RU2727167C1 - Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга - Google Patents
Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга Download PDFInfo
- Publication number
- RU2727167C1 RU2727167C1 RU2019129314A RU2019129314A RU2727167C1 RU 2727167 C1 RU2727167 C1 RU 2727167C1 RU 2019129314 A RU2019129314 A RU 2019129314A RU 2019129314 A RU2019129314 A RU 2019129314A RU 2727167 C1 RU2727167 C1 RU 2727167C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- polypeptides
- brain
- mcg
- amino acids
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 113
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 99
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 89
- 230000006870 function Effects 0.000 title abstract description 16
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 34
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 33
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 230000011514 reflex Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000015654 memory Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000001777 nootropic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 206010063045 Effusion Diseases 0.000 claims abstract description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000001067 neuroprotector Effects 0.000 claims abstract description 9
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 37
- 102000009854 cortexin Human genes 0.000 claims description 13
- 108010034906 cortexin Proteins 0.000 claims description 13
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 claims description 11
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000003925 brain function Effects 0.000 claims description 8
- -1 Cytoflavibral Chemical compound 0.000 claims description 6
- 108700019404 Pro-Gly-Pro- ACTH (4-7) Proteins 0.000 claims description 6
- AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N semax Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CNC=N1 AFEHBIGDWIGTEH-AQRCPPRCSA-N 0.000 claims description 6
- LYONXVJRBWWGQO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-oxo-4-phenylpyrrolidin-1-yl)acetamide Chemical compound C1C(=O)N(CC(=O)N)CC1C1=CC=CC=C1 LYONXVJRBWWGQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- IKMNOGHPKNFPTK-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-6-methylpyridin-1-ium-3-ol;4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O.CCC1=NC(C)=CC=C1O IKMNOGHPKNFPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VFEKMAOUJHONFD-UHFFFAOYSA-N 5-[[[5-hydroxy-4-(hydroxymethyl)-6-methylpyridin-3-yl]methyldisulfanyl]methyl]-4-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-3-ol;hydrate;dihydrochloride Chemical compound O.Cl.Cl.OCC1=C(O)C(C)=NC=C1CSSCC1=CN=C(C)C(O)=C1CO VFEKMAOUJHONFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M CDP-choline(1-) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M 0.000 claims description 5
- YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N Nicergoline Chemical compound C([C@@H]1C[C@]2([C@H](N(C)C1)CC=1C3=C2C=CC=C3N(C)C=1)OC)OC(=O)C1=CN=CC(Br)=C1 YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N 0.000 claims description 5
- GMZVRMREEHBGGF-UHFFFAOYSA-N Piracetam Chemical compound NC(=O)CN1CCCC1=O GMZVRMREEHBGGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DDNCQMVWWZOMLN-IRLDBZIGSA-N Vinpocetine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN3CCC4)=C5[C@@H]3[C@]4(CC)C=C(C(=O)OCC)N5C2=C1 DDNCQMVWWZOMLN-IRLDBZIGSA-N 0.000 claims description 5
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N choline alfoscerate Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP([O-])(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001284 citicoline Drugs 0.000 claims description 5
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 5
- SBBDHANTMHIRGW-QMMMGPOBSA-N hopantenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCC(O)=O SBBDHANTMHIRGW-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- 229950001260 hopantenic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 5
- DAFOCGYVTAOKAJ-UHFFFAOYSA-N phenibut Chemical compound OC(=O)CC(CN)C1=CC=CC=C1 DAFOCGYVTAOKAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960004122 phenibut Drugs 0.000 claims description 5
- NAJVRARAUNYNDX-UHFFFAOYSA-N picamilon Chemical compound OC(=O)CCCNC(=O)C1=CC=CN=C1 NAJVRARAUNYNDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960004526 piracetam Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000744 vinpocetine Drugs 0.000 claims description 5
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 3
- BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N Pentoxifylline Chemical compound O=C1N(CCCCC(=O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DERZBLKQOCDDDZ-JLHYYAGUSA-N cinnarizine Chemical compound C1CN(C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CCN1C\C=C\C1=CC=CC=C1 DERZBLKQOCDDDZ-JLHYYAGUSA-N 0.000 claims 2
- 229960000876 cinnarizine Drugs 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 7
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 7
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 7
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 7
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 7
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 4
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 3
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 3
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 3
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000007322 compensatory function Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 3
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000005171 mammalian brain Anatomy 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 3
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 208000007379 Muscle Hypotonia Diseases 0.000 description 2
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000007177 brain activity Effects 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002461 excitatory amino acid Effects 0.000 description 2
- 239000003257 excitatory amino acid Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000003371 gabaergic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 208000018879 impaired coordination Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000036997 mental performance Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000036314 physical performance Effects 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 2
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- RXPRRQLKFXBCSJ-GIVPXCGWSA-N vincamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN3CCC4)=C5[C@@H]3[C@]4(CC)C[C@](O)(C(=O)OC)N5C2=C1 RXPRRQLKFXBCSJ-GIVPXCGWSA-N 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 208000036632 Brain mass Diseases 0.000 description 1
- 241000723347 Cinnamomum Species 0.000 description 1
- 206010061822 Drug intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002038 Muscle Hypertonia Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 208000003443 Unconsciousness Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 1
- 230000010455 autoregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 230000001966 cerebroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008214 highly purified water Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000018883 loss of balance Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 230000036640 muscle relaxation Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 206010029864 nystagmus Diseases 0.000 description 1
- 238000012346 open field test Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008063 pharmaceutical solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000018406 regulation of metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 1
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области биологии и медицины и касается новой композиции полипептидов, выделенных из экстракта коры головного мозга крупного рогатого скота, фармацевтической композиции на ее основе и их применению. Композиция полипептидов обладает ноотропным, нейропротекторным, антиоксидантным, тканеспецифическим действием и характеризуется следующими показателями: молекулярная масса полипептидов составляет примерно 2000-2250 Да; количество связанных аминокислот составляет: аргинина - 12 до 30 мкг/мг, глицина – от 15 до 26 мкг/мг, аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг, глутамина – от 66 до 100 мкг/мг, аланина – от 22 до 35 мкг/мг, пролина – от 26 до 31 мкг/мг, лизина – от 26 до 46 мкг/мг, лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг, валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции. Фармацевтическая композиция для нормализации функции головного мозга содержит вышеуказанную композицию полипептидов и фармацевтически приемлемый носитель. Предлагается также применение вышеуказанных композиций для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора. Композиция полипептидов обладает свойствами нормализации функции головного мозга, при этом имеет меньшие побочные действия по сравнению с прототипом при ее применении. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 табл., 9 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области биологии и медицины, конкретно, к области химико-фармацевтической промышленности. Выделена новая композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга, ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием.
