RU2617049C1 - Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида - Google Patents
Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида Download PDFInfo
- Publication number
- RU2617049C1 RU2617049C1 RU2016118486A RU2016118486A RU2617049C1 RU 2617049 C1 RU2617049 C1 RU 2617049C1 RU 2016118486 A RU2016118486 A RU 2016118486A RU 2016118486 A RU2016118486 A RU 2016118486A RU 2617049 C1 RU2617049 C1 RU 2617049C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- niclosamide
- eudragit
- polymer
- drug
- particles
- Prior art date
Links
- RJMUSRYZPJIFPJ-UHFFFAOYSA-N niclosamide Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl RJMUSRYZPJIFPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 102
- 229960001920 niclosamide Drugs 0.000 title claims abstract description 101
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims description 12
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title claims description 12
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims abstract description 10
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 229920003156 Eudragit® RL PO Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920003160 Eudragit® RS PO Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 40
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 31
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 claims description 18
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 229920003152 Eudragit® RS polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 3
- FSXVSUSRJXIJHB-UHFFFAOYSA-M ethyl prop-2-enoate;methyl 2-methylprop-2-enoate;trimethyl-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCOC(=O)C=C.COC(=O)C(C)=C.CC(=C)C(=O)OCC[N+](C)(C)C FSXVSUSRJXIJHB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 229920003151 Eudragit® RL polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- DNKKLDKIFMDAPT-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylmethanamine;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound CN(C)C.CC(=C)C(O)=O.CC(=C)C(O)=O DNKKLDKIFMDAPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 30
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 abstract description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000006070 nanosuspension Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 2
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJMUSRYZPJIFPJ-ALWQSETLSA-N 5-chloro-N-(2-chloro-4-nitrophenyl)-2-hydroxybenzamide Chemical group ClC1=C(N[14C](C=2C(O)=CC=C(C=2)Cl)=O)C=CC(=C1)[N+](=O)[O-] RJMUSRYZPJIFPJ-ALWQSETLSA-N 0.000 description 1
- 208000036832 Adenocarcinoma of ovary Diseases 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010061328 Ovarian epithelial cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- IJLQMZYDFUGMCD-UHFFFAOYSA-N aniline pyridine-3-carboxamide Chemical compound NC1=CC=CC=C1.NC(=O)C1=CC=CN=C1 IJLQMZYDFUGMCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- JPNZKPRONVOMLL-UHFFFAOYSA-N azane;octadecanoic acid Chemical class [NH4+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O JPNZKPRONVOMLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- GYNNRVJJLAVVTQ-UHFFFAOYSA-N cloricromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=C(Cl)C(OCC(=O)OCC)=CC=C21 GYNNRVJJLAVVTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002571 cloricromen Drugs 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001523 electrospinning Methods 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012907 medicinal substance Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000003750 molluscacide Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical group 0.000 description 1
- 208000013371 ovarian adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 201000006588 ovary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 102220053182 rs371140684 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001599 sigmoid colon Anatomy 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
- A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противоопухолевому лекарственному средству на основе никлозамида в виде частиц субмикронного размера (не более 500 нм). Лекарственное средство включает, мас.%: никлозамид – 3,6-6,5, сополимер молочной и гликолевой кислот с молярным соотношением мономерных звеньев 50:50 – 31,8-53,6, полимеры эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО – 10,4-34,9, поверхностно-активное вещество, такое как поливиниловый спирт – 9,8-28,8, криопротектор, такой как D-маннитол – 7,1-13,5. Изобретение обеспечивает понижение уровня общетоксического действия и пролонгированное высвобождение никлозамида. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к новому поколению противоопухолевых препаратов на основе никлозамида. Никлозамид хорошо известен как лекарственный препарат - противоглистное средство [1]. Систематическое название: 5-хлор-N-(2-хлор-4-нитрофенил)-2-оксибензамид [1]. Считается, что никлозамид является разобщителем дыхания и окислительного фосфорилирования в митохондриях. Ниже приведена его формула
Недавно было обнаружено, что никлозамид также обладает и противоопухолевой активностью широкого спектра действия. Показана высокая активность никлозамида в отношении клеток гепатомы линий Huh-6 и Hep3B [2], клеток рака предстательной железы [3], клеток аденокарциномы яичника [4], клеток немелкоклеточного рака легкого [5], клеток рака молочной железы линий MDA-MB-231, MCF-7, MDA-MB-468, 4Т1 [6]. Обнаружено, что препарат ингибировал пролиферацию клеток различных линий лейкоза человека in vitro и in vivo [7]. Никлозамид подавляет миграцию опухолевых клеток глиобластомы и снижает их злокачественный потенциал in vivo [8]. В экспериментах in vivo обнаружено ингибирование образования метастазов и увеличение продолжительности жизни мышей с привитыми опухолями рака толстой кишки после лечения никлозамидом [9]. Никлозамид обладает также высокой активностью и в отношении опухолевых стволовых клеток (ОСК). Эффективность его действия в отношении ОСК убедительно доказана в отношении ОСК миелолейкоза [7] и рака молочной железы [10]. Никлозамид, в комбинации с другими противоопухолевыми препаратами, способствует преодолению устойчивости опухолевых клеток к этим препаратам. Совокупность полученных в разных исследованиях результатов позволяет рассматривать никлозамид в качестве перспективного противоопухолевого лекарственного средства для лечения широкого круга онкологических заболеваний, в том числе прогрессирующих форм рака.
