RU2700788C1 - Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis - Google Patents
Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2700788C1 RU2700788C1 RU2019101341A RU2019101341A RU2700788C1 RU 2700788 C1 RU2700788 C1 RU 2700788C1 RU 2019101341 A RU2019101341 A RU 2019101341A RU 2019101341 A RU2019101341 A RU 2019101341A RU 2700788 C1 RU2700788 C1 RU 2700788C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- asit
- cells
- foxp3
- allergen
- molecule
- Prior art date
Links
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 239000013566 allergen Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 22
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 101000713602 Homo sapiens T-box transcription factor TBX21 Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 101000819111 Homo sapiens Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102100036840 T-box transcription factor TBX21 Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 claims abstract description 12
- 101000686034 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102100023421 Nuclear receptor ROR-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 102100021386 Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 abstract description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- 241001591005 Siga Species 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 2
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000013573 pollen allergen Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940046536 tree pollen allergenic extract Drugs 0.000 description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010003338 GATA3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004610 GATA3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 101150042659 RORC gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000036284 Rhinitis seasonal Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 239000012163 TRI reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940074608 allergen extract Drugs 0.000 description 1
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012733 comparative method Methods 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 102000053917 human FOXP3 Human genes 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 208000017972 multifocal atrial tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000017022 seasonal allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано для оценки эффективности проведения аллерген-специфической иммунотерапии при аллергическом рините.The invention relates to medicine, namely to immunology and allergology, and can be used to assess the effectiveness of allergen-specific immunotherapy for allergic rhinitis.
Аллергический ринит (АР) - заболевание, характеризующееся наличием иммунологически обусловленного (чаще всего IgE-зависимого) воспаления слизистой оболочки носа, вызванного причинно-значимым аллергеном. Аллергический ринит нередко сочетается с аллергическим конъюнктивитом, бронхиальной астмой и другими аллергическими заболеваниями. АР с сопутствующими аллергическими заболеваниями, вызванный сенсибилизацией к пыльце растений, называют «поллинозом».Allergic rhinitis (AR) is a disease characterized by the presence of an immunologically caused (most often IgE-dependent) inflammation of the nasal mucosa caused by a causative allergen. Allergic rhinitis is often combined with allergic conjunctivitis, bronchial asthma and other allergic diseases. AR with concomitant allergic diseases caused by sensitization to pollen of plants is called “hay fever”.
Развитие аллергического ринита в настоящее время связывается с Th2-дисбалансом иммунного ответа. Под Th2-дисбалансом при аллергии подразумевается несбалансированное усиление дифференцировки Т-хелперов в направлении Th2-клеток, которая определяется преобладанием экспрессии транскрипционного фактора GATA-3 и ослаблением экспрессии факторов с противоположными эффектами - ТВЕТ и FOXP3, контролирующими дифференцировку Th1-клеток и регуляторных Т-клеток (Трег), соответственно [1]. Уровень синтеза названных факторов детерминируется экспрессией генов GATA3, ТВХ21 и FOXP3. Помимо этих факторов, в патогенезе аллергии возможно участие провоспалительных Th17-клеток, играющих важную роль в развитии аутоиммунной патологии [2]. Развитие Th17-клеток у человека определяется фактором RORC, синтез которого обусловлен экспрессией гена RORC [1].The development of allergic rhinitis is currently associated with a Th2 imbalance in the immune response. Th2 imbalance in allergies means an unbalanced increase in the differentiation of T-helpers in the direction of Th2 cells, which is determined by the predominance of expression of the transcription factor GATA-3 and the weakening of the expression of factors with opposite effects - TWET and FOXP3, which control the differentiation of Th1 cells and regulatory T cells (Treg), respectively [1]. The level of synthesis of these factors is determined by the expression of the GATA3, TBX21 and FOXP3 genes. In addition to these factors, the participation of pro-inflammatory Th17 cells, which play an important role in the development of autoimmune pathology, is possible in the pathogenesis of allergies [2]. The development of Th17 cells in humans is determined by the RORC factor, the synthesis of which is due to the expression of the RORC gene [1].
Учитывая важную роль в ограничении иммунного ответа и воспаления Трег, можно предположить, что в значительной степени патогенез АР обусловлен недостаточностью данной субпопуляции клеток [3]. Ранее было показано, что содержание Трег в периферической крови пациентов с АР может быть нормальным или сниженным [4-6]. Противоречивость полученных разными исследователями данных может быть связана с функциональной неоднородностью Трег, что приводит к необходимости оценивать функциональные характеристики этих клеток [3].Given the important role in limiting the immune response and inflammation of Treg, it can be assumed that the pathogenesis of AR is largely due to the insufficiency of this subpopulation of cells [3]. It was previously shown that the Treg content in the peripheral blood of patients with AR can be normal or reduced [4-6]. The inconsistency of the data obtained by different researchers may be associated with the functional heterogeneity of Treg, which leads to the need to evaluate the functional characteristics of these cells [3].
Основным регулятором дифференцировки и функционирования Трег является транскрипционный фактор FOXP3 [7]. У человека данный транскрипционный фактор представлен в виде 4 изоформ [8-10]:The main regulator of the differentiation and functioning of Treg is the transcription factor FOXP3 [7]. In humans, this transcription factor is presented in the form of 4 isoforms [8-10]:
1) полная молекула (FOXP3-FL);1) complete molecule (FOXP3-FL);
2) с делецией домена, кодируемого экзоном 2 (FOXP3Δ2);2) with a deletion of the domain encoded by exon 2 (FOXP3Δ2);
3) с делецией домена, кодируемого экзоном 7 (FOXP3Δ7);3) with a deletion of the domain encoded by exon 7 (FOXP3Δ7);
4) с одновременной делецией доменов, кодируемых экзонами 2 и 7 (FOXP3Δ2Δ7).4) with a simultaneous deletion of domains encoded by
Возможно, что функциональные особенности Трег при аллергических заболеваниях у человека определяются именно неполными изоформами молекулы FOXP3, поскольку предполагается, что именно молекула FOXP3Δ2, обладающая супрессорной функцией и располагающаяся преимущественно в ядре, является основной изоформой, определяющей функциональную активность Трег [11].It is possible that the functional features of Treg in allergic diseases in humans are determined by incomplete isoforms of the FOXP3 molecule, since it is assumed that the FOXP3Δ2 molecule, which has a suppressor function and is located mainly in the nucleus, is the main isoform that determines the functional activity of Treg [11].
