB substrate solution (Amresco, USA) was added and incubated for 10 minutes, the reaction was terminated with a 1N HCl solution, and the optical density was immediately measured at a wavelength of 450 nm using an ELISA reader (Varioska LUX, Thermo Scientific, USA).
Результаты ИФА представлены на фиг. 2, из которых видно, что новый штамм-продуцент клеток яичника китайского хомячка CHO-K1-10H10ch, продуцирует химерное полноразмерное человеческое антитело 10Н10 против вируса клещевого энцефалита, которое обладает широкой функциональной перекрестной активностью (в отношении вирусов клещевого энцефалита, Зика, денге, Западного Нила, желтой лихорадки).The ELISA results are shown in Fig. 2, from which it can be seen that the new strain-producer of Chinese hamster ovary cells CHO-K1-10H10ch produces a chimeric full-length human antibody 10H10 against tick-borne encephalitis virus, which has a wide functional cross-activity (against tick-borne encephalitis, Zika, dengue, Western Nile, yellow fever).
Источники научно-технической и патентной информацииSources of scientific, technical and patent information
1. Гловер Д. Клонирование ДНК. Методы. - 1988.1. Glover D. DNA cloning. Methods. - 1988.
2. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. - Мир, 1984.2. Maniatis T., Fritsch E., Sambrook D. Molecular cloning: TRANS. from English. - World, 1984.
3. Миронов А.Н., Супотницкий М.В., Лебединская Е.В. Феномен антитело-зависимого усиления инфекции у вакцинированных и переболевших // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2013. - №. 3 (47). - С. 12-25.3. Mironov A.N., Supotnitsky M.V., Lebedinskaya E.V. The phenomenon of antibody-dependent increase in infection in vaccinated and recovering patients // BIOpreparations. Prevention, diagnosis, treatment. - 2013. - no. 3 (47). - S. 12-25.
4. Asano R. et al. Comprehensive study of domain rearrangements of single-chain bispecific antibodies to determine the best combination of configurations and microbial host cells // MAbs. - Taylor & Francis, 2018. - T. 10. - №. 6. - C. 854-863.4. Asano R. et al. Comprehensive study of domain rearrangements of single-chain bispecific antibodies to determine the best combination of configurations and microbial host cells // MAbs. - Taylor & Francis, 2018. - T. 10. - no. 6. - C. 854-863.
5. Asano R. et al. Construction and humanization of a functional bispecific EGFR× CD16 diabody using a refolding system // The FEBS Journal. -2012. - T. 279. - №. 2. - C. 223-233.5. Asano R. et al. Construction and humanization of a functional bispecific EGFR× CD16 diabody using a refolding system // The FEBS Journal. -2012. - T. 279. - no. 2. - C. 223-233.
6. Aubry F. et al. Recent African strains of Zika virus display higher transmissibility and fetal pathogenicity than Asian strains //Nature communications. -2021.-Т. 12.-№. 1.-C. 1-14.6. Aubry F. et al. Recent African strains of Zika virus display higher transmissibility and fetal pathogenicity than Asian strains //Nature communications. -2021.-T. 12.-No. 1.-C. 1-14.
7. Barba-Spaeth G. et al. Structural basis of potent Zika-dengue virus antibody cross-neutralization // Nature. - 2016. - T. 536. - №. 7614. - C. 48-53.7. Barba-Spaeth G. et al. Structural basis of potent Zika-dengue virus antibody cross-neutralization // Nature. - 2016. - T. 536. - No. 7614. - C. 48-53.
8. Basarab M. et al. Zika virus // Bmj. - 2016. - T. 352.8 Basarab M. et al. Zika virus // Bmj. - 2016. - T. 352.
9. Baykov I.K. et al. A protective chimeric antibody to tick-borne encephalitis virus // Vaccine. - 2014. - T. 32. - №. 29. - C. 3589-3594.9. Baykov I.K. et al. A protective chimeric antibody to tick-borne encephalitis virus // Vaccine. - 2014. - T. 32. - no. 29. - C. 3589-3594.
10. Begum F. et al. Insight into the tropism of dengue virus in humans //Viruses. - 2019.-Т. 11. - №. 12. - С.1136.10. Begum F. et al. Insight into the tropism of dengue virus in humans //Viruses. - 2019.-T. 11. - no. 12. - S.1136.
