RU2796570C2

RU2796570C2 - Stable lyophilizates containing 5,10-methylene-(6r)-tetrahydrofolic acid

Info

Publication number: RU2796570C2
Application number: RU2020110073A
Authority: RU
Inventors: Рудольф Мозер; Виола Грён; Томас АММАНН
Original assignee: Мерк Патент Гмбх
Priority date: 2017-08-16
Filing date: 2018-08-15
Publication date: 2023-05-25

Abstract

FIELD: pharmaceuticals.

SUBSTANCE: invention relates to stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or salt thereof, as well as methods for their preparation, and the use of such products.

EFFECT: obtaining stable lyophilizates containing 5,10-methylene-(6r)-tetrahydrofolic acid.

10 cl, 1 dwg, 5 tbl, 7 ex

Description

Настоящее изобретение относится к стабильным лиофилизатам, содержащим 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-(6R)-CH₂-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.The present invention relates to stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-(6R)-CH ₂ -THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or a salt thereof.

Как используется в настоящей заявке, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ относится к 5,10-метилентетрагидрофолиевой кислоте в ее встречающейся в природе изомерной форме (N-[4-[(6aR)-3-амино-1,2,5,6,6а,7-гексагидро-1-оксоимидазо[1,5-f]птеридин-8(9Н)-ил]бензоил]-L-глутаминовая кислота), где хиральные центры на С6 птеридинового кольца и α-углерод глутаминовой кислоты находятся в их встречающейся в природе конфигурации.As used herein, 5,10-CH ₂ -(6R)-THF refers to 5,10-methylenetetrahydrofolic acid in its naturally occurring isomeric form (N-[4-[(6aR)-3-amino-1, 2,5,6,6a,7-hexahydro-1-oxoimidazo[1,5-f]pteridin-8(9H)-yl]benzoyl]-L-glutamic acid), where the chiral centers on C6 of the pteridine ring and α- the glutamic acid carbons are in their naturally occurring configuration.

5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота в комбинации с 5-фторурацилом (5-ФУ), известна в качестве лекарственного средства для лечения солидных опухолей (Seley, K.L. Drugs 4 (1), 99, 2001). Активная форма, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ, осуществляет ее химиотерапевтическое действие совместно с аналогом основания и метаболитом 5-ФУ 5-FdUMP путем ингибирования фермента тимидилатсинтаза (ТС). ТС катализирует превращение дезоксиуридилата (dUMP) в дезокситимидилат (dTMP), который является ключевой структурной единицей для синтеза ДНК. Деактивация ТС происходит путем образования ковалентного, тройного ингибирующего комплекса между ТС, аналогом основания 5-FdUMP, который представляет собой метаболит 5-ФУ, и 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ. Усиление цитотоксического эффекта 5-ФУ может достигаться путем увеличения внутриклеточной концентрации 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, вследствие чего повышается стабильность тройного комплекса. Это вызывает непосредственное ингибирование синтеза и репарации ДНК, что в конечном итоге приводит к клеточной гибели и задержке роста опухоли.5,10-methylenetetrahydrofolic acid in combination with 5-fluorouracil (5-FU) is known as a solid tumor drug (Seley, KL Drugs 4(1), 99, 2001). The active form, 5,10-CH ₂ -(6R)-THF, exerts its chemotherapeutic action in conjunction with the base analog and 5-FU 5-FdUMP metabolite by inhibiting the thymidylate synthase (TC) enzyme. TC catalyzes the conversion of deoxyuridylate (dUMP) to deoxythymidylate (dTMP), which is the key building block for DNA synthesis. Deactivation of TC occurs through the formation of a covalent, triple inhibitory complex between TC, a base analogue of 5-FdUMP, which is a metabolite of 5-FU, and 5,10-CH ₂ -(6R)-THF. Enhancement of the cytotoxic effect of 5-FU can be achieved by increasing the intracellular concentration of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF, which increases the stability of the ternary complex. This causes direct inhibition of DNA synthesis and repair, which ultimately leads to cell death and tumor growth inhibition.

Однако существуют нежелательные свойства, связанные с 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, которые ограничивают ее фармацевтическое применение. Например, 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ является высокочувствительной к окислению и химическому разложению, что приводит к неблагоприятно высокому содержанию примесей. Чувствительность к окислению и химическое разложение 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ является чрезвычайно высокими, когда она представлена в своей аморфной форме и имеет большую поверхность, например, в ее фармацевтически применимой форме, такой как лиофилизат. Хорошо известно, что для пригодности для фармацевтического применения, соответствующая композиция должна соответствовать определенным требованиям, включая высокую химическую и изомерную стабильность, таким образом, чтобы можно было достичь эффективного хранения в течение приемлемого периода времени, без проявления существенного изменения физико-химических характеристик композиции, легкости манипулирования и обработки, и т.д.However, there are undesirable properties associated with 5,10-CH ₂ -(6R)-THF that limit its pharmaceutical use. For example, 5,10-CH ₂ -(6R)-THF is highly susceptible to oxidation and chemical degradation, resulting in unfavorably high levels of impurities. The oxidation sensitivity and chemical degradation of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF is extremely high when it is present in its amorphous form and has a large surface area, for example in its pharmaceutically usable form such as a lyophilisate. It is well known that in order to be suitable for pharmaceutical use, an appropriate composition must meet certain requirements, including high chemical and isomeric stability, so that effective storage can be achieved for an acceptable period of time, without showing a significant change in the physico-chemical characteristics of the composition, lightness manipulation and processing, etc.

5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота представляет собой продукт присоединения тетрагидрофолиевой кислоты и формальдегида (см., например, Рое, М. и др. Biochemistry 18 (24), 5527, 1979; Kallen, R.G. Methods in Enzymology 18B, 705, 1971) и известна тем, что является чрезвычайно высокочувствительной к окислению на воздухе, а также нестабильна в нейтральных и/или кислых окружающих средах, что потенциально приводит к химическому разложению и/или гидролизу (см., например, Odin, Е. и др., Cancer Investigation 16 (7), 447, 1998; Osborn, М.J. и др., J. Am. Chem. Soc. 82, 4921, 1960; Hawkes, J., и Villota, R. Food Sci. Nutr. 28, 439, 1989). Попытки стабилизировать композиции, содержащие 5,10-метилентетрагидрофолаты, включают, например, (I) тщательное исключение атмосферного кислорода путем применения специальных технических устройств для восстановления твердых препаратов и инъекции 5,10-метилентетрагидрофолатов в среде без воздуха (см., например, Odin, Е. и др., Cancer Investigation 16 (7), 447, 1998; патент США №4,564,054); (II) добавление восстановителя, такого как L(+)-аскорбиновая кислота или ее соли, восстановленный гамма-глутатион, бета-меркаптоэтанол, тиоглицерин, N-ацетил-L-цистеин, и т.д. в качестве антиоксиданта для высокочувствительной 5,10-метилентетрагидрофолиевой кислоты и для тетрагидрофолиевой кислоты, в частности; (III) стабилизация с помощью соединений включения циклодекстрина (см., например, ЕР 0579996); (IV) добавление цитрата, при этом корригируя значения рН до щелочных значений (см., например, ЕР 1641460); или (V) образование различных кристаллических форм, таких как сульфатные соли (см., например, ЕР 0537492) или гемисульфатные соли (см., например, ЕР 2837631).5,10-methylenetetrahydrofolic acid is the addition product of tetrahydrofolic acid and formaldehyde (see e.g. Roe, M. et al. Biochemistry 18(24), 5527, 1979; Kallen, R.G. Methods in Enzymology 18B, 705, 1971) and known for being extremely sensitive to oxidation in air, as well as being unstable in neutral and/or acidic environments, potentially leading to chemical degradation and/or hydrolysis (see, for example, Odin, E. et al., Cancer Investigation 16 (7), 447, 1998; Osborn, M. J. et al., J. Am. Chem. Soc. 82, 4921, 1960; Hawkes, J., and Villota, R. Food Sci. Nutr. 28, 439, 1989). Attempts to stabilize compositions containing 5,10-methylenetetrahydrofolates include, for example, (i) careful exclusion of atmospheric oxygen by the use of special technical devices for the recovery of solid preparations and injection of 5,10-methylenetetrahydrofolates in an atmosphere without air (see, for example, Odin, E. et al., Cancer Investigation 16(7), 447, 1998, US Pat. No. 4,564,054); (II) adding a reducing agent such as L(+)-ascorbic acid or salts thereof, reduced gamma-glutathione, beta-mercaptoethanol, thioglycerol, N-acetyl-L-cysteine, etc. as an antioxidant for highly sensitive 5,10-methylenetetrahydrofolic acid and for tetrahydrofolic acid in particular; (III) stabilization with cyclodextrin inclusion compounds (see, for example, EP 0579996); (IV) adding citrate while adjusting the pH values to alkaline values (see, for example, EP 1641460); or (V) the formation of various crystalline forms such as sulfate salts (see eg EP 0537492) or hemisulfate salts (see eg EP 2837631).

Все еще существует большая потребность в фармацевтических композициях в стабильном твердом состоянии, в особенности лиофилизатов, 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ.There is still a great need for stable solid state pharmaceutical compositions, especially lyophilisates, 5,10-CH ₂ -(6R)-THF.

