RU2650780C1 - Пептидный модулятор пуринергических рецепторов - Google Patents
Пептидный модулятор пуринергических рецепторов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2650780C1 RU2650780C1 RU2016147736A RU2016147736A RU2650780C1 RU 2650780 C1 RU2650780 C1 RU 2650780C1 RU 2016147736 A RU2016147736 A RU 2016147736A RU 2016147736 A RU2016147736 A RU 2016147736A RU 2650780 C1 RU2650780 C1 RU 2650780C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pain
- receptors
- cys
- lys
- peptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 102000000033 Purinergic Receptors Human genes 0.000 title description 9
- 108010080192 Purinergic Receptors Proteins 0.000 title description 9
- 102100040460 P2X purinoceptor 3 Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 101710189970 P2X purinoceptor 3 Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims abstract description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 abstract description 52
- 230000036407 pain Effects 0.000 abstract description 52
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001696 purinergic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 102100040479 P2X purinoceptor 2 Human genes 0.000 description 19
- 101710189968 P2X purinoceptor 2 Proteins 0.000 description 19
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 18
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 18
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 102000002294 Purinergic P2X Receptors Human genes 0.000 description 7
- 108010000836 Purinergic P2X Receptors Proteins 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710094933 Purotoxin-1 Proteins 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- KECTXGMVIXOQAO-UHFFFAOYSA-N purotoxin 1 Chemical compound N1C(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)CNC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C)NC(=O)C(NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)CN)CSSCC(C(NC(C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)N2)C(C)O)=O)NC(=O)C(NC3=O)CSSCC(C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(N)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CC=4C=CC(O)=CC=4)NC(=O)CNC(=O)C(CO)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(N)=O)NC4=O)CSSCC4NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C2CSSCC1C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC3CC1=CNC=N1 KECTXGMVIXOQAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical class 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- CAWZRIXWFRFUQB-IOSLPCCCSA-N α,β Methylene ATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)CP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O CAWZRIXWFRFUQB-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 3
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- MISVBCMQSJUHMH-UHFFFAOYSA-N pyrimidine-4,6-diamine Chemical class NC1=CC(N)=NC=N1 MISVBCMQSJUHMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 3
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000002708 spider venom Substances 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 210000000273 spinal nerve root Anatomy 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- VQGBOYBIENNKMI-LJAQVGFWSA-N 5-[(3-phenoxyphenyl)methyl-[(1s)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl]carbamoyl]benzene-1,2,4-tricarboxylic acid Chemical compound C1=C(C(O)=O)C(C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C1C(=O)N([C@@H]1C2=CC=CC=C2CCC1)CC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 VQGBOYBIENNKMI-LJAQVGFWSA-N 0.000 description 2
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 2
- 208000006561 Cluster Headache Diseases 0.000 description 2
- PCDQPRRSZKQHHS-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Triphosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 PCDQPRRSZKQHHS-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 2
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 2
- 229940126202 P2X3 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010065347 Premenstrual pain Diseases 0.000 description 2
- 101710094935 Purotoxin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102400001227 Spinorphin Human genes 0.000 description 2
- 101800001235 Spinorphin Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940058936 antimalarials diaminopyrimidines Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000018912 cluster headache syndrome Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229940075993 receptor modulator Drugs 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 2
- VEKPWANJVWWTMM-DYDSHOKNSA-N spinorphin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1[C]2C=CC=CC2=NC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VEKPWANJVWWTMM-DYDSHOKNSA-N 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N suramin Chemical class OS(=O)(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(NC(=O)C3=CC=C(C(=C3)NC(=O)C=3C=C(NC(=O)NC=4C=C(C=CC=4)C(=O)NC=4C(=CC=C(C=4)C(=O)NC=4C5=C(C=C(C=C5C(=CC=4)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C)C=CC=3)C)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004371 toothache Diseases 0.000 description 2
- 208000009935 visceral pain Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJWWHDAQGDJZKY-UHFFFAOYSA-N 3-phenyl-1H-thieno[3,2-c]pyrazole Chemical compound C1(=CC=CC=C1)C1=NNC2=C1SC=C2 BJWWHDAQGDJZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241001411704 Alopecosa marikovskyi Species 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001012451 Homo sapiens Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 101000614332 Homo sapiens P2X purinoceptor 3 Proteins 0.000 description 1
- HAEJPQIATWHALX-KQYNXXCUSA-N ITP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 HAEJPQIATWHALX-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101710189973 P2X purinoceptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040444 P2X purinoceptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037601 P2X purinoceptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710189967 P2X purinoceptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101710189965 P2X purinoceptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 102100037602 P2X purinoceptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000004550 Postoperative Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- DSFVPALDDWRTFF-DIBLVGDCSA-N TNP-ATP Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]([C@@H]1O1)N2C=3N=CN=C(C=3N=C2)N)C21C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C2[N+]([O-])=O DSFVPALDDWRTFF-DIBLVGDCSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 241000094374 Thomisus onustus Species 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N bis[hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010049074 hemoglobin B Proteins 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001057 ionotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 1
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000037324 pain perception Effects 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43513—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae
- C07K14/43518—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae from spiders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к биологически активным пептидам, модулирующим пуринергическую сигнализацию, и может быть использовано для разработки на их основе новых лекарственных средств, например анальгетиков, для изучения механизмов возникновения боли, для обнаружения и тестирования новых модуляторов рецептора Р2ХЗ. Предложен пептид, имеющий следующую аминокислотную последовательность: Gly-Tyr-Cys-Ala-Thr-Lys-Gly-Ile-Lys-Cys-Asn-Asp-Ile-His-Cys-Cys-Ser-Gly-Leu-Lys-Cys-Asp-Ser-Lys-Arg-Lys-Val-Cys-Val-Lys-Gly- SEQ ID NO: 1. Изобретение позволяет получить эффективный антагонист пуринергических рецепторов Р2Х3. 2 н.п. ф-лы, 2 ил.
