RU2673537C2 - Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production - Google Patents
Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production Download PDFInfo
- Publication number
- RU2673537C2 RU2673537C2 RU2017117742A RU2017117742A RU2673537C2 RU 2673537 C2 RU2673537 C2 RU 2673537C2 RU 2017117742 A RU2017117742 A RU 2017117742A RU 2017117742 A RU2017117742 A RU 2017117742A RU 2673537 C2 RU2673537 C2 RU 2673537C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- osteomyelitis
- bone marrow
- bone
- ratio
- granulocyte
- Prior art date
Links
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 15
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 title abstract description 7
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 title description 24
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 title description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 26
- 241001373831 Saussurea controversa Species 0.000 claims abstract description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 41
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 23
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 22
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 17
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 16
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 14
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 13
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 6
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 5
- 206010031256 Osteomyelitis chronic Diseases 0.000 description 4
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000003275 diaphysis Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 3
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 3
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 3
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 210000001564 haversian system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- SLJTWDNVZKIDAU-SVAFSPIFSA-N Betulonic acid Chemical compound C1CC(=O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C SLJTWDNVZKIDAU-SVAFSPIFSA-N 0.000 description 1
- SLJTWDNVZKIDAU-CKURCAGRSA-N Betulonic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@]3(C)[C@@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CCC(=O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O SLJTWDNVZKIDAU-CKURCAGRSA-N 0.000 description 1
- 206010005940 Bone and joint infections Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000006735 Periostitis Diseases 0.000 description 1
- 241000241413 Propolis Species 0.000 description 1
- 206010037569 Purulent discharge Diseases 0.000 description 1
- 241000133134 Saussurea Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002583 angiography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 125000001271 cephalosporin group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001804 debridement Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 208000013210 hematogenous Diseases 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001167 myeloblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003460 periosteum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940069949 propolis Drugs 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Description
Изобретения относятся к фармацевтической промышленности, конкретно к средствам для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способам их получения.The invention relates to the pharmaceutical industry, specifically to means for stimulating the growth of granulocytic and lymphoid cells in the bone marrow and bone tissue regeneration and methods for their preparation.
Остеомиелит - инфекционный воспалительный процесс, поражающий все элементы кости, костный мозг и нередко характеризующееся генерализацией. К увеличению числа больных с хроническим остеомиелитом в последнее время приводят рост травматизма и широкое использование металлоостеосинтеза в лечении переломов. Несмотря на достигнутые успехи в лечении данного заболевания, частота рецидивов достигает от 10 до 40% и это сопряжено с повторными операциями. При этом наблюдается тенденция к смещению от ограниченных форм заболевания в сторону более тяжелых проявлений [9, 18, 19]. Известно, что развитие остеомиелита сопровождается как метаболическими нарушениями в органической основе костной ткани и костном мозге, так и сосудистыми и иммунными нарушениями [1, 8].Osteomyelitis is an infectious inflammatory process that affects all elements of the bone, bone marrow and is often characterized by generalization. An increase in the number of patients with chronic osteomyelitis has recently been caused by an increase in injuries and the widespread use of metal osteosynthesis in the treatment of fractures. Despite the successes achieved in the treatment of this disease, the relapse rate reaches from 10 to 40% and this is associated with repeated operations. Moreover, there is a tendency to shift from limited forms of the disease towards more severe manifestations [9, 18, 19]. It is known that the development of osteomyelitis is accompanied by metabolic disorders in the organic basis of bone tissue and bone marrow, as well as vascular and immune disorders [1, 8].
Современное лечение остеомиелита направлено по трем звеньям: воздействие на макроорганизм (консервативная терапия), на микроорганизм (антибиотикотерапия) и на местный очаг (хирургическое удаление инфицированной ткани). По последним двум направлениям исследования ведутся активно. Так, авторами описан ряд оптимальных способов антибиотикотерапии [3, 6, 15] и хирургической санации [10, 11]. Данные способы лечение направлены на устранение инфицирующего агента, либо дефектов костной ткани. В то же время, в патогенезе остеомиелита значение имеют следующие изменения: ослабление иммунной защиты (в том числе, вследствие нарушения функции костного мозга), нарастание воспалительного процесса, нарушение кровоснабжения и регенерации костной ткани в зоне поражения. Применение комплексных средств консервативной терапии остеомиелита мало исследовано, в то же время, их применение при остеомиелите является актуальным и необходимым [4, 5, 7, 17].Modern treatment of osteomyelitis is directed at three links: the effect on the macroorganism (conservative therapy), on the microorganism (antibiotic therapy) and on the local focus (surgical removal of infected tissue). In the last two areas, research is being conducted actively. Thus, the authors described a number of optimal methods of antibiotic therapy [3, 6, 15] and surgical debridement [10, 11]. These treatment methods are aimed at eliminating the infectious agent or bone defects. At the same time, the following changes are important in the pathogenesis of osteomyelitis: weakened immune defense (including due to impaired bone marrow function), increased inflammatory process, impaired blood supply and bone tissue regeneration in the affected area. The use of complex means of conservative therapy of osteomyelitis has been little studied, at the same time, their use in osteomyelitis is relevant and necessary [4, 5, 7, 17].
Предложены несколько лекарственных средств для лечения остеомиелита антиоксидантами. Так, авторами выявлено изменение показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной системы в острой стадии заболевания и их нормализация в динамике комплексной патогенетической терапии синтетическими антиоксидантами [12, 13]. Экспериментально показана эффективность применения при остеомиелите иммуномодулирующих средств: трансфер фактора молозива [16] и средства на основе прополиса [2]. Исследовано влияние β-аланиламида бетулоновой кислоты при остеомиелите, действие которого ускоряет регенерацию костной ткани [14].Several drugs have been proposed for the treatment of osteomyelitis with antioxidants. Thus, the authors revealed a change in lipid peroxidation (LP) and antioxidant systems in the acute stage of the disease and their normalization in the dynamics of complex pathogenetic therapy with synthetic antioxidants [12, 13]. The efficacy of immunomodulating agents in osteomyelitis has been experimentally shown: colostrum factor transfer [16] and propolis-based agents [2]. The effect of betulonic acid β-alanilamide in osteomyelitis, the effect of which accelerates bone tissue regeneration, was studied [14].
