RU2712212C1 - Method of treating oncological diseases by drug injections - Google Patents
Method of treating oncological diseases by drug injections Download PDFInfo
- Publication number
- RU2712212C1 RU2712212C1 RU2019134449A RU2019134449A RU2712212C1 RU 2712212 C1 RU2712212 C1 RU 2712212C1 RU 2019134449 A RU2019134449 A RU 2019134449A RU 2019134449 A RU2019134449 A RU 2019134449A RU 2712212 C1 RU2712212 C1 RU 2712212C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liposomes
- suspension
- diameter
- tumor
- drug
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 8
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims abstract description 154
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 88
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 73
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 52
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims abstract description 49
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 abstract 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 51
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N doxorubicine Natural products O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 6
- RZHVVXDUYUESJI-CPWCDSSXSA-N ethyl (2s,3s)-3-[[(2s)-1-[2-(4-hydroxyphenyl)ethylamino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)[C@H]1O[C@@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)NCCC1=CC=C(O)C=C1 RZHVVXDUYUESJI-CPWCDSSXSA-N 0.000 description 6
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 4
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 4
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- OHOQEZWSNFNUSY-UHFFFAOYSA-N Cy3-bifunctional dye zwitterion Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C2=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(C)(C)C1=CC=CC(C(C1=CC(=CC=C11)S([O-])(=O)=O)(C)C)=[N+]1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O OHOQEZWSNFNUSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- LOPCOKFMJOYXHI-UHFFFAOYSA-N Cy7 dye Chemical compound C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC(C=CC=CC=CC=C3N(C4=CC=C(C=C4C3)S(O)(=O)=O)CC)=[N+](CCCCCC(O)=O)C2=C1 LOPCOKFMJOYXHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002069 magnetite nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 101000749287 Clitocybe nebularis Clitocypin Proteins 0.000 description 1
- 101000767029 Clitocybe nebularis Clitocypin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 229940094664 Cysteine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 201000007983 brain glioma Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может быть использовано при лечении онкологических заболеваний у человека и животных с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата, предварительно инкапсулированного в липосомы.The invention relates to the field of medicine and veterinary medicine and can be used in the treatment of cancer in humans and animals by injection of an antitumor drug previously encapsulated in liposomes.
Известен способ лечения онкологических заболеваний с помощью внутривенных инъекций раствора лекарственного противоопухолевого препарата - Доксорубицина пациенту с онкологическим заболеванием [Doxorubicin hydrochloride // European Pharmacopoeia. Sixth Edition: монография. 2005. С. 1389-1390.].A known method of treating cancer using intravenous injection of a solution of an anticancer drug - Doxorubicin to a patient with an oncological disease [Doxorubicin hydrochloride // European Pharmacopoeia. Sixth Edition: Monograph. 2005. S. 1389-1390.].
Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как использование внутривенных инъекций раствора лекарственного препарата для лечения онкологических заболеваний.This method contains signs that match the essential features of the proposed technical solution, such as the use of intravenous injection of a solution of a drug for the treatment of cancer.
Известен способ лечения онкологических заболеваний людей с помощью внутривенных инъекций суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом (Цисплатином) [Boulikas Т., Clinical overview on Lipoplatin™: a successful liposomal formulation of cisplatin // Expert Opinion on Investigational Drugs. 2009. V. 18(8). P. 1197-1218. doi:10.1517/13543780903114168].There is a method of treating cancer of humans by intravenous injection of a suspension of liposomes with an encapsulated antitumor drug (Cisplatin) [Boulikas T., Clinical overview on Lipoplatin ™: a successful liposomal formulation of cisplatin // Expert Opinion on Investigational Drugs. 2009.V. 18 (8). P. 1197-1218. doi: 10.1517 / 13543780903114168].
Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как лечение онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем внутривенного введения суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом.This method contains signs that match the essential features of the proposed technical solution, such as the treatment of cancer by injection of a drug by intravenous administration of a suspension of liposomes with an encapsulated antitumor drug.
Наиболее близким к заявляемому является известный способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем введения водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом [Mikhaylov G., Mikac U., Magaeva A.A., Itin V.I., Naiden E.P., Psakhye I., Babes L., Reinheckel Т., Peters C., Zeiser R., Bogyo M., Turk V., Psakhye S.G., Turk В., Vasiljeva O.. Ferri-liposomes as an MRI-visible drug delivery system for targeting tumours and their microenviroment // Nat. Nanotechnol. 2011. V. 6(9). P. 594-602. см.стр. 600, Фиг. 4 (С)] - прототип.Closest to the claimed is a known method of treating cancer by injection of a drug by introducing an aqueous suspension of liposomes of the same diameter with an encapsulated antitumor drug [Mikhaylov G., Mikac U., Magaeva AA, Itin VI, Naiden EP, Psakhye I., Babes L., Reinheckel T., Peters C., Zeiser R., Bogyo M., Turk V., Psakhye SG, Turk B., Vasiljeva O .. Ferri-liposomes as an MRI-visible drug delivery system for targeting tumours and their microenviroment // Nat. Nanotechnol. 2011. V. 6 (9). P. 594-602. see page 600, FIG. 4 (C)] is a prototype.
В данном способе осуществляют лечение онкологического заболевания рака молочной железы in vivo на ортотопически трансплантированной мышиной модели вышеуказанной опухоли (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенных мышей) с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата JPM-565, являющегося ингибитором цистеиновой протеазы катепсина и замедляющего скорость роста опухоли, предварительно инкапсулированного в липосомы со средним диаметром 92,3 нанометров (нм), имеющие липидный состав, при котором содержание яичного фосфатидилхолина составляет 95% и содержание 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] равно 5%. В данном способе лечение проводят в течение 20 дней путем внутрибрюшинного введения лекарственного препарата в количестве 100 мг/кг тела животного каждые два дня при содержании препарата JPM-565 в водосодержащей суспензии липосом 12,5 мг/мл. При этом используют липосомы, которые кроме лекарственного препарата дополнительно содержат магнитные наночастицы магнетита, имеющие средний диаметр 5-7 нм, используемые для визуализации опухоли и фокусировки (концентрирования) препарата в опухоли с помощью наложения (воздействия) внешнего постоянного магнитного поля. В данном способе об эффективности лечения судят по замедлению скорости роста опухоли. Так, для опухоли, имеющей объем 125 мм на момент начала лечения, спустя 18 дней после начала лечения объем опухоли составил 400 мм, в то время, как без использования противоопухолевого препарата (контрольная группа мышей) объем опухоли возрастал до 950 мм. Таким образом, известный способ лечения за 18 дней замедлял скорость роста опухоли в 2,4 раза.In this method, an in vivo treatment of an oncological breast cancer cancer is carried out in an orthotopically transplanted mouse model of the aforementioned tumor (MMTV-PyMT tumor cells obtained from transgenic mice) by injection of the antitumor drug JPM-565, which is an inhibitor of catepsin cysteine protease and slows down the speed growth of a tumor previously encapsulated in liposomes with an average diameter of 92.3 nanometers (nm) having a lipid composition in which the egg content phosphatidylcholine is 95% and the content of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [methoxy- (polyethylene glycol) -2000] is 5%. In this method, treatment is carried out for 20 days by intraperitoneal administration of a drug in an amount of 100 mg / kg of the animal’s body every two days when the content of the drug JPM-565 in an aqueous suspension of liposomes is 12.5 mg / ml. In this case, liposomes are used, which, in addition to the drug, additionally contain magnetic magnetite nanoparticles having an average diameter of 5-7 nm, which are used to visualize the tumor and focus (concentrate) the drug in the tumor by applying (applying) an external constant magnetic field. In this method, the effectiveness of treatment is judged by slowing down the growth rate of the tumor. So, for a tumor with a volume of 125 mm at the start of treatment, 18 days after the start of treatment, the volume of the tumor was 400 mm, while without the use of an antitumor drug (control group of mice), the volume of the tumor increased to 950 mm. Thus, the known method of treatment for 18 days slowed down the tumor growth rate by 2.4 times.