Description
Область техники
Изобретение относится к медицине и фармакологии, а именно к биологически активным пептидам, которые модифицируют пуринергическую сигнализацию и могут применяться для профилактики и лечения заболеваний, фармакологической мишенью при которых являются пуринергические рецепторы.
Уровень техники
Изучение и лечение боли являются существенными аспектами улучшения качества жизни пациентов. Лечение боли основывается главным образом на назначении противовоспалительных препаратов, которые могут быть нестероидными противовоспалительными препаратами (НПВП) или стероидными (кортикостероидными) препаратами, антидепрессантов и антиконвульсантов, а также сильных или слабых опиатов. НПВП образуют наиболее назначаемый в мире класс терапевтических препаратов в связи с их высокой эффективностью как в отношении воспалительного процесса, так и в отношении самой боли. Их применяют при всех типах воспалительных болей, как острых, так и хронических. Хотя НПВП являются очень эффективными средствами, тем не менее, они остаются серьезным источником нежелательных побочных эффектов, что ограничивает применение НПВП в многочисленных клинических ситуациях. Несмотря на большое количество существующих терапевтических средств, многие виды боли остаются малочувствительными к известным анальгетикам, поэтому разработка новых анальгетических средств с новым механизмом действия является важной и актуальной задачей.
Ионотропные пуринергические рецепторы (Р2Х) являются лиганд-управляемыми ионными каналами, природным агонистом которых выступает аденозинтрифосфат (АТФ), прикладываемый с внеклеточной стороны. Эти рецепторы встречаются в различных органах и тканях, особое физиологическое значение имеет их функция в нервной системе [Surprenant A., North R.A. Signaling at purinergic P2X receptors // Annu. Rev. Physiol., 2009, Vol. 71, p. 333-359]. Они экспрессируются в чувствительных нейронах, и АТФ, освобожденный из поврежденных или воспаленных тканей, активирует Р2Х рецепторы и инициирует болевые сигналы. Полагают, что пуринергическая сигнализация играет важную роль в болевых состояниях, связанных с травмами, опухолями, воспалением, мигренью и респираторными заболеваниями. У человека известно семь изоформ Р2Х рецепторов, среди которых изоформы Р2Х2, Р2Х3, Р2Х4 и Р2Х7, как полагают, участвуют в системе восприятия боли [Donnelly-Roberts D. et al. Painful purinergic receptors // J. Pharmacol. Exp. Ther., 2008, Vol. 324, p. 409-415]. Среди семи изоформ пуринергических рецепторов Р2Х3 представляется важным и хорошо изученным «участником» болевых состояний [Wirkner К. et al. Р2Х3 receptor involvement in pain states // Mol. Neurobiol., 2007, Vol. 36, p. 165-183].
Селективные модуляторы функции пуринергических рецепторов, которые способны модулировать работу только определенных изоформ, являются основой для создания лекарственных препаратов для лечения заболеваний, в развитии которых принимают участие данные рецепторы, а также необходимы для изучения функций пуринергических рецепторов. В случае Р2Х3 рецепторов наибольшим фармакологическим потенциалом обладают антагонисты (ингибиторы) рецепторов, поскольку именно снижение их активности требуется для терапии целого ряда болевых синдромов.
В настоящее время известны многие низкомолекулярные антагонисты Р2ХЗ рецепторов, например 2',3'-O-(2,4,6-тринитрофенил)-АТФ [Virginio С. et al. Trinitrophenyl-substituted nucleotides are potent antagonists selective for P2X1, P2X3, and heteromeric P2X2/3 receptors // Mol. Pharmacol., 1998, Vol.53, p.969-973], другие производные моно- и динуклеотидов [Ford K.K. et al. The P2X3 antagonist P1, P5-di[inosine-5'] pentaphosphate binds to the desensitized state of the receptor in rat dorsal root ganglion neurons // J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, Vol. 315, p. 405-413; US 6,881,725], аналоги сурамина [Hausmann R. et al. The suramin analog 4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis (carbonylimino)))tetra-kis-benzenesulfonic acid (NF110) potently blocks P2X3 receptors: subtype selectivity is determined by location of sulfonic acid groups // Mol. Pharmacol., 2006, Vol. 69, p. 2058-2067], антагонист A-317491 [Jarvis M.F. et al. A-317491, a novel potent and selective non-nucleotide antagonist of P2X3 and P2X2/3 receptors, reduces chronic inflammatory and neuropathic pain in the rat // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2002, Vol. 99, p. 17179-17184], производные диаминопиримидина [Carter D.S. et al. Identification and SAR of novel diaminopyrimidines. Part 1: The discovery of RO-4, a dual P2X3/P2X2/3 antagonist for the treatment of pain // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, Vol 19, p. 1628-1631; Jahangir A. et al. Identification and SAR of novel diaminopyrimidines. Part 2: The discovery of RO-51, a potent and selective, dual P2X3/P2X2/3 antagonist for the treatment of pain // Bioorg. Med. Chem. Lett., 2009, Vol. 19, p. 1632-1635; US 7,589,090; US 7,531,547], тетразола и ариламидов [US 7,595,405], а также пиперазина и фенилтиенопиразола [Brotherton-Pleiss СЕ. Discovery and optimization of RO-85, a novel drug-like, potent, and selective P2X3 receptor antagonist // Bioorg. Med. Chem. Lett., 2010, Vol. 20, p. 1031-1036; US 7,491,821].