11. Buchacher A. et al. Generation of human monoclonal antibodies against HIV-1 proteins; electrofusion and Epstein-Barr virus transformation for peripheral blood lymphocyte immortalization // AIDS research and human retroviruses. - 1994. - T. 10. -№. 4. - C. 359-369.11. Buchacher A. et al. Generation of human monoclonal antibodies against HIV-1 proteins; electrofusion and Epstein-Barr virus transformation for peripheral blood lymphocyte immortalization // AIDS research and human retroviruses. - 1994. - T. 10. - no. 4. - C. 359-369.
12. Busse W. W. et al. Safety profile, pharmacokinetics, and biologic activity of MEDI-563, an anti-IL-5 receptor α antibody, in a phase I study of subjects with mild asthma // Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 2010. - T. 125. - №. 6. - C. 1237-1244. e2.12. Busse W. W. et al. Safety profile, pharmacokinetics, and biologic activity of MEDI-563, an anti-IL-5 receptor α antibody, in a phase I study of subjects with mild asthma // Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 2010. - T. 125. - No. 6. - C. 1237-1244. e2.
13. Carlring J., De Leenheer E., Heath A. W. A novel redox method for rapid production of functional bi-specific antibodies for use in early pilot studies // PLoS One. - 2011. - T. 6. - №. 7. - C. e22533.13. Carlring J., De Leenheer E., Heath A. W. A novel redox method for rapid production of functional bi-specific antibodies for use in early pilot studies // PLoS One. - 2011. - T. 6. - no. 7. - C. e22533.
14. Choudhry A., O'Brien S.M. Inotuzumab ozogamicin for the treatment of patients with acute lymphocytic leukemia // Drugs of Today (Barcelona, Spain: 1998). - 2017. - T. 53. - №. 12. - C. 653-665.14. Choudhry A., O'Brien S.M. Inotuzumab ozogamicin for the treatment of patients with acute lymphocytic leukemia // Drugs of Today (Barcelona, Spain: 1998). - 2017. - T. 53. - No. 12. - C. 653-665.
15. de Claro R.A. et al. US Food and Drug Administration Approval Summary: Brentuximab Vedotin for the Treatment of Relapsed Hodgkin Lymphoma or Relapsed Systemic Anaplastic Large-Cell LymphomaBrentuximab Vedotin for HL and sALCL // Clinical Cancer Research. - 2012. - T. 18. - №. 21. - C. 5845-5849.15. de Claro R.A. et al. US Food and Drug Administration Approval Summary: Brentuximab Vedotin for the Treatment of Relapsed Hodgkin Lymphoma or Relapsed Systemic Anaplastic Large-Cell LymphomaBrentuximab Vedotin for HL and sALCL // Clinical Cancer Research. - 2012. - T. 18. - no. 21. - C. 5845-5849.
16. Dejnirattisai W. et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans // Science. - 2010. - T. 328. - №. 5979. - C. 745-748.16. Dejnirattisai W. et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans // Science. - 2010. - T. 328. - No. 5979. - C. 745-748.
17. Dejnirattisai W. et al. Dengue virus sero-cross-reactivity drives antibody-dependent enhancement of infection with zika virus //Nature immunology. - 2016. - Т. 17. - №. 9. - С.1102-1108.17. Dejnirattisai W. et al. Dengue virus sero-cross-reactivity drives antibody-dependent enhancement of infection with zika virus //Nature immunology. - 2016. - V. 17. - No. 9. - S.1102-1108.
18. Demina A.V. et al. TBE vaccine and post TBE disease Abs drive antibody dependent enhancement of Zika infection. - 2018.18. Demina A.V. et al. TBE vaccine and post TBE disease Abs drive antibody dependent enhancement of Zika infection. - 2018.
19. Deng Y.Q. et al. A broadly flavivirus cross-neutralizing monoclonal antibody that recognizes a novel epitope within the fusion loop of E protein // PloS one. - 2011. - T. 6. - №. 1. - C. e16059.19. Deng Y.Q. et al. A broadly flavivirus cross-neutralizing monoclonal antibody that recognizes a novel epitope within the fusion loop of E protein // PloS one. - 2011. - T. 6. - no. 1. - C. e16059.
20. Durbin A., Wilder-Smith A. An update on Zika vaccine developments // Expert review of vaccines. - 2017. - T. 16. - №. 8. - C. 781-787.20. Durbin A., Wilder-Smith A. An update on Zika vaccine developments // Expert review of vaccines. - 2017. - T. 16. - no. 8. - C. 781-787.
