RU2559576C1 - Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex - Google Patents
Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex Download PDFInfo
- Publication number
- RU2559576C1 RU2559576C1 RU2014123183/15A RU2014123183A RU2559576C1 RU 2559576 C1 RU2559576 C1 RU 2559576C1 RU 2014123183/15 A RU2014123183/15 A RU 2014123183/15A RU 2014123183 A RU2014123183 A RU 2014123183A RU 2559576 C1 RU2559576 C1 RU 2559576C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ppsb
- prothrombin complex
- virus
- vii
- complete prothrombin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 title claims abstract description 30
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 title claims abstract description 30
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 claims description 34
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims description 7
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims description 7
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 5
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 14
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 abstract 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 208000019060 congenital factor VII deficiency Diseases 0.000 description 12
- 201000007386 factor VII deficiency Diseases 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 4
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 239000013622 capto Q Substances 0.000 description 4
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N acenocoumarol Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- 108010079356 FIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010016803 Fluid overload Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 1
- 206010023129 Jaundice cholestatic Diseases 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000005267 Obstructive Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000007587 Transfusion-Related Acute Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 201000000839 Vitamin K Deficiency Bleeding Diseases 0.000 description 1
- 206010047634 Vitamin K deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108091005605 Vitamin K-dependent proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 208000025341 autosomal recessive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 208000014522 congenital prothrombin deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000005376 factor X deficiency Diseases 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- NFBAXHOPROOJAW-UHFFFAOYSA-N phenindione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C1C1=CC=CC=C1 NFBAXHOPROOJAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 229940024790 prothrombin complex concentrate Drugs 0.000 description 1
- 229960001148 rivaroxaban Drugs 0.000 description 1
- KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N rivaroxaban Chemical compound S1C(Cl)=CC=C1C(=O)NC[C@@H]1OC(=O)N(C=2C=CC(=CC=2)N2C(COCC2)=O)C1 KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940078499 tricalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019731 tricalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 208000016794 vitamin K deficiency hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 229940019333 vitamin k antagonists Drugs 0.000 description 1
- -1 warfarex Chemical compound 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и биотехнологии и касается способа получения лиофилизированного препарата полного протромбинового комплекса с соотношением факторов свертывания крови II, VII, IX и X, близким 1:1:1:1, из плазмы крови.The invention relates to the field of pharmaceutical industry and biotechnology and relates to a method for producing a lyophilized preparation of a complete prothrombin complex with a ratio of coagulation factors II, VII, IX and X close to 1: 1: 1: 1 from blood plasma.
Протромбиновый комплекс - это группа гликопротеинов плазмы крови, включающая факторы ее свертывания - II, VII, IX и X (FII, FVII, FIX и FX), а также регуляторные белки С и S. Протромбиновые комплексы разделяют на полные (PPSB), в которых соотношение факторов II, VII, IX и X близко 1:1:1:1 и частичные (РСС), в которых фактор VII содержится в следовых количествах.The prothrombin complex is a group of blood plasma glycoproteins, including coagulation factors - II, VII, IX and X (FII, FVII, FIX and FX), as well as regulatory proteins C and S. Prothrombin complexes are divided into complete (PPSB), in which the ratio of factors II, VII, IX, and X is close to 1: 1: 1: 1 and partial (RCC), in which factor VII is contained in trace amounts.
Протромбиновые комплексы с различным количеством фактора VII широко использовались для лечения гемофилии В, но их постепенно заменили концентраты высокоочищенного фактора FIX. В настоящее время основным показанием для применения PPSB является реверсия эффекта «непрямых» антикоагулянтов антагонистов витамина K, в чем они демонстрируют высокую эффективность. Широко используются концентраты протромбинового комплекса и за пределами основного показания. В первую очередь речь идет о тяжелых коагулопатических кровотечениях, сопровождающихся дефицитом протромбинового комплекса, в особенности в случае ограничений для использования СЗП или КСН (высокий риск объемной перегрузки, синдром TRALI, отказ пациента от трансфузий).Prothrombin complexes with different amounts of factor VII were widely used to treat hemophilia B, but they were gradually replaced by concentrates of highly purified factor FIX. Currently, the main indication for the use of PPSB is the reversal of the effect of "indirect" anticoagulants of vitamin K antagonists, in which they demonstrate high efficiency. Concentrates of the prothrombin complex are widely used outside the main indication. First of all, we are talking about severe coagulopathic bleeding accompanied by a deficiency of the prothrombin complex, especially in case of restrictions on the use of FFP or CHF (high risk of volume overload, TRALI syndrome, patient refusal to transfusion).
