RU2705344C1 - Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему - Google Patents
Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705344C1 RU2705344C1 RU2019107398A RU2019107398A RU2705344C1 RU 2705344 C1 RU2705344 C1 RU 2705344C1 RU 2019107398 A RU2019107398 A RU 2019107398A RU 2019107398 A RU2019107398 A RU 2019107398A RU 2705344 C1 RU2705344 C1 RU 2705344C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mir
- breast cancer
- micro
- breast
- rna
- Prior art date
Links
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 21
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 238000009607 mammography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108091028049 Mir-221 microRNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108091025686 miR-199a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108091027966 Mir-137 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108091064157 miR-106a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091054189 miR-196a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091041631 miR-21-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091044442 miR-21-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091080321 miR-222 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091091807 let-7a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract 2
- 108091057746 let-7a-4 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract 2
- 108091028376 let-7a-5 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract 2
- 108091024393 let-7a-6 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract 2
- 108091091174 let-7a-7 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 24
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 abstract description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000004861 thermometry Methods 0.000 abstract 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091008065 MIR21 Proteins 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 230000005741 malignant process Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 208000004434 Calcinosis Diseases 0.000 description 2
- 108091070493 Homo sapiens miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 208000030270 breast disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035572 chemosensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 108091061917 miR-221 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063489 miR-221-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091055391 miR-221-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091031076 miR-221-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006220 Breast cyst Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 108010043471 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000589016 Homo sapiens Myomegalin Proteins 0.000 description 1
- 101000775053 Homo sapiens Neuroblast differentiation-associated protein AHNAK Proteins 0.000 description 1
- 101000602930 Homo sapiens Nuclear receptor coactivator 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000605639 Homo sapiens Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Proteins 0.000 description 1
- 101000823271 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ABL2 Proteins 0.000 description 1
- 108091070521 Homo sapiens let-7a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070522 Homo sapiens let-7a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070513 Homo sapiens let-7a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068985 Homo sapiens miR-137 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065981 Homo sapiens miR-155 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067573 Homo sapiens miR-222 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 108091062154 Mir-205 Proteins 0.000 description 1
- 102100032966 Myomegalin Human genes 0.000 description 1
- 102100031837 Neuroblast differentiation-associated protein AHNAK Human genes 0.000 description 1
- 102100037226 Nuclear receptor coactivator 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100038332 Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Human genes 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015098 Tumor Suppressor Protein p53 Human genes 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100022651 Tyrosine-protein kinase ABL2 Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000026555 breast adenosis Diseases 0.000 description 1
- 201000003149 breast fibroadenoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 1
- 230000008508 epithelial proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000024312 invasive carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 108091083769 miR-199a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047470 miR-199a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048350 miR-199a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056793 miR-199a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000006654 negative regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000026341 positive regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему. Проводят маммографию и УЗИ. Дополнительно проводят радиотермометрическое исследование молочных желез и выделяют панель микро-РНК из биологических жидкостей, включающую miR-199a, miR-222, let-7a, miR-196a, miR-106а, miR-21, miR-137, miR-155. Способ обеспечивает возможность выделить из массы дисгормональных заболеваний молочных желез группу патологий молочной железы, которая в обозримом будущем перейдет в рак, за счет совместного использования радиотермометрии и панели микро-РНК. 1 ил., 2 табл., 1 пр.
Description
Одной из ведущих онкологических нозологий в настоящее время является рак молочной железы. Данная патология занимает ведущие позиции по числу заболевших и по числу умерших. Решением данной проблемы является проведение научно обоснованного скрининга, которые представляют собой комплекс диагностических и лечебных мероприятий, направленных на раннее выявление онкопатологии молочных желез. Большим шагом вперед является создание шкалы BI-RADS, которая систематизировала все состояния молочной железы и оценила все изменения с позиции риска злокачественной трансформации ткани молочной железы.
