RU2732880C1 - Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium - Google Patents
Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium Download PDFInfo
- Publication number
- RU2732880C1 RU2732880C1 RU2020115816A RU2020115816A RU2732880C1 RU 2732880 C1 RU2732880 C1 RU 2732880C1 RU 2020115816 A RU2020115816 A RU 2020115816A RU 2020115816 A RU2020115816 A RU 2020115816A RU 2732880 C1 RU2732880 C1 RU 2732880C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hydroxo
- germanate
- triethanolammonium
- tartrato
- bis
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O triethanolammonium Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 13
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 title claims abstract 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 abstract 1
- 102000006447 Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 14
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 14
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 9
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 9
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 3
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 3
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 3
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 3
- 125000000082 organogermanium group Chemical group 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- WHKUVVPPKQRRBV-UHFFFAOYSA-M 2-(4-chloro-2-methylphenoxy)acetate Chemical compound CC1=CC(Cl)=CC=C1OCC([O-])=O WHKUVVPPKQRRBV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 2
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 2
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016752 1-Alkyl-2-acetylglycerophosphocholine Esterase Human genes 0.000 description 1
- XTNOEYFQXCQKLC-UHFFFAOYSA-N 18-(oxiren-2-yl)octadeca-15,17-dienoic acid Chemical compound C1=C(C=CC=CCCCCCCCCCCCCCC(=O)O)O1 XTNOEYFQXCQKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVUQWNIWFSWLIY-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxyicosa-2,4,6-trienoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC=CC=CC(O)=C(O)C(O)=O AVUQWNIWFSWLIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNRNYORZJGVOSY-UHFFFAOYSA-N 2,5-diphenyl-1,3-oxazole Chemical compound C=1N=C(C=2C=CC=CC=2)OC=1C1=CC=CC=C1 CNRNYORZJGVOSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNDIXBJHNLFJJP-UHFFFAOYSA-N 20-Hydroxyeicosatetraenoic acid Chemical compound OCCCCCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O NNDIXBJHNLFJJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000640990 Arabidopsis thaliana Tryptophan-tRNA ligase, chloroplastic/mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100031375 Endothelial lipase Human genes 0.000 description 1
- 101710087274 Endothelial lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 101001038001 Homo sapiens Lysophosphatidic acid receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102100040387 Lysophosphatidic acid receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 208000004224 Opium Dependence Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000005473 Secretory Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010031873 Secretory Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002501 Tryptophan-tRNA Ligase Human genes 0.000 description 1
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 208000037884 allergic airway inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Substances C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 230000007885 bronchoconstriction Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000497 foam cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002291 germanium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010071584 oxidized low density lipoprotein Proteins 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000000822 sequential centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- XZNXVSDNACTASG-RZNNTOFGSA-M sodium;3,5-diacetamido-2,4,6-triiodobenzoate;3,5-diacetamido-2,4,6-triiodobenzoic acid;(2r,3r,4r,5s)-6-(methylamino)hexane-1,2,3,4,5-pentol Chemical compound [Na+].CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(O)=O)=C1I.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I XZNXVSDNACTASG-RZNNTOFGSA-M 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012976 tarts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003595 thromboxanes Chemical class 0.000 description 1
- 238000013520 translational research Methods 0.000 description 1
- 210000004026 tunica intima Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/205—Amine addition salts of organic acids; Inner quaternary ammonium salts, e.g. betaine, carnitine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биохимии германийорганических соединений и касается биологически активного вещества бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония формулы [(HOCH2CH2)3NH+]2[Ge2(µ-Tart)2(µ-OH)2]2- (соединение I, вигетан), где Tart – остаток винной кислоты -OC(O)CH(O-)CH(O-)C(O)O-. Изобретение также относится к медицине, фармакологии и биологии и, конкретно, может быть использовано, например, для повышения устойчивости сосудистой системы к холестерину при развитии атеросклеротического процесса.The invention relates to the biochemistry of organogermanium compounds and concerns a biologically active substance bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium of the formula [(HOCH 2 CH 2 ) 3 NH + ] 2 [Ge 2 (µ-Tart) 2 (µ-OH) 2 ] 2- (compound I, vigetan), where Tart is the tartaric acid residue —OC (O) CH (O-) CH (O-) C (O) O-. The invention also relates to medicine, pharmacology and biology and, specifically, can be used, for example, to increase the resistance of the vascular system to cholesterol during the development of an atherosclerotic process.
В последнее время доказано участие в атерогенезе лизосомальных липолитических ферментов, ответственных за деградацию липидных компонентов липопротеидов (ЛП). Определено их участие в механизме нарушений обмена липидов и ЛП при атеросклерозе, выявлена взаимосвязь между степенью изменений их активности в мононуклеарах крови, уровнем липидов крови и коэффициентом атерогенности [см.Серебров В.Ю., Балашов П.П., Шарыпова Н.Г. Исследование активности фосфолипаз плазматических мембран лимфоцитов при абстинентном синдроме у больных опийной наркоманией: // Сб. науч. трудов Сиб. Мед. Универ. (Томск). Актуальные проблемы биологии; - 2004. - Т. 3. - С. 209; Mallat Z, Benessiano J, Simon T, et all. Circulating secretory phospholipase A2 activity and risk of incident coronary events in healthy men and women: The EPIC-NORFOLK Study. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2007; - V. 27: - P.1177-83]. Recently, the participation in atherogenesis of lysosomal lipolytic enzymes responsible for the degradation of lipid components of lipoproteins (LP) has been proven. Their participation in the mechanism of lipid and drug metabolism disorders in atherosclerosis was determined, the relationship between the degree of changes in their activity in blood mononuclear cells, the level of blood lipids and the coefficient of atherogenicity was revealed [see Serebrov V.Yu., Balashov P.P., Sharypova N.G. Study of the activity of phospholipases of plasma membranes of lymphocytes in withdrawal symptoms in patients with opium addiction: // Coll. scientific. Proceedings of Sib. Honey. University. (Tomsk). Actual problems of biology; - 2004. - T. 3. - S. 209; Mallat Z, Benessiano J, Simon T, et all. Circulating secretory phospholipase A2 activity and risk of incident coronary events in healthy men and women: The EPIC-NORFOLK Study. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2007; - V. 27: - P.1177-83].