Растворимость никлозамида в воде очень низкая, особенно в кислой среде, несколько возрастает в щелочных условиях, что определяет его низкую биодоступность, которая при пероральном введении составляет 10%. Низкая биодоступность никлозамида является сдерживающим фактором его использования в качестве противоопухолевого препарата. Для повышения растворимости никлозамида была получена его соль с этаноламином (ниже приведена формула)
В патенте № CN 1883266 A «А snail-killing medicine-nano suspension concentrate of niclosamide ethanolamine and method for preparing same» [11] описана наносуспензия никлозамида, в которой содержание никлозамида этаноламина - 15-25%, водорастворимого полимера - 0,05-0,5%, поверхностно-активного вещества - 3-15%, пеногасителя - 1-10%, и остальное - вода в качестве дисперсионной среды. Описанная суспензия готовится методом распыления. В качестве полимеров могут быть использованы алкил, циклический алкил, арил или ар-алкил и др. В качестве модификатора поверхности могут быть использованы одноатомные спирты, имеющие от 6 до 20 атомов углерода, и моно- и полиненасыщенных их производные; многоатомные спирты, имеющие от 2 до 10 атомов углерода, и их моноэфиры, диэфиры, триэфиры, соевое масло и др., которыми инкапсулирует частицу путем коацервации. Таким образом, данная суспензия представляет собой мелкодисперсную форму никлозамида, в состав которой с целью увеличения растворимости включены водорастворимый полимер и поверхностно-активное вещество. Однако для описанной суспензии не является характерным свойством пролонгированность действия. Кроме того, в указанном патенте нет описания противоопухолевых свойств суспензии.
В патенте № CN 1067515 C «Slow-released or control-released molluscacide» [12] описан препарат моллюскоцид в виде композиции, обеспечивающей контролируемое/замедленное высвобождение, в форме таблетки, гранулы, пленки, диализного мешка или содержащей высокомолекулярный носитель. В композицию включены следующие компоненты: носитель - от 5% до 80%; вспомогательные вещества - от 10% до 65%; материал пленочного покрытия - от 1% до 30%; моллюскоцид - от 3% до 20%. В качестве моллюскоцида может использоваться никлозамид, пентахлорфенол Na, никотинамид анилин; в качестве носителя - сульфаты, каолин и др.; в качестве вспомогательного вещества - крахмал, декстрин, стеараты и др.; в качестве пленочного покрытия - озокерит, парафин, метилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливиниловый спирт, пчелиный воск и др. Описанный препарат используется как моллюскоцид, и в патенте отсутствует описание противоопухолевых свойств препарата.
В работе [13] приводятся данные по включению никлозамида в состав циклодекстринов и получению комплексов с полиамдоаминами - (PAMAM) дендримерами с целью увеличения их растворимости в водных средах. Сильное взаимодействие между функциональными группами никлозамида и поверхностными амино-группами PAMAM приводило к сильному торможению высвобождения лекарственного средства из его комплекса с полимером, что является предпосылкой пролонгированности его лекарственного действия. Основным недостатком дендримеров является их высокая стоимость.
Для повышения растворимости и биодоступности никлозамида также было осуществлено его включение в гидрофильную полимерную матрицу на основе полиэтиленгликоля и поликапролактона с последующим получением нановолокон методом электроформования [14]. Наночастицы включались на поверхность и в состав нановолокна. Диаметр полученных наночастиц составил 11,6 нм. Диаметр полимерных нановолокон находился в диапазоне от 150 до 300 нм. При изучении высвобождения никлозамида из полученных препаратов в модельных опытах было показано, что при использовании наночастиц быстро переходит в раствор 15% вещества, затем 43% препарата выходит в течение 20 дней. При использовании нановолокон высвобождение составило 15 и 50% соответственно. Нановолокона обеспечивают большую площадь поверхности для высвобождения лекарственного средства. Также авторами был получен комплексный препарат в виде нановолокон, сочетающий, кроме наночастиц с никлозамидом, частицы серебра. Данное соединение было более устойчивое и характеризовалось контролируемым высвобождением вещества. Исследование цитотоксичности препаратов in vitro на клетках линий MCF-7 и А549 показало, что никлозамид в составе нановолокон индуцировал гибель клеток при меньшей концентрации по сравнению с никлозамидом. Однако описанная технология получения нановолокон является достаточно дорогостоящей и малоприменимой для использования в медицине.
В работе [15] приводятся результаты по получению никлозамида в виде полимерных частиц с никлозамидом на основе PLGA (никлозамид-PLGA) с диаметром с 584-662 нм, получаемых с использованием элекстроспрей-систем. Предложенная одно- или двухъядерная капиллярная система «Микроспрей» может генерировать монодисперсные частицы. Полимерные частицы с никлозамидом показали увеличение растворимости в 1,6 раз по сравнению с обычным препаратом никлозамида. Высвобождение никлозамида из частиц составило 31,6% за 500 часов. Авторами показано, что частицы никлозамид-PLGA обладают более высокой цитотоксической активностью, чем обычный никлозамид, по отношению к опухолевым клеткам яичника линий СР70 и SKOV-3. Свойства описанных в данной публикации частиц не вполне удовлетворяет требованиям, предъявляемым к инъекционным лекарственным формам в виде частиц, средний размер которых должен быть менее 500 нм, предпочтительно не более 200 нм, что обеспечит наиболее оптимальное биораспределение частиц, так как позволит задержать частицы в кровотоке, избежать их захвата клетками ретикулоэндотелиальной системы (РЭС) и улучшит проникновение в опухолевые клетки.