BI-RADS 0 - оценка является неполной. Используется при скрининге рака молочной железы, когда необходимы дополнительные исследования (повторный вызов)
BI-RADS 1 - отрицательный результат (нет данных, подтверждающих наличие узлового образования). Диффузные изменения
BI-RADS-2 - Доброкачественные изменения, нет признаков злокачественного роста. Выявляются доброкачественные объемные образования, доброкачественные кальцинаты
BI-RADS-3 - вероятно доброкачественные изменения - требуется короткий интервал контроля (6 мес). Вероятность злокачественного процесса менее 2%. По истечении 6 месяцев контрольное исследование однозначно решит вопрос о доброкачественности или злокачественности процесса
BI-RADS-4 - Изменения, подозрительные на злокачественность. Вероятность злокачественного процесса от 2 до 95%, рекомендуется биопсия. Направление в онкологическое учреждение
BI-RADS-5 - Злокачественные изменения. Вероятность более 95%, рекомендуется биопсия. Направление в онкологическое учреждение
BI-RADS-6 - гистологически верифицированный рак молочной железы (Г.П Корженкова, 2016)
В настоящее время ведущим диагностическим методом скрининга является сочетание маммографии и (в меньшей степени) ультразвукового исследования молочных желез. Преимущества маммографии выражаются в том, что эта методика позволяет визуализировать все проявления известных разновидностей непальпируемых новообразований (скопление микрокальцинатов размером от 50 мкм, локальная тяжистая перестройка структуры, рак внутри протока. Высокое разрешение обеспечивает дифференциальную уточненную диагностику заболеваний молочной железы. Маммография позволяет определить характер роста опухоли (моно- или мультицентрический), степень распространенности процесса. Недостатком маммографии связан с дозовой нагрузкой - от 0,15 м3в до 1.0 м3в) является невозможность определения узловых образований менее 3 мм - предел метода. Данный метод так же неэффективен при высокой рентгенологической плотности. Высокая рентгенологическая плотность уменьшает эффективность метода на 50%-100%. (Каприн А.Д., Рожкова Н.И., 2019). Ультразвуковое обследование молочной железы позволяет компенсировать недостатки маммографии и в комплексном применении повышает уточненную диагностику до 95%, но невозможность использовать данный метод изолированно в плане скрининга оставляет ряд нерешенных проблем. Главной проблемой является то, что у вышеописанных методик есть предел метода - минимальный размер выявляемого образования составляет 3 мм. Учитывая тот факт, что 1 мм опухолевой массы содержит 100 миллионов онкологических клеток, можно говорить о ранней клинической, но поздней биологической патологии. Поэтому даже сочетание этих методов не решает проблему выявления агрессивных форм рака молочной железы малых размеров, которые и приводят к ранней смертности.
Выделяют несколько механизмов активации пролиферативной активности эпителиальных клеток при предопухолевой активности эпителиальных клеток при предопухолевых состояниях молочной железы. Первый механизм активации связан с воспалительными цитокинами (интерлейкин-1, фактор некроза опухоли), которые активизируют ядерный фактор транскрипции, определяющий активное клеточной деление. Постоянная низкодозовая продукция фактора некроза опухоли стимулирует активность циклооксигеназы 2-типа - основного фермента биосинтеза простагландина Е2, которые в свою очередь поддерживают высокую экспрессию EGF, FGF, VEGF, IGF.
Другой механизм стимуляции пролиферации эпителия осуществляется многочисленными факторами роста (EGF, FGF, VEGF, IGF)
Третий путь стимуляции пролиферации - взаимодействие стероидных гормонов с соответствующими рецепторами приводит к активации транскрипции с увеличением пролиферативной активности. Важно отметить, что риск развития онкологической трансформации ткани молочной железы положительно коррелирует с образованием очаговых пролифератов. Так при наличии более 3 фокусов атипии рак развивался в 47% случаев, а при наличии 1 фокуса только 25% наблюдений.
Анализ данных трех путей дает основание предположить о последовательно-параллельном развитии этих путей с выраженной аутокринной стимуляцией. То есть, если первый путь активируется и доходит до определенного уровня, то становится выраженным второй путь и уже начинается активация третьего (гормонального) пути). Ставится следующий вопрос: в какой период и при каких изменениях в ткани молочной железы начинаются те предраковые изменения, которые приведут к развитию рака молочной железы.