Развитие атеросклероза связано с патологическими процессами в эндотелии сосудов. На раннем этапе атерогенеза активируется эндотелий, который экспрессирует на своей поверхности адгезионные молекулы для моноцитов (Мц), нейтрофилов и лейкоцитов крови и продуцирует хемоаттрактанты, привлекающие Мц в интиму сосудов. Мц, мигрирующие в субэндотелиальное пространство, дифференцируются в макрофаги, которые выступают как катализаторы образования окисленных липопротеидов низкой плотности (ЛНП), миграции и пролиферации гладкомышечных клеток из мышечной оболочки в интиму. Частицы модифицированных ЛНП захватываются макрофагами, которые трансформируются в пенистые клетки. Активированные макрофаги, продуцирующие металлопротеиназы и коллагеназу, способствуют распаду коллагена в бляшке и возникновению разрыва бляшки, образованию тромба и развитию инфаркта миокарда. Следовательно, макрофаги играют ключевую роль в развитии атеросклеротических повреждений [см. Душкин М.И. Макрофаги и атеросклероз: патофизиологические и терапевтические аспекты // Бюлл. СО РАМН (2006); №2 (120), с. 47-55]. В этом плане заслуживают внимания исследования средств, изменяющих активность гидролаз моноцитов, в частности фосфолипазы А2 (ФЛА2) (КФ 3.1.1.14) – лизосомального липолитического фермента класса гидролаз, имеющего оптимум действия при щелочных значениях рН, участвующего в атерогенезе, что обусловлено его участием в метаболизме липидов клеточных мембран, процессах перекисного окисления липидов (ПОЛ), синтезе эйкозаноидов и др. [см. Ji Huang, Hai-Yan Qian, Zhi-Zhong Li,. et all. Role of endothelial lipase in atherosclerosis // Translational Research, - 2010, vol. 156, Issue 1. - P. 1-6; Бельков В.В. С-реактивный белок и липопротеин-ассоциированная фосфолипаза А2: новые факты и новые возможности для диагностики и стратификации сердечно-сосудистых рисков // Ж. «Поликлиника» - 2010 - №1. - С. 18-21]. Следовательно, изменение активности ФЛА2 под влиянием тех или иных средств может служить критерием эффективности антиатеросклеротических препаратов. При этом существует потребность в поиске и внедрении в практику новых диагностических и лекарственных средств, обладающих указанной активностью.The development of atherosclerosis is associated with pathological processes in the vascular endothelium. At the early stage of atherogenesis, the endothelium is activated, which expresses on its surface adhesion molecules for monocytes (MC), neutrophils and blood leukocytes and produces chemoattractants that attract MC to the vascular intima. MCs that migrate into the subendothelial space differentiate into macrophages, which act as catalysts for the formation of oxidized low density lipoproteins (LDL), migration and proliferation of smooth muscle cells from the muscle membrane into the intima. Particles of modified LDL are captured by macrophages, which transform into foam cells. Activated macrophages that produce metalloproteinases and collagenase contribute to the breakdown of collagen in the plaque and the occurrence of plaque rupture, thrombus formation and the development of myocardial infarction. Therefore, macrophages play a key role in the development of atherosclerotic lesions [see. Dushkin M.I. Macrophages and atherosclerosis: pathophysiological and therapeutic aspects // Byull. SB RAMS (2006); No. 2 (120), p. 47-55]. In this regard, studies of agents that change the activity of monocyte hydrolases deserve attention, in particular phospholipase A2 (PLA2) (EC 3.1.1.14), a lysosomal lipolytic enzyme of the hydrolase class that has an optimum action at alkaline pH values involved in atherogenesis, due to its participation in metabolism of lipids of cell membranes, processes of lipid peroxidation (LPO), synthesis of eicosanoids, etc. [see. Ji Huang, Hai-Yan Qian, Zhi-Zhong Li ,. et all. Role of endothelial lipase in atherosclerosis // Translational Research, - 2010, vol. 156, Issue 1. - P. 1-6; Belkov V.V. C-reactive protein and lipoprotein-associated phospholipase A2: new facts and new opportunities for the diagnosis and stratification of cardiovascular risks // J. "Polyclinic" - 2010 - №1. - S. 18-21]. Consequently, the change in the activity of PLA2 under the influence of various agents can serve as a criterion for the effectiveness of antiatherosclerotic drugs. At the same time, there is a need for the search and introduction into practice of new diagnostic and medicinal products with the indicated activity.