Сейчас неожиданно было обнаружено, что определенные лиофилизаты, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль, преодолевают ранее обсуждаемые известные недостатки и предоставляют возможность получения фармацевтических композиций в твердом состоянии с высокой чистотой и низким содержанием либо продуктов окисления или других продуктов химического разложения. Благоприятные характеристики стабильности лиофилизатов согласно настоящему изобретению будет предоставлять возможность эффективного применения для медицинских показаний.It has now surprisingly been found that certain lyophilizates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or a salt thereof overcome earlier discussed known disadvantages and provide the opportunity to obtain solid state pharmaceutical compositions with high purity and low content of either oxidation products or other chemical degradation products. The favorable stability characteristics of the lyophilisates of the present invention will enable effective use for medical indications.

В контексте настоящей заявки, термин фармацевтически приемлемые соли относится к кислым солям, таким как сульфатные или сульфонатные соли, предпочтительно сульфатные соли, еще более предпочтительно гемисульфатные соли, или к солям щелочных или щелочноземельных металлов, предпочтительно солям натрия, калия, магния или кальция.In the context of this application, the term pharmaceutically acceptable salts refers to acid salts such as sulfate or sulfonate salts, preferably sulfate salts, even more preferably hemisulfate salts, or alkali or alkaline earth metal salts, preferably sodium, potassium, magnesium or calcium salts.

Добавление дикарбоновой кислоты к 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ приводит к поддержанию чистоты активного компонента 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ на существенно высоком уровне во время процесса лиофилизации, и в то же время поддерживать количества побочных продуктов на приемлемом низком уровне. Полученные лиофилизированные продукты проявляют стабильность в течение месяцев или больше без существенной потери активного компонента, например, поддерживая количество активного компонента на уровне или выше 95% и более предпочтительно на уровне или выше 98% в течение нескольких месяцев, включая наиболее предпочтительно приблизительно 99%, 99,5% или 99,8%. Это обеспечивает приготовление, хранение и применение лиофилизатов 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ без существенного разложения перед восстановлением.The addition of a dicarboxylic acid to 5,10-CH ₂ -(6R)-THF results in maintaining the purity of the active component 5,10-CH ₂ -(6R)-THF at a substantially high level during the lyophilization process, while maintaining the amounts by-products at an acceptable low level. The resulting lyophilized products are stable for months or more without significant loss of active ingredient, for example, maintaining the amount of active ingredient at or above 95% and more preferably at or above 98% for several months, including most preferably about 99%, 99 .5% or 99.8%. This enables the preparation, storage and use of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilisates without significant degradation prior to reconstitution.

Кроме того, было обнаружено, что лиофилизаты согласно настоящему изобретению имеют другое содержание воды, чем соответствующий активный компонент.In addition, it was found that the lyophilisates according to the present invention have a different water content than the corresponding active ingredient.

Лиофилизация или сушка вымораживанием представляет собой процесс обезвоживания, который осуществляют путем замораживания водного раствора, содержащего растворенный в нем материал и затем понижения окружающего давления для предоставления возможности замороженной воде сублимироваться непосредственно из твердой фазы в газообразную фазу. Обычно существует четыре стадии в полном процессе лиофилизации: предварительная обработка, замораживание, первичная сушка, и вторичная сушка.Lyophilization or freeze-drying is a dehydration process that is carried out by freezing an aqueous solution containing a material dissolved therein and then lowering the ambient pressure to allow the frozen water to sublimate directly from the solid phase to the gaseous phase. There are usually four steps in the complete lyophilization process: pre-treatment, freezing, primary drying, and secondary drying.

Предварительная обработка включает любой способ обработки материала перед замораживанием. Она может включать добавление других компонентов. Предварительная обработка возможна, но не всегда является необходимой для приготовления стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.Pre-treatment includes any method of processing material prior to freezing. It may include the addition of other components. Pretreatment is possible, but not always necessary, to prepare stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or her salt.

Замораживание часто осуществляют путем помещения водного раствора материала в колбу для сушки вымораживанием, которую охлаждают путем механического охлаждения, или применяя сухой лед или жидкий азот. В промышленном масштабе, замораживание водного раствора обычно осуществляют путем использования оборудования для сушки вымораживанием. На этой стадии, важным является охлаждение материала ниже его тройной точки, наиболее низкой температуры, при которой совместно могут существовать твердая и жидкая фазы материала. Это обеспечивает, что на следующих стадиях будет происходить сублимация, а не плавление. Замораживание предпочтительно осуществляют при температурах от -45°С до -70°С при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль. Возможен отжиг в течение от 1 до 2 часов при температурах полки приблизительно от -5°С до -2°С, но он не является необходимым, для приготовления стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.Freezing is often carried out by placing an aqueous solution of the material in a freeze-drying flask which is cooled by mechanical refrigeration or by the use of dry ice or liquid nitrogen. On an industrial scale, freezing of an aqueous solution is usually carried out by using freeze-drying equipment. At this stage, it is important to cool the material below its triple point, the lowest temperature at which the solid and liquid phases of the material can co-exist. This ensures that sublimation rather than melting will occur in the following steps. Freezing is preferably carried out at temperatures from -45°C to -70°C in the preparation of stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or its pharmaceutical an acceptable salt; and a dicarboxylic acid or salt thereof. Annealing for 1 to 2 hours at shelf temperatures of approximately -5°C to -2°C is possible, but is not necessary to prepare stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5 ,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and a dicarboxylic acid or a salt thereof.

Во время фазы первичной сушки, давление понижают (в интервале нескольких миллибар), и поставляют достаточное количество тепла для сублимации материала на льду. На этой начальной фазе сушки, приблизительно 95% воды в материале сублимируется. Эта фаза может быть медленной (может происходить в течение нескольких дней в промышленном масштабе), поскольку, если добавить слишком много тепла, то может измениться структура материала. В фазе первичной сушки, давление контролируется путем применения частичного вакуума. Вакуум ускоряет сублимации, делая ее пригодной в качестве рассчитанного процесса сушки. При приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль, фазу первичной сушки начинают при температуре замораживания предпочтительно от -45°С до -70°С. После этого во время фазы первичной сушки, температуру повышаю, после необязательного стартового периода в течение от предпочтительно 10 минут до 120 минут при температуре замораживания, в динамике до предпочтительно приблизительно 0°С. Во время фазы первичной сушки, поддерживают давление от предпочтительно приблизительно 50 мкбар до 200 мкбар.During the primary drying phase, the pressure is reduced (in the range of a few millibars) and sufficient heat is supplied to sublimate the material on ice. During this initial drying phase, approximately 95% of the water in the material is sublimated. This phase can be slow (may take several days on an industrial scale) because if too much heat is added, the structure of the material can change. In the primary drying phase, the pressure is controlled by applying a partial vacuum. The vacuum speeds up the sublimation, making it suitable as a timed drying process. When preparing stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or salt thereof, the primary drying phase is started at a temperature freezing preferably from -45°C to -70°C. Thereafter, during the primary drying phase, the temperature is increased, after an optional start-up period of preferably 10 minutes to 120 minutes at freezing temperature, over time to preferably approximately 0°C. During the primary drying phase, the pressure is maintained from preferably about 50 µbar to 200 µbar.

Фаза вторичной сушки направлена на удаление незамороженных молекул воды, поскольку лед был удален на фазе первичной сушки. На этой фазе, температуру повышают больше, чем на фазе первичной сушки, и можно даже выше 0°С, для распада любых физико-химических взаимодействий, которые могли образоваться между молекулами воды и замороженным материалом. Обычно давление также понижают на этой стадии для способствования десорбции (типично в диапазоне микробар, или фракций паскаля). Вторичную сушку предпочтительно осуществляют при температурах вплоть до приблизительно 25°С - 30°С и давлении приблизительно 50 мкбар - 200 мкбар при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH2-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.The secondary drying phase aims to remove unfrozen water molecules since the ice was removed during the primary drying phase. In this phase, the temperature is raised more than in the primary drying phase, and may even be above 0° C., in order to break down any physico-chemical interactions that may have formed between the water molecules and the frozen material. Usually the pressure is also reduced at this stage to promote desorption (typically in the range of microbars, or pascal fractions). Secondary drying is preferably carried out at temperatures up to about 25°C - 30°C and a pressure of about 50 μbar - 200 μbar in the preparation of stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH2-( 6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and a dicarboxylic acid or a salt thereof.

Фазу первичной и вторичной сушки можно комбинировать путем поддержания последовательного диапазона температур от температуры замораживания до температур вплоть до приблизительно 25°С - 30°С и давления приблизительно 50 мкбар - 200 мкбар при приготовлении стабильных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль. Диапазон температур может включать множественные стадии выдерживания, где температура поддерживается постоянной в течение определенного времени. Предпочтительно стадии выдерживания, если они присутствуют, осуществляют при температуре замораживания, при приблизительно 0°С и при приблизительно 25°С - 30°С.The primary and secondary drying phase can be combined by maintaining a consistent temperature range from freezing to temperatures up to about 25°C - 30°C and a pressure of about 50 μbar - 200 μbar in the preparation of stable lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R) -tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and a dicarboxylic acid or a salt thereof. The temperature range may include multiple holding stages where the temperature is kept constant for a certain time. Preferably, the aging steps, if present, are carried out at freezing temperature, at about 0°C, and at about 25°C - 30°C.