Выделяют следующие клинические ситуации, при которых наблюдается дефицит витамин K-зависимых факторов:The following clinical situations are distinguished in which a deficiency of vitamin K-dependent factors is observed:
1. Медикаментозные неиммунные влияния антикоагулянтов «непрямого» действия (варфарин, варфарекс, синкумар, фенилин, синтром, маркумар и др.).1. Medication non-immune effects of anticoagulants of "indirect" action (warfarin, warfarex, syncumar, phenyline, syntrom, markumar, etc.).
2. Геморрагическая болезнь новорожденных.2. Hemorrhagic disease of the newborn.
3. Все виды шока, тяжелые травмы, терминальные состояния (в том числе при обильной кровопотере).3. All types of shock, severe injuries, terminal conditions (including with heavy blood loss).
4. Обтурационная желтуха (поражения паренхимы печени).4. Obstructive jaundice (damage to the liver parenchyma).
5. Тяжелые энтеропатии (особенно у детей в возрасте до 3 лет) и медикаментозные кишечные дисбактериозы, обусловленные длительным применением антибиотиков широкого спектра действия и других антибактериальных препаратов.5. Severe enteropathy (especially in children under the age of 3 years) and drug-induced intestinal dysbiosis due to the prolonged use of broad-spectrum antibiotics and other antibacterial drugs.
6. Заболевания печени - инфекционные, токсические, паразитарные, аутоиммунные, цирроз и рак печени: нарушение синтеза в печени плазменных факторов свертывания - VII, IX, Χ, II, V, VIII, протеинов С и S и ряда других, при ахолии усиливается дефицит витамин K-зависимых факторов (VII, IX, Χ, II, протеинов С и S).6. Liver diseases - infectious, toxic, parasitic, autoimmune, cirrhosis and liver cancer: impaired synthesis of plasma coagulation factors in the liver - VII, IX, Χ, II, V, VIII, proteins C and S and a number of others, with acholy, the deficiency worsens vitamin K-dependent factors (VII, IX, Χ, II, proteins C and S).
7. Нефротический синдром (потеря витамин K-зависимых белков с мочой).7. Nephrotic syndrome (loss of vitamin K-dependent proteins in the urine).
8. Системный амилоидоз - дефицит фактора X (сорбция фактора X амилоидом).8. Systemic amyloidosis - factor X deficiency (sorption of factor X by amyloid).
9. Иммунные и аутоиммунные заболевания - продукция антител к отдельным факторам свертывания. Врожденный дефицит факторов IX (гемофилия В), X (болезнь Стюарта-Пауэра), II (гипопротром-бинемия), VII (гипопроконвертинемия).9. Immune and autoimmune diseases - production of antibodies to individual coagulation factors. Congenital deficiency of factors IX (hemophilia B), X (Stewart-Power disease), II (hypoprotromine-binemia), VII (hypoproconvertinemia).
Эффективным оказалось использование PPSB для реверсии антикоагулянтного эффекта прямого ингибитора активированного фактора X (Ха) - ривароксабана. Описаны случаи успешного применения концентрата протромбинового комплекса при лечении гепариноподобного синдрома.The use of PPSB for reversing the anticoagulant effect of a direct inhibitor of activated factor X (Xa), rivaroxaban, proved to be effective. Cases of successful use of the prothrombin complex concentrate in the treatment of heparin-like syndrome are described.
Так же PPSB используется при врожденном дефиците протромбина. Такая патология является редким аутосомно-рецессивным заболеванием описанном в виде смешанного дефицита факторов II, VII, IX, X и протеинов С и S. Концентраты очищенного протромбина не производятся, коррекция дефицита достигается применением протромбинового комплекса.PPSB is also used for congenital prothrombin deficiency. Such a pathology is a rare autosomal recessive disease described as a mixed deficiency of factors II, VII, IX, X and proteins C and S. Concentrates of purified prothrombin are not produced, deficiency correction is achieved by using the prothrombin complex.
Для характеристики концентратов протромбинового комплекса используют термин «специфическая активность» плазматических факторов свертывания II, IIa, VII, IX, X. Количественно данные параметры определяют методом коагулометрии в Международных Единицах (ME).To characterize the prothrombin complex concentrates, the term “specific activity” of plasma coagulation factors II, IIa, VII, IX, X is used. Quantitatively, these parameters are determined by the method of coagulation in International Units (ME).
Одна Международная Единица активности FII, FVII, FIX, FX эквивалентна активности соответствующего фактора, содержащегося в 1 мл нормальной человеческой плазмы. Одна ME активности FIIa эквивалентна такому количеству препарата, которое способно свернуть при температуре +37°C 1 мл нормальной человеческой плазмы за 30 с или 1 мл 0.1% раствора очищенного фибриногена за 15 с.One International Unit of Activity FII, FVII, FIX, FX is equivalent to the activity of the corresponding factor contained in 1 ml of normal human plasma. One ME of FIIa activity is equivalent to the amount of the drug that can coagulate at a temperature of + 37 ° C 1 ml of normal human plasma in 30 s or 1 ml of a 0.1% purified fibrinogen solution in 15 s.