Известно, что некоторые германийорганические соединения обладают адаптогенным действием [cм. Жигачёва И.В., Бинюков В.И., Миль Е.М., Генерозова И.П., Расулов М.М. Влияние германийорганического соединения на функциональное состояние митохондрий растительного и животного происхождения // Научный альманах (Биологические науки)2015,N 7(9), 955-966]. Органические соединения германия обладают биологической активностью (см. кн. - Лукевиц Э.Я. и др. Биологическая активность соединений германия. Рига: Зинатне, 1990, стр. 981). Содержащие германий органические полимеры эффективны при лечении психоневрологических нарушений (патент США 4281015, 1981 г., МПК А61К 31/28), офтальмологических расстройств (патент США 4296123, 1981 г., МПК А61К 31/28), нарушений функций печени (патент США 4309412, 1982 г., МПК А61К 31/74), фиброза легких (патент США 4321273, 1982 г., МПК А61К 31/28), аллергических заболеваний (патент США 4322402, 1982 г., МПК А61К 31/74) и гепатита (патент США 5340806, 1994 г., МПК А61К 31/79). Также они способствуют выработке интерферона в организме (патент США 4473581, 1984 г., МПК А61К 31/28) и защищают его от простуды (патент США 4898882, 1990 г., МПК А61К 31/28). Моногидрат 1-гидроксигерматрана обладает цитокинной активностью в отношении триптофанил-тРНК синтетазы (патент РФ № 2553986, 2015 г., МПК А61К 31/205).It is known that some organogermanium compounds have adaptogenic effects [see. Zhigacheva I.V., Binyukov V.I., Mil E.M., Generozova I.P., Rasulov M.M. The effect of organogermanium compounds on the functional state of mitochondria of plant and animal origin // Scientific almanac (Biological sciences) 2015, N 7 (9), 955-966]. Organic compounds of germanium have biological activity (see the book. - Lukewitz E.Ya. et al. Biological activity of germanium compounds. Riga: Zinatne, 1990, p. 981). Organic polymers containing germanium are effective in the treatment of neuropsychiatric disorders (US patent 4281015, 1981, IPC A61K 31/28), ophthalmic disorders (US patent 4296123, 1981, IPC A61K 31/28), liver dysfunctions (US patent 4309412 , 1982, IPC A61K 31/74), pulmonary fibrosis (US patent 4321273, 1982, IPC A61K 31/28), allergic diseases (US patent 4322402, 1982, IPC A61K 31/74) and hepatitis ( US patent 5340806, 1994, IPC A61K 31/79). They also promote the production of interferon in the body (US patent 4473581, 1984, IPC A61K 31/28) and protect it from colds (US patent 4898882, 1990, IPC A61K 31/28). 1-hydroxygermatran monohydrate has cytokine activity against tryptophanyl-tRNA synthetase (RF patent No. 2553986, 2015, IPC A61K 31/205).
В настоящее время существует необходимость поиска новых эффективных препаратов, обеспечивающих торможение атерогенеза. Currently, there is a need to search for new effective drugs that inhibit atherogenesis.
В качестве средства, понижающего общую активность основной (щелочной) фосфолипазы А2, предлагается использовать синтезированное ранее [см. Воронков М.Г., Адамович С.Н., Мирсков Р.Г., Мирскова А.Н. Синтез новых биологически активных О-гидрометаллоатранов // ЖОХ, 2009, т. 79, №1, С. 162-163] биологически активное соединение – бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германат (IV) триэтаноламмония, который имеет формулу: As a means of lowering the total activity of the basic (alkaline) phospholipase A2, it is proposed to use the previously synthesized [see. Voronkov M.G., Adamovich S.N., Mirskov R.G., Mirskova A.N. Synthesis of new biologically active O-hydrometalloatranes // ZhOKh, 2009, v. 79, No. 1, P. 162-163] biologically active compound - bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium, which has formula:
[(HOCH2CH2)3NH+]2[Ge2(μ-Tart)2(μ-OH)2]2- (соединение I), где Tart – остаток винной кислоты -OC(O)CH(O-)CH(O-)C(O)O-. Это соединение (далее – вигетан) имеет следующий вид:[(HOCH 2 CH 2 ) 3 NH + ] 2 [Ge 2 (μ-Tart) 2 (μ-OH) 2 ] 2- (compound I), where Tart is the tartaric acid residue -OC (O) CH (O- ) CH (O-) C (O) O-. This compound (hereinafter - vigetan) has the following form:
В качестве ближайшего аналога может быть указан источник: М.И. Яхкинд, М.Г. Воронков, М.И. Сусова, М.К. Нурбеков, М.М. Расулов, К.А. Абзаева, Р.М.Расулов. Применение протатран 4-хлор-2-метил-феноксиацетата для угнетения суммарной активности основной (щелочной) фосфолипазы А2 мононуклеаров // Патент на изобретение RU №2619860 от 15.04.2016. The source can be indicated as the closest analogue: M.I. Yakhkind, M.G. Voronkov, M.I. Susova, M.K. Nurbekov, M.M. Rasulov, K.A. Abzaeva, R.M. Rasulov. The use of protatran 4-chloro-2-methyl-phenoxyacetate for inhibition of the total activity of the main (alkaline) phospholipase A2 of mononuclear cells // Invention patent RU No. 2619860 dated 15.04.2016.
Хлоркрезацин (аналог) или: протатран 4-хлор-2-метилфеноксиацетат, имеет формулу: Chlorocresacin (analog) or: protatran 4-chloro-2-methylphenoxyacetate, has the formula:
и вид:and view:
Задачей изобретения является разработка нового средства, которое возможно применить для понижения общей активности основной фосфолипазы А2 мононуклеаров.The objective of the invention is to develop a new agent that can be used to reduce the overall activity of the main phospholipase A2 of mononuclear cells.