После завершения процесса лиофилизации, вакуум обычно нарушают с помощью инертного газа, такого как азот, перед герметизацией материала. После завершение операции, остаточное конечное содержание воды лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль обычно составляет приблизительно от 1% до 5%.After the lyophilization process is complete, the vacuum is usually broken with an inert gas such as nitrogen before the material is sealed. After completion of the operation, the residual final water content of lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or salt thereof is usually approximately 1% to 5%.

Стабильность является чрезвычайно важным свойством и компонентом исследований фармацевтических препаратов и разработки лекарственных средств. Исследования химической стабильности осуществляют как в растворе, так и твердом состоянии. Установлено, что стабильность в состоянии раствора и твердом состоянии может отличаться как качественно, так и количественно. Также стабильность в твердом состоянии для кристаллического материала и аморфного материала, такого как лиофилизат, может отличаться. Обширные исследования осуществляют для анализа химической стабильности лекарственных веществ и их фармацевтических композиций, подвергая их воздействию различных стрессовых факторов, таких как высокая температура и/или высокая влажность. Эти исследования также обеспечивают информацию относительно продуктов разложения и помогают разработать полноценные спецификации, а также присущую стабильность фармацевтической композиции. Наиболее распространенные пути разложения лекарственного вещества включают, в частности, гидролиз, окисление и фотохимическое разложение.Stability is an extremely important property and component of pharmaceutical research and drug development. Chemical stability studies are carried out both in solution and in the solid state. It has been established that the stability in the state of solution and solid state can differ both qualitatively and quantitatively. Also, the solid state stability of a crystalline material and an amorphous material such as a lyophilisate may be different. Extensive studies are carried out to analyze the chemical stability of drug substances and their pharmaceutical compositions by exposing them to various stress factors such as high temperature and/or high humidity. These studies also provide information on degradation products and help develop meaningful specifications as well as the inherent stability of a pharmaceutical composition. The most common routes of drug degradation include, in particular, hydrolysis, oxidation, and photochemical degradation.

Задачей испытания на стабильность является обеспечение подтверждений, как изменяется качество продукта в динамике во времени под влиянием различных факторов окружающей среды, таких как температура, влажность и свет, и установление подходящего срока годности при хранении для фармацевтического продукта и рекомендованных условий хранения для обеспечения безопасности пациента.The purpose of stability testing is to provide evidence of how the quality of a product changes over time under the influence of various environmental factors such as temperature, humidity and light, and to establish an appropriate shelf life for a pharmaceutical product and recommended storage conditions to ensure patient safety.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и янтарную кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and succinic acid or a salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и малеиновую кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and maleic acid or a salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и яблочную кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and malic acid or a salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и винную кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and tartaric acid or a salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и фумаровую кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and fumaric acid or a salt thereof.

Один вариант осуществления относится к лиофилизату, содержащему 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и щавелевую кислоту или ее соль.One embodiment relates to a lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and oxalic acid or a salt thereof.

Лиофилизаты согласно настоящему изобретению являются по существу аморфными, при этом имеют увеличенную стабильность, такую как увеличенная стабильность при хранении.Lyophilizates according to the present invention are essentially amorphous, while having increased stability, such as increased storage stability.

Лиофилизаты согласно настоящему изобретению также предпочтительно восстанавливаются в водный фармацевтический препарат для введения пациенту, который в этом нуждается.The lyophilizates of the present invention are also preferably reconstituted into an aqueous pharmaceutical preparation for administration to a patient in need thereof.

Дальнейший аспект относится к способу приготовления лиофилизатов согласно настоящему изобретению, который включает стадии:A further aspect relates to a process for the preparation of lyophilizates according to the present invention, which includes the steps:

(I) растворение 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли в воде, содержащей дикарбоновую кислоту или ее соль;(I) dissolving 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof in water containing the dicarboxylic acid or salt thereof;

(II) замораживание воды; и(II) freezing water; And

(III) последующее удаление замороженной воды в вакууме.(III) subsequent removal of the frozen water under vacuum.

Необязательно водное основание, такое как NaOH или KOH, добавляют на стадии (I) для полного растворения соединения 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота.Optionally, an aqueous base such as NaOH or KOH is added in step (I) to completely dissolve the 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid compound.

Раствор стадии а необязательно можно фильтровать через стерильный фильтр, перед осуществлением стадии (II).The solution of step a can optionally be filtered through a sterile filter before step (II) is carried out.

Значение рН раствора на стадии (I) составляет выше 6, обычно приблизительно 8-14, предпочтительно приблизительно 9,3.The pH of the solution in step (I) is above 6, typically about 8-14, preferably about 9.3.

Дальнейший аспект относится к восстановленным фармацевтическим композициям лиофилизатов согласно настоящему изобретению, содержащим 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту [5,10-CH₂-(6R)-ТГФ] или ее фармацевтически приемлемую соль и дикарбоновую кислоту или ее соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, такой как стерильная вода или жидкий фармацевтически приемлемый наполнитель, который необязательно дополнительно включает по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент, включая, но не ограничиваясь только ими, бактерициды, антибиотики, противовирусные средства, антисептики, противоопухолевые средства, противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, противогрибковые агенты, и/или противовоспалительные агенты или другие биологически активные или терапевтические агенты, которые пригодны для применения на людях, в частности противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, например 5-ФУ и производные, и антифолаты, например, метотрексат, Пеметрексед.A further aspect relates to reconstituted pharmaceutical compositions of lyophilisates according to the present invention containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid [5,10-CH ₂ -(6R)-THF] or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or a salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent, such as sterile water or a liquid pharmaceutically acceptable excipient, which optionally further includes at least one additional therapeutic agent, including, but not limited to, bactericides, antibiotics, antivirals, antiseptics, antitumor agents, anticancer compounds such as chemotherapeutic agents, antifungal agents, and/or anti-inflammatory agents or other biologically active or therapeutic agents that are suitable for use in humans, in particular anti-cancer compounds such as chemotherapeutic agents, for example 5-FU and derivatives, and antifolates, e.g. methotrexate, pemetrexed.

"Жидкий фармацевтически приемлемый носитель" относится к пропиленгликолю, полиэтиленгликолю, этанолу, диметилсульфоксиду (ДМСО), N-метилпирролидону (NMP), гликофуролу, изопропилиленглицерину (Solketal), глицеринформалю, ацетону, тетрагидрофурфуриловому спирту, моноглиму, диглиму, диметилизосорбиду или этиллактату, их смесям, или их водным смесям."Liquid pharmaceutically acceptable carrier" refers to propylene glycol, polyethylene glycol, ethanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), N-methylpyrrolidone (NMP), glycofurol, isopropylylene glycerol (Solketal), glycerinformal, acetone, tetrahydrofurfuryl alcohol, monoglyme, diglyme, dimethyl isosorbide or ethyl lactate, mixtures thereof , or their aqueous mixtures.

Дальнейший аспект относится к применению восстановленных фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению для терапии, предпочтительно для химиотерапии злокачественных новообразований.A further aspect relates to the use of the reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention for therapy, preferably chemotherapy, for cancer.