Анализ всех вышеописанных путей пролиферации тканей молочных желез позволяет отметить одно общее свойство: повышение температуры при активации пролиферативных процессов. Выявление роста температуры ткани молочной железы, оценка ее динамики позволяет находить те «зоны риска», в которых появляются неопластические изменения. Наилучшей технологией для измерения внутренней и поверхностной температуры ткани молочной железы является методика радиотермометрии (РТМ) (Веснин С.Г., 2000).
Данная технология основана на том, что все ткани человека обладают собственным электромагнитным излучением. Интенсивность излучения положительно коррелирует с температурой. Чем более выражена пролиферативная активность ткани, тем выше температура ткани. Данное теоретическое положение было обосновано французским ученым Готерье. Используя радиотермометрический комплекс, он провел исследование у 500 пациенток из Франции. Контрольной группой являлись пациентки из Великобритании, которым проводилось исследование по стандартной диагностической программе (ММГ+УЗИ молочных желез). В результате 10-летней работы было выявлено, что число диагностированных раков молочной железы во Франции в несколько раз превосходило выявленных раков молочной железы в Великобритании. Вместе с тем в ходе многочисленных научных исследований было установлено, что повышение температуры может быть не только при раке, но и при различных воспалительных заболеваниях молочной железы. Дифференциальная диагностика воспалительных и злокачественных заболеваний молочной железы крайне затруднительна.
С целью решения данной проблемы мы обратили внимание на следующие факты. Известно, что некоторые формы ФКМ ассоциированы с повышенным риском развития рака молочной железы в будущем (Degnim A.C., Dupont WD, Radisky D.C., Cancer. 2016 Oct: 122 (19): 2971-8. Соответственно, оптимизация диагностики и тактики ведения женщин с ДЗМЖ является частью стратегии снижения заболеваемости РМЖ
В.А. Хайленко (2018) установил, что основные мутации, приводящие к раку молочной железы, накапливаются в предраковом состоянии. Исследование мутаций в генах ТР53, PIK3CA, NCOA2, ABL2, PDE4DIP, AHNAK, RUNX1 показало, что вся «злокачественность» возникла уже в предраковом состоянии, до развития способности к инвазии. Это дало основание к изучению микро-РНК как предиктора неопластической трансформации ткани молочной железы. (К.А. Гришина, В.А. Хайленко, 2018) Наше внимание привлек такой класс биологических молекул как микро-РНК.
Выделение микроРНК по следующей методике: в образец добавляют 5 мкМ протеиназы К, инкубируют при 56 градусов Цельсия в течение 1 часа, затем используют колонки Exigon, для очистки микроРНК-образец наносят на колонку, после чего проводят центрифугирование при 2000 g на центрифуге Epprndorf 5104, затем колонку 3 раза промывают промывочным буфером, после каждого промывания проводят центрифугирование при 2000 g на центрифуге Eppendorf 5104, потом на колонку наносятся 20 мкл безнуклеазной воды. Колонку оставляют на 10 минут при комнатной температуре, а потом центрифугируют при 3000 g на центрифуге Eppendorf 5104, после чего проводят реакцию обратной транскрипции при помощи обратной транскриптазы (Exigon), для этого к 8 мкл образца добавляют 8 мкл реагента и инкубируют в течение 1 часа при температуре 60 градусов цельсия, после чего реакцию останавливают нагреванием до 95 градусов цельсия в течение 5 минут. Затем проводят полимеразную цепную реакцию с детекцией в реальном времени на приборе 7500Applied Biosystems, с праймерами на следующие микро РНК: has-miR-199а-3р, has-miR-222-3р, hsa-let-7a-5p, микро PHК-196a-2, has-miR-106a-5р, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-137, hsa-miR - 155 результаты анализируют при помощи компьютерной программы GenEx qPCR software и оформляют в виде таблицы (см. фиг. 1 - распределение микроРНК, выделенной из ватного зонда с биологической жидкостью, с ФКМ и РМЖ) Концентрация представлена как log с основанием 2 копий микро РНК в микролитре.
Превышение нормы на 1,5-2 единицы - это незначительное повышение, на 2-5 - повышение, на 5 и более - значительное повышение.