Протромбиновый комплекс является белковым препаратом, поэтому, как и другие белки, применяемые для лечебных целей, он может быть неустойчивым при хранении. Стабильность - одна из проблем, которая решается при разработке технологии производства препарата. Согласно существующим требованиям восстановленный концентрат должен быть стабилен, по крайней мере, в течение 12 часов.The prothrombin complex is a protein preparation, therefore, like other proteins used for medicinal purposes, it can be unstable during storage. Stability is one of the problems that is solved when developing the technology for the production of the drug. According to existing requirements, the reconstituted concentrate must be stable for at least 12 hours.
Другая проблема связана с использованием плазмы - это необходимость защиты реципиентов от вирусов, которые потенциально могут содержаться в крови доноров.Another problem associated with the use of plasma is the need to protect recipients from viruses that could potentially be in the blood of donors.
Поэтому важными и ответственными в производственном цикле являются стадии химической и/или тепловой вирусной инактивации.Therefore, the stages of chemical and / or thermal viral inactivation are important and responsible in the production cycle.
Во второй половине 80-х годов был разработан и внедрен новый метод вирусной инактивации - сольвент/детергентный (S/D метод), который впоследствии взяли на вооружение многие компании. Этот метод является неспецифическим и позволяет инактивировать все вирусы с липидной оболочкой: в частности ВИЧ, вирусы гепатита С и В, а также возможные неизвестные вирусы с липидной оболочкой. Вирусы ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С являются наиболее патогенными, поскольку имеют относительно сложное строение и легче преодолевают иммунный барьер. Однако S/D обработка столь действенна, что вирусная нагрузка в 1000000000 частиц на миллилитр устраняется менее чем за 2 минуты. Тем не менее S/D обработку для многих препаратов выполняют в течение 4-24 часов, что обеспечивает высокий уровень вирусной безопасности. Применяемые детергенты TWEEN-80 или Triton-X-100 в сочетании с гидрофобным растворителем три-n-бутилфосфатом (TnBP) разрушают липопротеиновые оболочки вирусов. Оставшиеся фрагменты нуклеиновых кислот не обладают патогенным действием и удаляются на последующих этапах очистки препарата. Эффективность S/D метода зависит от температуры и времени воздействия. S/D метод также применяется в качестве метода вирусной инактивации при изготовлении рекомбинантных препаратов.In the second half of the 80s, a new method of viral inactivation was developed and introduced - the solvent / detergent (S / D method), which many companies subsequently adopted. This method is nonspecific and allows inactivation of all viruses with a lipid membrane: in particular HIV, hepatitis C and B viruses, as well as possible unknown viruses with a lipid membrane. The viruses of HIV infection, hepatitis B and C are the most pathogenic, as they have a relatively complex structure and are easier to overcome the immune barrier. However, S / D processing is so effective that a viral load of 1,000,000,000 particles per milliliter is eliminated in less than 2 minutes. Nevertheless, S / D treatment for many drugs is performed within 4-24 hours, which ensures a high level of viral safety. Detergents TWEEN-80 or Triton-X-100 used in combination with a hydrophobic solvent, tri-n-butylphosphate (TnBP) destroy lipoprotein coatings of viruses. The remaining fragments of nucleic acids do not have a pathogenic effect and are removed at subsequent stages of drug purification. The effectiveness of the S / D method depends on temperature and exposure time. The S / D method is also used as a method of viral inactivation in the manufacture of recombinant preparations.
Тепловой способ вирусной инактивации применяется на лиофилизированных препаратах для воздействия на оболочечные вирусы (ВИЧ, гепатиты В и С) и на вирусы, не имеющие оболочек (гепатит А, парвовирус В19). Эффективность данной вирусной инактивации зависит от комбинации нескольких факторов воздействия на вирус: температурного режима, экспозиции установленной температуры, физическое состояние препарата, содержание соли, природы и концентрации стабилизатора. Последний необходим для сохранения качества и гемостатической активности препарата. Тепловой режим варьируется от 60°C до 100°C, экспозиция от 30 минут до 72 часов. В настоящее время многими фирмами применяется так называемый «тепловой шок»: температурный режим 100°C в течение 30 минут.The thermal method of viral inactivation is used on lyophilized preparations to act on enveloped viruses (HIV, hepatitis B and C) and on viruses without membranes (hepatitis A, parvovirus B19). The effectiveness of this viral inactivation depends on a combination of several factors influencing the virus: temperature, exposure to the set temperature, physical condition of the drug, salt content, nature and concentration of the stabilizer. The latter is necessary to maintain the quality and hemostatic activity of the drug. Thermal conditions vary from 60 ° C to 100 ° C, exposure from 30 minutes to 72 hours. Currently, many firms use the so-called “heat shock”: temperature conditions of 100 ° C for 30 minutes.