Необязательно, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно включать по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент. В специфических вариантах осуществления, по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент может быть выбран из группы, включающей бактерициды, антибиотики, противовирусные средства, антисептики, противоопухолевые средства, противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты, противогрибковые агенты, и/или противовоспалительные агенты или другие биологически активные или терапевтические агенты, которые пригодны для применения на людях, в частности противораковые соединения, такие как химиотерапевтические агенты. Противоопухолевое средство, такое как химиотерапевтический агент, может включать, но не ограничиваясь только ими, химиотерапевтические агенты, которые содержат специфические связывающие представители, белки, нуклеиновые кислоты или аналоги нуклеиновых кислот (такие как, но не ограничиваясь только ими, антисмысловые молекулы, рибозимы и миРНК), липиды, стероиды, большие молекулы, небольшие молекулы или металлы. Одно или несколько противоопухолевые средства могут включать один или несколько химиотерапевтических агентов, такие как, но не ограничиваясь только ими: нуклеиновые кислоты, в частности фторированные нуклеиновые кислоты (например, 5-фторурацил или его аналог или пролекарство), антифолаты (например, пеметрексед, ралтитрексед, лометрексол), ингибиторы топоизомеразы (например, иринотекан, топотекан), антиметаболитные лекарственные средства (например, метотрексат, гемцитабин, тезацитабин), модуляторы 5-ФУ, алкилирующие агенты (например, циклофосфамид, кармустин), ингибиторы биосинтеза нуклеиновых кислот (такие как митомицин, антрациклины (например, эпирубицин, доксорубицин), производные платины (например, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин), лекарственные средства, разрушающие микротрубочки (например, паклитаксел, доцетаксел, винорелбин, винкристин), лекарственные средства, блокирующие гормоны (например, тамоксифен), ингибиторы киназ, включая, но не ограничиваясь только ими, рецепторные и нерецепторные тирозинкиназы (например, Iressa, Tarceva, SU5416, РТК787, Gleevec), ингибиторы протеосомы (например, бортезомиб), иммуномодуляторы (например, левамизол), противовоспалительные лекарственные средства, ингибиторы васкуляризации, цитокины (например, интерлейкины, факторы некроза опухоли), и лекарственные средства, которые ингибируют активность цитокинов, гормонов, или рецепторов для цитокинов или гормонов (например, антитело к VEGF бевацизумаб или "Авастин"). Противоопухолевые средства также могут включать моноклональные антитела, такие как, но не ограничиваясь только ими, моноклональные антитела, которые связывают цитокины, гормоны или рецепторы гормонов (например, антитела, которые блокируют активацию EGF или VEGF факторов роста, такие как Авастин, эрбитукс, герцептин), и т.д.Optionally, reconstituted pharmaceutical compositions according to the present invention may further include at least one additional therapeutic agent. In specific embodiments, at least one additional therapeutic agent may be selected from the group consisting of bactericides, antibiotics, antiviral agents, antiseptics, anticancer agents, anticancer compounds such as chemotherapeutic agents, antifungal agents, and/or anti-inflammatory agents or other biologically active agents. active or therapeutic agents which are suitable for use in humans, in particular anti-cancer compounds such as chemotherapeutic agents. An antitumor agent, such as a chemotherapeutic agent, may include, but is not limited to, chemotherapeutic agents that contain specific binding members, proteins, nucleic acids, or nucleic acid analogs (such as, but not limited to, antisense molecules, ribozymes, and siRNAs). ), lipids, steroids, large molecules, small molecules or metals. One or more antitumor agents may include one or more chemotherapeutic agents, such as, but not limited to: nucleic acids, in particular fluorinated nucleic acids (for example, 5-fluorouracil or its analogue or prodrug), antifolates (for example, pemetrexed, raltitrexed , lometrexol), topoisomerase inhibitors (eg, irinotecan, topotecan), antimetabolite drugs (eg, methotrexate, gemcitabine, tezacitabine), 5-FU modulators, alkylating agents (eg, cyclophosphamide, carmustine), inhibitors of nucleic acid biosynthesis (such as mitomycin , anthracyclines (eg, epirubicin, doxorubicin), platinum derivatives (eg, cisplatin, oxaliplatin, carboplatin), drugs that disrupt microtubules (eg, paclitaxel, docetaxel, vinorelbine, vincristine), drugs that block hormones (eg, tamoxifen), kinase inhibitors, including, but not limited to, receptor and non-receptor tyrosine kinases (eg, Iressa, Tarceva, SU5416, PTK787, Gleevec), proteasome inhibitors (eg, bortezomib), immunomodulators (eg, levamisole), anti-inflammatory drugs, vascularization inhibitors , cytokines (eg, interleukins, tumor necrosis factors), and drugs that inhibit the activity of cytokines, hormones, or cytokine or hormone receptors (eg, the anti-VEGF antibody bevacizumab or Avastin). Anticancer agents may also include monoclonal antibodies, such as, but not limited to, monoclonal antibodies that bind cytokines, hormones, or hormone receptors (eg, antibodies that block the activation of EGF or VEGF growth factors, such as Avastin, Erbitux, Herceptin) , etc.

В дальнейших аспектах, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также пригодны для комбинирования с известными противораковыми средствами. Эти известные противораковые агенты включают следующие: модуляторы эстрогенового рецептора, модуляторы андрогенового рецептора, модуляторы ретиноидного рецептора, цитотоксические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренил-протеин-трансферазы, ингибиторы HMG-CoA редуктазы, ингибиторы ВИЧ протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы и другие ингибиторы ангиогенеза.In further aspects, the reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention are also suitable for combination with known anti-cancer agents. These known anticancer agents include the following: estrogen receptor modulators, androgen receptor modulators, retinoid receptor modulators, cytotoxic agents, antiproliferative agents, prenyl protein transferase inhibitors, HMG-CoA reductase inhibitors, HIV protease inhibitors, reverse transcriptase inhibitors, and other inhibitors of angiogenesis.

Дополнительно, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению в особенности подходят для применения одновременно с лучевой терапией.Additionally, the reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention are particularly suitable for use concomitantly with radiation therapy.

Выражение "модуляторы эстрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание эстрогена с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов эстрогенового рецептора включают, но не ограничиваясь только ими, тамоксифен, ралоксифен, идоксифен, LY353381, LY117081, торемифен, фулвестрант, 4-[7-(2,2-диметил-1-оксопропокси-4-метил-2-[4-[2-(1-пиперидинил)этокси]фенил]-2Н-1-бензопиран-3-ил]фенил-2,2-диметилпропаноат, 4,4'-дигидроксибензофенон-2,4-динитрофенилгидразон и SH646.The expression "estrogen receptor modulators" refers to compounds that prevent or inhibit the binding of estrogen to the receptor, regardless of the mechanism. Examples of estrogen receptor modulators include, but are not limited to, tamoxifen, raloxifene, idoxifene, LY353381, LY117081, toremifene, fulvestrant, 4-[7-(2,2-dimethyl-1-oxopropoxy-4-methyl-2-[4 -[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl]-2H-1-benzopyran-3-yl]phenyl-2,2-dimethylpropanoate, 4,4'-dihydroxybenzophenone-2,4-dinitrophenylhydrazone and SH646.

Выражение "модуляторы андрогенового рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание андрогенов с рецептором, независимо от механизма. Примеры модуляторов андрогенового рецептора включают финастерид и другие ингибиторы 5α-редуктазы, нилутамид, флутамид, бикалутамид, лиарозол и абиратерон ацетат.The expression "modulators of the androgen receptor" refers to compounds that prevent or inhibit the binding of androgens to the receptor, regardless of the mechanism. Examples of androgen receptor modulators include finasteride and other 5α-reductase inhibitors, nilutamide, flutamide, bicalutamide, liarozol, and abiraterone acetate.

Выражение "модуляторы ретиноидного рецептора" относится к соединениям, которые препятствуют или ингибируют связывание ретиноидов с рецептором, независимо от механизма. Примеры таких модуляторов ретиноидного рецептора включают бексаротен, третиноин, 13-цис-ретиноевая кислота, 9-цис-ретиноевая кислота, α-дифторметилорнитин, ILX23-7553, транс-N-(4'-гидроксифенил)-ретинамид и N-4-карбоксифенилретинамид.The expression "retinoid receptor modulators" refers to compounds that prevent or inhibit the binding of retinoids to the receptor, regardless of the mechanism. Examples of such retinoid receptor modulators include bexarotene, tretinoin, 13-cis-retinoic acid, 9-cis-retinoic acid, α-difluoromethylornithine, ILX23-7553, trans-N-(4'-hydroxyphenyl)-retinamide, and N-4-carboxyphenylretinamide. .

Выражение "цитотоксические агенты" относится к соединениям, которые приводят к смерти клетки главным образом путем прямого действия на функционирование клетки или ингибируют или препятствуют миозису клетки, включая алкилирующие агенты, факторы некроза опухоли, интеркалирующие агенты, ингибиторы микротрубулина и ингибиторы топоизомеразы.The expression "cytotoxic agents" refers to compounds that result in cell death primarily through a direct effect on cell function or inhibit or interfere with cell myosis, including alkylating agents, tumor necrosis factors, intercalating agents, microtrubulin inhibitors, and topoisomerase inhibitors.

Примеры цитотоксических агентов включают, но не ограничиваясь только ими, тирапазимин, сертенеф, кахектин, ифосфамид, тазонермин, лонидамин, карбоплатин, алтретамин, преднимустин, дибромдулцитол, ранимустин, фотемустин, недаплатин, оксалиплатин, темозоломид, гептаплатин, эстрамустин, импросульфан тозилат, трофосфамид, нимустин, диброспидиум хлорид, пумитепа, лобаплатин, сатраплатин, профиромицин, цисплатин, ирофулвен, дексифосфамид, цис-аминдихлор(2-метилпиридин)платина, бензилгуанин, глуфосфамид, GPX100, (транс,транс,транс)бис-му-(гексан-1,6-диамин)му-[диаминплатина(II)]бис[диамин(хлор)платина(II)]тетрахлорид, диаризидинилспермин, триоксид мышьяка, 1-(11-додециламино-10-гидроксиундецил)-3,7-диметилксантин, зорубицин, идарубицин, даунорубицин, бисантрен, митоксантрон, пирарубицин, пинафид, валрубицин, амрубицин, антинеопластон, 3'-деамино-3'-морфолино-13-деоксо-10-гидроксикарминомицин, аннамицин, галарубицин, элинафид, MEN10755 и 4-деметокси-3-деамино-3-азиридинил-4-метилсульфонилдаунорубицин (см. WO 00/50032).Examples of cytotoxic agents include, but are not limited to, tirapazimin, sertenef, cachectin, ifosfamide, tazonermine, lonidamine, carboplatin, altretamine, prednimustine, dibromodulcitol, ranimustine, fotemustine, nedaplatin, oxaliplatin, temozolomide, heptaplatin, estramustine, improsulfan tosylate, trophosph amide, nimustine, dibrospidium chloride, pumitepa, lobaplatin, satraplatin, proprofiromycin, cisplatin, irofulven, dexiphosphamide, cis-amine dichloro(2-methylpyridine)platinum, benzylguanine, glufosfamide, GPX100, (trans,trans,trans)bis-mu-(hexane-1 ,6-diamine)mu-[diamineplatinum(II)]bis[diamine(chloro)platinum(II)]tetrachloride, diarizidinylspermine, arsenic trioxide, 1-(11-dodecylamino-10-hydroxyundecyl)-3,7-dimethylxanthine, zorubicin , idarubicin, daunorubicin, bisantrene, mitoxantrone, pyrarubicin, pinafide, valrubicin, amrubicin, antineoplaston, 3'-deamino-3'-morpholino-13-deoxo-10-hydroxycarminomycin, annamycin, galarubicin, elinafid, MEN10755 and 4-demethoxy-3 -deamino-3-aziridinyl-4-methylsulfonyldaunorubicin (see WO 00/50032).