Технический результат – расширение арсенала способов воздействия на активность основной (щелочной) фосфолипазы А2 мононуклеаров путем применения средства – бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония, за счет его новой выявленной биологической активности, а именно, способности снижать суммарную активность основной (щелочной) фосфолипазы А2 мононуклеаров.The technical result is an expansion of the arsenal of methods for influencing the activity of the main (alkaline) phospholipase A2 of mononuclear cells by using the agent - bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium, due to its newly identified biological activity, namely, the ability reduce the total activity of the basic (alkaline) phospholipase A 2 of mononuclear cells.
Предлагается способ угнетения суммарной активности основной (щелочной) фосфолипазы А2 мононуклеаров, включающий введение композиции, которая содержит в качестве активного вещества бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германат (IV) триэтаноламмония, а также фармацевтически приемлемый водный носитель, экспериментальному животному внутримышечно ежедневно в течение 2 месяцев в дозе активного вещества 10 мг/кг массы животного. A method for inhibition of the total activity of the main (alkaline) phospholipase A2 of mononuclear cells is proposed, including the introduction of a composition that contains bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium as an active substance, as well as a pharmaceutically acceptable aqueous carrier, to an experimental animal intramuscularly daily for 2 months at a dose of the active substance 10 mg / kg of animal weight.
При этом в качестве фармацевтически приемлемого водного носителя предлагается использование официальной дистиллированной воды, воды для инъекций или официального физиологического раствора – 0,9% раствора натрия хлорида.In this case, the use of official distilled water, water for injection or an official physiological solution - 0.9% sodium chloride solution is proposed as a pharmaceutically acceptable aqueous carrier.
При этом раствор готовится «ex tempore» и может содержать 5-20 мас.% бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония.The solution is prepared "ex tempore" and may contain 5-20 wt.% Bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium.
Заявляемая биологическая активность бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония ранее не была известна. The claimed biological activity of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium was not previously known.
Свойство бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония снижать общую (суммарную) активность основной (щелочной) фосфолипазы A2 в литературе не описано.The property of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium to reduce the total (total) activity of the basic (alkaline) phospholipase A2 has not been described in the literature.
Использование бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония по новому назначению стало возможным благодаря выявленным нами его новым свойствам.The use of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium for a new purpose became possible due to its new properties revealed by us.
Впервые показано, что введение бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония снижает активность лизосомального липолитического фермента из класса гидролаз (КФ 3.1.1): щелочной ФЛА2.It was shown for the first time that the introduction of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium reduces the activity of a lysosomal lipolytic enzyme from the class of hydrolases (EC 3.1.1): alkaline PLA 2 .
Заявляемое изобретение относится к приоритетному направлению развития науки и технологий «Биомедицинские и ветеринарные технологии жизнеобеспечения и защиты человека и животных» [см. Алфавитно-предметный указатель к Международной патентной классификации по приоритетным направлениям развития науки и технологий / Ю.Г. Смирнов, Е.В. Скиданова, С.А. Краснов – М.: ПАТЕНТ, 2008. – с.15].The claimed invention relates to the priority direction of development of science and technology "Biomedical and veterinary technologies for life support and protection of humans and animals" [see. Alphanumeric Index to the International Patent Classification in Priority Areas of Science and Technology Development / Yu.G. Smirnov, E.V. Skidanova, S.A. Krasnov - M .: PATENT, 2008. - p. 15].
При разработке изобретения авторы использовали различные растворители для получения средства для воздействия на активность основной (щелочной) ФЛА2 мононуклеаров. Были испытаны различные растворы на водной основе, в частности раствор вышеуказанного активного вещества в воде для инъекций и в официальном 0,9% растворе натрия хлорида. При этом в том и в другом случае были получены аналогичные результаты. Следует отметить, что нами исследовались полученные таким образом растворы с различной концентрацией активного вещества – бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония (5%, 10%, 20%, 50%, 70%). При этом положительные эффекты от их использования, отмеченные ниже, значимо не различались. В исследованиях использовали различные дозы активного вещества: от 0,1 мг/кг до 20 мг/кг массы животного. Эффект угнетения активности фермента ФЛА2 присутствовал во всех случаях и был прямо пропорционален дозе используемого активного вещества. Соответственно, для достижения указанного нами технического результата важным является как таковое новое свойство данного соединения, а не его доза. Поэтому ниже, в примере, приведен для демонстрации только опыт с использованием активного вещества в дозе 10 мг/кг ежедневно. В данном случае применяли раствор активного вещества, который приготовляли ex tempore, используя воду для инъекций, смешивая с нею активное вещество. When developing the invention, the authors used various solvents to obtain a tool for influencing the activity of basic (alkaline) PLA2 mononuclear cells. Various water-based solutions were tested, in particular a solution of the above active substance in water for injection and in an official 0.9% sodium chloride solution. Moreover, in both cases, similar results were obtained. It should be noted that we studied the solutions obtained in this way with different concentrations of the active substance - bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium (5%, 10%, 20%, 50%, 70%). At the same time, the positive effects from their use, noted below, did not differ significantly. The studies used various doses of the active substance: from 0.1 mg / kg to 20 mg / kg of animal weight. The effect of inhibiting the activity of the PLA2 enzyme was present in all cases and was directly proportional to the dose of the active substance used. Accordingly, in order to achieve the technical result indicated by us, it is important as such a new property of this compound, and not its dose. Therefore, in the example below, only the experiment using the active substance at a dose of 10 mg / kg daily is given for demonstration. In this case, a solution of the active substance was used, which was prepared ex tempore using water for injection, mixing the active substance with it.