Помимо S/D метода и тепловой обработки третьим методом инактивации вирусов является нанофильтрация, нацеленная на безоболочечные вирусы. Это весьма действенный метод, хотя он и уступает в эффективности S/D и тепловой обработкам. С другой стороны, патогенность безоболочечных вирусов не так высока, и они преимущественно передаются пероральным и воздушно-капельным путями.In addition to the S / D method and heat treatment, the third method of virus inactivation is nanofiltration, aimed at non-enveloped viruses. This is a very effective method, although it is inferior in S / D efficiency and heat treatments. On the other hand, the pathogenicity of non-enveloped viruses is not so high, and they are predominantly transmitted by the oral and airborne routes.
Не редко производители препаратов плазмы комбинируют выше упомянутые способы обеспечения вирусной безопасности.It is not uncommon for manufacturers of plasma preparations to combine the above-mentioned methods for ensuring viral safety.
Сегодня в мире существует достаточное большое количество препаратов полного протромбинового комплекса, выделенных из плазмы («Prothromplex-Τ» («Baxter», Австрия), «Beriplex» («Aventis Behring», Германия), «Octaplex» («Octapharma», Австрия), «KASKADIL» («LFB France», Франция) и др.). Рекомбинантных аналогов таких препаратов не существует, поскольку для их изготовления понадобилось бы организовать производство сразу четырех белков (FII, FVII, FIX и FX), что естественно коммерчески не целесообразно.Today in the world there is a sufficiently large number of preparations of the complete prothrombin complex isolated from plasma (Prothromplex-Τ (Baxter, Austria), Beriplex (Aventis Behring, Germany), Octaplex (Octapharma, Austria ), "KASKADIL" ("LFB France", France), etc.). There are no recombinant analogues of such drugs, since for their manufacture it would be necessary to organize the production of four proteins at once (FII, FVII, FIX and FX), which is naturally not commercially feasible.
Концентраты PPSB высокоэффективны и вирусбезопасны, но, к сожалению, весьма дорогостоящи, также следует учитывать тот факт, что российских аналогов препаратов протромбинового комплекса просто не существует.PPSB concentrates are highly effective and virus-safe, but, unfortunately, very expensive, one should also take into account the fact that Russian analogues of prothrombin complex preparations simply do not exist.
До 1954 года единственным доступным препаратом PPSB была свежезамороженная плазма. В последующие годы были предприняты попытки использовать для выделения PPSB различные минеральные адсорбенты. Исходным материалом для получения протромбинового комплекса могут служить, например, криосупернатант (КCH) или фракция II+III Кона. Адсорбция PPSB на таких минеральных веществах как, например, трикальций фосфат, сульфат бария, гидроксид алюминия, и гидроксиапатит, оптимизировалась на протяжении многих лет. С помощью этих методов достигается выделение FII, FVII, FIX и FX с удельной активностью примерно 2.0, 1.0, 2.5 и 2.5 МЕ/мг белка соответственно (патент США 4411794 А).Until 1954, the only available PPSB was freshly frozen plasma. In subsequent years, attempts were made to use various mineral adsorbents to isolate PPSB. The starting material for the preparation of the prothrombin complex can be, for example, cryosupernatant (KCH) or Kona fraction II + III. PPSB adsorption on minerals such as tricalcium phosphate, barium sulfate, aluminum hydroxide, and hydroxyapatite has been optimized over the years. Using these methods, the isolation of FII, FVII, FIX, and FX with specific activity of about 2.0, 1.0, 2.5, and 2.5 IU / mg protein, respectively, is achieved (US Pat. No. 4,411,794 A).
В 1965 году для концентрирования PPSB была предложена анионообменная хроматография в объеме. Таким способом получают, например, «Prothromplex-Τ», который в настоящее время является наиболее распространенным коммерческим препаратом PPSB в России.In 1965, bulk anion exchange chromatography was proposed to concentrate PPSB. In this way, for example, Prothromplex-получают is obtained, which is currently the most common commercial PPSB preparation in Russia.
В качестве наиболее близкого аналога (прототипа) может быть указан способ выделения протромбинового комплекса за счет сорбции в объеме на DEAE-Sephadex А50, описанный в ряде источников (например, патенты США 3717708 А, 4272523 А, 4404132 А), при этом PPSB, получаемый таким способом, имеет низкую удельную активность, а ее увеличение, в свою очередь, приводит к уменьшению выхода, прежде всего по FVII.As the closest analogue (prototype), a method for isolating the prothrombin complex due to sorption in volume on DEAE-Sephadex A50, described in a number of sources (for example, US patents 3,717,708 A, 4,272,523 A, 4,404,132 A) can be indicated, while the PPSB obtained in this way, has a low specific activity, and its increase, in turn, leads to a decrease in yield, primarily by FVII.