Предшествующий уровень техники
К настоящему времени известен очень широкий спектр исследований, посвященных проблемам нормализации функций головного мозга. Также данные препараты, как правило, используют в качестве ноотропных, нейропротекторных препаратов и лекарственных средств, обладающих антиоксидантным и тканеспецифическим действием. Среди таких препаратов известны: Кортексин (регистрационное удостоверение
Р N003862/02), Церебролизин (регистрационное удостоверение
П N013827/01), Семакс (регистрационное удостоверение ЛС-002553) и другие.
Р N003862/02), Церебролизин (регистрационное удостоверение
П N013827/01), Семакс (регистрационное удостоверение ЛС-002553) и другие.
Из всех представленных препаратов пептидной природы наиболее изучен Кортексин. Препарат КОРТЕКСИН® представляет собой полипептидный препарат, выделенный из коры головного мозга крупного рогатого скота и свиней и обладает тканеспецифическим действием на кору головного мозга, оказывает церебропротекторное, ноотропное и противосудорожное действие, снижает токсические эффекты нейротропных веществ, улучшает процессы обучения и памяти, стимулирует репаративные процессы в головном мозге, ускоряет восстановление функций головного мозга после стрессорных воздействий (Лебедев АА., и др., 2006, Психофармакология и биологическая наркология, т. 6, выпуск 3, 1275-1283).
Механизм действия КОРТЕКСИНА® связан с его метаболической активностью: препарат регулирует соотношение тормозных и возбуждающих аминокислот, уровень серотонина и дофамина, оказывает ГАМК-ергическое влияние, обладает антиоксидантной активностью и способностью восстанавливать биоэлектрическую активность головного мозга.
Кортексин представляет собой фармакологическое средство, содержащее в качестве активного начала выделенный целевой продукт в виде комплекса биологически активных полипептидов с молекулярной массой не более 15 000 Да и изоэлектрической точкой 3,5-9,5, и максимумом поглощения в УФ-спектре, при длине волны 275±6 нм. предлагается использовать в медицинской практике для нормализации функций головного мозга (RU 2275924). При этом сам препарат представляет собой лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком. Ввиду того, что Кортексин получают при выделении из коры головного мозга крупного рогатого скота, он имеет сложный состав, который практически невозможно охарактеризовать через последовательности аминокислот их их содержание. Так, в аминокислотном составе Кортексина имеется широкий спектр аминокислот, в т.ч. протеиногенных: аспарагиновая кислота и глицин, а также треонин, серин, глутаминовая кислота, пролин, аланин, валин, изолейцин, тирозин, фенилаланин, гистидин, лизин, аргинин и другие аминокислоты.
Однако, следует отметить, что Кортексин содержит набор полипептидных фракций различной молекулярной массы и неустановленного состава, при этом может содержать полипептидные фракции, которые могут вызвать побочное действие: непереносимость препарата, аллергию, тошноту, головокружение и др. Дополнительно, при наличии так называемые инертных или балластных фракций в препарате его вводимый объем может возрастать, что не всегда подходит для использования в детской практике. Препарат с таким неустановленным составом достаточно трудно получать и идентифицировать, а также контролировать его качество, т.к. состав точно не определен.
Таким образом, сохраняется потребность в разработке более эффективного препарата для нормализации функции головного мозга, обладающего ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием, при этом имеющего меньшие побочные действия.
Основная причина, ограничивающая эффективность и безопасность всех существующих нейропептидных препаратов, полученных из головного мозга млекопитающих - это их ксеногенное происхождение. При выделении нейропептидов из тканей головного мозга животных для снижения их иммуногенности (антигенных свойств) прибегают к кислотному или ферментативному гидролизу белков и высокомолекулярных полипептидов, тем самым уменьшая количество нейротрофических факторов роста белковой и полипептидной природы [Хабриева. У., 2005]. Пептидный препарат, полученный таким способом, содержит денатурированные продукты кислотного гидролиза белков и полипептидов с нарушенной четвертичной и третичной структурой, что снижает его специфичность и биологическую активность, повышает его иммуногенность, вызывая аллергические реакции при применении. Дополнительной причиной побочных реакций является, как правило, сложный состав таких органических препаратов, включающий разнообразные белки по аминокислотному составу и молекулярной массе. Среди таких белков зачастую есть белки, которые вызывают аллергические и другие побочные реакции, но отделить или очистить от них сам препарат достаточно сложно и трудоемко в виду схожести по свойствам с другими белками в составе, несущими полезную функцию.
Для решения данной проблемы авторами были получены белково-пептидная композиция с выраженным ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием. Данная композиция характеризуется тем, что в ее состав входят белки и полипептиды с молекулярной массой примерно 2000-2250 Да, количество связанных аминокислот составляет: аргинина 12 до 30 мкг/мг сухого остатка композиции, глицина – от 15 до 26 мкг/мг, аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг, и глутамина – от 66 до 100 мкг/мг сухого остатка композиции.
В дополнительном варианте реализации количество связанных аминокислот составляет: аланина – от 22 до 35 мкг/мг, пролина – от 26 до 31 мкг/мг, лизина – от26 до 46 мкг/мг, лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг, валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции.
Кроме того, предложена фармацевтическая композиция, содержащая композицию полипептидов согласно изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Дополнительно, предложено применение композиции полипептидов согласно изобретению или фармацевтической композиции, включающей композицию полипептидов согласно изобретению, для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора. Применение в таком случае можно осуществлять путем внутривенной инъекции, внутримышечного введения или ректально. Также композицию полипептидов согласно изобретению или фармацевтическую композицию, включающей композицию полипептидов согласно изобретению, можно применять отдельно или в комбинации с другим нейропротектором. Другой нейропротектор может представлять собой кортексин, церебролизин, актовегин, пирацетам, фенотропил, энцефабол, глиатилин, пантокальцин, глицин, фенибут, цитиколин, пикамилон, семакс, мексидол, цитофлавин, кавинтон, оксибрал, сермион, циннаризин, трентал.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 приведена хроматограмма экстракта, полученная гель-фильтрационной хроматографией. Стрелкой показана фракция, которую выделяли.
На фиг. 2 приведен масс-спектр композиции полипептидов.
На фиг. 3 приведен масс-спектр композиции полипептидов, соответствующий времени удерживания 17,3-18,9 мин.
На фиг. 4 приведен масс-спектр композиции полипептидов, соответствующий времени удерживания 27,7-29,5мин.
На фиг. 5 приведены результаты исследования биологической активности.
На фиг. 6 приведены результаты исследования биологической активности (гистограмма).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение заключается в том, что была получена композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга, ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием, характеризующийся следующими показателями:
- молекулярная масса полипептидов составляет примерно 2000-2250 Да;
- количество связанных аминокислот составляет:
аргинина 12 до 30 мкг/мг сухого остатка композиции, глицина – от 15 до 26 мкг/мг, аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг, и глутамина – от 66 до 100 мкг/мг сухого остатка композиции.
