RU2642262C2 - Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин - Google Patents
Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин Download PDFInfo
- Publication number
- RU2642262C2 RU2642262C2 RU2014134747A RU2014134747A RU2642262C2 RU 2642262 C2 RU2642262 C2 RU 2642262C2 RU 2014134747 A RU2014134747 A RU 2014134747A RU 2014134747 A RU2014134747 A RU 2014134747A RU 2642262 C2 RU2642262 C2 RU 2642262C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- numbering system
- kabat numbering
- seq
- antibody
- sequence
- Prior art date
Links
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 391
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 59
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 55
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 108
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 claims description 46
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 20
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 claims description 18
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 8
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 241000421777 Abatus Species 0.000 claims 1
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 57
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 46
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 45
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 description 44
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 42
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 29
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 23
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 21
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 21
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 18
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 18
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 13
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 11
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 9
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 description 9
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 description 7
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 102000019355 Synuclein Human genes 0.000 description 6
- 108050006783 Synuclein Proteins 0.000 description 6
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 6
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 6
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 6
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 description 4
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 208000032859 Synucleinopathies Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 4
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 4
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 4
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000004558 lewy body Anatomy 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 3
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 102220549033 B-cell linker protein_Y91F_mutation Human genes 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 2
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 2
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 2
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 2
- 102220518434 Enhancer of filamentation 1_T28S_mutation Human genes 0.000 description 2
- 102220491910 Golgin subfamily A member 6-like protein 1_C97S_mutation Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102220476699 Interleukin-1 receptor-associated kinase 3_F83A_mutation Human genes 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 2
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102220620561 Transcription factor Sp4_M69L_mutation Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 102220346089 c.113G>A Human genes 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 2
- 102000004963 gamma-Synuclein Human genes 0.000 description 2
- 108090001121 gamma-Synuclein Proteins 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 2
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004179 neuropil Anatomy 0.000 description 2
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 102200036624 rs104893875 Human genes 0.000 description 2
- 102200036626 rs104893877 Human genes 0.000 description 2
- 102200036620 rs104893878 Human genes 0.000 description 2
- 102220054555 rs147122501 Human genes 0.000 description 2
- 102220243676 rs1555601019 Human genes 0.000 description 2
- 102220007583 rs281860300 Human genes 0.000 description 2
- 102200156936 rs28934878 Human genes 0.000 description 2
- 102220019720 rs397507902 Human genes 0.000 description 2
- 102220047535 rs587783040 Human genes 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 208000003755 striatonigral degeneration Diseases 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 206010000117 Abnormal behaviour Diseases 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000007415 Anhedonia Diseases 0.000 description 1
- 206010002653 Anosmia Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 238000012492 Biacore method Methods 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006100 Bradykinesia Diseases 0.000 description 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 description 1
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 1
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 101100012887 Drosophila melanogaster btl gene Proteins 0.000 description 1
- 101100012878 Drosophila melanogaster htl gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- -1 FR3 Proteins 0.000 description 1
- 208000034347 Faecal incontinence Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000011993 High Performance Size Exclusion Chromatography Methods 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000619542 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase parkin Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011965 Lipoprotein Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010061306 Lipoprotein Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 229940121948 Muscarinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010031127 Orthostatic hypotension Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000002192 Parkinson disease 3 Diseases 0.000 description 1
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000005793 Restless legs syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 206010039424 Salivary hypersecretion Diseases 0.000 description 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 1
- 206010039792 Seborrhoea Diseases 0.000 description 1
- 201000001880 Sexual dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 208000009106 Shy-Drager Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- 208000021017 Weight Gain Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 208000031326 autosomal dominant parkinson disease 3 Diseases 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000003799 beta-Synuclein Human genes 0.000 description 1
- 108090000182 beta-Synuclein Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011325 biochemical measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003543 catechol methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 230000008455 cerebrovascular function Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 1
- 230000003931 cognitive performance Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 101150069842 dlg4 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 229940052760 dopamine agonists Drugs 0.000 description 1
- 239000003136 dopamine receptor stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 208000029444 double vision Diseases 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002599 functional magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000008449 language Effects 0.000 description 1
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007334 memory performance Effects 0.000 description 1
- 230000003924 mental process Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000478 neocortex Anatomy 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007996 neuronal plasticity Effects 0.000 description 1
- 238000010855 neuropsychological testing Methods 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001144 postural effect Effects 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000007425 progressive decline Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036385 rapid eye movement (rem) sleep Effects 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102220054995 rs373913704 Human genes 0.000 description 1
- 102200036566 rs80356715 Human genes 0.000 description 1
- 102220287154 rs886040428 Human genes 0.000 description 1
- 208000026451 salivation Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000008742 seborrheic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008786 sensory perception of smell Effects 0.000 description 1
- 231100000872 sexual dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 230000008667 sleep stage Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012030 stroop test Methods 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000007794 visualization technique Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0058—Antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
- A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1018—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описано антитело, содержащее зрелую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три CDR по Кабату (Kabat), из последовательности SEQ ID NO: 44, и по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, содержащую три CDR по Кабату, из последовательности SEQ ID NO: 45, и по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45, где антитело специфически связывается с человеческим альфа-синуклеином. Также описана фармацевтическая композиция, содержащая описанное антитело. Представлен способ лечения пациента, имеющего болезнь с тельцами Леви или имеющего риск развития данного заболевания или способ обнаружения телец Леви у пациента, имеющего болезнь с тельцами Леви или имеющего риск развития данного заболевания, содержащий назначение пациенту эффективной схемы введения описанного антитела. Изобретение обеспечивает антитела которые связываются с человеческим альфа-синуклеином и могут применяться для лечения и диагностики болезни с тельцами Леви. 7 н. и 73 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 2 пр.
Description
[0001] Для настоящей заявки испрашивается приоритет по предварительной заявке на патент США №61/591835, поданной 27 января 2012, и предварительной заявке на патент США №61/711207, поданной 8 октября 2012, которые включены сюда посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Синуклеинопатии, включая болезни с тельцами Леви (Lewy body diseases (LBD)), характеризуются дегенерацией дофаминергической системы, моторными изменениями, когнитивными нарушениями и образованием телец Леви (LB) и/или нейритов Леви. (McKeith et al., Neurology (1996) 47:1113-24). Синуклеинопатии включают болезнь Паркинсона (включая идиопатическую болезнь Паркинсона), болезнь диффузных телец Леви (Lewy Body Disease (DLBD)), также известную как деменция с тельцами Леви (Dementia with Lewy Bodies (DLB)), вариант болезни Альцгеймера с образованием телец Леви (Lewy body variant (LBV)), объединенные болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона (Parkinson disease (PD)), чисто вегетативную недостаточность и синдром Шая - Дрейджера (Shy-Drager); например, оливопонтоцеребральную атрофию, стриатонигральную дегенерацию и синдром Шая - Дрейджера. Некоторые немоторные признаки и симптомы, как полагают, являются предвестниками синуклеинопатий в продромальной фазе заболевания (т.е., пресимптоматичический, субклинический, доклинический или премоторный период). Такие ранние признаки включают в себя, например, нарушения поведения во время REM-сна (sleep behavior disorder (RBD)), потерю обоняния и запоры (Mahowald et al., Neurology (2010) 75:488-489). Заболевания, сопровождающиеся образованием телец Леви, часто являются причиной двигательных нарушений и когнитивных расстройств у пожилых людей (Galasko et al., Arch. Neurol. (1994) 51:888-95).
[0003] Альфа-синуклеин относится к большому семейству белков, включая бета- и гамма-синуклеин и синоретин. Альфа-синуклеин экспрессируется в норме в синапсе и, как считается, отвечает за нервную пластичность, обучение и память. Некоторые исследования показали, что центральную роль в патогенезе PD играет синаптический белок альфа-синуклеин. Белок может агрегировать с образованием нерастворимых фибрилл в патологических условиях. Например, синуклеин откладывается в LB (Spillantini et al., Nature (1997) 388:839-40; Takeda et al., J. Pathol. (1998) 152:367-72; Wakabayashi et al., Neurosci. Lett. (1997) 239:45-8). Мутации в гене альфа-SN ассоциированы с редкими семейными формами паркинсонизма (Kruger et al., Nature Gen. (1998) 18:106-8; Polymeropoulos, et al., Science (1997) 276:2045-7). Гиперэкспрессия синуклеина у трансгенных мышей (Masliah et al., Science (2000) 287:1265-9) и у мух вида Drosophila (Feany et al., Nature (2000) 404:394-8) имитирует некоторые патологические аспекты болезни с тельцами Леви. Кроме того, было высказано предположение, что растворимые олигомеры синуклеина могут быть нейротоксическими (Conway et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97:571-576; Volles et al., J. Biochemistry (2003) 42:7871-7878). Накопление альфа-синуклеина с одинаковыми морфологическими и неврологическими изменениями у различных видов животных, таких как люди, мыши и мухи, позволяет сделать предположение о том, что именно данная молекула способствует развитию болезни с тельцами Леви.
СУЩНОСТЬ ЗАЯВЛЕННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] Настоящее изобретение относится к антителам, содержащим зрелую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три определяющие комплементарность области (Complementarity Determing Region (CDR)), положение и длина которых определены в соответствии со схемой Кабата (Kabat), из SEQ ID NO:44, и по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO:44, и легкую цепь, содержащую три CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой Kabat, из SEQ ID NO:45, и по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO:45. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична SEQ ID NO:44 и зрелая вариабельная область легкой цепи по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична SEQ ID NO:45. В некоторых антителах положение L46 (система нумерации по Кабату) может быть занято F; положение L49 (система нумерации по Кабату) может быть занято С; положение L83 (система нумерации по Кабату) может быть занято А; положение Н11 (система нумерации по Кабату) может быть занято L; положение Н28 (система нумерации по Кабату) может быть занято S; положение Н38 (система нумерации по Кабату) может быть занято К; положение Н48 (система нумерации по Кабату) может быть занято I; положение Н67 (система нумерации по Кабату) может быть занято А; положение Н69 (система нумерации по Кабату) может быть занято L; положение Н71 (система нумерации по Кабату) может быть занято А; и/или положение Н91 (система нумерации по Кабату) может быть занято F. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) может быть занято S. В некоторых из таких антител аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:44 и аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO:45, за исключением условия, что положение L46 (система нумерации по Кабату) может быть занято L или F, и/или положение L49 (система нумерации по Кабату) может быть занято Y или С, и/или положение L83 (система нумерации по Кабату) может быть занято F или А, и/или положение Н11 (система нумерации по Кабату) может быть занято V или L, и/или положение Н28 (система нумерации по Кабату) может быть занято Т или S, и/или положение Н38 (система нумерации по Кабату) может быть занято R или К, и/или положение Н48 (система нумерации по Кабату) может быть занято М или I, и/или положение Н67 (система нумерации по Кабату) может быть занято V или А, и/или положение Н69 (система нумерации по Кабату) может быть занято М или L, и/или положение Н71 (система нумерации по Кабату) может быть занято Т или А, и/или положение Н91 (система нумерации по Кабату) может быть занято Y или F, и/или Н97 (система нумерации по Кабату) может быть занято Cor S. В некоторых из таких антител положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y. В некоторых из таких антител положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает L и положение Н38 (нумерация Kabat) занимает К. В некоторых из таких антител положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V и положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R. В некоторых из таких антител положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y. В некоторых из таких антител положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, должность Н38 (система нумерации по Кабату) занимает К, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение Н97 (нумерация Kabat) занимает С. В некоторых из таких антител положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S. В некоторых из таких антител положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S. В некоторых из таких антител аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области тяжелой цепи является иной, чем SEQ ID NO:44, и аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области легкой цепи является иной, чем SEQ ID NO:45.
[0005] Настоящее изобретение дополнительно относится к антителу, содержащему гуманизированную тяжелую цепь, содержащую три CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой Кабата, из SEQ ID NO:44, и гуманизированную легкую цепь, содержащую три CDR из SEQ ID NO:45, при условии, что положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, и/или положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С, и/или положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F, и/или положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, и/или положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, и/или положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, и/или положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, и/или положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, и/или положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, и/или положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, и/или положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y, и/или положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V и положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R. В некоторых из таких антител положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y. В некоторых из таких антител положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С, положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
[0006] Настоящее изобретение дополнительно относится к антителу, содержащему зрелую вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:23, и зрелую вариабельную область легкой цепи, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:37. В некоторых из таких антител зрелая вариабельная область тяжелой цепи содержит три CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой, из SEQ ID NO:23, и зрелая вариабельная область легкой цепи содержит три CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой Кабата, из SEQ ID NO:37, и положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител последовательность зрелой тяжелой цепи идентична по меньшей мере на 95% последовательности SEQ ID NO:23 и последовательность зрелой легкой цепи идентична по меньшей мере на 95% последовательности SEQ ID NO:37. В некоторых из таких антител любые различия в областях CDR зрелой вариабельной области тяжелой цепи и зрелой вариабельной области легкой цепи из последовательностей SEQ ID NO:52 и SEQ ID NO:60, соответственно, находятся в положениях от Н60 до Н65. У некоторых из таких антител величина KD (константа диссоциации), характерная для антитела и альфа-синуклеина, превышает в от около 0,5 раз до 2 раз величину KD, характерную для мышиного или химерного антитела 1Н7 и альфа-синуклеина. В некоторых из таких антител положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F или А, положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F. В некоторых из таких антител положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С. В некоторых из таких антител любое различие между каркасным участком вариабельной области зрелой вариабельной области тяжелой цепи и последовательностью SEQ ID NO:23 представляет собой одно или более из положения Н11 (система нумерации по Кабату), занимаемого V, положения Н28 (система нумерации по Кабату), занимаемого Т, положения Н38 (система нумерации по Кабату), занимаемого R, положения Н48 (система нумерации по Кабату), занимаемого М, положения Н69 (система нумерации по Кабату), занимаемого М, и положения Н91 (система нумерации по Кабату), занимаемого Y. В некоторых из таких антител любое различие между каркасным участком вариабельной области зрелой вариабельной области легкой цепи и последовательностью SEQ ID NO:37 заключается в том, что положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F или А. В некоторых из таких антител зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:23, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:37.
[0007] В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:19, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:21, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:23, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:25, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:27, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:45, 33, 35, 37 или 39.
[0008] В любом из упомянутых выше антител зрелая вариабельная область тяжелой цепи может быть слита с константной областью тяжелой цепи и зрелая константная область легкой цепи может быть слита с константной областью легкой цепи.
[0009] В любом из упомянутых выше антител константная область тяжелой цепи может представлять собой мутантную форму природной константной области человека, которая хуже связывается с рецептором Fcγ по сравнению с природной константной областью человека.
[0010] В любом из упомянутых выше антител константная область тяжелой цепи может представлять собой изотип IgG1 человека. В некоторых антителах аллотип представляет собой G1m3. В некоторых антителах аллотип представляет собой G1m1.
[0011] В некоторых антителах константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:52, при условии, что С-концевой остаток лизина может быть опущен. В некоторых антителах константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:49. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:52, при условии, что С-концевой остаток лизина может быть опущен, и зрелая константная область легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:49. В некоторых антителах зрелая легкая цепь содержит последовательность SEQ ID NO:53 и зрелая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO:56.
[0012] Настоящее изобретение дополнительно относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей любую из вышеупомянутых зрелых вариабельных областей тяжелой цепи и/или любую из вышеупомянутых зрелых вариабельных областей зрелой легкой цепи, например, SEQ ID NO:18, 20, 22, 24, 26, 32, 34, 36 или 38.
[0013] Настоящее изобретение дополнительно относится к клетке-хозяину, содержащей вектор, содержащий любую из нуклеиновых кислот, описанных выше.
[0014] Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции, содержащей любое из вышеуказанных антител.
[0015] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения пациента с болезнью телец Леви или имеющего риск развития данного заболевания, включающему эффективную схему введения пациенту любого из вышеуказанных антител. Согласно некоторым способам, болезнь представляет собой болезнь Паркинсона. Согласно некоторым способам, у пациента подавляется снижение когнитивной функции. Согласно некоторым способам, уменьшаются агрегаты альфа-синуклеина в нейритных бляшках и/или в аксонах. Согласно некоторым способам, у пациента уменьшается нейритная дистрофия. Согласно некоторым способам, сохраняется синаптическая и/или дендритная плотность. Согласно некоторым способам, способ сохраняет у пациента синаптофизин и/или МАР2.