Выше приведенные способы очистки PPSB из плазмы крови человека более трудоемкие и обладает дополнительными рисками контаминации полупродукта по сравнению с колоночной хроматографией, которая гораздо лучше отвечает современным требованиям GMP.The above methods for the purification of PPSB from human blood plasma are more time-consuming and have additional risks of contamination of the intermediate in comparison with column chromatography, which meets the modern GMP requirements much better.
Задача настоящего изобретения заключалась в разработке технологий выделения и очистки протромбинового комплекса с высоким содержанием фактора VII методом колоночной хроматографии.The objective of the present invention was to develop technologies for the isolation and purification of prothrombin complex with a high content of factor VII by column chromatography.
Указанная задача решается новым способом получения лиофилизированного вирусбезопасного полного протромбинового комплекса, с соотношением FII, FVII, FIX и FX, близким 1:1:1:1.This problem is solved by a new method of obtaining a lyophilized virus-safe complete prothrombin complex, with a ratio of FII, FVII, FIX and FX, close to 1: 1: 1: 1.
Способ получения препарата заключается в выделение криосупернатанта (КСН) из свежезамороженной плазмы (СЗП) в процессе первичного криофракционирования по методу J. Newman. Затем из КСН методом анионообменной хроматографии выделяется протромбиновый комплекс (PPSB), который подвергается вирусной инактивации сольвент/детергентным методом и фракционированию на положительно заряженном сорбенте с использованием буферных растворов разной ионной силы для удаления части балластных белков, S/D, а также продуктов деградации, образующихся в процессе вирусной инактивации. На последнем этапе производства полный протромбиновый комплекс стерилизуют и переводят в лиофилизированную форму. На схеме 1 представлена последовательность стадий производства полного протромбинового комплекса согласно данному методу.The method of obtaining the drug consists in the isolation of cryosupernatant (SPF) from freshly frozen plasma (FFP) in the process of primary cryofractionation according to the method of J. Newman. Then, the prothrombin complex (PPSB) is separated from SPE by anion exchange chromatography, which is subjected to viral inactivation by the solvent / detergent method and fractionation on a positively charged sorbent using buffer solutions of different ionic strengths to remove part of the ballast proteins, S / D, as well as degradation products formed in the process of viral inactivation. At the last stage of production, the complete prothrombin complex is sterilized and converted into a lyophilized form. Figure 1 shows the sequence of stages of production of a complete prothrombin complex according to this method.
Предложенное сочетание и последовательность стадий очистки, условия обработки и фракционирования в предлагаемом способе позволяют решить трудности, связанные с оптимизацией процесса получения PPSB, позволяют получать относительно чистый препарат при сохранении высокого выхода всех четырех факторов, обеспечить вирусную безопасность, стабильность при хранении и удобство применения готовой формы. Для выделения протромбинового комплекса из КСН могут использоваться различные сорбенты, несущие различные положительно заряженные группы (DEAE, ТМАЕ, QAE, ТАМ, АЕ, Q и т.п.), способные сорбировать значительное количество фактора VII, например TOYOPEARL GigaCap Q-650M («TOSOH BIOSCIENCE)), Япония), Capto Q, DEAE-Sephadex A50 или QAE-Sephadex A50 («GE HealthCare», США). Также PPSB из KCH может быть выделение адсорбцией на минеральных веществах (Ca3PO4, Al(ОН)3 и др.)The proposed combination and sequence of stages of purification, processing and fractionation conditions in the proposed method can solve the difficulties associated with the optimization of the PPSB production process, allow to obtain a relatively pure preparation while maintaining a high yield of all four factors, ensure viral safety, storage stability and ease of use of the finished form . Various sorbents carrying various positively charged groups (DEAE, TMAE, QAE, TAM, AE, Q, etc.) capable of sorbing a significant amount of factor VII, for example, TOYOPEARL GigaCap Q-650M (" TOSOH BIOSCIENCE)), Japan), Capto Q, DEAE-Sephadex A50 or QAE-Sephadex A50 (GE HealthCare, USA). Also PPSB from KCH may be adsorption on minerals (Ca 3 PO 4 , Al (OH) 3 , etc.)
Для регулирования pH в способе предпочтительно использовать 0.5 Μ растворы уксусной кислоты или Tris.To adjust the pH in the method, it is preferable to use 0.5 Μ solutions of acetic acid or Tris.