Среди ингибиторов P2X3 рецепторов известны также вещества белковой природы: спинорфин, фрагмент В-цепи гемоглобина, воздействующий также на другие мишени [Jung K.Y. et al. Structure-activity relationship studies of spinorphin as a potent and selective human P2X3 receptor antagonist // J. Med. Chem., 2007, Vol. 50, p. 4543-4547], и два компонента яда паука Alopecosa marikovskyi - пуротоксин-1 (РТ1) [Grishin Е.V. et al. Novel peptide from spider venom inhibits P2X3 receptors and inflammatory pain // Ann. Neurol., 2010, Vol. 67, p. 680-683; RU 2422459] и пуротоксин-2 (PT2) [Kabanova N.V. et al. Modulation of P2X3 receptors by spider toxins // Biochim. Biophys. Acta, 2012, Vol. 1818, p. 2868-2875]. PT1 является наиболее близким аналогом заявляемых соединений. Этот пептид состоит из 35 аминокислотных остатков и селективно угнетает активность Р2Х3 рецепторов за счет стабилизации их десенситизированного состояния. Рекомбинантный РТ1 может быть получен в бактериальной системе экспрессии [Grishin E.V. et al. Novel peptide from spider venom inhibits P2X3 receptors and inflammatory pain // Ann. Neurol., 2010, Vol. 67, p. 680-683; RU 2422459; RU 257194].
Несмотря на достаточно большое количество известных соединений, способных ингибировать Р2Х3 рецепторы, в настоящее время, тем не менее, нет ни одного препарата, действующего как модулятор Р2ХЗ, разрешенного для применения в клинической практике. В то же время, поиск новых лекарственных средств, эффективно и безопасно купирующих боль различного происхождения, является актуальной задачей современной медицины. Одним из подходов к решению данной задачи может быть создание и внедрение в клинику новых эффективных и селективных модуляторов Р2Х3 рецепторов.
Раскрытие изобретения
Задачей данного изобретения является разработка и получение новых эффективных антагонистов пуринергических рецепторов Р2Х3, перспективных для применения в клинической практике.
Техническим результатом изобретения является получение новых эффективных пептидов, модулирующих активность пуринергических рецепторов Р2Х3, а также обладающих селективностью по отношению к Р2Х3, высокой стабильностью и являющихся перспективными для применения в терапии заболеваний или состояний млекопитающего, фармакологической мишенью при которых являются пуринергические рецепторы Р2Х3, в частности, болей различной этиологии.
Кроме того, дополнительным техническим результатом является то, что пептиды по изобретению отличаются простотой структуры по сравнению с прототипом и могут быть легко получены в бактериальной системе экспрессии, поэтому пептиды по изобретению являются перспективными для создания на их основе лекарственных препаратов.
Указанный технический результат достигается посредством разработки и получения пептида, модулирующего активность пуринергических рецепторов Р2Х3, имеющего следующую аминокислотную последовательность:
или последовательность, гомологичную ей, по меньшей мере, на 90%.
В некоторых вариантах воплощения изобретения пептид, модулирующий активность пуринергических рецепторов Р2Х3, имеет следующую аминокислотную последовательность:
или последовательность, гомологичную ей, по меньшей мере, на 95%.
Еще в одном варианте воплощения изобретения пептид, модулирующий активность пуринергических рецепторов Р2ХЗ, имеет следующую аминокислотную последовательность:
Настоящее изобретение также относится к применению пептидов, являющихся предметом изобретения, в качестве модуляторов пуринергических рецепторов Р2Х3.
Настоящее изобретение также относится к применению пептидов, являющихся предметом изобретения, в качестве антагонистов пуринергических рецепторов Р2Х3.
Настоящее изобретение также относится к применению пептидов, являющихся предметом изобретения, для получения фармацевтической композиции для лечения и/или предотвращения состояний, ассоциированных с пуринергическими рецепторами Р2Х3, например, в терапии болей различной этиологии и/или симптомов боли, в частности боли при воспалении, постоперационной боли, висцеральной боли, зубной боли, предменструальный боли, болей, вызванных ожогами, мигрени или кластерной головной боли, боли при повреждении нерва, неврите, невралгии, боли при онкологических заболеваниях или боли, связанной с синдромом раздраженного кишечника.
Изобретение также включает получение пептидов, являющихся предметом изобретения. Указанные пептиды могут быть получены генно-инженерным способом или химическим синтезом.
Определение и термины
Как используется в настоящем документе, термин «пептид РТ6» относится к пептиду, имеющему следующую аминокислотную последовательность:
Термин «модулировать» в настоящем документе означает изменять функциональные характеристики пуринергических рецепторов Р2Х (в частности ингибировать, блокировать, снижать или предотвращать вызываемые связыванием агониста (в том числе эндогенного агониста) с рецептором физиологические эффекты), в частности Р2Х3 рецепторов.
Термин «модулятор» в настоящем документе означает вещество, способное модулировать, то есть изменять функциональные характеристики пуринергических рецепторов Р2Х (в частности, ингибировать, блокировать, снижать или предотвращать вызываемые связыванием агониста (в том числе эндогенного агониста) с рецептором физиологические эффекты), в частности Р2Х3 рецепторов.
Под «антагонистом» (антагонистом рецепторов) в биохимии и фармакологии подразумевается подтип лигандов к клеточным рецепторам. Лиганд, обладающий свойствами антагониста рецепторов, - это такой лиганд, который ингибирует, блокирует, снижает или предотвращает вызываемые связыванием агониста (в том числе эндогенного агониста) с рецептором физиологические эффекты.
«Селективным» антагонист называют в том случае, если он ингибирует конкретный рецептор либо подтип рецепторов. Степень селективности может различаться.
Термин «гомологичный» (или «гомологичность») в настоящем изобретении является синонимом термину «идентичность» и означает сходство последовательностей пептидных молекул. В настоящем изобретении степень идентичности последовательностей означает сравнение между аминокислотными последовательностями и определяется путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в окне сравнения, при этом часть аминокислотной последовательности в окне сравнения может содержать вставки или делеции (т.е. пробелы) в сравнении с контрольной последовательностью (не содержащей вставок или делеции) для оптимально выравнивания двух последовательностей. Степень идентичности можно рассчитать путем определения числа положений, по которым в обеих последовательностях находятся идентичные аминокислотные остатки, получая число совпадающих положений, деления числа совпадающих положений на общее число положений в окне сравнения и умножения результата на 100, получая степень идентичности последовательностей в процентах. Специалистам должно быть известно, что существует много установленных алгоритмов для выравнивания двух последовательностей. Примерами алгоритмов, подходящих для определения степени идентичности последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0 [Altschul S.F. et al. Basic local alignment search tool // J. Mol. Biol., 1990, Vol. 215, p. 403-410; Altschul S.F. et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs // Nucleic Acids Res., 1997, Vol. 25, p. 3389-3402].
