RU2680664C1 - Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method - Google Patents
Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method Download PDFInfo
- Publication number
- RU2680664C1 RU2680664C1 RU2017144359A RU2017144359A RU2680664C1 RU 2680664 C1 RU2680664 C1 RU 2680664C1 RU 2017144359 A RU2017144359 A RU 2017144359A RU 2017144359 A RU2017144359 A RU 2017144359A RU 2680664 C1 RU2680664 C1 RU 2680664C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- time
- series
- laser scanning
- images
- signal
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 18
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 abstract description 18
- 239000011575 calcium Substances 0.000 abstract description 18
- 239000000975 dye Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002232 neuromuscular Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000007383 nerve stimulation Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 102000038650 voltage-gated calcium channel activity Human genes 0.000 description 1
- 108091023044 voltage-gated calcium channel activity Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01J—MEASUREMENT OF INTENSITY, VELOCITY, SPECTRAL CONTENT, POLARISATION, PHASE OR PULSE CHARACTERISTICS OF INFRARED, VISIBLE OR ULTRAVIOLET LIGHT; COLORIMETRY; RADIATION PYROMETRY
- G01J1/00—Photometry, e.g. photographic exposure meter
- G01J1/58—Photometry, e.g. photographic exposure meter using luminescence generated by light
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
- G02B21/002—Scanning microscopes
- G02B21/0024—Confocal scanning microscopes (CSOMs) or confocal "macroscopes"; Accessories which are not restricted to use with CSOMs, e.g. sample holders
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемый способ относится к использованию лазерной сканирующей конфокальной микроскопии при регистрации высокоскоростных флуоресцентных сигналов. В частности, в физиологических исследованиях, для регистрации интенсивности свечения кальциевых красителей в нервно-мышечном препарате при стимуляции двигательного нерва.The proposed method relates to the use of laser scanning confocal microscopy for recording high-speed fluorescent signals. In particular, in physiological studies, to register the intensity of the glow of calcium dyes in the neuromuscular preparation during stimulation of the motor nerve.
Известен способ сканирования флуоресцентных сигналов от биологических объектов при помощи лазерного сканирующего конфокального микроскопа (принцип впервые предложен М. Мински в 1957 г.), описанный в книге "Мухитова А.Р., Архиповой С.С, Никольского Е.Е., Современная световая микроскопия в биологических и медицинских исследованиях Казанский институт биохимии и биофизики КазНЦ РАН, Казанский гос. мед университет Росздрава. - М.: Наука, 2011. - 140 с. - ISBN 978-5-02-037483-6", в соответствие с которым препарат сканируют поточечно лазерным лучом и возбуждают флуоресцентный краситель, свет от которого через конфокальную диафрагму регистрируется фотоумножителем. Затем из зарегистрированных значений интенсивности света при помощи компьютера восстанавливается поточено изображение препарата. Для формирования серии изображений, циклы сканирования повторяются.A known method of scanning fluorescent signals from biological objects using a laser scanning confocal microscope (the principle was first proposed by M. Minsky in 1957), described in the book "A. Mukhitova, S. Arkhipova, E. E. Nikolsky, Modern Light microscopy in biological and medical research, Kazan Institute of Biochemistry and Biophysics, KazSC RAS, Kazan State Medical University of Roszdrav. - M .: Nauka, 2011. - 140 pp. - ISBN 978-5-02-037483-6 ", in accordance with which the drug is scanned dotwise by a laser beam and excite fluo estsentny dye, through which light from the confocal aperture is recorded by a photomultiplier. Then from the registered values of light intensity with the help of a computer the restored image of the preparation is restored. To form a series of images, scan cycles are repeated.
Смещения Стокса - разница длин волн максимумов спектров поглощения и испускания флуоресценции флуорохромом. Измеряется в обратных сантиметрах, реже нанометрах, в силу нелинейности зависимости энергии фотона от длинны волны. Назван в честь физика Джоджа Стокса.Stokes bias is the difference in the wavelengths of the maxima of the absorption and fluorescence spectra of the fluorochrome. It is measured in inverse centimeters, less often nanometers, due to the nonlinearity of the dependence of the photon energy on the wavelength. Named after physicist George Stokes.