Обычно вирусная инактивация производится путем перемешивания аРСС с 1% Tween 80 и 0.3% TnBP в течение от 4 до 24 ч. В качестве стабилизаторов могут использоваться, например, различные сочетания концентраций лизина и глицина.Usually, viral inactivation is carried out by mixing ARCC with 1% Tween 80 and 0.3% TnBP for 4 to 24 hours. For example, various combinations of lysine and glycine concentrations can be used as stabilizers.
Удаление S/D, очистку аРСС от тромбина, а также от балластных белков и продуктов деградации проводят анионообменной колоночной хроматографией с использованием различных сорбентов, например TOYOPEARL GigaCap Q-650M или Capto Q.Removal of S / D, purification of APCC from thrombin, as well as from ballast proteins and degradation products, is carried out by anion exchange column chromatography using various sorbents, for example TOYOPEARL GigaCap Q-650M or Capto Q.
Буферный раствор, используемый для фракционирования, содержит оптимально Tris, цитрат натрия, хлорид натрия, воду для инъекций, pH 7.55-7.65. Одним из условий фракционирования является изменение концентрации натрия хлорида в сторону увеличения. В приведенной ниже таблице 1 представлены параметры используемых буферов в процессе очистки PPSB.The buffer solution used for fractionation contains optimally Tris, sodium citrate, sodium chloride, water for injection, pH 7.55-7.65. One of the conditions for fractionation is a change in the concentration of sodium chloride in the direction of increase. Table 1 below shows the parameters of the buffers used during the PPSB flushing process.
В полученном растворе PPSB корректируют содержание хлорида натрия, цитрата натрия и pH до уровня, близкого к физиологическому (137 мМ NaCl, 13.5 мМ CitNa3 и pH 7.34), затем раствор концентрируют и стерильно фильтруют оптимально в 3 этапа через мембранные микрофильтры с размерами пор 2-8 мкм, 1.2 мкм и, наконец, 0.65 мкм. После чего концентрат активированного протромбинового комплекса стерильно разливают по флаконам объемом 50 мл и подвергают лиофильной сушке.In the resulting PPSB solution, the content of sodium chloride, sodium citrate and pH is adjusted to a level close to physiological (137 mM NaCl, 13.5 mM CitNa 3 and pH 7.34), then the solution is concentrated and sterile filtered optimally in 3 stages through membrane microfilters with pore size 2 -8 microns, 1.2 microns and finally 0.65 microns. After that, the concentrate of the activated prothrombin complex is sterilely poured into 50 ml vials and subjected to freeze drying.
Ниже представлены конкретные примеры осуществления изобретения.The following are specific examples of carrying out the invention.
Пример 1Example 1
Колонку заполняют сорбентом TOYOPEARL GigaCap Q-650M, который уравновешивают буфером А (80 мМ NaCl, 20 мМ CitNa3, pH 7.60), после чего на него со скоростью 60 см/ч наносят образец криосупернатанта, объем КCH определяли из расчета 25 ME FVII/мл геля. Для удаления не связанных белков сорбент промывают буфером А, десорбцию протромбинового комплекса проводят буфером В (500 мМ NaCl, 20 мМ CitNa3, pH 7.60), сорбент подвергают регенерации. Выход PPSB по факторам II, VII, IX и X составлял 88.9%, 85.6%, 85.2% и 87.6% соответственно.The column was filled with the TOYOPEARL GigaCap Q-650M sorbent, which was equilibrated with buffer A (80 mM NaCl, 20 mM CitNa 3 , pH 7.60), after which a cryosupernatant sample was applied at a speed of 60 cm / h, the KCH volume was determined from 25 ME FVII / ml of gel. To remove unbound proteins, the sorbent is washed with buffer A, the prothrombin complex is desorbed with buffer B (500 mM NaCl, 20 mM CitNa 3 , pH 7.60), and the sorbent is regenerated. The yield of PPSB for factors II, VII, IX, and X was 88.9%, 85.6%, 85.2%, and 87.6%, respectively.
Пример 2Example 2
Способ, аналогичный описанному в примере 1, отличающийся тем, что очистку PPSB проводят с помощью сорбента Capto Q. Выход PPSB по факторам II, VII, IX и X составлял 87.6%, 89.9%, 85.4% и 85.9% соответственно.A method similar to that described in example 1, characterized in that the purification of PPSB is carried out using a Capto Q sorbent. The yield of PPSB by factors II, VII, IX and X was 87.6%, 89.9%, 85.4% and 85.9%, respectively.
