RU2535122C1 - Method for preparing choleragen anatoxin - Google Patents
Method for preparing choleragen anatoxin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2535122C1 RU2535122C1 RU2013149677/15A RU2013149677A RU2535122C1 RU 2535122 C1 RU2535122 C1 RU 2535122C1 RU 2013149677/15 A RU2013149677/15 A RU 2013149677/15A RU 2013149677 A RU2013149677 A RU 2013149677A RU 2535122 C1 RU2535122 C1 RU 2535122C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- toxoid
- cholerogen
- kda
- tangential ultrafiltration
- antigen
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 26
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 title abstract description 6
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 title abstract description 6
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 title abstract 3
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 title abstract 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 9
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229960005004 cholera vaccine Drugs 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000602423 Vibrio cholerae O1 Species 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к технологии производства медицинских иммунобиологических препаратов, в частности к технологии получения холерогена-анатоксина, и может быть использовано в практике производства вакцины оральной холерной бивалентной химической таблетированной.The invention relates to a technology for the production of medical immunobiological preparations, in particular to a technology for producing cholerogen-toxoid, and can be used in the practice of manufacturing an oral cholera bivalent chemical tablet vaccine.
Холероген-анатоксин используется для получения вакцины холерной бивалентной химической, таблетированной (одним из компонентов которой он является), включенной в Национальный календарь профилактических прививок по эпидемическим показаниям в соответствии с Приказом Минздрава России №229 от 27.06.2001 г. Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, представляет собой смесь холерогена-анатоксина и O-антигенов, полученных из инактивированных формалином бульонных культур холерных вибрионов O1 серогруппы - Vibrio cholerae 569 В классического биовара серовара Инаба и V. cholerae M-41 классического биовара серовара Огава.Cholerogen-toxoid is used to obtain a bivalent chemical cholera vaccine, tableted (one of the components of which it is), included in the National calendar of preventive vaccinations according to epidemiological indications in accordance with Order of the Ministry of Health of Russia No. 229 dated 06/27/2001. Bivalent chemical cholera vaccine, tablets enteric coated is a mixture of cholerogen-toxoid and O-antigens obtained from formalin inactivated broth cultures of cholera vibrios O1 serogens rupps - Vibrio cholerae 569 In the classic biovar of Serovar Inaba and V. cholerae M-41 of the classic biovar of Serovar Ogawa.
Известен способ получения очищенного холерного экзотоксина (В.В. Строганов и др. Применение метода ультрафильтрации на отечественных полупроницаемых мембранах марки УАМ для отделения соматического O-антигена от экзотоксина холерного вибриона - Пробл. особо опасных инф., 1978, вып.4, с.52-55), сущность которого заключается в том, что из нативной культуры, содержащей O-антиген и холерный экзотоксин, удаляют ультрафильтрацией O-антиген. Полученный холерный экзотоксин используется только для получения антихолерогенной сыворотки, а не как компонент вакцины.A known method for producing purified cholera exotoxin (V.V. Stroganov et al. The use of ultrafiltration method on domestic semipermeable membranes of the UAM brand for separating somatic O-antigen from exotoxin cholera vibrio - Probl. Especially dangerous inf., 1978, issue 4, p. 52-55), the essence of which is that from the native culture containing the O-antigen and cholera exotoxin, the O-antigen is removed by ultrafiltration. The resulting cholera exotoxin is used only to obtain anticholerogenic serum, and not as a component of the vaccine.
Известен способ производства химической вакцины, состоящей из холерогена-анатоксина вместе с O-антигеном серовара Инаба, описанный в патенте России №2076734, A61K 39/00, согласно которому холерный вибрион выращивают в условиях глубинного культивирования на питательной среде, состоящей из ферментативного перевара казеина или мяса. В начале стационарной фазы роста выращивание прекращают добавлением 0,6% формалина. Убитые формалином микробные тела через 12 ч отделяют в центрифуге при 15000 об/мин, а надосадочную жидкость выдерживают 25-30 дней при концентрации формалина 0,2%, pH 6,7, температуре 10-12°C для образования устойчивого анатоксина и снижения токсичности O-антигена. После этого приступают к выделению, очистке и концентрации иммуногенов (холерогена-анатоксина и O-антигена). Поэтапное осаждение антигенов холерного вибриона состоит в выполнении следующих операциях. На первом этапе добавляют сульфат аммония до 0,37 насыщения (281±7,6 г соли на 1 л), перемешивают, оставляют на 18-20 ч и центрифугируют при 8000 об/мин. Полученный на роторе осадок «O-антигенсодержащая фракция» используют в дальнейшем для получения O-антигена. На втором этапе из центрифугата выделяют фракцию, содержащую термолабильные белки, условно названную «холероген-анатоксин», путем последующего осаждения до 0,80 насыщения (327±38 г соли на 1 л исходного раствора). После центрифугирования осадок диализуют, разводят дистиллированной водой до 10 мг белка в 1 мл и проводят стерилизующую фильтрацию через мембранные фильтры. Полученную жидкую фракцию «холероген-анатоксин» лиофильно высушивают и используют для конструирования таблеток вакцины.A known method for the production of a chemical vaccine consisting of cholerogen-toxoid together with O-antigen of Serovar Inaba described in Russian patent No. 2076734, A61K 39/00, according to which cholera vibrio is grown under conditions of deep cultivation on a nutrient medium consisting of an enzymatic digest of casein or meat. At the beginning of the stationary growth phase, growth is stopped by the addition of 0.6% formalin. Microbial bodies killed by formalin are separated in a centrifuge at 15,000 rpm after 12 hours, and the supernatant is kept for 25-30 days at a formalin concentration of 0.2%, pH 6.7, and a temperature of 10-12 ° C to form a stable toxoid and reduce toxicity O-antigen. After that, they begin to isolate, purify and concentrate immunogens (cholerogen-toxoid and O-antigen). The phased deposition of cholera vibrio antigens consists in the following operations. At the first stage, ammonium sulfate is added to saturation of 0.37 (281 ± 7.6 g of salt per 1 liter), stirred, left for 18-20 hours and centrifuged at 8000 rpm. Obtained on the rotor precipitate "O-antigen-containing fraction" is used in the future to obtain O-antigen. At the second stage, a fraction containing thermolabile proteins, conventionally called “cholerogen-toxoid”, is isolated from the centrifugate by subsequent precipitation to 0.80 saturation (327 ± 38 g of salt per 1 liter of stock solution). After centrifugation, the pellet is dialyzed, diluted with distilled water to 10 mg of protein in 1 ml and sterilizing filtration is carried out through membrane filters. The obtained liquid fraction "cholerogen-toxoid" is freeze-dried and used for the construction of vaccine tablets.
Недостатками способа являются существенные потери холерогена-анатоксина и O-антигена и применение значительного (608±45,7 г на 1 дм3 безмикробного центрифугата) количества сульфата аммония, затрачиваемого на осаждение.The disadvantages of the method are significant losses of cholerogen-toxoid and O-antigen and the use of a significant (608 ± 45.7 g per 1 dm 3 microbial centrifugate) amount of ammonium sulfate spent on deposition.
Описанные недостатки устранены в способе по патенту RU 2451522, в соответствии с которым осуществляют предварительное концентрирование нативных холерогена-анатоксина и О-антигена путем проточной фильтрации через мембранные модули с номинальной отсечкой по молекулярной массе 50 кДа под давлением 0,23-0,25 МПа со средней удельной скоростью освобождения нативных холерогена-анатоксина и O-антигена от балластных примесей - 60-70 дм3/м2/ч, с последующим осаждением балластной (O-антигенсодержащей) фракции путем добавления 281±7,6 г сульфата аммония на 1 дм3 безмикробного центрифугата с последующим удалением этой фракции центрифугированием; осаждением холерогена-анатоксина и O-антигена из полученного центрифугата путем добавления 327±38 г сульфата аммония на 1 дм3 безмикробного центрифугата и концентрированием центрифугированием. После концентрирования центрифугированием полученный продукт диализуют, разводят дистиллированной водой до 10 мг белка в 1 мл и проводят стерилизующую фильтрацию через мембранные фильтры, лиофильно высушивают и используют для конструирования таблеток вакцины. Балластную (O-антигенсодержащую) фракцию используют в дальнейшем для получения O-антигена. O-антиген, полученный с использованием двух вышеописанных способов, обладает стандартностью и используется в дальнейшем для конструирования таблеток вакцины холерной бивалентной химической, таблетированной.The described disadvantages are eliminated in the method according to patent RU 2451522, in accordance with which preliminary concentration of native cholerogen-toxoid and O-antigen is carried out by flow filtration through membrane modules with a nominal cut-off in molecular weight of 50 kDa under a pressure of 0.23-0.25 MPa with the average specific rate of release of native cholerogen-toxoid and O-antigen from ballast impurities is 60-70 dm 3 / m 2 / h, followed by precipitation of the ballast (O-antigen-containing) fraction by adding 281 ± 7.6 g of ammonium sulfate per 1 dm 3 microbial centrifugate, followed by removal of this fraction by centrifugation; the precipitation of cholerogen-toxoid and O-antigen from the obtained centrifugate by adding 327 ± 38 g of ammonium sulfate per 1 DM 3 microbial centrifugate and concentration by centrifugation. After concentration by centrifugation, the resulting product is dialyzed, diluted with distilled water to 10 mg of protein in 1 ml and sterilizing filtration is carried out through membrane filters, freeze-dried and used to construct vaccine tablets. The ballast (O-antigen-containing) fraction is further used to obtain the O-antigen. O-antigen obtained using the two above-described methods is standard and is subsequently used for the construction of tablets of a bivalent chemical cholera vaccine tablet.
Недостатком описанных способов являются потери холерогена-анатоксина, возникающие за счет того, что его концентрирование проводят центрифугированием. Кроме того, технологический процесс получения холерогена-анатоксина длительный и многостадийный.The disadvantage of the described methods is the loss of cholerogen-toxoid resulting from the fact that its concentration is carried out by centrifugation. In addition, the technological process for producing cholerogen-toxoid is long and multi-stage.
Технический результат заключается в увеличении выхода холерогена-анатоксина, с сохранением показателей качества препарата при сокращении времени и количества технологических стадий его получения.The technical result consists in increasing the yield of cholerogen-toxoid, while maintaining the quality indicators of the drug while reducing the time and number of technological stages of its production.
Одним из перспективных направлений, применяемых в технологиях производства химических вакцин, является внедрение метода тангенциальной ультрафильтрации. Фильтрация в проточном (тангенциальном) потоке является разделительным методом, в котором поток жидкости направляется вдоль мембраны, омывая ее поверхность. Применение мембранных модулей с разным размером пор (номинальной отсечкой по молекулярной массе) позволяет использовать данный метод для разделения и концентрирования антигенов с различной молекулярной массой.One of the promising areas used in the production technology of chemical vaccines is the introduction of tangential ultrafiltration. Filtration in the flow (tangential) flow is a separation method in which the fluid flow is directed along the membrane, washing its surface. The use of membrane modules with different pore sizes (nominal cutoff by molecular weight) allows you to use this method to separate and concentrate antigens with different molecular weights.
Технический результат достигается тем, что в способе получения холерогена-анатоксина, включающем выращивание холерного вибриона штамма 569 В Инаба в условиях глубинного культивирования, отделение убитых формалином микробных тел в проточной центрифуге, согласно изобретению холероген-анатоксин выделяют методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по мол. массе 300 кДа, концентрируют методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по мол. массе 30 кДа, очищают диафильтрацией трехкратным объемом стерильной очищенной водой методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по мол. массе 30 кДа с последующей стерилизующей фильтрацией.The technical result is achieved by the fact that in the method for producing cholerogen-toxoid, including the cultivation of cholera vibrio of strain 569 In Inaba under conditions of deep cultivation, the separation of formalin-killed microbial bodies in a flow centrifuge, according to the invention, the cholerogen-toxoid is isolated by tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off by pier. mass of 300 kDa, concentrated by tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off by mol. mass of 30 kDa, purified by diafiltration with a three-fold volume of sterile purified water by tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off of mol. mass of 30 kDa followed by sterilizing filtration.
Возможность практического использования заявляемого изобретения подтверждается примером.The possibility of practical use of the claimed invention is confirmed by example.
Пример. Холерный вибрион V. cholerae 569 В классического биовара серовара Инаба выращивают в условиях глубинного культивирования в реакторе с 200 л бульона из ферментативного перевара казеина, с аэрацией и автоматической подкормкой глюкозой и аммиаком. В первые четыре часа роста поддерживают температуру 37°C, а затем в течение 5-7 ч снижают до 34-35°C для сохранения в культуральной жидкости термолабильного токсина. В начале стационарной фазы роста (10-11 ч выращивания), когда концентрация микробных тел, достигнув 70-100 млрд в 1 мл, остается постоянной 2-3 ч, выращивание прекращают добавлением 0,6% формалина.Example. Vibrio cholerae V. cholerae 569 In the classic biovar, Inaba serovar is grown under deep cultivation in a reactor with 200 l of broth from enzymatic digest of casein, with aeration and automatic feeding of glucose and ammonia. In the first four hours of growth, the temperature is maintained at 37 ° C, and then reduced to 34-35 ° C over the course of 5-7 hours to preserve the thermolabile toxin in the culture fluid. At the beginning of the stationary growth phase (10-11 hours of cultivation), when the concentration of microbial bodies, reaching 70-100 billion in 1 ml, remains constant for 2-3 hours, the cultivation is stopped by adding 0.6% formalin.
Убитые формалином микробные тела через 12 ч отделяют в проточной центрифуге при 15000 об/мин, а надосадочную жидкость выдерживают 20-30 дней при концентрации формалина 0,2%, pH 6,7, температуре 10-12°C для образования устойчивого холерогена-анатоксина и снижения токсичности O-антигена. После этого приступают к выделению, очистке и концентрации иммуногенов.Microbial bodies killed by formalin are separated after 12 hours in a flow centrifuge at 15,000 rpm, and the supernatant is kept for 20-30 days at a formalin concentration of 0.2%, pH 6.7, and a temperature of 10-12 ° C to form stable cholerogen-toxoid and reducing the toxicity of O-antigen. After that, they begin the isolation, purification and concentration of immunogens.
Технологические операции тангенциальной ультрафильтрации проводили с использованием ультра- и микрофильтрационной установки на базе фильтродержателя АСФ-020, которая дает возможность:Tangential ultrafiltration technological operations were carried out using an ultra- and microfiltration unit based on the ASF-020 filter holder, which makes it possible to:
проводить технологический процесс в асептических условиях;carry out the process in aseptic conditions;
осуществлять стерилизацию оборудования химическим и термическим способами и их сочетанием, что соответствует требованиям GMP (ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств»);sterilize equipment by chemical and thermal methods and their combination, which meets the requirements of GMP (GOST R 52249-2009 "Rules for the production and quality control of medicines");
быстро заменять фильтрующие элементы в случае их выхода из строя во время проведения технологического процесса, благодаря модульной системе фильтров установки на базе фильтродержателя АСФ-020.quickly replace the filter elements in case of failure during the process, thanks to the modular filter system of the installation based on the filter holder ASF-020.
Выделение холерогена-анатоксина осуществляют методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по молекулярной массе 300 кДа под давлением 0,24-0,26 МПа. Образующийся фильтрат, содержащий холероген-анатоксин, концентрируют методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по молекулярной массе 30 кДа под давлением 0,24-0,26 МПа. Далее осуществляют очистку концентрированного холерогена-анатоксина диафильтрацией трехкратным объемом стерильной очищенной водой методом тангенциальной ультрафильтрации с использованием мембран с номинальной отсечкой по молекулярной массе 30 кДа под давлением 0,24-0,26 МПа. Очищенную диафильтрацией фракцию «холероген-анатоксин» подвергают стерилизующей фильтрации, лиофильно высушивают и используют для конструирования таблеток вакцины холерной бивалентной химической, таблетированной.The selection of cholerogen-toxoid is carried out by the method of tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off by molecular weight of 300 kDa under a pressure of 0.24-0.26 MPa. The resulting filtrate containing cholerogen-toxoid is concentrated by tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off by molecular weight of 30 kDa under a pressure of 0.24-0.26 MPa. Next, the concentrated cholerogen-toxoid is purified by diafiltration with a triple volume of sterile purified water by tangential ultrafiltration using membranes with a nominal cut-off of 30 kDa molecular weight under a pressure of 0.24-0.26 MPa. The “cholerogen-toxoid” fraction purified by diafiltration is subjected to sterilizing filtration, freeze-dried and used to design tablets of a bivalent chemical cholera vaccine.
Количество безмикробного центрифугата штамма V. cholerae O1 569 В классического биовара серовара Инаба для получения холерогена-анатоксина по существующему способу (патент RU 2451522) и заявляемому способу составляло по 100 дм3. Контроль качества лиофилизированных препаратов «холероген-анатоксин» (таблица 1) показал на соответствие их требованиям нормативной документации, при этом количество препарата холерогена-анатоксина, полученного по заявляемому способу, на 25% больше.The amount of the microbial centrifugate of the strain V. cholerae O1 569 B in the classical biovar of Serovar Inaba for producing cholerogen-toxoid according to the existing method (patent RU 2451522) and the claimed method was 100 dm 3 . Quality control of lyophilized preparations "cholerogen-toxoid" (table 1) showed compliance with the requirements of regulatory documentation, while the amount of cholerogen-toxoid obtained by the present method is 25% more.
Проверка препаратов методом гель-хроматографии (чертеж) выявила, что профили элюции представляли собой подобные пики, оба препарата (I - полученный по заявляемому способу; II - полученный по существующему способу (патент RU 2451522)) выходили с колонки практически с одинаковой задержкой во времени, что говорит об их одинаковом качественном составе.Testing the preparations by gel chromatography (drawing) revealed that the elution profiles were similar peaks, both drugs (I - obtained by the present method; II - obtained by the existing method (patent RU 2451522)) left the column with almost the same time delay , which indicates their equal quality composition.
Характеристики проведения процесса получения холерогена-анатоксина по существующему и заявленному способам технологии представлены в таблице 2. Как видно из данных, представленных в таблице 2, использование предложенного способа сокращает время получения холерогена-анатоксина из культуральной жидкости и всего технологического процесса в целом на 100 ч по сравнению с существующим способом технологии, при этом количество стадий производственного процесса сокращается.The characteristics of the process for producing cholerogen-toxoid according to the existing and claimed methods of technology are presented in table 2. As can be seen from the data presented in table 2, the use of the proposed method reduces the time to obtain cholerogen-toxoid from the culture fluid and the whole process as a whole by 100 hours compared with the existing method of technology, while the number of stages of the production process is reduced.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149677/15A RU2535122C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for preparing choleragen anatoxin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149677/15A RU2535122C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for preparing choleragen anatoxin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2535122C1 true RU2535122C1 (en) | 2014-12-10 |
Family
ID=53285810
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013149677/15A RU2535122C1 (en) | 2013-11-06 | 2013-11-06 | Method for preparing choleragen anatoxin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2535122C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2799574C1 (en) * | 2022-10-21 | 2023-07-06 | Федеральное казенное учреждение науки "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУН "Российский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора) | Method of producing cholera toxin for control of production of cholera chemical vaccine |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143280C1 (en) * | 1999-05-26 | 1999-12-27 | Федеральное государственное учреждение Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Министерства здравоохранения РФ | Method of preparing purified choleraic 0-antigen |
| RU2159128C1 (en) * | 2000-02-24 | 2000-11-20 | Федеральное государственное учреждение Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" МЗ РФ | Oral chemical vaccine for protecting against cholera |
| WO2011034495A1 (en) * | 2009-09-16 | 2011-03-24 | Gotovax Ab | Vaccine against cholera and enterotoxigenic e. coli (etec) diarrhea |
| EP2351578A1 (en) * | 2005-06-27 | 2011-08-03 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Process for manufacturing vaccines |
| RU2445116C1 (en) * | 2011-03-03 | 2012-03-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | METHOD FOR CONCENTRATING NATIBE O-ANTIGEN Vibrio cholerae |
| RU2451522C1 (en) * | 2011-01-19 | 2012-05-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method for concentration of native cholerogen-anatoxin and o-antigen of 569 v serovar inaba strain classic biovar vibrio cholerae 01 |
-
2013
- 2013-11-06 RU RU2013149677/15A patent/RU2535122C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143280C1 (en) * | 1999-05-26 | 1999-12-27 | Федеральное государственное учреждение Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Министерства здравоохранения РФ | Method of preparing purified choleraic 0-antigen |
| RU2159128C1 (en) * | 2000-02-24 | 2000-11-20 | Федеральное государственное учреждение Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" МЗ РФ | Oral chemical vaccine for protecting against cholera |
| EP2351578A1 (en) * | 2005-06-27 | 2011-08-03 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Process for manufacturing vaccines |
| WO2011034495A1 (en) * | 2009-09-16 | 2011-03-24 | Gotovax Ab | Vaccine against cholera and enterotoxigenic e. coli (etec) diarrhea |
| RU2451522C1 (en) * | 2011-01-19 | 2012-05-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | Method for concentration of native cholerogen-anatoxin and o-antigen of 569 v serovar inaba strain classic biovar vibrio cholerae 01 |
| RU2445116C1 (en) * | 2011-03-03 | 2012-03-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") | METHOD FOR CONCENTRATING NATIBE O-ANTIGEN Vibrio cholerae |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2799574C1 (en) * | 2022-10-21 | 2023-07-06 | Федеральное казенное учреждение науки "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУН "Российский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора) | Method of producing cholera toxin for control of production of cholera chemical vaccine |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK202100114Y4 (en) | Separation of 2′-FL from a fermentation broth | |
| EP2729167B1 (en) | A process for detergent-free production of outer membrane vesicles of a gram-negative bacterium | |
| JPWO2009008362A1 (en) | Method for producing sialic acid compound-containing composition | |
| EP1877538B1 (en) | Method for producing strains of overproductive staphylococcus aureus | |
| RU2535122C1 (en) | Method for preparing choleragen anatoxin | |
| JP2011072199A (en) | Method for separating sialyllactose material | |
| RU2416243C2 (en) | Method of extracting low molecular peptides | |
| CN102475151A (en) | Production method of whey beverage | |
| RU2704452C1 (en) | Method of producing a hemophilic b type conjugated vaccine | |
| RU2143280C1 (en) | Method of preparing purified choleraic 0-antigen | |
| RU2451522C1 (en) | Method for concentration of native cholerogen-anatoxin and o-antigen of 569 v serovar inaba strain classic biovar vibrio cholerae 01 | |
| CN114073765A (en) | Composition for inhibiting helicobacter pylori and application thereof | |
| RU2456996C1 (en) | Method for preparing purified cholera toxin b subunit from recombinant strain vibrio cholerae | |
| RU2445116C1 (en) | METHOD FOR CONCENTRATING NATIBE O-ANTIGEN Vibrio cholerae | |
| JP2014210801A (en) | Method for separating sialyl lactose material | |
| RU2409678C1 (en) | Method for producing low-molecular peptides showing interferon stimulating activity | |
| RU2209081C1 (en) | Polyvalent vaccine for immunoprophylaxis and immunotherapy of diseases caused by opportunistic microorganisms | |
| Komissarov et al. | Fractionation of Cholerae Vibrio Cholerogen-Anatoxin by Tangential Filtration | |
| RU2504399C1 (en) | Method for preparing cell-free vaccine for pertussis immunisation | |
| CN114867864A (en) | Processes for the production, recovery and purification of capsular polysaccharide polyribosyl-ribitol-phosphate (PRP) and uses thereof | |
| RU2332231C2 (en) | Method of obtaining acellular vaccine for pertussis immunoprophylaxis | |
| RU2687973C1 (en) | Method of producing drug preparation of collalisin®, lyophilizate for preparing solution for local and parenteral application for treating fibroproliferative diseases | |
| RU2528878C1 (en) | Method of production of concentrate of microbial cells for obtaining live tularemia vaccine | |
| US10660925B2 (en) | Method for producing a medium containing steroidal glycosides from plant cells of the genus Hoodia | |
| RU2353387C1 (en) | Method of producing antigen erythrocytic pasteurellosis diagnosticum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151107 |