В настоящее время единственным патогенетическим методом лечения АР является аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ). Считается, что эффективность данного метода связана с переключением иммунного ответа с Th2-типа на Th1-тип, накоплением IgG4-блокирующих антител, образованием анти-IgE-антител, однако механизм действия АСИТ до конца не выяснен. На данный момент определены клинические критерии для назначения АСИТ, но важнейшим аспектом остается прогнозирование ее эффективности. Прогнозирование эффективности АСИТ позволит проводить правильный отбор пациентов, значительно повысить результативность лечения и избежать возможных осложнений при ее проведении.Currently, the only pathogenetic treatment for AR is allergen-specific immunotherapy (ASIT). It is believed that the effectiveness of this method is associated with switching the immune response from the Th2 type to the Th1 type, the accumulation of IgG4-blocking antibodies, the formation of anti-IgE antibodies, however, the mechanism of action of ASIT is not fully understood. At the moment, the clinical criteria for the appointment of ASIT are defined, but the most important aspect remains the prediction of its effectiveness. Predicting the effectiveness of ASIT will allow for the correct selection of patients, significantly increase the effectiveness of treatment and avoid possible complications during its implementation.
Показана возможность использования допплерографии подъязычных слюнных желез как дополнительного метода оценки будущей эффективности АСИТ в силу анатомического расположения органа, а также высокой чувствительности к метаболическим и физиологическим изменениям [12]. Однако в настоящем исследовании не проводился анализ взаимосвязи показателей допплерографии подъязычных слюнных желез с сопутствующими аллергическими болезнями, поскольку они, будучи причиной постоянного аллергического воспаления, могут изменять состояние слюнных желез. Также не проводился анализ взаимосвязи показателей допплерографии подъязычных слюнных желез с данными лабораторных исследований (например, с уровнем общего IgE), а также со спектром причинно-значимых аллергенов, в том числе бытовых и эпителиальных.The possibility of using dopplerography of the sublingual salivary glands as an additional method for assessing the future effectiveness of ASIT due to the anatomical location of the organ, as well as high sensitivity to metabolic and physiological changes [12]. However, this study did not analyze the relationship of dopplerography of the sublingual salivary glands with concomitant allergic diseases, since they, being the cause of persistent allergic inflammation, can change the state of the salivary glands. There was also no analysis of the relationship of the dopplerography of the sublingual salivary glands with laboratory data (for example, with the level of total IgE), as well as with a spectrum of causally significant allergens, including domestic and epithelial ones.
Для контроля эффективности лечения аллергического ринита известен способ заключающийся в том, что после проведенного лечения определяют выраженность симптомов аллергического ринита в баллах, концентрацию калия в носовом секрете и рассчитывают индекс иммунного напряжения слизистой оболочки полости носа (ИИН) по формуле: ИИН=(ИAsIgA / sIgA)X Liz X 100, где ИAsIgA - индекс авидности sIgA; sIgA - содержание секреторного иммуноглобулина А, мг/л; Liz - содержание лизоцима, мкг/мл; 100 - постоянный коэффициент; 22 и при сумме баллов всех симптомов аллергического ринита равной нулю, концентрации калия в носовом секрете 10,92±0,68 ммоль/л и ИИН больше или равным 0,45 проведенное лечение считают эффективным [13].To control the effectiveness of treatment of allergic rhinitis, a known method is that after the treatment is carried out, the severity of the symptoms of allergic rhinitis in points, the concentration of potassium in the nasal secretion are determined and the index of the immune tension of the nasal mucosa (IIN) is calculated by the formula: IIN = (AsIgA / sIgA ) X Liz X 100, where AsIgA is the avidity index sIgA; sIgA — content of secretory immunoglobulin A, mg / l; Liz - lysozyme content, μg / ml; 100 is a constant coefficient; 22 and when the total score of all symptoms of allergic rhinitis is zero, the concentration of potassium in the nasal secretion is 10.92 ± 0.68 mmol / L and the IIN is greater than or equal to 0.45, the treatment is considered effective [13].
Известно, что использование в качестве объективного показателя снижение концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете позволяет выявить иммунотерапевтическую эффективность препарата [14]. Поскольку повышенное содержание свободного гемоглобина в назальном секрете, выявляемое иммунометрически, представляет собой, подобно повышенному содержанию эозинофилов, характерный симптом обострения хронического аллергического ринита, отражающий тяжесть клинического течения. При этом уменьшение тяжести клинических проявлений ринита под влиянием топической терапии сопровождается снижением относительного содержания эозинофилов и концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете.It is known that the use of a decrease in the concentration of free hemoglobin in the nasal secretion as an objective indicator allows us to identify the immunotherapeutic effectiveness of the drug [14]. Since the increased content of free hemoglobin in the nasal secretion, detected immunometrically, is, like the increased content of eosinophils, a characteristic symptom of exacerbation of chronic allergic rhinitis, reflecting the severity of the clinical course. Moreover, a decrease in the severity of the clinical manifestations of rhinitis under the influence of topical therapy is accompanied by a decrease in the relative content of eosinophils and the concentration of free hemoglobin in the nasal secretion.
Одним из способов оценки эффективности АСИТ при поллинозном конъюнктивите является проведение провокационного конъюнктивального теста (ПКТ), при этом через 2-3 месяца после АСИТ проводят повторно ПКТ и при увеличении его пороговой дозы в 2 и более раз терапевтический результат оценивают как эффективный [15].One of the ways to assess the effectiveness of ASIT in pollinosis conjunctivitis is to conduct a provocative conjunctival test (PCT), while 2-3 months after ASIT, PCT is repeated and if the threshold dose is 2 or more times higher, the therapeutic result is evaluated as effective [15].
Показано, что в целях прогнозирования хода аллерген-специфической иммунотерапии у детей с поллинозами целесообразно, помимо общеклинического, аллергологического и иммунологического обследования, определять показатели фенотипа N- и Р+-антигенов эритроцитов крови. Комплексное определение фенотипических маркеров иммунного реагирования по наличию «минорных» групповых антигенов на поверхности эритроцитов крови у детей с поллинозами демонстрирует, что эритроциты крови содержат поверхностный N-антиген и Р+-антиген. Показано, что у детей с Р+-антигеном на поверхности эритроцитов крови наблюдается более высокая эффективность аллерген-специфической иммунотерапии [16].It was shown that in order to predict the progress of allergen-specific immunotherapy in children with pollinosis, it is advisable, in addition to general clinical, allergological and immunological examination, to determine the phenotype of N- and P + -antigens of red blood cells. A comprehensive determination of phenotypic markers of the immune response by the presence of “minor” group antigens on the surface of blood red blood cells in children with pollinosis demonstrates that blood red blood cells contain surface N-antigen and P + antigen. It has been shown that in children with P + antigen on the surface of blood red blood cells there is a higher efficiency of allergen-specific immunotherapy [16].