21. Fernandez E. et al. Human antibodies to the dengue virus E-dimer epitope have therapeutic activity against Zika virus infection // Nature immunology. - 2017. - T. 18. - №. 11. - C. 1261-1269.21. Fernandez E. et al. Human antibodies to the dengue virus E-dimer epitope have therapeutic activity against Zika virus infection // Nature immunology. - 2017. - T. 18. - no. 11. - C. 1261-1269.
22. Ferrara N. et al. Development of ranibizumab, an anti-vascular endothelial growth factor antigen binding fragment, as therapy for neovascular age-related macular degeneration //Retina. - 2006. - T. 26. - №. 8. - C. 859-870.22 Ferrara N. et al. Development of ranibizumab, an anti-vascular endothelial growth factor antigen binding fragment, as therapy for neovascular age-related macular degeneration //Retina. - 2006. - T. 26. - No. 8. - C. 859-870.
23. Fox J. P. et al. Additional observations on the duration of humoral immunity following vaccination with the 17D strain of yellow fever virus //American journal of hygiene. - 1948. - T. 47. -№. 1. - C. 64-70.23 Fox J. P. et al. Additional observations on the duration of humoral immunity following vaccination with the 17D strain of yellow fever virus // American journal of hygiene. - 1948. - T. 47. - no. 1. - C. 64-70.
24. Ishida T. et al. Defucosylated anti-CCR4 monoclonal antibody (KW-0761) for relapsed adult T-cell leukemia-lymphoma: a multicenter phase II study // J Clin Oncol. - 2012. - T. 30. - №. 8. - C. 837-842.24. Ishida T. et al. Defucosylated anti-CCR4 monoclonal antibody (KW-0761) for relapsed adult T-cell leukemia-lymphoma: a multicenter phase II study // J Clin Oncol. - 2012. - T. 30. - no. 8. - C. 837-842.
25. Jen E.Y. et al. FDA Approval: Gemtuzumab Ozogamicin for the Treatment of Adults with Newly Diagnosed CD33-Positive Acute Myeloid LeukemiaFDA Approval Summary: Gemtuzumab Ozogamicin // Clinical cancer research. - 2018. - T. 24. - №. 14. - C. 3242-3246.25. Jen E.Y. et al. FDA Approval: Gemtuzumab Ozogamicin for the Treatment of Adults with Newly Diagnosed CD33-Positive Acute Myeloid LeukemiaFDA Approval Summary: Gemtuzumab Ozogamicin // Clinical cancer research. - 2018. - T. 24. - No. 14. - C. 3242-3246.
26. Kyle J. L., Harris E. Global spread and persistence of dengue //Annual review of microbiology. - 2008. - T. 62. - №. 1. - C. 71-92.26. Kyle J. L., Harris E. Global spread and persistence of dengue // Annual review of microbiology. - 2008. - T. 62. - no. 1. - C. 71-92.
27. Li J. et al. IFNγ-induced Chemokines Are Required for CXCR3-mediated T-Cell Recruitment and Antitumor Efficacy of Anti-HER2/CD3 Bispecific AntibodyT-Cell Recruitment By Anti-HER2/CD3 // Clinical Cancer Research. - 2018. - T. 24. - №. 24. - C. 6447-6458.27 Li J. et al. IFNγ-induced Chemokines Are Required for CXCR3-mediated T-Cell Recruitment and Antitumor Efficacy of Anti-HER2/CD3 Bispecific AntibodyT-Cell Recruitment By Anti-HER2/CD3 // Clinical Cancer Research. - 2018. - T. 24. - No. 24. - C. 6447-6458.
28. Monath T. P. Yellow fever vaccine //Expert review of vaccines. -2005. - T. 4. - №. 4. - C. 553-574.28. Monath T. P. Yellow fever vaccine //Expert review of vaccines. -2005. - T. 4. - no. 4. - C. 553-574.
29. Montefiori D. C. et al. Neutralizing and infection-enhancing antibody responses to human immunodeficiency virus type 1 in long-term nonprogressors //The Journal of infectious diseases. - 1996. - Т. 173. - №. 1.-C. 60-67.29 Montefiori D. C. et al. Neutralizing and infection-enhancing antibody responses to human immunodeficiency virus type 1 in long-term nonprogressors //The Journal of infectious diseases. - 1996. - T. 173. - No. 1.-C. 60-67.