[0016] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения образования телец Леви у пациента с болезнью телец Леви или имеющего риск развития данного заболевания, включающему введение пациенту эффективного количества любого из вышеупомянутых антител. Согласно некоторым способам, болезнь представляет собой болезнь Паркинсона. Согласно некоторым способам, у пациента подавляется снижение когнитивной функции. Согласно некоторым способам, агрегаты альфа-синуклеина в нейритных бляшках и/или в аксонах уменьшаются. Согласно некоторым способам, у пациента уменьшается нейритная дистрофия. Согласно некоторым способам, сохраняется синаптическая и/или дендритная плотность. Согласно некоторым способам, способ сохраняет у пациента синаптофизин и/или МАР2.
[0017] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу ингибирования агрегации синуклеина или растворения телец Леви или агрегатов синуклеина у пациента с болезнью телец Леви или имеющего риск развития данного заболевания, включающему введение пациенту эффективного количества любого из вышеупомянутых антител. Согласно некоторым способам, болезнь представляет собой болезнь Паркинсона. Согласно некоторым способам, у пациента подавляется снижение когнитивной функции. Согласно некоторым способам, агрегаты альфа-синуклеина в нейритных бляшках и/или в аксонах уменьшаются. Согласно некоторым способам, у пациента уменьшается нейритная дистрофия. Согласно некоторым способам, сохраняется синаптическая и/или дендритная плотность. Согласно некоторым способам, способ сохраняет у пациента синаптофизин и/или МАР2.
[0018] Настоящее изобретение дополнительно относится к способам определения телец Леви у больного с болезнью телец Леви или имеющего риск развития данного заболевания, включающим введение пациенту эффективного количества любого из вышеупомянутых антител, причем антитело связывается с тельцами Леви и связанное антитело обнаруживают. Согласно некоторым способам, болезнь представляет собой болезнь Паркинсона. Согласно некоторым способам, антитело метят.
[0019] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу получения антитела, включающему культивирование клеток, трансформированных нуклеиновыми кислотами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела, так что клетка секретирует антитело; и очистку антитела из среды для культивирования клеток; причем антитело представляет собой любое из антител, описанных выше.
[0020] Настоящее изобретение дополнительно относится к способу получения клеточной линии, продуцирующей антитело, включающему введение вектора, кодирующего тяжелые и легкие цепи антитела, и селектируемого маркера в клетки; разращивание клеток в условиях для отбора клеток, имеющих повышенное количество копий вектора; отделение отдельных клеток от отобранной клетки; и сохранение клеток, клонированных из одной клетки, отобранной на основе выхода антитела; где антитело представляет собой любое из антител, описанных выше. Некоторые из таких способов дополнительно содержат разращивание клеток в селективных условиях и скрининг с целью отбора клеточных линий, экспрессирующих в природных условиях и секретирующих по меньшей мере 100 мг/л/106 клеток/24 часа.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0021] На фиг. 1 показано выравнивание аминокислотных последовательностей m1H7 с четырьмя вариантами зрелой вариабельной области гуманизированной тяжелой цепи 1Н7. ВАС02037 (SEQ ID NO:42) представляет собой последовательность акцептора VH человека. Последовательности CDR, определенные по Кабату, подчеркнуты и выделены жирным шрифтом.
[0022] На фиг. 2 показано выравнивание аминокислотных последовательностей m1H7 с четырьмя вариантами зрелой вариабельной области гуманизированной легкой цепи 1Н7. AAY33358 (SEQ ID NO:43) представляет собой последовательность акцептора VL человека. Последовательности CDR, определенные по Кабату, подчеркнуты и выделены жирным шрифтом.
[0023] На фиг. 3 А-С приведен кинетический анализ Biacore связывания мышиного 1Н7 (а), химерного 1Н7 (В) и гуманизированного 1Н7 Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3, соответственно.
[0024] На фиг. 4 А-С приведены кинетические параметры связывания (ForteBio) для гуманизированного 1Н7 (Hu1H7VHv2-Hu1H7VLv4, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv2, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv4, Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1) и химерного 1H7.
[0025] На фиг. 5 показаны результаты воздействия пассивной иммунотерапии с 1Н7 на производительность памяти в тесте с водным лабиринтом Морриса.
[0026] На фиг. 6 показаны результаты воздействия пассивной иммунотерапии с 1Н7 на скорость и ошибки в тесте с круглой балкой.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0027] SEQ ID NO:1 представляет собой природную аминокислотную последовательность человеческого альфа-синуклеина дикого типа.
[0028] SEQ ID NO:2 представляет собой домен неамилоидного компонента (non-amyloid component (NAC)) альфа-синуклеина, по сообщению Jensen et al. (Biochem. J. 310 (Pt 1): 91-94, 1995; GenBank, номер доступа S56746).
[0029] SEQ ID NO:3 представляет собой домен неамилоидного компонента (NAC) альфа-синуклеина, по сообщению Uéda et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:11282-6, 1993).
[0030] SEQ ID NO:4 представляет собой вариабельную нуклеотидную последовательность тяжелой цепи мышиного антитела 1Н7 (m1H7).
[0031] SEQ ID NO:5 представляет собой вариабельную аминокислотную последовательность тяжелой цепи m1H7.
[0032] SEQ ID NO:6 представляет собой вариабельную нуклеотидную последовательность легкой цепи m1H7.
[0033] SEQ ID NO:7 представляет собой вариабельную аминокислотную последовательность легкой цепи m1H7.
[0034] SEQ ID NO:8 представляет собой вариабельную нуклеотидную последовательность зрелой тяжелой цепи m1H7.
[0035] SEQ ID NO:9 представляет собой вариабельную аминокислотную последовательность зрелой тяжелой цепи mlH7.
[0036] SEQ ID NO:10 представляет собой вариабельную нуклеотидную последовательность зрелой легкой цепи m1H7.
[0037] SEQ ID NO:11 представляет собой вариабельную аминокислотную последовательность зрелой легкой цепи m1H7.
[0038] SEQ ID NO:12 представляет собой CDR1 тяжелой цепи из m1H7 (определение по Kabat).
[0039] SEQ ID NO:13 представляет собой CDR2 тяжелой цепи из m1H7 (определение по Kabat).
[0040] SEQ ID NO:14 представляет собой CDR3 тяжелой цепи из m1H7 (определение по Kabat).
[0041] SEQ ID NO:15 представляет собой CDR1 легкой цепи из m1H7 (определение по Kabat)
[0042] SEQ ID NO:16 представляет собой CDR2 легкой цепи из m1H7 (определение по Kabat).
[0043] SEQ ID NO:17 представляет собой CDR3 легкой цепи из m1H7 (определение по Kabat).
[0044] SEQ ID NO:18 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VHv1.
[0045] SEQ ID NO:19 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VHv1.
[0046] SEQ ID NO:20 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VHv2.
[0047] SEQ ID NO:21 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VHv2.
[0048] SEQ ID NO:22 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VHv3.
[0049] SEQ ID NO:23 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VHv3.
[0050] SEQ ID NO:24 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VHv4.
[0051] SEQ ID NO:25 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VHv4.
[0052] SEQ ID NO:26 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VHv5.
[0053] SEQ ID NO:27 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VHv5.
[0054] SEQ ID NO:28 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VH.
[0055] SEQ ID NO:29 представляет собой аминокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VH.
[0056] SEQ ID NO:30 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VH.
[0057] SEQ ID NO:31 представляет собой аминокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VH.
[0058] SEQ ID NO:32 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VLv1.
[0059] SEQ ID NO:33 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VLv1.
[0060] SEQ ID NO:34 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VLv2.
[0061] SEQ ID NO:35 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VLv2.
[0062] SEQ ID NO:36 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность Hu1H7VLv3.
[0063] SEQ ID NO:37 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VLv3.
[0064] SEQ ID NO:39 представляет собой аминокислотную последовательность Hu1H7VLv4.
[0065] SEQ ID NO:40 представляет собой нуклеиновокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VL.
[0066] SEQ ID NO:41 представляет собой аминокислотную последовательность сигнального пептида Hu1H7VL.
[0067] SEQ ID NO:42 представляет собой аминокислотную последовательность акцептора человека ВАС02037 (GI-21670055), которая используется для каркасного участка тяжелой цепи.
[0068] SEQ ID NO:43 представляет собой аминокислотную последовательность акцептора человека AAY33358 (GI-63102905), которая используется для каркасного участка легкой цепи.
[0069] SEQ ID NO:44 представляет собой последовательность Hu1H7VH, не имеющую обратную мутацию или мутацию в CDR.
[0070] SEQ ID NO:45 представляет собой последовательность Hu1H7VL, не имеющую обратную мутацию или мутацию в CDR.
[0071] SEQ ID NO:46 представляет собой последовательность для альтернативных вариантов Hu1H7VH.
[0072] SEQ ID NO:47 представляет собой последовательность для альтернативных вариантов Hu1H7VL.
[0073] SEQ ID NO:48 представляет собой последовательность для альтернативных вариантов CDR3 Hu1H7VH.
[0074] SEQ ID NO:49 представляет собой константную область легкой цепи Hu1H7 (с аргинином) (общую для v1-v4).
[0075] SEQ ID NO:50 представляет собой константную область тяжелой цепи Hu1H7 (IgG1; общую для v1-v5).
[0076] SEQ ID NO:51 представляет собой константную область легкой цепи Hu1H7 (без аргинина) (общую для v1-v4).
[0077] SEQ ID NO:52 представляет собой константную область тяжелой цепи Hu1H7 (аллотип G1m3).
[0078] SEQ ID NO:53 представляет собой версию 3 легкой цепи Hu1H7 (вариабельная область+константная область с аргинином).
[0079] SEQ ID NO:54 представляет собой версию 3 легкой цепи Hu1H7 (вариабельная область+константная область без аргинина).
[0080] SEQ ID NO:54 представляет собой версию 3 тяжелой цепи Hu1H7 (вариабельная область+константная область).
[0081] SEQ ID NO:56 представляет собой версию 3 тяжелой цепи Hu1H7 (вариабельная область+константная область; аллотип G1m3).
[0082] SEQ ID NO:57 представляет собой константную область тяжелой цепи Hu1H7 (IgG2).
[0083] SEQ ID NO:58 представляет собой константную область тяжелой цепи Hu1H7 (аллотип G1m1).
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0084] Моноклональные антитела, как правило, предоставляются в выделенной форме. Это означает, что антитело является, как правило, по меньшей мере на 50% мас./мас. очищенным от белков и других макромолекул после его продукции или очистки, но не исключает возможность того, что моноклональное антитело объединяют с избытком фармацевтически приемлемого носителя(ей) или другого носителя, предназначенного для облегчения его применения. Иногда моноклональные антитела являются по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 90%, 95 или 99% мас./мас. очищенными от белков и других макромолекул после продукции или очистки.
[0085] Специфическое связывание моноклонального антитела с его целевым антигеном означает сродство, составляющее по меньшей мере 106, 107, 108, 109 или 1010 М-1. Детектируемое специфическое связывание больше по величине и отличаемо от неспецифического связывания, которое происходит по меньшей мере с одной неродственной мишенью. Специфическое связывание может возникать в результате образования связей между отдельными функциональными группами или определенного пространственного расположения (например, по типу "замок и ключ"), тогда как неспецифическое связывание является обычно результатом действия сил Ван-дер-Ваальса. Однако, специфическое связывание не обязательно означает, что моноклональное антитело связывается с одной и только одной мишенью.
[0086] Основная структурная единица антитела представляет собой тетрамер из субъединиц. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара имеет одну "легкую" (около 25 кДа) и одну "тяжелую" цепь (около 50-70 кДа). Амино-концевой участок каждой цепи включает вариабельную область, составляющую примерно от 100 до 110 или более аминокислот, в первую очередь, ответственную за распознавание антигена. Данная вариабельная область первоначально экспрессируется связанной с отщепляемым сигнальным пептидом. Вариабельную область без сигнального пептида иногда называют зрелой вариабельной областью. Так, например, зрелая вариабельная область легкой цепи означает вариабельную область легкой цепи без сигнального пептида легкой цепи. Карбокси-концевой участок каждой цепи определяет константную область, ответственную, главным образом, за эффекторную функцию.
[0087] Легкие цепи классифицируют как каппа или лямбда. Тяжелые цепи классифицируют как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, и они определяют изотип антитела, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области соединены областью "J", состоящей из около 12 или более аминокислот, с тяжелой цепью, также включающей область "D", состоящую из около 10 или более аминокислот. (Смотри для общего представления Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7, включена посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей).
[0088] Зрелые вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепей образуют сайт связывания антитела. Таким образом, интактное антитело имеет два сайта связывания. За исключением бифункциональных или биспецифических антител, два сайта связывания являются одинаковыми. Все цепи имеют одинаковую общую структуру из относительно консервативных каркасных участков (framework regions (FR)), соединенных тремя гипервариабельными областями, также называемыми определяющие комплементарность области или CDR (complementarity determining region). Последовательности CDR из двух цепей каждой пары выровнены каркасными участками, обладающими способностью связываться со специфическим эпитопом. От N-конца к С-концу, как легкие, так и тяжелые цепи содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Приписывание аминокислот к каждому домену происходит в соответствии с определениями Кабата для последовательностей белков, представляющих иммунологический интерес (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991)), или по Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989). Кабат также предложил широко используемое соглашение о нумерации (система нумерации по Кабату), в которой соответствующим остаткам в различных тяжелых цепях или в различных легких цепях присвоен одинаковый номер (например, Н83 означает положение 83 по системе нумерации Кабата в зрелой вариабельной области тяжелой цепи; аналогично положение L36 означает положение 36 система нумерации по Кабату в зрелой вариабельной области легкой цепи). Нумерация по Кабату используется на всем протяжении описания, со ссылкой на положения в вариабельной области антитела, если явно не указано иное.
[0089] Термин "антитело" включает интактные антитела и их фрагменты со связывающей способностью. Как правило, фрагменты конкурируют с интактным антителом, из которого они были получены, за специфическое связывание с мишенью, включая отдельные тяжелые цепи, легкие цепи Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, диатела, Dab, нанотела и Fv. Фрагменты могут быть получены способами получения рекомбинантной ДНК или ферментативным или химическим разделением интактных иммуноглобулинов. Термин "антитело" также включает в себя биспецифическое антитело и/или гуманизированное антитело. Биспецифическое или бифункциональное антитело представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две различных пары тяжелых/легких цепей и два различных сайта связывания (смотри, например, Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-53 (1992)). В некоторых биспецифических антителах две различные пары тяжелых/легких цепей включают пару тяжелая цепь/легкая цепь гуманизированного 1Н7 и пару тяжелая цепь/легкая цепь, специфичную для эпитопа на альфа-синуклеине, отличного от того, который связан с 1Н7.
[0090] В некоторых биспецифических антителах одна пара тяжелая цепь/легкая цепь представляет собой гуманизированное антитело 1Н7, как дополнительно раскрыто ниже, и пара тяжелая цепь/легкая цепь происходит от антитела, которое связывается с рецептором, экспрессируемым на гематоэнцефалическом барьере, таким как инсулиновый рецептор, рецептор инсулиноподобного фактора роста (ИФР), рецептор лептина, или рецептор липопротеинов, или рецептор трансферрина (Friden et al., PNAS 88:4771-4775, 1991; Friden et al., Science 259:373-377, 1993). Такое биспецифическое антитело может быть перенесено через гематоэнцефалический барьер посредством рецептор-опосредованного трансцитоза. Поглощение мозгом биспецифического антитела можно дополнительно увеличить за счет конструирования биспецифического антитела с целью уменьшения его сродства к рецептору гематоэнцефалического барьера. Снижение сродства к рецептору приводит к более широкому распределению в мозге (см, например, Atwal. et al. Sci. Trans. Med. 3, 84ra43, 2011; Yu et al. Sci. Trans. Med. 3, 84ra44, 2011).
[0091] Примерами биспецифических антител могут также служить (1) антитело с двойными вариабельными доменами (DVD-Ig), где каждая легкая цепь и тяжелая цепь содержит два вариабельных домена в тандеме, соединенные коротким пептидным линкером (Wu et al., Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-Ig™) Molecule, B: Antibody Engineering, Springer Berlin Heidelberg (2010)); (2) Tandab, который является продуктом слияния двух одноцепочечных диантител (diabodies), давая четырехвалентное биспецифическое антитело, которое имеет два сайта связывания для каждого из целевых антигенов; (3) флекситело (flexibody), которое представляет собой сочетание scFv-фрагментов с диантителом, давая поливалентную молекулу; (4) так называемая молекула "dock and lock", получаемая на основе домена димеризации/докинга ("dimerization and docking domain") в протеинкиназе А, которая при применении с Fab-фрагментами может дать трехвалентный биспецифический связывающий белок, состоящий из двух одинаковых Fab-фрагментов, связанных с отличающимся Fab-фрагментом; (5) так называемая молекула Scorpion, содержащая, например, два scFv-фрагмента, слитые с обоими концами Fc-области человека. Примеры платформ, подходящих для получения биспецифических антител, включают, но без ограничения, BiTE (Micromet), DART (MacroGenics), Fcab и Mab2 (F-star), IgG1 с генно-инженерным Fc (Xencor) или DuoBody (на основе обмена Fab-плеча, Genmab).