Микро-РНК представляют собой «глобальные переключатели генома», регулирующие множественные метаболические пути и образование белковых продуктов. Доказано, что ряд микро-РНК имеют онкогенное действие, к которым относят микро-РНК-21, 155, 182, 10b, 27а, 9. Микро РНК 21 является одной из наиболее известных и изученных микроРНК в разных видах опухолей. Ее экспрессия резко повышена при РМЖ, что связывают с ростом опухоли, метастазами и плохим прогнозом течения заболевания. Гиперэкспрессия микроРНК-155 часто встречается в ткани опухоли молочной железы и негативно влияет на выживаемость и хемочувствительность (через ген FOXO3a) опухолевых клеток, в то время как пониженная экспрессия miR-155 может усилить клеточную хемочувствительность и апоптоз.
Уровни некоторых микро-РНК изучены при доброкачественной патологии. По данным J. Chan, экспрессия MiR-21 вызывает блокирование генов, связанных с апоптозом. MiR-221/222 относят к онкогенным микро-РНК, сверхэкспрессия которых в разных типах опухолей приводит к усилению клеточной пролиферации, ингибированию апоптоза, индукции ангиогенеза. Подавление и низкий уровень экспрессии MiR 221/222 в опухолях молочной железы коррелирует с положительным статусом эстрогеновых рецепторов и более благоприятным прогнозом заболевания.
Активность MiR-155 необходима для поддержания нормального функционирования клеток, увеличение экспрессии данной микро-РНК отмечено при аутоиммунных заболеваниях и при различных формах рака. Кроме того, данная микро-РНК ассоциируется с эстроген - позитивным статусом опухоли и потенциально может служить диагностическим маркером.
По данным ряда авторов (Чебанов Д.К., Михайлова И.Н., Абрамов А.А., Воробьева Н.С., 2016) MiR-205 индуцирует апоптоз и тормозит рост и инвазию клеток опухоли, а также является супрессором онкогенеза. Данная работа является аналогом нашего изобретения
Прототипом нашей работы является диссертация В.В. Козлова, в которой изучено несколько микро-РНК у пациенток с диагнозом: фиброаденома молочной железы. Изучались: Микро-РНК 21, 155, 221, 222, 205. Автором отмечено десятикратное увеличение микроРНК, индуцирующих апоптоз и клеточный рост. В отличии от данной работы, мы увеличили платформу исследуемых микро-РНК включив в нее микро РНК 108, -137, -199, роль которых отражается прежде всего в индикации противоопухолевых возможностей организма, что позволяет проводить более информативный анализ резистентности организма к опухолевой агрессии, что повышает диагностическую ценность скрининговых исследований по выявлению рака молочной железы.
Резидентом Сколково лабораторией Онкоюнайт - ген. Директор Чебанов Д.К. совместно с кафедрой превентологии Российской Академии Медико-Социальной Реабилитации к.м.н. Фишер Л.Н., и к.м.н. Фишер О.А разработана панель для определения микро-РНК для оценки риска развития рака молочной железы:
1 has-miR-199a-3p - ответственен за метастазирование. Стимуляция ангиогенеза через сверхэкспрессию АроЕ - повышение в опухоли
2. hsa-miR-222-3p - супрессор, усиление пролиферации, а так же дифференцировка и блокада апоптоза в клетках - повышение при риске
3. has-let-7a-5p - увеличение уровня интегрина В-3 - ассоциирован с ФНО - контроль пролиферации - снижен при риске заболевания
4. микро-РНК-196ф-2 - защитный фактор. Снижение роста и пролиферации, контроль миграции и инвазии - снижает риск опухоли
5. has-miR-106a-5p - индуцирует апоптоз, снижает пролиферацию - снижен при опухоли
6. hsa-miR-21-5p - активация PI-3K7 Akt пути - пролиферация и выживание клеток - повышается при риске
7. has-miR-21-137 - пролиферация, апоптоз - снижен при заболевании
8. has-miR-155 - снижение уровня таурина, повышение влияния оксидативного стресса - повышен при дефиците таурина.