Таким образом, все перечисленные композиции, составы и способы имеют ограничения в большей или меньшей степени, в связи с чем существует необходимость в разработке новых и/или усовершенствованных составов, композиций и способов для создания противоопухолевого лекарственного средства на основе никлозамида. Более конкретно, существует необходимость в разработке состава противоопухолевого лекарственного средства на основе никлозамида, которое характеризовалось бы субмикронными размерами (не более 500 нм), пролонгированным характером высвобождения никлозамида, противоопухолевой активностью и пониженным уровнем общетоксического действия.
Достижение технического результата осуществляется путем разработки противоопухолевого лекарственного средства на основе никлозамида, включающего биодеградируемый полимер в виде сополимера молочной и гликолевой кислот с молярным соотношением мономерных звеньев 50 на 50%, полимеры эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО, поверхностно-активное вещество в виде поливинилового спирта, криопротектор в виде D-маннитола, представляющего собой частицы субмикронного размера со средним размером не более 500 нм, следующего состава, мас.%:
| никлозамид | 3.6÷6,5 |
| сополимер молочной и гликолевой кислот | 31.8÷53.6 |
| эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО | 10.4÷34.9 |
| поливиниловый спирт | 9.8÷28.8 |
| D-маннитол | 7.1÷13.5 |
Противоопухолевое лекарственное средство может быть выполнено, в виде капсул, или гранул, или порошка или другой пероральной формы, или в виде лиофилизата, или суспензии для инъекций.
Сопоставление характеристик заявляемого лекарственного средства с литературными данными о других полимерсодержащих продуктах (препараты, фармацевтические композиции, полимерные частицы и т.п.), содержащих никлозамид, приведено в таблице 1.
Таким образом, в сравнении с другими полимерсодержащими продуктами на основе никлозамида, указанными в таблице 1, заявляемый состав противоопухолевого лекарственного средства на основе никлозамида, включающего биодеградируемый полимер в виде сополимера молочной и гликолевой кислот с молярным соотношением мономерных звеньев 50 на 50%, полимеры эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО, поверхностно-активное вещество в виде поливинилового спирта, криопротектор в виде D-маннитола, позволяет достигать наиболее оптимальные характеристики в виде субмикронного размера частиц со средним размером не более 500 нм, и технического результата в виде пролонгированного высвобождения, противоопухолевого действия и снижения общетоксического действия. Описанный технический результат достигается по совокупности всех существующих признаков созданного лекарственного средства.
При разработке лекарственного средства наибольшее внимание было уделено выбору полимерного носителя. Влияние вида полимера на свойства будущей композиции с лекарственным веществом является первостепенным. Основные требования к полимерам, применяемым в медицине - биосовместимость, нетоксичность, апирогенность, отсутствие канцерогенных свойств, возможность стерилизации и др. Выбор типа полимера также ограничивается его коммерческой доступностью, возможностью медицинского применения. Как уже указывалось, одними из наиболее перспективных полимерных носителей для разработки систем доставки лекарственных веществ являются полилактидгликолиды [16-18]. В таблице 2 представлены результаты исследования свойств образцов полученных полимерсодержащих композиций на основе никлозамида. Эксперимент по получению образца NC-1, проведенный с использованием PLGA 50/50, показал, что примерно 90% никлозамида находится в свободном состоянии (степень сорбции никлозамида ≤10%). Таким образом, сополимер молочной и гликолевой кислот PLGA 50/50 малопригоден для получения частиц с никлозамидом. Использование для этих целей PLA или PLGA 75:25 также неперспективно, так как эти полимеры еще более гидрофобны по сравнению с PLGA 50/50. Полимер PLGA-COOH 50/50 не подходит для иммобилизации никлозамида, также несущего отрицательный заряд при нейтральных или щелочных значениях pH.
Известно, что никлозамид образует соли с органическими соединениями, несущими положительно заряженные функциональные группы, в частности с этаноламином. Это свойство было использовано Bharathi D. и др. для иммобилизации никлозамида на полиамдоаминах (PAMAM) дендримерах [13]. В последнее время эудрагиты стали применяться для получения полимерсодержащих форм лекарственных препаратов для различных способов введения: перорального, трансбуккального, подъязычного, глазного, ректального, вагинального и/или парентерального [19-22]. Нами для исследований были выбраны полимеры из семейства полиметакрилатов: EUDRAGIT® RL РО и EUDRAGIT® RS РО. Ниже приведена общая структурная формула полимеров
где R1 - атомом водорода или метильная группа; R2 - метильная или этильная группа; R3 - метильная группа; R4 - группа CH2-CH2-N(CH3)3 + Cl-.
В экспериментах (NC-7, NC-9, NC-19) для получения полимерных частиц с никлозамидом была использована смесь полимеров PLGA 50/50 и EUDRAGIT® RL РО или EUDRAGIT® RS РО в разных массовых соотношениях. Использование EUDRAGIT® RS РО было более предпочтительным, так как давало частицы с никлозамидом меньшего размера с более узким интервалом их распределения, а также с более высоким уровнем включения никлозамида в полимерную матрицу (см. таблицу 1). Степень включения никлозамида в состав полимерных частиц существенно возрастала (≥75%). Определенные затруднения вызывала отгонка растворителя. После проведения данного процесса оставалось незначительное количество этилацетата, растворенное в водной среде, которое удалялось только при проведении стадии лиофилизации.