В дополнительном варианте реализации количество связанных аминокислот составляет: аланина – от 22 до 35 мкг/мг,
пролина – от 26 до 31 мкг/мг,
лизина – от 26 до 46 мкг/мг,
лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг,
валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции.
Данная композиция получена из экстракта мозга млекопитающих. Экстракт получают из мозга крупного рогатого скота по методике, известной из предшествующего уровня техники. Далее, из полученного экстракта выделяют композицию полипептидов согласно изобретению.
Полученная композиция полипептидов обладает ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием. Дополнительно, данная композиция характеризуется следующими показателями:
- молекулярная масса полипептидов составляет примерно 2000-2250 Да;
- количество связанных аминокислот составляет:
аргинина 12 до 30 мкг/мг сухого остатка композиции, глицина – от 15 до 26 мкг/мг, аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг, и глутамина – от 66 до 100 мкг/мг сухого остатка композиции.
Кроме того, в полученной композиции количество связанных аминокислот составляет: аланина – от 22 до 35 мкг/мг, пролина – от 26 до 31 мкг/мг, лизина – от 26 до 46 мкг/мг, лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг, валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции.
Показано, что композиция полипептидов согласно изобретению обладает нейропротекторным действием. Нейропротекторное действие предполагает, что при остром и хроническом повреждении нейронов происходит снижение цитотоксического отека мозга, нормализация репаративных процессов в головном мозге и процессов ремиелинизации периферической нервной системы, восстановление устойчивой деятельности мозга, снижение поражения нейронов при различных эндогенных нейротоксических факторов и токсических эффектов нейротропных веществ и апоптоза нейронов. Ноотропное действие композиции полипептидов согласно изобретению предполагает сохранение и повышение функций головного мозга, улучшение процессов обучения и памяти, концентрации внимания, общего тонуса нервной системы и сопротивляемости различным стрессовым воздействиям. Антиоксидантное действие предполагает ингибирование перекисного окисления липидов в нейронах и клетках глии, сохранение устойчивого функционирования всех отделов нервной системы, активацию защиты нейронов в условиях оксидантного стресса. Тканеспецифическое действие означает активизацию метаболизма нейронов центральной и периферической нервной системы и нормализациюи функций коры головного мозга.
В целом, композиция полипептидов по свойствам представляет собой нейропептидный препарат, который оказывает влияние на биоэлектрическую активность головного мозга, регулирует соотношение тормозных и возбуждающих аминокислот, обеспечивает ГАМК- ергическое действие, снижает токсичность нейротропных веществ и контролирует экспрессию генов, синтез белка в клетках. Все эти процессы входят в каскад патогенетической коррекции постаноксического состояния и другого рода повреждений, сопровождающихся нарушением ауторегуляции мозгового кровотока и повреждения нейронов.
Водорастворимые полипептиды в контексте данного изобретения означают полипептиды, состоящие из аминокислот, растворимы в воде. Методы определения количественного содержания водорастворимых полипептидов могут быть различными, например, с помощью спектрометрии, например, по методу спектрофотометрического определения по методу Брэдфорда.
Молекулярная масса в контексте данного изобретения означает молекулярный вес полипептида, выраженный в единице измерения дальтон (Да). Полипептиды, входящие в состав композиции полипептидов по изобретению, имеют молекулярную массу примерно от 2000 Да до примерно 2250 Да. Методы определения молекулярной массы известны из предшествующего уровня техники: хроматографическими, физическими, с помощью методом спектрометрии, например, масс-спектрометрии.
Связанные аминокислоты в контексте данного изобретения означает аминокислоты, находящиеся в ассоциированном состоянии (в связи какой-либо природы) с белками и другими структурами или веществами в органе или организме либо в виде непосредственно самих белков или пептидов, образуя их. Ранее было выяснено, что роль связанных аминокислот заключается не только в их нейромедиаторных функциях, но и в модификации белков, а также регуляции метаболических процессов, обеспечивающих адаптацию мозга.
Свободные аминокислоты в контексте данного изобретения относится как к белковым, так и небелковым аминокислотам. Белковые (протеиногенные) аминокислоты могут находиться в несвязанной в белки или пептиды форме.
Ниже представлены формулы аминокислот, входящих в состав композиции:
| Название | Формула |
| Аргинин Arg | (NH-C(NH2)NH(CH2)3CH(NH2)-COOH) |
| Глицин Gly | NH2-CH2-COOH |
| Аспарагин Asp | HOOC-CH(NH2)-CH2-CONH2 |
| Глутамин Glu | O=C(NH2)-CH2-CH2-CH(NH2)-COOH |
| Аланин Ala | NH2-CH(CH3)-COOH |
| Пролин Pro |
 |
| Лизин Lys | HOOC-CH(NH2)(CH2)4NH2 |
| Лейцин Leu | HOOC-CH(NH2)CH2CH(CH3)2 |
Термин «примерно» используется для указания того, что значение включает характерную погрешность устройства, методики, использующейся для определения значения, и/или колебания, которые присущи исследуемым объектам. Например, но без наложения ограничений, если используется термин "примерно", то указанное значение может быть больше или меньше на 12% или 11%, или 10%, или 9%, или 8%, или 7%, или 6%, или 5%, или 4%, или 3%, или 2%, или 1%.
Композиция полипептидов согласно настоящему изобретению может быть в форме лиофилизата. Способы получения лиофилизата известны из уровня техники. Как правило, лиофилизат получают замораживанием раствора, включающего композицию полипептидов и, возможно, вспомогательные вещества, такие как стабилизаторы, наполнители, консерванты, и подверганием данного раствора сублимационной сушке при пониженном давлении.
Дополнительно, композиция полипептидов согласно изобретению может быть представлена в виде фармацевтической композиции, содержащей композицию полипептидов в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель.
Так, фармацевтически эффективное количество может составлять от 1 мг до 50 мг на 1 г фармацевтической композиции. При этом, фармацевтически приемлемый носитель в указанной фармацевтической композиции может составлять остальное, до 1 г. Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой носитель, растворитель или разбавитель, вспомогательные вещества, традиционно используемые для приготовления готовых лекарственных форм. Так, в случае инъекционных форм, например, в случае готовых лекарственных форм в виде инъекции, вводимых внутривенно или внутримышечно, носителем или растворителем может выступать вода для инъекций или любой раствор, в т.ч. и на водной основе, предназначенный для введения таким способом, а вспомогательными веществами могут быть стабилизаторы, вещества, обеспечивающие изотоничность, вещества для регуляции рН. вязкости, консерванты. В случае ректальных форм носитель может представлять собой суппозиторную основу, которая может быть гидрофильной, гидрофобной основой, эмульсионной или основой другого типа, пригодной для приготовления данных готовых лекарственных форм. Ректальная форма также может содержать вспомогательные вещества, традиционно используемые для получения ректальных форм, например, консерванты, эмульгаторы, загустители, пластификаторы и иные вспомогательные вещества.