В настоящее время охарактеризованы и клонированы молекулы аллергенов и определены их антигенные детерминанты, что является основанием для появления нового вида диагностики IgE-опосредованных заболеваний - молекулярной диагностики (МД), т.е. картирование аллергенной сенсибилизации пациента на молекулярном уровне с применением очищенных рекомбинантных натуральных аллергенных молекул вместо экстрактов аллергенов.Allergen molecules have been characterized and cloned and their antigenic determinants have been determined, which is the basis for the emergence of a new type of diagnosis of IgE-mediated diseases - molecular diagnostics (MD), i.e. mapping the patient’s allergenic sensitization at the molecular level using purified recombinant natural allergenic molecules instead of allergen extracts.
Согласно концепции МД, эффективность АСИТ будет высокой при повышенном уровне asIgE на М и отсутствии антител на m компоненты. При повышенном уровне asIgE одновременно на М и m белки эффективность АСИТ может быть недостаточно эффективной. При повышенном уровне asIgE к m белкам и отсутствии антител на М белки аллергена АСИТ на этот аллерген проводить не рекомендуется [17].According to the MD concept, the effectiveness of ASIT will be high with an increased level of asIgE on M and the absence of antibodies on m components. With an increased level of asIgE simultaneously on M and m proteins, the effectiveness of ASIT may not be effective enough. With an increased level of asIgE to m proteins and the absence of antibodies to M proteins, ASIT allergen is not recommended for this allergen [17].
Таким образом, приведенные клиническо-диагностические примеры демонстрируют высокую эффективность технологии ImmunoCAP и методов МД, которые могут быть использованы в клинической практике врача-аллерголога для решения вопроса о необходимости проведения успешной АСИТ, а также обоснованного выбора аллергена для проведения специфической иммунотерапии.Thus, the given clinical diagnostic examples demonstrate the high efficiency of ImmunoCAP technology and MD methods, which can be used in the clinical practice of an allergist to decide the need for a successful ASIT, as well as a reasonable choice of allergen for specific immunotherapy.
Задачей изобретения была разработка способа оценки влияния аллерген-специфической иммунотерапии на функциональное состояние Трег, оценивая не только численность и долю Трег в периферической крови, но и уровень экспрессии изоформ молекулы FOXP3, отличающихся по наличию экзона 2, а также уровень экспрессии мРНК транскрипционных факторов GATA3, ТВХ21 и RORC у пациентов с сезонным АР.The objective of the invention was to develop a method for assessing the effect of allergen-specific immunotherapy on the functional state of Treg, evaluating not only the number and proportion of Treg in peripheral blood, but also the level of expression of isoforms of the FOXP3 molecule, which differ in the presence of
Для оценки эффективности проведения аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) при аллергическом рините определяли численность регуляторных Т-клеток, уровня экспрессии изоформ молекулы FOXP3 методом проточной цитометрии, а также уровня экспрессии мРНК транскрипционных факторов GATA3, ТВХ21 и RORC методом полимеразной цепной реакции в реальном времени в периферической крови пациентов до и после проведения АСИТ. При усилении функциональной активности регуляторных Т-клеток за счет увеличения количества клеток, экспрессирующих молекулу FOXP3, лишенную экзона 2, снижении соотношения GATA3/TBX21 и снижении экспрессии мРНК RORC оценивали как положительный эффект от проведения АСИТ до окончания сезона палинации.To assess the effectiveness of allergen-specific immunotherapy (ASIT) in case of allergic rhinitis, the number of regulatory T cells, the expression level of isoforms of the FOXP3 molecule by flow cytometry, and the expression level of mRNA transcription factors GATA3, TBX21 and RORC by real-time polymerase chain reaction were determined peripheral blood of patients before and after ASIT. With an increase in the functional activity of regulatory T cells due to an increase in the number of cells expressing an FOXP3
Техническим результатом заявленного изобретения является выявление группы пациентов по результатам оценки функциональной активности Трег периферической крови, у которых проводимая АСИТ сопровождается высоким терапевтическим эффектом, имеет долгосрочный характер, сохраняясь по окончании сезона палинации. Использование способа позволяет достоверно оценивать на начальном этапе эффективность проводимой АСИТ при аллергическом рините.The technical result of the claimed invention is the identification of a group of patients according to the evaluation of the functional activity of Treg of peripheral blood, in which the ongoing ASIT is accompanied by a high therapeutic effect, has a long-term character, persisting at the end of the palination season. Using the method allows you to reliably evaluate at the initial stage the effectiveness of ASIT in allergic rhinitis.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
В исследовании приняли участие 38 пациентов с аллергическим ринитом и риноконъюнктивитом - 23 мужчины, 15 женщин, медиана возраста 32,5 (26-46) года, и 24 здоровых донора - 16 мужчин, 8 женщин, медиана возраста 33 (24-50) года.The study involved 38 patients with allergic rhinitis and rhinoconjunctivitis - 23 men, 15 women, median age 32.5 (26-46) years, and 24 healthy donors - 16 men, 8 women, median age 33 (24-50) years .
Материалом для исследования служила периферическая кровь. Забор крови производили в пробирки с антикоагулянтом. Клетки подсчитывали на гемоанализаторе по общепринятой методике. Выделение мононуклеаров периферической крови (МНПК) и последующий анализ выполняли в течение последующих 6 ч.The material for the study was peripheral blood. Blood sampling was performed in test tubes with an anticoagulant. Cells were counted on a blood analyzer according to a standard technique. Isolation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and subsequent analysis were performed over the next 6 hours.
