RU2542404C1 - Method for determining functional activity of human complement component c4 - Google Patents
Method for determining functional activity of human complement component c4 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2542404C1 RU2542404C1 RU2013149248/15A RU2013149248A RU2542404C1 RU 2542404 C1 RU2542404 C1 RU 2542404C1 RU 2013149248/15 A RU2013149248/15 A RU 2013149248/15A RU 2013149248 A RU2013149248 A RU 2013149248A RU 2542404 C1 RU2542404 C1 RU 2542404C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- component
- activity
- living
- complement component
- complement
- Prior art date
Links
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 title claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 title claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 241000248418 Tetrahymena pyriformis Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 241000223782 Ciliophora Species 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000001094 effect on targets Effects 0.000 claims 1
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 abstract description 3
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000223794 Paramecium aurelia Species 0.000 description 1
- 206010051017 Staphylococcal bacteraemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности комплемента в сыворотке крови организма при диагностике ряда заболеваний.The invention relates to medical immunology, and in particular to methods for determining the functional activity of complement in the blood serum of an organism in the diagnosis of a number of diseases.
Традиционный способ определения функциональной активности комплемента человека в сыворотке крови основан на его способности лизировать клетки-мишени, каковыми являются эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьими антителами к поверхностным антигенам. Для определения функциональной активности отдельных компонентов такой гемолиз проводят с образцами сыворотки в количествах, недостаточных для осуществления самостоятельного лизиса, но в присутствии реагента RX (где X - тестируемый компонент), характеризующийся отсутствием тестируемого компонента, но избыточным содержанием остальных компонентов, необходимых для осуществления лизиса. Размер фиксируемого гемолиза в этом случае определяется количеством функционально активного тестируемого компонента, находящегося в образце сыворотки, взятой в количествах, недостаточных для осуществления самостоятельного лизиса [1]. Для определения функциональной активности компонента С4 в качестве реагента R4 используется пул не менее 10 сывороток здоровых доноров, обработанный гидразингидратом, необратимо инактивирующим компонент С4 [1].The traditional method for determining the functional activity of human complement in serum is based on its ability to lyse target cells, such as sheep erythrocytes sensitized by rabbit antibodies to surface antigens. To determine the functional activity of the individual components, such hemolysis is carried out with serum samples in quantities insufficient for independent lysis, but in the presence of RX reagent (where X is the test component), characterized by the absence of the tested component, but with an excess content of the remaining components necessary for lysis. The size of the fixed hemolysis in this case is determined by the amount of a functionally active test component located in a serum sample taken in amounts insufficient for independent lysis [1]. To determine the functional activity of component C4, a pool of at least 10 healthy donor sera treated with hydrazine hydrate irreversibly inactivating component C4 is used as R4 reagent [1].
Недостатком гемолитического метода является необходимость наличия сенсибилизированных эритроцитов барана, что сопряжено с необходимостью содержания животного или приобретения свежей бараньей крови.The disadvantage of the hemolytic method is the need for sensitized sheep erythrocytes, which is associated with the need to keep the animal or purchase fresh sheep blood.
Преодолеть эти недостатки можно, используя другую мишень для тестирования активности комплемента. Из литературы известно [2], что комплемент морской свинки способен обездвиживать инфузории Tetrahymena pyriformis и при этом не требуется дополнительной сенсибилизации микроорганизма антителами. В работе, однако, не было изучено, какой из наблюдаемых эффектов: набухание микроорганизма, обездвиживание или дальнейший лизис мог бы послужить в дальнейшем критерием для определения активности комплемента. Кроме того, не было известно, можно ли такой подход использовать для определения активности отдельных компонентов комплемента. Получение необходимых для осуществления способа клеток Tetrahymena pyriformis существенно удобнее и дешевле, чем получение или приобретение сенсибилизированных эритроцитов барана.These deficiencies can be overcome by using another target to test complement activity. It is known from the literature [2] that the complement of guinea pigs is capable of immobilizing the ciliates of Tetrahymena pyriformis and does not require additional sensitization of the microorganism with antibodies. However, the study did not study which of the observed effects: swelling of the microorganism, immobilization, or further lysis could serve as a further criterion for determining complement activity. In addition, it was not known whether this approach can be used to determine the activity of individual components of complement. Obtaining the necessary for the implementation of the method of Tetrahymena pyriformis cells is much more convenient and cheaper than obtaining or purchasing sensitized sheep erythrocytes.