Кроме того, настоящее изобретение включает также применение композиции полипептидов для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора.
Судорожный синдром представляет собой состояние, которое наступает внезапно и характеризуется непроизвольным сокращением мышц, может сопровождаться изменением сознания человека. Лечение или купирование судорожного синдрома заключается в снижении количества рецидивов, ослаблении симптомов, замедлении или приостановлении прогрессирования данного состояния.
Рефлекторная деятельность мозга заключается в быстрой и адекватной ответной реакции организма на внешнее или внутреннее раздражение. В рефлекторном механизме принято различать три части: чувствующую, центральную и двигательную. Раздражитель вызывает процесс возбуждения в концевых разветвлениях чувствующего нерва. Возбуждение по чувствующему нерву передается в центр (мозг), где переключается на двигательный нерв и по нему достигает рабочего органа, при этом возникает ответная реакция на раздражение. Эти три части рефлекторного механизма вместе называются рефлекторной дугой. При этом в мозге данные механизмы осуществляются за счет различных рецепторов и сигнальных веществ, при участии различных отделов. Таким образом, установить природу и причину нарушения рефлекторной деятельности мозга достаточно сложно. При нарушениях рефлекторной деятельности, как правило, диагностируют отклонения от нормы как в поведении, так и в вегетативной сфере. Они относятся к категории неврозов и выражаются в нарушении ориентировочно-исследовательского рефлекса, в неадекватных реакциях на сигналы из внешней среды, в дефектах памяти, в плохой обучаемости, нестабильном проявлении навыков, недостаточной пространственной ориентации, эмоциональных сдвигах, а также в патологических изменениях со стороны сердечно-сосудистой, пищеварительной, эндокринной и других систем организма.
Восстановление при данном нарушении означает улучшение рефлекторной деятельности по сравнению с состоянием до лечения, ослабление симптомов или замедление их прогрессирования, восстановление функций ориентации в пространстве, повышении эффективности реакций на внешние раздражители, повышении компенсаторных функций организма, улучшение когнитивных функций, более ровного поведения в быту, восстановление нормального психо-эмоциального характера.
Нарушение памяти означает состояние, при котором происходит снижение или утрата способности запоминать, сохранять, узнавать и воспроизводить информацию. При различных заболеваниях могут страдать отдельные компоненты памяти, такие как запоминание, удержание, воспроизведение.
Восстановление при нарушении памяти означает приостановление прогрессирования нарушения памяти, улучшение состояния или ослабление симптомов нарушения памяти, при этом это может выражаться в снижении эпизодов потери памяти, повышении объема запоминаемой информации, улучшение когнитивных навыков.
Нарушение координации движений может выражаться в неустойчивости пациента, раскачивании из стороны в сторону при стоянии или ходьбе, потери равновесия, падениях при ходьбе на ровных поверхностях. В особо тяжелых случаях это состояние может сопровождаться тошнотой и рвотой. Также состояние может приводить к дизартрии и нистагму, тремору конечностей, снижению мышечного тонуса. Восстановление данной функции при приеме средств может выражаться в ослаблении симптомов, облегчении состояния и замедлении его прогрессирования, повышении общего мышечного тонуса и компенсаторных функций.
Инсульт представляет собой острое нарушение кровоснабжения головного мозга (острое нарушение мозгового кровообращения), характеризующееся внезапным (в течение нескольких минут, часов) появлением очаговой и/или общемозговой неврологической симптоматики, которая сохраняется более 24 часов или приводит к смерти больного в более короткий промежуток времени вследствие цереброваскулярной патологии и излиянию в головной мозг. Последствия инсульта и излияния в мозг могут выражаться в парезе мышц лица и тела, нарушении координации и двигательной функции, снижении тонуса мышц, спутанности сознания, нарушении памяти и рефлекторной деятельности мозга и когнитивных расстройств. Лечение заключается в восстановлении утраченных функции и повышении компенсаторных функций организма, снижении последствий данного состояния.
Нейропротекторы представляют собой вещества или фармацевтические препараты, котороые позволяют защитить клетки мозга от повреждающих воздействий, предотвратить их гибель или улучшить их функции, в основном, за счет восстановления связей между нейронами, повышения качества передачи сигнала, что в конечном счете может приводить к улучшению или нормализации умственной активности, ослаблении или восстановлении нарушенных функций, в т.ч. функций памяти, двигательных и координационных функций, когнитивных навыков и рефлекторной деятельности мозга, повышении устойчивости мозга к гипоксии, общей умственной и физической работоспособности.
При этом, применение композиции полипептидов или фармацевтической композиции, содержащей композицию полипептидов согласно изобретению, для лечения или восстановления при указанных выше состояниях возможно в форме внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции или композиции в виде ректальной формы.
При этом, композицию полипептидов можно вводить отдельно или в комбинации с другим нейропротектором. Под другим нейропротектором подразумевается препарат, который применяют для восстановления или нормализации деятельности мозга и нервной системы, повышению умственной и физической работоспособности.
В частности, другой нейропротектор может представлять собой кортексин, церебролизин, актовегин, пирацетам, фенотропил, энцефабол, глиатилин, пантокальцин, глицин, фенибут, цитиколин, пикамилон, семакс, мексидол, цитофлавин, кавинтон, оксибрал, сермион, циннаризин, трентал.
Для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора можно использовать не только композицию полипептидов согласно настоящему изобретению, но и фармацевтическую композицию, содержащую данную композицию полипептидов. Применять фармацевтическую композицию можно путем внутривенной инъекции, внутримышечного введения или ректальной формы. При этом, применять фармацевтическую композицию можно отдельно или в комбинации с другим нейропротектором. В частности, другой нейропротектор представляет собой кортексин, церебролизин, актовегин, пирацетам, фенотропил, энцефабол, глиатилин, пантокальцин, глицин, фенибут, цитиколин, пикамилон, семакс, мексидол, цитофлавин, кавинтон, оксибрал, сермион, циннаризин, трентал.
Настоящее изобретение ниже приведено в виде примеров, которые никоим образом не ограничивают объем и предназначены только в иллюстративных целях.
Примеры
Пример 1
Способ получения экстракта мозга млекопитающих
Сырье для выделения композиции полипептидов получали согласно способу, описанному в патенте RU 2275924. Экстракт после получения лиофилизовали, получая белый или желтовато-белый порошок.