Примеры ингибиторов микротрубулина включают паклитаксел, виндезин сульфат, 3',4'-дидегидро-4'-деокси-8'-норвинкалеукобластин, доцетаксол, ризоксин, доластатин, мивобулин изетионат, ауристатин, цемадотин, RPR109881, BMS184476, винфлунин, криптофицин, 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил)бензолсульфонамид, ангидровинбластин, N,N-диметил-L-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-L-пролин-трет-бутиламид, TDX258 и BMS188797.Examples of microtrubulin inhibitors include paclitaxel, vindesine sulfate, 3',4'-didehydro-4'-deoxy-8'-norvincaleucoblastin, docetaxol, rizoxin, dolastatin, mivobulin isethionate, auristatin, cemadotin, RPR109881, BMS184476, vinflunin, cryptophycin, 2, 3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-methoxyphenyl)benzenesulfonamide, anhydrovinblastine, N,N-dimethyl-L-valyl-L-valyl-N-methyl-L-valyl-L-prolyl -L-proline-tert-butylamide, TDX258 and BMS188797.

Ингибиторы топоизомеразы представляют собой, например, топотекан, гикаптамин, иринотекан, рубитекан, 6-этоксипропионил-3',4'-O-эксобензилиденчартреузин, 9-метокси-N,N-диметил-5-нитропиразоло[3,4,5-kl]акридин-2-(6Н)пропанамин, 1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Н-бензо[de]пирано[3',4':b,7]индолизино[1,2b]хинолин-10,13(9Н,15Н)дион, луртотекан, 7-[2-(N-изопропиламино)этил]-(20S)камптотецин, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, этопозид фосфат, тенипозид, собузоксан, 2'-диметиламино-2'-деоксиэтопозид, GL331, N-[2-(диметиламино)этил]-9-гидрокси-5,6-диметил-6Н-пиридо[4,3-b]карбазол-1-карбоксамид, азулакрин, (5а,5аВ,8аа,9b)-9-[2-[N-[2-(диметиламино)этил]-N-метиламино]этил]-5-[4-гидрокси-3,5-диметоксифенил]-5,5а,6,8,8а,9-гексогидрофуро(3',4':6,7)нафто(2,3-d)-1,3-диоксол-6-он, 2,3-(метилендиокси)-5-метил-7-гидрокси-8-метоксибензо[с]фенантридиниум, 6,9-бис[(2-аминоэтил)амино]бензо[g]изохинолин-5,10-дион, 5-(3-аминопропил-амино)-7,10-дигидрокси-2-(2-гидроксиэтиламинометил)-6Н-пиразоло[4,5,1-de]акридин-6-он, N-[1-[2(диэтиламино)этиламино]-7-метокси-9-оксо-9Н-тиоксантен-4-илметил]формамид, N-(2-(диметиламино)этил)акридин-4-карбоксамид, 6-[[2-(диметиламино)этил]амино]-3-гидрокси-7Н-индено[2,1-с]хинолин-7-он и димесна.Topoisomerase inhibitors are, for example, topotecan, hycaptamine, irinotecan, rubitecan, 6-ethoxypropionyl-3',4'-O-exobenzylidenechartreusine, 9-methoxy-N,N-dimethyl-5-nitropyrazolo[3,4,5-kl ]acridine-2-(6Н)propanamine, 1-amino-9-ethyl-5-fluoro-2,3-dihydro-9-hydroxy-4-methyl-1Н,12Н-benzo[de]pyrano[3',4 ':b,7]indolizino[1,2b]quinoline-10,13(9H,15H)dione, lurtothecan, 7-[2-(N-isopropylamino)ethyl]-(20S)camptothecin, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, etoposide phosphate, teniposide, sobuxane, 2'-dimethylamino-2'-deoxyetoposide, GL331, N-[2-(dimethylamino)ethyl]-9-hydroxy-5,6-dimethyl-6H-pyrido[4,3- b]carbazole-1-carboxamide, azulacrine, (5a,5aB,8aa,9b)-9-[2-[N-[2-(dimethylamino)ethyl]-N-methylamino]ethyl]-5-[4-hydroxy -3,5-dimethoxyphenyl]-5,5а,6,8,8а,9-hexohydrofuro(3',4':6,7)naphtho(2,3-d)-1,3-dioxol-6-one , 2,3-(methylenedioxy)-5-methyl-7-hydroxy-8-methoxybenzo[c]phenanthridinium, 6,9-bis[(2-aminoethyl)amino]benzo[g]isoquinoline-5,10-dione, 5-(3-Aminopropyl-amino)-7,10-dihydroxy-2-(2-hydroxyethylaminomethyl)-6H-pyrazolo[4,5,1-de]acridin-6-one, N-[1-[2( diethylamino)ethylamino]-7-methoxy-9-oxo-9H-thioxanthen-4-ylmethyl]formamide, N-(2-(dimethylamino)ethyl)acridine-4-carboxamide, 6-[[2-(dimethylamino)ethyl] amino]-3-hydroxy-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-one and dimesna.

"Антипролиферативные агенты" включают антисмысловые РНК и ДНК олигонуклеотиды, такие как G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 и INX3001 и антиметаболиты, такие как, например, эноцитабин, кармофур, тегафур, пентостатин, доксифлуридин, триметрексат, флударабин, капецитабин, галоцитабин, цитарабин окфосфат, фостеабин натрия гидрат, ралтитрексед, палтитрексид, эмитефур, тиазофурин, децитабин, нолатрексед, пеметрексед, нелзарабин, 2'-деокси-2'-метилиденцитидин, 2'-фторметилен-2'-деоксицитидин, N-[5-(2,3-дигидробензофурил)сульфонил]-N'-(3,4-дихлорфенил)мочевина, N6-[4-деокси-4-[N2-[2(Е),4(Е)-тетрадекадиеноил]глициламино]-L-глицеро-β-L-манногептопиранозил]аденин, аплидин, эктеинасцидин, троксацитабин, 4-[2-амино-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидро-3Н-пиримидино[5,4-b]-1,4-тиазин-6-ил-(S)-этил]-2,5-тиеноил-b-глутаминовая кислота, аминоптерин, 5-фторурацил, аланозин, сложный эфир 11-ацетил-8-(карбамоилоксиметил)-4-формил-6-метокси-14-окса-1,11-диазатетрацикло(7.4.1.0.0)тетрадека-2,4,6-триен-9-илуксусной кислоты, свайнсонин, лометрексол, дексразоксан, метиониназа, 2'-циано-2'-деокси-М4-палмитоил-1-(3-0-арабинофуранозил цитозин и 3-аминопиридин-2-карбоксальдегид тиосемикарбазон."Antiproliferative agents" include antisense RNA and DNA oligonucleotides such as G3139, ODN698, RVASKRAS, GEM231 and INX3001 and antimetabolites such as, for example, enocytabine, carmofur, tegafur, pentostatin, doxifluridine, trimetrexate, fludarabine, capecitabine, halocytabine, cytarabine oxphosphate , fosteabine sodium hydrate, raltitrexed, paltitrexide, emitefur, thiazofurin, decitabine, nolatrexed, pemetrexed, nelzarabine, 2'-deoxy-2'-methylidencytidine, 2'-fluoromethylene-2'-deoxycytidine, N-[5-(2,3 -dihydrobenzofuryl)sulfonyl]-N'-(3,4-dichlorophenyl)urea, N6-[4-deoxy-4-[N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoyl]glycylamino]-L-glycero- β-L-mannoheptopyranosyl]adenine, aplidine, ecteinascidin, troxcitabine, 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahydro-3H-pyrimidino[5,4-b]-1,4- thiazin-6-yl-(S)-ethyl]-2,5-thienoyl-b-glutamic acid, aminopterin, 5-fluorouracil, alanosine, 11-acetyl-8-(carbamoyloxymethyl)-4-formyl-6-ester methoxy-14-oxa-1,11-diazatetracyclo(7.4.1.0.0)tetradeca-2,4,6-trien-9-ylacetic acid, swinesonine, lometrexol, dexrazoxane, methioninase, 2'-cyano-2'-deoxy -M4-palmitoyl-1-(3-0-arabinofuranosyl cytosine and 3-aminopyridine-2-carboxaldehyde thiosemicarbazone.