МНПК выделяли центрифугированием в градиенте плотности фикола (1,077 г/см3). Клетки суспензировали в PBS с 1% BSA и 0,01%NaN3, затем инкубировали с моноклональными антителами (МАТ) к поверхностным маркерам в том же буфере в течение 30 мин при 4°С, после чего отмывали и пермеабилизировали в течение 40 мин буфером «Foxp3 Fixation/Permeabilization Buffer» (eBioscience) согласно методическим указаниям фирмы. Клетки отмывали и инкубировали в течение 90 мин при 4°С в темноте с МАТ против FOXP3, снова отмывали и сразу (без фиксации) анализировали на проточном цитометре. Учитывая минорность фракции Трег, для уменьшения ошибки анализировали не менее 2×105 клеток, попадающих в гейт лимфоцитов. Лазерную цитометрию клеток осуществляли на проточном цитометре BD FACSCanto™ II (Becton Dickinson) в стандартном режиме. Анализ данных проводили с помощью программного обеспечения FlowJo.MNPCs were isolated by centrifugation in a density gradient of ficol (1.077 g / cm 3 ). Cells were suspended in PBS with 1% BSA and 0.01% NaN 3 , then incubated with monoclonal antibodies (MAT) to surface markers in the same buffer for 30 min at 4 ° C, after which they were washed and permeabilized for 40 min with buffer Foxp3 Fixation / Permeabilization Buffer (eBioscience) according to company guidelines. The cells were washed and incubated for 90 min at 4 ° C in the dark with MAT against FOXP3, washed again and immediately (without fixation) analyzed on a flow cytometer. Given the minority of the Treg fraction, at least 2 × 10 5 cells entering the lymphocyte gate were analyzed to reduce the error. Laser cell cytometry was performed on a BD FACSCanto ™ II flow cytometer (Becton Dickinson) in standard mode. Data analysis was performed using FlowJo software.
Использовали МАТ, меченные различными флуорохромами - FITC (флуоресцеина изотиоцианат), РЕ (фикоэритрин), АРС (аллофикоцианин), PerCP-eFluor710 (перидинин-хлорофилл-протеин-ePluor710) и РЕ-Су7 (фикоэритрин-цианин 7). Использовали следующее сочетание МАТ фирмы «eBioscience» (препараты для изотипических контролей той же фирмы): CD3-PE-Cy7, CD4-FITC, CD25-PerCP-eFluor710, FOXP3(PCH101)-APC, FOXP3(150D/E4)-PE. Особенностью данной методики является специфичность МАТ против молекулы FOXP3. МАТ клона РСН101 распознают эпитоп молекулы FOXP3, кодируемый экзоном 1, т.е. все изоформы молекулы, а МАТ клона 150D/E4 - эпитоп, кодируемый экзоном 2, т.е. только молекулы FOXP3-FL и FOXP3Δ7. При сочетании данных МАТ их одновременное связывание с клеткой указывает на наличие в клетке целой молекулы FOXP3, а при связывании только МАТ клона РСН101 - на экспрессию в клетке исключительно изоформ, лишенных экзона 2. Алгоритм гейтирования для определения Трег, экспрессирующих различные изоформы молекулы FOXP3, представлен на фиг. 1. В качестве отрицательного контроля при выставлении гейтов для FOXP3+-клеток использовали субпопуляцию CD3--клеток, заведомо не экспрессирующую молекулу FOXP3 (фиг. 1а-в). Долю Трег в субпопуляции Т-хелперов определяли по связыванию CD3+CD4+-клеток с МАТ против CD25 и экзону 1 молекулы FOXP3 (фиг. 1д) в гейте, выставленном для CD3--клеток (фиг. 1б). Долю Трег, экспрессирующих только полную молекулу молекулу FOXP3, определяли по связыванию FOXP3+-клеток с МАТ к экзону 2 молекулы FOXP3 (фиг. 1е) по маркеру, выставленном для CD3--клеток (фиг. 1в).MATs labeled with various fluorochromes were used: FITC (fluorescein isothiocyanate), PE (phycoerythrin), APC (allophycocyanin), PerCP-eFluor710 (peridinin-chlorophyll-protein-ePluor710) and PE-Cy7 (phycoerythrin-cyanine 7). The following combination of mAbs from eBioscience (preparations for isotypic controls of the same company) was used: CD3-PE-Cy7, CD4-FITC, CD25-PerCP-eFluor710, FOXP3 (PCH101) -APC, FOXP3 (150D / E4) -PE. A feature of this technique is the specificity of MAT against the FOXP3 molecule. MAT clone PCH101 recognize the epitope of the FOXP3 molecule encoded by exon 1, i.e. all isoforms of the molecule, and the MAT of clone 150D / E4 is the epitope encoded by
Для определения мРНК генов GATA3, ТВХ21, RORC и FOXP3 проводили ПЦР в режиме «реального времени» с обратной транскрипцией.To determine the mRNA of the GATA3, TBX21, RORC, and FOXP3 genes, real-time PCR with reverse transcription was performed.
Выделение РНК из МНПК осуществляли по методу Хомчинского [18] с использованием реактива TRI Reagent («Sigma») в соответствии с протоколом производителя. Реакцию обратной транскрипции ставили с помощью набора RevertAid First Stand cDNA Syntesis Kit («Thermo Fisher Scientific»). После получения кДНК проводили ПЦР в режиме «реального времени» с использованием набора реактивов TaqMan Universal RT-PCR Master Mix, праймерами GATA3 (Hs00231122_ml), TBX21(Hs00894392_ml), RORC (Hs01076112_ml) и FOXP3, определяющим полную молекулу FOXP3 (FOXP3_1=Hs01092117_ml, FOXP3_2=Hs00203958_ml) («Thermo Fisher Scientific»).Isolation of RNA from MNPK was carried out according to the Khomchinsky method [18] using the TRI Reagent reagent (Sigma) in accordance with the manufacturer's protocol. The reverse transcription reaction was performed using the RevertAid First Stand cDNA Syntesis Kit (Thermo Fisher Scientific). After obtaining the cDNA, real-time PCR was performed using the TaqMan Universal RT-PCR Master Mix reagent kit, with the primers GATA3 (Hs00231122_ml), TBX21 (Hs00894392_ml), RORC (Hs01076112_ml) and FOXP3, which determines the complete molecule FOXP3111_01_OX FOXP3_2 = Hs00203958_ml) ("Thermo Fisher Scientific").
Для расчета относительных количеств исследуемых РНК использовали сравнительный метод [19]. Уровень экспрессии мРНК исследуемых генов определяли относительно экспрессии мРНК β2-микроглобулина.To calculate the relative amounts of the studied RNA, the comparative method was used [19]. The mRNA expression level of the studied genes was determined relative to β2-microglobulin mRNA expression.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием методов непараметрического анализа. Показатели представляли в виде Me (L-H), где Me - медиана, L - нижний квартиль, Н - верхний квартиль. Для сопоставления двух независимых выборок по количественным признакам использовали U-критерий Манна-Уитни. Для анализа связи различий между связанными выборками применяли критерий Вилкоксона. Различие групп считали статистически значимым при р<0,05. Обработку выполняли в программном пакете StatSoft Statistica 12.0.Statistical processing of the research results was carried out using non-parametric analysis methods. The indicators were represented as Me (L-H), where Me is the median, L is the lower quartile, and H is the upper quartile. To compare two independent samples by quantitative characteristics, the Mann-Whitney U test was used. To analyze the relationship of differences between related samples, the Wilcoxon test was used. The difference in groups was considered statistically significant at p <0.05. Processing was performed in the StatSoft Statistica 12.0 software package.