Гомологичные пептиды имеют идентичные или сходные аминокислотные последовательности. В контексте настоящего изобретения сходные остатки представляют собой «консервативные замены» или «разрешенные точечные мутации» соответствующих аминокислотных остатков в контрольной последовательности. Консервативные замены остатков в контрольной последовательности являются такими заменами, которые физически или функционально сходны с соответствующим контрольным остатком, например, имеют сходный размер, форму, электрический заряд, химические свойства, включая способность к образованию ковалентных или водородных связей, и т.п. Для специалиста в данной области техники очевидно, что все гомологичные пептидные последовательности, являющиеся предметом изобретения, обладают способностью эффективно модулировать активность Р2Х3 рецепторов.
В используемом здесь значении термин «лечение» означает способ получения благоприятных или желаемых клинических результатов. В соответствии с целями настоящего изобретения благоприятные или желаемые клинические результаты включают, не ограничиваясь ими, один или несколько нижеследующих аспектов: уменьшение любого проявления, в частности, болей различной этиологии, в том числе интенсивности боли, ослабление одного или нескольких симптомов боли, включая любой признак боли, такой как сокращение продолжительности боли и/или уменьшение восприятия или ощущения боли, временное облегчение и/или замедление развития боли.
Термин «уменьшение проявления» боли означает любые способы ослабления боли (которые могут включать уменьшение потребности в лекарственных средствах и/или сокращение количества других лекарственных средств, обычно применяемых в данных условиях), уменьшения продолжительности, интенсивности и/или частоты возникновения боли (включая, например, увеличение времени до появления у субъекта боли различной этиологии).
Термин «уменьшение интенсивности» боли различной этиологии означает ослабление или улучшение одного или нескольких симптомов боли по сравнению с болью, имеющей место без введения модулятора рецепторов Р2Х3. Термин «уменьшение интенсивности» означает также уменьшение продолжительности симптома.
Термин «временное облегчение» боли различной этиологии или одного или нескольких симптомов боли означает уменьшение степени проявления одного или нескольких нежелательных клинических признаков боли у одного или нескольких субъектов, подвергаемых лечению модулятором рецепторов Р2Х3 в соответствии с настоящим изобретением.
В используемом здесь значении термин «замедление» развития боли различной этиологии, означает торможение, препятствование, задержку, стабилизацию и/или отсрочку прогрессирования боли. Подобное замедление может быть различным по времени в зависимости от истории болезни и/или субъекта, подлежащего лечению. Как должно быть очевидно специалисту в данной области, существенное или значительное замедление может в действительности включать предотвращение боли, выражающееся в том, что у субъекта не возникает боль. Способ «замедления» развития симптома является способом, который уменьшает вероятность возникновения симптома в данный период времени и/или уменьшает степень проявления симптома в данный период времени по сравнению с ситуацией, когда данный способ не применяется. Такие сравнения обычно основаны на клинических исследованиях с участием числа субъектов, достаточного для получения статистически значимого результата.
Описание чертежей
Рисунок 1. Получение рекомбинантного пептида РТ6:
(А) Разделение продуктов гидролиза гибридного белка энтеропептидазой на колонке Jupiter С4 (10×250 мм). Отмечена фракция, соответствующая РТ6 (*).
(Б) Повторная хроматография выделенного РТ6 на колонке Vydac С18 (4,6*250 мм).
Рисунок 2. Влияние пептида РТ6 на токи, опосредованные Р2Х рецепторами в культуре нейронов из ганглиев дорсальных корешков спинного мозга крыс. Гистограмма показывает относительную величину остаточных токов (I), опосредованных гомомерными Р2Х3, гетеромерными Р2Х2/3 и гомомерными Р2Х2 рецепторами, при приложении РТ6 в концентрации 50 нМ по сравнению с контрольными токами в отсутствии РТ6 (10).
Подробное раскрытие изобретения
Поставленная задача данного изобретения решается за счет получения пептидов по изобретению, модулирующих активность пуринергических рецепторов Р2Х3. Так, в частности, последовательность пептида РТ6 определена посредством анализа мРНК из ядовитых желез аранеоморфных пауков, а именно, указанная последовательность пептида РТ6 определена посредством анализа библиотеки кДНК желез паука Thomisus onustus. Пептиды по изобретению, и в частности пептид РТ6, являются веществами полипептидной (белковой) природы и могут быть получены химическим синтезом или генно-инженерным способом.
Неожиданно было обнаружено, что заявляемые пептиды способны ингибировать пуринергические рецепторы Р2Х3. Так, в частности, пептид РТ6 в концентрации 50 нМ вызывает 80%-е ингибирование токов, опосредованных Р2Х3 рецепторами в сенсорных нейронах крыс. РТ6 является селективным антагонистом пуринергических рецепторов Р2Х3.
Препараты на основе пептидов по изобретению являются перспективными для применения в терапии болей различной этиологии, в частности, боли при воспалении, постоперационной боли, висцеральной боли, зубной боли, предменструальный боли, болей, вызванных ожогами, мигрени или кластерной головной боли, боли при повреждении нерва, неврите, невралгии, боли при онкологических заболеваниях или боли, связанной с синдромом раздраженного кишечника. Пептиды по изобретению могут применяться, в частности, для уменьшения проявления боли, для уменьшения интенсивности боли, для временного облегчения боли или для замедления развития боли различной этиологии.