[0092] Термин "эпитоп" относится к участку на антигене, с которым связывается антитело. Эпитоп может быть образован из смежных аминокислот или несмежных аминокислот, которые соприкасаются между собой при третичной укладке одного или нескольких белков. Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, обычно устойчивы при воздействии денатурирующих растворителей, в то время как эпитопы, образованные при третичной укладке белка, обычно разрушаются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп обычно включает по меньшей мере 3 и чаще по меньшей мере 5 или от 8 до 10 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения пространственной конформации эпитопов включают, например, рентгеновскую кристаллографию и двумерный ядерный магнитный резонанс. Смотри, например, Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol.66, Glenn E. Morris, Ed. (1996).
[0093] Антитела, которые распознают одинаковые или перекрывающиеся эпитопы, могут быть идентифицированы с помощью обычного иммунного анализа, показывающего способность одного антитела блокировать связывание другого антитела с антигеном-мишенью. Эпитоп антитела может быть также определен с помощью рентгеновской кристаллографии антитела, связанного со своим антигеном для идентификации контактных остатков. Альтернативно, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если все аминокислотные мутации в антигене, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, снижают или устраняют связывание другого. Два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые уменьшают или устраняют связывание одного антитела, снижают или устраняют связывание другого.
[0094] Конкуренцию между антителами определяют с помощью анализа, в котором испытуемое антитело ингибирует специфическое связывание эталонного антитела с общим антигеном (смотри, например, Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990). Испытуемое антитело конкурирует с эталонным антителом, если избыток испытуемого антитела (например, по меньшей мере 2-кратный, 5-кратный, 10-кратный, 20-кратный или 100-кратный) ингибирует связывание эталонного антитела по меньшей мере на 50%, например, на 75%, 90% или 99%, как измерено в анализе конкурентного связывания. Антитела, идентифицированные конкурентным анализом (конкурирующие антитела), включают антитела, связывающиеся с тем же эпитопом в качестве эталонного антитела, и антитела, связывающиеся с соседним эпитопом, расположенным достаточно проксимально по отношению к эпитопу, связанному с эталонным антителом, для того чтобы возникло пространственное затруднение.
[0095] Термин "пациент" включает человека или другое млекопитающее, которые получают либо профилактическое, либо терапевтическое лечение.
[0096] В целях классификации аминокислотных замещений как консервативных или неконсервативных аминокислоты группируются следующим образом: Группа I (гидрофобные боковые цепи): met, ala, val, leu, ile; Группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи): cys, ser, thr; Группа III (кислые боковые цепи): asp, glu; Группа IV (основные боковые цепи): asn, gln, his, lys, arg; Группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепи): gly, pro; и Группа VI (ароматические боковые цепи): trp, tyr, phe. Консервативные замены включают замены между аминокислотами в пределах одного и того же класса. Неконсервативные замещения представляют собой замену члена одного из данных классов на член другого.
[0097] Идентичность последовательностей в процентах определяют с последовательностями антител, максимально выровненными по соглашению о нумерации Кабата. После выравнивания, если область антитела субъекта (например, вся зрелая вариабельная область тяжелой или легкой цепи) сравнивают с такой же областью эталонного антитела, процент идентичности последовательностей между областью антитела субъекта и областью эталонного антитела представляет собой число положений, занимаемых одной и той же аминокислотой как в области антитела субъекта, так и в области эталонного антитела, деленное на общее число выровненных положений двух областей, с неучитываемыми пробелами, умноженное на 100, чтобы преобразовать в проценты.
[0098] Композиции или способы, "содержащие" один или более перечисленных элементов, могут включать другие элементы, не перечисленные специально. Например, композиция, которая содержит антитело, может содержать антитело отдельно или в сочетании с другими ингредиентами.
[0099] Обозначение диапазона значений включает все целые числа в диапазоне или при определении диапазона и все поддиапазоны, определенные целыми числами в диапазоне.
[0100] Если из контекста не следует иное, термин "около" охватывает значения в пределах стандартной погрешности измерения (standard margin of error of measurement (SEM)) заявленной величины.
[0101] Индивид находится в группе повышенного риска заболевания, если данный субъект имеет по меньшей мере один известный фактор риска (например, генетический, биохимический, семейный анамнез, ситуационное воздействие), помещая индивиды с таким фактора риска в группу со статистически значимым более высоким риском развития болезни, чем индивиды без данного фактора риска.
[0102] Термин "симптом" относится к субъективным признакам болезни, таким как измененная походка, в восприятии пациента. "Признак" относится к объективным свидетельствам болезни, наблюдаемым врачом.
[0103] Статистическая значимость означает 0.05≤р.
[0104] "Когнитивная функция" относится к психическим процессам, таким как некоторые или все из внимания, памяти, языковых проблем, решения проблем и проявления интереса к своему окружению и самообслуживания.
[0105] "Повышенные когнитивные функции" или "улучшенные когнитивные функции" относится к улучшению по сравнению с исходными данными, например, диагностикой или началом лечения. "Снижение когнитивной функции" относится к снижению функции по отношению к такой базовой линии.
[0106] В модельных системах животных, таких как крысы или мыши, когнитивные функции могут быть измерены способами, включая применение лабиринта, в котором субъекты используют пространственную информацию (например, водный лабиринт Морриса (Morris), круговой лабиринт Барнса (Barnes), лабиринт с приподнятым радиальным рукавом, Т-лабиринт и другие), ситуацию создания тревожности, ситуацию активного избегания, тест освещенное "открытое поле", измерение активности в темноте, приподнятый крестообразный лабиринт, двухкамерный исследовательский тест или тест принудительного плавания.
[0107] У человека когнитивные функции могут быть измерены с помощью одного или более из нескольких стандартных тестов. Примеры теста или испытания для определения когнитивной функции были описаны (Ruoppila, 1. and Suutama, Т. Scand. J. Soc. Med. Suppl. 53, 44-65, 1997) и включают стандартизированные психометрические тесты (например, шкала памяти Векслера, шкала Векслера для оценки интеллекта у взрослых, стандартные последовательные матрицы Рэйвена, тест оценки умственной способности взрослых Шайе-Терстона), нейропсихологические тесты (например, тест Лурия-Небраска), метакогнитивные самооценки (например, анкета оценки памяти), тесты зрительно-пространственных фильтраций (фигуры Поппелрейтера, распознавание часов, рисование и вычеркивание сот), тесты когнитивной фильтрации (например, мини-тесты ментального статуса Фольштейна) и тесты времени реагирования. Другие стандартные тесты для оценки когнитивной деятельности включают оценочную шкалу нарушений при болезни Альцгеймера - когнитивную подшкалу (Alzheimer's Disease Assessment Scale-cognitive subscale (ADAS-cog)); шкалу общего впечатления врача о происходящих изменениях, включая информацию лица, осуществляющего уход за больными (clinical global impression of change scale (шкала CIBIC-plus)); совместное исследование болезни Альцгеймера - элементарных действий по самообслуживанию (Alzheimer's Disease Cooperative Study Activities of Daily Living Scale (ADCS-ADL)); мини-тест исследования психического состояния (Mini Mental State Exam (MMSE)); критерии по психоневрологическому опроснику (Neuropsychiatric Inventory (NPI)); клиническую рейтинговую шкалу деменции (Clinical Dementia Rating Scale (CDR)); Кембриджскую нейропсихологическую автоматизированную батарею тестов (Cambridge Neuropsychological Test Automated Battery (CANTAB)) или шкалу клинической гериатрической оценки Сандоз (Sandoz Clinical Assessment - Geriatric (SCAG)), цветовой тест Струпа (Stroop Test), тест следования по маршруту (Trail Making), цифровой ряд Векслера (Wechsler Digit Span) и компьютеризированный когнитивный тест CogState. Кроме того, когнитивные функции могут быть измерены с использованием способов визуализации, таких как позитронно-эмиссионая томография (Positron Emission Tomography (PET)), функциональная магнитно-резонансная томография (MPT), однофотонная эмиссионная компьютерная томография (Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT)) или любой другой способ визуализации, который позволяет измерять функцию мозга.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
I. ОБЩЕЕ
[0108] Настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам 1Н7 (антителам Hu1H7). Данные антитела могут применяться для лечения и диагностики болезни с тельцами Леви.
II. МОЛЕКУЛЫ-МИШЕНИ
[0109] Природный человеческий альфа-синуклеин дикого типа представляет собой пептид из 140 аминокислот, имеющий следующую аминокислотную последовательность:
MDVFMKGLSK AKEGVVAAAE KTKQGVAEAA GKTKEGVLYV GSKTKEGVVH
GVATVAEKTK EQVTNVGGAV VTGVTAVAQK TVEGAGSIAA ATGFVKKDQL
GKNEEGAPQE GILEDMPVDP DNEAYEMPSE EGYQDYEPEA (SEQ ID NO:1)
(Uéda et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:11282-6, 1993; GenBank, номер доступа: P37840). Белок имеет три общепризнанных домена, домен с повторами КТКЕ, охватывающий аминокислоты от 1 до 61, домен NAC (неамилоидный компонент), включающий аминокислоты от около 60 до около 95, и С-концевой кислотный домен, включающий аминокислоты от около 98 до 140. Jensen et al. было показано, что NAC имеет следующую аминокислотную последовательность: EQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGSIAAATGFV (SEQ ID NO:2) (Jensen et al., Biochem. J. 310 (Pt 1): 91-94, 1995; GenBank, номер доступа S56746). Uéda et al. было показано, что NAC имеет следующую аминокислотную последовательность: KEQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGS (SEQ ID NO:3) (Uéda et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:11282-6, 1993).
[0110] Если из контекста не следует иное, ссылка на альфа-синуклеин или его фрагменты включает природные человеческие аминокислотные последовательности дикого типа, указанные выше, и их человеческие аллельные варианты, в частности те, которые связаны с болезнью с тельцами Леви (например, Е46К, А30Р и А53Т, где первая буква указывает на аминокислоту в SEQ ID NO:1, число соответствует положению кодона в SEQ ID NO:1 и вторая буква обозначает аминокислоту в аллельном варианте). Такие варианты могут необязательно присутствовать по отдельности или в любой комбинации. Индуцированные мутации E83Q, A90V, А76Т, которые усиливают агрегацию альфа-синуклеина, также могут присутствовать по отдельности или в комбинации друг с другом и/или аллельными вариантами Е46К А30Р и А53Т человека.
III. БОЛЕЗНИ С ТЕЛЬЦАМИ ЛЕВИ
[0111] Болезни с тельцами Леви (LBD) характеризуются дегенерацией дофаминергической системы, моторными изменениями, когнитивными нарушениями и образованием телец Леви (LB). (McKeith et al., Neurology (1996) 47:1113-24). Тельца Леви представляют собой сферические белковые отложения, найденные в нервных клетках. Их присутствие в мозге нарушает нормальную функцию мозга, прерывая действие химических посредников, включая ацетилхолин и дофамин. Болезни с тельцами Леви включают болезнь Паркинсона (включая идиопатическую болезнь Паркинсона), болезнь диффузных телец Леви (Lewy Body Disease (DLBD)), также известную как деменция с тельцами Леви (Dementia with Lewy Bodies (DLB)), вариант болезни Альцгеймера с образованием телец Леви (Lewy body variant (LBV)), объединенные болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона и множественную системную атрофию (multiple system atrophy (MSA); например, оливопонтоцеребральную атрофию, стриатонигральную дегенерацию и синдром Шая - Дрейджера (Shy-Drager). DLBD разделяет симптомы как болезни Альцгеймера, так и болезни Паркинсона. DLBD отличается от болезни Паркинсона, в основном, местонахождением телец Леви. При DLBD тельца Леви образуются, главным образом, в коре головного мозга. При болезни Паркинсона они образуются, в основном, в черной субстанции. Другие болезни с тельцами Леви включают чисто вегетативную недостаточность, дисфагию с тельцами Леви, случайную LBD и унаследованную LBD (например, мутации гена альфа-синуклеина, PARK3 и PARK4).
IV. АНТИТЕЛА ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ
A. Специфичность связывания и функциональные свойства
[0112] Гуманизированные антитела по изобретению специфически связываются с человеческим альфа-синуклеином. Сродство некоторых гуманизированных антител (т.е., Ка) может превосходить, например, в пять раз или в два раза сродство мышиных антител (m1H7). Некоторые гуманизированные антитела имеют такое же сродство, что и m1H7, с учетом SEM. Некоторые гуманизированные антитела имеют сродство больше, чем таковое у мышиного 1Н7. Предпочтительные гуманизированные антитела связываются с тем же эпитопом и/или конкурируют с m1H7 за связывание с человеческим альфа-синуклеином.
B. Гуманизированные антитела
[0113] Гуманизированное антитело представляет собой антитело, полученное способом генной инженерии, в котором последовательности CDR из нечеловеческого "донорного" антитела введены в "акцепторные" последовательности человеческих антител (см, например, Queen et al., US 5,530,101 и 5,585,089; Winter et al., US 5,225,539; Carter, US 6,407,213; Adair, US 5,859,205 и 6,881,557; и Foote, US 6,881,557). Последовательности акцепторного антитела могут представлять собой, например, последовательность зрелой вариабельной области человеческого антитела, композит таких последовательностей, консенсусную последовательность последовательностей вариабельных областей человеческого антитела (например, консенсусные последовательности вариабельных областей легких и тяжелых цепей по Кабату, 1991, выше) или последовательность вариабельной области зародышевой линии.
[0114] В качестве примера акцепторной последовательности для тяжелой цепи служит человеческая зрелая вариабельная область тяжелой цепи с NCBI кодом доступа ВАС02037 (GI: 21670055). Данная акцепторная последовательность включает в себя две последовательности CDR, имеющие такую же каноническую форму, что и тяжелая цепь мышиного 1Н7, и имеет 65,8% идентичности последовательности в каркасном участке вариабельной области тяжелой цепи. Если используется другая акцепторная последовательность, такой акцептор может представлять собой, например, другую зрелую вариабельную область тяжелой цепи, полученную из зародышевой линии VH1-18, или последовательность зрелой вариабельной области тяжелой цепи, включающую одну из данных последовательностей зародышевой линии.
[0115] Примером акцепторной последовательности для легкой цепи является зрелая вариабельная область легкой цепи с NCBI кодом доступа AAY33358 (GI: 63102905). Данная акцепторная последовательность включает в себя две последовательности CDR, имеющие такую же каноническую форму, что и легкая цепь мышиного 1Н7, и имеет 65,4% идентичности последовательности в каркасном участке вариабельной области легкой цепи. Если используется другой акцептор, такой акцептор предпочтительно представляет собой другую последовательность зрелой легкой цепи, полученной из зародышевой линии А30, или последовательность зрелой вариабельной области легкой цепи, включающей одну из данных последовательностей зародышевой линии.
[0116] Гуманизированное антитело по изобретению представляет собой антитело, имеющее по три последовательности CDR в легкой цепи и в тяжелой цепи, как определено Кабатом, полностью или по существу из донорного мышиного антитела 1Н7, и последовательности каркасного участка зрелой вариабельной области и константные области, если они присутствуют, полностью или по существу из последовательностей тяжелой цепи человеческого антитела. Точно так же гуманизированная тяжелая цепь представляет собой тяжелую цепь, имеющую три последовательности CDR из тяжелой цепи, как определено Кабатом, полностью или по существу из тяжелой цепи мышиного антитела 1Н7, и последовательность зрелой вариабельной области тяжелой цепи и последовательность константной области тяжелой цепи, если они присутствуют, полностью или по существу из последовательности тяжелой цепи человеческого антитела. Точно так же гуманизированная легкая цепь представляет собой легкую цепь, имеющую три последовательности CDR из легкой цепи, как определено Кабатом, полностью или по существу из легкой цепи антитела m1H7, и последовательность зрелой вариабельной области легкой цепи и последовательность константной области легкой цепи, если они присутствуют, полностью или по существу из последовательности легкой цепи человеческого антитела. CDR происходит по существу из m1H7, если по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% остатков идентичны соответствующим остаткам в соответствующей CDR из m1H7. Последовательности каркасного участка зрелой вариабельной области цепи антитела или последовательность константной области цепи антитела происходят по существу из человеческой последовательности каркасного участка зрелой вариабельной области или из человеческой последовательности константной области, соответственно, когда по меньшей мере 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% соответствующих остатков, определенных по Kabat, являются идентичными.