ПРИМЕР 1.EXAMPLE 1
Изначально было исследовано 38 пациентов, страдающих сезонным аллергическим ринитом или риноконъюнктивитом (АР/АРК) с сенсибилизацией к аллергенам из пыльцы деревьев, диагностируемым на протяжении как минимум двух последних лет вне зависимости от наличия у них бронхиальной астмы. Диагноз подтверждался анамнезом и положительными скарификационными тестами с пыльцевыми аллергенами. Скрининг пациентов осуществлялся вне сезона палинации. Для проведения АСИТ случайным образом было отобрано 19 пациентов - 10 мужчин, 9 женщин, медиана возраста 33 (28-46) года, что по возрасту и полу соответствовало группе здоровых доноров. Им был проведен 1 курс АСИТ классическим методом водно-солевыми экстрактами из смеси пыльцы деревьев («Микроген») подкожно по ускоренной схеме до суммарной дозы аллергена не менее 6000 PNU. Забор крови проводили трехкратно: 1) в период скрининга (до АСИТ); 2) после окончания курса АСИТ, но до сезона палинации (после АСИТ); 3) после курса АСИТ по окончании сезона палинации (после сезона палинации).Initially, 38 patients with seasonal allergic rhinitis or rhinoconjunctivitis (AR / ARC) with sensitization to tree pollen allergens diagnosed for at least the last two years, regardless of the presence of bronchial asthma, were examined. The diagnosis was confirmed by an anamnesis and positive scarification tests with pollen allergens. Patients were screened out of the palination season. To conduct ASIT, 19 patients were randomly selected - 10 men, 9 women, median age 33 (28-46) years, which in age and sex corresponded to a group of healthy donors. He conducted the 1st course of ASIT using the classical method of water-salt extracts from a mixture of tree pollen (“Microgen”) subcutaneously according to an accelerated scheme to a total allergen dose of at least 6,000 PNU. Blood sampling was performed three times: 1) during the screening period (before ASIT); 2) after the completion of the ASIT course, but before the palination season (after ASIT); 3) after the ASIT course at the end of the palination season (after the palination season).
В периферической крови всех пациентов с АР до проведения АСИТ, после ее проведения и после сезона палинации при сравнении с показателями группы здоровых доноров не было выявлено статистически значимых отличий в количестве лейкоцитов, лимфоцитов и Т-хелперов (табл. 1).In the peripheral blood of all patients with AR before ASIT, after it and after the palination season, when compared with the parameters of the group of healthy donors, there were no statistically significant differences in the number of leukocytes, lymphocytes and T-helpers (Table 1).
При исследовании уровня экспрессии мРНК транскрипционных факторов, определяющих Th1/Th2-поляризацию иммунного ответа, в группе пациентов с АР было выявлено некоторое снижение уровня экспрессии мРНК GATA3 (в 1,1 раза) и ТВХ21 (в 1,4 раза) и статистически значимое увеличение соотношения GATA3/TBX21 в 2,1 раза относительно показателей здоровых людей, что подтвердило наличие Th2-дисбаланса у пациентов с АР до проведения АСИТ (р=0,004, табл. 2).When studying the level of mRNA expression of transcription factors that determine the Th1 / Th2 polarization of the immune response, a slight decrease in the expression level of GATA3 mRNA (1.1 times) and TBX21 (1.4 times) and a statistically significant increase were revealed in the group of patients with AR the GATA3 / TBX21 ratio is 2.1 times that of healthy people, which confirmed the presence of Th2 imbalance in patients with AR before ASIT (p = 0.004, table 2).
При цитометрическом исследовании у всех пациентов с АР было выявлено статистически значимое снижение в периферической крови в 1,5 раза доли Трег (CD25+FOXP3+) среди CD4+ Т-клеток (р=0,003, табл. 3) и в 1,3 раза их абсолютного количества относительно показателей здоровых доноров. Снижение количества Трег в основном было обусловлено уменьшением численности Трег, экспрессирующих только изоформу FOXP3, лишенную продукта экзона 2 (FOXP3Δ2 Трег). Данный показатель был в 1,5 раза ниже, чем в группе здоровых доноров (р=0,003, табл. 3).A cytometric study of all patients with AR revealed a statistically significant decrease in the peripheral blood of 1.5 times the proportion of Treg (CD25 + FOXP3 + ) among CD4 + T cells (p = 0.003, table 3) and 1.3 times their absolute number relative to indicators of healthy donors. The decrease in the number of Treg was mainly due to the decrease in the number of Treg expressing only the FOXP3
Таким образом, было показано, что до проведения терапии в исследуемой группе было выявлено наличие характерного для аллергических заболеваний Th2-дисбаланса (повышение соотношения GATA3/TBX21) и снижение содержания регуляторных Т-клеток, в основном, за счет уменьшения численности регуляторных Т-клеток, экспрессирующих молекулу FOXP3, лишенную экзона 2. Последнее обстоятельство расценивается как снижение функциональной активности регуляторных Т-клеток.Thus, it was shown that prior to the treatment, the study group revealed the presence of Th2 imbalance characteristic of allergic diseases (an increase in the GATA3 / TBX21 ratio) and a decrease in the content of regulatory T cells, mainly due to a decrease in the number of regulatory T cells, expressing a FOXP3
ПРИМЕР 2.EXAMPLE 2
После проведения АСИТ соотношение GATA3/TBX21 снизилось и перестало статистически значимо отличаться от показателя нормы, не достигая, однако, последней, но отражая положительный эффект от проведенной терапии, который сохранялся до окончания сезона палинации. Также у пациентов с АР, получивших АСИТ, по окончании сезона палинации было отмечено статистически значимое снижение экспрессии мРНК транскрипционного фактора RORC, определяющего дифференцировку провоспалительных ТЫ7-клеток, что так же можно расценивать в качестве положительного (противовоспалительного) эффекта от проведенной терапии. Анализ уровня экспрессии мРНК, кодирующей полную молекулу FOXP3, не показал статистически значимых изменений по сравнению со здоровыми донорами.After ASIT, the GATA3 / TBX21 ratio decreased and ceased to differ statistically significantly from the norm, not reaching, however, the latter, but reflecting the positive effect of the therapy that lasted until the end of the palination season. Also, in patients with AR who received ASIT, at the end of the palination season, a statistically significant decrease in the mRNA expression of the transcription factor RORC was observed, which determines the differentiation of pro-inflammatory TY7 cells, which can also be regarded as a positive (anti-inflammatory) effect of the therapy. Analysis of the expression level of mRNA encoding the complete FOXP3 molecule did not show statistically significant changes compared to healthy donors.