Кроме того, пептид РТ6 характеризуется чрезвычайно стабильной структурой (содержит мотив так называемого «цистинового узла»), легко может быть получен в бактериальной системе экспрессии и отличается простотой структуры по сравнению с прототипом (пептид РТ1, RU 2422459): он короче на четыре остатка и содержит на одну дисульфидную связь меньше, нежели пептид РТ1, РТ6 содержит шесть остатков цистеина, образующих три внутримолекулярные дисульфидные связи. Это служит основанием для предположения высокого потенциала РТ6 с точки зрения создания лекарственных препаратов.
Осуществление изобретения
Возможность объективного достижения технического результата при осуществлении изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, содержащих сведения экспериментального характера. Следует понимать, что эти и все приведенные в материалах заявки примеры не являются ограничивающими и приведены только для иллюстрации настоящего изобретения.
Получение рекомбинантного пептида РТ6
Аминокислотную последовательность пептида РТ6 преобразуют в соответствующую ей нуклеотидную последовательность с учетом частоты использования кодонов у Escherichia coli. Синтезируют несколько олигонуклеотидных фрагментов длиной до 50 нуклеотидов, перекрывающие полную последовательность гена РТ6, при этом концевые из них содержат сайты рестрикции для клонирования в плазмиду pET-32b (Novagen, США):
Синтез полноразмерной последовательности гена, кодирующего пептид РТ6, осуществляют с помощью методов лигирования олигонуклеотидов друг с другом и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для этого проводят фосфорилирование 3'-концов фрагментов с помощью полинуклеотидкиназы (Promega, США) при 37°C в течение 30 мин, лигирование осуществляют с использованием ДНК-лигазы фага Т4 (Promega, США) в течение 18 ч при 16°C. ПЦР проводят по стандартной процедуре на ПЦР-амплификаторе РТС-200 (MJ Research, США). Реакционная смесь содержит буферный раствор для ПЦР (50 мМ KCl, 1,5 мМ MgCl2, 0,1% Твин 20, 50 мМ Трис-HCl, pH 8,6), смесь четырех дезоксинуклеотидов (Promega, США), праймерные (концевые) олигонуклеотиды (5'-GGCTATTGCGCGACCA-3' и 5'-TTAGCCTTTCACGCACAC-S'), матричную ДНК (лигазную смесь) и Taq-полимеразу. Условия ПЦР: денатурация (96°C) - 20 сек.; отжиг (50°C) - 20 сек.; элонгация (72°C) - 30 сек., 25 циклов. Затем проводят рестрикцию ПЦР-продукта и плазмиды рЕТ-32b в буфере MultiCore, оптимальном для работы ферментов BamHI и KpnI (Promega, США). В качестве контроля проводят рестрикцию плазмиды каждым из ферментов по отдельности, результат оценивают по изменению подвижности вектора при электрофорезе в агарозном геле. Очистку рестрицированных фрагментов ДНК и вектора проводят с помощью электрофореза в агарозном геле с последующим выделением ДНК из геля с использованием набора реактивов Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega, США) в соответствии с методикой фирмы-производителя. Синтетический ген РТ6 и вектор рЕТ-32b лигируют друг с другом с помощью ДНК-лигазы фага Т4. В результате получают плазмиду, кодирующую химеру белка тиоредоксина с РТ6 под контролем Т7 промотора.
Полученные плазмиды используют для трансформации клеток Е. coli штамма XL1 Blue с помощью электропоратора Cellject (Eurogentec, Бельгия). Параметры электроимпульса выставляют согласно рекомендациям фирмы-производителя электропоратора. Суспензию клеток переносят на чашку Петри с твердой средой LB (1% бактотриптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl, 1,5% агара, 10 мМ Трис-HCl, pH 7,6) с добавлением ампициллина (70 мкг/мл) в качестве селективного фактора. Чашки инкубируют при 37°C в течение 18 ч. Колонии E. coli XL1 Blue, полученные на селективной среде после проведения трансформации, рассеивают штрихами на новой чашке Петри с твердой средой LB и ампициллином (70 мкг/мл). Чашки инкубируют 18 ч при 37°C. Проводят ПЦР со специфичными к интересующей последовательности олигонуклеотидными праймерами (5'-GGCTATTGCGCGACCA-3' и 5'-TTAGCCTTTCACGCACAC-3'), в качестве матрицы используют тотальную нуклеиновую кислоту из полученной клеточной массы. Отобранные трансформанты используют для получения ночной жидкой культуры в 5 мл жидкой среды LB с добавлением ампициллина (70 мкг/мл), суспензию инкубируют 18 ч при 37°C. Процедуру препаративного выделения плазмидной ДНК проводят с использованием набора реактивов Wizard Plus SV Minipreps DNA Purification System (Promega, США) в соответствии с методикой фирмы-производителя.
Правильность сборки и лигирования проверяют секвенированием по методу Сэнгера на приборе Model 373 DNA Sequencer (Applied Biosystems, США) с использованием реактивов ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready reaction kit, ДНК-полимеразы AmpliTaq DNA polymerase, FS (Perkin Elmer, США) и праймера pET-HindSeq (5'-CTTCCTTTCGGGCTTTG-3') в соответствии с рекомендациями указанных производителей.
Наработку химерного белка проводят с помощью контролируемой экспрессии соответствующего гена в клетках Е. coli штамма BL21(DE3). Ночную культуру клеток, трансформированных экспрессионным вектором рЕТ-32b, содержащим вставку гена РТ6, разбавляют в 200 раз жидкой питательной средой LB с ампициллином (100 мкг/мл). Клетки инкубируют при 37°C и перемешивании (200 об/мин) до достижения оптической плотности OD620=0,6, после чего к культуре добавляют индуктор (изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид, ИПТГ; 0,2 мМ) и инкубируют при комнатной температуре в течение 18 ч.