На чертеже представлены результаты эксперимента по изучению динамики выхода никлозамида из полимерсодержащей композиции NC-19 в условиях диализа при температуре 37°C и pH 7.5 в фосфатно-солевом буферном растворе. Как видно, в данных условиях наблюдается медленное выделение вещества в раствор (за 180 часов высвобождается не более 17% никлозамида от взятого в опыт), что является предпосылкой пролонгированности действия лекарственного препарата. Эти результаты хорошо согласуются с данными, приведенными в работе [17] по высвобождению никлозамида, включенного в состав комплексов с полиамдоаминами - (PAMAM).
В таблице 3 приведены результаты исследования цитотоксической активности образцов полимерсодержащих композиций на основе никлозамида на различных линиях опухолевых клеток. В качестве веществ - сравнения использовали субстанцию никлозамида и «пустые» частицы, не содержащие никлозамид. Обнаружена высокая цитотоксическая активность исследованных образцов полимерсодержащих композиций на основе никлозамида, которая либо не отличалась от активности свободного никлозамида, либо превышала ее. Полимерные композиции без никлозамида, в используемом диапазоне концентраций, активностью не обладали.
Для исследования общетоксических свойств полимерсодержащей композиции на основе никлозамида (образец NC-19) избраны внутрибрюшинный и пероральный (внутрижелудочный) пути введения экспериментальным животным. Были определены полулетальные дозы полимерсодержащей композиции на основе никлозамида в сравнении с препаратом сравнения субстанцией никлозамида. Исследование острого токсического действия проводили на мышах линии C57BL/6 обоего пола в 4-х дозах. Контроль - введение стерильной воды для инъекций. Определение диапазона летальных доз полимерсодержащей композиции на основе никлозамида проводили путем токсикометрического анализа выживаемости животных после однократного введения препарата с последующим 30-дневным наблюдением. Для полимерсодержащей композиции на основе никлозамида установленные значения среднесмертельной дозы (LD50) при однократном введении мышам линии C57BL/6 составили: при в/б введении - LD50=92.8 мг/кг; при в/ж (пероральном) введении LD50>1700 мг/кг, что выше значений среднесмертельной дозы при в/б введении - LD50=44.8 мг/кг (C57BL/6); при в/ж введении LD50>1600 мг/кг (C57BL/6) субстанции никлозамида. Полученные результаты свидетельствуют о более низкой токсичности полученного препарата по сравнению с субстанцией никлозамида.
В качестве наиболее перспективного препарата, по совокупности полученных данных: по результатам исследования цитотоксической активности, по содержанию никлозамида, степени включения никлозамида в полимерные частицы (81%), среднему размеру полимерных частиц (средний размер частиц менее 200 нм) и способности к ресуспендированию, является образец полимерсодержащей композиции на основе никлозамида NC-19.
Предлагаемое изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.
Пример 1. Получение полимерных частиц с включенным в них никлозамидом.
В стеклянном флаконе взвешивали субстанцию никлозамида в количестве примерно 50 мг. Добавляли избыток полимера в количестве 7:1 или 10:1 (масс.), по отношению к массе никлозамида. В качестве полимеров использовали PLGA 50/50 или смесь PLGA 50/50 с EUDRAGIT RL РО в соотношениях 4:1, 3:2 и 1:1 (масс.) или смесь PLGA 50/50 с EUDRAGIT RS РО в соотношениях 4:1, 3:2 и 1:1 (масс.). Вещества растворяли при перемешивании на магнитной мешалке при 55-60°C в 6.0 мл этилацетата. Полученный раствор охлаждали до комнатной температуры. В реакционном сосуде взвешивали 25.0 г 0.5% или 1.0% раствора ПВС в деионизированной (д/и) воде. К раствору ПВС при интенсивном перемешивании на магнитной мешалке добавляли порциями в течение 3÷5 мин раствор никлозамида и полимеров в этилацетате. Продолжали перемешивание смеси в течение 10 мин при комнатной температуре. Проводили эмульгирование смеси погружным гомогенизатором Ultra-Turrax Т-25 basic с помощью насадки S25N - 25F при 24 тыс. об/мин 3 раза по 0.5 мин с 2 перерывами по 0.5 мин. Пенистую массу перегружали в круглодонную колбу. Остатки эмульсии смывали из реакционного сосуда и с насадки гомогенизатора д/и водой 2 раза по 3 мл. Упаривали этилацетат с помощью роторного испарителя в вакууме водоструйного насоса. Полученную смесь фильтровали через стеклянный фильтр (пор. 161 мкм) самотеком, добавляли раствор 100.1 мг D-маннитола в 1 мл д/и воды. Остатки смеси из колбы для упаривания и с фильтра смывали д/и водой 2 раза по 3 мл в приемник. Фильтрат замораживали в бане с жидким азотом. Процесс удаления воды проводили на лиофильной сушке при остаточном давлении 0.03÷0.1 мБар и комнатной температуре в течение 20 ч. Выходы готового продукта составляли от 80.4 до 95.5% от общей массы взятых ингредиентов.
Полученные частицы оценивались по следующим параметрам: размерам частиц и степени включения лекарственного вещества в частицы. Средний размер частиц определяли методом автокорреляционной спектроскопии на субмикронном лазерном спектрометре Coulter N4MD (USA). Полученные частицы имели субмикронные размеры (см. табл. 1).