Наиболее ярким и статистически достоверным фактом стало уменьшение почти в 2 раза доли Трег, экспрессирующих полную молекулу FOXP3 (FOXP3-FL), у пациентов, прошедших АСИТ, по окончании сезона палинации в сравнении с этим показателем до проведения АСИТ (26,8% после сезона палинации против 46,7% до АСИТ, р=0,01 по критерию Вилкоксона, фиг. 2). Данное снижение свидетельствует об относительном накоплении функционально активных неполных изоформ молекулы FOXP3Δ2 Трег после сезона палинации, локализующихся преимущественно в ядре и определяющих функциональную активность Трег.The most striking and statistically significant fact was a almost 2-fold decrease in the proportion of Treg expressing the complete FOXP3 molecule (FOXP3-FL) in patients undergoing ASIT at the end of the palination season in comparison with this indicator before ASIT (26.8% after the season palinations against 46.7% to ASIT, p = 0.01 according to the Wilcoxon test, Fig. 2). This decrease indicates the relative accumulation of functionally active incomplete isoforms of the FOXP3Δ2 Treg molecule after the palination season, which are localized mainly in the nucleus and determine the functional activity of Treg.
Подводя итог проведенному исследованию, можно констатировать, что для пациентов с АР характерно снижение в периферической крови уровня Трег в основном за счет FOXP3Δ2 Трег, что, возможно, обуславливает снижение их функциональной активности. При этом уменьшение доли FOXP3-FL Трег (или относительное накопление FOXP3Δ2 Трег) у пациентов с АР после проведения АСИТ, ярко выраженное по окончании сезона палинации, должно свидетельствовать об относительном усилении функциональной активности Трег. Выдвинутые предположения основываются на литературных данных о молекуле FOXP3-FL как функционально малоактивной в качестве транскрипционного фактора и локализующейся преимущественно в цитоплазме клетки.Summing up the study, we can conclude that patients with AR are characterized by a decrease in the level of Treg in peripheral blood, mainly due to FOXP3Δ2 Treg, which may lead to a decrease in their functional activity. At the same time, a decrease in the proportion of FOXP3-FL Treg (or relative accumulation of FOXP3Δ2 Treg) in patients with AR after ASIT, pronounced at the end of the palination season, should indicate a relative increase in the functional activity of Treg. The assumptions made are based on published data on the FOXP3-FL molecule as functionally inactive as a transcription factor and localized mainly in the cytoplasm of the cell.
Таким образом, результаты настоящего исследования указывают на уменьшение количества и снижение функциональной активности Трег периферической крови при аллергическом рините/риноконъюнктивите. Функциональная активность Трег корректируется после проведения АСИТ - эффект имеет долгосрочный характер, сохраняясь и наиболее интенсивно проявляясь по окончании сезона палинации.Thus, the results of this study indicate a decrease in the number and a decrease in the functional activity of Treg of peripheral blood in allergic rhinitis / rhinoconjunctivitis. The functional activity of Treg is corrected after ASIT - the effect is long-term in nature, persisting and most intensively manifested at the end of the palination season.
Краткое описание чертежей.A brief description of the drawings.
Фиг. 1. Алгоритм гейтирования при цитометрическом анализе Трег, экспрессирующих различные изоформы молекулы FOXP3, на примере мононуклеаров периферической крови обследованного лица из группы здоровых доноров.FIG. 1. The gating algorithm in the cytometric analysis of Treg expressing various isoforms of the FOXP3 molecule, using the example of peripheral blood mononuclear cells of the examined person from the group of healthy donors.
а-в - выставление FOXP3+ гейта по CD3--клеткам, заведомо не экспрессирующим молекулу FOXP3: CD3--клетки среди лимфоцитов (а); выставление FOXP3(PCH101)+ гейта по CD3--клеткам (б); выставление FOXP3(150D/E4)+ гейта по CD3--клеткам (в),a-c - exposure of FOXP3 + gate to CD3 - cells that obviously do not express the FOXP3 molecule: CD3 - cells among lymphocytes (a); exposure of FOXP3 (PCH101) + gate on CD3 - cells (b); setting FOXP3 (150D / E4) + gate on CD3 - cells (c),
г-е - определение Трег, экспрессирующих различные изоформы молекулы FOXP3: CD4+Т-клетки среди лимфоцитов (г); CD25+FOXP3(PCH101)+ - все Трег среди CD4+ Т-клеток (д); FOXP3(150D/E4)+ - FOXP3 FL Трег среди всех Трег (е).gf — determination of Treg expressing various isoforms of the FOXP3 molecule: CD4 + T cells among lymphocytes (g); CD25 + FOXP3 (PCH101) + - all Treg among CD4 + T cells (d); FOXP3 (150D / E4) + - FOXP3 FL Treg among all Treg (e).
Фиг. 2. Доля Трег, экспрессирующих полную изоформу FOXP3 (FOXP3-FL), в периферической крови пациентов с аллергическим ринитом до и после АСИТ, а также здоровых доноров.FIG. 2. The proportion of Treg expressing the complete isoform FOXP3 (FOXP3-FL) in the peripheral blood of patients with allergic rhinitis before and after ASIT, as well as healthy donors.
* - р<0,05 отн. доноров; ## - р<0,05 отн. показателя до АСИТ* - p <0.05 rel. donors; ## - p <0.05 rel. indicator to ASIT
Список литературы.Bibliography.
1. Ярилин А.А. Транскрипционные регуляторы дифференцировки Т-хелперов // Иммунология. 2010; 31(3): 152-66.1. Yarilin A.A. Transcriptional regulators of differentiation of T-helpers // Immunology. 2010; 31 (3): 152-66.
2. Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, Turner H, Murphy TL, Murphy KM, Weaver CT: Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages. Nat Immunol 2005, 6:1123-1132.2. Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, Turner H, Murphy TL, Murphy KM, Weaver CT: Interleukin 17-producing CD4 + effector T cells develop via a lineage distinct from the
3. Palmer C., Mulligan J.K., Smith S.E., Atkinson C. The role of regulatory T cells in the regulation of upper airway inflammation. Am J Rhinol Allergy. 2017; 31(6): 345-351.3. Palmer C., Mulligan J.K., Smith S.E., Atkinson C. The role of regulatory T cells in the regulation of upper airway inflammation. Am J Rhinol Allergy. 2017; 31 (6): 345-351.