"Антипролиферативные агенты" также включают моноклональные антитела к факторам роста, отличающиеся от тех, которые перечислены для "ингибиторов ангиогенеза", такие как трастузумаб, и подавляющие опухоли гены, такие как р53, которые могут быть доставлены с помощью переноса генов, опосредованного рекомбинантным вирусом (см., например, патент США №6 069 134)."Anti-proliferative agents" also includes monoclonal antibodies to growth factors other than those listed for "angiogenesis inhibitors" such as trastuzumab, and tumor-suppressing genes such as p53, which can be delivered by recombinant virus-mediated gene transfer ( see, for example, US Pat. No. 6,069,134).

Лекарственные средства, приведенные в следующей таблице, предпочтительно, но не исключительно, комбинируют с восстановленными фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению.The drugs in the following table are preferably, but not exclusively, combined with the reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention.

Восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут применяться для терапии, специфически для химиотерапии злокачественных новообразований, то есть в способе лечения злокачественного новообразования, который включает введение терапевтически эффективного количества 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ субъекту, нуждающемуся в таком лечении.The reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention may be used in cancer chemotherapy specific therapy, i.e. in a method of treating cancer which comprises administering a therapeutically effective amount of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF to a subject in need of such treatment.

В другом варианте осуществления, восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению применяют для терапии, предпочтительно для химиотерапии, то есть для лечения злокачественного новообразования. Примеры злокачественных новообразований, подлежащих лечению, включают, но не ограничиваясь только ими, рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка, рак желчного пузыря, рак желчных проток, рак ободочной кишки, рак прямой кишки, рак печени, рак поджелудочной железы, рак яичников, рак головы и шеи, и мезотелиомный рак.In another embodiment, the reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention are used for therapy, preferably chemotherapy, ie for the treatment of cancer. Examples of cancers to be treated include, but are not limited to, breast cancer, esophageal cancer, gastric cancer, gallbladder cancer, bile duct cancer, colon cancer, rectal cancer, liver cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer , head and neck cancer, and mesothelioma cancer.

В предпочтительном варианте осуществления, злокачественное новообразование выбирают из различных форм злокачественных новообразований, включая рак ободочной кишки, рак желудка, рак молочной железы, рак кишечника, рак желчного пузыря, рак легких (специфически аденокарцинома), колоректальный рак (КРР), включая метастатический КРР, рак головы и шеи, рак печени и рак поджелудочной железы.In a preferred embodiment, the cancer is selected from various forms of cancer including colon cancer, gastric cancer, breast cancer, colon cancer, gallbladder cancer, lung cancer (specifically adenocarcinoma), colorectal cancer (CRC), including metastatic CRC, head and neck cancer, liver cancer, and pancreatic cancer.

Восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению представлены в форме, подходящей для парентерального введения, такого как внутривенно или внутримышечно, подкожно, внутриартериально.The reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention are in a form suitable for parenteral administration, such as intravenously or intramuscularly, subcutaneously, intra-arterially.

Для парентерального введения, флюидизированные единичные дозированные формы типично содержат восстановленные лиофилизаты, предпочтительно восстановленные фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, необязательно дополнительный терапевтический агент, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, с образованием, например, растворов на водной основе или суспензий на масляной основе. Для парентеральных растворов, лиофилизаты согласно настоящему изобретению можно стерилизовать посредством фильтрации во время их приготовления, например, перед заполнением в подходящий флакон или ампулу.For parenteral administration, fluidized unit dosage forms typically contain reconstituted lyophilizates, preferably reconstituted pharmaceutical compositions of the present invention, optionally an additional therapeutic agent, and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent, to form, for example, aqueous solutions or oily suspensions. For parenteral solutions, the lyophilizates of the present invention can be sterilized by filtration during their preparation, for example before being filled into a suitable vial or ampoule.

В случае комбинированной терапии с применением восстановленной фармацевтической композиции согласно настоящего изобретения и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, активные агенты могут вводиться в виде части одной и той же фармацевтической композиции или по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент может вводиться отдельно, то есть в виде раздельных (и возможно разных) фармацевтических композиций, необязательно с помощью различных путей введения, либо одновременно или последовательно.In the case of combination therapy using a reconstituted pharmaceutical composition according to the present invention and at least one additional therapeutic agent, the active agents may be administered as part of the same pharmaceutical composition, or at least one additional therapeutic agent may be administered separately, i.e. as separate (and possibly different) pharmaceutical compositions, optionally via different routes of administration, either simultaneously or sequentially.

Доза активного(ых) агента(ов), то есть 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ (и необязательно по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента), используемых для лечения, как описано в настоящей заявке, будет зависеть от различных факторов, включая возраст и состояние здоровья субъекта, подвергаемого лечению, тип и тяжесть заболевания, подвергаемого лечению, и частоты ведения, и т.д. Квалифицированные специалисты в области лечения злокачественных новообразований и химиотерапии смогут определить терапевтически эффективные количества и схемы применения для активного фармацевтического компонента 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ отдельно или в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом, как определено выше, на основании известных протоколов для оценки токсичности и эффективности.The dose of the active agent(s), i.e. 5,10-CH ₂ -(6R)-THF (and optionally at least one additional therapeutic agent) used for treatment as described herein, will depend on various factors including the age and health status of the subject being treated, the type and severity of the disease being treated and the frequency of management, and so on. Those skilled in the art of cancer treatment and chemotherapy will be able to determine therapeutically effective amounts and schedules for the active pharmaceutical ingredient 5,10-CH ₂ -(6R)-THF alone or in combination with at least one additional therapeutic agent as defined above, based on known protocols to evaluate toxicity and efficacy.

Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству активного соединения, которое проявляет биологическую или медицинскую ответную реакцию в ткани, системе, животном, индивидууме или человеке, которая предполагается квалифицированным практиком (например, исследователем, ветеринаром, лечащим врачом или другим клиницистом или лицом, осуществляющим лечение), которая включает (I) предотвращение заболевания; и/или (II) ингибирование заболевания (например, остановку дальнейшего развития патологии и/или симптоматологии); и/или (III) ослабление заболевания (например, обращение патологии и/или симптоматологии). Аналогичным образом, термин "лечение", как используется в настоящей заявке, относится к: (I) предотвращение заболевания; и/или (II) ингибирование заболевания (например, остановку дальнейшего развития патологии и/или симптоматологии); и/или (III) ослабление заболевания (например, обращение патологии и/или симптоматологии).The term "therapeutically effective amount" refers to the amount of an active compound that exhibits a biological or medical response in a tissue, system, animal, individual, or human that is expected by a skilled practitioner (e.g., researcher, veterinarian, physician or other clinician or person exercising treatment), which includes (i) prevention of disease; and/or (II) inhibition of the disease (eg, stopping the further development of pathology and/or symptomatology); and/or (III) amelioration of the disease (eg, reversal of pathology and/or symptomatology). Similarly, the term "treatment", as used in this application, refers to: (i) prevention of disease; and/or (II) inhibition of the disease (eg, stopping the further development of pathology and/or symptomatology); and/or (III) amelioration of the disease (eg, reversal of pathology and/or symptomatology).

Предпочтительная фармацевтическая композиция может содержать от 0,1% до 99 мас. %, предпочтительно 10-60 мас. %, активного фармацевтического компонента (то есть 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ необязательно в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом), в зависимости от способа введения.The preferred pharmaceutical composition may contain from 0.1% to 99 wt. %, preferably 10-60 wt. % active pharmaceutical ingredient (ie 5,10-CH ₂ -(6R)-THF optionally in combination with at least one additional therapeutic agent), depending on the route of administration.

Типичные диапазоны дозировок 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ для применения для лечения злокачественного новообразования могут находиться в диапазоне от 5 мг/м² до 1,5 г/м², предпочтительно от 30 мг/ м² до 500 мг/м² (для лечения рака ободочной и прямой кишки) соотв. от 10 мг/м² до 1000 мг/м² (для терапии с применением метотрексата), и более предпочтительно от приблизительно от 60 мг/м² до приблизительно 300 мг/м² (для лечения рака ободочной и прямой кишки) соотв. от 50 мг/м² до 500 мг/м² (для терапии с применением метотрексата).Typical dosage ranges of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF for use in the treatment of cancer may range from 5 mg/m ² to 1.5 g/m ² , preferably from 30 mg/m ² to 500 mg /m ² (for the treatment of cancer of the colon and rectum) resp. 10 mg/m ² to 1000 mg/m ² (for methotrexate therapy), and more preferably from about 60 mg/m ² to about 300 mg/m ² (for the treatment of colon and rectal cancer) resp. from 50 mg/m ² to 500 mg/m ² (for methotrexate therapy).

Термины "изомерная чистота" соотв. "стереоизомерная чистота", как используется в настоящей заявке, относятся к количеству 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в образце, который может содержать один или несколько других изомеров одного и того же соединения. Термины "изомерно чистый" соотв. "стереизомерно чистый", как используется в настоящей заявке, обозначает 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в изомерном избытке по сравнению с другими изомерами больше, чем приблизительно 80%, предпочтительно больше, чем приблизительно 90%, предпочтительно больше, чем приблизительно 95%, более предпочтительно больше, чем приблизительно 97%, еще более предпочтительно больше, чем приблизительно 99%, более предпочтительно больше, чем приблизительно 99,5% или более, и наиболее предпочтительно вплоть до 100%, где остаток может составлять один или несколько других изомеров.The terms "isomer purity" resp. "stereoisomeric purity" as used herein refers to the amount of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF in a sample, which may contain one or more other isomers of the same compound. The terms "isomerically pure" resp. "stereoisomerically pure" as used herein means 5,10-CH ₂ -(6R)-THF in an isomeric excess over the other isomers of more than about 80%, preferably more than about 90%, preferably more, than about 95%, more preferably greater than about 97%, even more preferably greater than about 99%, more preferably greater than about 99.5% or more, and most preferably up to 100%, where the remainder may be one or several other isomers.