Пример 2. Определение общего содержания никлозамида в образцах
Содержание никлозамида в полимерных частицах определяли методом ВЭЖХ после их растворения в диметилсульфоксиде и последующего разбавления метанолом. Для проведения ВЭЖХ использовали систему Agilent 1290 series, с УФ-детектором (США). Условия проведения ВЭЖХ: колонка - Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18, 250×4,6 мм, 5 мкм; температура термостата - 30°C; режим - изократический; подвижная фаза - элюент А - метанол для хроматографии = 87%, элюент В - 0,05% раствор муравьиной кислоты; скорость потока элюента - 1,2 мл/мин; объем вводимой пробы - 20 мкл; время регистрации хроматограммы - 10 минут; условия детектирования - длина волны 322±4 нм.
Образцы хроматографировались трехкратно для подтверждения воспроизводимости и получения статистически достоверных данных.
Пример 3. Определение степени включения никлозамида в полимерную матрицу
В флаконе перемешивали в течение 3 мин. 50.00 мг образца и 2.6 мл деионизированной воды. Суспензию центрифугировали в течение 20 мин при скорости 14000 об/мин на центрифуге Eppendorf Centrifuge 5415. Супернатант удаляли. Осадок перемешивали с 1.0 мл деионизированной воды на вихревом смесителе типа Vortex в течение 0.5 мин. Суспензию центрифугировали снова в течение 15 мин при скорости 14000 об/мин на центрифуге Eppendorf. Супернатант удаляли. Осадок сушили на лиофильной сушке в течение 22 ч до постоянного веса.
В стеклянном флаконе растворяли 11.00 мг (точная навеска), высушенного до постоянного веса, отмытого образца в 10 мл диметилсульфоксида, после чего определяли в нем содержание никлозамида методом ВЭЖХ в условиях, приведенных выше. Рассчитывали количество (масс.) никлозамида, связанное с полимерной матрицей.
Пример 4. Изучение динамики выхода никлозамида из полимерсодержащей композиции
Исследование динамики выхода (высвобождения) никлозамида в модельном эксперименте осуществляли в условиях равновесного диализа при температуре 37°C и pH 7.5 в фосфатно-солевом буферном растворе из композиции NC-19. Сосудом для проведения диализа служила емкость вместимостью 1000 мл с пластиковой крышкой, содержащая 400 мл раствора PBS. Для перемешивания диализной жидкости использовали магнитный элемент в тефлоновой оболочке (∅ 6×15 мм) и магнитную мешалку STIRRER Туре ОР-951 (Radelkis, Венгрия). Термостатирование осуществляли в термостате Shellab Model 1519Е-2 (Sheldon Manufacturing, Inc., США). В качестве диализных мешков использовали ленту MF-1230 MFPI (США), размер пор 12-14 кДа, ширина 45 мм. Содержание никлозамида в диализате определяли спектрофотометрически на спектрофотометре Ultrospec 2000 (США) при длине волны λ 340 нм.
В стеклянном флаконе на 10 мл с крышкой взвешивали 200.0 мг композиции NC-19 (общее содержание никлозамида - 10.9 мг). Из сосуда для диализа отбирали 8 мл раствора PBS, добавляли к навеске и перемешивали на магнитной мешалке в течение 7 мин. Полученную суспензию переносили пипеткой в подготовленный диализный мешок с зажатым пластиковым зажимом концом. Остатки суспензии во флаконе дважды смывали по 1 мл раствора PBS и переносили в мешок. Заполненный мешок герметизировали нитью и пластиковым зажимом, опускали в сосуд для диализа, банку плотно закрывали и помещали в термостат на магнитную мешалку, затем включали перемешивание и начинали отсчет времени. Через определенные промежутки времени проводили отбор проб из сосуда с диализатом по 3 мл. Измеряли оптическую плотность раствора диализата относительно раствора PBS. Затем пробы возвращали обратно в сосуды. Продолжительность эксперимента составила 9,125 суток. Кривая изменения во времени относительного количества никлозамида, перешедшего из мешка в диализат (высвобождение, в %), представлена на чертеже. За 100% принимали максимальное значение оптической плотности 1.282, которую теоретически может дать все количество никлозамида в 400 мл раствора PBS (0.023 мг/мл) из взятой навески образца композиции NC-19.
Пример 5. Определение цитотоксической активности образцов полимерсодержащих композиций на основе никлозамида в опытах in vitro.
Для изучения цитотоксической активности образцов полимерсодержащей композиции на основе никлозамида in vitro наряду с модельной клеточной тест-системой - линией аденокарциномы молочной железы человека MCF-7, была использована линия клеток миелолейкоза человека К562 и линия колоректального рака человека COLO 320 HSR (карцинома сигмовидной кишки). При проведении опытов in vitro использовали методику учета выживаемости опухолевых клеток. В качестве вещества сравнения использовали субстанцию никлозамида. Культивирование клеток проводили в CO2-инкубаторе при 37°C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2, в среде ДМЕМ (линия MCF-7) и RPMI1640 (линия К562), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки и 50 мкг/мл гентамицина (Life Technologies, США). За 24 часа до эксперимента клетки высевали в культуральные 96-луночные платы. Исследуемые препараты и свободный никлозамид вносили к клеткам не менее чем в трех повторах для каждой исследуемой концентрации в диапазоне от 0,05 до 40 мкМ по никлозамиду. При работе с полимерсодержащими композициями на основе никлозамида при приготовлении растворов концентрацию рассчитывали, исходя из процентной доли никлозамида в композиции полимерных препаратов никлозамида. Выживаемость клеток после инкубации с препаратами оценивали с помощью МТТ-теста и по кривым выживаемости определяли значения IC50. Для этого в лунки с клетками добавляли раствор МТТ, инкубировали 2-4 часа при 37°C, после чего удаляли раствор МТТ, вносили ДМСО и измеряли оптическую плотность по поглощению при 540 нм с помощью многоканального спектрофотометра. По полученным данным строили графики зависимости выживаемости клеток от концентрации препаратов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы Origin.