Кальциевый транзиент - изменение интенсивности свечения кальциевого флуоресцентного красителя во времени в зависимости от концентрации ионов кальция в среде.Calcium transient - a change in the intensity of the glow of a calcium fluorescent dye over time, depending on the concentration of calcium ions in the medium.
Вход кальция - вход в нервное окончание ионов кальция через кальциевые каналы, расположенные на мембране.Calcium entry - entry into the nerve ending of calcium ions through calcium channels located on the membrane.
Кальциевый канал - семейство ионных каналов, избирательно проницаемых для ионов кальция.The calcium channel is a family of ion channels selectively permeable to calcium ions.
Потенциал действия - волна возбуждения, перемещающаяся по мембране живой клетки в виде кратковременного изменения мембранного потенциала на небольшом участке возбудимой клетки, в результате которого наружная поверхность этого участка становится отрицательно заряженной по отношению к внутренней поверхности мембраны, в то время, как в покое она заряжена положительно. Потенциал действия является физиологической основой нервного импульса.The action potential is an excitation wave moving along the membrane of a living cell in the form of a short-term change in the membrane potential in a small area of an excitable cell, as a result of which the outer surface of this section becomes negatively charged relative to the inner surface of the membrane, while at rest it is positively charged . The action potential is the physiological basis of the nerve impulse.
Конфокальная диафрагма - это диафрагма конфокального микроскопа, которая предназначена отсекать поток фонового рассеянного света. Диафрагма расположена после объективной линзы так, чтобы свет, испускаемый исследуемой точкой, проходил через нее, а свет, исходящий от других точек, задерживался диафрагмой.A confocal aperture is the diaphragm of a confocal microscope, which is designed to cut off the flow of background scattered light. The diaphragm is located after the objective lens so that the light emitted by the studied point passes through it, and the light emanating from other points is delayed by the diaphragm.
Недостатком имеющегося способа является низкая скорость сканирования. Ограничение скорости сканирования связано со временем, необходимым на механическое перемещение зеркал, которые позиционируют лазерный луч. Современные конфокальные микроскопы позволяют сканировать изображение с разверткой несколько десятков мс на кадр. Этого недостаточно для регистрации быстрых процессов. Возможно высокоскоростное сканирование одной линии изображения. Но при таком режиме сканирования, можно получить информацию только от ограниченной зоны объекта исследования.The disadvantage of this method is the low scanning speed. The limitation of the scanning speed is associated with the time required for the mechanical movement of the mirrors that position the laser beam. Modern confocal microscopes allow you to scan an image with a scan of several tens of ms per frame. This is not enough to register fast processes. High-speed scanning of one image line is possible. But with this scanning mode, you can get information only from the limited area of the object of study.
Техническая задача, на решение которой направлено данное изобретение, является улучшение временного разрешения при сканировании быстрых флуоресцентных сигналов в лазерной сканирующей конфокальной микроскопии на примере регистрации флуоресцентного кальциевого транзиента.The technical problem to which this invention is directed is to improve the temporal resolution when scanning fast fluorescence signals in laser scanning confocal microscopy using the example of registration of a fluorescent calcium transient.
Технический результат предлагаемого способа регистрации быстрых флуоресцентных сигналов при помощи лазерного сканирующего конфокального микроскопа заключается в возможности достоверной оценки амплитудных и временных характеристик регистрируемых быстрых флуоресцентных сигналов.The technical result of the proposed method for recording fast fluorescence signals using a laser scanning confocal microscope is the possibility of a reliable assessment of the amplitude and time characteristics of the recorded fast fluorescence signals.
Технический результат в предлагаемом способе регистрации быстрых флуоресцентных сигналов при помощи лазерного сканирующего конфокального микроскопа, включающий в себя получение на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе временной серии изображений и построение графика зависимости интенсивности свечения флуоресцентного красителя от времени, достигается тем, что съемка происходит в несколько этапов, на каждом из которых сигнал от препарата смещается на некую константу времени при неизменных параметрах сканирования микроскопа, а полученные в ходе эксперимента серии изображений собираются в одну серию по определенному алгоритму.The technical result in the proposed method for recording fast fluorescence signals using a laser scanning confocal microscope, which includes obtaining a time series of images on a laser scanning confocal microscope and plotting the time dependence of the luminescence intensity of the fluorescent dye, is achieved by the fact that shooting takes place in several stages, each of which the signal from the drug is shifted to a certain time constant with the microscope scanning parameters unchanged And received in the course of a series of images of the experiment are collected in one series by a certain algorithm.