30. Montoya M. et al. Longitudinal analysis of antibody cross-neutralization following Zika virus and dengue virus infection in Asia and the Americas // The Journal of infectious diseases. - 2018. - T. 218. - №. 4. - C. 536-545.30 Montoya M. et al. Longitudinal analysis of antibody cross-neutralization following Zika virus and dengue virus infection in Asia and the Americas // The Journal of infectious diseases. - 2018. - T. 218. - No. 4. - C. 536-545.
31. Muster T. et al. A conserved neutralizing epitope on gp41 of human immunodeficiency virus type 1 // Journal of virology. - 1993. - T. 67. - №. 11.-C. 6642-6647.31. Muster T. et al. A conserved neutralizing epitope on gp41 of human immunodeficiency virus type 1 // Journal of virology. - 1993. - T. 67. - No. 11.-C. 6642-6647.
32. Neufeldt C. J. et al. Rewiring cellular networks by members of the Flaviviridae family // Nature Reviews Microbiology. - 2018. - T. 16. - №. 3. - C. 125-142.32 Neufeldt C. J. et al. Rewiring cellular networks by members of the Flaviviridae family // Nature Reviews Microbiology. - 2018. - T. 16. - no. 3. - C. 125-142.
33. Oldenburg J. et al. Emicizumab prophylaxis in hemophilia A with inhibitors // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 377. - №. 9. - C. 809-818.33. Oldenburg J. et al. Emicizumab prophylaxis in hemophilia A with inhibitors // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 377. - No. 9. - C. 809-818.
34. Priyamvada L. et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus // Proceedings of the National Academy of Sciences.-2016.-T. 113.-№. 28. - C. 7852-7857.34. Priyamvada L. et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus // Proceedings of the National Academy of Sciences.-2016.-T. 113.-No. 28. - C. 7852-7857.
35. Saiki R.K. et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science. - 1988. - T. 239. - №. 4839. - C. 487-491.35. Saiki R.K. et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science. - 1988. - T. 239. - No. 4839. - C. 487-491.
36. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proceedings of the national academy of sciences. - 1977. -T. 74.-№. 12.-C. 5463-5467.36. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proceedings of the national academy of sciences. - 1977. -T. 74.-No. 12.-C. 5463-5467.
37. Satta A. et al. Design, selection and optimization of an anti-TRAIL-R2/anti-CD3 bispecific antibody able to educate T cells to recognize and destroy cancer cells // MAbs. - Taylor & Francis, 2018. - T. 10. - №. 7. - C. 1084-1097.37 Satta A. et al. Design, selection and optimization of an anti-TRAIL-R2/anti-CD3 bispecific antibody able to educate T cells to recognize and destroy cancer cells // MAbs. - Taylor & Francis, 2018. - T. 10. - no. 7. - C. 1084-1097.
38. Smith I. et al. 2-year follow-up of trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer: a randomised controlled trial //The lancet. - 2007. - T. 369. - №. 9555. - C. 29-36.38 Smith I. et al. 2-year follow-up of trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer: a randomized controlled trial //The lancet. - 2007. - T. 369. - No. 9555.-C. 29-36.
39. VanBlargan L. A. et al. Broadly neutralizing monoclonal antibodies protect against multiple tick-borne flaviviruses // Journal of Experimental Medicine. - 2021. - T. 218. - №. 5. - С.e20210174.39 VanBlargan L. A. et al. Broadly neutralizing monoclonal antibodies protect against multiple tick-borne flaviviruses // Journal of Experimental Medicine. - 2021. - T. 218. - No. 5. - С.e20210174.
40. Walker L. M., Burton D. R. Passive immunotherapy of viral infections:'super-antibodies' enter the fray // Nature Reviews Immunology. - 2018. -Т. 18.-№. 5.-C. 297-308.40. Walker L. M., Burton D. R. Passive immunotherapy of viral infections: 'super-antibodies' enter the fray // Nature Reviews Immunology. - 2018. -T. 18.-No. 5.-C. 297-308.
41. Yamamoto K. et al. Phase I study of KW-0761, a defucosylated humanized anti-CCR4 antibody, in relapsed patients with adult T-cell leukemia-lymphoma and peripheral T-cell lymphoma //Journal of Clinical Oncology. - 2010. -Т. 28.-№. 9.-C. 1591-1598.41. Yamamoto K. et al. Phase I study of KW-0761, a defucosylated humanized anti-CCR4 antibody, in relapsed patients with adult T-cell leukemia-lymphoma and peripheral T-cell lymphoma // Journal of Clinical Oncology. - 2010. -T. 28.-No. 9.-C. 1591-1598.