Пример 6. Исследование общей (острой) токсичности полимерсодержащей композиции на основе никлозамида.
Исследование по определению острой токсичности препарата проводили на инбредных мышах линии C57BL/6 обоего пола при внутрижелудочном (пероральном) и внутрибрюшинном введении из расчета по две однополые группы мышей (6 самок/6 самцов) на каждую дозу и 2 группы контроля. Мышей распределяли по группам случайным образом методом рандомизации. В качестве критериев приемлемости рандомизации считали отсутствие внешних признаков заболеваний и гомогенность групп по весу тела (±10%). Препараты вводили внутрибрюшинно в предпаховую область мыши (максимальный объем однократного введения 1,0 мл) и внутрижелудочно (в/ж) в виде суспензии через рот в желудок мыши с помощью атравматического зонда (максимальный объем однократного введения не превышал 0,5 мл). Для достижения больших доз препарат вводили животным повторно с интервалами не менее 60 минут. После однократного введения препарата определяли летальность и время гибели животных. Определение диапазона летальных доз субстанции никлозамида и полимерсодержащей композиции на основе никлозамида проводили путем токсикометрического анализа выживаемости животных после однократного внутрижелудочного/внутрибрюшинного введения с последующим 30-дневным наблюдением. Количественные данные, полученные в эксперименте, обрабатывались методом вариационной статистики с применением «t»-критерия Стьюдента, методом Стьюдента-Манна-Уитни при Р=0.05, а также методами непараметрической статистики. При введении полимерсодержащей композиции на основе никлозамида наблюдались зависимые от доз летальные эффекты. Результаты испытания острого токсического действия препарата на мышах линии C57BL/6 позволили рассчитать значения среднесмертельных доз.
Таким образом, по совокупности всех полученных результатов испытаний лекарственное средство на основе никлозамида с использованием полимеров PLGA (50/50), эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО, стабилизатора эмульсии поливинилового спирта и криопротектора D-маннитола, в виде частиц субмикронного размера со средним размером не более 500 нм, обладает пролонгированным вывсвобождением, высокой цитотоксической активностью в отношении опухолевых клеток человека и пониженным уровнем общей (острой) токсичности.
Источники информации
1. The International Pharmacopoeia. The Fourth Edition // http://apps.who.int/phint/en/p/docf/
2. Tomizawa M.; Shinozaki F.; Motoyoshi Y.; Sugiyama Т.; Yamamoto S.; Sueishi M.; Yoshida T. Niclosamide suppresses Hepatoma cell proliferation via the Wnt pathway // Onco Targets Ther. - 2013. - Vol. 6. - P. 1685-93. doi: 10.2147/OTT.S50065.
3. Liu, C; Lou, W; Zhu, Y; Nadiminty, N; Schwartz, CT; Evans, CP; Gao, AC. Niclosamide inhibits androgen receptor variants expression and overcomes enzalutamide resistance in castration-resistant prostate cancer // Clin Cancer Res. - 2014. - Jun 15. - Vol. 20(12). - P. 3198-210. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-13-3296.
4. Yoshioka, S; King, ML; Ran, S; Okuda, H; MacLean, JA 2nd; McAsey, ME; Sugino, N; Brard, L; Watabe, K; Hayashi, K. WNT7A regulates tumor growth and progression in ovarian cancer through the WNT/β-catenin pathway // Mol Cancer Res. - 2012. - Vol. 10(3). - P. 469-82. doi: 10.1158/1541-7786.
5. Li, R; Hu, Z; Sun, SY; Chen, ZG; Owonikoko, TK; Sica, GL; Ramalingam, SS; Curran, WJ; Khuri, FR; Deng, X. Niclosamide overcomes acquired resistance to erlotinib through suppression of STAT3 in non-small cell lung cancer // Molecular Cancer Therapeutics. - 2013. - Vol. 12(10). - P. 2200-2212. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-13-0095.
6. Ye, T; Xiong, Y; Yan, Y; Xia, Y; Song, X; Liu, L; Li, D; Wang, N; Zhang, L; Zhu, Y; Zeng, J; Wei, Y; Yu, L. The anthelmintic drug niclosamide induces apoptosis, impairs metastasis and reduces immunosuppressive cells in breast cancer model // PLoS One. - 2014. - Vol. 9(1). - P. 85887. doi: 10.1371/journal.pone.0085887.
7. Jin, Y; Lu, Z; Ding, K; Li, J; Du, X; Chen, C; Sun, X; Wu, Y; Zhou, J; Pan, J. Antineoplastic mechanisms of niclosamide in acute myelogenous leukemia stem cells: inactivation of the NF-kappaB pathway and generation of reactive oxygen species // Cancer Res. - 2010. - Vol. 70(6). - P. 2516-27. doi: 10.1158/0008-5472.