[0117] Некоторые аминокислотные остатки из аминокислотных остатков каркасного участка человеческой зрелой вариабельной области могут быть выбраны для замещения, в силу их возможного влияния на конформацию CDR и/или на связывание с антигеном, опосредования ими взаимодействия между тяжелой и легкой цепями, их взаимодействия с константной областью, их функционирования в качестве сайтов для желательной или нежелательной посттрансляционной модификации, их необычности относительно положения в последовательности человеческой вариабельной области, что может обуславливать их потенциальную иммуногенность, а также других причин. Следующие 11 положений каркасного участка вариабельной области были рассмотрены в качестве кандидатов на замены по одной или более из данных причин, как дополнительно указано в примерах (L46F, Y49C, F83A, V11L, T28S, R38K, M48I, V67A, M69L, Т71А, Y91F).
[0118] Здесь, как и везде, упомянутый первым остаток представляет собой остаток гуманизированного антитела, образуемого введением последовательностей CDR по Кабату в каркасный участок акцептора человека, и упомянутый вторым остаток представляет собой остаток, рассматриваемый в качестве замены такого остатка. Таким образом, внутри каркасных участков вариабельной области упомянутый первым остаток является человеческим и в последовательностях CDR упомянутый первым остаток является мышиным (например, C97S).
[0119] Аминокислотные замены могут быть произведены в последовательностях CDR. Один возможный вариант заключается в замене определенных остатков в последовательностях CDR мышиного антитела 1Н7 соответствующими остатками из последовательностей CDR человека, как правило, из последовательностей CDR человеческих акцепторных последовательностей, используемых в проектировании примеров гуманизированных антител. В некоторых антителах только часть последовательностей CDR, а именно подмножество аминокислотных остатков последовательностей CDR, необходимых для связывания, называемых SDR (specificity determining regions), необходима, чтобы сохранить связывание в гуманизированном антителе. Аминокислотные остатки CDR, не контактирующие с антигеном и не относящиеся к аминокислотным остаткам SDR, могут быть определены на основе предыдущих исследований (например, остатки Н60-Н65 в CDR Н2 часто не требуются), из последовательностей CDR по Кабату, лежащих вне гипервариабельных петель по Chothia (Chothia, J. Mol. Biol 196:901, 1987), молекулярным моделированием и/или эмпирически, или как описано в публикации Gonzales et al., Mol. Immunol. 41:863 (2004). В таких гуманизированных антителах, в положениях, в которых один или более донорных аминокислотных остатков CDR отсутствует или в которых вся донорная последовательность CDR опущена, аминокислотный остаток, занимающий определенное положение, может быть аминокислотным остатком, занимающим соответствующее положение (по системе нумерации Кабата) в последовательности акцепторного антитела. Число таких замен акцепторных на донорные аминокислотные остатки для включения в последовательности CDR отражает баланс некоторых конкурирующих факторов. Такие замены потенциально выгодны с целью уменьшения количества мышиных аминокислотных остатков в гуманизированном антителе и, следовательно, уменьшения потенциальной иммуногенности. Однако, замены могут также вызвать изменения сродства, и значительное снижение сродства предпочтительно избегать. Положения для замещения в последовательностях CDR и аминокислоты для замены также могут быть выбраны эмпирически.
[0120] Одной из причин для выполнения замены в пределах последовательности CDR является то, что мышиный остаток представляет собой сайт посттрансляционной модификации, который может мешать экспрессии или сборке антитела. Здесь, положение Н97 в CDRH3, которое занимает С в мышином 1Н7, было идентифицировано в качестве сайта для замены.
[0121] 11 обратных мутаций каркасного участка вариабельной области и 1 замещение в последовательности CDR, упомянутые выше, могут быть включены в гуманизированные антитела 1Н7 во многих перестановках. Вариабельная область тяжелой цепи таких антител может быть представлена в виде последовательности, содержащей QVQLVQSGAE-X1-KKPGASVKVSCKASGY-X2-FTSYYIHWV-X3-QAPGQGLEW-X4-GWIYPGSGNTKYSEKFKGR-X5-T-X6-T-X7-DTSTSTAYMELRSLRSDDTAVY-X8-CARDG-X9-YGFAYWGQGTLVTVSS, где -Х1- представляет собой V или L; -Х2- представляет собой S или Т; -Х3- представляет собой R или К; -Х4- представляет собой М или I; -Х5- представляет собой V или А; -Х6- представляет собой М или L; -Х7- представляет собой Т или A; -X8- представляет собой Y или F; -Х9- представляет собой С, М, S или Т (SEQ ID NO:46). В некоторых вариабельных областях тяжелой цепи -Х9- представляет собой С. Некоторые вариабельные области легкой цепи могут быть представлены в виде последовательности, содержащей DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPK-Z1-LI-Z2-AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED-Z3-ATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIK, где -Z1- представляет собой L или F; -Z2- представляет собой Y или С; -Z3- представляет собой F или A (SEQ ID NO:47). В некоторых антителах вариабельная область тяжелой цепи содержит последовательность SEQ ID NO:46 и вариабельная область легкой цепи содержит последовательность SEQ ID NO:47. Например, остатки X1 и Х3 из последовательности SEQ ID NO:48 представляют собой V и R, соответственно. Например, остатки Х5 и Х7 из последовательности SEQ ID NO:46 представляют собой А и остаток Z1 из последовательности SEQ ID NO:47 представляет собой F. Например, остатки -Х4, Х6 и X8 из последовательности SEQ ID NO:46 представляют собой М, М и Y, соответственно, и остатки Z2 и Z3 из последовательности SEQ ID NO:47 представляют собой С и F, соответственно. Например, остатки Х2 и Х9 из последовательности SEQ ID NO:48 представляют собой Т и С, соответственно.
[0122] Некоторые антитела содержат две замены в тяжелой цепи и две замены в легкой цепи. Например, положение Н67 занимает А, положение Н71 занимает А, положение L46 занимает F и положение L49 занимает С. В некоторых антителах зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:23. В некоторых антителах зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:37. Например, в H3L3 (Hu1H7VHv3 (SEQ ID NO:23)-Hu1H7VLv3 (SEQ ID NO:37)), зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:23, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет последовательность аминокислот, определенную последовательностью SEQ ID NO:37.
[0123] Настоящее изобретение относится к вариантам гуманизированного антитела H3L3, в которых зрелая вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи показывает по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности относительно SEQ ID NO:23 и зрелая вариабельная область гуманизированной легкой цепи показывает по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности относительно SEQ ID NO:37. Некоторые такие гуманизированные антитела включают в себя три области CDR из тяжелой цепи и три области CDR из легкой цепи, полностью или по существу идентичные CDR-областям из H3L3, которые являются такими же, как и у мышиного донорного антитела. CDR-области могут быть определены любым традиционным определением (например, по Хотия (Chothia)), но предпочтительно, как определено Кабатом.
[0124] Некоторые варианты гуманизированного антитела H3L3 сохраняют некоторые или все из обратных мутаций в H3L3. Другими словами, по меньшей мере 1, 2, 3 или предпочтительно все 4 из следующего присутствуют: положение Н67 занимает А и положение Н71 занимает А, положение L46 занимает F и положение L49 занимает С.
[0125] В дополнение к сохранению по меньшей мере 1, 2, 3 или предпочтительно всех 4 из обратных мутаций в H3L3, гуманизированные антитела 1Н7 могут также содержать дополнительные обратные мутации в каркасных участках вариабельной области. Примеры таких обратных мутаций включают положение Н11, занимаемое L, Н28, занимаемое S, Н38, занимаемое К, Н48, занимаемое I, Н69, занимаемое L, Н91, занимаемое F, и/или L83, занимаемое А. При выборе обратных мутаций для терапевтического или диагностического продукта следует учитывать, до какой степени они вообще не улучшают сродство, и до какой степени включение большего количества мышиных аминокислотных остатков может привести к повышенному риску иммуногенности. Например, H3L1 содержит зрелую вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO:23 и легкую цепь с последовательностью SEQ ID NO:33. Например, H4L1 содержит зрелую вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO:25 и легкую цепь с последовательностью SEQ ID NO:33.
[0126] Еще одна возможность для изменения состоит в применении различных человеческих акцепторных последовательностей, как обсуждалось выше. Замены в CDR-областях возможны, как описано выше, например, в положении Н97, но перед выбором таких замен для терапевтического или диагностического продукта следует учитывать потенциальное воздействие на сродство и экспрессию антитела.
[0127] Если положение Н97 в мышиной последовательности CDRH3 представляет собой иное, чем цистеин, его предпочтительно занимает М, S или Т. Некоторые антитела содержат гуманизированную тяжелую цепь, содержащую последовательность CDR1 по Кабату из SEQ ID NO:12: SYYIH; последовательность CDR2 по Кабату из SEQ ID NO:13: WIYPGSGNTKYSEKFKG; последовательность CDR3 по Кабату из SEQ ID NO:48: DG-X9-YGFAY, в которой -Х9- представляет собой С, М, S или Т, более предпочтительно С. Некоторые антитела содержат гуманизированную легкую цепь, содержащую последовательность CDR1 по Кабату определяемую SEQ ID NO:15: KASQSVDYDGDSYMN; последовательность CDR2 по Кабату из SEQ ID NO:16: AASNLES; последовательность CDR3 по Кабату из SEQ ID NO:17: QQSNEDPFT. Некоторые антитела содержат гуманизированную тяжелую цепь, содержащую три последовательности CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой Кабата последовательностями SEQ ID NO:12, 13 и 48 и гуманизированного легкую цепь, содержащую три последовательности CDR, положение и длина которых определены в соответствии со схемой Кабат последовательностями SEQ ID NO:15-17. В некоторых из таких антител гуманизированная тяжелая цепь содержит три последовательности CDR по Кабату определяемые последовательностями SEQ ID NO:12-14, и гуманизированная легкая цепь содержит три последовательности CDR по Кабату определяемые последовательностями SEQ с ID NO:15-17.
[0128] Настоящее изобретение дополнительно относится к гуманизированным антителам 1Н7, в которых зрелая вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи показывает по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности или на 100% идентична последовательностям SEQ ID NO. 19, 21, 23, 25 и 27, и зрелая вариабельная область гуманизированной легкой цепи показывает по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности или на 100% идентична любой одной из последовательностей SEQ ID NO. 33, 35, 37 и 39.
[0129] Различные перестановки 11-ти обратных мутаций каркасного участка вариабельной области и 1 мутация в CDR, описанные выше, могут быть включены в гуманизированные антитела 1Н7. В некоторых из таких антител положение L46 занимает L или F (предпочтительно F), и/или положение L49 занимает Y или С (предпочтительно С), и/или положение L83 занимает F или А, и/или положение Н11 занимает V или L, и/или положение Н28 занимает Т или S, и/или положение Н38 занимает R или К, и/или положение Н48 занимает М или I, и/или положение Н67 занимает V или А (предпочтительно А), и/или положение Н69 занимает М или L, и/или положение Н71 занимает Т или А (предпочтительно А), и/или положение Н91 занимает Y или F, и/или положение Н28 занимает S или Т, и/или положение Н97 занимает С или М или S или Т (предпочтительно С).
[0130] В некоторых из таких антител сохраняются некоторые или все из обратных мутаций в Hu1H7VLv1-v4 и Hu1H7VHv1-v5. Предпочтительно, сохраняются обратные мутации в положениях L46, Н67 и Н71. Другими словами, положение L46 занимает F, положение Н67 занимает А и положение Н71 занимает А. Более предпочтительно, сохраняются обратные мутации в положениях L46, L49, Н67 и Н71. Другими словами, положение L46 занимает F, положение L49 занимает С, положение Н67 занимает А и положение Н71 занимает А. В некоторых антителах некоторые или все из положений Н11, Н28, Н38, Н48, Н67, Н69, Н71 и/или Н91 в тяжелых цепях заняты L, S, К, I, A, L и F, соответственно. Точно так же в некоторых антителах некоторые или все из положений L46, L49 и/или L83 в легких цепях занимают F, С и А, соответственно. В некоторых антителах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или все десять положений Н11, Н28, Н38, Н48, Н67, Н69, Н71, Н91, L46, L49 и L83 занимает/занимают L, S, К, I, A, L, A, F, F, С и А, соответственно. В некоторых антителах 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 положений изменены в каркасном участке зрелой вариабельной области тяжелой цепи по отношению к последовательности SEQ ID NO:44, и 0, 1, 2 или 3 положения изменены в каркасном участке зрелой вариабельной области легкой цепи по отношению к последовательности SEQ ID NO:45. В некоторых из таких антител положение Н97 занимает С. Предпочтительно, гуманизированное антитело имеет величину KD для альфа-синуклеина, превышающую от около 0,5 раз до 2 раз величину KD для мышиного или химерного антитела 1Н7.
[0131] В некоторых антителах положение L46 занимает F, положение Н67 занимает А, положение Н71 занимает А, положение Н11 занимает V и положение Н38 занимает R. В некоторых из таких антител положение L49 занимает Y. Более предпочтительно, в некоторых из таких антител положение L49 занимает С. В некоторых из таких антител положение L83 занимает F. В некоторых из таких антител положение L83 занимает А. В некоторых из таких антител положение Н97 занимает С. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает М, положение Н69 занимает М и положение Н91 занимает Y. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает М, положение Н69 занимает М и положение Н91 занимает F. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает М, положение Н69 занимает L и положение Н91 занимает Y. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает М, положение Н69 занимает L и положение Н91 занимает F. В некоторых таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает I, положение Н69 занимает М и положение Н91 занимает Y. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает I, положение Н69 занимает М и положение Н91 занимает F. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает I, положение Н69 занимает L и положение Н91 занимает Y. В некоторых из таких антител положение Н28 занимает Т или S, положение Н48 занимает I, положение Н69 занимает L и положение Н91 занимает F. В некоторых из таких антител положение H11 занимает L, и/или положение Н38 занимает К, и/или положение Н97 занимает S.
[0132] В любом из вышеупомянутых антител могут быть произведены другие аминокислотные замены в каркасном участке зрелой вариабельной области, например, в аминокислотных остатках, не вступающих в контакт с аминокислотными остатками CDR. Часто замены, произведенные в вариантах гуманизированных последовательностей, являются консервативными по отношению к замененным аминокислотам. В некоторых антителах замены по отношению к Hu1H7VLv1-v4 и Hu1H7VHv1-v5 (консервативные или неконсервативные) не оказывают существенного влияния на сродство или потенцию полученного антитела по отношению к Hu1H7VLv1-v4 и Hu1H7VHv1-v5, то есть на его способность связывать человеческий альфа-синуклеин.
[0133] Варианты, как правило, отличаются от последовательностей зрелых вариабельных областей тяжелой и легкой цепей из Hu1H7VLv1-v4 и Hu1H7VHv1-v5 небольшим числом (например, как правило, не более 1, 2, 3, 5 или 10 в каркасном участке зрелой вариабельной области либо легкой цепи, либо тяжелой цепи, или обеих типов цепей) замен, делеций или вставок.
С. Отбор константной области
[0134] Вариабельные области тяжелой и легкой цепей гуманизированных антител могут быть связаны, по меньшей мере, с частью константной области человека. Выбор константной области зависит, в частности, от того, желательны ли антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность, антителозависимый клеточный фагоцитоз и/или комплементзависимая цитотоксичность. Например, человеческие изотипы IgG1 и IgG3 обладают комплементзависимой цитотоксичностью, а человеческие изотипы IgG2 и IgG4 не обладают ею. Человеческие IgG1 и IgG3 также вызывают более сильные клеточно-опосредованные эффекторные функции, чем человеческие IgG2 и IgG4. Константные области легкой цепи могут быть лямбда или каппа. Пример константной области человеческой легкой цепи каппа имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:49. N-концевой аргинин из последовательности SEQ ID NO:49 может быть опущен, и в этом случае константная область легкой цепи каппа имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:51. Служащая примером константная область тяжелой цепи человеческого IgG1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:50. Служащая примером константная область тяжелой цепи человеческого IgG2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57. Антитела могут быть экспрессированы в виде тетрамеров, содержащих две легкие и две тяжелые цепи, в виде отдельных тяжелых цепей, легких цепей, в виде Fab, Fab', F(ab')2 и Fv или в виде одноцепочечных антител, в которых зрелые вариабельные домены тяжелой и легкой цепи соединены через спейсер.
[0135] Человеческие константные области проявляют аллотипическую вариабельность и изоаллотипическую вариабельность для различных индивидов, то есть, константные области могут отличаться у разных индивидов по одному или нескольким полиморфным положениям. Изоаллотипы отличаются от аллотипов в том, что сыворотки, распознающие изоаллотип, связываются с неполиморфной областью одного или более других изотипов. Так, например, константные области тяжелой цепи могут быть аллотипами IgG1 G1m1 или IgG1 G1m3 и имеют аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52 или SEQ ID NO:55. Еще одна константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52 или SEQ ID NO:55, за исключением того, что в ней отсутствует С-концевой лизин.