Возможность осуществления изобретения может быть проиллюстрирована следующим примером.The possibility of carrying out the invention can be illustrated by the following example.
Пример.Example.
Исследование проводили на кроликах Шиншилла с исходной массой 1,8-2,0 кг в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации». Правила утверждены приказом Министерства здравоохранения РФ от 19.06.2003 г №267 (Правила лабораторной практики в Российской Федерации Министерства здравоохранения РФ Приказ от 19 июня 2003 года № 267 http://www.kodeks.ru (24 апреля 2010г)). Животных содержали в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемыми для экспериментальных и иных научных целей. По окончании эксперимента животным проводили эвтаназию цервикальной дислокацией 5 позвонка, соблюдая правила «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986). The study was carried out on Chinchilla rabbits with an initial weight of 1.8-2.0 kg in accordance with the “Rules of laboratory practice in the Russian Federation”. The rules are approved by order of the Ministry of Health of the Russian Federation dated June 19, 2003 No. 267 (Rules of laboratory practice in the Russian Federation of the Ministry of Health of the Russian Federation, Order No. 267 dated June 19, 2003 http://www.kodeks.ru (April 24, 2010)). The animals were kept in accordance with the rules of the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for experimental and other scientific purposes. At the end of the experiment, the animals were euthanized by cervical dislocation of the 5th vertebra, observing the rules of the "European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes" (Strasbourg, 1986).
Гиперлипидемию у кроликов вызывали методом Аничкова-Халатова. Hyperlipidemia in rabbits was induced by the Anichkov-Khalatov method.
Испытуемые вещества для инъекций растворяли «ex tempore» в официальной дистиллированной воде, воде для инъекций.The test substances for injection were dissolved "ex tempore" in official distilled water, water for injection.
Кроликов разделяли на следующие группы (по 10 голов):The rabbits were divided into the following groups (10 heads each):
1) группа опыта, которым вводили внутримышечно ежедневно свежеприготовленный водный раствор бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония (вигетана), доза активного вещества 10 мг/кг веса животного, в течение 2 месяцев.1) a group of experiment, which was injected intramuscularly daily with a freshly prepared aqueous solution of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium (vigetan), a dose of the active substance 10 mg / kg of animal weight, for 2 months.
2) группа плацебо – контроля, которым вводили внутримышечно ежедневно эквиобъёмное количество официального 0,9% раствора натрия хлорида в течение 2 месяцев.2) a placebo-control group, which was injected intramuscularly daily with an equal volume of the official 0.9% sodium chloride solution for 2 months.
3) группа, получавшие внутримышечно свежеприготовленный водный раствор аналога – хлоркрезацина в дозе 10 мг/кг в течение 2 месяцев.3) a group that received intramuscularly a freshly prepared aqueous solution of an analogue - chlorocresacin at a dose of 10 mg / kg for 2 months.
Эталоном служили данные, полученные у интактных кроликов.The reference was the data obtained from intact rabbits.
В конце экспериментов в крови животных стандартными методами определяли содержание липидов, триацилглицеринов, β-липопротеинов и холестерина.At the end of the experiments, the content of lipids, triacylglycerols, β-lipoproteins, and cholesterol was determined in the blood of animals by standard methods.
Мононуклеары (моноциты – Мц) выделяли из крови путем последовательного центрифугирования в градиенте фикол-верографин [см. Gmelig - Meyling F., Waldman T.A. Separation of human blood monocytes and lymphocytes on a continuous percoll gradient // J. Immunol. Method. - 1980. -Vol. 26. - P. 603-308. Гепаринизированную кровь разводили 0,9% официальным раствором натрия хлорида в соотношении 1:1 и осторожно наслаивали раствор фикола с 76% верографином, центрифугировали 45 мин. После центрифугирования отбирали Мц и вновь центрифугировали их 30 мин при 1200 g. Полученные в виде осадка Мц троекратно отмывали физиологическим раствором в соотношении 5:1 центрифугируя по 10 мин при 1200 g. Осадок гомогенизировали в 2 мл 0,25М раствора сахарозы pH 7,4 с 0,001М ЭДТА. Активность ФЛА2 определяли радиометрическим методом [см. Stoffel. W., Trabert. U. Studies on the occerence and proparties of lisosomal phospholipases Al and A2 and the degradation of posphatidie acid in rat liver lysosomes // Hoppe-Seyler's Z. Fhysiol. Chem. - 1969. - Bd/ 350. - S. 836-844] с использованием в качестве субстрата синтезированного ранее 1-ацил-2(13-Н) арахидоноил-глицеро-3sn-фосфорилхолина [см. Robertson A.F., Lends W.E.M. Positional specificities in phospholipid hydrolises // Biochemistry (Wash.). - 1962. - Vol.1. - P. 804-810]. Инкубационная смесь содержала 150 нмолей меченого лецитина, 8 ммоль CaCl2 при pH 8,0 и источник ферментов (исследуемые Мц) в конечном объеме 1,3 мл. Инкубацию проводили на водяной вибробане в