Рассмотрим осуществление предлагаемого способа регистрации быстрого кальциевого флуоресцентного сигнала при помощи лазерного сканирующего конфокального микроскопа на примере регистрации кальциевого транзиента.Consider the implementation of the proposed method for recording a fast calcium fluorescence signal using a laser scanning confocal microscope using the example of recording a calcium transient.
Лазерный сканирующий конфокальный микроскоп - это микроскоп, получение изображения в котором осуществляется сканированием препарата, окрашенного флуоресцентным красителем, сфокусированным лазерным лучом определенной длины волны. Перемещение лазерного луча осуществляется за счет системы зеркал, которые осуществляют развертку лазерного луча при сканировании препарата. Во время сканирования препарата лазерный луч возбуждает флуоресцентный краситель, который согласно смещению Стокса испускает свет, длина волны которого выше длинны волны света от лазерного источника возбуждения. С помощью системы фильтров свет возбуждения задерживается, а свет эмиссии проходит через конфокальную диафрагму и регистрируется системой фотоумножителей. Из зарегистрированных интенсивностей свечения, соответствующих определенным точкам препарата, при помощи компьютера формируется интересующее нас видеоизображение.A laser scanning confocal microscope is a microscope in which an image is obtained by scanning a preparation stained with a fluorescent dye focused by a laser beam of a specific wavelength. The laser beam is moved through a system of mirrors that scan the laser beam when scanning the drug. During the scanning of the preparation, the laser beam excites a fluorescent dye, which, according to the Stokes shift, emits light whose wavelength is higher than the wavelength of light from the laser excitation source. Using a filter system, the excitation light is delayed, and the emission light passes through the confocal diaphragm and is recorded by the photomultiplier system. From the recorded intensities of the glow corresponding to certain points of the drug, a video image of interest to us is formed using a computer.
В случае регистрации кальциевого транзиента одновременно со сканированием изображения осуществляется стимуляция препарата, которая вызывает изменение свечения флуоресцентного красителя. Регистрация входа кальция осуществляется при помощи флуоресцентных кальциевых красителей, которые меняют интенсивность своего свечения в зависимости от концентрации ионов кальция в среде (кальциевый транзиент). Вход ионов кальция в периферические нервные окончания является быстропротекающим биологическим процессом и для его регистрации необходимо высокоскоростное сканирование. Длительность кальциевого транзиента в зависимости от красителя и объекта исследования составляет 500-1000 мс а скорость нарастания переднего фронта кальциевого транзиента составляет около 6-12 мс. Соответственно для корректного анализа амплитуды флуоресцентного кальциевого транзиента необходимо временное разрешение системы регистрации порядка 1 миллисекунды на кадр. Существующие конфокальные сканирующие системы позволяют сканировать изображения размером 512 на 512 пикселей со скоростью 30-70 миллисекунд на кадр, что не позволяет оценивать корректно амплитудные и временные характеристики кальциевого транзиента.In the case of registration of a calcium transient, simultaneously with the scanning of the image, the drug is stimulated, which causes a change in the fluorescence dye glow. Calcium input is recorded using fluorescent calcium dyes, which change the intensity of their glow depending on the concentration of calcium ions in the medium (calcium transient). The entry of calcium ions into the peripheral nerve endings is a fast-moving biological process and high-speed scanning is necessary for its registration. The duration of the calcium transient depending on the dye and the object of study is 500-1000 ms and the rise rate of the leading edge of the calcium transient is about 6-12 ms. Accordingly, for the correct analysis of the amplitude of the fluorescent calcium transient, a temporary resolution of the registration system of the order of 1 millisecond per frame is necessary. Existing confocal scanning systems allow you to scan images of 512 by 512 pixels at a speed of 30-70 milliseconds per frame, which does not allow you to correctly evaluate the amplitude and time characteristics of the calcium transient.