Термин "химическая чистота", как используется в настоящей заявке, обозначает процентное содержание предпочтительного соединения в образце. Термин "существенная химическая чистота", как используется в настоящей заявке, относится к соединению приблизительно с 80% химической чистотой, предпочтительно приблизительно 90%, более предпочтительно приблизительно 95%, более предпочтительно приблизительно 97%, более предпочтительно приблизительно 98% химической чистотой, и наиболее предпочтительно 99% или выше, чем 99%, например, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9 или вплоть до 100% химической чистотой, как определяется с помощью ВЭЖХ. Химические примеси могут включать непрореагировавший исходный материал (включая растворитель), продукты разложения 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ (такие как тетрагидрофолиевая кислота и ее продукты разложения), и т.д.The term "chemical purity", as used in this application, refers to the percentage of the preferred compound in the sample. The term "substantial chemical purity" as used herein refers to a compound with about 80% chemical purity, preferably about 90%, more preferably about 95%, more preferably about 97%, more preferably about 98% chemical purity, and most preferably 99% or greater than 99%, eg 99.5, 99.6, 99.7, 99.8, 99.9 or up to 100% chemical purity as determined by HPLC. Chemical impurities may include unreacted starting material (including solvent), degradation products of 5,10-CH ₂ -(6R)-THF (such as tetrahydrofolic acid and its degradation products), etc.

Термин "фармацевтически приемлемый", как используется в настоящей заявке, указывает на то, что носитель разрешен или признан контрольным органом для применения у животных, и более предпочтительно у людей, то есть он не является токсичным для хозяина или пациента. Дополнительно, предпочтительный носитель не будет препятствовать эффективности биологической активности активного компонента. Термин "носитель" относится к любому вспомогательному материалу, необходимому для конкретного предпочтительного способа введения и включает, например, растворитель (разбавители) наполнители, или другие вспомогательные вещества, с которыми вводят лиофилизаты согласно настоящему изобретению. Типично применяемые разбавители фармацевтические носители включают стерильные жидкости, такие как водные растворы и масла (например, из нефтепродуктов, животного, растительного или синтетического происхождения), например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и другие. Типично применяемые водные жидкости включают воду, солевые растворы, водные растворы декстрозы и глицерина и другие. Подходящие фармацевтические наполнители включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерин моностеарат, тальк, сухое снятое молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и другие. Примеры подходящих фармацевтических носителей хорошо известны в области техники и описаны, например, в "Remington's Pharmaceutical Sciences" под ред. E.W. Martin (18-ое изд., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990).The term "pharmaceutically acceptable" as used herein indicates that the carrier is approved or recognized by the regulatory authority for use in animals, and more preferably in humans, i.e. it is not toxic to the host or patient. Additionally, the preferred carrier will not interfere with the effectiveness of the biological activity of the active ingredient. The term "carrier" refers to any adjuvant necessary for a particular preferred route of administration and includes, for example, solvent(s), excipients, or other adjuvants with which the lyophilizates of the present invention are administered. Typical diluents and pharmaceutical carriers include sterile liquids such as aqueous solutions and oils (eg, from petroleum, animal, vegetable, or synthetic origin), such as peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil, and others. Typical aqueous liquids include water, saline solutions, aqueous dextrose and glycerol solutions, and others. Suitable pharmaceutical excipients include starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, chalk, silica gel, sodium stearate, glycerol monostearate, talc, skimmed milk powder, glycerin, propylene, glycol, water, ethanol, and others. Examples of suitable pharmaceutical carriers are well known in the art and are described, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences, ed. E.W. Martin (18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990).

ПримерыExamples

Онлайн данные, записанные во время лиофилизации, представлены на Фиг. 1.Online data recorded during lyophilization is shown in FIG. 1.

Пример 1: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и яблочную кислотуExample 1 Lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and malic acid

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С (получая рН 14,0). Добавляли 6,96 г яблочной кислоты и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,0) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 11,65 г очищенной воды. В общей сложности 2,15 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1. 5,0 мл полученного прозрачного раствора (составляя 5,181 г - 5,184 г) вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (36 флаконов). Флаконы сразу замораживали с жидким азотом и лиофилизировали при <10^-1 мбар. Полученные флаконы содержали лиофилизат 102 мг 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рассчитанный в виде свободной кислоты) с яблочной кислотой. Вес осадка составлял 258 мг. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,42% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ. Содержание воды составляло 2,7 мас. %, что соотв. 7,0 мг на флакон.Under a nitrogen atmosphere, 210 g of purified water and 16.5 g of 2M sodium hydroxide were cooled to 3±2° C. (getting a pH of 14.0). 6.96 g of malic acid was added followed by 5.70 g of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid hemisulfate salt (pH reduced to 13.0) and washed with 2.5 g of purified water. By adding 2M sodium hydroxide, the pH was maintained at 9.3±0.1. 11.65 g of purified water was added. A total of 2.15 g of 2M sodium hydroxide pH is needed to maintain the pH at 9.3±0.1. 5.0 ml of the resulting clear solution (constituting 5.181 g - 5.184 g) was applied per vial in 10 ml glass vials (36 vials). The vials were immediately frozen with liquid nitrogen and lyophilized at <10 ^-1 mbar. The resulting vials contained a 102 mg lyophilisate of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid (calculated as free acid) with malic acid. The sediment weight was 258 mg. 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid showed a surface purity of 97.42% as measured by HPLC. The water content was 2.7 wt. %, which acc. 7.0 mg per vial.

При восстановлении раствор имел осмоляльность 253 мОсмол/кг.When reconstituted, the solution had an osmolality of 253 mOsmol/kg.

Пример 2: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и янтарную кислотуExample 2: Lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and succinic acid

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С (получая рН 14,0). Добавляли 10,56 г гексагидрата сукцината натрия и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 12,74 г очищенной воды. В общей сложности 14,8 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1.Under a nitrogen atmosphere, 210 g of purified water and 16.5 g of 2M sodium hydroxide were cooled to 3±2° C. (getting a pH of 14.0). 10.56 g of sodium succinate hexahydrate was added followed by 5.70 g of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid hemisulphate salt (pH decreased to 13.8) and washed with 2.5 g of purified water. By adding 2M sodium hydroxide, the pH was maintained at 9.3±0.1. 12.74 g of purified water was added. A total of 14.8 g of 2M sodium hydroxide pH is needed to maintain the pH at 9.3±0.1.

5,0 мл полученного прозрачного раствора (составляющего 5,0959 г и 5,1079 г) вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (36 флаконов). Флаконы сразу замораживали с жидким азотом и лиофилизировали при <10^-1 мбар.5.0 ml of the resulting clear solution (constituting 5.0959 g and 5.1079 g) was applied per vial in 10 ml glass vials (36 vials). The vials were immediately frozen with liquid nitrogen and lyophilized at <10 ^-1 mbar.

Полученные флаконы содержали лиофилизат 102 мг 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рассчитанный в виде свободной кислоты) с янтарной кислотой. Вес осадка составлял 242 мг. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,35% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ. Содержание воды составляло 1,1 мас. %, что соотв.. 2,6 мг на флакон.The resulting vials contained a 102 mg lyophilisate of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid (calculated as free acid) with succinic acid. The sediment weight was 242 mg. 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid showed a surface purity of 97.35% as measured by HPLC. The water content was 1.1 wt. %, which corresponds to 2.6 mg per vial.

При восстановлении раствор имел осмоляльность 267 мОсмол/кг.When reconstituted, the solution had an osmolality of 267 mOsmol/kg.

Пример 3: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и малеиновую кислотуExample 3: Lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and maleic acid

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С. Добавляли 13,92 г ди-натрий малеат гидрата и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Охлаждение прекращали и температуру повышали до комнатной температуры. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 17,05 г очищенной воды. В общей сложности 18,4 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1.Under a nitrogen atmosphere, 210 g of purified water and 16.5 g of 2M sodium hydroxide were cooled to 3±2°C. 13.92 g of di-sodium maleate hydrate was added followed by 5.70 g of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid hemisulfate salt (pH decreased to 13.8) and washed with 2.5 g of purified water. Cooling was stopped and the temperature was raised to room temperature. By adding 2M sodium hydroxide, the pH was maintained at 9.3±0.1. 17.05 g of purified water was added. A total of 18.4 g of 2M sodium hydroxide pH is needed to maintain the pH at 9.3±0.1.

Прозрачный раствор выдерживали в течение 2 часов при комнатной температуре.The clear solution was kept for 2 hours at room temperature.

5,0 мл полученного прозрачного раствора вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (7 флаконов). Флаконы лиофилизировали. Полученные флаконы содержали лиофилизат 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты с малеиновой кислотой. 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 97,54% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ.5.0 ml of the resulting clear solution was added to a vial in 10 ml glass vials (7 vials). The vials were lyophilized. The resulting vials contained a lyophilisate of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid with maleic acid. 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid showed a surface purity of 97.54% as measured by HPLC.