9. miR-199а-5р - биомаркер, связанный с данной микро-РНК, подавлял подавляющую опухоль роль в раке молочной железе.
Таким образом, совместное использование радиотермометрии и панели вышеперечисленных микро-РНК позволяет выделить из массы дисгормональных заболеваний молочных желез группу тех патологий молочной железы, которая в обозримом будущем перейдет в рак. Это позволяет назначать разработанный на кафедре превентологии индивидуальный онкопрофилактический комплекс, добиваясь регресса предопухолевой патологии.
Описание методики:
В настоящее время при прохождении скрининга рака молочной железы пациентке в возрасте 39-65 лет проводится осмотр молочных желез и маммография. С целью уточнения диагноза проводится ультразвуковое исследование молочных желез. Если пациентка по шкале BI-RADS относится к группе 4, 5, 6, пациентка направляется на дообследование в онкологический диспансер. Если пациентка по данным обследования относится к 1 или 2 группе по данной шкале, то она наблюдается у гинеколога. Если пациентка относится к 3 группы шкалы BI-RADS, то так как данная группа относится к риску развития рака молочной железы с вероятностью менее 2%, требуются дополнительные диагностические мероприятия, так как нельзя исключить наличие агрессивной формы рака молочной железы, который за 6 месяцев будет бурно прогрессировать, а именно данная агрессивная форма рака молочной железы сопровождается повышенным метастазированием и смертностью. С целью решения данной проблемы нами предложена следующая методика:
1 этап: проведение радиотермометрического исследования. Проведение данного исследования у пациентки проводится по общепринятой методике С.Г Веснин (1998). Измеряется температура в блоке глубиной до 7 см и поверхностной температуры. Признаком риска развития рака молочной железы является очаговая термоасимметрия молочных желез. Расчет по алгоритму В.И Видюкова позволяет выделить группу пациенток, у которых высокий риск развития рака молочной железы. По алгоритму В.И Видюкова установлено наличие 3 групп пациенток: высчитывается 2 коэффициента. Если 1 коэффициент менее 2, а второй менее 2.5, то риск развития рака молочной железы составляет около 15%. Если один коэффициент более 2, а второй менее 2.5, или наоборот то риск развития рака молочной железы составляет 60%. Если 1 коэффициент составляет более 2, а второй более 2,5, то риск развития рака молочной железы более 85%.
2 этап: с целью уточнения диагноза у пациенток из группы риска берется на анализ выделения из соска молочной железы, пунктат кисты молочной железы или пунктат из очага молочной железы, слюна и проводится исследование панели микро-РНК: mir-199а, miR-222, miR-196a, mir-106a, miR-21, miR-137, miR-155. Данное дополнительное уточняющее обследование позволяет повысить эффективность скрининговых мероприятий по выявлению ранних форм рака молочной железы.
Пример №1 Пациентка П, 1957 года рождения обратилась с жалобами на скудные выделения из соска правой молочной железы в апреле 2018 года. При ММГ - картина выраженного аденоза, высокая рентгенологическая плотность breast density 5 При проведении УЗИ молочных желез без узловых образований, обнаружено множество микрокист диаметром 4-5 мм. Проведено радиотермометрическое обследование молочных желез. Установлено, что 1 коэффициент равнялся 1,7 (норма до 2), 2 коэффициент 1.9 (норма 2.5). С целью уточнение диагноза назначено определение микро-РНК. Приводим полученные результаты:
По шкале риска -0- популяционный риск, 0-3 - небольшое повышение; 4-7 - значительное повышение; 7-10 - существенный риск заболевания
Исходя из полученных данных шкалы риск развития рака молочной железы незначительно повышен - 3
Через 6 месяцев пациентка обратилась на контрольный осмотр с жалобами на появление узлового образования в правой молочной железе примерно 2 см, увеличение подмышечных л/узлов справа. ММГ - в правой молочной железе в в/нар квадранте определяется узловое полициклическое образование 2 см в диаметре, наличие сгруппированных микрокальцинатов. УЗИ молочных желез - в правой молочной железе в в/наружном квадранте гипоэхогенное образование неправильной формы 2 см, в правой подмышечной области увеличенные узлы до 2,5 см. проведение радиотермометрического исследования показало, что первый коэффициент составлял 2,45; второй коэффициент 3.2 (это соответствует вероятному развитию рака молочной железы более 85% контрольное измерение микро-РНК дало следующие результаты
В результате коэффициент по определению микро-РНК составлял 7, что характерно для высокого риска развития рака молочной железы. Проведенное гистологическое исследование подтвердило наличие инвазивной карциномы.