течение 30 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 3 мл смеси хлороформ: метанол (1:2 об/об) и немедленно экстрагировали по методу Клайера и Дайера. Продукты реакции разделяли тонкослойной хроматографией в закрепленном слое силикагеля («Chemapol») на стеклянных пластинах размером 20×20 см в системе растворителей хлороформ: метанол:вода (65:25:4). Фракции лизолецитина, лецитина и жирных кислот экстрагировали смесью хлороформ:метанол (1:2 об/об). Экстракты помещали во флаконы с 10 мл сцинциляционной жидкости, содержащей в 100 мл толуола особой чистоты 5 г 2,5-дифенилоксазола и 300 мг 1,4-бис-(5-фенилоксазолил-2)-бензола. Радиоактивность измеряли на сцинцилляционном счетчике «Rackbeta 1215» ЛКБ (Швеция). Об активности ФЛА2 судили по образованию меченой жирной кислоты, получившейся в результате воздействия этих ферментов на 1-ацил-2(13-H)-арахидонил-глицеро-3sn-фосфорилхолин.Mononuclear cells (monocytes - MC) were isolated from blood by sequential centrifugation in a ficol-verographin gradient [see. Gmelig - Meyling F., Waldman TA Separation of human blood monocytes and lymphocytes on a continuous percoll gradient // J. Immunol. Method. - 1980. -Vol. 26. - P. 603-308. Heparinized blood was diluted with 0.9% official sodium chloride solution in a 1: 1 ratio, and the ficoll solution with 76% verografin was carefully layered, and centrifuged for 45 min. After centrifugation, MC was taken and centrifuged again for 30 min at 1200 g. The MC obtained in the form of a precipitate was washed three times with saline in a 5: 1 ratio by centrifugation for 10 min at 1200 g. The precipitate was homogenized in 2 ml of 0.25M sucrose solution pH 7.4 with 0.001M EDTA. The PLA2 activity was determined by the radiometric method [see. Stoffel. W., Trabert. U. Studies on the occerence and proparties of lisosomal phospholipases Al and A2 and the degradation of posphatidie acid in rat liver lysosomes // Hoppe-Seyler's Z. Fhysiol. Chem. - 1969. - Bd / 350. - S. 836-844] using as a substrate previously synthesized 1-acyl-2 (13-H) arachidonoyl-glycero-3sn-phosphorylcholine [see. Robertson AF, Lends WEM Positional specificities in phospholipid hydrolises // Biochemistry (Wash.). - 1962. - Vol.1. - P. 804-810]. The incubation mixture contained 150 nmol of labeled lecithin, 8 mmol of CaCl 2 at pH 8.0, and a source of enzymes (studied MC) in a final volume of 1.3 ml. The incubation was carried out on a water vibrator for 30 min at 37 ° C. The reaction was stopped by adding 3 ml of a mixture of chloroform: methanol (1: 2 v / v) and immediately extracted by the method of Klayer and Dyer. The reaction products were separated by thin layer chromatography in a fixed layer of silica gel (Chemapol) on glass plates 20 × 20 cm in size in a solvent system chloroform: methanol: water (65: 25: 4). Fractions of lysolecithin, lecithin and fatty acids were extracted with a mixture of chloroform: methanol (1: 2 v / v). The extracts were placed in vials with 10 ml of scintillation fluid containing 5 g of 2,5-diphenyloxazole and 300 mg of 1,4-bis- (5-phenyloxazolyl-2) -benzene in 100 ml of high purity toluene. Radioactivity was measured on a scintillation counter "Rackbeta 1215" LKB (Sweden). The PLA2 activity was judged by the formation of a labeled fatty acid resulting from the action of these enzymes on 1-acyl-2 (13-H) -arachidonyl-glycero-3sn-phosphorylcholine.
Активность ФЛА2 выражали в микромолях образовавшихся продуктов в минуту на 1 г белка.The PLA2 activity was expressed in micromoles of the formed products per minute per 1 g of protein.
Статистическую обработку данных проводили методом Стьюдента. Данные представляли в виде средних и стандартных значений ошибки – М и m, соответственно. Достоверными считали различия при р ≤ 0,05 (см. Петри А., Сэбин К., 2009].The data were statistically processed by the Student's method. Data were presented as mean and standard error values - M and m, respectively. Differences were considered significant at p ≤ 0.05 (see A. Petri, K. Sabin, 2009].
Результаты.Results.
При применении бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония (вигетана) в Мц снижается уровень холестерола и общих липидов (таблица 1).When bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium (vigetan) is used in MC, the level of cholesterol and total lipids decreases (table 1).
Результаты ферментативного анализа, представленные в таблице 2, свидетельствуют, что развитие атеросклероза сопровождается значительным увеличением суммарной активности ФЛА2 в Мц по сравнению с эталоном. При введении бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония достоверно снижается активность ФЛА2 в Мн по сравнению с контролем, как и при применении аналога – хлоркрезацина.The results of the enzymatic analysis, presented in Table 2, indicate that the development of atherosclerosis is accompanied by a significant increase in the total activity of PLA 2 in MC as compared to the reference. With the introduction of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium, the activity of PLA 2 in Mn significantly decreases in comparison with the control, as with the use of an analogue, chlorocresacin.