Задачей заявленного изобретения является разработка способа определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека с использованием доступной мишени для действия активного комплемента, не требующей дополнительной сенсибилизации антителами.The objective of the claimed invention is to develop a method for determining the functional activity of component C4 of a human complement using an accessible target for the action of active complement, which does not require additional sensitization with antibodies.
Поставленная задача достигается путем разработки способа определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека по измерению его воздействия в присутствии реагента R4 на инфузории Tetrahymena pyriformis, с использованием прибора для биологических исследований БиоЛаТ-3 [3]. Было обнаружено, что при действии комплемента на инфузории через определенный промежуток времени, зависящий от количества активного комплемента, начинается процесс обездвиживания инфузорий, протекающий со скоростью, также зависящей от количества активного комплемента. Скорость перехода подвижных инфузорий в неподвижные может быть использована для расчета количества функционально активного комплемента.The task is achieved by developing a method for determining the functional activity of the complement component C4 of a person by measuring its effect in the presence of R4 reagent on Tetrahymena pyriformis ciliates using a BioLaT-3 biological research device [3]. It was found that with the action of complement on the ciliates, after a certain period of time, depending on the amount of active complement, the process of immobilization of ciliates begins, proceeding at a speed that also depends on the amount of active complement. The rate of transition of moving infusoria to motionless can be used to calculate the number of functionally active complement.
Способ определения предусматривает внесение в измерительные ячейки прибора суспензии инфузорий в буферном растворе, добавление в ячейки сыворотки крови в необходимом количестве, как источника С4, и реагента R4, как источника остальных, кроме С4, компонентов комплемента, и автоматический циклический подсчет оставшихся подвижными клеток во времени.The method of determination involves introducing into the measuring cells of the device a suspension of ciliates in a buffer solution, adding to the blood serum cells in the required quantity, as a source of C4, and reagent R4, as a source of the complement components other than C4, and automatic cyclic counting of the remaining mobile cells in time .
Метод расчета основан на определении константы скорости гибели клеток, которую удобно рассчитывать по тангенсу угла наклона зависимости логарифма числа подвижных клеток от времени в период наблюдаемого падения числа живых клеток. Величина константы скорости падения числа живых клеток, зависящая от количества активного компонента С4 комплемента, сравнивается с активностью компонента С4 комплемента в пуле не менее 10 сывороток здоровых людей, что выбирается в качестве стандарта. Тем самым достигается определение функциональной активности компонента С4 комплемента методом, пригодным для стандартизации.The calculation method is based on determining the cell death rate constant, which is conveniently calculated from the slope of the logarithm of the number of mobile cells versus time during the period of the observed drop in the number of living cells. The value of the rate constant for the decrease in the number of living cells, depending on the amount of the active component of C4 complement, is compared with the activity of the component C4 of complement in a pool of at least 10 healthy human sera, which is chosen as the standard. Thereby, the determination of the functional activity of the complement component C4 is achieved by a method suitable for standardization.
Техническим результатом заявленного изобретения является разработка способа определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека с использованием доступной мишени для действия комплемента, каковой являются инфузории Tetrahymena pyriformis.The technical result of the claimed invention is the development of a method for determining the functional activity of the complement component C4 of a person using an accessible target for complement action, which are Tetrahymena pyriformis ciliates.
Пример 1. Определение функциональной активности компонента С4 комплемента человека. В измерительные ячейки прибора БиоЛаТ-3 вносят 200 мкл суспензии приблизительно 800 клеток инфузории Tetrahymena pyriformis в вероналовом буферном растворе, pH 7,4, содержащим 0,075 М NaCl, 0,075 мМ Са2+ и 0,25 мМ Mg2+, и 100 мкл того же буфера, содержащего от 1 до 6 мкл испытуемой пробы и от 5 до 15 мкл реагента R4, представляющего собой пул не менее 10 сывороток здоровых людей, обработанный гидразингидратом, необратимо инактивирующим компонент С4. С помощью прибора БиоЛаТ-3 и совмещенного с ним компьютера определяют число живых клеток в ячейках каждую минуту. На основании динамики падения числа живых клеток во времени рассчитывают константу скорости реакции первого порядка, определяя тангенс угла наклона зависимости логарифма числа подвижных клеток от времени в период наблюдаемого падения числа живых клеток. Калибровочную кривую получают, измеряя падение числа живых клеток во времени для пула сывороток, выбранного в качестве стандарта (рис.1). На рис.1, представлен калибровочный график зависимости константы скорости обездвиживания инфузорий от количества активного компонента С4 (R2=0.99).Example 1. Determination of the functional activity of the complement component C4 of a person. 200 μl of a suspension of approximately 800 Tetrahymena pyriformis infusoria cells in a Veronal buffer solution, pH 7.4, containing 0.075 M NaCl, 0.075 mM Ca 2+ and 0.25 mM Mg 2+ , and 100 μl of that the same buffer containing from 1 to 6 μl of the test sample and from 5 to 15 μl of R4 reagent, which is a pool of at least 10 healthy human sera treated with hydrazine hydrate that irreversibly inactivates the C4 component. Using the BioLaT-3 device and a computer combined with it, the number of living cells in the cells is determined every minute. Based on the dynamics of the decrease in the number of living cells in time, the first-order reaction rate constant is calculated by determining the slope of the logarithm of the number of mobile cells versus time during the period of the observed decrease in the number of living cells. A calibration curve is obtained by measuring the drop in the number of living cells over time for a serum pool selected as a standard (Fig. 1). In Fig. 1, a calibration graph of the dependence of the constant of the immobilized immobility rate constant on the amount of active component C4 (R 2 = 0.99) is presented.
Содержание активного С4 в стандартной сыворотке принято за 400 мкг/мл в соответствии с литературными данными [4].The content of active C4 in standard serum was taken as 400 μg / ml in accordance with published data [4].
ЛитератураLiterature
1. Козлов Л.В., Крылова Ю.И., Чих В.П., Молчанова Н.Н. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента С2, С3, С4 и С5. Биоорган, химия. 1982. Т.8. С.652-659.1. Kozlov L.V., Krylova Yu.I., Chikh V.P., Molchanova N.N. Modified methods for determining the functional activity of complement factors C2, C3, C4 and C5. Bioorgan, chemistry. 1982.V.8. S.652-659.
2. Sinclair I.J.B. The role of complement in the immune reactions of Paramecium aurelia and Tetrahymena pyriformis. Immunology. 1958. V.1. P.291-299.2. Sinclair I.J.B. The role of complement in the immune reactions of Paramecium aurelia and Tetrahymena pyriformis. Immunology 1958. V.1. P.291-299.
3. Черемных Е.Г., Покатаев A.C., Гридунова B.H. Прибор для биологических исследований. Патент РФ 2361913 опубл. 20.07.09. Бюл. №20.3. Cheremnykh EG, Pokataev A.C., Gridunova B.H. The device for biological research. RF patent 2361913 publ. 07/20/09. Bull. No. 20.
4. Hallett A.F., Cooper R. Complement activation in Staphylococcus aureus bacteraemia. Clin. exp. Immunol. 1980. V.40. P.306-311.4. Hallett A.F., Cooper R. Complement activation in Staphylococcus aureus bacteraemia. Clin. exp. Immunol. 1980. V. 40. P.306-311.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149248/15A RU2542404C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for determining functional activity of human complement component c4 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149248/15A RU2542404C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for determining functional activity of human complement component c4 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2542404C1 true RU2542404C1 (en) | 2015-02-20 |
Family
ID=53289000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013149248/15A RU2542404C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for determining functional activity of human complement component c4 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2542404C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996007738A3 (en) * | 1994-09-08 | 1996-03-28 | Imutran Ltd | Modified human c3 proteins |
| RU2253118C1 (en) * | 2003-12-09 | 2005-05-27 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Determination of functional activity of human complement c4 component |
| RU2376606C1 (en) * | 2008-10-22 | 2009-12-20 | Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method and set for immune-enzyme detection of functional activity of component c4 of human complement |
| WO2011047346A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Omeros Corporation | Methods for treating disseminated intravascular coagulation by inhibiting masp-2 dependent complement activation |
| RU2417375C2 (en) * | 2009-07-28 | 2011-04-27 | Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method and set for immune-enzyme assay of functional activity of human complement component c3 |
-
2013
- 2013-11-06 RU RU2013149248/15A patent/RU2542404C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996007738A3 (en) * | 1994-09-08 | 1996-03-28 | Imutran Ltd | Modified human c3 proteins |
| RU2253118C1 (en) * | 2003-12-09 | 2005-05-27 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Determination of functional activity of human complement c4 component |
| RU2376606C1 (en) * | 2008-10-22 | 2009-12-20 | Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method and set for immune-enzyme detection of functional activity of component c4 of human complement |
| RU2417375C2 (en) * | 2009-07-28 | 2011-04-27 | Федеральное Государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method and set for immune-enzyme assay of functional activity of human complement component c3 |
| WO2011047346A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Omeros Corporation | Methods for treating disseminated intravascular coagulation by inhibiting masp-2 dependent complement activation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Andreani et al. | Reference values for hematology and plasma biochemistry variables, and protein electrophoresis of healthy Hermann's tortoises (Testudo hermanni ssp.) | |
| Trefz et al. | Construction and validation of a decision tree for treating metabolic acidosis in calves with neonatal diarrhea | |
| Goy‐Thollot et al. | Pre‐and post‐transfusion alloimmunization in dogs characterized by 2 antiglobulin‐enhanced cross‐match tests | |
| Guzelbektes et al. | Serum amyloid A and haptoglobin concentrations and liver fat percentage in lactating dairy cows with abomasal displacement | |
| Alhaji et al. | Serological survey of bovine brucellosis in Fulani nomadic cattle breeds (Bos indicus) of North-central Nigeria: Potential risk factors and zoonotic implications | |
| RU2010101909A (en) | METHOD FOR IDENTIFICATION OR TREATMENT OF REACTION "TRANSPLANT AGAINST THE OWNER" | |
| EP2952896A1 (en) | Method for reducing false negatives in immunoassay for assaying biomembrane-derived specimen | |
| Svete et al. | Serum cortisol and haematological, biochemical and antioxidant enzyme variables in horse blood sampled in a slaughterhouse lairage, immediately before stunning and during exsanguination | |
| Duffield et al. | Interpretation of serum metabolic parameters around the transition period | |
| Blokland et al. | Increased mTORC1 activation in salivary gland B cells and T cells from patients with Sjögren’s syndrome: mTOR inhibition as a novel therapeutic strategy to halt immunopathology? | |
| Hooijberg et al. | Method comparison and generation of plasma biochemistry RIs for the White rhinoceros on a point‐of‐care and wet chemistry analyzer | |
| Guidetti et al. | Alloimmunization of a dog erythrocyte antigen 1− dog transfused with weakly dog erythrocyte antigen 1+ blood | |
| Hartmann et al. | Development of a sensitive phospho-p70 S6 kinase ELISA to quantify mTOR proliferation signal inhibition | |
| CN104007103A (en) | Sperm detection method and kit thereof | |
| RU2542404C1 (en) | Method for determining functional activity of human complement component c4 | |
| RU2545775C1 (en) | Method for assaying functional activity of human complement component c3 | |
| RU2417375C2 (en) | Method and set for immune-enzyme assay of functional activity of human complement component c3 | |
| RU2542401C1 (en) | Method for determining functional activity of human complement component c2 | |
| RU2542397C1 (en) | Method for determining integral functional activity of complement membrane attack complex components | |
| RU2550946C1 (en) | Method of determining functional activity of human complement factor b | |
| RU2542399C1 (en) | Method for determining integral functional activity of human complement component c1 | |
| RU2542407C1 (en) | Method for determining functional activity of human complement factor d | |
| Gordon et al. | Acute phase protein concentrations following serial procaine penicillin G injections in horses | |
| Wicks et al. | T lymphocyte phenotype of contact‐allergic patients: experience with nickel and p‐phenylenediamine | |
| Ozato et al. | Accelerated calcium ion uptake in murine thymocytes induced by concanavalin A |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171107 |