Пример 4: Лиофилизат, содержащий 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и фумаровую кислотуExample 4: Lyophilisate containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and fumaric acid

В атмосфере азота 210 г очищенной воды и 16,5 г 2М гидроксида натрия охлаждали до 3±2°С. Добавляли 6,26 г ди-натрия фумарат и после этого 5,70 г гемисульфатной соли 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты (рН снижалось до 13,8) и промывали с помощью 2,5 г очищенной воды. Охлаждение прекращали и температуру повышали до комнатной температуры. Путем добавления 2М гидроксида натрия значение рН поддерживалось при 9,3±0,1. Добавляли 17,66 г очищенной воды. В общей сложности 19,1 г 2М гидроксида натрия рН необходимо для поддержания значения рН при 9,3±0,1. Прозрачный раствор выдерживали в течение 2 часов в атмосфере аргона при комнатной температуре.Under a nitrogen atmosphere, 210 g of purified water and 16.5 g of 2M sodium hydroxide were cooled to 3±2°C. 6.26 g of di-sodium fumarate was added followed by 5.70 g of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid hemisulfate salt (pH reduced to 13.8) and washed with 2.5 g of purified water. Cooling was stopped and the temperature was raised to room temperature. By adding 2M sodium hydroxide, the pH was maintained at 9.3±0.1. 17.66 g of purified water was added. A total of 19.1 g of 2M sodium hydroxide pH is needed to maintain the pH at 9.3±0.1. The clear solution was kept for 2 hours under argon at room temperature.

5,0 мл полученного прозрачного раствора вносили на флакон в стеклянные флаконы объемом 10 мл (7 флаконов). Флаконы лиофилизировали. Полученные флаконы содержали лиофилизат 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты с фумаровой кислотой. 5, 10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевая кислота продемонстрировала чистоту 96,80% поверхности, измеренную с помощью ВЭЖХ.5.0 ml of the resulting clear solution was added to a vial in 10 ml glass vials (7 vials). The vials were lyophilized. The resulting vials contained a lyophilisate of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid with fumaric acid. 5, 10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid showed a purity of 96.80% surface as measured by HPLC.

Пример 5: Долгосрочная стабильность лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислоту (содержание (6R)-5,10-СН₂-ТГФ)Example 5: Long-term stability of lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and dicarboxylic acid ((6R)-5,10-CH ₂ -THF content)

Для определения долгосрочной стабильности лиофилизатов 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты хранили на воздухе при +5°С, +25°С/60% относительной влажности и +40°С/75%To determine the long-term stability of the 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilisates prepared according to Examples 1-4, the lyophilisates were stored in air at +5°C, +25°C/60% relative humidity and +40° C/75%

относительной влажности. Содержание оставшейся 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ измеряли с помощью ВЭЖХ через периодические интервалы и представляли путем сравнения с исходным значением (% отн.). Результаты представлены в Таблицах 1 и 2.relative humidity. The content of the remaining 5,10-CH ₂ -(6R)-THF was measured by HPLC at periodic intervals and presented by comparison with the original value (% rel.). The results are presented in Tables 1 and 2.

Таблицы 1 и 2 убедительно показывают, что лиофилизаты 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ являются чрезвычайно стабильными в течение длительного периода времени даже при повышенных температурах.Tables 1 and 2 convincingly show that 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilizates are extremely stable over a long period of time even at elevated temperatures.

Пример 6: Долгосрочная стабильность лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислоту (содержание индикатора стабильности 10-формил-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты)Example 6: Long-term stability of lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and dicarboxylic acid (10-formyl-(6R)-tetrahydrofolic acid stability indicator content)

Для определения долгосрочной стабильности лиофилизатов (6R)-5,10-CH₂-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты хранили на воздухе при +5°С, +25°С/60% относительной влажности и +40°С/75% относительной влажности. Содержание основного продукта разложения 10-формил-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты измеряли с помощью ВЭЖХ через периодические интервалы. Результаты представлены в Таблицах 3 и 4.To determine the long-term stability of the (6R)-5,10-CH ₂ -THF lyophilisates prepared according to Examples 1-4, the lyophilisates were stored in air at +5°C, +25°C/60% relative humidity and +40° C/75% RH. The content of the main degradation product 10-formyl-(6R)-tetrahydrofolic acid was measured by HPLC at periodic intervals. The results are presented in Tables 3 and 4.

Таблицы 3 и 4 подтверждают, что лиофилизаты 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ являются чрезвычайно стабильными в течение длительного периода времени даже при повышенных температурах.Tables 3 and 4 confirm that 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilizates are extremely stable over a long period of time even at elevated temperatures.

Не происходит ни плавления, ни коллапса во время процесса лиофилизации 5,10-CH₂-(6R)-ТГФ в соответствии с настоящим изобретении. Процесс прогоняют при температуре полки 30°С и давлении 200 мкбар. Экстенсивное сжатие осадка уменьшается, корка, демонстрирующая плотную структуру, образуется на верху лиофилизатов согласно настоящему изобретению. Необязательно, осуществляют отжиг в течение 1-2 часов при температурах приблизительно от -5°С до -2°С.Neither melting nor collapse occurs during the 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilization process according to the present invention. The process is run at a shelf temperature of 30°C and a pressure of 200 μbar. Extensive shrinkage of the sediment is reduced, a crust showing a dense structure is formed on top of the lyophilisates according to the present invention. Optionally, carry out annealing for 1-2 hours at temperatures from approximately -5°C to -2°C.

Пример 7: Стабильность восстановленных лиофилизатов, содержащих 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и дикарбоновую кислотуExample 7: Stability of reconstituted lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and dicarboxylic acid

Для определения стабильностей восстановленных лиофилизатов (6R)-5,10-CH₂-ТГФ, приготовленных в соответствии с Примерами 1-4, лиофилизаты, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту на флакон, повторно растворяли в 10 мл воды (время растворения). Через дополнительные 50 минут, измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Затем раствор охлаждали до -18°С и хранили в течение 12 дней при -18°С. После этого снова измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Флаконы снова нагревали вплоть до комнатной температуры и хранили в течение дополнительных 5 дней. После этого снова измеряли содержание 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Соответствующее сравнительные флаконы, содержащие 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и три-цитрат натрия, 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту и ацетат натрия, и только 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту (без дикарбоновой кислоты) обрабатывали и анализировали эквивалентно. Все результаты (измеренные с помощью ВЭЖХ) рассчитывали относительно исходного значения. Результаты представлены в Таблице 5.To determine the stability of the reconstituted (6R)-5,10-CH ₂ -THF lyophilisates prepared according to Examples 1-4, the lyophilisates containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid per vial were redissolved in 10 ml water (dissolution time). After an additional 50 minutes, the content of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid was measured. The solution was then cooled to -18°C and stored for 12 days at -18°C. After that, the content of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid was again measured. The vials were again warmed up to room temperature and stored for an additional 5 days. After that, the content of 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid was again measured. Corresponding comparative vials containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and sodium tri-citrate, 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid and sodium acetate, and 5,10-methylene-(6R) only α-tetrahydrofolic acid (without dicarboxylic acid) was processed and analyzed equivalently. All results (as measured by HPLC) were calculated relative to baseline. The results are presented in Table 5.

Таблица 5 подтверждает, что восстановленные лиофилизаты 5,10-СН₂-(6R)-ТГФ являются приемлемо стабильны в динамике, когда хранятся при низких температурах.Table 5 confirms that reconstituted 5,10-CH ₂ -(6R)-THF lyophilisates are reasonably stable over time when stored at low temperatures.

Claims

1. A stable lyophilisate for the treatment of malignant neoplasms containing 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a dicarboxylic acid or salt thereof, where the dicarboxylic acid is succinic, maleic, malic, tartaric, fumaric or oxalic acid.

2. A stable lyophilisate according to claim 1, having a chemical purity greater than 98% and a stereoisomeric purity greater than 99%.

3. Reconstituted product for the treatment of malignant neoplasms, obtained by dissolving the lyophilisate according to claim 1 in water or a liquid pharmaceutically acceptable excipient.

4. The reconstituted product of claim 3, wherein the water is sterile water for injection.

5. Refurbished product according to any one of paragraphs. 3 or 4 which further comprises a pharmaceutically acceptable carrier.

6. Refurbished product according to any one of paragraphs. 3-5, which further comprises an additional pharmaceutically acceptable chemotherapeutic active ingredient.

7. Refurbished product according to any one of paragraphs. 3-6, which further includes an aqueous base as a buffer.

8. A method for preparing a lyophilizate according to claim 1, which includes the steps:

(I) dissolving 5,10-methylene-(6R)-tetrahydrofolic acid, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in water containing a dicarboxylic acid selected from succinic, maleic, malic, tartaric, fumaric, or oxalic acid, or a salt thereof;

(II) freezing water; And

(III) subsequent removal of the frozen water under vacuum.

9. Method for preparing a lyophilisate according to claim 8, wherein NaOH is added in step (I).

10. The use of the reconstituted product according to any one of paragraphs. 3-7 for the treatment of malignancy.