42. Yamane-Ohnuki N. et al. Establishment of FUT8 knockout Chinese hamster ovary cells: an ideal host cell line for producing completely defucosylated antibodies with enhanced antibody-dependent cellular cytotoxicity //Biotechnology and bioengineering. - 2004. - T. 87. - №. 5. - C. 614-622.42. Yamane-Ohnuki N. et al. Establishment of FUT8 knockout Chinese hamster ovary cells: an ideal host cell line for producing completely defucosylated antibodies with enhanced antibody-dependent cellular cytotoxicity //Biotechnology and bioengineering. - 2004. - T. 87. - No. 5. - C. 614-622.
43. Yu L. et al. Delineating antibody recognition against Zika virus during natural infection // JCI insight. - 2017. - T. 2. - №. 12.43 Yu L. et al. Delineating antibody recognition against Zika virus during natural infection // JCI insight. - 2017. - T. 2. - no. 12.
44. Патент РФ №2550252, МПК C12N 15/63, опубл. 10.05.2015 г. (прототип).44. RF patent No. 2550252, IPC C12N 15/63, publ. May 10, 2015 (prototype).
Seq id no: 1Seq id no: 1
cgaagaaaggcccacccgtgaaggtgagccagtgagttgattgcagtccagttacgctggagtctgaggctcgtcctgaatggatccctatacagttgaagtcggaagtttacatacacttaagttggagtcattaaaactcgtttttcaactactccacaaatttcttgttaacaaacaatagttttggcaagtcagttaggacatctactttgtgcatgacacaagtcatttttccaacaattgtttacagacagattatttcacttataattcactgtatcacaattccagtgggtcagaagtttacatacactaagttcgactcctctgcagaatgcggcgatgtttcggtaaggggtccgctactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctctctggctaactagagaacccactgcttactggcttatcgaaattaatacgactcactatagggagacccaagctggctagcaccatgatgcggaccctgatcctggctgtgctgctggtgtacttctgtgccaccgtgcactgctccgacattgtgctgacccagactccactcactttgtcggttaccattggacagccagcctccatctcttgcaagtcaagtcagagcctcttagatagtgatggaaagacatatttgaattggttgttacagaggccaggccagtctccaaagcgcctaatctatctggtgtctaaattggactctggagtccctgacaggttcactggcggtggatcagggacagatttcacactgaaaatcagcagagtggaggctgaggatttgggagtttattattgctggcaaggtacacattttcctcagacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgtagacggaagagagccaccaactttagtctgctgaagcaggccggcgacgtggaagagaatcctggacctatgggagtgaaggtgctgttcgccctgatctgtattgccgtggccgaagcttctgtgaagctggaggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcagtttcagtgactattacatgtattgggttcgtcagactccggaaaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggtagtcacacctcctatcgagacagtgtgaaggggcgatttaccatctccagagacaatggcaagaacaacctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgtaagaggtgcttactggggccaagggactctggtcactgtctcttctgccagcaccaaggggccaagcgtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctctacatcacccgggaacctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgcgaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgaagttccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgagtcgaccgagcggttcccgcccctctccctcccccccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatgttattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgagggcccggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcagttcctctggaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgccacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctcacctcaagcgtattcaacaaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcggtgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaacgtctaggccccccgaaccacggggacgtggttttcctttgaaaaacacgatgataatatggccacaaccatgaccgagtacaagcccacggtgcgcctcgccacccgcgacgacgtccccagggccgtacgcaccctcgccgccgcgttcgccgactaccccgccacgcgccacaccgtcgatccggaccgccacatcgagcgggtcaccgagctgcaagaactcttcctcacgcgcgtcgggctcgacatcggcaaggtgtgggtcgcggacgacggcgccgcggtggcggtctggaccacgccggagagcgtcgaagcgggggcggtgttcgccgagatcggcccgcgcatggccgagttgagcggttcccggctggccgcgcagcaacagatggaaggcctcctggcgccgcaccggcccaaggagcccgcgtggttcctggccaccgtcggcgtctcgcccgaccaccagggcaagggtctgggcagcgccgtcgtgctccccggagtggaggcggccgagcgcgccggggtgcccgccttcctggagacctccgcgccccgcaacctccccttctacgagcggctcggcttcaccgtcaccgccgacgtcgaggtgcccgaaggaccgcgcacctggtgcatgacccgcaagcccggtgcctgattcgcatatgggttaatgcttcgagcagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgcagtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattataagctgcaataaacaagttcctcgacctctagctagagctactcgggaccccttaccgaaacatcgccgcattctgcagaggagtcgagtgtatgtaaacttctgacccactgggaatgtgatgaaagaaataaaagctgaaatgaatcattctctctactattattctgatatttcacattcttaaaataaagtggtgatcctaactgacctaagacagggaatttttactaggattaaatgtcaggaattgtgaaaaagtgagtttaaatgtatttggctaaggtgtatgtaaacttccgacttcaactgtatagggatccgctcaatactgaccatttaaatcatacctgacctccatagcagaaagtcaaaagcctccgaccggaggcttttgacttgatcggcacgtaagaggttccaactttcaccataatgaaataagatcactaccgggcgtattttttgagttatcgagattttcaggagctaaggaagctaaaatgagccatattcaacgggaaacgtcttgctcgaggccgcgattaaattccaacatggatgctgatttatatgggtataaatgggctcgcgataatgtcgggcaatcaggtgcgacaatctatcgattgtatgggaagcccgatgcgccagagttgtttctgaaacatggcaaaggtagcgttgccaatgatgttacagatgagatggtcaggctaaactggctgacggaatttatgcctcttccgaccatcaagcattttatccgtactcctgatgatgcatggttactcaccactgcgatcccagggaaaacagcattccaggtattagaagaatatcctgattcaggtgaaaatattgttgatgcgctggcagtgttcctgcgccggttgcattcgattcctgtttgtaattgtccttttaacggcgatcgcgtatttcgtctggctcaggcgcaatcacgaatgaataacggtttggttggtgcgagtgattttgatgacgagcgtaatggctggcctgttgaacaagtctggaaagaaatgcataagcttttgccattctcaccggattcagtcgtcactcatggtgatttctcacttgataaccttatttttgacgaggggaaattaataggttgtattgatgttggacgagtcggaatcgcagaccgataccaggatcttgccatcctatggaactgcctcggtgagttttctccttcattacagaaacggctttttcaaaaatatggtattgataatcctgatatgaataaattgcagtttcacttgatgctcgatgagtttttctaatgagggcccaaatgtaatcacctggctcaccttcgggtgggcctttctgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcgatgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcatagctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaagaacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttacctcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgattttctaccgaagaaaggcccacccgtgaaggtgagccagtgagttgattgcagtccagttacgctggagtctgaggctcgtcctgaatggatccctatacagttgaagtcggaagtttacatacacttaagttggagtcattaaaactcgtttttcaactactccacaaatttcttgttaacaaacaatagttttggcaagtcagttaggacatctactttg tgcatgacacaagtcatttttccaacaattgtttacagacagattatttcacttataattcactgtatcacaattccagtgggtcagaagtttacatacactaagttcgactcctctgcagaatgcggcgatgtttcggtaaggggtccgctactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttac ggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcatta tgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgcc ccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctctggctaactagagaacccactgcttactggcttatcgaaattaatacgactcactatagggagacccaagctggctagcaccatgatgcggaccctgatcctggctgtgctgctggtgtacttctgtgccaccgtgcactgctccgacattgtg ctgacccagactccactcactttgtcggttaccattggacagccagcctccatctcttgcaagtcaagtcagagcctcttagatagtgatggaaagacatatttgaattggttgttacagaggccaggccagtctccaaagcgcctaatctatctggtgtctaaattggactctggagtccctgacaggttcactggcggtggatcagggacagatttcacact gaaaatcagcagtggaggctgaggatttgggagtttattattgctggcaaggtacacatttttcctcagacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccag agaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacagggg agagtgtagacggaagagagccaccaactttagtctgctgaagcaggccggcgacgtggaagagaatcctggacctatgggagtgaaggtgctgttcgccctgatctgtattgccgtggccgaagcttctgtgaagctggaggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcagtt tcagtgactattacatgtattgggttcgtcagactccggaaaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggtagtcacacctcctatcgagacagtgtgaaggggcgatttaccatctccagacaatggcaagaacaacctgtacctgcaaatgagcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgtaagaggtg cttactggggccaagggactctggtcactgtctcttctgccagcaccaaggggccaagcgtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacag tcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttcccccca aaacccaaggacaccctctacatcacccgggaacctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaat ggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgcgaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagcc ggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgaagttccactacaccgcagaagaagagcctctccctgtctccgggtaaatgagtcgaccgagcggttcccgcccctctccct cccccccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatgtttattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgaggggcccggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcag ttcctctggaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgccacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctcacctcaagcgtattcaac aaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcggtgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaacgtctaggccccccgaaccacggggacgtggttttcctttgaaaaacacgatgataatatggccacaaccatgaccgagtacaagcccacggtgcgcctcgccacccg cgacgacgtccccagggccgtacgcaccctcgccgccgcgttcgccgactaccccgccacgcgccacaccgtcgatccggaccgccacatcgagcgggtcaccgagctgcaagaactcttcctcacgcgcgtcgggctcgacatcggcaaggtgtgggtcgcggacgacggcgccgcggtggcggtct ggaccacgccggagagcgtcgaagcggggggcggtgttcgccgagatcggcccgcgcatggccgagttgagcggttcccggctggccgcgcagcaacagatggaaggcctcctggcgccgcaccggcccaaggacccgcgtggttcctggccaccgtcggcgtctcgcccgaccaccaggggcaagggtctggggcag cgccgtcgtgctccccggagtggaggcggccgagcgcgccggggtgcccgccttcctggagacctccgcgccccgcaacctccccttctacgagcggctcggcttcaccgtcaccgccgacgtcgaggtgcccgaaggaccgcgcacctggtgcatgacccgcaagcccggtgcctgattcgcatatgggtta atgcttcgagcagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgcagtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattataagctgcaataaacaagttcctcgacctctagctagagctactcgggaccccttaccgaaacatcgccgcattctgcagaggagtcga gtgtatgtaaacttctgacccactgggaatgtgatgaaagaaataaaagctgaaatgaatcattctctctactattattctgatatttcacattcttaaaataaagtggtgatcctaactgacctaagacagggaatttttactagattaaatgtcaggaattgtgaaaaagtgagtttaaatgtatttggctaaggtgtatgtaaacttcc gacttcaactgtatagggatccgctcaatactgaccatttaaatcatacctgacctccatagcagaaagtcaaaagcctccgaccgggaggcttttgacttgatcggcacgtaagaggttccaactttcaccataatgaaataagatcactaccgggcgtattttttgagttatcgagattttcaggagctaaggaagctaaaatgagccatattcaacgggaaacgt cttgctcgaggccgcgattaaattccaacatggatgctgatttatatgggtataaatgggctcgcgataatgtcgggcaatcaggtgcgacaatctatcgattgtatgggaagcccgatgcgccagagttgtttctgaaacatggcaaaggtagcgttgccaatgatgttacagatgagatggtcaggctaaactggctgacgga atttatgcctcttccgaccatcaagcattttatccgtactcctgatgatgcatggttactcaccactgcgatcccagggaaaacagcattccaggtattagaagaatatcctgattcaggtgaaaatattgttgatgcgctggcagtgttcctgcgccggttgcattcgattcctgtttgtaattgtccttttaacggcgatcgcgta tttcgtctggctcaggcgcaatcacgaatgaataacggtttggttggtgcgagtgattttgatgacgagcgtaatggctggcctgttgaacaagtctggaaagaaatgcataagcttttgccattctcaccggattcagtcgtcactcatggtgatttctcacttgataaccttattttgacgaggggaaattaataggttgtattgat gttggacgagtcggaatcgcagaccgataccaggatcttgccatcctatggaactgcctcggtgagttttctccttcattacagaaacggctttttcaaaaatatggtattgataatcctgatatgaataaattgcagtttcacttgatgctcgatgagtttttctaatgagggcccaaatgtaatcacctggctcaccttcgggtg ggccttttctgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcgatgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgt ggcgctttctcatagctcacctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaacccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtagg cggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaagaacagtattggtatctgcgctctgctgaagccagttacctcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagaatcctttgatt ttctac
Seq id no: 2Seq id no: 2
VKLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFSFSDYYMYWVRQTPEKRLEWVATISDGGSHTSYRDSVKGRFTISRDNGKNNLYLQMSSLKSEDTAMYYCVRGAYWGQGTLVTVSSAVKLEESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFSFSDYYMYWVRQTPEKRLEWVATISDGGSHTSYRDSVKGRFTISRDNGKNNLYLQMSSLKSEDTAMYYCVRGAYWGQGTLVTVSSA
Seq id no: 3Seq id no: 3
DIVLTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGGGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIKDIVLTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGGGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIK
Claims (19)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2800471C1 true RU2800471C1 (en) | 2023-07-21 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2550252C1 (en) * | 2013-11-15 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | RECOMBINANT PLASMID DNA pCLm4/hygro-14D5 CODING POLYPEPTIDE WITH LIGHT CHAIN PROPERTIES OF CHIMERIC ANTIBODY TO TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS, AND RECOMBINANT PLASMID DNA pCHm2-14D5 CODING POLYPEPTIDE WITH HEAVY CHAIN PROPERTIES OF CHIMERIC ANTIBODY TO TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS, CHIMERIC ANTIBODY PROVIDING ACUTE PREVENTION OF TICK-BORNE ENCEPHALITIS IN MICE |
| CA2829963C (en) * | 2011-03-15 | 2020-08-11 | Janssen Biotech, Inc. | Human tissue factor antibody and uses thereof |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2829963C (en) * | 2011-03-15 | 2020-08-11 | Janssen Biotech, Inc. | Human tissue factor antibody and uses thereof |
| RU2550252C1 (en) * | 2013-11-15 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | RECOMBINANT PLASMID DNA pCLm4/hygro-14D5 CODING POLYPEPTIDE WITH LIGHT CHAIN PROPERTIES OF CHIMERIC ANTIBODY TO TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS, AND RECOMBINANT PLASMID DNA pCHm2-14D5 CODING POLYPEPTIDE WITH HEAVY CHAIN PROPERTIES OF CHIMERIC ANTIBODY TO TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS, CHIMERIC ANTIBODY PROVIDING ACUTE PREVENTION OF TICK-BORNE ENCEPHALITIS IN MICE |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Тепляков А., Обмолова Г., Кристаллическая структура тканевого фактора в комплексе с антителом 10H10 выявляет сигнальный эпитоп, Cell Signal. 2017 Aug;36:139-144. doi: 10.1016/j.cellsig.2017.05.004. Epub 2017 5 мая. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7280828B2 (en) | Antibodies targeting BCMA and uses thereof | |
| CN106967172B (en) | The anti-PD-1 bifunctional antibody of anti-CTLA 4-, its medical composition and its use | |
| CN108752482B (en) | Chimeric antigen receptors carrying truncated or untruncated myeloid cell-triggered receptor signaling structures and their applications | |
| CN108373504A (en) | CD24 specific antibodies and anti-CD24-CAR-T cells | |
| WO2020010250A2 (en) | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof | |
| JP7288503B2 (en) | Engineered anti-CD19 CAR-T cells | |
| JP2025024057A (en) | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof | |
| UA128304C2 (en) | MULTISPECIFIC ANTIBODY TO CD40 AND CD137 | |
| CN116063464A (en) | Antibodies or antigen binding fragments thereof to coronaviruses | |
| CN107847591A (en) | Multivalence human immunodeficiency virus antigen binding molecules and its application | |
| CN108456251A (en) | Anti- PD-L1 antibody and its application | |
| ES2718399T3 (en) | Molecules that attach to human bispecific EGFRVIII antibodies | |
| UA119659C2 (en) | ANTIBODY TO PD-1, ITS ANTIGEN-BINDING FRAGMENT AND THEIR MEDICAL APPLICATION | |
| CN112480239B (en) | Human papillomavirus specific T cell receptor and its antitumor use | |
| US20240002543A1 (en) | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof | |
| KR102011789B1 (en) | T cells expressing chimeric antigen receptors and chimeric antigen receptors | |
| CN109776678A (en) | A kind of humanization PD-L1 monoclonal antibody, preparation method and application | |
| WO2018006881A1 (en) | Recombinant immune-checkpoint receptor and application thereof | |
| CN111944062A (en) | Chimeric antigen receptor for recognizing Fc fragment and application thereof | |
| WO2022135578A1 (en) | Claudin18.2 chimeric antigen receptor and use thereof | |
| JP2023538369A (en) | Anti-CD73 antibody and its use | |
| US20240067706A1 (en) | Fully human broad-spectrum neutralizing antibody 76e1 against coronavirus, and use thereof | |
| JP2024514246A (en) | CLDN18.2 antigen binding protein and uses thereof | |
| JP2022529380A (en) | Chimeric antigen receptor constructs and their use in CAR-T cells | |
| CN108822216B (en) | Carry the Chimeric antigen receptor and its application of truncation or not truncated nature cell toxin receptor signal structure |