Активацию лизосомального липолиза можно рассматривать как компенсаторную реакцию ферментных систем на фоне преобладания неспецифического нерегулируемого эндоцитоза модифицированных ЛНП или надмолекулярных ЛНП-содержащих комплексов. При этом в условиях субстратного насыщения может возникнуть относительная недостаточность отдельных лизосомальных ферментов, в частности ФЛА2. ФЛА2 секретируется в виде профермента и для ее активации требуется гидролиз специфических пептидных связей. Для проявления каталитической активности ФЛА2 необходим Ca2+ в миллимолярных концентрациях. ФЛА2 имеют ключевое значение в продукции провоспалительных медиаторов – арахидоновой кислоты (АрК) и эйкозаноидов. Все метаболиты АрК называются эйкозаноидами. АрК образуется из фосфолипидов мембраны клеток (лейкоциты, тромбоциты).The activation of lysosomal lipolysis can be considered as a compensatory reaction of enzyme systems against the background of the prevalence of nonspecific unregulated endocytosis of modified LDL or supramolecular LDL-containing complexes. In this case, under conditions of substrate saturation, a relative deficiency of certain lysosomal enzymes, in particular PLA2, may occur. PLA2 is secreted as a proenzyme, and its activation requires hydrolysis of specific peptide bonds. For the manifestation of the catalytic activity of PLA2, Ca 2+ is required in millimolar concentrations. PLA2 are of key importance in the production of pro-inflammatory mediators - arachidonic acid (ARA) and eicosanoids. All of the ArC metabolites are called eicosanoids. ArK is formed from phospholipids of the cell membrane (leukocytes, platelets).
Существует два основных пути метаболизма АрК – циклоксигеназный и липоксигеназный. Конечными продуктами циклоксигеназного пути являются простагландины и тромбоксаны, а липоксигеназного – гидроксиэйкозатетраеновая кислота и лейкотриены. Помимо циклооксигеназы и липоксигеназы, выявлен третий фермент – эпоксигеназа, который окисляет АрК в эпоксиэйкозатриеновую кислоту и дигидроксиэйкозатриеновую кислоту. Высвобождение АрК происходит преимущественно через активацию ФЛА2, а фосфатидилхолин является первичным субстратом. ФЛА2 принимает участие в многочисленных физиологических процессах, включая иммунные реакции, воспаление, пролиферацию, вазо- и бронхоконстрикцию [см. Zhao Y, Tong J, Не D, et all. Role of lysophosphatidic acid receptor LPA2 in the development of allergic airway inflammation in a murine model of asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2009. - Nov. 20, - p. 10-11].There are two main pathways of ARK metabolism - cyclooxygenase and lipoxygenase. The end products of the cycloxygenase pathway are prostaglandins and thromboxanes, and of the lipoxygenase pathway, hydroxyeicosatetraenoic acid and leukotrienes. In addition to cyclooxygenase and lipoxygenase, a third enzyme, epoxygenase, has been identified, which oxidizes ArA to epoxyeicosatrienoic acid and dihydroxyeicosatrienoic acid. ArK is released mainly through the activation of PLA 2 , and phosphatidylcholine is the primary substrate. PLA 2 is involved in numerous physiological processes, including immune responses, inflammation, proliferation, vasoconstriction and bronchoconstriction [see. Zhao Y, Tong J, Not D, et all. Role of lysophosphatidic acid receptor LPA2 in the development of allergic airway inflammation in a murine model of asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2009. - Nov. 20, - p. 10-11].
Таким образом, применение химического соединения - бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония в водном растворе приводит к достоверному снижению общей активности основной (щелочной) фосфолипазы А2 мононуклеаров.Thus, the use of the chemical compound bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium in an aqueous solution leads to a significant decrease in the total activity of the basic (alkaline) phospholipase A2 of mononuclear cells.
Изобретение позволит создать на основе бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония новые фармакологические препараты для предотвращения нарушений липидного обмена.The invention will make it possible to create new pharmacological preparations based on bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium for the prevention of lipid metabolism disorders.
Таблица 1. Table 1.
Показатели липидного обмена у кроликов при применении водного раствора бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмония Lipid metabolism indicators in rabbits when using an aqueous solution of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium
Примечание: * - p<0.05 по отношению к контролю;Note: * - p <0.05 in relation to control;
** - p<0.05 по отношению к эталону.** - p <0.05 in relation to the standard.
Таблица 2. Table 2.