Клетки осаждают центрифугированием (10 мин, 4500 об/мин) и ресуспендируют в 25 мл стартового буфера для аффинной хроматографии (см. ниже) с добавлением 1% Тритона Х-100. Разрушение клеточных структур проводят с использованием ультразвукового дезинтегратора СРХ 750 (Cole-Parmer Instruments, США). Выделение гибридного белка проводят с помощью аффинной хроматографии. Клеточный лизат наносят в стартовом буфере (50 мМ Трис-HCl, pH 8, 300 мМ NaCl) на колонку объемом 3 мл со смолой TALON Superflow Metal Affinity Resin (Clontech, США) со скоростью потока 1 мл/мин. Для элюции целевого белка используют буфер, содержащий 50 мМ Трис-HCl, pH 8, 300 мМ NaCl, 150 мМ имидазол. Детекцию осуществляют по оптическому поглощению элюата при 280 нм. Контроль за выделением и очисткой гибридного белка ведут с помощью электрофореза аликвот получаемых фракций в полиакриламидном геле.
Полученный белок подвергают обессоливанию на колонке Jupiter С4 (10×250 мм, 
, 10 мкм; Phenomenex, США). Элюцию осуществляют ступенчатым изменением концентрации ацетонитрила (0-70%) в 0,1%-ной трифторуксусной кислоте (ТФУ) со скоростью потока 2 мл/мин. Белок высушивают на вакуумном концентраторе, растворяют в 50 мМ Трис-HCl, pH 8, конечная концентрация белка составляет ~1 мг/мл. К раствору белка добавляют раствор каталитической субъединицы энтеропептидазы человека из расчета 1 ед. на 1 мг белка, гидролиз проводят при комнатной температуре в течение 18 ч. Разделение продуктов гидролиза гибридного белка проводят на колонке Jupiter С4 (250×10 мм, , 10 мкм; Phenomenex, США) в линейном градиенте концентрации ацетонитрила (0-24% за 24 мин, 23-60% за 1 мин) в 0,1%-ной ТФУ при скорости потока 2 мл/мин. Детекцию осуществляют по оптическому поглощению элюата при 210 нм (рисунок 1А). Индивидуальность полученного препарата РТ6 подтверждают повторной хроматографией на колонке Vydac 218ТР54 С18 column (4,6×250 мм, , 5 мкм; Separations Group, США) в линейном градиенте концентрации ацетонитрила (0-30% за 30 мин) в 0,1%-ной ТФУ при скорости потока 1 мл/мин (рисунок 1Б). В результате получают выход рекомбинантного РТ6 5 мг с 1 л бактериальной культуры. Структуру рекомбинантного пептида подтверждают при помощи масс-спектрометрии и N-концевого секвенирования.
Для специалиста в данной области техники понятно, что все пептиды, являющиеся предметом изобретения и имеющие последовательность, гомологичную последовательности пептида РТ6, по меньшей мере, на 90%, в частности, на 95%, могут быть получены аналогичным способом.
Исследование активности РТ6 в отношении Р2Х рецепторов
Пептиды по изобретению исследовались на способность модулировать активность Р2Х рецепторов. Нейроны для экспериментов выделяют из ганглиев дорсальных корешков спинного мозга (заднекорешковых ганглиев) 9-12-дневных крыс линии Wistar. Ганглии помещают в чашку Петри, наполненную внеклеточным раствором (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 2 мМ MgCl2, 20 мМ HEPES, pH 7,4) комнатной температуры, а затем - в раствор ферментов (1 мг трипсина и 2 мг коллагеназы в 2 мл внеклеточного раствора), нагретый до 35°C, инкубируют в течение 10 мин. Затем ганглии тщательно промывают чистым (без ферментов) внеклеточным раствором в другой чашке Петри. Из промытых ганглиев выделяют одиночные клетки с помощью тонких игл. Чашка с одиночными клетками переносится в электрофизиологическую установку. Эксперименты начинают после того, как все клетки осядут на дно чашки через 30 мин. после выделения.
Электрофизиологическое тестирование проводится с использованием классического метода локальной фиксации потенциала (patch clamp) в конфигурации отведения напряжения от целой клетки (whole cell) с применением подхода быстрого приложения вещества (агониста), которое связывается с Р2Х3 рецепторами и вызывает открытие ионного канала. Электрофизиологическая установка состоит из трех частей: микроскопа, системы приложения веществ на клетку («прыгающий столик»; Pharma Robot, Украина) и системы регистрации токов, протекающих через каналы в плазматической мембране клетки. Выделенные нейроны в чашке Петри располагают под микроскопом с фазовым контрастом на установке. Для эксперимента выбирают клетки диаметром 8-12 мкм. К выбранной клетке подводят стеклянную пипетку-электрод, заполненную внутриклеточным раствором (120 мМ CsF, 10 мМ Трис-HCl, pH 7,2), в результате формируется плотный контакт между пипеткой и клеточной мембраной с сопротивлением порядка ГОм. Затем клетку на пипетке поднимают со дна чашки и помещают в аппликационную трубку. Растворы, используемые в эксперименте, находятся в камерах прыгающего столика. В опыте используются четыре типа растворов: раствор 1 - базовый внеклеточный раствор, в котором хранятся полученные клетки, раствор 2 - базовый раствор с добавлением агониста в необходимой концентрации, раствор 3 - базовый раствор с пептидом РТ6 в необходимой концентрации, раствор 4 - базовый раствор с агонистом и пептидом РТ6 в необходимых концентрациях. Процедуру отмывки проводят не менее 15 раз на протяжении 3 мин. Через 3 мин после приложения агониста процедуру повторяют. После получения контрольных токов к клетке прикладывают пептид РТ6. Далее повторяют процедуру прикладывания агониста вместе с РТ6. После прикладывания агониста вместе с РТ6 отмывку клетки от агониста также проводят на фоне РТ6. Последовательное приложение агониста с РТ6 прекращают, когда амплитуда Р2Х-опосредованого тока остается неизменной. Отношение амплитуды контрольного тока к установившейся амплитуде тока на фоне определенной концентрации РТ6 является показателем эффективности действия данной концентрации РТ6. Токи регистрируют при поддерживаемом потенциале -60 мВ и комнатной температуре с помощью усилителя модели 2400 (А-М Systems, США). Электроды для электрофизиологических исследований изготовляют из боросиликатного стекла на установке Р-97 Flamming/Brown (Sutter Instrument, США), их сопротивление составляет 3-5 МОм. В качестве агониста используют цитидинтрифосфат (ЦТФ) в насыщающей концентрации (100 мкМ). Ток с быстрой фазой нарастания (до 12 мсек) и быстрой фазой спада (до 500 мсек) соответствует току, опосредованному Р2ХЗ рецепторами. Время активации рецепторов составляет 2-4 мсек, время десенситизации - 20-100 мсек, а время выхода рецепторов из десенситизации - порядка 2 мин для ЦТФ.