Пример 3Example 3
Свежезамороженную плазму размораживают при 35°C при непрерывном перемешивании, после того как температура смеси достигает 0-+4°C, криоприципитат отделяют проточным центрифугированием при 4000 об/мин при температуре 0°C. pH полученного криосупернатанта до 7.60 доводят 1.0М гидроксидом натрия, затем к КCH медленно при перемешивании добавляют сухой DEAE- или QAE-Sephadex А50 из расчета 1.5 г/л КCH, суспензию перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Сорбент отделяют на колонне и промывают буфером А (80 мМ NaCl, 20 мМ CitNa3, pH 7.60), протромбиновый комплекс элюируют буфером В (500 мМ NaCl, 20 мМ CitNa3, pH 7.60), элюат концентрируют и диализуют против буфера С (100 мМ NaCl, 20 мМ CitNa, pH 7.60) до конечной концентрации общего белка 4.0%. Выход PPSB по факторам II, VII, IX и X составлял 91.9%, 78.0%, 92.4% и 94.6% соответственно.Freshly frozen plasma is thawed at 35 ° C with continuous stirring, after the temperature of the mixture reaches 0- + 4 ° C, cryoprecipitate is separated by flow centrifugation at 4000 rpm at a temperature of 0 ° C. The pH of the obtained cryosupernatant was adjusted to 7.60 with 1.0 M sodium hydroxide, then dry DEAE or QAE-Sephadex A50 was added slowly to KCH with stirring at the rate of 1.5 g / L KCH, the suspension was stirred for 2 h at room temperature. The sorbent is separated on a column and washed with buffer A (80 mM NaCl, 20 mM CitNa 3 , pH 7.60), the prothrombin complex is eluted with buffer B (500 mM NaCl, 20 mM CitNa 3 , pH 7.60), the eluate is concentrated and dialysed against buffer C (100 mM NaCl, 20 mM CitNa, pH 7.60) to a final total protein concentration of 4.0%. The yield of PPSB for factors II, VII, IX, and X was 91.9%, 78.0%, 92.4%, and 94.6%, respectively.
К полученному таким образом концентрату полного протромбинового комплекса добавляют сухой лизин до конечной концентрации 10 мМ в сочетание с сухим глицином до конечной концентрации 200 мМ, после растворения аминокислот к PPSB добавляют 11% TWEEN 80 до конечной концентрации 1.0% и TnBP до конечной концентрации 0.3%, вирусную инактивацию проводят при непрерывном перемешивание при комнатной температуре в течение 6 ч. Выход по активности FII, FVII, FIX и FX не менее 83%.Dry lysine is added to the concentrate of the complete prothrombin complex thus obtained to a final concentration of 10 mM in combination with dry glycine to a final concentration of 200 mM, after dissolving the amino acids, 11% TWEEN 80 is added to PPSB to a final concentration of 1.0% and TnBP to a final concentration of 0.3%, viral inactivation is carried out with continuous stirring at room temperature for 6 hours. The yield of activity of FII, FVII, FIX and FX is not less than 83%.
Очистку PPSB проводят методом колоночной хроматографии с использованием сорбента TOYOPEARL GigaCap Q-650M, для этого гель уравновешивают буфером А, после чего на него со скоростью 60 см/ч наносят PPSB из расчета 25 ME FVII/мл геля. Для удаления не связанных белков сорбент промывают буфером А, затем для очистки от балластных белков и тромбина буфером D (140 мМ NaCl, 20 мМ CitNa3, pH 7.60), десорбцию полного протромбинового комплекса проводят буфером С, сорбент подвергают регенерации. Выход по активности FII, FVII, FIX и FX не менее 84%.PPSB was purified by column chromatography using a TOYOPEARL GigaCap Q-650M sorbent, for which the gel was equilibrated with buffer A, after which PPSB was applied at a rate of 60 cm / h at 25 ME FVII / ml gel. To remove unbound proteins, the sorbent is washed with buffer A, then for purification from ballast proteins and thrombin with buffer D (140 mM NaCl, 20 mM CitNa 3 , pH 7.60), the complete prothrombin complex is desorbed with buffer C, the sorbent is regenerated. The yield of FII, FVII, FIX, and FX activity is at least 84%.
К элюату добавляют 11.0 мМ CitNa3 таким образом, чтобы в растворе PPSB конечная концентрация хлорида натрия составила 137 мМ, а цитрата натрия 13.5 мМ, pH до 7.34 корректируют 0.5М уксусной кислотой. Затем раствор полного протромбинового комплекса концентрируют так, чтобы количество единиц активности FVII составило 25-30 МЕ/мл, стерилизуют в 3 этапа через мембранные микрофильтры с размерами пор 2-8 мкм, 1.2 мкм и 0.65 мкм, разливают по 20 мл во флаконы объемом 50 мл и замораживают при -50°C и давлении 1 бар в течение 7.5 ч, лиофилизацию проводят повышением температуры от -20 до +30°C при давлении 60 мкбар в течение 40.5 ч. Выход по активности FII, FVII, FIX и FX на данном этапе составлял не менее 85%.11.0 mM CitNa 3 was added to the eluate so that the final concentration of sodium chloride in the PPSB solution was 137 mM, and sodium citrate 13.5 mM, pH adjusted to 7.34 with 0.5 M acetic acid. Then the solution of the complete prothrombin complex is concentrated so that the number of FVII activity units is 25-30 IU / ml, sterilized in 3 stages through membrane microfilters with pore sizes of 2-8 μm, 1.2 μm and 0.65 μm, and poured into 20 ml 50 ml vials ml and freeze at -50 ° C and a pressure of 1 bar for 7.5 h, lyophilization is carried out by raising the temperature from -20 to + 30 ° C at a pressure of 60 μbar for 40.5 h. The yield of activity of FII, FVII, FIX and FX on this stage was at least 85%.