Пример 2
Выделение композиции полипептидов с использованием гель-фильтрационной хроматографии
Полученный на предыдущей стадии экстракт представляет собой комплекс водорастворимых полипептидов с молекулярной массой до
10 000 Да. Для разделения на фракции применяли разделение с помощью гель-фильтрационной хроматографии. Условия приведены ниже:
10 000 Да. Для разделения на фракции применяли разделение с помощью гель-фильтрационной хроматографии. Условия приведены ниже:
Условия разделения на колонке HiLoad 16/60 Superdex 30 prep grade
| Прибор | Жидкостной хроматограф Akta Pure150 |
| Колонка | HiLoad 16/60 Superdex 30 prep grade, Vкол=120 мл |
| Подвижная фаза | Вода высокоочищенная (MilliQ) |
| Скорость потока, мл/мин | 1,0 |
| Температура колонки, °C | 20-24 |
| Температура образцов, °C | 20-24 |
| Параметры УФ детектора | Длина волны 220 нм |
| Объем вводимой пробы, мл | 5,0 |
| Время разделения, мин | 125,0 |
Результаты, полученные при анализе полученного экстракта гель-фильтрационной хроматографией, представлены на Фиг. 1.
Была выделена фракция при временах удерживания от примерно 88 до примерно 99 мин. Полученную фракцию высушили до постоянной массы.
Пример 3
Анализ полученной композиции полипептидов
Анализ полипептидов, входящих в полученную ранее фракцию, проводили методами спектрофотометрии, методами ВЭЖХ-УФ-анализа и ВЭЖХ-МС анализа.
Количество водорастворимых пептидов определяли по методу Брэдфорда с применением спектрометрии. Использовали стандартные растворы и реактивы. Измеряли оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре на длине волны 595 нм. В качестве калибровочного образца использовали стандартный образец Кортексина (без искусственного глицина) в количестве 50 мг. Количество водорастворимых пептидов составило от примерно 7,8 до примерно 19,3 мг на 1 мг сухого остатка.
Общее количество аминокислот определяли методом кислотного гидролиза с последующей дериватизацией с помощью ВЭЖХ-УФ анализа.
Для определения количества аминокислот, входящих в состав пептидов, необходимо было определить количество свободных аминокислот в образце и общее количество аминокислот в этом же образце. Для определения свободных аминокислот проводили дериватизацию. Для определения общего количества аминокислот проводили дериватизацию образца после предварительно проведенного кислотного гидролиза с последующей нейтрализацией. Для этого в стеклянную виалу автоинжектора хроматографа помещали 10 мкл образца, добавляли 70 мкл AccQ•Tag Ultra Borate buffer (боратный буфер) и 20 мкл раствора AccQ•Tag Ultra reagent (коммерческий реагент). Содержимое виалы с плотно закрытой крышкой немедленно перемешивали на вортексе и выдерживали сначала при комнатной температуре 1 минуту, а затем при 55°С в течение 10 минут. Дериваты были устойчивы при комнатной температуре в течение 1 недели.
Условия хроматографии приведены ниже:
Количество свободных аминокислот определяли методом дериватизации без гидролиза, с помощью ВЭЖХ-УФ анализа. Для расчета количества аминокислот, находящихся в составе пептидов, то есть связанных аминокислот, из общего количества вычитали количество свободных аминокислот.
Количество связанных аминокислот составило:
аргинина 12 до 30 мкг/мг сухого остатка композиции,
глицина – от 15 до 26 мкг/мг,
аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг, и
глутамина – от 66 до 100 мкг/мг сухого остатка композиции.
Количества других аминокислот составило:
аланина – от 22 до 35 мкг/мг,
пролина – от 26 до 31 мкг/мг,
лизина – от 26 до 46 мкг/мг,
лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг,
валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции.
Молекулярные массы пептидов определяли методом ВЭЖХ-МС с последующим расчетом молекулярной массы характерных пептидов на основании полученных хроматограмм.
Условия проведения анализа представлены ниже:
Параметры масс-детектора:
| Режим ионизации | положительная ES+ |
| Длительность сканирования, сек | 0.25 |
| Режим детектирования: сканирующий, в диапазоне | от 300 до 3000 m/z |
| Настройки источника ионизации | |
| Напряжение на капилляре, кВ | 4,0 |
| Напряжение на конусе, В | 44 |
| Напряжение на экстракторе, В | 3.00 |
| Напряжение на линзе (RF lens), В | 2.50 |
| Температура источника, °C | 150 |
| Температура газа десольватации, °C | 350 |
| Поток газа десольватации, Л/ч | 600 |
Результаты масс-хроматографии полученной композиции полипептидов представлены на Фиг. 2.
Для определения молекулярной массы по масс-спектрам низкого разрешения используется метод деконволюции.
Результат определения молекулярной массы основных пептидов композиции полипептидов согласно изобретению после разделения в режиме гель-фильтрационной хроматографии
| Время удерживания пика, мин. | Величина заряда иона | Значение молекулярной массы, Да |
| 17,3-18,9 | 5+ | 2000-2025 |
| 4+ | ||
| 3+ | ||
| 2+ | ||
| 27,7-29,5 | 5+ | 2025-2250 |
| 4+ | ||
| 3+ |
На хроматограмме данной композиции полипептидов хорошо видны основные пики с временами удерживания 17,3-18,9 и 27,7-29,5 мин, в составе которых находятся пептиды с молекулярной массой 2000-2025 Да и 2025-2250, соответственно.
Кроме того, полученную композицию разводили по полного растворения в воде и определяли рН полученного раствора. рН составил от 5,0 до 6,6.
Пример 4
Определение биологической активности полученной композиции полипептидов на куриных эмбрионах
Биологическую активность композиции полипептидов оценивали по влиянию на рост нервных элементов или выселяющихся клеток в зоне роста в культуре ткани головного мозга куриных эмбрионов при сравнении с контролем.
В качестве биологической тест-системы использовали головной мозг куриных эмбрионов, извлечённых из яиц после 9-12 суток инкубации.
Количественную оценку влияния препарата на рост ткани головного мозга эмбрионов выполняли морфометрическим методом с последующим расчётом индекса площади роста клеток (далее ИП) и расчетного значения ИП%, выражающего разницу площади контрольного и опытного образца, выраженного в процентах.
В качестве эталона активности был принят минимально допустимый ИП% ткани головного мозга после культивирования с ЛП Кортексин® в концентрации 20 нг/мл = 20%.
В результате проведенных исследований было показано, что композиция полипептидов обладает биологической активностью: стимулирует увеличение площади роста нервной ткани не менее, чем на 20% относительно контроля.
Для проведения анализа брали яйцо с куриным эмбрионом возрастом 9-12 суток, мыли яйцо водой с мылом. Извлекали куриный эмбрион. Хирургическими инструментами, обработанными в 96° растворе спирта этилового с последующим пломбированием, разрезали пленку, покрывающую головной мозг, выделяли ткань головного мозга и помещали ее в стерильную чашку Петри с несколькими каплями раствора Хенкса. Прикрепляли к поверхности шести чашек Петри по 12-14 фрагментов нервной ткани размером около 0,5 мм, затем чашки закрывали и выдерживали 2-4 минуты в ламинарном шкафу при комнатной температуре. Далее вносили по 3 мл среды для культивирования без добавления объектов испытания, после чего в опытные чашки вносили объекты испытания концентрации 20 нг/мл в объеме 3 мл.
Опытные и контрольные чашки Петри закрывали крышками и помещали их в СО2-инкубатор с 5% содержанием углекислого газа и температурой (37±1) °С на 50 часов.
Биологическую активность композиции полипептидов определяли по влиянию на рост нервных элементов или выселяющихся клеток в зоне роста в культуре ткани головного мозга куриных эмбрионов при сравнении с контролем. Испытание проводили с помощью светового микроскопа.
Исходную площадь фрагмента нервной ткани измеряли путем его обведения с помощью инструмента «Draw or Erase Feature» модуля TotalLab Colony Counter. Значение параметра "площадь" вносили в таблицу регистрации результатов в графу «min». Площадь всего фрагмента нервной ткани головного мозга, включая периферическую зону роста, измеряли тем же способом и вносили полученный результат в таблицу регистрации результатов в графу «max».
ИП рассчитывали как отношение площади всего фрагмента нервной ткани головного мозга, включая периферическую зону роста, к исходной площади фрагмента нервной ткани (max/min).
Для прогноза биологической активности объектов испытания рассчитывали ИП% с использованием формулы 1.
ИП%=((ИПо-ИПк)/ИПк)×100% (1)
Где: ИП% – индекс площади роста клеток для объекта испытания; ИПо – индекс площади роста клеток опытных образца; ИПк – индекс площади роста клеток контрольного образца.
Объект испытания считали биологически активным, если ИП% ткани головного мозга после культивирования с объектами испытания в концентрации 20 нг/мл был не менее чем на 20 % больше ИП в контроле.
Статистическую обработку результатов расчета ИП проводили c применением t-критерия для независимых выборок с использованием программного обеспечения Prism 6 (GraphPad Software, США). Различия считались статистически значимыми при p<0,05. В отчете результаты представлены в виде гистограмм, отражающих средние значения и стандартное отклонение и статистические отличия, значение n (количество измерений в каждой группе) было равно 14.
На фиг. 5 приведены фотографии роста клеток на курином эмбрионе в случае контроля и композиции полипептидов. Видно, что в случае композиции полипептидов согласно изобретению площадь роста нервных клеток выше.
Таким образом, была показана тканеспецифическая и нейропротекторная активность композиции полипептидов.
Пример 5
Определение хронической токсичности композиции
Для оценки хронической токсичности использовали модель на мышах, при этом был выбран период 3 месяца.
В опытах на грызунах (крысы обоего пола) композицию полипептидов, полученную в примере 2, вводили в/м ежедневно на протяжении 90 дней в 3 дозах: в 10 раз большей терапевтической для человека - 1,5 мг/кг; максимальной 150 мг/кг (в 1000 раз большей терапевтической для человека, не вызывает гибели у крыс при однократном введении) и промежуточной - 15 мг/кг.
Исследования проводились в соответствии с экспериментальной программой:
Животные - крысы самки, крысы самцы.
Путь введения - внутримышечный.
Дозы: 1 доза - 1,5 мг/кг; 2 доза - 15 мг/кг; 3 доза - 150 мг/кг.
Частота введения - в течение 90 дней.
Растворитель - вода для инъекций.
Число животных - 1 доза - 20 самцов, 20 самок;
2 доза - 20 самцов, 20 самок;
3 доза - 20 самцов, 20 самок.
Общее количество - 160, из них 40 - контрольная группа.
В процессе эксперимента проводили оценку следующих показателей: общее состояние, взвешивание, потребление воды, гематологические, биохимические исследования, физиологические исследования, макроскопическое исследование и взвешивание внутренних органов, гистологические исследования.
По итогам исследования было установлено, что композициб полипептидов согласно изобретению у крыс обоих полов в/м один раз в сутки в течение 90 дней в дозах 1,5; 15; 150 мг/кг не влияет на внешний вид, общее состояние и поведение животных, не оказывает негативного влияния на биохимические параметры крови и основные физиологические функции организма, не вызывает патоморфологических изменений. Таким образом, следует сделать вывод, что композиция хорошо переносима, безвредна, не обладает острой и хронической токсичностью.
Пример 6
Исследование биологической активности
Для подтверждения биологической активности заявленного фармацевтического средства и его способности нормализации функций головного мозга были проведены исследования по изучению фармакологической активности на модели острой черепно-мозговой травмы (ОЧМТ).
Для моделирования черепно-мозговой травмы использовали специальную установку, состоящую из металлической трубки длиной 0,5 м, диаметром 2 см и стального шарика весом 0,03 кг. Для фиксации головы крысы помещались в стандартные домики из плексигласа, в передней части которых находилось отверстие, соответствующее диаметру трубки. Травму наносили при падении шарика на теменную область черепа животных. После нанесения травмы у крыс наблюдали мышечную релаксацию, кратковременную потерю сознания, сопорозное состояние и кратковременные судороги. Отмечено, что в течение 30-40 минут у крыс сохранялась атаксия, а рефлекторные реакции были нарушены в течение 1,5-3 часов.
Композицию полипептидов начинали вводить в/м со следующего дня после острой травмы в дозах 1,5 мг/кг 1 раз в день на протяжении 10 дней.
Об эффективности лечения судили по клинической картине, динамике массы тела, относительной массы головного мозга, функциональному состоянию центральной нервной системы, показателям тканевого дыхания, активности метаболических процессов в головном мозге и гистологической картине мозга.
| Масса тела и относительная масса мозга экспериментальных животных после острой травмы и лечения целевым продуктом | |||
| Показатели | Экспериментальные группы | ||
| Интактные (здоровые) | Без лечения (через 10 суток) | Лечение композицией (через 10 суток) | |
| Масса тела, г | 184±8 | 163±5 | 179±7 |
| Относит. масса мозга, мг/100 г массы тела | 9,0±0,4 | 15±1,1 | 11,1±1,2 |
В таблице показано состояние при ОЧМТ функций центральной нервной системы (нарушения процессов обучения, памяти, возбуждения и торможения) без лечения и после применения композиции согласно изобретению.
| Показатели функционального состояния центральной нервной системы (СПП, УРПИ, тест открытого поля) экспериментальных животных при ОЧМТ и лечении композицией полипептидов | |||
| Показатели | Экспериментальные группы | ||
| Интактные (здоровые) | Без лечения (через 10 суток) | Лечение композицией полипептидов (через 10 суток) | |
| СПП, В | 11,3±1,2 | 14,2±1,3 | 12,8±0,9 |
| УРПИ | |||
| Латентный период реакции перехода, сек | 73±4 | 135±5 | 70±4 |
| Время пребывания в светлой камере, сек | 82±3 | 43±6 | 80±5 |
| Время пребывания в темной камере, сек | 4,7±0,5 | 18,3±1,2 | 4,5±0,6 |
| Число обученных животных (% ко всей группе) | 10 (100) | 2 (20) | 10 (100) |
| Открытое поле, регистрация в течение 5 минут | |||
| Горизонтальная активность | 32±2 | 6±1 | 29±2 |
| Вертикальная активность | 19±2 | 5±1 | 15±1 |
| Норковый рефлекс | 14±2 | 4±1 | 13±1 |
| Болюсы | 8±1 | 4±1 | 6±1 |
| Интегральная активность | 63±4 | 14±2 | 61±2 |
| Примечания: СПП - суммационно-подпороговый показатель; УРПИ - условный рефлекс пассивного избегания. |
|||
Из данных таблицы видно, что композиция полипептидов согласно изобретению нормализует функции центральной нервной системы.