Список литературы
1. Degnim А.С., Dupont W.D., Radisky D.С. et al. Extent of atypical hyperplasia stratifies breast cancer risk in 2 independent cohorts of women. Cancer. 2016 Oct: 122 (19); 2971-8.
2. Мастопатии под ред. А.Д Каприна, Н.И. Рожковой, Москва изд. группа «Гэотар-Медиа» 2019.
3. К.А. Гришина, В.А. Хайленко. Роль микро-РНК в развитии рака молочной железы и их потециал в качестве биомаркеров этого заболевания, Опухоли женской репродуктивной системы, №3-2018, с. 40-45.
4. Д.К. Чебанов, И.Н. Михайлова, А.А. Абрамов, Н.С. Воробьева. Диагностика и прогноз течения рака молочной железы на основе профиля экспрессии микро-РНК опухолевых экзосом, Онкогинекология №2-2016, с. 4-12; - аналог.
5. Козлов В.В. Роль молекулярных маркеров в диагностике и лечении рака молочной железы, Автореферат дисс. на соискание ученой степени к.м.н., Новосибирск 2014 – прототип.
6. Рожкова Н.И., Каприн А.Д. Профилактика - приоритет клинической маммологии. М.: СИМК, 2015. 185 с.
7. Г.П. Корженкова. Опухоли женской репродуктивной системы 2016; том 2; с. 3-9.
Claims (1)
- Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему, включающий маммографию и УЗИ, отличающийся тем, что дополнительно проводят радиотермометрическое исследование молочных желез и выделяют панель микро-РНК из биологических жидкостей, включающую miR-199a, miR-222, let-7a, miR-196a, miR-106а, miR-21, miR-137, miR-155.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019107398A RU2705344C1 (ru) | 2019-03-15 | 2019-03-15 | Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019107398A RU2705344C1 (ru) | 2019-03-15 | 2019-03-15 | Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705344C1 true RU2705344C1 (ru) | 2019-11-06 |
Family
ID=68501096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019107398A RU2705344C1 (ru) | 2019-03-15 | 2019-03-15 | Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705344C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407429C2 (ru) * | 2008-12-26 | 2010-12-27 | Сергей Георгиевич Веснин | Антенна-аппликатор и устройство для определения температурных изменений внутренних тканей биологического объекта и способы определения температурных изменений и выявления риска рака |
| CA2950977A1 (en) * | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Exosomics Siena S.P.A. | Use of tm9sf4 as a biomarker for tumor associated exosomes |
| RU2015123827A (ru) * | 2015-06-19 | 2017-01-10 | Лемарк Михайлович Клюкин | Способ для полуавтоматического диагностирования патологий молочных желёз |
| RU2017146331A (ru) * | 2017-12-27 | 2019-06-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ПостгенТех" (ООО "ПостгенТех") | Способ диагностики рака молочной железы и рака яичников |
-
2019
- 2019-03-15 RU RU2019107398A patent/RU2705344C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407429C2 (ru) * | 2008-12-26 | 2010-12-27 | Сергей Георгиевич Веснин | Антенна-аппликатор и устройство для определения температурных изменений внутренних тканей биологического объекта и способы определения температурных изменений и выявления риска рака |
| CA2950977A1 (en) * | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Exosomics Siena S.P.A. | Use of tm9sf4 as a biomarker for tumor associated exosomes |
| RU2015123827A (ru) * | 2015-06-19 | 2017-01-10 | Лемарк Михайлович Клюкин | Способ для полуавтоматического диагностирования патологий молочных желёз |
| RU2017146331A (ru) * | 2017-12-27 | 2019-06-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ПостгенТех" (ООО "ПостгенТех") | Способ диагностики рака молочной железы и рака яичников |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ГРИШИНА К.А. и др. Роль микроРНК в развитии рака молочной железы и их потенциал в качестве биомаркеров этого заболевания. Опухоли женской репродуктивной системы, 2018, 15(3), стр.40-47. * |