[0136] Один или несколько аминокислотных остатков на амино- или карбокси-конце легкой и/или тяжелой цепи, такой как С-концевой лизин тяжелой цепи, может отсутствовать или быть дериватизированным в части молекул или во всех молекулах. Замены могут быть произведены в константных областях, чтобы уменьшить или увеличить эффекторную функцию, такую как комплемент-опосредованная цитотоксичность или ADCC (смотри, например, Winter et al., патент США №5624821; Tso et al., патент США №5834597; и Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006), или продлить время полужизни в организме человека (смотри, например, Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004). Примеры замен включают Gln в положении 250 и/или Leu в положении 428 (нумерация EU используется в данном параграфе для константной области) для увеличения времени полужизни антитела. Замена в любом или во всех положениях 234, 235, 236 и/или 237 уменьшает сродство к рецепторам Fcγ, в частности, к рецептору FcγRI (смотри, например, патент США 6624821). В некоторых антителах имеется замена аланина в положениях 234, 235 и 237 человеческого IgG1 для снижения эффекторных функций. Необязательно, в положениях 234, 236 и/или 237 в человеческом IgG2 произведена замена на аланин и в положении 235 произведена замена на глутамин (см, например, патент США 5624821).
[0137] В некоторых антителах константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:49. В некоторых антителах константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO:52. Примеры легких цепей Hu1H7 имеют последовательность SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54. Примеры тяжелых цепей Hu1H7 имеют аминокислотную последовательность SEQ ID NO:55 или SEQ ID NO:56. В некоторых антителах легкая цепь представляет собой SEQ ID NO:53. В некоторых антителах тяжелая цепь представляет собой SEQ ID NO:56.
D. Экспрессия рекомбинантных антител
[0138] Антитела могут быть получены рекомбинантной экспрессией. Нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, могут быть оптимизированы в отношении кодонов для экспрессии в желаемом типе клеток (например, СНО или Sp2/0). Рекомбинантные конструкции нуклеиновых кислот, как правило, включают в себя последовательность, контролирующую экспрессию, функционально связанную с кодирующими последовательностями цепей антител, включая ассоциированные естественным образом или гетерологичные промоторные области. Последовательности, контролирующие экспрессию, могут представлять собой эукариотические промоторные системы в векторах, способных к трансформации или трансфекции эукариотических клеток-хозяев. После того, как вектор был введен в соответствующего хозяина, хозяина выдерживают в условиях, подходящих для высокого уровня экспрессии нуклеотидных последовательностей и сбора и очистки кросс-реагирующих антител. Вектор или векторы, кодирующие цепи антитела, может также содержать селектируемый ген, такой как ген дигидрофолатредуктазы, чтобы позволить амплификацию числа копий нуклеиновых кислот, кодирующих цепи антитела.
[0139] E. coli является прокариотическим хозяином, особенно подходящим для экспрессии антител, в частности, фрагментов антител. Такие организмы, как дрожжи, также применимы для экспрессии. Saccharomyces служит примером дрожжевого хозяина, с подходящими векторами, имеющими последовательности, контролирующие экспрессию, точку начала репликации, последовательности терминации и тому подобное, как это необходимо. Типичные промоторы включают промоторы для 3-фосфоглицераткиназы и других гликолитических ферментов. Индуцируемые промоторы дрожжей включают, в частности, промоторы из генов алкогольдегидрогеназы, изоцитохрома С и ферментов, ответственных за утилизацию мальтозы и галактозы.
[0140] Клетки млекопитающих могут быть использованы для экспрессии нуклеотидных сегментов, кодирующих иммуноглобулины или их фрагменты. Смотри Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987). В данной области был разработан ряд подходящих линий клеток-хозяев, способных секретировать интактные гетерологичные белки, и они включают в себя клеточные линии СНО, различные линии клеток COS, клетки HeLa, клетки НЕК293, L-клетки и клетки миеломы, которые не продуцируют антитело, включая SP2/0 и NS0. Может быть выгодным применять нечеловеческие клетки. Экспрессирующие векторы для таких клеток могут включать последовательности, контролирующие экспрессию, такие как точка начала репликации, промотор, энхансер (Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)), и необходимые информационные сайты процессинга, такие как сайты связывания рибосомы, сайты сплайсинга РНК, сайты полиаденилирования, и последовательности терминации транскрипции. Подходящими последовательностями, контролирующие экспрессию, являются промоторы, полученные из эндогенных генов, цитомегаловируса, SV40, аденовируса, вируса папилломы крупного рогатого скота и тому подобное. Смотри Со et al., J. Immunol. 148:1149 (1992).
[0141] После введения вектора(ов) кодирования тяжелых и легких цепей антител в культуру клеток клеточные пулы могут быть подвергнуты скринингу на производительность роста и качество продукции в бессывороточной среде. Лучшие продуцирующие клеточные пулы могут быть подвергнуты основанному на FACS одноклеточному клонированию для генерации моноклональных линий. Специфические продуктивности, составляющие выше 50 пг или 100 пг на клетку в день, которые соответствуют титрам продукта, составляющим более 7,5 г/л культуры, могут быть предпочтительными. Антитела, продуцируемые отдельными клонами клеток, также могут быть проверены на мутность, фильтрационные свойства, электрофорезом в полиакриламидном геле (PAGE), изоэлектрическим фокусированием (IEF), УФ-сканированием, гель-фильтрацией (HP-SEC), картированием углеводов и олигосахаридов, масс-спектрометрией и анализом связывания, таким как ELISA или Biacore. Отобранный клон можно держать во многих флаконах и хранить в замороженном виде для последующего использования.
[0142] После экспрессии антитела могут быть очищены в соответствии со стандартными процедурами в данной области техники, включая способ, основанный на применении белка А для захвата, колоночную хроматографию (например, гидрофобное взаимодействие или ионный обмен), применение низкого значения pH для инактивации вирусов и тому подобное (см. для общего представления Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)).
[0143] Способы коммерческого производства антител, включая оптимизацию кодонов, подбор промоторов, элементов транскрипции и терминаторов, одноклеточное клонирование в бессывороточной среде, сохранение клеток, использование маркеров селекции для амплификации числа копий, СНО-терминатор, одноклеточное клонирование в бессывороточной среде, улучшение белковых титров (см, например, патент США 5786464, патент США 5888809, патент США 6063598, патент США 6114148, патент США 7569339, WO 2004/050884, WO 2005/019442, WO 2008/012142, WO 2008/012142, WO 2008/107388 и WO 2009/027471).
Е. Нуклеиновые кислоты
[0144] Настоящее изобретение дополнительно относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим любую из тяжелых и легких цепей, описанных выше. Как правило, нуклеиновые кислоты также кодируют сигнальный пептид, слитый со зрелыми тяжелыми и легкими цепями (например, сигнальные пептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO:29, 31 и 41, которые могут быть закодированы последовательностями SEQ ID NO:28, 30 и 40). Кодирующие последовательности нуклеиновых кислот может быть функционально связаны с регуляторными последовательностями, такими как промотор, энхансер, сайт связывания с рибосомой, сигнал терминации транскрипции и тому подобное, чтобы обеспечить экспрессию кодирующих последовательностей. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи, могут находиться в изолированной форме или могут быть клонированы в одном или более векторе. Нуклеиновые кислоты могут быть синтезированы, например, твердофазным синтезом или с помощью ПЦР перекрывающихся олигонуклеотидов. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи, могут быть соединены в одну непрерывную нуклеиновую кислоту, например, в экспрессирующем векторе, или могут находиться раздельно, например, каждая клонирована в своем собственном векторе экспрессии.
V. ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ
[0145] Настоящее изобретение относится к нескольким способам лечения или осуществления профилактики болезни с тельцами Леви у пациентов, страдающих таким заболеванием или подверженных риску развития такого заболевания. Пациенты, поддающиеся лечению, включают лиц, подвергающихся риску развития заболевания LBD, но без симптомов, а также пациентов, имеющих в настоящее время симптомы или ранние предупреждающие знаки синуклеинопатии, например, замедление EEG, психоневрологические проявления (депрессия, слабоумие, галлюцинации, беспокойство, апатия, ангедония), вегетативные изменения (ортостатическая гипотензия, нарушения функции мочевого пузыря, запоры, недержание кала, слюнотечение, дисфагия, сексуальная дисфункция, изменения в мозговом кровотоке), сенсорные изменения (в обонянии, ощущении боли, необычные ощущения в цветоразличении), нарушения сна (нарушения поведения во время REM-стадии сна (RBD), синдром беспокойных ног/периодические движения конечностей, сонливость, бессонница) и различные другие признаки и симптомы (утомляемость, двоение в глазах, ухудшение зрения, себорея, потеря веса/набор веса). Поэтому настоящие способы можно применять профилактически для лиц, у которых имеется известный генетический риск развития LBD. К таким лицам относятся те, которые имеют родственников, переживших данную болезнь, и те, чей риск определяется анализом генетических или биохимических маркеров. Генетические маркеры риска в отношении PD включают мутации в генах альфа-синуклеина или паркина, UCHLI и CYP2D6; в частности, мутации в положениях 30 и 53 гена альфа-синуклеина. Лица, в настоящее время страдающие от болезни Паркинсона, могут быть распознаны на основе ее клинических проявлений, включая остаточный тремор, ригидность мышц, брадикинезию и постуральную нестабильность.
[0146] У бессимптомных пациентов лечение может начаться в любом возрасте (например, в возрасте 10-ти, 20-ти, 30-ти лет). Однако, обычно не следует начинать лечение до тех пор, пока пациент не достигнет 40, 50, 60 или 70 лет. Лечение, как правило, влечет за собой множество дозировок в течение определенного периода времени. Лечение может контролироваться анализом антител или ответов активированных Т-клеток или В-клеток на терапевтический агент (например, укороченная форма пептида альфа-синуклеина) с течением времени. Если ответ падает, назначается усиленная дозировка.
[0147] Антитела могут быть использованы для лечения или осуществления профилактики болезни с тельцами Леви у пациентов введением в условиях, которые генерируют положительный терапевтический ответ у пациента (например, уменьшение агрегатов альфа-синуклеина в нейритах и/или в аксонах, снижение нейритической дистрофии, улучшение когнитивных функций и/или обращение, лечение или профилактика когнитивных нарушений) у пациента. Согласно некоторым способам, области нейритической дистрофии в нейропиле коры головного мозга и/или базальных ганглиев у пациентов, получавших лечение, могут уменьшиться в среднем по меньшей мере на 10%, 20%, 30% или 40%, в сравнении с контрольной группой.
[0148] Когнитивные нарушения, прогрессирующее снижение когнитивных функций, изменения в морфологии мозга, а также изменения в цереброваскулярной функции обычно наблюдаются у пациентов, страдающих болезнью с тельцами Леви или подверженных риску развития данного заболевания. Введение настоящих антител может ингибировать или задерживать снижение когнитивной функции у таких больных.
[0149] Настоящее изобретение дополнительно относится к способам сохранения или увеличения синаптической плотности и/или дендритной плотности. Индекс изменений в синаптической или дендритной плотности может быть измерен маркерами формирования синапсов (синаптофизин) и/или дендритов (МАР2). Согласно некоторым способам, синаптическая или дендритная плотность может быть восстановлена до уровня синаптической или дендритной плотности у здорового человека. Согласно некоторым способам, средний уровень синаптической или дендритной плотности у пациентов, получавших лечение, может быть повышен на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% или более по сравнению с группой контрольных пациентов, не получавших лечение.
VI. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
[0150] В профилактических целях антитело или агент для индукции антитела или фармацевтическую композицию антитела или агента для индукции антитела вводят пациенту, подверженному заболеванию или в противном случае находящемуся под угрозой развития заболевания, в соответствии со схемой лечения (доза, частота и способ введения), эффективной для того, чтобы уменьшить риск, снизить тяжесть или задержать начало по меньшей мере одного признака или симптома заболевания. При некоторых профилактических применениях данная схема лечения является эффективной для ингибирования или задержки накопления альфа-синуклеина и усеченных фрагментов в головном мозге и/или для того, чтобы ингибировать или задержать его токсическое действие и/или ингибировать/или задержать развитие нарушений поведения. В терапевтических целях антитело или агент для индукции антитела вводят пациенту с подозрением на болезнь с тельцами Леви или уже страдающему заболеванием с тельцами Леви, в соответствии со схемой лечения (доза, частота и способ введения), эффективной для улучшения или, по меньшей мере, задержки дальнейшего ухудшения по меньшей мере одного признака или симптома заболевания. В некоторых терапевтических применениях схема лечения является эффективной для снижения или, по меньшей мере, ингибирования дальнейшего увеличения уровней альфа-синуклеина и усеченных фрагментов, связанных с этим токсичностей и/или нарушений поведения.
[0151] Схема лечения считается терапевтически или профилактически эффективной, если для пациента, получавшего индивидуальное лечение, достигается более благоприятный исход, чем средний результат в контрольной группе сравниваемых пациентов, не получавших лечение с помощью способов по настоящему изобретению, или если более благоприятный исход показан для получавших лечение пациентов в сравнении с пациентами контрольной группы в контролируемых клинических испытаниях (например, фаза II, фаза II/III или стадия III испытания) на уровне р<0,05 или 0,01 или даже 0,001.
[0152] Эффективные дозы варьируют в зависимости от многих факторов, включая способ введения, участок-мишень, физиологическое состояние пациента, включая тип болезни с тельцами Леви, такие факторы, как является ли пациент носителем АроЕ, является ли пациент человеком или животным, вводились ли другие препараты и является ли лечение профилактическим или терапевтическим.
[0153] Примерный диапазон дозировок для антител составляет от около 0,01 до 5 мг/кг и чаще от 0,1 до 3 мг/кг или от 0,15 до 2 мг/кг или от 0,15 до 1,5 мг/кг от массы тела пациента. Такие дозы антитела можно вводить ежедневно, через день, еженедельно, раз в две недели, ежемесячно, ежеквартально или в соответствии с любым другим графиком, определенным эмпирическим анализом. Пример лечения включает введение многократных дозировок в течение длительного периода, например, по меньшей мере на протяжении шести месяцев. Дополнительные примеры схем лечения включают введение один раз каждые две недели или один раз в месяц или один раз в каждые от 3 до 6 месяцев.
[0154] Антитела могут быть введены через периферийный путь (то есть, путь, по которому введенное или индуцированное антитело пересекает гематоэнцефалический барьер, чтобы достичь предназначенный участок в головном мозге). Способы введения включают в себя топикальный, внутривенный, пероральный, подкожный, внутриартериальный, внутричерепной, интратекальный, внутрибрюшинный, интраназальный или внутримышечный. Некоторые пути для введения антител представляют собой внутривенное и подкожное введение. Такой тип инъекции чаще всего выполняют в мышцы руки или ноги. Согласно некоторым способам, агенты вводят непосредственно в определенную ткань, где накоплены отложения, например, внутричерепной инъекцией.
[0155] Фармацевтические композиции для парентерального введения могут быть стерильными и по существу изотоническими и изготовленными в условиях GMP (должной медицинской практики (Good Manufacturing Practice)). Фармацевтические композиции могут быть представлены в стандартной лекарственной форме (например, дозировка для однократного введения). Фармацевтические композиции могут быть приготовлены с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей или вспомогательных веществ. Состав зависит от выбранного пути введения. Для инъекции антитела могут быть приготовлены в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический раствор или ацетатный буфер (чтобы уменьшить дискомфорт в месте инъекции). Раствор может содержать вспомогательные агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, антитела могут быть в лиофилизированной форме для смешивания перед использованием с подходящим носителем, например, стерильной апирогенной водой.
[0156] Настоящие назначения можно вводить в сочетании с другим агентом, эффективным в лечении или профилактике болезни, которую лечат. Например, в случае болезни Паркинсона, иммунотерапевтические препараты против альфа-синуклеина WO/2008/103472, леводопа, агонисты дофамина, ингибиторы СОМТ, ингибиторы МАО-В, амантадин или антихолинергические агенты могут быть использованы в сочетании с настоящими назначениями.
VII. ДРУГИЕ ПРИМЕНЕНИЯ
[0157] Антитела, описанные выше, могут применяться для обнаружения альфа-синуклеина в контексте клинической диагностики или лечения или в исследовании. Антитела также могут продаваться как исследовательские реагенты для лабораторных исследований с целью выявления клеток, несущих альфа-синуклеин, и их реакции на различные раздражители. В таких применениях моноклональные антитела могут быть помечены флуоресцентными молекулами, спин-мечеными молекулами, ферментами или радиоизотопами, и могут предоставляться в виде комплекта со всеми реагентами, необходимыми для выполнения анализа на альфа-синуклеин. Антитела также могут применяться для очистки альфа-синуклеина, например, аффинной хроматографией.
[0158] Антитела могут применяться для обнаружения LB у пациента. Такие способы могут применяться для диагностики или подтверждения диагноза PD или другого заболевания, связанного с наличием LB в мозге или предрасположенности к этому.