8. Wieland, A; Trageser, D; Gogolok, S; Reinartz, R; 
Keller, M; Leinhaas, A; Schelle, R; Normann, S; Klaas, L; Waha, A; Koch, P; Fimmers, R; Pietsch, T; Yachnis, AT; Pincus, DW; Steindler, DA; 
Simon, M; Glas, M; Scheffler, B. Anticancer effects of niclosamide in human glioblastoma // Clin Cancer Res. - 2013. - Aug 1. - Vol. 19(15). - P. 4124-36. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-12-2895.
9. Sack, U; Walther, W; Scudiero, D; Selby, M; Aumann, J; Lemos, C; Fichtner, I; Schlag, PM; Shoemaker, RH; Stein, U. S100A4-induced cell motility and metastasis is restricted by the Wnt/β-catenin pathway inhibitor calcimycin in colon cancer cells // Mol Biol Cell. - 2011. - Vol. 22(18). - P. 3344-54. doi: 10.1091/mbc.E10-09-0739
10. Wang, YC; Chao, TK; Chang, CC; Yo, YT; Yu, MH; Lai, HC. Drug screening identifies niclosamide as an inhibitor of breast cancer stem-like cells // PLoS One. - 2013. - Sep 18. - Vol. 8(9). - P. 74538. doi: 10.1371/journal.pone.0074538.
11. Патент Китая CN 1883266 A на изобретение, опубл. 27.12.2006.
12. Патент Китая CN 1067515 C на изобретение, опубл. 27.06.2001.
13. Bharathi Devarakonda, Ronald A. Hill, Wilna Liebenberg, Marius Brits, Melgardt M. de Villiers Comparison of the aqueous solubilization of practically insoluble niclosamide by polyamidoamine (PAMAM) dendrimers and cyclodextrins // International Journal of Pharmaceutics - 2005 - Vol. 304. - P. 193-209.
14. Poornima Dubey and Gopinath P. Fabrication of electrospun poly(ethylene oxide) - poly(capro lactone) composite nanofibers for co-delivery of niclosamide and silver nanoparticles exhibits enhanced anti-cancer effects in vitro // Journal of Materials Chemistry В - JANUARY 2016.
15. Meng-Yi Bai, Hui-Ching Yang Fabrication of novel niclosamide-suspension using an electrospray system to improve its therapeutic effects in ovarian cancer cells in vitro // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects - 2013 - Vol. 419 - P. 248-256.
16. Makadia, H.K.; Siegel, S.J. Poly Lactic-co-Glycolic Acid (PLGA) as Biodegradable Controlled // Drug Delivery Carrier Polymers. - 2011. - Vol. 3. - P. 1377-1397.
17. Semete, В.; Booysen, L.; Lemmer, Y.; Kalombo, L.; Katata, L.; Verschoor, J.; Swai, H. In vivo evaluation of the biodistribution and safety of PLGA nanoparticles as drug delivery systems // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. - 2010. - Vol. 6. - P. 662-671.
18. Stevanovic, M.; Uskokovic, D. Poly(lactide-co-glycolide)-based Micro and Nanoparticles for the Controlled Drug Delivery of Vitamins // Current Nanoscience. - 2009. - Vol. 5(1). - P. 1-14.
19. Caputoa A., Castaldelloa A., Brocca-Cofanoa E., Voltana R., Bortolazzia F., Altavillab G, Sparnacci с K, Lausc M, Induction of humoral and enhanced cellular immune responses by novel core-shell nanosphere- and microsphere-based vaccine formulations following systemic and mucosal administration. // Vaccine 2009. V. 27. P. 3605-3615.
20. Pignatello R., Ricupero N., Bucolo C., et al. Preparation and Characterization of Eudragit Retard Nanosuspensions for the Ocular Delivery of Cloricromene. // AAPS Pharm. Sci. Tech. 2006; V. 7(2). Article 27.
21. Morgen M., Tung D., Boras В., Miller W., Malfait A.-M., Tortorella M. Nanoparticles for Improved Local Retention after Intra-Articular Injection into the Knee Joint. // Pharm. Res. 2013. V. 30. P. 257-268.