Активность ФЛА2 в моноцитах кроликов (мкмоль/мин на 1 г белка) при применении водного раствора бис(μ-тартрато)ди(μ-гидроксо) германата (IV) триэтаноламмонияPLA2 activity in rabbit monocytes (μmol / min per 1 g of protein) using an aqueous solution of bis (μ-tartrato) di (μ-hydroxo) germanate (IV) triethanolammonium
Примечание: * - p<0.05 по отношению к контролю;Note: * - p <0.05 in relation to control;
** - p<0.05 по отношению к эталону.** - p <0.05 in relation to the standard.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020115816A RU2732880C1 (en) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020115816A RU2732880C1 (en) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2732880C1 true RU2732880C1 (en) | 2020-09-24 |
Family
ID=72916467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020115816A RU2732880C1 (en) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2732880C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5039706A (en) * | 1987-11-30 | 1991-08-13 | Du Pont Merck Pharmaceutical Company | Antiinflammatory PLA2 inhibitors |
| US20020035060A1 (en) * | 1995-03-07 | 2002-03-21 | Steven R. Patierno | Pharmaceutical compositions, methods, and kits for treatment and diagnosis of lung cancer |
| RU2619860C1 (en) * | 2016-04-15 | 2017-05-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук | APPLICATION OF PROTATRAN 4-CHLORO-2-METHYLPHENOXYACETATE FOR EXHAUSTING OF MONONUCLEAR CELLS BASIC (ALKALINE) PHOSPHOLIPASE a2 TOTAL ACTIVITY |
| RU2661616C2 (en) * | 2016-05-11 | 2018-07-17 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Иркутский национальный исследовательский технический университет" (ФГБОУ ВО "ИРНИТУ") | BIS(µ-TARTRATO)DI(µ-HYDROXO)GERMANATE(IV) TRIETHANOLAMMONIUM INCREASING THE STATIC AND DYNAMIC PERFORMANCE |
-
2020
- 2020-05-14 RU RU2020115816A patent/RU2732880C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5039706A (en) * | 1987-11-30 | 1991-08-13 | Du Pont Merck Pharmaceutical Company | Antiinflammatory PLA2 inhibitors |
| US20020035060A1 (en) * | 1995-03-07 | 2002-03-21 | Steven R. Patierno | Pharmaceutical compositions, methods, and kits for treatment and diagnosis of lung cancer |
| RU2619860C1 (en) * | 2016-04-15 | 2017-05-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук | APPLICATION OF PROTATRAN 4-CHLORO-2-METHYLPHENOXYACETATE FOR EXHAUSTING OF MONONUCLEAR CELLS BASIC (ALKALINE) PHOSPHOLIPASE a2 TOTAL ACTIVITY |
| RU2661616C2 (en) * | 2016-05-11 | 2018-07-17 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Иркутский национальный исследовательский технический университет" (ФГБОУ ВО "ИРНИТУ") | BIS(µ-TARTRATO)DI(µ-HYDROXO)GERMANATE(IV) TRIETHANOLAMMONIUM INCREASING THE STATIC AND DYNAMIC PERFORMANCE |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| KIM Y-S., et al., Effect of cytosolic phospholipase A2 on proinflammatory cytokine-induced bone resorptive genes including receptor activator of nuclear factor kappa B ligand in human dental pulp cells. J Endod. 2010 Apr;36(4):636-41.doi: 10.1016/j.joen. 2009.12.009. * |
| KIM Y-S., et al., Effect of cytosolic phospholipase A2on proinflammatory cytokine-induced bone resorptive genes including receptor activatorof nuclear factor kappa B ligand in human dental pulp cells. J Endod. 2010 Apr;36(4):636-41.doi:10.1016/j.joen. 2009.12.009. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2732883C1 (en) | Use of 1-(hermatrane-1-yl)-1-oxyethylamine for inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells | |
| Petrosino et al. | Protective role of palmitoylethanolamide in contact allergic dermatitis | |
| Arora et al. | Ceramide induces hepatocyte cell death through disruption of mitochondrial function in the rat | |
| Elias et al. | Skin barrier | |
| US5620962A (en) | Anti-inflammatory compositions containing monogalactosyl dieicosapentaenoyl glycerol and methods of relating thereto | |
| Sofi et al. | Ceramide synthesis regulates T cell activity and GVHD development | |
| RU2619860C1 (en) | APPLICATION OF PROTATRAN 4-CHLORO-2-METHYLPHENOXYACETATE FOR EXHAUSTING OF MONONUCLEAR CELLS BASIC (ALKALINE) PHOSPHOLIPASE a2 TOTAL ACTIVITY | |
| Svensson et al. | Spinal phospholipase A2 in inflammatory hyperalgesia: role of the small, secretory phospholipase A2 | |
| JP2001526683A (en) | Treatment of lactosylceramide-related symptoms | |
| JP2009520730A (en) | Means and methods for treating and preventing allergic diseases | |
| Hurst et al. | Differential effects of mepacrine, chloroquine and hydroxychloroquine on superoxide anion generation, phospholipid methylation and arachidonic acid release by human blood monocytes | |
| RU2733166C1 (en) | Use of bis(&micro;-tartrato)di(&micro;-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium for inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells | |
| Qiu et al. | Atorvastatin decreases lipoprotein lipase and endothelial lipase expression in human THP-1 macrophages | |
| Mahmoudi et al. | Effect of diabetes on efferocytosis process | |
| Myers et al. | Differential effects of anti-inflammatory drugs on lipoxygenase and cyclo-oxygenase activities of neutrophils from a reverse passive Arthus reaction | |
| RU2732880C1 (en) | Method of inhibiting total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using bis(μ-tartrato)di(μ-hydroxo)germanate (iv) triethanolammonium | |
| RU2732881C1 (en) | Method for suppressing total activity of basic (alkaline) phospholipase a2 of mononuclear cells using 1-(hermatrane-1-yl)-1-oxyethylamine | |
| ES2395002T3 (en) | New combination for use in the treatment of inflammatory disorders | |
| Kaplan-Harris et al. | The antiinflammatory activity of analogs of indomethacin correlates with their inhibitory effects on phospholipase A2 of rabbit polymorphonuclear leukocytes | |
| Haughey et al. | A biological perspective of CSF lipids as surrogate markers for cognitive status in HIV | |
| Farooqui et al. | Neuroprotection abilities of cytosolic phospholipase A2 inhibitors in kainic acid-induced neurodegeneration | |
| RU2545888C1 (en) | Using complex of tris-(2-hydroxyethyl)amine and bis-(2-methylphenoxy-acetate) zinc (zincatran) for reducing total activity of acidic phospholipase a1 | |
| Bektas et al. | Induction of apoptosis by synthetic ceramide analogues in the human keratinocyte cell line HaCaT | |
| Marone et al. | Pharmacological modulation of human mast cells and basophils. | |
| Gardette et al. | The protein tyrosine phosphatase Lyp/PTPN22 drives TNFα-induced priming of superoxide anions production by neutrophils and arthritis |