Например, данные способы могут применяться для пациента с симптомами деменции. Если пациент имеет LB, то пациент, скорее всего, страдает заболеванием с тельцами Леви, таким как болезнь Паркинсона. Данные способы также могут применяться у бессимптомных пациентов. Наличие телец Леви или других аномальных отложений альфа-синуклеина указывает на восприимчивость к будущей симптоматической болезни. Данные способы также могут применяться для мониторинга прогрессирования заболевания и/или ответа на лечение у пациентов, у которых ранее была диагностирована болезнь с тельцами Леви.
[0159] Данные способы можно осуществлять введением антитела с последующим обнаружением антитела после того, как оно связалось. При желании, можно избежать выведения антитела из организма, используя фрагмент антитела, у которого отсутствует полноразмерная константная область, например, Fab. Согласно некоторым способам, одно и то же антитело может служить в качестве реагента как для лечения, так и для диагностики.
[0160] Для диагностики (например, in vivo изображение), антитела можно вводить внутривенной инъекцией в тело пациента, или непосредственно в мозг внутричерепной инъекцией, или просверлив отверстие в черепе. Дозировка реагента должна быть в пределах тех же диапазонов, что и для способов лечения. Как правило, антитело помечено, хотя, согласно некоторым способам, антитело является немеченым и реагент для вторичного мечения используют для связывания с антителом. Выбор метки зависит от средства обнаружения. Например, флуоресцентная метка подходит для оптического обнаружения. Использование парамагнитных меток подходит для томографического обнаружения без хирургического вмешательства. Радиоактивные метки также могут быть обнаружены с помощью PET или SPECT.
[0161] Диагностика проводится путем сравнения количества, размера и/или интенсивности меченых локусов с соответствующими значениями базовой линии. Значения базовой линии могут представлять средние уровни в группе незаболевших индивидов. Значения базовой линии также могут представлять предыдущие уровни, определенные у того же пациента. Например, значения базовой линии можно определить у пациента до начала лечения, а измеренные после этого значения сравнить со значениями базовой линии. Уменьшение значений относительно базовой линии сигнализирует о положительном ответе на лечение.
[0162] Данные антитела могут применяться для генерирования антиидиотипических антител (смотри, например, Greenspan & Bona, FASEB J. 7(5):437-444, 1989; и Nissinoff, J. Immunol. 147:2429-2438, 1991). Такие антиидиотипические антитела могут применяться в фармакокинетике, фармакодинамике, исследованиях по биораспределению, а также в исследованиях клинических ответов человеческих античеловеческих антител (human-anti-human antibody (НАНА)) у лиц, получавших антитела. Например, антиидиотипические антитела специфически связываются с вариабельной областью гуманизированных антител 1Н7, и, следовательно, могут применяться для обнаружения гуманизированных антител 1Н7 в фармакокинетических исследованиях и для количественного определения ответов человеческого античеловеческого антитела (НАНА) у прошедших лечение индивидов.
[0163] Все заявки на патенты, сайт, другие публикации, номера доступа и т.п., упоминавшееся выше или ниже, включены посредством ссылки во всей их полноте для всех целей в той же степени, как если бы для каждого отдельного предмета было указано, что он конкретно и отдельно должен быть включен посредством ссылки. Если различные версии последовательности связаны с номерами доступа, выданными в разное время, то имеется в виду версия, связанная с номером доступа на действительную дату подачи данной заявки. Действительная дата подачи заявки означает более раннюю из двух дат, а именно фактической даты подачи или даты подачи приоритетной заявки со ссылкой на номер доступа, если это применимо. Аналогичным образом, если различные версии публикации, веб-сайта и т.п. опубликованы разное время, подразумевается версия, опубликованная наиболее близкая по времени публикации к действительной даты подачи заявки, если не указано иное. Любой признак, стадия, элемент, осуществление или аспект настоящего изобретения могут применяться в сочетании с любым другим, если специально не указано иное. Хотя настоящее изобретение было описано достаточно подробно с приведением иллюстраций и примеров для достижения ясности и понимания, очевидно, что объем прилагаемой формулы изобретения допускает осуществление определенных изменений и модификаций.
ПРИМЕРЫ
Пример I. Проектирование гуманизированных антител 1Н7
[0164] Отправная точка или антитело-донор для гуманизации представляет собой мышиное антитело 1Н7, продуцируемое гибридомой, имеющей номер доступа АТСС РТА-8220 и описанной в заявке на патент США №11/710248, опубликованной как US 2009/0208487. Полные аминокислотная и нуклеиновокислотная последовательности вариабельной области тяжелой цепи m1H7 представлены как SEQ ID NO:4 и 5, соответственно. Полные аминокислотная и нуклеиновокислотная последовательности вариабельной области легкой цепи m1H7 представлены как SEQ ID NO:6 и 7, соответственно. Аминокислотная и нуклеиновокислотная последовательности вариабельной области тяжелой цепи зрелого m1H7 представлены как SEQ ID NO:8 и 9, соответственно. Аминокислотная и нуклеиновокислотная последовательности вариабельной области легкой цепи зрелого m1H7 представлены как SEQ ID NO:10 и 11, соответственно. Аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи представлены как SEQ ID NO:12, 13 и 14, соответственно. Аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи представлены как SEQ ID NO:15, 16 и 17, соответственно. Система нумерации по Кабату (Kabat) используется во всем данном примере.
[0165] Вариабельная каппа (Vk) из m1H7 принадлежит мышиной подгруппе 3 (по Кабату), что соответствует человеческой подгруппе 1 (по Кабату). Вариабельная тяжелая цепь (Vh) из 1Н7 принадлежит мышиной подгруппе 5а (по Кабату), которая соответствует человеческой подгруппе 1 (по Кабату) (Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No.91-3242, 1991). 15-й остаток CDR-L1 принадлежит каноническому классу 5 (обратите внимание, что метионин в положении 33, как правило, соответствует лейцину в данном классе), 7-й остаток CDR-L2 принадлежит каноническому классу 1, 9-й остаток CDR-L3 принадлежит каноническому классу 1 в Vk (Martin & Thornton, J Mol Biol. 263:800-15, 1996). 5-й остаток CDR-H1 принадлежит каноническому классу 1, 17-й остаток CDR-H2 принадлежит каноническому классу 2 (Martin & Thornton, J Mol Biol. 263:800-15, 1996). CDR-H3 не имеет канонических классов, но петля из 8-ми остатков, вероятно, имеет изогнутое основание в соответствии с правилами Shirai et al., FEBS Lett. 455:188-97 (1999).
[0166] Остатки на интерфейсе между доменами Vh и Vk представляют собой обычно встречаемые аминокислотные остатки, за исключением того, что F46 в каппа-цепи, как правило, является остатком лейцина. Это делает данную позицию кандидатом для обратной мутации. Для того чтобы найти структуры, которые обеспечили бы приблизительную структурную модель 1Н7, был проведен поиск по белковым последовательностям в базе данных PDB (Deshpande et al., Nucleic Acids Res. 33: D233-7, 2005). Антитело 0.5B анти-HIV имеет в целом хорошее сходство с последовательностью Vk 1Н7, сохраняя те же канонические структуры для петель. ЯМР-структура антитела 0.5 В анти-HIV (pdb код 1QNZ; Tugarinov et al., Structure 8:385-95, 2000) была использована для структуры Vk в моделировании. Антитело против альфа-(2→8)-полисиаловой кислоты имеет в целом хорошее сходство последовательности со структурой Vh 1Н7. Оно также имеет область CDR-H3 аналогичной длины с изогнутым основанием. Структура антитела против альфа-(2→8)-полисиаловой кислоты (1PLG; Evans et al., Biochemistry 34:6737-44, 1995) имеет разумное разрешение (2,8 ангстрем), и была использована для структуры Vh в моделировании. Кроме того, CDR-H1 и CDR-H2 из антитела против альфа-(2→8)-полисиаловой кислоты имеют те же канонические структуры, что и Vh 1Н7. DeepView/Swiss-PdvViewer 3.7 (SP5) (Guex & Peitsch, Electrophoresis 18: 2714-2723, 1997) был использован для моделирования грубой структуры 1H7fv.
[0167] Поиск в базе данных из NCBI неповторяющихся белковых последовательностей позволил отобрать подходящие человеческие каркасные участки, в которые можно ввести мышиные CDR. Для Vk была выбрана человеческая легкая цепь каппа с NCBI кодом доступа AAY33358 (GI: 63102905; SEQ ID NO:43). (Kramer et al., Eur J Immunol. 35:2131-45, 2005). Она имеет те же канонические классы для CDR-L2 и CDR-L3 и принадлежит каппе зародышевой линии А30 человека, члену подгруппы 1 каппа человека по Кабату. Последовательность AAY33358 имеет 65,4% идентичности в каркасном участке вариабельной области легкой цепи с легкой цепью мышиного 1Н7. Для Vh была выбрана тяжелая цепь человеческого Ig ВАС02037 (GI: 21670055; SEQ ID NO:42), принадлежащая к тяжелой цепи человеческой зародышевой линии VH1-18. Она является членом подгруппы 1 человеческой тяжелой цепи по Кабату. Она разделяет каноническую форму CDR-H1 и CDR-H2 из 1Н7, и Н3 состоит из 8 остатков с предсказанным изогнутым основанием. Последовательность ВАС02037 имеет 65,8% идентичности в каркасном участке вариабельной области с тяжелой цепью мышиного 1Н7. Последовательности вариабельных областей гуманизированных тяжелой и легкой цепей 1Н7, не имеющие обратных мутаций или CDR-мутаций, представлены как последовательности SEQ ID NO:44-45.
[0168] Были построены четыре варианта вариабельной области гуманизированной легкой цепи и пять вариантов вариабельной области гуманизированной тяжелой цепи, содержащих различные перестановки вышеупомянутых замен (Hu1H7VLv1-v4; SEQ ID NO:32-39, и Hu1H7VHv1-v5; SEQ ID NO:18-27, соответственно) (фигуры 1-2 и таблица 1). Последовательности SEQ ID NO.19, 21, 23, 25, 27, 33, 35, 37 и 39 включают в себя обратные мутации, как показано в таблице 1. Кроме того, две гуманизированные тяжелые цепи (SEQ ID NO:25, 27) включают в себя мутацию C→S в положении Н97 (система нумерации по Кабату) из CDR3 тяжелой цепи (фигуры 1-2 и таблица 1). Аминокислотные остатки в положениях L46, L49, L83, Н11, Н28, Н38, Н48, Н67, Н69, Н71, Н91 и Н97 в Hu1H7VLv1-v4 и Hu1H7VHv1-v5 приведены в таблице 2.
[0169] Было обнаружено, что вариант H3L3 (hu1H7VHv3 (SEQ ID NO:23)-Hu1H7VLv3 (SEQ ID NO:37) дает самое низкое значение константы диссоциации (самое высокое значение константы ассоциации), такое же, как и мышиный 1Н7, в пределах SEM.
[0170] Обоснования для отбора указанных позиций в качестве кандидатов для замены состоят в следующем.
[0171] L46F (здесь, как и везде для обратных мутаций в каркасном участке, упоминаемый первым остаток представляет собой человеческий остаток и второй остаток является мышиным): Данная позиция соответствует остаткам интерфейса Vk/Vh.
[0172] Y49C: остаток цистеина в данном положении является необычным как в мышиной, так и в человеческой последовательности. Занимая положение в центре антигенсвязывающего сайта, данный остаток может связывать антиген или поддерживать конформацию петель.
[0173] F83A: В человеческом каркасном участке данную позицию занимает остаток фенилаланина, аминокислоты большего размера. Поэтому А83 был бы необычен в человеческих каркасных участках. В гуманизированном антителе константный домен будет человеческим, а не мышиным, так что человеческий F83 был бы обычен. Однако, данная позиция в Vk находится в непосредственной близости к константному домену и может помешать упаковке напротив константной области. Поэтому было бы интересно мутировать его обратно до А, чтобы убедиться в том, есть ли различие.
[0174] V11L: Данная позиция контактирует с константным доменом и поэтому может изменять топографию сайта связывания.
[0175] T28S: Данная позиция способствует конформации CDR-H1, но может также связывать антиген. Мутация T→S представляет собой консервативную мутацию.
[0176] R38K: Данная позиция лежит под CDR-H2, взаимодействуя с F63 в модели. Мутация R→K представляет собой консервативную мутацию.
[0177] M48I: Данная позиция находится под F63 в CDR-H2 в модели. Мутация М-I представляет собой консервативную мутацию.
[0178] V67A: Данная позиция лежит под CDR-H2. Мутация V→A не является консервативной мутацией.
[0179] M69L: Данная позиция лежит под CDR-H2. Мутация M→L представляет собой консервативную мутацию.
[0180] Т71А: Данная позиция соответствует каноническому остатку для CDR-H2. Мутация Т→А не является консервативной мутацией.
[0181] Y91F: Данная позиция соответствует аминокислотному остатку интерфейса, взаимодействующему с Р44 в легкой цепи. Мутация Y→F представляет собой консервативную мутацию.
[0182] C97S: Данная CDR-мутация в CDRH3 позволяет избежать посттрансляционной модификации цистеина.
[0183]> Hu1H7Vκ Версия 1
[0184]> Hu1H7Vκ Версия 2
[0185]> Hu1H7Vκ Версия 3
[0186]> Hu1H7Vκ Версия 4
[0001] >Hu1H7vh Версия 1
[0002] >Hu1H7vh Версия 2
[0003] >Hu1H7vh Версия 3
[0004] >Hu1H7vh Версия 4
[0005] >Hu1H7vh Версия 5
Пример II. Кинетический анализ связывания мышиных, химерных и гуманизированных антител 1Н7
[0192] Были охарактеризованы кинетики связывания гуманизированных антител 1Н7, содержащих тяжелую цепь, выбранную из Hu1H7VHv1-5, и легкую цепь, выбранную из Hu1H7VLv1-4.
[0193] Полный кинетический анализ связывания антител методом Biacore проводили с помощью прибора Biacore. Деталированные кинетические параметры связывания (скорость ассоциации, ka, скорость диссоциации, kd, и константа сродства, KD) были определены для мышиного 1Н7 (фиг. 3А), химерного 1Н7 (фиг. 3В) и гуманизированных 1Н7 (Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1, Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1) антител (фиг. 3С). Кинетические параметры связывания гуманизированных 1Н7, в частности, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3, сопоставимы с таковыми для мышиного 1Н7.
[0194] Кинетические параметры связывания гуманизированных антител 1Н7 также были измерены бислойной интерферометрией (BLI) с использованием прибора ForteBio Октет QK (ForteBio, Menlo Park, СА). Деталированные кинетические параметры связывания (скорость ассоциации, кажущаяся ka, скорость диссоциации, кажущаяся kd, и константа сродства, кажущаяся KD) были определены для химерного 1Н7 и различных гуманизированных антител 1Н7 (таблицы 6-7, фигуры 4А-С). Кажущаяся ka, кажущаяся kd и кажущаяся KD представляют собой кинетические параметры связывания, полученные с использованием форматов анализа с помощью прибора ForteBio. Данные параметры отличаются от ka, kd и KD, измеряемых с помощью анализов по методу Biocore вследствие, например, эффектов авидности, связанных с форматами анализов на приборе ForteBio.
[0195] Гуманизированные антитела 1Н7, в частности, Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3 и Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1, окрашивали различные области (например, полосатое тело, пирамидальный слой клеток, кору головного мозга, черную субстанцию) мозга трансгенной или нетрансгенной мыши, аналогично мышиному 1Н7.
ПРИМЕР II. Пассивная иммунизация антителами к α-синуклеину
[0196] Целью данного эксперимента является определение эффективности антител против α-синуклеина в in vitro и in vivo исследованиях, а также проведение поведенческих тестов. Авторы использовали самок трансгенных мышей, экспрессирующих α-синуклеин (Line 61), самок мышей с нокаутом гена α-синуклеина и самок мышей дикого типа, в возрасте 3-4 месяца в момент инициации и n=14/группа. Испытуемые антитела включали 9Е4 (IgG1, эпитоп: аминокислотные остатки 118-126 из альфа-синуклеина), 5С1 (IgG1, эпитоп: аминокислотные остатки 118-126 из альфа-синуклеина, с-линкер), 5D12, IgG2 (SN118-126), 1Н7, IgG1 (SN 91-99) и контрольное IgG1 антитело 27-1. Мыши получали дозу в 10 мг/кг в течение 5 месяцев, в общей сложности 21 инъекций. Кроме того, животным вводили лентивирус (LV), экспрессирующий человеческий α-синуклеин (дикий тип) односторонним введением человеческого α-синуклеина (дикий тип) в гиппокамп.