В результате проведенного эксперимента неожиданно обнаружено, что связывание пептида РТ6 с Р2Х3 рецепторами в десенситизированном состоянии приводит к значительному уменьшению амплитуды тока. В концентрации 50 нМ РТ6 приводит к уменьшению амплитуды тока, опосредованного Р2Х3 рецепторами, на 80% (рисунок 2). Таким образом, пептид РТ6 является модулятором, а именно антагонистом, пуринергических рецепторов Р2Х3.
В мембранах нейронов ганглиев дорсальных корешков спинного мозга кроме Р2Х3 рецепторов присутствуют также Р2Х2 и Р2Х2/3 рецепторы [Burgard Е.С. et al. Р2Х receptor-mediated ionic currents in dorsal root ganglion neurons // J. Neurophysiol., 1999, V. 82, P. 1590-1598]. Время выхода из десенситизации Р2Х3 рецепторов очень велико по сравнению с Р2Х2 и Р2Х2/3 рецепторами. При приложении агониста с периодом в 1 мин все наблюдаемые ответы, кроме первого, опосредованы Р2Х2 и Р2Х2/3 рецепторами. Чувствительность Р2Х2/3 рецептора к АТФ и к α,β-метилен-АТФ приблизительно одинакова (Kd ~30 мкМ), а минимальная концентрация α,β-метилен-АТФ, необходимая для активации Р2Х2 рецепторов, составляет не менее 100 мкМ. Эквивалентность ионных токов, наблюдаемых в ответ на поочередное приложение АТФ и α,β-метилен-АТФ, свидетельствует о значительном преобладании Р2Х2/3 рецепторов в мембране клетки. В клетках, которые генерируют ионные токи разной амплитуды, большей - в ответ на приложение АТФ и очень малой - в ответ на приложение α,β-метилен-АТФ, мембрана содержит в основном Р2Х2 рецепторы. В результате эксперимента было обнаружено, что РТ6 не влияет на ионные токи, опосредованные Р2Х2/3 и Р2Х2 рецепторами (рисунок 2). Таким образом, неожиданно было установлено, что пептид РТ6 действует селективно на рецепторы изоформы Р2Х3 и является селективным антагонистом пуринергических рецепторов Р2Х3.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.
Claims (3)
1. Пептид, являющийся антагонистом пуринергических рецепторов Р2Х3 и имеющий следующую аминокислотную последовательность:
Gly1-Tyr2-Cys3-Ala4-Thr5-Lys6-Gly7-Ile8-Lys9-Cys10-Asn11-Asp12-Ile13-His14-Cys15-Cys16-Ser17-Gly18-Leu19-Lys20-Cys21-Asp22-Ser23-Lys24-Arg25-Lys26-Val27-Cys28-Val29-Lys30-Gly31 - SEQ ID NO: 1.
2. Применение пептида по п. 1 в качестве антагониста пуринергических рецепторов Р2Х3.
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147736A RU2650780C1 (ru) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
| CN201780076067.5A CN110062763B (zh) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 嘌呤能受体的肽调节剂 |
| KR1020197019434A KR102237590B1 (ko) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 퓨린성 수용체의 펩티드 조절자 |
| CA3045790A CA3045790C (en) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | Peptide modulator of purinergic receptors |
| EA201991365A EA037272B1 (ru) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
| US16/466,885 US10981958B2 (en) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | Peptide modulator of purinergic receptors |
| EP17877931.0A EP3584254A4 (en) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | PEPTIDE MODULATOR OF PURINERGIC RECEPTORS |
| AU2017371488A AU2017371488B2 (en) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | Peptide modulator of purinoceptors |
| JP2019531251A JP6870091B2 (ja) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | プリン受容体のペプチドモジュレータ |
| PCT/RU2017/000279 WO2018106142A1 (ru) | 2016-12-06 | 2017-05-31 | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147736A RU2650780C1 (ru) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2650780C1 true RU2650780C1 (ru) | 2018-04-17 |
Family
ID=61976543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016147736A RU2650780C1 (ru) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10981958B2 (ru) |
| EP (1) | EP3584254A4 (ru) |
| JP (1) | JP6870091B2 (ru) |
| KR (1) | KR102237590B1 (ru) |
| CN (1) | CN110062763B (ru) |
| AU (1) | AU2017371488B2 (ru) |
| CA (1) | CA3045790C (ru) |
| EA (1) | EA037272B1 (ru) |
| RU (1) | RU2650780C1 (ru) |
| WO (1) | WO2018106142A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2714114C1 (ru) * | 2019-08-30 | 2020-02-11 | Общество с ограниченной ответственностью «Анальгетики будущего» | Способ получения пептида, модулирующего активность пуринергических рецепторов |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113151128B (zh) * | 2021-03-11 | 2022-04-05 | 厦门宝太生物科技股份有限公司 | 一种用于新型冠状病毒n蛋白表达的大肠杆菌表达培养基 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2422459C1 (ru) * | 2010-06-01 | 2011-06-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
| RU2571942C2 (ru) * | 2013-11-14 | 2015-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Способ получения рекомбинантного анальгетического пептида |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1348466A3 (en) | 2002-02-01 | 2003-10-29 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating pain with adenosine-tetraphosphates |
| AU2006281497B2 (en) | 2005-08-15 | 2012-06-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Piperidine and piperazine derivatives as P2X3 antagonists |