22. Joshi M. Role of Eudragit in Targeted Drug Delivery. // Intern. J. Current Pharm. Res. 2013. V. 5 (2). P. 58-62.
Claims (3)
1. Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида, включающее биодеградируемый полимер в виде сополимера молочной и гликолевой кислот с молярным соотношением мономерных звеньев 50 на 50%, полимеры эудрагит Eudragit RS РО или эудрагит Eudragit RL РО, поверхностно-активное вещество в виде поливинилового спирта, криопротектор в виде D-маннитола, представляющее собой частицы субмикронного размера со средним размером не более 500 нм, следующего состава, мас.%:
2. Противоопухолевое лекарственное средство по п. 1, отличающееся тем, что оно выполнено в виде капсул, или гранул, или порошка или другой пероральной формы, или в виде лиофилизата, или суспензии для инъекций.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016118486A RU2617049C1 (ru) | 2016-05-12 | 2016-05-12 | Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016118486A RU2617049C1 (ru) | 2016-05-12 | 2016-05-12 | Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2617049C1 true RU2617049C1 (ru) | 2017-04-19 |
Family
ID=58642694
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016118486A RU2617049C1 (ru) | 2016-05-12 | 2016-05-12 | Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2617049C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021201796A1 (en) * | 2020-04-01 | 2021-10-07 | Imuneks Farma Ilac San. Ve Tic.A.S | Targeted release of niclosamide compositions with high solubility and bioavailability |
| WO2022101623A1 (en) * | 2020-11-10 | 2022-05-19 | The University Of Liverpool | Pharmaceutically active compound formulations |
| EP4019002A4 (en) * | 2019-08-23 | 2023-03-01 | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd | NICLOSAMIDE DELAYED RELEASE COMPOSITION AND ANTIVIRAL USE |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5980948A (en) * | 1996-08-16 | 1999-11-09 | Osteotech, Inc. | Polyetherester copolymers as drug delivery matrices |
| WO2011084618A2 (en) * | 2009-12-16 | 2011-07-14 | Nod Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for oral drug delivery |
-
2016
- 2016-05-12 RU RU2016118486A patent/RU2617049C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5980948A (en) * | 1996-08-16 | 1999-11-09 | Osteotech, Inc. | Polyetherester copolymers as drug delivery matrices |
| WO2011084618A2 (en) * | 2009-12-16 | 2011-07-14 | Nod Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for oral drug delivery |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Meng-Yi Bai, Hui-Ching Yang. Fabrication of novel niclosamide-suspension using an electrospray system to improve its therapeutic effects in ovarian cancer cells in vitro // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects - 2013 - Vol. 419 - P. 248-256. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4019002A4 (en) * | 2019-08-23 | 2023-03-01 | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd | NICLOSAMIDE DELAYED RELEASE COMPOSITION AND ANTIVIRAL USE |
| WO2021201796A1 (en) * | 2020-04-01 | 2021-10-07 | Imuneks Farma Ilac San. Ve Tic.A.S | Targeted release of niclosamide compositions with high solubility and bioavailability |
| WO2022101623A1 (en) * | 2020-11-10 | 2022-05-19 | The University Of Liverpool | Pharmaceutically active compound formulations |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vijayakumar et al. | Intravenous administration of trans-resveratrol-loaded TPGS-coated solid lipid nanoparticles for prolonged systemic circulation, passive brain targeting and improved in vitro cytotoxicity against C6 glioma cell lines | |
| Saneja et al. | Gemcitabine and betulinic acid co-encapsulated PLGA− PEG polymer nanoparticles for improved efficacy of cancer chemotherapy | |
| Wu et al. | Preparation and biological activity studies of resveratrol loaded ionically cross-linked chitosan-TPP nanoparticles | |
| Zhang et al. | TPGS-g-PLGA/Pluronic F68 mixed micelles for tanshinone IIA delivery in cancer therapy | |
| Liang et al. | Self-assembled zein–sodium carboxymethyl cellulose nanoparticles as an effective drug carrier and transporter | |
| Chen et al. | Formulation, characterization and evaluation of curcumin-loaded PLGA-TPGS nanoparticles for liver cancer treatment | |
| Singh et al. | Macrophage-targeted chitosan anchored PLGA nanoparticles bearing doxorubicin and amphotericin B against visceral leishmaniasis | |
| Jing et al. | A novel polyethylene glycol mediated lipid nanoemulsion as drug delivery carrier for paclitaxel | |
| Jan et al. | In vitro anti-leukemic assessment and sustained release behaviour of cytarabine loaded biodegradable polymer based nanoparticles | |
| Guo et al. | Synergistic anti-tumor activity of paclitaxel-incorporated conjugated linoleic acid-coupled poloxamer thermosensitive hydrogel in vitro and in vivo | |
| Wang et al. | Biodegradable polymeric micelles coencapsulating paclitaxel and honokiol: a strategy for breast cancer therapy in vitro and in vivo | |
| Zhou et al. | Shape regulated anticancer activities and systematic toxicities of drug nanocrystals in vivo | |
| Chu et al. | PEG-derivatized octacosanol as micellar carrier for paclitaxel delivery | |
| Patra et al. | Nanodelivery and anticancer effect of a limonoid, nimbolide, in breast and pancreatic cancer cells | |
| Mohamed et al. | Enhanced in vitro cytotoxicity and anti-tumor activity of vorinostat-loaded pluronic micelles with prolonged release and reduced hepatic and renal toxicities | |
| Gupta et al. | An insight into potential of nanoparticles-assisted chemotherapy of cancer using gemcitabine and its fatty acid prodrug: a comparative study | |
| RU2617049C1 (ru) | Противоопухолевое лекарственное средство на основе никлозамида | |
| Maity et al. | Flavonoid-based polymeric nanoparticles: A promising approach for cancer and diabetes treatment | |
| Li et al. | In situ gel-forming dual drug delivery system for synergistic combination therapy of colorectal peritoneal carcinomatosis | |
| Alinezhad et al. | Utilization of curcumine and nanocurcumine compounds in cancer therapy | |
| Baviskar et al. | Development and evaluation of N-acetyl glucosamine-decorated vitamin-E-based micelles incorporating resveratrol for cancer therapy | |
| Kzar et al. | Everolimus loaded NPs with FOL targeting: preparation, characterization and study of its cytotoxicity action on MCF-7 breast cancer cell lines | |
| Zu et al. | Docetaxel-loaded bovine serum albumin nanoparticles conjugated docosahexaenoic acid for inhibiting lung cancer metastasis to bone | |
| Malekpour et al. | Combination nanochemotherapy of brain tumor using polymeric nanoparticles loaded with doxorubicin and paclitaxel: An in vitro and in vivo study | |
| Dadashzadeh et al. | 9-nitrocamptothecin polymeric nanoparticles: cytotoxicity and pharmacokinetic studies of lactone and total forms of drug in rats |