Недостатком известного способа является то, что он не позволяет обеспечить достаточно высокую эффективность лечения онкологического заболевания. Кроме того, данный способ неизбежно приводит к появлению побочного эффекта, обусловленного комбинацией относительной длительности противоопухолевого лечения и присутствием во всех липосомах кроме лекарственного препарата также наночастиц магнетита, медленно выводящихся из организма, накапливающихся в печени и требующих для их выведения из организма использования дополнительных препаратов.The disadvantage of this method is that it does not provide a sufficiently high efficiency of treatment of cancer. In addition, this method inevitably leads to a side effect due to a combination of the relative duration of the anticancer treatment and the presence in all liposomes of the drug also of magnetite nanoparticles that are slowly excreted from the body, accumulate in the liver and require the use of additional drugs for their elimination from the body.
Техническая проблема изобретения заключается в разработке способа лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, лишенного вышеуказанного недостатка.The technical problem of the invention lies in the development of a method for the treatment of cancer using injections of a drug devoid of the above disadvantage.
Технический результат изобретения состоит в повышении эффективности лечения онкологических заболеваний, уменьшении времени ответа на терапию, скорости роста опухоли и ее объема.The technical result of the invention is to increase the effectiveness of the treatment of cancer, reducing the response time to therapy, tumor growth rate and its volume.
Предварительно были проведены эксперименты с различными способами лечения онкологических заболеваний, которые показали, что указанный технический результат достигается в том случае, когда в способе лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, включающий введение водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом, перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят внутривенно смесь трех суспензий липосом различного диаметра, имеющих одинаковый липидный состав, причем каждая липосома одного диаметра содержит один флуоресцентный краситель, причем красители подобраны так, что пики максимального испускания у них полностью не накладываются друг на друга, при этом первую суспензию получают путем пропускания суспензии липосом, содержащей один из красителей, через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм, вторую суспензию получают путем пропускания суспензии липосом, содержащих другой краситель, через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм, третью суспензию получают путем пропускания суспензии липосом, содержащих третий краситель, через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм, после введения смеси суспензий липосом определяют интенсивность флуоресценции липосом, накопившихся в опухолевой ткани, в зависимости от диаметра липосом, затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани, и лекарственный препарат вводят внутривенно, инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.Previously, experiments were carried out with various methods of treating cancer, which showed that the technical result is achieved when, in the method of treating cancer by injection of a drug, comprising administering an aqueous suspension of liposomes of the same diameter with an encapsulated antitumor drug before administration suspension of liposomes of the same diameter with an encapsulated antitumor drug an atom is injected intravenously with a mixture of three suspensions of liposomes of different diameters having the same lipid composition, each liposome of one diameter containing one fluorescent dye, the dyes being selected so that the peaks of maximum emission from them do not completely overlap, and the first suspension is obtained by passing suspension of liposomes containing one of the dyes through an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 200 nm, the second suspension is obtained by passing a suspension of liposomes containing x another dye, through an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 100 nm, a third suspension is obtained by passing a suspension of liposomes containing a third dye, through the extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 50 nm, after the introduction of a mixture of suspensions of liposomes, the fluorescence intensity of liposomes accumulated in tumor tissue, depending on the diameter of the liposomes, then the diameter of the liposomes with the highest degree of accumulation in the tumor tissue is selected, and the drug is administered intravenously encapsulated in lipids osomas with the same lipid composition and diameter, ensuring their greatest degree of accumulation in the tumor tissue.
Предлагаемый способ является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе.The proposed method is new and is not described in the patent and scientific literature.
Предлагаемый способ может быть использован как для лечения различных онкологических заболеваний поверхностной или глубокой локализации, так и на кожных покровах, например, таких как рак молочной железы, глиома, рак простаты и т.д. При этом для лечения могут быть использованы различные лекарственные препараты, например, такие, как JPM-565, Цисплатин, Иринотекан и т.д. Следует отметить, что в предлагаемом способе используемые лекарственные препараты обязательно должны селективно (избирательно) действовать на подлежащий лечению тип опухоли и быть предварительно инкапсулированы в липосомы, причем для лечения онкологических заболеваний пациенту или больному животному необходимо вводить водосодержащую суспензию таких липосом внутривенно, поскольку механизм всасывания липосом из желудочно-кишечного тракта при пероральном их введении до конца не ясен. При этом липосомы могут быстро деградировать под действием желудочного сока либо ферментов желчи, в результате чего лекарственный препарат, не обладающий селективностью по отношению к клеткам опухоли, но обладающий высокой токсичностью (например, Доксорубицин), неизбежно будет воздействовать как на опухолевые клетки, так и на здоровые клетки организма. Внутримышечное введение используемых липосом также может быть нецелесообразным ввиду того, что при этом создается депо липосом в месте введения, а скорость элиминации (выхода из мышечной ткани в кровоток) из депо зависит от размера липосом и составляет от нескольких часов (при диаметре липосом менее 50 нм) до нескольких дней (при диаметре липосом более 50 нм), что замедляет процесс лечения, а в некоторых случаях даже при минимальном диаметре липосом 30-50 нм такие липосомы ввиду малого диаметра капилляров организма могут вообще не дойти из мышцы до пораженного опухолью органа.The proposed method can be used both for the treatment of various oncological diseases of superficial or deep localization, and on the skin, for example, such as breast cancer, glioma, prostate cancer, etc. Moreover, various medications can be used for treatment, for example, such as JPM-565, Cisplatin, Irinotecan, etc. It should be noted that in the proposed method, the drugs used must necessarily selectively (selectively) act on the type of tumor to be treated and be pre-encapsulated in liposomes, and for the treatment of oncological diseases, a patient or sick animal must be injected with an aqueous suspension of such liposomes intravenously, since the liposome absorption mechanism from the gastrointestinal tract when administered orally, it is not completely clear. In this case, liposomes can quickly degrade under the influence of gastric juice or bile enzymes, as a result of which a drug that does not have selectivity for tumor cells but has high toxicity (for example, doxorubicin) will inevitably affect both tumor cells and healthy body cells. Intramuscular administration of used liposomes may also be impractical due to the fact that a liposome depot is created at the injection site, and the rate of elimination (exit from muscle tissue into the bloodstream) from the depot depends on the size of the liposomes and is several hours (with liposome diameters less than 50 nm ) up to several days (with a liposome diameter of more than 50 nm), which slows down the treatment process, and in some cases even with a minimum liposome diameter of 30-50 nm, such liposomes may not reach the muscles at all due to the small diameter of the capillaries of the body s to the affected organ.
В предлагаемом техническом решении так же, как и в прототипе, используют водосодержащую суспензию липосом, которая в качестве дисперсионной среды может содержать воду или водные растворы различных добавок, например, таких, как компоненты буфера, соли, например, NaCl, сахара и т.д. При этом концентрация липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом в каждом курсе лечения может быть различна.In the proposed technical solution, as in the prototype, use an aqueous suspension of liposomes, which as a dispersion medium may contain water or aqueous solutions of various additives, for example, such as buffer components, salts, for example, NaCl, sugar, etc. . In this case, the concentration of liposomes with the drug encapsulated in them in each course of treatment may be different.
Следует отметить, что получение липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом описано в литературе [см.прототип]. Кроме того, коммерчески доступен ряд противоопухолевых препаратов, которые уже инкапсулированы в липосомы [Upendra Bulbake, Sindhu Doppalapudi, Nagavendra Kommineni and Wahid Khan. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review // Pharmaceutics. 2017. V. 9. Р. 1-33].It should be noted that the preparation of liposomes with a drug encapsulated in them is described in the literature [see prototype]. In addition, a number of anticancer drugs that are already encapsulated in liposomes are available commercially [Upendra Bulbake, Sindhu Doppalapudi, Nagavendra Kommineni and Wahid Khan. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review // Pharmaceutics. 2017. V. 9. R. 1-33].
Липидный состав используемых липосом может быть различен и определяется качественным и количественным соотношением смеси липидов, используемых в процессе получения липосом, однако в пределах одного курса лечения липидный состав всегда должен быть одинаков, поскольку степень и скорость накопления липосом зависят от их липидного состава. В предлагаемом способе перед курсом лечения больного человека или животного им предварительно необходимо внутривенно ввести смесь трех суспензий липосом различного диаметра, имеющих одинаковый липидный состав, которые могут быть получены путем пропускания суспенизии липосом через экструдер, снабженный мембраной с круглыми порами, диаметр которых выбран из группы, включающей 200, 100 и 50 нм. Экспериментально было показано, что полученные липосомы имеют сферическую форму и достаточно узкое распределение по размеру, причем их средний диаметр близок к диаметру пор в использованной мембране. Вводимые липосомы не должны содержать лекарственного препарата и каждая липосома одного диаметра должна содержать один флуоресцентный краситель, причем красители подобраны так, что пики максимального испускания у них полностью не накладываются друг на друга. Флуоресцентный краситель, вводимый в одну из липосом, может быть выбран, например, из группы, включающей красители с коммерческими (фирменными) названиями DiO, Alexa Fluor 488, Су3 и т.д. Флуоресцентный краситель, вводимый в липосому другого диаметра, может быть выбран, например, из другой группы, включающей красители с коммерческими названиями Dil, Alexa Fluor 568, Су5 и т.д. Флуоресцентный краситель, вводимый в третью липосому с другим диаметром, может быть выбран, например, из третьей группы, включающей красители с коммерческими названиями DiD, Alexa Fluor 647, Су7 и т.д. Вышеописанные флуоресцентные красители подобраны так, что пики максимального испускания у любого красителя, находящегося в одной из групп, полностью не накладывается на пик максимального испускания красителя, находящегося в любой другой группе. Все вышеуказанные красители коммерчески доступны.The lipid composition of the liposomes used can be different and is determined by the qualitative and quantitative ratio of the lipid mixture used in the process of liposome production, however, within the same course of treatment, the lipid composition should always be the same, since the degree and rate of accumulation of liposomes depend on their lipid composition. In the proposed method, before a course of treatment of a sick person or animal, they first need to intravenously administer a mixture of three suspensions of liposomes of different diameters having the same lipid composition, which can be obtained by passing a suspension of liposomes through an extruder equipped with a round-pore membrane, the diameter of which is selected from the group including 200, 100 and 50 nm. It was experimentally shown that the obtained liposomes have a spherical shape and a fairly narrow size distribution, with their average diameter being close to the pore diameter in the used membrane. The introduced liposomes should not contain a drug and each liposome of the same diameter should contain one fluorescent dye, and the dyes are selected so that the peaks of maximum emission they do not completely overlap. A fluorescent dye introduced into one of the liposomes can be selected, for example, from the group comprising dyes with the commercial (company) names DiO, Alexa Fluor 488, Cy3, etc. A fluorescent dye introduced into a liposome of a different diameter can be selected, for example, from another group including dyes with the commercial names Dil, Alexa Fluor 568, Cy5, etc. The fluorescent dye introduced into the third liposome with a different diameter can be selected, for example, from the third group, including dyes with the commercial names DiD, Alexa Fluor 647, Cy7, etc. The above-described fluorescent dyes are selected so that the peaks of maximum emission from any dye in one of the groups does not completely overlap with the peak of maximum emission of a dye located in any other group. All of the above dyes are commercially available.
При реализации способа каждая суспензия липосом может быть получена методом обращения фаз с последующей гомогенизацией суспензии методом экструзии. Загрузку красителя в липосомы проводят на стадии получения липосом. Гидрофобные красители (например, DiD) добавляют к липидам перед переводом липосом из органической фазы в водную, в то время как гидрофильные красители (например, Alexa Fluor 488) добавляют к липидам на стадии формирования липосом. После смешивания полученную суспензию липосом с флуоресцентным красителем проверяют на наличие свободного красителя и при необходимости отмывают не связавшийся с липосомами краситель методом гель-фильтрации.When implementing the method, each suspension of liposomes can be obtained by phase reversal followed by homogenization of the suspension by extrusion. The loading of dye into liposomes is carried out at the stage of liposome production. Hydrophobic dyes (e.g., DiD) are added to lipids before the liposomes are transferred from the organic phase to aqueous, while hydrophilic dyes (e.g., Alexa Fluor 488) are added to lipids at the liposome formation stage. After mixing, the resulting suspension of liposomes with a fluorescent dye is checked for the presence of a free dye and, if necessary, the dye not bound to the liposomes is washed by gel filtration.
При изготовлении смеси суспензий липосом различного диаметра, несущих различные флуоресцентные красители, следят, чтобы сохранялась концентрация липидов и при выборе концентрации каждого красителя в конечном объеме суспензии учитывают характеристики флуоресцентных красителей так, чтобы иметь возможность нормировать измеренное значения яркости флуоресценции опухолевой ткани на введенную дозу каждого красителя, измеренное, например, с использованием спектрофотометрии.In the manufacture of a mixture of liposome suspensions of various diameters carrying different fluorescent dyes, ensure that the lipid concentration is maintained and, when choosing the concentration of each dye in the final volume of the suspension, the characteristics of the fluorescent dyes are taken into account so as to be able to normalize the measured fluorescence brightness of the tumor tissue to the administered dose of each dye measured, for example, using spectrophotometry.
В предлагаемом способе после внутривенного введения смеси трех суспензий липосом различного диаметра, имеющих одинаковый липидный состав, с помощью системы визуализации IVIS и специального программного обеспечения определяют наибольшую степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом. Накопление липосом в опухолевой ткани обусловлено известным эффектом повышенной проницаемости кровеносных сосудов опухоли и удерживания наночастиц (EPR-эффектом) [Nichols J.W.; Bae Y. Н. EPR: Evidence and fallacy // Journal of Controlled Release. 2014. V. 190. P. 451-464]. После этого выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани и лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.In the proposed method, after intravenous administration of a mixture of three suspensions of liposomes of different diameters with the same lipid composition, using the IVIS imaging system and special software, the greatest degree of liposome accumulation in the tumor tissue is determined depending on the diameter of the liposomes. The accumulation of liposomes in the tumor tissue is due to the known effect of increased permeability of the blood vessels of the tumor and retention of the nanoparticles (EPR effect) [Nichols J.W .; Bae Y. N. EPR: Evidence and fallacy // Journal of Controlled Release. 2014. V. 190. P. 451-464]. After that, the diameter of the liposomes with the highest degree of accumulation in the tumor tissue is selected and the drug is administered intravenously encapsulated in liposomes with the same lipid composition and diameter, which ensures their greatest degree of accumulation in the tumor tissue.
Из научно-технической литературы известно, что накопление липосом зависит как от размеров самих липосом, так и от размера пор сосудов в опухолевой ткани и стадии онкологического заболевания. Поскольку накопление липосом варьируется от пациента к пациенту, заранее нельзя достоверно предсказать оптимальную методику лечения [Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А., Воробьев С.И., Певгов В.Г., Смирнова З.С., Оборотова Н.А., Лукьянец Е.А., Барышников А.Ю. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. 2007. Т. 2. С. 45-49]. При использовании описанного в прототипе способа в клинической практике могут наблюдаться случаи нерационального введения лекарственного препарата, инкапсулированного в липосомы, одновременно содержащие магнитные наночастицы. Учитывая относительную длительность курса лечения вышеописанными противоопухолевыми препаратами это неизбежно может приводить к накоплению в организме критических концентраций железа и лекарственного препарата, требующих дополнительных манипуляций по их выведению из организма, что осложняет известный способ лечения. В предложенном способе вводят суспензии липосом, не содержащие магнитные наночастицы на основе железа, что исключает вероятность накопления предельно допустимой концентрации железа в организме, сокращает курс лечения и повышает эффективность лечения за счет оптимального выбора диаметра используемых в процессе лечения липосом. Используемые в предлагаемом способе различные флуоресцентные красители в составе липосом малотоксичны и вводятся всего один раз.From the scientific and technical literature it is known that the accumulation of liposomes depends both on the size of the liposomes themselves and on the pore size of the vessels in the tumor tissue and the stage of cancer. Since the accumulation of liposomes varies from patient to patient, it is impossible to reliably predict the optimal treatment technique in advance [Gurevich D.G., Meerovich I.G., Meerovich G.A., Vorobyev S.I., Pevgov V.G., Smirnova Z. S., Oborotova N.A., Lukyanets E.A., Baryshnikov A.Yu. The effect of liposome sizes on the level and selectivity of thiosens accumulation in a tumor // Russian Biotherapeutic Journal. 2007.Vol. 2. P. 45-49]. When using the method described in the prototype in clinical practice, cases of irrational administration of a drug encapsulated in liposomes simultaneously containing magnetic nanoparticles can be observed. Given the relative duration of the course of treatment with the antitumor drugs described above, this can inevitably lead to the accumulation in the body of critical concentrations of iron and a drug, requiring additional manipulations to remove them from the body, which complicates the known method of treatment. In the proposed method, liposome suspensions are introduced that do not contain iron-based magnetic nanoparticles, which eliminates the possibility of accumulation of the maximum permissible concentration of iron in the body, reduces the course of treatment and increases the effectiveness of treatment due to the optimal choice of the diameter of liposomes used in the treatment process. Used in the proposed method, various fluorescent dyes in the composition of liposomes are low toxic and are introduced only once.
При реализации предлагаемого способа диаметр и степень полидисперсности используемых липосом контролируют методом динамического светорассеяния.When implementing the proposed method, the diameter and degree of polydispersity of the used liposomes are controlled by dynamic light scattering.
Одновременное введение смеси суспензий липосом различного размера не создает конкуренции в процессе накопления липосом в опухолевой ткани ввиду того, что количество клеток в опухоли не менее 1 миллиона и быстро растет в процессе ее развития.The simultaneous introduction of a mixture of suspensions of liposomes of various sizes does not create competition in the process of accumulation of liposomes in the tumor tissue due to the fact that the number of cells in the tumor is at least 1 million and grows rapidly during its development.
Интервал времени между введением смеси суспензий липосом и моментом определения наибольшей степени накопления липосом в опухолевой ткани зависит от типа опухоли, используемых красителей и т.д., и может составлять, например, 6-24 ч.The time interval between the introduction of a mixture of liposome suspensions and the moment of determining the highest degree of liposome accumulation in the tumor tissue depends on the type of tumor, the dyes used, etc., and can be, for example, 6-24 hours.
Об эффективности лечения судят либо по уменьшению скорости роста опухоли в процессе лечения, либо по уменьшению объема опухоли в процессе лечения. При этом объем опухоли рассчитывают по формуле V=(а×b2) / 2, где а и b - это самый большой и самый маленький диаметры опухоли. Начинать лечение целесообразно непосредственно после принятия решения о наиболее подходящем диаметре липосом с лекарственным препаратом. Для этого необходимо иметь заранее приготовленные лекарственные препараты, инкапсулированные в липосомы различного диаметра, чтобы не тратить время на их приготовление и сразу перейти к лечению.The effectiveness of treatment is judged either by a decrease in the rate of tumor growth during treatment, or by a decrease in tumor volume during treatment. The tumor volume is calculated by the formula V = (a × b 2 ) / 2, where a and b are the largest and smallest tumor diameters. It is advisable to start treatment immediately after deciding on the most suitable diameter of liposomes with the drug. To do this, you must have pre-prepared drugs encapsulated in liposomes of various diameters so as not to waste time on their preparation and immediately proceed to treatment.
Преимущества предлагаемого способа иллюстрируют следующие примеры.The advantages of the proposed method are illustrated by the following examples.
Пример 1.Example 1
В опыте используют подопытных животных - иммунокомпетентных FVB/N мышей с привитой опухолью молочной железы мыши (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенной мыши). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли.In the experiment, experimental animals were used - immunocompetent FVB / N mice with inoculated mouse breast tumors (tumor cells of the MMTV-PyMT line obtained from transgenic mice). Experimental animals with a grafted tumor are divided into two groups of 6 animals each - control (mice that are not treated) and experimental (mice that are treated). The effectiveness of the treatment of the disease is monitored by slowing the growth rate of the tumor.
В качестве флуоресцентных красителей используют красители с коммерческими названиями DiO, DiI и DiD, пики максимального испускания у которых полностью не накладываются друг на друга. Навеску красителя DiO (0,4 мг) растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО), а далее в 7,5 мл хлороформа. Навеску красителя DiI (0,3 мг) растворяют в ДМСО, а далее в 10 мл хлороформа. Навеску красителя DiD (0,35 мг) растворяют в ДМСО, а далее в 8,6 мл хлороформа. Липосомы с тем же липидным составом, что и в прототипе, получают методом обращения фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 95 мг фосфатидилхолина и 5 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 7,5 мл раствора красителя DiO. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают ультразвуком (УЗ) с частотой 16 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7.4) и перемешивают до получения суспензии. Липофильный краситель DiO полностью входит в состав липосом, отмывка не связавшегося красителя не требуется. Для получения первой суспензии липосом с красителем DiO вышеописанную суспензию пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Вторую суспензию липосом с красителем DiI получают аналогичным образом, пропуская через экструдер с мембраной с диаметром пор 100 нм. Третью суспензию липосом с красителем DiD также получают аналогично путем пропускания через экструдер с мембраной с диаметром пор 50 нм. Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 196, 108 и 52 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1. Смесь трех суспензий липосом различного диаметра получают путем смешения 1 мл первой суспензии с 1 мл второй суспензии и 1 мл третьей суспензии.As fluorescent dyes, dyes with the commercial names DiO, DiI and DiD are used, the peaks of maximum emission in which do not completely overlap each other. A portion of the dye DiO (0.4 mg) is dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and then in 7.5 ml of chloroform. A portion of DiI dye (0.3 mg) is dissolved in DMSO, and then in 10 ml of chloroform. A portion of the dye DiD (0.35 mg) is dissolved in DMSO, and then in 8.6 ml of chloroform. Liposomes with the same lipid composition as in the prototype are prepared by phase reversal by dispersing 95 mg of phosphatidylcholine and 5 mg of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [methoxy (polyethylene glycol) - in a round bottom flask 2000] in a mixture containing 7.5 ml of chloroform and 2.5 ml of methanol, after which 7.5 ml of DiO dye solution is added to the resulting solution. The resulting mixture is treated with ultrasound (ultrasound) for 5 min with a frequency of 16 kHz in an ultrasonic bath until a stable colloidal solution is formed, then organic solvents are distilled off on a rotary evaporator. To the resulting gel, add 3 ml of aqueous 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4) and mix until a suspension is obtained. The lipophilic dye DiO is fully incorporated into liposomes; washing of unbound dye is not required. To obtain the first suspension of liposomes with DiO dye, the above suspension is passed through an extruder with a membrane with a pore diameter of 200 nm. A second suspension of liposomes with DiI dye is obtained in a similar manner by passing through a membrane extruder with a pore diameter of 100 nm. A third suspension of DiD dye liposomes is also prepared similarly by passing through a membrane extruder with a pore diameter of 50 nm. Using dynamic light scattering, it was shown that three different liposome dispersions with average diameters of 196, 108 and 52 nm, with a polydispersity index equal to or less than 0.1, were obtained in the experiment. A mixture of three suspensions of liposomes of different diameters is obtained by mixing 1 ml of the first suspension with 1 ml of the second suspension and 1 ml of the third suspension.
Перед началом лечения на 5-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл смеси суспензий липосом различного диаметра, затем через 24 ч с помощью системы IVIS определяют, что краситель DiI дает максимальный сигнал в области опухолевой ткани, из чего делают вывод, что максимальную степень накопления имеют липосомы с диаметром 108 нм.Before treatment begins, on the 5th day after the grafting of the tumor, the animals from the experimental group are intravenously injected with 150 μl of a mixture of liposome suspensions of various diameters, then after 24 hours using the IVIS system it is determined that the DiI dye gives the maximum signal in the area of the tumor tissue, from which we conclude that the maximum degree of accumulation are liposomes with a diameter of 108 nm.
После этого с использованием экструдера, снабженного мембраной с диаметром пор 100 нм, получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 100 нм, не содержащие флуоресцентного красителя, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - ингибитор цистеиновой протеазы катепсина JPM-565. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол в соотношении 3:1 по объему до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном растворе противоопухолевого препарата, содержащего 12,5 мг JPM-565 в 1 мл раствора, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер. Для очистки от не загрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).After that, using an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 100 nm, liposomes with the above lipid composition and an optimal average diameter close to 100 nm are obtained, not containing a fluorescent dye, but containing the antitumor drug cathepsin cysteine protease inhibitor JPM-565 inside. Obtaining these liposomes is carried out by evaporation on a rotary evaporator of a solution of lipids in a mixture of chloroform-methanol in a ratio of 3: 1 by volume until a uniform film is formed on the walls of the flask. The resulting film was suspended in an aqueous solution of an antitumor preparation containing 12.5 mg of JPM-565 in 1 ml of a solution until a liposome suspension formed, which was then passed through an extruder. To purify the antitumor preparation which was not loaded into the liposomes, the suspension obtained was passed through a NAP-25 brand desalting column (GE Healthcare illustra ™ NAP ™ Columns) with a mobile phase, which was 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4).
Лечение подопытных животных так же, как и в прототипе, проводят после того, как объем опухоли достигнет 125 мм, и начинают через 24 ч после инъекции смеси суспензии липосом различного диаметра. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 100 мг/кг тела мыши (по количеству JPM-565). Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Внутривенные инъекции проводят каждые два дня, при этом общее количество инъекций в каждой группе мышей было равно 10. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.The treatment of experimental animals, as in the prototype, is carried out after the tumor volume reaches 125 mm, and begin 24 hours after injection of a mixture of a suspension of liposomes of various diameters. The treatment is carried out by intravenous administration of an aqueous suspension of liposomes containing an antitumor preparation in a dose of 100 mg / kg of the mouse body (in the amount of JPM-565). In the control group of mice, instead of a suspension of liposomes with a drug, the above solution of sodium phosphate buffer is intravenously administered. Intravenous injections are performed every two days, with the total number of injections in each group of mice being 10. The tumor volume in mice is measured every day and the treatment efficacy is judged by the change in the tumor growth rate.
Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 18-й день лечения составлял 200 мм, что в 4,75 раза меньше, чем у контрольной группы мышей, не получающих лекарство. При этом достигнутый в прототипе эффект замедления скорости роста опухоли в 2,4 раза в нашем случае наблюдают уже на 12-й день лечения.Experience showed that in the experimental group of mice, the tumor volume on the 18th day of treatment was 200 mm, which is 4.75 times less than in the control group of mice not receiving the drug. Moreover, the effect achieved in the prototype of the effect of slowing down the tumor growth rate by 2.4 times in our case is already observed on the 12th day of treatment.
Пример 2.Example 2
В опыте используют подопытных животных - мышей с привитой опухолью предстательной железы человека (клеточная линия 22Rv1). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли.In the experiment, experimental animals are used - mice vaccinated with a tumor of the human prostate gland (cell line 22Rv1). Experimental animals with a grafted tumor are divided into two groups of 6 animals each - control (mice that are not treated) and experimental (mice that are treated). The effectiveness of the treatment of the disease is monitored by slowing the rate of tumor growth.
Липосомы различного диаметра получают через липидную пленку. В качестве флуоресцентных красителей используют красители с коммерческими названиями Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 568 и Alexa Fluor 647, пики максимального испускания у которых полностью не накладываются друг на друга. Навеску красителя Alexa Fluor 488 (0,1 мг) растворяют в 3 мл натрий-фосфатного буфера PBS. Навеску красителя Alexa Fluor 568 (0,25 мг) растворяют в 3 мл натрий-фосфатного буфера PBS. Навеску красителя Alexa Fluor 647 (0,3 мг) растворяют в 3 мл натрий-фосфатного буфера PBS. Липосомы получают путем диспергирования в круглодонной колбе 80 мг лецитина, 15 мг холестерина и 5 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола с последующим упариванием на роторном испарителе полученного раствора липидов до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют 3 мл водосодержащего раствора Alexa Fluor 488 в 10 мМ натрий-фосфатном буфере (рН=7.4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения первой суспензии липосом с красителем Alexa Fluor 488 вышеописанную суспензию пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Для очистки от не загрузившегося в липосомы флуоресцентного красителя полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4). Вторую суспензию липосом с красителем Alexa Fluor 568 получают аналогичным образом, пропуская через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Третью суспензию липосом с красителем Alexa Fluor 647 также получают аналогично, путем пропускания через экструдер с мембраной с диаметром пор 50 нм. Методом динамического светорассеяния было показано, что в ходе опыта были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 203, 98 и 53 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.Liposomes of various diameters are obtained through a lipid film. As fluorescent dyes, dyes with the commercial names Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 568 and Alexa Fluor 647 are used, the peaks of maximum emission in which do not completely overlap each other. A portion of the dye Alexa Fluor 488 (0.1 mg) was dissolved in 3 ml of sodium phosphate buffer PBS. A portion of the dye Alexa Fluor 568 (0.25 mg) is dissolved in 3 ml of sodium phosphate buffer PBS. A portion of the dye Alexa Fluor 647 (0.3 mg) is dissolved in 3 ml of sodium phosphate buffer PBS. Liposomes are prepared by dispersing in a round bottom flask 80 mg of lecithin, 15 mg of cholesterol and 5 mg of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [methoxy- (polyethylene glycol) -2000] in a mixture containing 7.5 ml chloroform and 2.5 ml of methanol, followed by evaporation on a rotary evaporator of the resulting lipid solution until a uniform film forms on the walls of the flask. The resulting film was suspended in 3 ml of an aqueous solution of Alexa Fluor 488 in 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4) and mixed until a suspension was obtained. To obtain the first suspension of liposomes with Alexa Fluor 488 dye, the above suspension is passed through an extruder with a membrane with a pore diameter of 200 nm. To purify the fluorescent dye that was not loaded into the liposomes, the resulting suspension was passed through a NAP-25 brand desalting column with a mobile phase, which was 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4). A second suspension of liposomes with Alexa Fluor 568 is prepared in a similar manner by passing through a membrane extruder with a different pore diameter of 100 nm. A third suspension of liposomes with Alexa Fluor 647 dye is also prepared in a similar manner by passing through a membrane extruder with a pore diameter of 50 nm. Using dynamic light scattering, it was shown that three different liposome dispersions with average diameters of 203, 98, and 53 nm, with a polydispersity index equal to or less than 0.1 were obtained during the experiment.
Смесь трех суспензий липосом различного диаметра получают путем смешения 1 мл первой суспензии с 1 мл второй суспензии и 1 мл третьей суспензии.A mixture of three suspensions of liposomes of different diameters is obtained by mixing 1 ml of the first suspension with 1 ml of the second suspension and 1 ml of the third suspension.
Перед началом лечения на 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл смеси суспензий липосом различного диаметра, затем через 6 ч с помощью системы IVIS определяют что краситель Alexa Fluor 488 дает максимальный сигнал в области опухолевой ткани, из чего делают вывод что максимальную степень накопления имеют липосомы с диаметром 203 нм.Before starting treatment on the 7th day after grafting the tumor, the animals from the experimental group were injected intravenously with 150 μl of a mixture of liposome suspensions of various diameters, then after 6 hours using IVIS system it was determined that Alexa Fluor 488 dye gave the maximum signal in the area of the tumor tissue, from which the conclusion is that liposomes with a diameter of 203 nm have a maximum degree of accumulation.
Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, полученные с использованием экструдера, снабженного мембраной с диаметром пор 200 нм.A comparison of the results showed that liposomes obtained using an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 200 nm possess the highest degree of accumulation in the tumor tissue.
После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 200 нм, не содержащие флуоресцентного красителя, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - Доксорубицин. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют 120 мМ водным раствором (NH4)2SO4, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм. Далее полученную суспензию очищают от сульфата аммония во внешнем буфере с помощью обессоливающей колонки марки NAP-25, затем к ней добавляют водный раствор доксорубицина с концентрацией 12 мг/мл и инкубируют в течение 2 ч. Для очистки от не загрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).After that, liposomes with the above lipid composition and an optimal average diameter close to 200 nm are obtained, not containing a fluorescent dye, but containing the antitumor drug Doxorubicin inside. Obtaining these liposomes is carried out by evaporation on a rotary evaporator of a lipid solution in a mixture of chloroform-methanol, taken in a ratio of 3: 1 by volume, until a uniform film is formed on the walls of the flask. The resulting film was suspended in a 120 mM aqueous solution of (NH 4 ) 2 SO 4 until a liposome suspension formed, which was then passed through an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 200 nm. Next, the resulting suspension is purified from ammonium sulfate in an external buffer using a NAP-25 brand desalting column, then an aqueous solution of doxorubicin with a concentration of 12 mg / ml is added to it and incubated for 2 hours. The suspension obtained is not loaded into the liposomes of the antitumor preparation pass through a desalting column brand NAP-25 with a mobile phase, which is a 10 mm sodium phosphate buffer (pH = 7.4).
Лечение подопытных животных начинают через 20 ч после инъекции смеси суспензий липосом различного диаметра. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 9 мг/кг тела животного (по концентрации доксорубицина). Суспензию липосом внутривенно вводят на 7, 12 и 17 дни после имплантации опухоли. Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по уменьшению объема опухоли.Treatment of experimental animals begins 20 hours after injection of a mixture of suspensions of liposomes of various diameters. The treatment is carried out by intravenous administration of an aqueous suspension of liposomes containing an antitumor drug at a dose of 9 mg / kg of the animal’s body (according to the concentration of doxorubicin). A suspension of liposomes is intravenously administered on days 7, 12, and 17 after tumor implantation. In the control group of mice, instead of a suspension of liposomes with a drug, the above solution of sodium phosphate buffer is intravenously administered. Tumor volume in mice is measured every day and treatment efficacy is judged by the decrease in tumor volume.
Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 17-й день лечения оказался в 5,5 раза меньше, чем у контрольной группы мышей. При этом в среднем опухоль у мышей, получающих противоопухолевый препарат, с момента лечения уменьшилась на 82%.Experience showed that in the experimental group of mice, the tumor volume on the 17th day of treatment was 5.5 times less than in the control group of mice. Moreover, on average, the tumor in mice receiving the antitumor drug decreased by 82% from the time of treatment.
Пример 3.Example 3
В опыте используют подопытных животных - крыс с привитой опухолью глиомы головного мозга (клеточная линия С6). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (крысы, которых не лечат) и опытную (крысы, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания судят по замедлению скорости роста опухоли.In the experiment, experimental animals are used - rats vaccinated with a brain glioma tumor (cell line C6). Experimental animals with a vaccinated tumor are divided into two groups of 6 individuals in each - control (rats that are not treated) and experimental (rats that are treated). The effectiveness of the treatment of the disease is judged by the slowdown of the tumor growth rate.
Липосомы различного диаметра получают аналогично Примеру 2. В качестве флуоресцентных красителей используют красители с коммерческими названиями коммерческими названиями Су3, Су5 и Су7, пики максимального испускания у которых полностью не накладываются друг на друга. Перед введением в липосомы навеску красителя Су3 (0,7 мг) растворяют в 2 мл натрий-фосфатного буфера PBS. Навеску красителя Су5 (0,8 мг) растворяют в 2 мл натрий-фосфатного буфера PBS. Навеску красителя Су7 (0,6 мг) растворяют в 2 мл натрий-фосфатного буфера PBS.Liposomes of different diameters are obtained analogously to Example 2. As fluorescent dyes, dyes with commercial names by the commercial names Su3, Su5 and Su7 are used, the peaks of maximum emission which do not completely overlap each other. Before introduction into the liposomes, a sample of Cy3 dye (0.7 mg) is dissolved in 2 ml of PBS sodium phosphate buffer. A portion of the Cu5 dye (0.8 mg) is dissolved in 2 ml of PBS sodium phosphate buffer. A portion of the dye Su7 (0.6 mg) is dissolved in 2 ml of sodium phosphate buffer PBS.
Липосомы получают фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 250 мг фосфатидилхолина, 225 мг дипальмитоилфосфатидилхолина и 25 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 37,5 мл хлороформа и 12,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 2 мл раствора красителя Су3. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают УЗ с частотой 16 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7.4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения первой суспензии липосом с красителем Су3 вышеописанную суспензию пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Для очистки от не загрузившегося в липосомы флуоресцентного красителя полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4). Вторую суспензию липосом с красителем Су5 получают аналогичным образом, пропуская через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Третью суспензию липосом с красителем Су7 также получают аналогично, путем пропускания через экструдер с мембраной с диаметром пор 50 нм. Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 212, 96 и 48 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1. Смесь трех суспензий липосом различного диаметра получают путем смешения 2 мл первой суспензии с 2 мл второй суспензии и 2 мл третьей суспензии.Liposomes are prepared by dispersing in a round bottom flask 250 mg of phosphatidylcholine, 225 mg of dipalmitoylphosphatidylcholine and 25 mg of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N- [methoxy- (polyethylene glycol) -2000] in a mixture containing 37.5 ml of chloroform and 12.5 ml of methanol, after which 2 ml of Cy3 dye solution is added to the resulting solution. The resulting mixture is treated with ultrasound for 5 minutes with a frequency of 16 kHz in an ultrasonic bath until a stable colloidal solution is formed, then organic solvents are distilled off on a rotary evaporator. To the resulting gel, add 3 ml of aqueous 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4) and mix until a suspension is obtained. To obtain the first suspension of liposomes with Cy3 dye, the above suspension is passed through an extruder with a membrane with a pore diameter of 200 nm. To purify the fluorescent dye that was not loaded into the liposomes, the resulting suspension was passed through a NAP-25 brand desalting column with a mobile phase, which was 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4). The second suspension of liposomes with Cy5 dye is obtained in a similar manner by passing through a membrane extruder with a different pore diameter of 100 nm. A third suspension of liposomes with Cy7 dye is also obtained in the same way by passing through a membrane extruder with a pore diameter of 50 nm. Using dynamic light scattering, it was shown that three different liposome dispersions with average diameters of 212, 96, and 48 nm, with a polydispersity index equal to or less than 0.1, were obtained in the experiment. A mixture of three suspensions of liposomes of different diameters is obtained by mixing 2 ml of the first suspension with 2 ml of the second suspension and 2 ml of the third suspension.
Перед началом лечения на 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 600 мкл смеси суспензий липосом различного диаметра, затем через 10 ч с помощью системы IVIS определяют что краситель Су7 дает максимальный сигнал в области опухолевой ткани, из чего делают вывод что максимальную степень накопления имеют липосомы с диаметром 48 нм.Before the start of treatment, on the 7th day after the grafting of the tumor, the animals from the experimental group were intravenously injected with 600 μl of a mixture of liposome suspensions of various diameters, then after 10 hours using the IVIS system it was determined that Cy7 dye gives the maximum signal in the area of the tumor tissue, from which it is concluded liposomes with a diameter of 48 nm have a maximum degree of accumulation.
Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, полученные с помощью экструдера, снабженного мембраной с диаметром пор 50 нм.A comparison of the results showed that liposomes obtained using an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 50 nm have the highest degree of accumulation in the tumor tissue.
После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 50 нм, не содержащие флуоресцентного красителя, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - Иринотекан. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора вышеуказанных липидов общей массой липидов 4,0 г в смеси хлороформ-метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном раствором противоопухолевого препарата, содержащего 750 мг Иринотекана в 50 мл водного 5% раствора декстрозы с рН=6,2. При этом проводят три цикла, каждый из которых включает заморозку и разморозку смеси, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. Для очистки от не загрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).After that, liposomes with the above lipid composition and an optimal average diameter close to 50 nm are obtained, not containing a fluorescent dye, but containing the antitumor drug Irinotecan inside. Obtaining these liposomes is carried out by evaporating on a rotary evaporator a solution of the above lipids with a total lipid mass of 4.0 g in a mixture of chloroform-methanol taken in a ratio of 3: 1 by volume, until a uniform film is formed on the walls of the flask. The resulting film is suspended in an aqueous solution of an antitumor preparation containing 750 mg of Irinotecan in 50 ml of an aqueous 5% dextrose solution with pH = 6.2. In this case, three cycles are carried out, each of which includes freezing and thawing the mixture until a liposome suspension is formed, which is then passed through an extruder equipped with a membrane with a pore diameter of 50 nm. To purify the antitumor preparation that was not loaded into the liposomes, the suspension obtained was passed through a NAP-25 brand desalting column with a mobile phase, which was 10 mM sodium phosphate buffer (pH = 7.4).
Лечение подопытных животных проводят через 18 ч после инъекции смеси суспензий липосом. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 50 мг/кг тела животного (по концентрации Иринотекана). Суспензию липосом вводят по схеме 2 раза в неделю в течение 4-х недель. Контрольной группе крыс вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у крыс измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.Treatment of experimental animals is carried out 18 hours after injection of a mixture of suspensions of liposomes. The treatment is carried out by intravenous administration of an aqueous suspension of liposomes containing an antitumor drug at a dose of 50 mg / kg of the animal’s body (according to the concentration of Irinotecan). A suspension of liposomes is administered according to the scheme 2 times a week for 4 weeks. In the control group of rats, instead of the suspension of liposomes with the drug, the above solution of sodium phosphate buffer is intravenously administered. Tumor volume in rats is measured every day and treatment efficacy is judged by the change in tumor growth rate.
Объем опухоли у леченых крыс на 28-й день лечения оказался в 4,5 раза меньше, чем у контрольных не леченных крыс.The tumor volume in the treated rats on the 28th day of treatment was 4.5 times less than in the control untreated rats.
Таким образом, из приведенных примеров видно, что предложенный способ по сравнению с прототипом на 18-й день лечения замедляет рост опухоли с 400 мм3 (в прототипе) до 250 мм3, действительно повышая тем самым эффективность лечения онкологического заболевания в 2 раза.Thus, from the above examples it is seen that the proposed method, compared with the prototype on the 18th day of treatment, slows down tumor growth from 400 mm 3 (in the prototype) to 250 mm 3 , thereby really increasing the cancer treatment efficiency by 2 times.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019134449A RU2712212C1 (en) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | Method of treating oncological diseases by drug injections |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019134449A RU2712212C1 (en) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | Method of treating oncological diseases by drug injections |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2712212C1 true RU2712212C1 (en) | 2020-01-27 |
Family
ID=69184124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019134449A RU2712212C1 (en) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | Method of treating oncological diseases by drug injections |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2712212C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2297827C2 (en) * | 2001-09-28 | 2007-04-27 | Эсперион Терапьютикс, Инк. | Method and the device for carrying out vesicle extrusion under high pressure |
| WO2015066535A1 (en) * | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Yale University | Modular particles for immunotherapy |
| RU2574926C2 (en) * | 2004-05-03 | 2016-02-10 | Хермес Байесайенсиз, Инк. | Liposomal compositions applicable for drug delivery |
-
2019
- 2019-10-28 RU RU2019134449A patent/RU2712212C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2297827C2 (en) * | 2001-09-28 | 2007-04-27 | Эсперион Терапьютикс, Инк. | Method and the device for carrying out vesicle extrusion under high pressure |
| RU2574926C2 (en) * | 2004-05-03 | 2016-02-10 | Хермес Байесайенсиз, Инк. | Liposomal compositions applicable for drug delivery |
| WO2015066535A1 (en) * | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Yale University | Modular particles for immunotherapy |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CHEN J.H. et al. Treatment of rabbits bearing advanced VX2 tumors in the mammary gland with nano-sized liposomal adriamycin administered by various routes//Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2005 Nov 16; 85(43):3039-42. PMID: 16324402, реферат * |
| АБАКУМОВ М.А и др. Магнитные биосовместимые наночастицы оксида железа для мрт-диагностики//Тезисы 2-й Международной Школы "Наноматериалы и нанотехнологии в живых системах. Безопасность и наномедицина", 19-24 сентября 2011 г., с.63. * |
| АБАКУМОВ М.А и др. Магнитные биосовместимые наночастицы оксида железа для мрт-диагностики//Тезисы 2-й Международной Школы "Наноматериалы и нанотехнологии в живых системах. Безопасность и наномедицина", 19-24 сентября 2011 г., с.63. CHEN J.H. et al. Treatment of rabbits bearing advanced VX2 tumors in the mammary gland with nano-sized liposomal adriamycin administered by various routes//Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2005 Nov 16; 85(43):3039-42. PMID: 16324402, реферат. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhu et al. | CaCO 3-assisted preparation of pH-responsive immune-modulating nanoparticles for augmented chemo-immunotherapy | |
| Wang et al. | Enhanced drug delivery using sonoactivatable liposomes with membrane-embedded porphyrins | |
| Yang et al. | Focused ultrasound and interleukin-4 receptor-targeted liposomal doxorubicin for enhanced targeted drug delivery and antitumor effect in glioblastoma multiforme | |
| Son et al. | Folate-modified PLGA nanoparticles for tumor-targeted delivery of pheophorbide a in vivo | |
| JP7312822B2 (en) | Injectable hydrogel system and lesion labeling method | |
| JP5685243B2 (en) | Pharmaceutical carrier, its preparation method and use | |
| US11471410B2 (en) | Pharmaceutical composition combining at least two distinct nanoparticles and a pharmaceutical compound, preparation and uses thereof | |
| JP2004511426A5 (en) | ||
| US20090324741A1 (en) | Injectable polymer-lipid blend | |
| Shariati et al. | High pressure nebulization (PIPAC) versus injection for the intraperitoneal administration of mRNA complexes | |
| JP2021504446A5 (en) | ||
| EA038653B1 (en) | Formulations for treating bladder cancer | |
| JP6770524B2 (en) | Cocreate, and how to use it to increase tissue permeability of pharmacologically active substances | |
| US20130261442A1 (en) | Methods and system for ultrasound-mediated drug delivery | |
| KR101791244B1 (en) | Composition for delivery of a liposome comprising synthetic receptor-phospholipid conjugates and a functional substance containing the functional substance conjugated ligand binding to the synthetic receptor | |
| TW201628656A (en) | Pharmaceutical composition, preparation and uses thereof | |
| CN114099698B (en) | PH sensitive liposome and preparation method and application thereof | |
| RU2712212C1 (en) | Method of treating oncological diseases by drug injections | |
| CN113144172B (en) | Preparation method of liposome containing vancomycin, IR780 and oxygen-carrying perfluorohexane | |
| CN106798735B (en) | Hydrophilic small molecule brain-targeted secondary delivery medicine carrier and preparation method thereof | |
| CN112370529A (en) | A kind of compound preparation for treating pulmonary arterial hypertension and preparation method | |
| RU2706356C1 (en) | Method of treating oncological diseases by drug injections | |
| WO2010071230A1 (en) | Photodynamic therapeutic agent showing accumulation of cell-specific functions | |
| CN114848843B (en) | Chemotherapeutic synergistic targeting combined treatment nano-drug and application thereof in tumor treatment | |
| JPWO2005021012A1 (en) | Gemcitabine encapsulated drug carrier |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200724 Effective date: 20200724 |