| EP1924564B1 (en) | 2005-09-01 | 2016-11-09 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Diaminopyrimidines as p2x3 and p2x2/3 modulators |
| EP1934364A4 (en) * | 2005-09-30 | 2009-03-25 | Merck & Co Inc | NUCLEIC ACIDS ENCODING A FUNCTIONAL PURINERGIC RECEPTOR OF MAMMAL, P2X3, AND METHODS OF MAKING AND USING SAME |
| EP2038264B1 (en) | 2006-06-29 | 2016-10-26 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Tetrazole-substituted arylamides |
| WO2008104472A1 (en) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 2, 4 -diaminopyrimidine derivatives and their use as p2x antagonists or as prodrugs thereof |
| KR101698153B1 (ko) * | 2010-04-26 | 2017-01-23 | 광주과학기술원 | Ｐ2ｘ1 및 ｐ2ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 피리딘 카르복실산계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 |
-
2016
- 2016-12-06 RU RU2016147736A patent/RU2650780C1/ru active
-
2017
- 2017-05-31 US US16/466,885 patent/US10981958B2/en active Active
- 2017-05-31 CA CA3045790A patent/CA3045790C/en active Active
- 2017-05-31 EA EA201991365A patent/EA037272B1/ru unknown
- 2017-05-31 JP JP2019531251A patent/JP6870091B2/ja active Active
- 2017-05-31 AU AU2017371488A patent/AU2017371488B2/en active Active
- 2017-05-31 EP EP17877931.0A patent/EP3584254A4/en active Pending
- 2017-05-31 WO PCT/RU2017/000279 patent/WO2018106142A1/ru unknown
- 2017-05-31 CN CN201780076067.5A patent/CN110062763B/zh active Active
- 2017-05-31 KR KR1020197019434A patent/KR102237590B1/ko active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2422459C1 (ru) * | 2010-06-01 | 2011-06-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов |
| RU2571942C2 (ru) * | 2013-11-14 | 2015-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Способ получения рекомбинантного анальгетического пептида |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GRISHIN E.V. et al., Novel Peptide from Spider Venom Inhibits P2X3 Receptors and Inflammatory Pain, ANNALS of Neurology, 2010, V.67, N.5, p.680-683. * |
| TOKURIKI N. ET AL., Stability effects of mutations and protein evolvability, Curr. Opin. Struct. Biol., 2009, v.19, n.5, p.596-604. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2714114C1 (ru) * | 2019-08-30 | 2020-02-11 | Общество с ограниченной ответственностью «Анальгетики будущего» | Способ получения пептида, модулирующего активность пуринергических рецепторов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA037272B1 (ru) | 2021-03-02 |
| US10981958B2 (en) | 2021-04-20 |
| KR102237590B1 (ko) | 2021-04-07 |
| KR20190090849A (ko) | 2019-08-02 |
| JP6870091B2 (ja) | 2021-05-12 |
| AU2017371488A1 (en) | 2019-07-18 |
| CN110062763A (zh) | 2019-07-26 |
| EA201991365A1 (ru) | 2019-11-29 |
| EP3584254A1 (en) | 2019-12-25 |
| CA3045790A1 (en) | 2018-06-14 |
| AU2017371488B2 (en) | 2020-10-29 |
| EP3584254A4 (en) | 2020-07-15 |
| US20200207815A1 (en) | 2020-07-02 |
| WO2018106142A1 (ru) | 2018-06-14 |
| CN110062763B (zh) | 2022-11-15 |
| CA3045790C (en) | 2021-08-10 |
| JP2020504098A (ja) | 2020-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6426217B2 (ja) | 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド | |
| Bradbury et al. | Molecular cloning of PC3, a putatively secreted protein whose mRNA is induced by nerve growth factor and depolarization. | |
| Monteggia et al. | Cloning and localization of the hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel family in rat brain | |
| JP6063626B2 (ja) | プロミニン−１ペプチド断片およびその使用 | |
| RU2650780C1 (ru) | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов | |
| Fabbretti et al. | Regulation of P2X3 receptor structure and function | |
| RU2422459C1 (ru) | Пептидный модулятор пуринергических рецепторов | |
| JPH04218374A (ja) | ヒト毛様体神経栄養因子 | |
| US20060024729A1 (en) | Mechanosensitive mammalian potassium channels activatable by polyunsaturated fatty acids and the use of said channels in drug screening | |
| US20210363176A1 (en) | Means and methods for production of serine adp-ribosylated forms of proteins and peptides | |
| US6942979B1 (en) | Method for screening substances capable of modulating the activity of a TRAAK potassium channel | |
| Miller et al. | A GTPase cycle in initiation of protein translocation across the endoplasmic reticulum membrane | |
| CN109071601A (zh) | 药学活性肽化合物，其制备方法和用途 | |
| US20050159333A1 (en) | Methods of modulating smooth muscle contractility | |
| ES2700531T3 (es) | Fosforilación del factor de transcripción E2F4 en los restos Thr-248 y/o Thr-250 como diana terapéutica en procesos patológicos asociados a poliploidía somática | |
| PT1334195E (pt) | Análogos, agonistas, antagonistas e variantes da actividade da enzima da oxidoreductase do factor de inibição de imigração de macrófago ( mif ) como imunomoduladores, medicamentos, agentes de protecção e de diagnóstico em doenças inflamatórias e imun | |
| EA047514B1 (ru) | Модифицированные лиганд-управляемые ионные каналы и способы их использования | |
| Serulle | A novel cGKII-GluR1 interaction and the regulation of AMPA receptor trafficking | |
| WO2017091807A1 (en) | Peptide inhibitors for calcineurin |