| ГРИШИНА К.А. и др. Роль микроРНК в развитии рака молочной железы и их потенциал в качестве биомаркеров этого заболевания. Опухоли женской репродуктивной системы, 2018, 15(3), стр.40-47. ЛОГИНОВ В.И. Новые гены микроРНК, гиперметилированные при раке молочной железы. Молекулярная Биология, 2016, 50(5), стр.797-802. * |
| ЛОГИНОВ В.И. Новые гены микроРНК, гиперметилированные при раке молочной железы. Молекулярная Биология, 2016, 50(5), стр.797-802. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Serum microRNA expression levels can predict lymph node metastasis in patients with early-stage cervical squamous cell carcinoma | |
| Silakit et al. | Circulating mi r‐192 in liver fluke‐associated cholangiocarcinoma patients: A prospective prognostic indicator | |
| Dong et al. | Circulating CUDR, LSINCT‐5 and PTENP 1 long noncoding RNA s in sera distinguish patients with gastric cancer from healthy controls | |
| Bhangu et al. | The role of epithelial mesenchymal transition and resistance to neoadjuvant therapy in locally advanced rectal cancer | |
| Pang et al. | miR-497 as a potential serum biomarker for the diagnosis and prognosis of osteosarcoma | |
| Ismail et al. | Diagnostic significance of miR-639 and miR-10b in βreast cancer patients | |
| CN103937888B (zh) | 鉴别胃癌的血浆microRNA标志物的筛选与应用 | |
| Ramshankar et al. | Lung cancer detection by screening-presenting circulating miRNAs as a promising next generation biomarker breakthrough | |
| Chen et al. | PLA2G10 incorporated in exosomes could be diagnostic and prognostic biomarker for non-small cell lung cancer | |
| JP6757935B2 (ja) | 分子マンモグラフィ | |
| Cheng et al. | Downregulation of NONO induces apoptosis, suppressing growth and invasion in esophageal squamous cell carcinoma | |
| US9683264B2 (en) | Circulating miRNAs as early detection marker and prognostic marker | |
| Liu et al. | Exosomal miRNAs as circulating biomarkers for prediction of development of haematogenous metastasis after surgery for stage II/III gastric cancer | |
| Wang et al. | MicroRNA-10b is upregulated and has an invasive role in colorectal cancer through enhanced Rhoc expression | |
| Li et al. | Clinical significance of blood‑based miRNAs as biomarkers of non‑small cell lung cancer | |
| Hui et al. | Serum miRNA expression in patients with esophageal squamous cell carcinoma | |
| Yusuf et al. | Potential biomarkers in NASH-induced liver cirrhosis with hepatocellular carcinoma: A preliminary work on roles of exosomal miR-182, miR-301a, and miR-373 | |
| Wang | Diagnostic performance for declined microRNA‐133a in pancreatic cancer | |
| Sung et al. | Down-regulation of inositol polyphosphate 4-phosphatase type II expression in colorectal carcinoma | |
| Aalami et al. | Gastric cancer and circulating microRNAs: An updated systematic review and diagnostic meta-analysis | |
| Qiao et al. | Tumor‐Originated Exosomal hsa‐miR‐3937 as a Minimally Invasive Early Biomarker for Liquid Biopsy of Colorectal Cancer | |
| Jiang et al. | Identification of Cholangiocarcinoma Associated with Hepatolithiasis via the Combination of miRNA and Ultrasound | |
| Senaratne et al. | Clinical Value of Circulating microRNAs in Diagnosis and Prognosis of Pancreatic Cancer: A Systematic Review | |
| RU2705344C1 (ru) | Способ скрининга рака молочной железы и предрасположенности к нему | |
| O'Brien et al. | Circulating plasma microRNAs in colorectal neoplasia: A pilot study in assessing response to therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210316 |