Кальциевый транзиент инициируется входом кальция в нервное окончание через потенциал-чувствительные кальциевые каналы во время распространяющегося потенциала действия. Потенциал действия запускается раздражением двигательного нерва специализированным стимулятором биологических объектов. Стимулятор - это внешнее электронное устройство, которое выдает импульсы заданной амплитуды и длительности. Стимулятор синхронизируется с конфокальным сканирующим микроскопом через блок синхронизации, входящий в состав микроскопа.The calcium transition is initiated by the entry of calcium into the nerve ending through voltage-sensitive calcium channels during the propagating action potential. The action potential is triggered by stimulation of the motor nerve by a specialized stimulator of biological objects. A stimulator is an external electronic device that gives out pulses of a given amplitude and duration. The stimulator is synchronized with the confocal scanning microscope through the synchronization unit, which is part of the microscope.
Блок синхронизации осуществляет запуск стимулятора синхроимпульсом. В момент начала съемки видеоизображения блок синхронизации посылает импульсный сигнал на стимулятор, после чего стимулятор посылает импульсный сигнал на препарат. На стимуляторе можно настраивать задержку между синхроимпульсом от микроскопа и импульсом, стимулирующим препарат.The synchronization unit starts the stimulator with a sync pulse. At the time the video image is taken, the synchronization unit sends a pulse signal to the stimulator, after which the stimulator sends a pulse signal to the drug. On the stimulator, you can adjust the delay between the sync pulse from the microscope and the pulse stimulating the drug.
Разработанный способ позволяет зарегистрировать повторяющийся периодический флуоресцентный кальциевый сигнал с достаточным временным и пространственным разрешением посредством только программных операций, без конструктивного изменения существующей конфокальной системы. Суть метода заключается в том, что сигнал стимуляции можно смещать относительно начала процесса сканирования микроскопом. Это достигается посредством задержки этого сигнала стимулятором. Так как развертка микроскопа неизменна, то регистрировать сигнал при смещении микроскоп будет в других точках, отстоящих по времени от начала исходного сигнала на величину временной константы t. Величина t выбирается исходя из необходимого временного разрешения и зависит от временных параметров регистрируемого сигнала. Чтобы достичь необходимого результата, нужно смещать сигнал до тех пор, пока шаг времени смещения n*t не достигнет значения минимального времени между кадрами Т (n*t=Т), где n=1, 2, 3,.., N(Фигура 1). Длительность одной серии кадров k*T выбирается исходя из длительности интересующего сигнала флуоресценции и должна превышать его длительность на значение Т, где k - количество кадров одного регистрируемого сигнала. На фиг. 1 изображен сигнал без смещения и четыре смещенных сигнала. Так как микроскоп формирует кадры с периодом Т, то полученный сигнал будет далек от истинного. На изображении он представлен пятью соединенными между собой точками сигнала без смещения, попавшими в момент регистрации кадра. Таким образом, смещая сигнал по времени, можно собрать потерянные из-за низкой скорости сканирования кадры и соответственно потерянные точки сигнала. Восстановление флуоресцентного сигнала с высоким временным разрешением из зарегистрированных серий кадров осуществляется согласно следующему алгоритму (Фиг. 2): кадр из смещенной серии изображений вставляется за соответствующим кадром первой серии изображений в порядке смещения. Собранные кадры таким путем объединяются в порядке смещения в одно видеоизображение, которое будет обладать интересующей нас разверткой по времени. При этом развертка (время между кадрами) нового видеоизображения будет равна заданному шагу времени смещения сигнала t.The developed method allows you to register a repeating periodic fluorescent calcium signal with sufficient temporal and spatial resolution through only software operations, without constructive changes to the existing confocal system. The essence of the method is that the stimulation signal can be shifted relative to the beginning of the scanning process with a microscope. This is achieved by delaying this signal with a stimulator. Since the sweep of the microscope is unchanged, the signal will be recorded when the microscope is displaced at other points that are separated in time from the beginning of the original signal by the value of the time constant t. The value of t is selected based on the required time resolution and depends on the time parameters of the recorded signal. To achieve the desired result, you need to shift the signal until the offset time step n * t reaches the minimum time between frames T (n * t = T), where n = 1, 2, 3, .., N (Figure one). The duration of a series of frames k * T is selected based on the duration of the fluorescence signal of interest and should exceed its duration by a value of T, where k is the number of frames of one recorded signal. In FIG. 1 shows a non-biased signal and