4. Huang X, Chen Y, Zhang F, et al. Peripheral Th17/Treg cell-mediated immunity imbalance in allergic rhinitis patients. Braz J Otorhinolaryngol. 2014; 80: 152-155.4. Huang X, Chen Y, Zhang F, et al. Peripheral Th17 / Treg cell-mediated immunity imbalance in allergic rhinitis patients. Braz J Otorhinolaryngol. 2014; 80: 152-155.
5. Han D, Wang C, Lou W, et al. Allergen-specific IL-10-secreting type I T regulatory cells, but not CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) T cells, are decreased in peripheral blood of patients with persistent allergic rhinitis. Clin Immunol. 2010; 136: 292-301.5. Han D, Wang C, Lou W, et al. Allergen-specific IL-10-secreting type I T regulatory cells, but not CD4 (+) CD25 (+) Foxp3 (+) T cells, are decreased in peripheral blood of patients with persistent allergic rhinitis. Clin Immunol. 2010; 136: 292-301.
6. Gene S, Eroglu H, Kucuksezer UC, et al. The decreased CD4+CD25+FoxP3+ T cells in nonstimulated allergic rhinitis patients sensitized to house dust mites. J Asthma. 2012; 49:569-574.6. Gene S, Eroglu H, Kucuksezer UC, et al. The decreased CD4 + CD25 + FoxP3 + T cells in nonstimulated allergic rhinitis patients sensitized to house dust mites. J Asthma. 2012; 49: 569-574.
7. Sakaguchi S., Yamaguchi Т., Nomura Т., Ono M., Regulatory T cells and immune tolerance. Cell. 2008; 133(5): 775-87.7. Sakaguchi S., Yamaguchi T., Nomura T., Ono M., Regulatory T cells and immune tolerance. Cell. 2008; 133 (5): 775-87.
8. Smith E.L., Finney H.M., Nesbitt A.M., Ramsdell F., Robinson M.K. Splice variants of human FOXP3 are functional inhibitors of human CD4+ T-cell activation. Immunology. 2006; 119(2): 203-11.8. Smith EL, Finney HM, Nesbitt AM, Ramsdell F., Robinson MK Splice variants of human FOXP3 are functional inhibitors of human CD4 + T-cell activation. Immunology 2006; 119 (2): 203-11.
9. Kaur G., Goodall J.C., Jarvis L.B., Hill Gaston J.S. Characterisation of Foxp3 splice variants in human CD4+ and CD8+ T cells - Identification of Foxp3delta7 in human regulatory T cells. Mol. Immunol. 2010; 48(1-3): 321-32.9. Kaur G., Goodall JC, Jarvis LB, Hill Gaston JS Characterization of Foxp3 splice variants in human CD4 + and CD8 + T cells - Identification of Foxp3delta7 in human regulatory T cells. Mol. Immunol. 2010; 48 (1-3): 321-32.
10. Chae W.J., Henegariu O., Lee S.K., Bothwell A.L. The mutant leucine-zipper domain impairs both dimerization and suppressive function of Foxp3 in T cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006; 103(25): 9631-6.10. Chae W.J., Henegariu O., Lee S.K., Bothwell A.L. The mutant leucine-zipper domain impairs both dimerization and suppressive function of Foxp3 in T cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006; 103 (25): 9631-6.
11. Zheng Y., Josefowicz S.Z., Kas A., Chu T.T., Gavin M.A., Rudensky A.Y. Genome-wide analysis of Foxp3 target genes in developing and mature regulatory T cells. Nature. 2007; 445(7130): 936-40.11. Zheng Y., Josefowicz S.Z., Kas A., Chu T.T., Gavin M.A., Rudensky A.Y. Genome-wide analysis of Foxp3 target genes in developing and mature regulatory T cells. Nature. 2007; 445 (7130): 936-40.
12. Рязанов M.B. и др. Оценка эффективности аллерген-специфической иммунотерапии у детей с поллинозом с помощью допплерографии подъязычных слюнных желез // file:///C:/Users/User/Downloads/1460-1056-1-SM.pdf12. Ryazanov M.B. et al. Evaluation of the effectiveness of allergen-specific immunotherapy in children with hay fever using dopplerography of the sublingual salivary glands // file: /// C: /Users/User/Downloads/1460-1056-1-SM.pdf
13. Самуйлов Ю.Ю. Определение степени тяжести и оценка эффективности лечения аллергического ринита // Автореферат, Санкт-Петербург, 2008, http://www.dissercat.com/content/opredelenie-stepeni-tyazhesti-i-otsenka-effektivnosti-lecheniya-allergicheskogo-rinita#ixzz5Y9GnKBvr).13. Samuylov Yu.Yu. Determination of severity and evaluation of the effectiveness of treatment of allergic rhinitis // Abstract, St. Petersburg, 2008, http://www.dissercat.com/content/opredelenie-stepeni-tyazhesti-i-otsenka-effektivnosti-lecheniya-allergicheskogo-rinita#ixzz5Y9GnKBvr )
14. Мокроносова М.А. и др. Оценка эффективности фармакотерапии аллергического ринита по снижению концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете // Медицинская иммунология. 2006; 8(5-6): 689-696.https://doi.org/10.15789/1563-0625-2006-5-6-689-69614. Mokronosova M.A. et al. Evaluation of the effectiveness of pharmacotherapy of allergic rhinitis in reducing the concentration of free hemoglobin in a nasal secret // Medical Immunology. 2006; 8 (5-6): 689-696.https: //doi.org/10.15789/1563-0625-2006-5-6-689-696
15. RU 2400148, 27.09.201015. RU 2400148, 09/27/2010
16. Арсеньева Н.А. Фенотипические маркеры прогноза эффективности аллерген-специфической иммунотерапии детей с поллинозами // Автореферат кмн, Москва, 2008, http://www.dissercat.com/content/fenotipicheskie-markery-prognoza-effektivnosti-allergenspetsificheskoi-immunoterapii-detei-s#ixzz5YcRqQzdY16. Arsenyev N.A. Phenotypic markers for predicting the effectiveness of allergen-specific immunotherapy in children with hay fever // Abstract kmn, Moscow, 2008, http://www.dissercat.com/content/fenotipicheskie-markery-prognoza-effektivnosti-allergenspetsificheskoi-immunoterapii-detei-s#ixzzdYcR
17. Агафонова E.B. и др. Компонентная аллергодиагностика: возможности прогнозирования эффективности аллерген-специфической иммунотерапии // Практическая медицина, 2016, 3 (95) май, стр. 7-1217. Agafonova E.B. et al. Component Allergy Diagnostics: Possibilities for Predicting the Effectiveness of Allergen-Specific Immunotherapy // Practical Medicine, 2016, 3 (95) May, pp. 7-12
18. Chomczynski Р, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987; 162(1): 156-9.18. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987; 162 (1): 156-9.
19. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using realtime quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 2001; 25(4): 402-8.19. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using realtime quantitative PCR and the 2 (-Delta Delta C (T)) Method. Methods 2001; 25 (4): 402-8.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101341A RU2700788C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019101341A RU2700788C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2700788C1 true RU2700788C1 (en) | 2019-09-23 |
Family
ID=68063135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019101341A RU2700788C1 (en) | 2019-01-17 | 2019-01-17 | Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2700788C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2775129C1 (en) * | 2021-04-20 | 2022-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for preventing autoimmune thyroiditis in the course of allergen-specific therapy |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2902940A1 (en) * | 2013-02-27 | 2014-09-04 | The Broad Institute, Inc. | T cell balance gene expression, compositions of matters and methods of use thereof |
| RU2015156628A (en) * | 2013-06-04 | 2017-07-14 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | METHODS FOR TREATING ALLERGIES AND INCREASING EFFECTIVENESS OF ALLERGEN-SPECIFIC IMMUNOTHERAPY BY INTRODUCING IL-4P INHIBITOR |
| US20180119099A1 (en) * | 2012-06-18 | 2018-05-03 | Yale University | Compositions and methods for diminishing an immune response |
-
2019
- 2019-01-17 RU RU2019101341A patent/RU2700788C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20180119099A1 (en) * | 2012-06-18 | 2018-05-03 | Yale University | Compositions and methods for diminishing an immune response |
| CA2902940A1 (en) * | 2013-02-27 | 2014-09-04 | The Broad Institute, Inc. | T cell balance gene expression, compositions of matters and methods of use thereof |
| RU2015156628A (en) * | 2013-06-04 | 2017-07-14 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | METHODS FOR TREATING ALLERGIES AND INCREASING EFFECTIVENESS OF ALLERGEN-SPECIFIC IMMUNOTHERAPY BY INTRODUCING IL-4P INHIBITOR |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| PARK J. W. Allergen specific immunotherapy for allergic rhinitis //The Korean Journal of Medicine, 2013 Т. 84, N. 6, с. 798-801. * |
| МИТИН А. Н. и др. Экспрессия фактора FOXP3 и соотношение его изоформ в Т-клетках на разных стадиях дифференцировки //Иммунология, 2012, Т. 33, N. 4. * |
| МИТИН А. Н. и др. Экспрессия фактора FOXP3 и соотношение его изоформ в Т-клетках на разных стадиях дифференцировки //Иммунология, 2012, Т. 33, N. 4. ЯРИЛИН А. А. и др. Естественные регуляторные Т-клетки и фактор FOXP3 //Иммунология, 2006, Т. 27, N. 3, с. 176-188. PARK J. W. Allergen specific immunotherapy for allergic rhinitis //The Korean Journal of Medicine, 2013 Т. 84, N. 6, с. 798-801. * |
| ЯРИЛИН А. А. и др. Естественные регуляторные Т-клетки и фактор FOXP3 //Иммунология, 2006, Т. 27, N. 3, с. 176-188. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2775129C1 (en) * | 2021-04-20 | 2022-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for preventing autoimmune thyroiditis in the course of allergen-specific therapy |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Conejero et al. | Lung CD103+ dendritic cells restrain allergic airway inflammation through IL-12 production | |
| Campbell et al. | Peptide immunotherapy in allergic asthma generates IL-10–dependent immunological tolerance associated with linked epitope suppression | |
| DeLong et al. | Ara h 1–reactive T cells in individuals with peanut allergy | |
| Chan et al. | Patients with cystic fibrosis have inducible IL-17+ IL-22+ memory cells in lung draining lymph nodes | |
| Ling et al. | Allergen-specific CD4+ T cells in human asthma | |
| Zhen et al. | Enhanced Th1 and Th17 responses in peripheral blood in active non-segmental vitiligo | |
| Pant et al. | CD4+ and CD8+ regulatory T cells in chronic rhinosinusitis mucosa | |
| Tao et al. | FOXP3+ T regulatory cells in lesions of oral lichen planus correlated with disease activity | |
| Tan et al. | Impaired function of regulatory T-cells in patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD) | |
| Campana et al. | Frequent occurrence of T cell–mediated late reactions revealed by atopy patch testing with hypoallergenic rBet v 1 fragments | |
| Reeder et al. | The common γ-chain cytokine IL-7 promotes immunopathogenesis during fungal asthma | |
| de Oliveira et al. | Preconception allergen sensitization can induce B10 cells in offspring: a potential main role for maternal IgG | |
| US9964540B2 (en) | Detection of an immune response | |
| US20130004528A1 (en) | Direct analysis of antigen-specific immune response | |
| Ansari et al. | Deregulated phenotype of autoreactive Th17 and Treg clone cells in pemphigus vulgaris after in-vitro treatment with desmoglein antigen (Dsg-3) | |
| Wilfahrt et al. | Histone deacetylase 3 represses cholesterol efflux during CD4+ T-cell activation | |
| Boehne et al. | Tim-3 is dispensable for allergic inflammation and respiratory tolerance in experimental asthma | |
| RU2700788C1 (en) | Method for assessment of efficiency of allergen-specific immunotherapy in allergic rhinitis | |
| Arai et al. | Basophils from allergic rhinitis patients show allergen-specific upregulation of thymic stromal lymphopoietin receptor | |
| Fernández-Nieto et al. | Changes in sputum eicosanoids and inflammatory markers after inhalation challenges with occupational agents | |
| Gomes de Castro et al. | Downmodulation of regulatory T cells producing TGF-β participates in pathogenesis of leprosy reactions | |
| Hou et al. | Impact of enhancer of zeste homolog 2 on T helper cell-mediated allergic rhinitis | |
| Naydenova et al. | Il-10 and Il-35 As Inflammation Regulators in Patients With Allergic Rhinitis and Mild Atopic Asthma | |
| Černý et al. | Value of cord blood Treg population properties and function-associated characteristics for predicting allergy development in childhood | |
| Kudo et al. | Cyclosporin A indirectly attenuates activation of group 2 innate lymphoid cells in papain-induced lung inflammation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210118 |
|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: CORRECTION TO CHAPTER -MM4A- IN JOURNAL 34-2021 |