Данные таблицы показывают, что в результате ОЧМТ тонус мышц увеличивался, а величина реакции на механическое раздражение заметно снижалась, что свидетельствует о нарушениях сопряжения рефлекторных процессов в центральной и периферической нервных системах. Применение композицию полипептидов способствует нормализации периферической нервной системы и мышц.
| Величина физической выносливости крыс по продолжительности висения (мин) в тесте статической силовой нагрузки собственным весом | |||
| Показатели | Экспериментальные группы | ||
| Интактные (здоровые) | Без лечения (через 10 суток) | Лечение композицией полипептидов (через 10 суток) | |
| Время висения, мин | 27,2±1,4 | 7,5±0,7 | 22,4±1,3 |
Представленные результаты свидетельствуют о эффективности композиции полипептидов при лечении последствий острой черепно-мозговой травмы. Также, на основании полученных результатах можно говорить об эффективном ноотропном, нейроптротекторном, антиоксидантном и тканеспецифическом действии композиции полипептидов согласно изобретению. Композиция согласно изобретению может быть использована для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора.
Пример 7
Исследование аллергических реакций
В качестве исследования возможных побочных действий выбрали модель на 2-хмесячных крысах породы норвежские коричневые, массой около 150 г. Крыс разделили на 3 группы, по 8 в каждой (контроль (интактные животные); с введением альбумина из яичного желтка 0,1 мг; с введением композиции полипептидов 1,5 мкг/кг). Аллергические реакции вызывали введением перорально альбумин из яичного желтка в течение 10 дней. Композицию полипептидов также вводили перорально в течение 10 дней.
Крыс содержали в чистом помещении, на безаллергенной диете, наблюдали в течение 30 дней. При выявлении кожной аллергии записывали симптомы, делали измерения (если применимо).
Результаты включали следующее описание:
- У интактных животных не отмечено аллергических реакций, в т.ч. в виде кожных.
- У 6 животных из группы, получавшей альбумин из яичного желтка (Группа 1), на 3 день от начала приема развились активные кожные реакции: образование неровностей кожи и раздражение, расчесывания раздраженных мест, зуд и беспокойство животного, дерматит на лапах. На 11 день (1 день спустя завершения приема альбумина) кожные реакции усилились, появилась вялость и сонливость животных. На 15 и далее день у 4 животных из 6 описанных выявлялись кожные реакции, но со сниженным эффектом.
- У 3 животных из группы, получавших композицию полипептидов (Группа 2), диагностировали зуд и раздражение кожи, расчесывание раздраженных участков. К 20 дню данные явления не были отмечены.
Параллельно с внешним осмотром отбирали кровь и проводили клинический анализ крови на наличие базофилов (Б), эузинофилов (Э) и нейтрофилов (Н) (показатели аллергической реакции). Взято среднее из 8 животных, приведено объемное содержание в %.
| Показатели, день | 10 день | 15 день | 20 день | 25 день | 30 день |
| Интактные животные | Б -0,3 Э – 0,1 Н - 10 |
Б -0,3 Э – 0,15 Н - 10 |
Б -0,3 Э – 0,15 Н - 10 |
Б -0,3 Э – 0,15 Н - 10 |
Б -0,3 Э – 0,15 Н - 10 |
| Группа 1 | Б – 1,0 Э – 2,1 Н – 18 |
Б – 1,3 Э – 1,9 Н – 18 |
Б – 1,3 Э – 1,7 Н – 17 |
Б – 1,3 Э – 1,5 Н – 15 |
Б – 1,3 Э – 1,5 Н – 15 |
| Группа 2 | Б – 0,4 Э – 1,5 Н – 14 |
Б – 0,4 Э – 1,5 Н – 14 |
Б – 0,4 Э – 1,2 Н – 14 |
Б – 0,3 Э – 1,2 Н – 12 |
Б – 0,3 Э – 1,0 Н – 10 |
Как видно из результатов, композиция полипептидов практически не вызывает аллергии на модели крыс.
Пример 8
Получение фармацевтических композиций, включающих композицию полипептидов, в виде инъекций
Полученную в Примере 2 композицию полипептидов лиофилизовали, растворяли в различных количествах в фармацевтическом растворителе (воде, новокаине) и анализировали на стабильность.
| Состав | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Композиция полипептидов | 5 мг | 10 мг | 15 мг | 5 мг | 10 мг | 15 мг |
| Вода или 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор) | до 1 мл. | до 1 мл. | до 1 мл. | |||
| 0,5% новокаина | до 1 мл. | до 1 мл. | до 1 мл. |
Все указанные растворы были стабильны и активны в отношении роста нервных клеток (анализ аналогично Примеру 4).
Данные растворы предназначались для введения внутримышечно или внутривенного введения.
Пример 9
Получение фармацевтических композиций, включающих композицию полипептидов, для ректального введения
Композицию полипептидов в виде лиофилизата из Примера 2 растворяли в небольшом количестве воды и вводили в суппозиторную массу «Witepsol W». WITEPSOL W представляет собой коммерчески доступную суппозиторную основу, содержащую твердые жиры с числом гидроксильных групп 20–50. В состав данной основы входят триглицериды (65-80%), диглицериды (10-35%) и моноглицериды (1-5%). Входящие в состав неполные глицериды замедляют осаждение твердых частиц, способствуют смачиванию слизистых оболочек и улучшают абсорбцию активных компонентов.
Получали фармацевтическую композицию, в виде суппозиториев для ректального введения со следующим составов:
| Состав | 1 | 2 | 3 |
| Композиция полипептидов | 5 мг | 10 мг | 15 мг |
| Витепсол | до 2 г. | до 2 г. | до 2 г. |
Все композиции были стабильны, плавились при температуре 35-37°С и обеспечивали высвобождение активного вещества в течение 45 мин.
Claims (20)
1. Композиция полипептидов, полученных из экстракта мозга крупного рогатого скота, обладающая ноотропным, нейроптротекторным, антиоксидантным и тканеспецифическим действием, характеризующаяся следующими показателями:
- молекулярная масса полипептидов составляет примерно 2000-2250 Да;
- количество связанных аминокислот составляет:
аргинина 12 до 30 мкг/мг, глицина – от 15 до 26 мкг/мг, аспарагина – от 36 до 74 мкг/мг и глутамина – от 66 до 100 мкг/мг сухого остатка композиции,
- количество дополнительных связанных аминокислот составляет:
аланина – от 22 до 35 мкг/мг,
пролина – от 26 до 31 мкг/мг,
лизина – от 26 до 46 мкг/мг,
лейцина – от 25 до 32 мкг/ мг,
валина – от 25 до 32 мкг/мг сухого остатка композиции.