four biased signals. Since the microscope forms frames with a period T, the received signal will be far from true. In the image, it is represented by five interconnected signal points without bias that fell at the time of registration of the frame. Thus, by shifting the signal in time, it is possible to collect frames lost due to the low scanning speed and, accordingly, lost signal points. The restoration of a fluorescence signal with a high temporal resolution from registered series of frames is carried out according to the following algorithm (Fig. 2): a frame from an offset series of images is inserted behind the corresponding frame of the first series of images in the order of offset. Collected frames in this way are combined in the order of displacement into one video image, which will have a time scan of interest to us. In this case, the sweep (time between frames) of the new video image will be equal to the specified step of the signal displacement time t.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144359A RU2680664C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144359A RU2680664C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2680664C1 true RU2680664C1 (en) | 2019-02-25 |
Family
ID=65479309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017144359A RU2680664C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2680664C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5034613A (en) * | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
| RU2005115052A (en) * | 2005-05-18 | 2006-11-27 | Андрей Алексеевич Климов (RU) | METHOD FOR FLUORESCENT NANOSCOPY |
-
2017
- 2017-12-18 RU RU2017144359A patent/RU2680664C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5034613A (en) * | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
| RU2005115052A (en) * | 2005-05-18 | 2006-11-27 | Андрей Алексеевич Климов (RU) | METHOD FOR FLUORESCENT NANOSCOPY |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Штейн Г.И. "Руководство по конфокальной микроскопии" - СПб: ИНЦ РАН, 2007, всего - 77 страниц. Митрошина Е.В. "Оптический имиджинг в приложении к исследованию нейробиологических систем мозга", Электронное учебно-методическое пособие - Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2012, всего - 40 страниц. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lillis et al. | Two-photon imaging of spatially extended neuronal network dynamics with high temporal resolution | |
| Vicidomini et al. | STED nanoscopy with time-gated detection: theoretical and experimental aspects | |
| CN109187459B (en) | An adaptive scanning wide-field high-throughput tomographic imaging method and device | |
| US9551658B2 (en) | STED microscopy with pulsed excitation, continuous stimulation, and gated registration of spontaneously emitted fluorescence light | |
| JP2016504598A (en) | Apparatus and method for fluorescence imaging using radio frequency multiplex excitation | |
| Elson et al. | Real-time time-domain fluorescence lifetime imaging including single-shot acquisition with a segmented optical image intensifier | |
| US10041883B2 (en) | System and method for time-resolved fluorescence imaging and pulse shaping | |
| US20110031414A1 (en) | Device for microscopy having selective illumination of a plane | |
| Becker et al. | Picosecond fluorescence lifetime microscopy by TCSPC imaging | |
| US20130126755A1 (en) | Method and device for simultaneous multi-channel and multi-method acquisition of synchronized parameters in cross-system fluorescence lifetime applications | |
| JP7287961B2 (en) | System, apparatus and method for simultaneous multi-plane imaging | |
| Becker et al. | Multiwavelength TCSPC lifetime imaging | |
| Becker et al. | FRET measurements by TCSPC laser scanning microscopy | |
| Schultz et al. | Advances in two-photon scanning and scanless microscopy technologies for functional neural circuit imaging | |
| US20230039098A1 (en) | Adaptive illumination apparatus, method, and applications | |
| US20110043619A1 (en) | Resolution-Enhanced Luminescence Microscopy | |
| Talbot et al. | High speed unsupervised fluorescence lifetime imaging confocal multiwell plate reader for high content analysis | |
| CN111971606A (en) | Time-resolved imaging method with high spatial resolution | |
| Stuurman et al. | Impact of new camera technologies on discoveries in cell biology | |
| Chen et al. | Spatial resolution enhancement in photon-starved STED imaging using deep learning-based fluorescence lifetime analysis | |
| RU2680664C1 (en) | Fast fluorescent signals with the confocal laser scanning microscope recording method | |
| CN108982445A (en) | Two area's fluorescence lifetime micro imaging system of near-infrared of multiphoton excitation | |
| US11953440B2 (en) | Method and apparatus for simultaneous nonlinear excitation and detection of different chromophores across a wide spectral range using ultra-broadband light pulses and time-resolved detection | |
| Fernandez et al. | Dynamic real-time subtraction of stray-light and background for multiphoton imaging | |
| CN206848565U (en) | A kind of fast accurate optical focus strengthening system based on DMD |