Пример 4Example 4
Способ, аналогичный описанному в примере 3, отличающийся тем, что очистку PPSB проводили с помощью сорбента Capto Q. Выход по активности FII, FVII, FIX и FX не менее 83%.A method similar to that described in example 3, characterized in that the purification of PPSB was carried out using a Capto Q sorbent. The yield for activity of FII, FVII, FIX and FX was at least 83%.
Измерение активности факторов свертывания крови и концентрации общего белка проводили по методикам, многократно описанным в литературе.Measurement of the activity of coagulation factors and the concentration of total protein was carried out according to the methods repeatedly described in the literature.
Предложенный способ позволяет получить препарат, по своей эффективности не уступающий лучшим зарубежным аналогам, и может быть рекомендован для промышленного использования.The proposed method allows to obtain a drug that is not inferior in its effectiveness to the best foreign analogues, and can be recommended for industrial use.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014123183/15A RU2559576C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014123183/15A RU2559576C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2559576C1 true RU2559576C1 (en) | 2015-08-10 |
Family
ID=53796437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014123183/15A RU2559576C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2559576C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4364861A (en) * | 1980-05-27 | 1982-12-21 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them |
| US4404132A (en) * | 1980-05-27 | 1983-09-13 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood coagulation promoting product |
| EP0044343B1 (en) * | 1980-01-28 | 1984-08-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Prothrombin-containing therapeutic compositions and methods of producing enzymatically active blood clotting factors from prothrombin-containing blood fractions |
| WO1989012097A1 (en) * | 1988-06-09 | 1989-12-14 | Fondation Nationale De Transfusion Sanguine | PROCESS FOR PREPARING A FACTOR VIIa-RICH FRACTION, AND APPLICATION THEREOF AS A DRUG |
| CA2285935C (en) * | 1997-04-08 | 2011-01-18 | Baxter Aktiengesellschaft | An immunotolerant prothrombin complex preparation |
-
2014
- 2014-06-09 RU RU2014123183/15A patent/RU2559576C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0044343B1 (en) * | 1980-01-28 | 1984-08-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Prothrombin-containing therapeutic compositions and methods of producing enzymatically active blood clotting factors from prothrombin-containing blood fractions |
| US4364861A (en) * | 1980-05-27 | 1982-12-21 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them |
| US4404132A (en) * | 1980-05-27 | 1983-09-13 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood coagulation promoting product |
| WO1989012097A1 (en) * | 1988-06-09 | 1989-12-14 | Fondation Nationale De Transfusion Sanguine | PROCESS FOR PREPARING A FACTOR VIIa-RICH FRACTION, AND APPLICATION THEREOF AS A DRUG |
| CA2285935C (en) * | 1997-04-08 | 2011-01-18 | Baxter Aktiengesellschaft | An immunotolerant prothrombin complex preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6836562B2 (en) | Method for purification of therapeutic protein | |
| US7816495B2 (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| US10806755B2 (en) | Plasma-supplemented formulation | |
| ES2400014T3 (en) | Methods for preparing factor X, factor X activated, factor X inactivated and factor Xa inactivated | |
| ES2420535T3 (en) | New process for the highly selective purification of two plasma proteins: von willebrand factor (vwf) and fibronectin (fn). | |
| RU2559576C1 (en) | Method of obtaining virus-safe complete prothrombin complex | |
| RU2648517C1 (en) | Method for obtaining a liophilized preparation of an activated protrombin complex having viii-shunting activity factor | |
| CN116322920A (en) | Purification of FVIII from plasma using silica adsorption | |
| RU2445974C2 (en) | Method for producing concentrated factor viii of human blood plasma | |
| US10188965B2 (en) | Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution | |
| US8822643B2 (en) | Process for the preparation of a virus-inactivated FV concentrate starting from human plasma, scalable to industrial level | |
| JP2021073280A (en) | Method of purifying therapeutic proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RH4A | Copy of patent granted that was duplicated for the russian federation |
Effective date: 20200827 |