[0197] Антитела для количественного анализа включают таковые от Chemicon (эпитоп: полноразмерный альфа-синуклеин), Millipore (эпитоп: полноразмерный альфа-синуклеин) и Neotope, ELADW 105 (эпитоп: аминокислотные остатки 121-124 полноразмерного альфа-синуклеина).
[0198] Конечные точки: Титры антител измеряли на протяжении фазы жизни. Поведенческие анализы включают тест водного лабиринта Морриса (Morris Water Maze test (MWW)) и тест с горизонтальной балкой. Тест с круглой балкой представляет собой проверку баланса при движении, координации и походки, проводимый с использованием двух балок различного диаметра. Балка А имеет больший диаметр (проще, считается балкой для обучения), и балка D имеет меньший диаметр (сложнее, считается балкой для тестирования). Данные представлены в виде "ошибок" (количество промахов/10 см) и "скорости" (время, затраченное на прохождение 10 см/сек). Определение производительности в водном лабиринте проводили через 10 недель после начала исследования и в конце исследования. Были выполнены следующие невропатологические измерения: агрегация альфа-синуклеина, синаптофизин и МАР2. Были выполнены следующие биохимические измерения: альфа-синуклеин, PSD95, синаптофизин. Селективное мультимаркирование и маркирование для конфокальной микроскопии проводили с использованием синаптических, нейрональных и глиальных маркеров.
[0199] Результаты показали, что воздействие всех антител, за исключением 5D12, приводило к значительному снижению накопления α-синуклеина и сохранению синаптических и дендритных плотностей, а также положительным результатам в производительности теста MWM. Антитело 9Е4 эффективно в in vitro и in vivo исследованиях, а также в поведенческих тестах. Показания свидетельствуют о том, что антитело может уменьшить нейритные/аксональные агрегаты альфа-синуклеина.
[0200] Поведенческие результаты: Антитело 1Н7 (а также антитела 9Е4 и 5С1) улучшило производительность при выполнении теста в водном лабиринте у трансгенных мышей, экспрессирующих α-синуклеин, в то время как 5D12 не подействовало. Антитела 9Е4 и 1Н7 улучшили производительность в тесте с балкой, измеренную как по скорости, так и по ошибкам, в то время как антитела 5D12 и 5С1 не подействовали (фиг. 6).
[0201] Невропатологические результаты: Антитела 9Е4, 1Н7 и 5С1 уменьшили ELADW-105 положительную нейритную дистрофию, в то время как антитело 5D12 не подействовало. В трансгенных мышах, экспрессирующих α-синуклеин, антитело 9Е4 уменьшило площадь нейропиля на 43% в коре головного мозга и на 40% в базальных ганглиях, по сравнению с контролем. Антитело 9Е4 также сохраняло синаптофизин и МАР2 в неокортексе и базальных ганглиях.
ДЕПОЗИТ
[0202] Следующие клеточные линии, продуцирующие моноклональные антитела, были депонированы следующим международным депозитарием: American Type Culture Collection (АТСС, P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108), в соответствии с положениями Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры, в указанные даты:
[0203] Любому специалисту в данной области техники очевидно, что в данное описание могут быть внесены многие изменения и модификации без отхода от сущности или объема прилагаемой формулы изобретения. Если из контекста не очевидно иное, любая(ой) стадия, признак, осуществление, или аспект может быть использован в сочетании с любым другим. Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании, включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка были конкретно и индивидуально указаны как включенные сюда посредством ссылки.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
SEQ ID NO:l Природный человеческий альфа-синуклеин дикого типа
SEQ ID NO:2 Домен неамилоидного компонента (NAC) альфа-синуклеина по сообщению Jensen et al.
SEQ ID NO:3 Домен неамилоидного компонента (NAC) альфа-синуклеина по сообщению Uéda et al.
SEQ ID NO:4 Нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела m1H7 (сигнальный пептид подчеркнут, CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:5 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела m1H7 (сигнальный пептид подчеркнут, CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:6 Нуклеотидная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела m1H7 (сигнальный пептид подчеркнут, CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:7 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи антитела m1H7 (сигнальный пептид подчеркнут, CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:8 Нуклеотидная последовательность вариабельной области зрелой тяжелой цепи антитела m1H7 (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:9 Аминокислотная последовательность вариабельной области зрелой тяжелой цепи антитела m1H7 (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:10 Нуклеотидная последовательность вариабельной области зрелой легкой цепи (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:11 Аминокислотная последовательность вариабельной области зрелой легкой цепи антитела m1H7 (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:12 CDR1 тяжелой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:13 CDR2 тяжелой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:14 CDR3 тяжелой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:15 CDR1 легкой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:16 CDR2 легкой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:17 CDR3 легкой цепи антитела m1H7 (определение по Кабату)
SEQ ID NO:18 Hu1H7VHv1 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:19 Hu1H7VHv1 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:20 Hu1H7VHv2 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:21 Hu1H7VHv2 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:22 Hu1H7VHv3 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:23 Hu1H7VHv3 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:24 Hu1H7VHv4 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:25 Hu1H7VHv4 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:26 Hu1H7VHv5 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:27 Hu1H7VHv5 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:28 Сигнальный пептид Hu1H7VH (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:29 Сигнальный пептид Hu1H7VH (аминокислотная посл.)
SEQ ID NO:30 Сигнальный пептид HulH7VH (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:31 Сигнальный пептид Hu1H7VH (аминокислотная посл.)
SEQ ID NO:32 Hu1H7VLv1 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:33 Hu1H7VLv1 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:34 Hu1H7VLv2 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:35 Hu1H7VLv2 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:36 Hu1H7VLv3 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:37 Hu1H7VLv3 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:38 Hu1H7VLv4 (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:39 Hu1H7VLv4 (аминокислотная посл.) (CDR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты)
SEQ ID NO:40 Сигнальный пептид Hu1H7VL (нуклеотидная посл.)
SEQ ID NO:41 Сигнальный пептид Hu1H7VL (аминокислотная посл.)
SEQ ID NO:42 ВАС02037 (GI-21670055) Человеческая акцепторная последовательность, используемая для каркасного участка тяжелой цепи. Аминокислотная посл.
SEQ ID NO:43 AAY33358 GI-63102905) Человеческая акцепторная последовательность, используемая для каркасного участка легкой цепи Аминокислотная посл.
SEQ ID NO:44 Hu1H7VH без обратной мутации или мутации в CDR
SEQ ID NO:45 Hu1H7VL без обратной мутации или мутации в CDR
SEQ ID NO:46 Альтернативные варианты Hu1H7VH
где -X1- представляет собой V или L; -Х2- представляет собой S или Т; -Х3- представляет собой R или К; -Х4- представляет собой М или I; -Х5- представляет собой V или А; -Х6- представляет собой М или L; -Х7- представляет собой Т или A; -X8- представляет собой Y или F; -Х9- представляет собой С или S.
SEQ ID NO:47 Альтернативные варианты Hu1H7VL
где -Z1 представляет собой L или F; -Z2- представляет собой Y или С; -Z3- представляет собой F или А.
SEQ ID NO:48 Альтернативные варианты CDR3 Hu1H7VH
где -Х9- представляет собой С или М или S или Т, предпочтительно С.
SEQ ID NO:49 Константная область гуманизированной легкой цепи 1Н7 (с R) (общая для v1-v4)
SEQ ID NO:50 Константная область гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (общая для v1-v5) IgG1
SEQ ID NO:51 Константная область гуманизированной легкой цепи 1Н7 (без R) (общая для v1-v5)
SEQ ID NO:52 Константная область гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (аллотип G1m3)
SEQ ID NO:53 Версия 3 гуманизированной легкой цепи 1Н7 (вариабельная область+константная область с аргинином)
SEQ ID NO:54 Версия 3 гуманизированной легкой цепи 1Н7 (вариабельная область+константная область без аргинина)
SEQ ID NO:55 Версия 3 гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (вариабельная область+константная область)
SEQ ID NO:56 Версия 3 гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (вариабельная область+константная область, аллотип G1m3)
SEQ ID NO:57 Константная область гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (IgG2)
SEQ ID NO:58 Константная область гуманизированной тяжелой цепи 1Н7 (аллотип G1m1)
Claims (80)
1. Антитело, содержащее зрелую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три CDR по Кабату (Kabat), из последовательности SEQ ID NO: 44, и по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, содержащую три CDR по Кабату, из последовательности SEQ ID NO: 45, и по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45, где антитело специфически связывается с человеческим альфа-синуклеином.
2. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 44 и зрелая вариабельная область легкой цепи по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID NO: 45.
3. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
4. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
5. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность последовательности SEQ ID NO: 44 и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
6. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
7. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
8. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 45.
9. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
10. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 45.
11. Антитело по п. 1, при условии, что положение L46 (система нумерации по Кабату (Kabat)) занимает F.
12. Антитело по п. 1, при условии, что положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С.
13. Антитело по п. 1, при условии, что положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А.
14. Антитело по п. 1, при условии, что положение HI 1 (система нумерации по Кабату) занимает L.
15. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S.
16. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает К.
17. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I.
18. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А.
19. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L.
20. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А.
21. Антитело по п. 1, при условии, что положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F.
22. Антитело по п. 1, в котором аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 44 и аминокислотная последовательность зрелой вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 45, за исключением того, что положение L46 (система нумерации по Кабату) может быть занято L или F, и/или положение L49 (система нумерации по Кабату) может быть занято Y или С, и/или положение L83 (система нумерации по Кабату) может быть занято F или А, и/или положение Н11 (система нумерации по Кабату) может быть занято V или L, и/или положение Н28 (система нумерации по Кабату) может быть занято Т или S, и/или положение Н38 (система нумерации по Кабату) может быть занято R или К, и/или положение Н48 (система нумерации по Кабату) может быть занято М или I, и/или положение Н67 (система нумерации по Кабату) может быть занято V или А, и/или положение Н69 (система нумерации по Кабату) может быть занято М или L, и/или положение Н71 (система нумерации по Кабату) может быть занято Т или А, и/или положение Н91 (система нумерации по Кабату) может быть занято Y или F, и/или Н97 (система нумерации по Кабату) может быть занято С или S, и где антитело специфически связывается с человеческим альфа-синуклеином.
23. Антитело по п. 22, в котором положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А.
24. Антитело по п. 22, в котором положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А.
25. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F.
26. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С.
27. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
28. Антитело по п. 22, в котором положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С.
29. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает положение L и положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает К.
30. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает положение V и положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R.
31. Антитело по п. 22, в котором положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает положение I, Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F.
32. Антитело по п. 22, в котором положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
33. Антитело по п. 22, в котором положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А.
34. Антитело по п. 22, в котором положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
35. Антитело по п. 22, в котором положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S.
36. Антитело по п. 22, в котором положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
37. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А.
38. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает А.
39. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
40. Антитело по п. 22, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
41. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает положение K, Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
42. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
43. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
44. Антитело по п. 22, в котором положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает S, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает I, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает L, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S.
45. Антитело по п. 22, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает S.
46. Антитело, содержащее гуманизированную вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три CDR по Кабату из последовательности SEQ ID NO: 44, и гуманизированную вариабельную область легкой цепи, содержащую три CDR по Кабату из последовательности SEQ ID NO: 45, при условии, что положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и/или положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, где антитело специфически связывается с человеческим альфа-синуклеином.
47. Антитело по п. 46, в котором положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V и положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R.
48. Антитело по п. 46, в котором положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
49. Антитело по п. 46, в котором положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
50. Антитело по п. 46, в котором положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y и положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
51. Антитело по п. 46, в котором положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
52. Антитело, содержащее зрелую вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 23, и зрелую вариабельную область легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 37, в котором любые различия в последовательностях CDR зрелой вариабельной области тяжелой цепи и зрелой вариабельной области легкой цепи из последовательностей SEQ ID NO: 23 и 37, соответственно, находятся в положениях от Н60 до Н65 и Н97, и где антитело специфически связывается с человеческим альфа-синуклеином.
53. Антитело по п. 52, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи содержит три CDR по Кабату из последовательности SEQ ID NO: 23, и зрелая вариабельная область легкой цепи содержит три CDR по Кабату из последовательности SEQ ID NO: 37, и в котором положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F и положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С.
54. Антитело по п. 53, в котором дополнительно положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
55. Антитело по п. 53, в котором дополнительно положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
56. Антитело по п. 52, в котором зрелая тяжелая цепь имеет последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% с SEQ ID NO: 23, и зрелая легкая цепь имеет последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% с SEQ ID NO: 37.
57. Антитело по п. 52, в котором положение L46 (система нумерации по Кабату) занимает F, положение L49 (система нумерации по Кабату) занимает С, положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F или А, положение Н11 (система нумерации по Кабату) занимает V, положение Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н67 (система нумерации по Кабату) занимает А, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н71 (система нумерации по Кабату) занимает А и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
58. Антитело по п. 57, в котором дополнительно предусмотрено, что положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
59. Антитело по п. 57, в котором дополнительно предусмотрено, что положение Н97 (система нумерации по Кабату) занимает С.
60. Антитело по п. 52, при условии, что любые различия между каркасным участком вариабельной области зрелой вариабельной области тяжелой цепи и последовательностью SEQ ID NO: 23 представляют собой одно или более из того, что положение H11 (система нумерации по Кабату) занимает V, Н28 (система нумерации по Кабату) занимает Т, положение Н38 (система нумерации по Кабату) занимает R, положение Н48 (система нумерации по Кабату) занимает М, положение Н69 (система нумерации по Кабату) занимает М и положение Н91 (система нумерации по Кабату) занимает Y.
61. Антитело по п. 52, при условии, что любое различие между каркасным участком вариабельной области зрелой вариабельной области легкой цепи и последовательностью SEQ ID NO: 37 заключается в том, что положение L83 (система нумерации по Кабату) занимает F.
62. Антитело по п. 52, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 23, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 37.
63. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 44, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
64. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 19, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
65. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 21, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
66. Антитело по п. 1, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 23, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
67. Антитело по п. 22, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 25, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
68. Антитело по п. 22, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 27, и зрелая вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностями SEQ ID NO: 45, 33, 35, 37 или 39.
69. Антитело по п. 62, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи и константная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи.
70. Антитело по п. 69, в котором константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 52 при условии, что С-концевой остаток лизина может быть опущен.
71. Антитело по п. 69, в котором константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 49.
72. Антитело по п. 62, в котором зрелая вариабельная область тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 52 при условии, что С-концевой остаток лизина может быть опущен, и константная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, определяемую последовательностью SEQ ID NO: 49.
73. Антитело по п. 72, в котором зрелая легкая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 53 и зрелая тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO: 56.
74. Антитело по любому из пп. 1, 22, 46 или 52, в котором константная область тяжелой цепи представляет собой мутантную форму природной человеческой константной области, которая хуже связывается с рецептором Fcγ по сравнению с природной человеческой константной областью.
75. Антитело по любому из пп. 1, 22, 46 или 52, в котором антитело содержит константную область тяжелой цепи из изотипа IgGI человека.
76. Фармацевтическая композиция для обнаружения телец Леви, содержащая антитело, как определено по п. 1, и фармацевтически приемлемый носитель.
77. Фармацевтическая композиция для лечения болезни с тельцами Леви, содержащая антитело, как определено по п. 1, и фармацевтически приемлемый носитель.
78. Способ лечения пациента, имеющего болезнь с тельцами Леви или имеющего риск развития данного заболевания, содержащий назначение пациенту эффективной схемы введения антитела, как определено по п. 1.
79. Способ обнаружения телец Леви у пациента, имеющего болезнь с тельцами Леви или имеющего риск развития данного заболевания, включающий введение пациенту эффективного количества антитела, как определено по п. 1, в котором антитело связывается с тельцами Леви; и обнаружения связанного антитела в организме пациента.