Согласно стандартам оказания медицинской помощи при хирургических инфекциях, терапия остеомиелита сопровождается длительным применением антибиотиков, негормональных противовоспалительных средств (НПВС), иммуномодуляторов, обладающих рядом побочных эффектов и обусловливающих высокую ксенобиотическую нагрузку на организм.According to the standards of medical care for surgical infections, osteomyelitis therapy is accompanied by prolonged use of antibiotics, non-hormonal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), immunomodulators, which have a number of side effects and cause a high xenobiotic load on the body.
Поэтому, поиск лекарственных средств для лечения остеомиелита, является актуальной проблемой современной медицины. В этом плане перспективны лекарственные средства на основе природных биологически активных веществ, обладающие полимодальным фармакологическим действием, сочетанным с низкой токсичностью и редким индуцированием аллергических реакций.Therefore, the search for drugs for the treatment of osteomyelitis is an urgent problem of modern medicine. In this regard, promising drugs based on natural biologically active substances with a multimodal pharmacological effect, combined with low toxicity and a rare induction of allergic reactions.
Ранее для лечения остеомиелита на основе растительных экстрактов не были описаны.Previously, plant extracts based osteomyelitis have not been described.
Новый технический результат состоит в расширении арсенала средств консервативной терапии остеомиелита, обладающих высокой активностью и низкой токсичностью, а так же способов их получения.A new technical result consists in expanding the arsenal of means of conservative treatment of osteomyelitis, which have high activity and low toxicity, as well as methods for their preparation.
Поставленную задачу решают применением экстракта из листьев соссюреи спорной (Saussurea controversa DC сем. Asteraceae) для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани.The problem is solved by using an extract from the leaves of the disputed saussurea (Saussurea controversa DC sem. Asteraceae) to stimulate the growth of granulocytic and lymphoid cells in the bone marrow and bone tissue regeneration.
Способ получения экстракта соссюреи спорной заключается в экстракции листьев, измельченных до 3-6 мм 40% этанолом при температуре 80°C трехкратно в течение 60 мин при соотношении сырье-экстрагент 1:15 с последующим удалением экстрагента под вакуумом до получения сухого остатка.The method of obtaining the controversial saussure extract is the extraction of leaves, crushed to 3-6 mm with 40% ethanol at a temperature of 80 ° C three times for 60 minutes at a ratio of raw material-extractant 1:15, followed by removal of the extractant under vacuum to obtain a dry residue.
Фармакологические испытанияPharmacological tests
В качестве объекта исследования использовали листья S.controversa, собранные в июле 2013 г в местах естественного произрастания в Иркутской области. Воздушно-сухой растительный материал с влажностью 6,3±0,1% измельчали и просеивали через сита с диаметром отверстий 2-6 мм. Экстракт получали путем обработки сырья 40% этанолом методом мацерации при нагревании. Извлечения концентрировали под вакуумом досуха при температуре не выше 50°C.The leaves of S.controversa collected in July 2013 in places of natural growth in the Irkutsk region were used as the object of study. Air-dry plant material with a moisture content of 6.3 ± 0.1% was crushed and sieved through sieves with a hole diameter of 2-6 mm. The extract was obtained by processing the raw material with 40% ethanol by maceration by heating. The extracts were concentrated in vacuo to dryness at a temperature not exceeding 50 ° C.
Эксперименты выполняли на белых крысах самцах линии Вистар массой 280-300 г, количество животных в каждой группе - 6. Животных содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. При проведении экспериментов руководствовались принципами, изложенными в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинской декларации. Экспериментальный остеомиелит развивали с применением ранее разработанной модели (Способ моделирования травматического остеомиелита, патент №2584402 от 21.04.2016). Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ статистического анализа Statistica 6,0. Для оценки значимости отличий между выборками использовали непараметрический критерий Манна-Уитни с вычислением среднего арифметического значения М и его стандартной ошибки т.The experiments were performed on white rats of males of the Wistar strain weighing 280-300 g, the number of animals in each group is 6. The animals were kept under standard vivarium conditions with free access to water and food. When conducting the experiments, they were guided by the principles set out in the directives of the European Community (86/609 / EEC) and the Helsinki Declaration. Experimental osteomyelitis was developed using a previously developed model (патент Patent No. 04,084,402 dated 04/21/2016). Statistical processing of the results was carried out using the Statistica 6.0 statistical analysis software package. To assess the significance of differences between the samples, the non-parametric Mann-Whitney test was used with calculation of the arithmetic mean of M and its standard error t.
Первичную оценку эффективности экстракта при экспериментальном остеомиелите проводили с помощью метода трехфазной сцинтиграфии. Животных распределяли на три группы: интактные (1); с экспериментальным остеомиелитом, не леченные (2); с экспериментальным остеомиелитом, леченные экстрактом соссюреи спорной (3). У крыс 2 и 3 групп моделировали травматический остеомиелит правой бедренной кости. С 7-го дня эксперимента животным 3 группы внутрижелудочно вводили экстракт один раз в сутки в течение трех недель в виде водной суспензии в дозе 100 мг/кг. Трехфазную сцинтиграфию с 99mТс-технефор (ООО «Диамед», Россия, 18,5 МБк) выполняли на 7 и 28 сутки эксперимента на однофотонном эмиссионном компьютерном томографе Philips BrightView (США). Исследование включало в себя радионуклидную ангиографию, мягкотканную фазу (blood-pool) и костную фазу исследования (остеосцинтиграфию).The initial evaluation of the effectiveness of the extract in experimental osteomyelitis was carried out using the method of three-phase scintigraphy. Animals were divided into three groups: intact (1); with experimental osteomyelitis, untreated (2); with experimental osteomyelitis treated with controversial saussure extract (3). In rats of
В результате исследования на 7 сутки в группе здоровых крыс определялось одновременное поступление индикатора в магистральные сосуды задних конечностей, отсутствие участков гиперфиксации препарата в мягкотканную и костные фазы исследования. В 2 и 3 группах регистрировалось ускоренное и повышенное поступление препарата в артерии на стороне поражения, а также определялись участки гиперфиксации индикатора в мягкотканую и костную фазы исследования, что расценивалось нами как проявление остеомиелита.As a result of the study, on the 7th day in the group of healthy rats, the simultaneous entry of the indicator into the main vessels of the hind limbs, the absence of drug fixation sites in the soft tissue and bone phases of the study were determined. In
На 28-е сутки у крыс второй группы повышенное поступление препарата на стороне пораженной конечности сохранялось во все фазы сцинтиграфического исследования. В то же время у крыс 3 группы происходило уменьшение фиксации препарата в мягкотканую фазу на 44%, что свидетельствовало о положительной динамике воспалительного процесса в окружающих тканях пораженной конечности (фиг. 1). В костную фазу исследования у крыс 3 группы происходило снижение концентрации препарата, поступающего в правую конечность, на 64% в сравнении с группой 2 (фиг. 2). Полученный результат в виде уменьшения степени аккумуляции радиофармацевтического препарата в 3 группе животных указывает на снижение костного метаболизма и гиперемии мягких тканей, что отражает положительную динамику течения остеомиелита при применении экстракта S. controversa.On the 28th day, in rats of the second group, an increased intake of the drug on the side of the affected limb remained in all phases of the scintigraphic study. At the same time, in rats of
Влияние экстракта на состояние костного мозга и костной ткани исследовали на фоне антибиотикотерапии (Цефазолин), рекомендуемой стандартом лечения.The effect of the extract on the state of the bone marrow and bone tissue was studied against the background of antibiotic therapy (Cefazolin), the recommended standard of treatment.
Для этого крыс распределяли на четыре группы: интактные (1); с экспериментальным остеомиелитом, не леченные (2); с экспериментальным остеомиелитом, леченные антибиотиком широкого спектра цефазолином (3); с экспериментальным остеомиелитом, леченные экстрактом S.controversa и антибиотиком (4). Экстракт вводили в желудок в виде водной суспензии в дозе 100 мг/кг в течение 14 дней. Животным 3-5 групп внутримышечно вводили антибиотик цефалоспориновой группы Цефазолин («Рузфарма», Россия) в дозе 50 мг/кг в течение пяти дней. На 21 сутки животных выводили из эксперимента при использовании CO2-асфиксии.For this, the rats were divided into four groups: intact (1); with experimental osteomyelitis, untreated (2); with experimental osteomyelitis treated with a broad-spectrum antibiotic cefazolin (3); with experimental osteomyelitis treated with S.controversa extract and antibiotic (4). The extract was introduced into the stomach as an aqueous suspension at a dose of 100 mg / kg for 14 days. Animals of 3-5 groups were intramuscularly injected with a cephalosporin group antibiotic Cefazolin (Ruzpharma, Russia) at a dose of 50 mg / kg for five days. On day 21, animals were removed from the experiment using CO 2 asphyxiation.
Состояние костномозгового кроветворения у крыс оценивали путем подсчета общего количества миелокариоцитов (ОКК) на бедренную кость (106/бедро) и миелограмм на мазках. Для чего, костный мозг из канала левой бедренной кости вымывали 1 мл 5% раствора уксусной кислоты и ресуспендировали. Дополнительное разведение проводили с помощью лейкоцитарного меланжера (конечное разведение в 20000 раз). Вычисление ОКК проводили с помощью камеры Горяева. Миелограммы подсчитывали на мазках, приготовленных из гомогената фрагмента миелоидной ткани, взятой из сегмента грудины, и аутологичной сыворотки (1:1), комбинированно окрашенных фиксатором-красителем Май-Грюнвальда и азур II-эозином по Нохту. Процентное содержание отдельных клеточных форм при подсчете миелограмм переводили в абсолютные цифры - ×106 клеток на бедро.The state of bone marrow hematopoiesis in rats was assessed by counting the total number of myelocaryocytes (OCC) on the femur (10 6 / thigh) and myelogram on smears. For this, 1 ml of a 5% solution of acetic acid was washed out of the bone marrow from the left femoral canal and resuspended. Additional dilution was performed using leukocyte melanger (final dilution of 20,000 times). Calculation of OCC was carried out using a Goryaev camera. Myelograms were counted on smears prepared from the homogenate of a fragment of myeloid tissue taken from the sternum segment and autologous serum (1: 1), combined stained with May-Grunwald fixative-dye and Azur II-eosin according to Noht. The percentage of individual cell forms when calculating myelograms was translated into absolute numbers - × 10 6 cells per hip.
Для гистологического исследования правую бедренную кость декальцинировали, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Депарафинированные срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином.For histological examination, the right femur was decalcified, dehydrated in ascending alcohol and embedded in paraffin. Deparaffined sections with a thickness of 7 μm were stained with hematoxylin and eosin.
При наблюдении клинической картины к 10 дню у всех крыс группы 2 появилась боль при пальпации, увеличение объема коленного сустава в 2-3 раза по сравнению со здоровой конечностью, а также наблюдали симптомы разлитого воспаления окружающих тканей. В группе 3 у 5-ти животных происходило расхождение краев раны и наблюдалось серозное, а затем гнойное отделяемое. В то же время, у 2-х животных в группе 4 воспаление локализовалось в виде инкапсулированных абсцессов в области правой бедренной кости, а у 4-х рана затягивалась. Таким образом, применение экстракта S.controversa способствовало локализации воспалительного процесса и положительной динамике при остеомиелите.When observing the clinical picture by day 10, all rats of group 2 had pain on palpation, an increase in the volume of the knee joint by a factor of 2–3 compared with a healthy limb, and symptoms of diffuse inflammation of the surrounding tissues were also observed. In
ОКК крыс с экспериментальным остеомиелитом (группа 2), в том числе леченных только антибиотиком (группа 3), снижалось на 46 и 58% соответственно в сравнении с ОКК интактных животных (табл.1). Введение экстракта S.controversa заболевшим крысам на фоне антибиотикотерапии (группа 4) способствовало достоверной нормализации общего количества ядросодержащих клеток костного мозга, что свидетельствует о большей эффективности сочетанной терапии в группе 4 по сравнению с монотерапией (группа 3).OCC of rats with experimental osteomyelitis (group 2), including those treated only with an antibiotic (group 3), decreased by 46 and 58%, respectively, in comparison with OCC of intact animals (Table 1). The introduction of S.controversa extract to diseased rats on the background of antibiotic therapy (group 4) contributed to a reliable normalization of the total number of nucleated bone marrow cells, which indicates the greater effectiveness of combination therapy in group 4 compared with monotherapy (group 3).
В результате развития экспериментального остеомиелита в костном мозге экспериментальных животных (группа 2) наблюдали угнетение гранулоцитарного ростка, о чем свидетельствовало достоверное уменьшение количества молодых форм клеток в среднем на 70% и угнетение эритроидного ростка, вследствие чего общее число эритрокариоцитов уменьшалось на 40%. Кроме того, у крыс в группе 2 в четыре раза возрастало количество мегакариоцитов, а число лимфоцитов снижалось в три раза в сравнении с интактной группой животных. При этом в костном мозге крыс группы 2 наблюдали большое количество разрушенных лимфоцитов.As a result of the development of experimental osteomyelitis in the bone marrow of experimental animals (group 2), granulocyte germ inhibition was observed, as evidenced by a significant decrease in the number of young cell forms by an average of 70% and inhibition of the erythroid germ, resulting in a decrease in the total number of erythrokaryocytes by 40%. In addition, in rats in group 2, the number of megakaryocytes increased four times, and the number of lymphocytes decreased three times in comparison with the intact group of animals. At the same time, a large number of destroyed lymphocytes was observed in the bone marrow of group 2 rats.
После монотерапии антибиотиком (группа 3), в костном мозге крыс с экспериментальным остеомиелитом сохранялись изменения со стороны гранулоцитарного ростка. Отмечено достоверное уменьшение количества молодых форм клеток: количество миелобластов уменьшалось на 88%, промиелоцитов - на 73%, миелоцитов - на 60%, сокращалось количество митозов на 83%. Лейкоэритробластическое отношение (ЛЭО) клеток костного мозга смещалось в сторону уменьшения клеток миелоидного ряда. Количество лимфоцитов в костном мозге экспериментальных животных после антибиотикотерапии еще более снижалось.After monotherapy with antibiotic (group 3), changes in the granulocyte germ were preserved in the bone marrow of rats with experimental osteomyelitis. A significant decrease in the number of young cell forms was noted: the number of myeloblasts decreased by 88%, promyelocytes - by 73%, myelocytes - by 60%, the number of mitoses was reduced by 83%. The leukoerythroblastic ratio (LEO) of bone marrow cells shifted toward a decrease in the number of myeloid cells. The number of lymphocytes in the bone marrow of experimental animals after antibiotic therapy was further reduced.
После курсового применения экстракта 5. controversa на фоне антибиотикотерапии значительно возрастало количество молодых и зрелых форм гранулоцитов и лимфоцитов до показателей в интактной группе. Кроме того, после терапии экстрактом S.controversa наблюдали достоверное увеличение количества зрелых форм эритрокариоцитов по сравнению с животными, получавшими только антибиотикотерапию.After the course application of the extract of 5. controversa against the background of antibiotic therapy, the number of young and mature forms of granulocytes and lymphocytes significantly increased to indicators in the intact group. In addition, after therapy with S.controversa extract, a significant increase in the number of mature forms of erythrokaryocytes was observed compared to animals that received only antibiotic therapy.
Полученные данные позволяют говорить о стимуляции гранулопоэза и коррекции клеточных показателей костного мозга, измененных в результате антибиотикотерапии экспериментального остеомиелита, при курсовом применении экстракта S. controversa.The data obtained allow us to talk about the stimulation of granulopoiesis and the correction of cellular indicators of bone marrow, changed as a result of antibiotic therapy of experimental osteomyelitis, with the course application of S. controversa extract.
При морфологическом исследовании в диафизе бедренной кости крыс, на 21 сутки после моделирования остеомиелита без лечения (группа 2), отмечались признаки выраженного воспаления. В костномозговых пространствах - лейкоцитарная инфильтрация и гиперемия сосудов. Выявлялся некроз и аутолиз костных пластинок кортикального и трабекулярного слоев с образованием секвестров. Нормальное строение остеонов было нарушено, гаверсовы каналы частично запустевали. Наряду с признаками воспаления в кости отмечались не резко выраженные признаки регенерации: разрастание грануляционной ткани и активация остеобластов в области костных дефектов (Фиг. 3).During a morphological study in the diaphysis of the femur of rats, on the 21st day after modeling osteomyelitis without treatment (group 2), signs of severe inflammation were noted. In bone marrow spaces - leukocyte infiltration and hyperemia of blood vessels. Necrosis and autolysis of the bone plates of the cortical and trabecular layers with the formation of sequesters was revealed. The normal structure of osteons was disrupted, Haversian channels partially deserted. Along with signs of inflammation in the bone, there were not pronounced signs of regeneration: proliferation of granulation tissue and activation of osteoblasts in the area of bone defects (Fig. 3).
В группе крыс, получавших антибиотикотерапию цефазолином (группа 3), воспаление имело разлитой характер, однако, его интенсивность была ниже, чем у крыс группы 2. Сохранялась дискомплексация костных пластинок. Процесс резорбции некротизированной костной ткани преобладал над процессом остеогенеза (Фиг. 4).In the group of rats receiving antibiotic therapy with cefazolin (group 3), the inflammation was diffuse in nature, however, its intensity was lower than in rats of group 2. Bone plate discomfort remained. The process of resorption of necrotic bone tissue prevailed over the process of osteogenesis (Fig. 4).
В группах крыс, получавших терапию антибиотиком в комплексе с экстрактом S. controversa (группа 4) отмечали снижение интенсивности воспалительных процессов. Признаки регенераторных процессов: активация эндооста, периоста, появление остеобластических "почек", формирование грануляционной ткани, были повсеместно видны на протяжении бедренной кости, но более выражены в эпифизарном отделе. Большинство костных пластин имели нормальное строение и равномерную минерализацию (Фиг. 5).In groups of rats treated with antibiotic therapy in combination with S. controversa extract (group 4), a decrease in the intensity of inflammatory processes was noted. Signs of regenerative processes: activation of the endoost, periosteum, the appearance of osteoblastic "kidneys", the formation of granulation tissue, were everywhere visible throughout the femur, but more pronounced in the epiphyseal department. Most bone plates had a normal structure and uniform mineralization (Fig. 5).
Таким образом, при курсовом применении экстракта S. controversa снижается интенсивность воспалительных процессов в костной ткани и костном мозге, усиливаются гранулопоэз и регенерация костной ткани.Thus, with the course application of S. controversa extract, the intensity of inflammatory processes in bone tissue and bone marrow decreases, granulopoiesis and bone tissue regeneration increase.
Обоснование способа получения экстракта соссюреи спорной.The rationale for the method of obtaining the extract of the controversial saussure
Экстракцию сырья осуществляли методом многократной мацерации при нагревании, моделируя технологический процесс в лабораторном реакторе (Radley's, Великобритания), снабженном обогревающейся водяной рубашкой и мешалкой RZR 2020 (Heidolph, Германия) при скорости 300 об/мин. Экстракты, полученные после каждого приема мацерации, объединяли, экстрагент удаляли в роторном испарителе при температуре не выше 50°C, сконцентрированный густой экстракт высушивали методом конвективной сушки до содержания влаги не более 5%. Выбор оптимальных параметров экстракции (соотношение сырья и экстрагента, степень измельченности сырья, время, температура, кратность экстракции) осуществляли после определения выхода экстрактивных веществ (ЭВ).Raw materials were extracted by repeated maceration by heating, simulating the technological process in a laboratory reactor (Radley's, UK) equipped with a heated water jacket and an RZR 2020 stirrer (Heidolph, Germany) at a speed of 300 rpm. The extracts obtained after each administration of maceration were combined, the extractant was removed in a rotary evaporator at a temperature not exceeding 50 ° C, the concentrated thick extract was dried by convective drying to a moisture content of not more than 5%. The choice of optimal extraction parameters (ratio of raw materials and extractant, degree of grinding of raw materials, time, temperature, extraction ratio) was carried out after determining the yield of extractives (EV).
Опыт 1. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 30 мин. Общий выход ЭВ составил 19,70 г (39,40%, табл. 2).
Опыт 2. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 21,56 г (45,10%).Experience 2. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw materials-extractant 1:10.
Опыт 3. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 90 мин. Общий выход ЭВ составил 21,18 г (42,37%).
Опыт 4. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили дважды, второй раз в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 19,58 г (39,20%).Experience 4. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. The extraction was carried out twice, the second time in the ratio of raw materials-extractant 1:10.
Опыт 5. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили 3 раза при температуре 80°C, 60 мин. Общий выход ЭВ составил 22,85 г (45,70%).Experience 5. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. Extraction was carried out 3 times at a temperature of 80 ° C, 60 min. The total yield of EV was 22.85 g (45.70%).
Опыт 6. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:20. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:15. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 22,47 г (44,95%).Experience 6. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was poured 40% ethanol in a ratio of 1:20. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw material-extractant 1:15.
Опыт 7. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:10. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:8. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 17,21 г (34,40%).Experience 7. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:10. The second and third times the extraction was carried out in the ratio of raw material-extractant 1: 8.
Опыт 8. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 90°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 21,80 г (43,60%).Experience 8. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw materials-extractant 1:10. Extraction temperature 90 ° C,
Опыт 9. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 70°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 20,71 г (41,42%).Experience 9. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was poured 40% ethanol in a ratio of 1:15. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw materials-extractant 1:10. Extraction temperature 70 ° C,
Опыт 10. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 60°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 19,43 г (38,86%).Experience 10. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw materials-extractant 1:10.
Опыт 11. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 23,15 г (46,30%).Experience 11. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 1 mm, was filled with 40% ethanol in a ratio of 1:15. The second and third times the extraction was carried out in a ratio of raw materials-extractant 1:10.
Опыт 12. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили еще три раза в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 20,03 г (40,06%).Experience 12. In the extractor was placed 50.0 g of raw material, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 3-6 mm, was poured 40% ethanol in a ratio of 1:15. Extraction was carried out three more times in the ratio of raw materials-extractant 1:10.
Исходя из полученных результатов оптимальное для выхода ЭВ соотношение сырья и экстрагента 1:15 при трехкратной экстракции в течение 60 мин (опыт 5). Дальнейшее уменьшение кратности экстракции, соотношения сырья и экстрагента при одновременном повышении или понижении времени экстракции приводит к снижению выхода ЭВ. Так же влияет снижение температуры экстракции до 60-70°C или ее повышение до 90°C. Максимальный выход ЭВ наблюдали при экстракции фракции сырья, проходящего через отверстия с диаметром 1 мм, отсеянное от пыли (опыт 11). Это явление можно объяснить особенностью строения листа соссюреи спорной: нижний эпидермис листа обильно покрыт нитевидными трихомами, образующими как бы войлочное покрытие. Поэтому даже при измельчении сырья, его частицы посредством волосков слипаются, образуя более крупные. Основная масса сырья (около 98%) просеивается лишь через сита с отверстиями диаметром 3-6 мм. Через отверстия с диаметром 1 мм проходят частицы сырья, свободные от волосков, вследствие чего, содержащие большее количество биологически активных веществ.Based on the results obtained, the ratio of raw material and extractant optimal for the yield of EV is 1:15 after triple extraction for 60 minutes (experiment 5). A further decrease in the extraction ratio, the ratio of raw materials and extractant while increasing or decreasing the extraction time leads to a decrease in the yield of EV. The decrease in the extraction temperature to 60-70 ° C or its increase to 90 ° C also affects. The maximum yield of EV was observed during the extraction of the fraction of raw materials passing through holes with a diameter of 1 mm, sifted out from dust (experiment 11). This phenomenon can be explained by the structural feature of the controversial saussure leaf: the lower epidermis of the leaf is abundantly covered with filiform trichomes, forming a kind of felt coating. Therefore, even when grinding the raw material, its particles stick together by means of hairs, forming larger ones. The bulk of the raw material (about 98%) is sifted only through sieves with holes with a diameter of 3-6 mm. Through holes with a diameter of 1 mm, particles of raw materials free from hairs pass, as a result of which, containing a large number of biologically active substances.
Таким образом оптимальным способом получения комплексного средства консервативной терапии остеомиелита является трехкратная экстракция 40% этанолом листьев соссюреи спорной, измельченных до 3-6 мм в соотношении 1:15 при 80°C в течение 60 мин. Этанол из жидкого экстракта удаляют под вакуумом, экстракт высушивают до содержания влаги не более 5%.Thus, the optimal way to obtain a comprehensive means of conservative treatment of osteomyelitis is a triple extraction of 40% ethanol of leaves of disputed saussure, crushed to 3-6 mm in a ratio of 1:15 at 80 ° C for 60 minutes. Ethanol from the liquid extract is removed under vacuum, the extract is dried to a moisture content of not more than 5%.
Источники информацииInformation sources
1. Акжигитов Г.Н. Гематогенный остеомиелит / Г.Н. Акжигитов, Я.Б. Юдин. - М.: Медицина, 1998. 288 с.1. Akzhigitov G.N. Hematogenous osteomyelitis / G.N. Akzhigitov, Ya.B. Yudin. - M.: Medicine, 1998.288 s.
2. Амиров Н.Х., Мубаракова Л.Н., Захаров Ю.А. Способ лечения одонтогенного остеомиелита, осложненного флегмоной. Патент №2232029 от 27.08.2001.2. Amirov N.Kh., Mubarakova L.N., Zakharov Yu.A. A method for the treatment of odontogenic osteomyelitis complicated by phlegmon. Patent No. 2232029 of 08/27/2001.
3. Афиногенов Г.Е. Антимикробная биодеградируемая композиция на основе высокомолекулярного поливинилпирролидона для профилактики экспериментального остеомиелита/ Г.Е. Афиногенов, P.M. Тихилов, А.Г. Афиногенова и др. // Травматология и ортопедия России. 2010. №3. С. 47-54.3. Afinogenov G.E. Antimicrobial biodegradable composition based on high molecular weight polyvinylpyrrolidone for the prevention of experimental osteomyelitis / G.E. Afinogenov, P.M. Tikhilov, A.G. Afinogenova et al. // Traumatology and Orthopedics of Russia. 2010. No3. S. 47-54.
4. Батаков Е.А. Современные аспекты диагностики и лечения хронического остеомиелита / Е.А. Батаков, Д.Г. Алексеев, В.Е. Батаков. - Самара: Медицина. 2008. 117 с.4. Batakov E.A. Modern aspects of the diagnosis and treatment of chronic osteomyelitis / E.A. Batakov, D.G. Alekseev, V.E. Batakov. - Samara: Medicine. 2008.117 p.
5. Белохвостикова Т.С. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите / Т.С. Белохвостикова, Л.Е. Кирдей, Е.Ю. Гаврилова и др. // Медицинская иммунология. 2002. №4 (2). С. 228-229.5. Belokhvostikova T.S. Correction of secondary disorders of the immune system in chronic post-traumatic osteomyelitis / TS Belokhvostikova, L.E. Kirdey, E.Yu. Gavrilova et al. // Medical Immunology. 2002. No4 (2). S. 228-229.
6. Дзюба Г.Г. Опыт использования локальных антибактериальных носителей при лечении хронического гнойного остеомиелита длинных трубчатых костей / Г.Г. Дзюба, С.А. Ерофеев, Д.И. Одарченко // Современные проблемы науки и образования. 2013. №4. С. 111.6. Dzyuba G.G. The experience of using local antibacterial carriers in the treatment of chronic purulent osteomyelitis of long tubular bones / G.G. Dziuba, S.A. Erofeev, D.I. Odarchenko // Modern problems of science and education. 2013. No4. S. 111.
7. Кирдей Е.Г. Иммунный статус больных с различными формами остеомиелитов / Е.Г. Кирдей, А.П. Барабаш, Д.Г. Данилов и др. // Сибирский медицинский журнал. 1977. №9 (1-2). С. 19-21.7. Kirdey E.G. The immune status of patients with various forms of osteomyelitis / E.G. Kirdey, A.P. Barabash, D.G. Danilov et al. // Siberian Medical Journal. 1977. No. 9 (1-2). S. 19-21.
8. Корженевский А.А. Обоснование выбора препарата для иммунотерапии хронического остеомиелита // Аллергология и иммунология. 2008. №9 (2). С. 227-230.8. Korzhenevsky A.A. Justification of the choice of drug for immunotherapy of chronic osteomyelitis // Allergology and Immunology. 2008. No9 (2). S. 227-230.
9. Кутин А.А. Гематогенный остеомиелит у взрослых / А.А. Кутин, Н.И. Мосиенко. - М.: Медицина и жизнь. 2000. 224 с.9. Kutin A.A. Hematogenous osteomyelitis in adults / A.A. Kutin, N.I. Mosienko. - M .: Medicine and life. 2000.224 s.
10. Ладонин С.В. Экспериментальное обоснование использования аллогенного деминерализованного костного имплантата в комплексном лечении хронического остеомиелита / С.В. Ладонин, Е.А. Белозерцева // Морфологические ведомости. 2011. №1. С. 101-107.10. Ladonin S.V. Experimental substantiation of the use of allogeneic demineralized bone implant in the complex treatment of chronic osteomyelitis / S.V. Ladonin, E.A. Belozertseva // Morphological sheets. 2011. No1. S. 101-107.
11. Линник С.А. Способ пластики костных дефектов у больных с остеомиелитом предплечья мышечным лоскутом, сфомированным из musculus pronator qvadratus / С.А. Линник, Н.Ф. Фомин, Ш.Л. Динаев и др. // Травматология и ортопедия России.2011. №3. С. 97-100.11. Linnik S.A. Method for bone defect plasty in patients with forearm osteomyelitis with a muscle flap sominated from musculus pronator qvadratus / S.A. Linnik, N.F. Fomin, Sh. L. Dinaev et al. // Traumatology and Orthopedics of Russia. 2011.
12. Матузов С.А. Лечение хронического травматического остеомиелита с применением антиоксидантов: автореф. дисс.… к.м.н. Иркутск, 1997. 27 с.12. Matuzov S.A. Treatment of chronic traumatic osteomyelitis with the use of antioxidants: author. diss. ... candidate of medical sciences Irkutsk, 1997.27 p.
13. Султонов Ш.Р. Динамика процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты при хроническом гематогенном остеомиелите у детей / Ш.Р. Султонов, А.А. Азизов, A.M. Сабурова // Докл. Акад. наук Респ.Таджикистан. 2009. Т. 52. №9. С. 723-727.13. Sultonov Sh.R. Dynamics of lipid peroxidation processes and antioxidant defense systems in children with chronic hematogenous osteomyelitis / Sh.R. Sultonov A.A. Azizov, A.M. Saburova // Dokl. Acad. Sciences of the Republic of Tajikistan. 2009.V. 52. No. 9. S. 723-727.
14. Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Жукова Н.А. Средство для лечения остеомиелита. Патент №2604124 от 28.10.2015.14. Tolstikova T.G., Sorokina I.V., Zhukova N.A. A remedy for osteomyelitis. Patent No. 2604124 dated 10.28.2015.
15. Федянин С.Д. Рациональная антибиотикотерапия у пациентов с гематогенным и посттравматическим остеомиелитом // Вестник Витебского государственного медицинского университета. 2004. №2. С. 61-68.15. Fedyanin S.D. Rational antibiotic therapy in patients with hematogenous and post-traumatic osteomyelitis // Bulletin of the Vitebsk State Medical University. 2004. No2. S. 61-68.
16. Хеннен У.Дж. Трансфер фактор Плюс: идеальная комбинация биологически активных веществ для оптимального иммунитета / У.Дж. Хеннен, Ю.П. Гичева, Э.А. Оганова. - Новосибирск, 2001.16. Hennen W.J. Transfer factor Plus: an ideal combination of biologically active substances for optimal immunity / W.J. Hennen, Yu.P. Gicheva, E.A. Oganova. - Novosibirsk, 2001.
17. Шалыгин А.В. Коррекция реологических свойств крови в лечении острого гематогенного остеомиелиае у детей / А.В. Шалыгин, А.А. Солнышко, А.П. Скударнова // Науки о человеке. Томск, 2003. С. 112.17. Shalygin A.V. Correction of the rheological properties of blood in the treatment of acute hematogenous osteomyeliae in children / A.V. Shalygin, A.A. The Sun, A.P. Skudarnova // Human Sciences. Tomsk, 2003.S. 112.
18. Bohndorf К. Osteomyelitis / К. Bohndorf, 
19. Davis J.S. Menagement of bone and joint infections due to Staphilococcus aureus // Intern. Medicine J. 2005. №35. P. 79-96.19. Davis J.S. Menagement of bone and joint infections due to Staphilococcus aureus // Intern. Medicine J. 2005. No. 35. P. 79-96.
Приложениеapplication
Фиг. 1. Содержание 99mТс-технефор (%) в мягкотканую фазу сцинтиграфического исследования пораженной конечности крыс с экспериментальным остеомиелитом.FIG. 1. The content of 99m TC-technefor (%) in the soft tissue phase of a scintigraphic study of the affected limb of rats with experimental osteomyelitis.
Фиг. 2. Содержание 99mТс-технефор в костную фазу сцинтиграфического исследования пораженной конечности крыс с экспериментальным остеомиелитом.FIG. 2. The content of 99m TC-technefor in the bone phase of a scintigraphic study of the affected limb of rats with experimental osteomyelitis.
*p≤0.05 в сравнении с группой-2.* p≤0.05 in comparison with group-2.
Фиг. 3. Участок диафиза бедренной кости крысы на 21 сутки после моделирования остеомиелита без лечения. Признаки воспаления без видимой активации остеогенеза. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.FIG. 3. The area of the diaphysis of the femur of the rat on day 21 after modeling osteomyelitis without treatment. Signs of inflammation without visible activation of osteogenesis. Hematoxylin and eosin staining, × 200.
Фиг. 4. Участок диафиза бедренной кости крысы на 21 сутки после моделирования остеомиелита при лечении антибиотиком. Сохранение признаков воспаления, незначительная активация остеогенеза. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.FIG. 4. The diaphysis portion of the rat femur on day 21 after modeling osteomyelitis with antibiotic treatment. Preservation of signs of inflammation, slight activation of osteogenesis. Hematoxylin and eosin staining, × 200.
Фиг. 5. Участок диафиза бедренной кости крысы вблизи костно-мозгового канала, на 21 сутки после моделирования остеомиелита при терапии антибиотиком в комплексе с экстрактом S. controversa. Активация остеобластических процессов на месте погибших остеонов. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.FIG. 5. The portion of the diaphysis of the femur of the rat near the bone marrow canal, on the 21st day after modeling of osteomyelitis with antibiotic therapy in combination with S. controversa extract. Activation of osteoblastic processes at the site of dead osteons. Hematoxylin and eosin staining, × 200.
Примечание. 1,2,3 - p≤0,05 в сравнении с группами 1,2 и 3 соответственно.Note. 1,2,3 -
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017117742A RU2673537C2 (en) | 2017-05-22 | 2017-05-22 | Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017117742A RU2673537C2 (en) | 2017-05-22 | 2017-05-22 | Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017117742A3 RU2017117742A3 (en) | 2018-11-22 |
| RU2017117742A RU2017117742A (en) | 2018-11-22 |
| RU2673537C2 true RU2673537C2 (en) | 2018-11-28 |
Family
ID=64400997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017117742A RU2673537C2 (en) | 2017-05-22 | 2017-05-22 | Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2673537C2 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2259840C2 (en) * | 2003-11-14 | 2005-09-10 | Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН | Medicinal remedy of adaptogenic activity |
| KR20070071029A (en) * | 2005-12-29 | 2007-07-04 | 주식회사 엘지생활건강 | Composition having keratin exfoliation promoting effect including Chunsan Snow Lead |
| US20130028968A1 (en) * | 2011-07-29 | 2013-01-31 | Andy Teh-An Huang | Compositions and methods to relieve chronic diseases symptoms |
-
2017
- 2017-05-22 RU RU2017117742A patent/RU2673537C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2259840C2 (en) * | 2003-11-14 | 2005-09-10 | Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН | Medicinal remedy of adaptogenic activity |
| KR20070071029A (en) * | 2005-12-29 | 2007-07-04 | 주식회사 엘지생활건강 | Composition having keratin exfoliation promoting effect including Chunsan Snow Lead |
| US20130028968A1 (en) * | 2011-07-29 | 2013-01-31 | Andy Teh-An Huang | Compositions and methods to relieve chronic diseases symptoms |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АВДЕЕВА Е.Ю. и др. Биохимическое исследование активности экстрактов Saussurea Controversa DC. И Filipendula Ulmaria (L.) maxim при экспериментном остеомиелите //Бюллетень сибирской медицины, 2016, подписано в печать 15.03.2016, т.15, N2, стр.5-15. * |
| АВДЕЕВА Е.Ю. и др. Исследование биологически активных веществ экстракта Saussurea Controversa, обладающего иммуностимулирующей активностью //Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты, Сборник материалов IX международного симпозиума, Москва, 20-25 апреля 2015, стр.12-14. АВДЕЕВА Е.Ю. и др. Проблема создания фитопрепаратов для профилактики и лечения остеомелита //Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине, Сборник трудов конференции, Москва, 23-25 июня 2016, стр.559-561. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2017117742A3 (en) | 2018-11-22 |
| RU2017117742A (en) | 2018-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yin et al. | Biomimetic anti-inflammatory nano-capsule serves as a cytokine blocker and M2 polarization inducer for bone tissue repair | |
| Liu et al. | Treatment of non-traumatic avascular necrosis of the femoral head | |
| Peng et al. | In vitro & in vivo assessment of a herbal formula used topically for bone fracture treatment | |
| Bhattacharya et al. | Systematic approach to treat chronic osteomyelitis through localized drug delivery system: bench to bed side | |
| Huang et al. | Highly efficient release of simvastatin from simvastatin‑loaded calcium sulphate scaffolds enhances segmental bone regeneration in rabbits | |
| Xu et al. | Staphylococcal enterotoxin C2 expedites bone consolidation in distraction osteogenesis | |
| Deepanjali et al. | Efficacy of simvastatin in bone regeneration after surgical removal of mandibular third molars | |
| RU2429002C1 (en) | Method of stimulating reparative osteogenesis | |
| Ye et al. | Kartogenin potentially protects temporomandibular joints from collagenase-induced osteoarthritis via core binding factor β and runt-related transcription factor 1 binding-A rat model study | |
| Bravo et al. | Temporary inhibition of the plasminogen activator inhibits periosteal chondrogenesis and promotes periosteal osteogenesis during appendicular bone fracture healing | |
| RU2673537C2 (en) | Agent for growth stimulation of granulocyte and lymphoid cells in bone marrow and regeneration of bone tissue and method of its production | |
| US20020090400A1 (en) | Putamen ovi | |
| Zhu et al. | Comparison study of bone defect healing effect of raw and processed pyritum in rats | |
| WO2021186080A1 (en) | Heat-treated platelet-derived growth factor extract for use in a method of preventing or treating a tissue defect | |
| SHAFIEI | Histological, biomechanical and radiological evaluation of bone repair with human platelet rich plasma in rabbit model | |
| Segundo et al. | Platelet‐rich plasma, hydroxyapatite, and chitosan in the bone and cartilaginous regeneration of femoral trochlea in rabbits: Clinical, radiographic, and Histomorphometric evaluations | |
| Wong et al. | Effect of gusuibu graft on bone formation | |
| EP1190716B1 (en) | The leaves of cajanus cajan(l.) millsp and extract, formulation and uses thereof | |
| Ezirganli et al. | Effects of Ankaferd BloodStopper on bone healing in an ovariectomized osteoporotic rat model | |
| Shen et al. | Comparison between tonifying kidney yang and yin in treating segmental bone defects based on the induced membrane technique: an experimental study in a rat model | |
| Lin et al. | [Retracted] MRI Manifestations and Diagnostic Value of Chronic Osteomyelitis | |
| Högel et al. | Bone healing of critical size defects of the rat femur after the application of bone marrow aspirate and two different rh-BMP7 concentrations | |
| Skyba et al. | Dynamics of morphometric bone changes in the site of mandibular perforation defect in rats with toxic hepatitis and use of hepatoprotector | |
| Irban et al. | The effect of ozone therapy on experimental bone fracture healing in rats | |
| Arslan et al. | Effect of lymphedema on the recovery of fractures |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190523 |