2. Композиция полипептидов по п. 1 в форме лиофилизата.
3. Фармацевтическая композиция для нормализации функций головного мозга, содержащая композицию полипептидов по пп. 1, 2 и фармацевтически приемлемый носитель.
4. Применение композиции полипептидов по пп. 1, 2 для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора.
5. Применение по п. 4, отличающееся тем, что применение осуществляют путем внутривенной инъекции, внутримышечного введения или ректально.
6. Применение по пп. 4, 5, отличающееся тем, что композицию полипептидов вводят отдельно или в комбинации с другим нейропротектором.
7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что другой нейропротектор представляет собой кортексин, церебролизин, актовегин, пирацетам, фенотропил, энцефабол, глиатилин, пантокальцин, глицин, фенибут, цитиколин, пикамилон, семакс, мексидол, цитофлавин, кавинтон, оксибрал, сермион, циннаризин, трентал.
8. Применение фармацевтической композиции по п. 3 для купирования судорожного синдрома, восстановления нарушенной рефлекторной деятельности мозга, памяти, координации движений, при инсульте, излияниях в головной мозг или в качестве нейропротектора.
9. Применение по п. 8, отличающееся тем, что применение осуществляют путем внутривенной инъекции, внутримышечного введения или ректально.
10. Применение по пп. 8, 9, отличающееся тем, что композицию по п. 3 вводят отдельно или в комбинации с другим нейропротектором.
11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что другой нейропротектор представляет собой кортексин, церебролизин, актовегин, пирацетам, фенотропил, энцефабол, глиатилин, пантокальцин, глицин, фенибут, цитиколин, пикамилон, семакс, мексидол, цитофлавин, кавинтон, оксибрал, сермион, циннаризин, трентал.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019129314A RU2727167C1 (ru) | 2019-09-17 | 2019-09-17 | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019129314A RU2727167C1 (ru) | 2019-09-17 | 2019-09-17 | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2727167C1 true RU2727167C1 (ru) | 2020-07-21 |
Family
ID=71741159
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019129314A RU2727167C1 (ru) | 2019-09-17 | 2019-09-17 | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2727167C1 (ru) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0258111A2 (en) * | 1986-08-07 | 1988-03-02 | FIDIA S.p.A. | Novel neuronotrophic factor |
| RU2082429C1 (ru) * | 1992-11-27 | 1997-06-27 | Римма Ивановна Коваленко | Способ получения биологически активного пептидного препарата, обладающего адаптогенными свойствами |
| WO1998001465A1 (en) * | 1996-07-09 | 1998-01-15 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Neuroactive peptide |
| RU2275924C2 (ru) * | 2004-08-04 | 2006-05-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Способ получения комплекса биологически активных полипептидов для нормализации функций головного мозга и фармацевтическое средство на его основе |
| EA010720B1 (ru) * | 2006-01-31 | 2008-10-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Способ получения средства для поддерживающей терапии, обладающего тканеспецифической активностью, и средство, полученное данным способом (варианты) |
-
2019
- 2019-09-17 RU RU2019129314A patent/RU2727167C1/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0258111A2 (en) * | 1986-08-07 | 1988-03-02 | FIDIA S.p.A. | Novel neuronotrophic factor |
| RU2082429C1 (ru) * | 1992-11-27 | 1997-06-27 | Римма Ивановна Коваленко | Способ получения биологически активного пептидного препарата, обладающего адаптогенными свойствами |
| WO1998001465A1 (en) * | 1996-07-09 | 1998-01-15 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Neuroactive peptide |
| RU2275924C2 (ru) * | 2004-08-04 | 2006-05-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Способ получения комплекса биологически активных полипептидов для нормализации функций головного мозга и фармацевтическое средство на его основе |
| EA010720B1 (ru) * | 2006-01-31 | 2008-10-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Способ получения средства для поддерживающей терапии, обладающего тканеспецифической активностью, и средство, полученное данным способом (варианты) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Harun-Or-Rashid et al. | Structural and functional rescue of chronic metabolically stressed optic nerves through respiration | |
| EP2667715B1 (en) | Treatment of autism spectrum disorders using glycyl-l-2-methylprolyl-l-glutamic acid | |
| Sun et al. | Diminished neurosteroid sensitivity of synaptic inhibition and altered location of the α4 subunit of GABAA receptors in an animal model of epilepsy | |
| Kutsyr et al. | Gradual increase in environmental light intensity induces oxidative stress and inflammation and accelerates retinal neurodegeneration | |
| Arakaki et al. | Anti-inflammatory effects of rebamipide eyedrop administration on ocular lesions in a murine model of primary Sjögren's syndrome | |
| Gu et al. | Partial TrkB receptor activation suppresses cortical epileptogenesis through actions on parvalbumin interneurons | |
| US20150224164A1 (en) | Treatment of autism spectrum disorders using glycyl-l-2-methylprolyl-l-glumatic acid | |
| Chien et al. | Neuroprotective effect of 4-(Phenylsulfanyl) butan-2-one on optic nerve crush model in rats | |
| Wang et al. | TRIF contributes to epileptogenesis in temporal lobe epilepsy during TLR4 activation | |
| Curatolo et al. | Recombinant human IL-2 is cytotoxic to oligodendrocytes after in vitro self aggregation | |
| Yang et al. | The fungal secretory peptide micasin induces itch by activating MRGPRX1/C11/A1 on peripheral neurons | |
| RU2727167C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| RU2727154C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| RU2726854C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| RU2727586C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| RU2727162C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| RU2727159C1 (ru) | Композиция полипептидов, обладающая свойством нормализовать функции головного мозга | |
| WO2024251289A1 (en) | Use of kinase domain m7ck of trpm7 in preparation of drug for treating alzheimer's disease | |
| Li et al. | A high-salt diet aggravates retinal ischaemia/reperfusion injury | |
| CN114751957A (zh) | 一种高抗氧化可穿透血脑屏障的改善记忆力衍生肽及其应用 | |
| UA92387C2 (ru) | Пептид, который имеет стресспротекторное действие, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применение | |
| RU2301678C1 (ru) | Пептид, стимулирующий регенерацию нейронов центральной нервной системы, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения | |
| Chao et al. | Immunomodulatory protein from ganoderma microsporum protects against oxidative damages and cognitive impairments after traumatic brain injury | |
| JP2023504205A (ja) | 角膜病変の治療のための生体分子 | |
| Iwasaki et al. | Vasoactive intestinal peptide influences neurite outgrowth in cultured rat spinal cord neurons |