80. Антитело по любому из пп. 1, 22, 46 или 52, в котором антитело специфически связывается с эпитопом в аминокислотных остатках 91-99 человеческого альфа-синуклеина.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261591835P | 2012-01-27 | 2012-01-27 | |
| US61/591,835 | 2012-01-27 | ||
| US201261711207P | 2012-10-08 | 2012-10-08 | |
| US61/711,207 | 2012-10-08 | ||
| PCT/US2013/023307 WO2013112945A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-01-25 | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014134747A RU2014134747A (ru) | 2016-03-20 |
| RU2642262C2 true RU2642262C2 (ru) | 2018-01-24 |
Family
ID=48873980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014134747A RU2642262C2 (ru) | 2012-01-27 | 2013-01-25 | Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US8790644B2 (ru) |
| EP (1) | EP2807188B1 (ru) |
| JP (2) | JP6342333B2 (ru) |
| KR (2) | KR102086061B1 (ru) |
| CN (2) | CN108517010A (ru) |
| AU (1) | AU2013211874B2 (ru) |
| BR (1) | BR112014018561A8 (ru) |
| CA (1) | CA2863953A1 (ru) |
| CL (1) | CL2014001984A1 (ru) |
| DK (1) | DK2807188T3 (ru) |
| ES (1) | ES2749457T3 (ru) |
| HK (1) | HK1204791A1 (ru) |
| IL (2) | IL233829B (ru) |
| IN (1) | IN2014DN07149A (ru) |
| MX (2) | MX360778B (ru) |
| MY (1) | MY171140A (ru) |
| NZ (1) | NZ629296A (ru) |
| PH (1) | PH12014501685A1 (ru) |
| RU (1) | RU2642262C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201404321YA (ru) |
| UA (1) | UA115439C2 (ru) |
| WO (1) | WO2013112945A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201406227B (ru) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY165038A (en) | 2011-10-28 | 2018-02-28 | Prothena Biosciences Ltd | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein |
| CA2863953A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Neotope Biosciences Limited | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein |
| UA118441C2 (uk) | 2012-10-08 | 2019-01-25 | Протена Біосаєнсиз Лімітед | Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн |
| US10513555B2 (en) | 2013-07-04 | 2019-12-24 | Prothena Biosciences Limited | Antibody formulations and methods |
| ES2776706T3 (es) * | 2013-07-05 | 2020-07-31 | Genmab As | Anticuerpos contra CD3 humanizados o quiméricos |
| KR102202925B1 (ko) * | 2013-11-21 | 2021-01-14 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-알파-시누클레인 항체 및 사용 방법 |
| US10562973B2 (en) | 2014-04-08 | 2020-02-18 | Prothena Bioscience Limited | Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein |
| WO2016061389A2 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Genentech, Inc. | Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use |
| CN106568969B (zh) * | 2016-10-19 | 2017-09-26 | 首都医科大学 | 一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法 |
| US11237176B2 (en) | 2016-12-02 | 2022-02-01 | Prothena Biosciences Limited | Infrared assay detecting secondary structure profiles of alpha-synuclein |
| JP6908709B2 (ja) | 2017-01-06 | 2021-07-28 | エービーエル バイオ インコーポレイテッド | 抗α−ｓｙｎ抗体およびその使用 |
| US11142570B2 (en) * | 2017-02-17 | 2021-10-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies to alpha-synuclein and uses thereof |
| EP3406632A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-11-28 | S.I.S.S.A. Scuola Internazionale Superiore di Studi Avanzati | Ligands binding to prion protein for use in the treatment of synucleinopathies |
| CA3085572A1 (en) | 2017-12-14 | 2019-06-20 | Abl Bio Inc. | Bispecific antibody to a-syn/igf1r and use thereof |
| GB201720975D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Ucb Biopharma Sprl | Anti-alpha synuclein antibodies |
| GB201720970D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| AU2019247511A1 (en) | 2018-04-06 | 2020-10-22 | Atyr Pharma, Inc. | Compositions and methods comprising anti-NRP2 antibodies |
| WO2020033756A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Determination of parkinson's disease |
| AU2019361253A1 (en) * | 2018-10-19 | 2021-04-01 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Anti-synuclein antibodies |
| EP4037711A4 (en) * | 2019-10-03 | 2024-02-14 | Atyr Pharma, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS USING ANTI-NRP2 ANTIBODIES |
| CA3178472A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Enzyme and pathway modulation with sulfhydryl compounds and their derivatives |
| IL300059A (en) * | 2020-07-23 | 2023-03-01 | Othair Prothena Ltd | Anti-abeta antibodies |
| CN113912714B (zh) * | 2021-12-15 | 2022-02-22 | 北京凯祥弘康生物科技有限公司 | 特异性结合α-突触核蛋白的抗体及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7657380B2 (en) * | 2003-12-04 | 2010-02-02 | Xencor, Inc. | Methods of generating variant antibodies with increased host string content |
| EA200900954A1 (ru) * | 2007-01-05 | 2010-02-26 | Юнивэсэти Оф Цюрих | Способ получения связывающей молекулы, специфичной к белку, ассоциированному с расстройством, или антитела, или его связывающего фрагмента, или по меньшей мере одной цепи иммуноглобулина, связывающих вышеуказанный белок (варианты), связывающая молекула, антитело, цепь иммуноглобулина или их связывающий фрагмент (варианты), антиген, полинуклеотид, вектор и клетка-хозяин, их включающие композиция и набор и способ диагностики или лечения неврологических расстройств посредством вышеуказанных объектов (варианты) |
Family Cites Families (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2, Inc., Danville, Calif. | Geänderte antikörper. |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| IE64738B1 (en) | 1990-03-20 | 1995-09-06 | Akzo Nv | Stabilized gonadotropin containing preparations |
| US6407213B1 (en) | 1991-06-14 | 2002-06-18 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US5786464C1 (en) | 1994-09-19 | 2012-04-24 | Gen Hospital Corp | Overexpression of mammalian and viral proteins |
| WO1996024369A1 (en) | 1995-02-06 | 1996-08-15 | Genetics Institute, Inc. | Formulations for il-12 |
| DE19539493A1 (de) | 1995-10-24 | 1997-04-30 | Thomae Gmbh Dr K | Starker homologer Promotor aus Hamster |
| US5834597A (en) | 1996-05-20 | 1998-11-10 | Protein Design Labs, Inc. | Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same |
| US6114148C1 (en) | 1996-09-20 | 2012-05-01 | Gen Hospital Corp | High level expression of proteins |
| US5888809A (en) | 1997-05-01 | 1999-03-30 | Icos Corporation | Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA |
| WO2000046750A1 (en) | 1999-02-05 | 2000-08-10 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Image texture retrieving method and apparatus thereof |
| WO2004006955A1 (en) | 2001-07-12 | 2004-01-22 | Jefferson Foote | Super humanized antibodies |
| WO2004039234A2 (en) | 2002-05-13 | 2004-05-13 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Humanized antibodies against the venezuelan equine encephalitis virus |
| TW200509968A (en) | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
| US9034337B2 (en) | 2003-10-31 | 2015-05-19 | Prothena Biosciences Limited | Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
| US8506959B2 (en) | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
| US20080014194A1 (en) | 2003-10-31 | 2008-01-17 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease |
| CA2507664C (en) | 2002-11-29 | 2010-09-07 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Novel neomycin-phosphotransferase-genes and methods for the selection of recombinant cells producing high levels of a desired gene product |
| ES2609010T3 (es) | 2003-04-04 | 2017-04-18 | Genentech, Inc. | Formulaciones de anticuerpos y de proteínas a concentración elevada |
| US7358331B2 (en) | 2003-05-19 | 2008-04-15 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease |
| DE10338531A1 (de) | 2003-08-19 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Reklonierung von Produktionszellen |
| WO2005047860A2 (en) | 2003-11-08 | 2005-05-26 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies to alpha-synuclein |
| JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
| DE602005014805D1 (de) | 2004-11-10 | 2009-07-16 | Boehringer Ingelheim Pharma | Verwendung von durchflusszytometrischer analyse zur optimierung von zellbankingstrategien für cho-zellen |
| US7930064B2 (en) * | 2004-11-19 | 2011-04-19 | Parata Systems, Llc | Automated drug discrimination during dispensing |
| US20080300204A1 (en) | 2005-07-19 | 2008-12-04 | University Of Rochester | Alpha-Synuclein Antibodies and Methods Related Thereto |
| EP2468770B1 (en) | 2006-07-14 | 2017-12-20 | AC Immune S.A. | Humanized antibody against amyloid beta. |
| US20080124760A1 (en) | 2006-07-26 | 2008-05-29 | Barbara Enenkel | Regulatory Nucleic Acid Elements |
| EP2118300B1 (en) * | 2007-02-23 | 2015-05-27 | Prothena Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
| US8147833B2 (en) | 2007-02-23 | 2012-04-03 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
| SG178804A1 (en) | 2007-02-23 | 2012-03-29 | Schering Corp | Engineered anti-il-23p19 antibodies |
| EP2126093B1 (en) | 2007-03-02 | 2012-10-10 | Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG | Improvement of protein production |
| EA200970880A1 (ru) | 2007-03-22 | 2010-02-26 | Имклоун Элэлси | Стабильные композиции на основе антител |
| BRPI0808291A2 (pt) | 2007-03-22 | 2018-12-11 | Genentech Inc | anticorpos anti-ige/ m1, peptideo, composições, ácido nucléico isolado, vetor, célula hospedeira, processo para a produção de um anticorpo anti-ige/m1' apoptótico ou o fragmento funcional, artigo de fabricação, método para depletar espcificamente as células b produtoras de ige, métodos para o tratamento de um doença mediada por ige, para evitar a produção de ige induzida por alérgeno, para reduzir a produção de lge induzida por alérgeno, hibridoma murino, anticorpo e animal transgênico |
| EP2031064A1 (de) | 2007-08-29 | 2009-03-04 | Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG | Verfahren zur Steigerung von Proteintitern |
| KR101247418B1 (ko) | 2007-12-21 | 2013-03-25 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항체 제형 |
| KR101603076B1 (ko) | 2007-12-28 | 2016-03-14 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | 아밀로이드증의 치료 및 예방 |
| AT506535B1 (de) * | 2008-02-22 | 2010-04-15 | Affiris Forschungs & Entwicklungs Gmbh | Vaccine enthaltend alpha-synuclein-mimotope auf basis von peptiden |
| EP2282758B1 (en) | 2008-04-29 | 2018-11-21 | BioArctic AB | Antibodies and vaccines for use in therapeutic and diagnostic methods for alpha-synuclein-related disorders |
| WO2009141239A1 (en) | 2008-05-20 | 2009-11-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A pharmaceutical formulation comprising an antibody against ox40l, uses thereof |
| US20120276019A1 (en) | 2008-07-25 | 2012-11-01 | Diamedica Inc. | Tissue kallikrein for the treatment of parkinson's disease |
| DE102008048129A1 (de) | 2008-09-20 | 2010-04-22 | Lfk-Lenkflugkörpersysteme Gmbh | Flugkörper mit zumindest einem Bremsfallschirm sowie Befestigungsvorrichtung zur Befestigung eines Bremsfallschirms an einem Flugkörper |
| CA2746778C (en) | 2008-12-19 | 2019-04-23 | University Of Zurich | Human anti-alpha-synuclein autoantibodies |
| IL262668B2 (en) | 2009-07-28 | 2024-10-01 | Shire Human Genetic Therapies | Preparations for the treatment of Gaucher disease |
| AR078161A1 (es) | 2009-09-11 | 2011-10-19 | Hoffmann La Roche | Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento. |
| WO2011090720A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-28 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd | Purification of proteins |
| EP2366714A1 (en) | 2010-03-03 | 2011-09-21 | Dr. Rentschler Holding GmbH & Co. KG | Naturally occuring autoantibodies against alpha-synuclein that inhibit the aggregation and cytotoxicity of alpha-synuclein |
| TW201134488A (en) | 2010-03-11 | 2011-10-16 | Ucb Pharma Sa | PD-1 antibodies |
| WO2011127324A2 (en) * | 2010-04-08 | 2011-10-13 | JN Biosciences, LLC | Antibodies to cd122 |
| CN107335062B (zh) * | 2010-06-08 | 2021-09-24 | 基因泰克公司 | 半胱氨酸改造的抗体和偶联物 |
| HUE040213T2 (hu) * | 2010-06-11 | 2019-02-28 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Anti-TIM antitest |
| AU2011279044B2 (en) * | 2010-07-15 | 2013-12-19 | Adheron Therapeutics, Inc. | Humanized antibodies targeting the EC1 domain of Cadherin-11 and related compositions and methods |
| RU2610667C2 (ru) | 2010-10-11 | 2017-02-14 | Эббви Бахамаз Лтд., | Способ очистки белков |
| WO2012109280A2 (en) | 2011-02-07 | 2012-08-16 | Neotope Biosciences Limited | Apoe immunotherapy |
| WO2012160536A1 (en) | 2011-05-26 | 2012-11-29 | Dr Reddy's Laboratories Limited | Antibody purification |
| JP6061922B2 (ja) | 2011-06-22 | 2017-01-18 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | プロテイノパチーの処置方法 |
| TW201306866A (zh) | 2011-06-30 | 2013-02-16 | Genentech Inc | 抗－ｃ－ｍｅｔ抗體調配物 |
| MY165038A (en) | 2011-10-28 | 2018-02-28 | Prothena Biosciences Ltd | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein |
| WO2013066866A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Genentech, Inc. | Antibody formulations |
| CA2863953A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Neotope Biosciences Limited | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein |
| PT2890712T (pt) | 2012-08-29 | 2019-06-28 | Hoffmann La Roche | Transportador para a barreira hematoencefálica |
| UA118441C2 (uk) | 2012-10-08 | 2019-01-25 | Протена Біосаєнсиз Лімітед | Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн |
| US10513555B2 (en) | 2013-07-04 | 2019-12-24 | Prothena Biosciences Limited | Antibody formulations and methods |
| US10562973B2 (en) | 2014-04-08 | 2020-02-18 | Prothena Bioscience Limited | Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein |
| US10084674B2 (en) | 2015-09-09 | 2018-09-25 | International Business Machines Corporation | Virtual desktop operation and data continuity preservation |
-
2013
- 2013-01-25 CA CA2863953A patent/CA2863953A1/en not_active Abandoned
- 2013-01-25 UA UAA201409460A patent/UA115439C2/uk unknown
- 2013-01-25 WO PCT/US2013/023307 patent/WO2013112945A1/en active Application Filing
- 2013-01-25 SG SG11201404321YA patent/SG11201404321YA/en unknown
- 2013-01-25 DK DK13740871.2T patent/DK2807188T3/da active
- 2013-01-25 NZ NZ629296A patent/NZ629296A/en not_active IP Right Cessation
- 2013-01-25 RU RU2014134747A patent/RU2642262C2/ru active
- 2013-01-25 KR KR1020147024060A patent/KR102086061B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2013-01-25 CN CN201810297949.0A patent/CN108517010A/zh active Pending
- 2013-01-25 US US13/750,983 patent/US8790644B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-01-25 MY MYPI2014002199A patent/MY171140A/en unknown
- 2013-01-25 JP JP2014554890A patent/JP6342333B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-01-25 EP EP13740871.2A patent/EP2807188B1/en active Active
- 2013-01-25 IN IN7149DEN2014 patent/IN2014DN07149A/en unknown
- 2013-01-25 AU AU2013211874A patent/AU2013211874B2/en not_active Ceased
- 2013-01-25 MX MX2014008952A patent/MX360778B/es active IP Right Grant
- 2013-01-25 CN CN201380007018.8A patent/CN104619724B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-01-25 BR BR112014018561A patent/BR112014018561A8/pt active Search and Examination
- 2013-01-25 ES ES13740871T patent/ES2749457T3/es active Active
- 2013-01-25 KR KR1020207006200A patent/KR102246217B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-07-24 US US14/340,342 patent/US9234031B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-07-24 PH PH12014501685A patent/PH12014501685A1/en unknown
- 2014-07-24 US US14/340,355 patent/US9217030B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-07-24 MX MX2018014044A patent/MX2018014044A/es unknown
- 2014-07-25 CL CL2014001984A patent/CL2014001984A1/es unknown
- 2014-07-27 IL IL233829A patent/IL233829B/en active IP Right Grant
- 2014-08-25 ZA ZA2014/06227A patent/ZA201406227B/en unknown
-
2015
- 2015-06-03 HK HK15105305.2A patent/HK1204791A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2015-11-10 US US14/937,792 patent/US9670273B2/en active Active
-
2017
- 2017-05-04 US US15/587,255 patent/US10118960B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-05-16 JP JP2018094968A patent/JP6807893B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2018-09-27 US US16/144,923 patent/US10597441B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2020
- 2020-02-19 US US16/795,479 patent/US10875909B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2021
- 2021-03-22 IL IL281731A patent/IL281731A/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7657380B2 (en) * | 2003-12-04 | 2010-02-02 | Xencor, Inc. | Methods of generating variant antibodies with increased host string content |
| EA200900954A1 (ru) * | 2007-01-05 | 2010-02-26 | Юнивэсэти Оф Цюрих | Способ получения связывающей молекулы, специфичной к белку, ассоциированному с расстройством, или антитела, или его связывающего фрагмента, или по меньшей мере одной цепи иммуноглобулина, связывающих вышеуказанный белок (варианты), связывающая молекула, антитело, цепь иммуноглобулина или их связывающий фрагмент (варианты), антиген, полинуклеотид, вектор и клетка-хозяин, их включающие композиция и набор и способ диагностики или лечения неврологических расстройств посредством вышеуказанных объектов (варианты) |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10875909B2 (en) | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein | |
| AU2017276296B2 (en) | Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein | |
| JP6511396B2 (ja) | アルファ−シヌクレイン認識抗体 | |
| RU2575629C2 (ru) | Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин |