RU2506926C1 - Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human - Google Patents
Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human Download PDFInfo
- Publication number
- RU2506926C1 RU2506926C1 RU2012130662/13A RU2012130662A RU2506926C1 RU 2506926 C1 RU2506926 C1 RU 2506926C1 RU 2012130662/13 A RU2012130662/13 A RU 2012130662/13A RU 2012130662 A RU2012130662 A RU 2012130662A RU 2506926 C1 RU2506926 C1 RU 2506926C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- distilled water
- table vinegar
- dirofilariasis
- supernatant
- animals
- Prior art date
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 11
- 208000003917 Dirofilariasis Diseases 0.000 title claims abstract description 5
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 title abstract 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и в частности может быть использовано для диагностики личинок кровепаразитов у животных и человека.The invention relates to the field of veterinary medicine and in particular can be used to diagnose larvae of blood parasites in animals and humans.
Известен способ диагностики сыворотки крови, которую отстаивают и сразу же исследуют. При этом микроскопию крови производят под небольшим (х100) увеличением микроскопа. Кровь забирается у обследуемого животного [1, 2].A known method for the diagnosis of blood serum, which is upheld and immediately examined. In this case, blood microscopy is performed under a small (x100) magnification of the microscope. Blood is taken from the examined animal [1, 2].
Основным существенным недостатком известного способа является невозможность обнаружения паразитов при низкой степени инвазии, кроме того невозможно осуществить видовую идентификацию паразита.The main significant disadvantage of this method is the inability to detect parasites with a low degree of invasion, in addition, it is impossible to carry out species identification of the parasite.
Наиболее близким аналогом заявляемого технического решения является Способ диагностики кровепаразитов, заключающийся в том, что берут 1 мл венозной крови обследуемого животного и 10 мл 1% раствора уксусной кислоты, смешивают кровь в такой пропорции и центрифугируют в течение 5 минут при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость смешивают, а осадок переносят на предметное стекло, где готовят мазок, высушивают при комнатной температуре, фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают краской Романовского в течение 20-60 мин, промывают под проточной водой, высушивают и микроскопируют сначала по малым увеличением (х100), а при подозрении на паразита - по большим (х400) [3].The closest analogue of the claimed technical solution is a Method for the diagnosis of blood parasites, which consists in the fact that they take 1 ml of venous blood of the examined animal and 10 ml of a 1% solution of acetic acid, mix the blood in this proportion and centrifuge for 5 minutes at 1500 rpm. The supernatant is mixed, and the precipitate is transferred to a glass slide, where a smear is prepared, dried at room temperature, fixed in a Nikiforov mixture, stained with Romanovsky paint for 20-60 minutes, washed under running water, dried and microscopped first at low magnification (x100) , and with suspected parasite - for large (x400) [3].
Основным существенным недостатком известного способа является невозможность определения личинок кровепаразитов при микроскопии без окрашивания препарата.The main significant disadvantage of this method is the inability to determine the larvae of blood parasites during microscopy without staining the drug.
Основной задачей, решаемой настоящим Способом, является ускорение процесса диагностики, сокращение финансовых затрат и повышение достоверности за счет детальной идентификации возбудителя на разных стадиях заболевания.The main task solved by this Method is to accelerate the diagnostic process, reduce financial costs and increase reliability due to the detailed identification of the pathogen at different stages of the disease.
Поставленная задача решается в изобретении за счет того, что смешивают кровь животных или человека, разведенного в столовом уксусе из расчета 1:5, за счет разведении реагентов в дистиллированной воде (столовый уксус, разводят в дистиллированной воде из расчета 345 мл дистиллированной воды и 4,75 мл столового уксуса.), размешивают смесь с последующим ее отстаиванием в темном холодном месте, центрифугируют ее, а затем сливают надосадочную жидкость, добавляя несколько капель метиленового синего и вновь центрифугируют ее, надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят на предметное стекло, готовят мазок, который после высушивания, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают одновременно растворами из метиленовой сини по Леффлеру (исследуемый материал наносили на чистые обезжиренные предметные стекла, растирали на воздухе, а затем фиксировали над пламенем горелки в течение 1-2 мин. На фиксированный препарат наносили метиленовый синий по Леффлеру и проводили окраску в течение 3 мин) и по Цилю (наносили несколько капель основного фуксина Циля на фиксированный мазок и окрашивали препарат в течение 1-3 мин.), в разведении в дистиллированной воде в соотношении 1:1:18, а затем высушивают мазок при комнатной температуре и микроскопируют под увеличением с иммерсией (×1000) с определением вида возбудителя.The problem is solved in the invention due to the fact that the blood of animals or humans diluted in table vinegar is mixed at a rate of 1: 5, by dilution of reagents in distilled water (table vinegar, diluted in distilled water at a rate of 345 ml of distilled water and 4, 75 ml of table vinegar.), Stir the mixture, followed by settling in a dark, cold place, centrifuge it, and then pour off the supernatant, add a few drops of methylene blue and centrifuge it again, the supernatant with They sludge, and the precipitate is transferred to a glass slide, a smear is prepared, which, after drying, is fixed over the flame of the burner and stained simultaneously with Leffler methylene blue solutions (the test material was applied to clean fat-free glass slides, ground in air, and then fixed over the burner flame in for 1-2 minutes Methylene blue was applied to the fixed preparation according to Leffler and stained for 3 minutes) and according to Zil (several drops of the main fuchsin Ziel were applied to the fixed smear and stained with for 1-3 minutes), diluted in distilled water in a ratio of 1: 1: 18, and then the smear is dried at room temperature and microscopied under magnification with immersion (× 1000) to determine the type of pathogen.
Кроме того поставленная Задача решается в изобретении за счет того, что после второго центрифугирования, окрашивание мазка производят в течение 3 минут, а фиксацию препарата проводят в течение 10 секунд над пламенем спиртовки.In addition, the task is solved in the invention due to the fact that after the second centrifugation, the smear is stained for 3 minutes, and the preparation is fixed for 10 seconds above the flame of the spirit lamp.
Заявителю из проведенного патентно-информационного поиска, а также из практики аналогичной диагностики дирофиляриоза у животных или человека в ветеринарии не было известно о существовании способа, с идентичными существенными признаками. Исходя из приведенных выше доводов, предлагаемый Способ обладает критерием новизны для изобретения.The applicant from the patent information search, as well as from the practice of a similar diagnosis of dirofilariasis in animals or humans in veterinary medicine was not aware of the existence of a method with identical essential features. Based on the above arguments, the proposed Method has a novelty criterion for the invention.
Указанные выше существенные признаки в совокупности решают одну задачу с получением технического эффекта - ускорение процесса диагностики при сокращении затрат на химический реагент и повышение достоверности диагностики за счет детальной идентификации возбудителя на различных стадиях заболевания. При этом каждый из существенных признаков предлагаемого решения необходим, а вместе взятые достаточны для реализации поставленной задачи.The above essential features together solve one problem with obtaining a technical effect - accelerating the diagnostic process while reducing the cost of a chemical reagent and increasing the reliability of diagnosis due to the detailed identification of the pathogen at various stages of the disease. Moreover, each of the essential features of the proposed solution is necessary, and taken together are sufficient to implement the task.
При этом также между совокупностью существенных признаков и решаемой задачи существует причинно-следственная связь; существенные признаки являются причиной для следствия в виде решения задачи.Moreover, there is a causal relationship between the totality of essential features and the problem being solved; significant features are the cause for the investigation in the form of a solution to the problem.
Все это подтверждает вывод о том, что заявляемое техническое решение соответствует критерию «Изобретательский уровень». Предлагаемое в качестве изобретения техническое решение может реализовываться с присущей ему совокупностью существенных признаков многократно с получением одного и того же технического результата, что подтверждает соответствие критерия «промышленная применимость».All this confirms the conclusion that the claimed technical solution meets the criterion of "Inventive step". The technical solution proposed as an invention can be implemented with its inherent set of essential features repeatedly to obtain the same technical result, which confirms the conformity of the criterion of "industrial applicability".
Данное решение апробировано на малом инновационном предприятии - Общество с ограниченной ответственностью научно-производственное предприятие «Центр паразитологии».This solution has been tested at a small innovative enterprise - the Center for Parasitology Research and Production Enterprise, limited liability company.
Ниже приводятся результаты апробации:The following are test results:
Пример: В центрифужной пробирке смешивают кровь животных с раствором разведенного столового уксуса из расчета 1:5 (где 1-1 мл отобранной крови, а 5-5 мл водного раствора столовой уксусной кислоты). Полученную смесь размешивали стеклянной палочкой и отстаивали в темном холодном месте 30 минут. Затем производили центрифугирование в 2 этапа: сначала центрифугировали смесь в течение 3 мин, а затем после слива надосадочной жидкости, к осадку добавляли 2-3 капли метиленового синего, и центрифугировали еще раз осадок в течение 3 мин. Затем надосадочную жидкость сливали и переносили осадок на предметное стекло, где готовили влажный мазок. Мазок высушивали и фиксировали над пламенем горелки (спиртовки) в течение 10 секунд. После фиксации окрашивали мазок растворами из метиленовой сини по Леффлеру (исследуемый материал наносили на чистые обезжиренные предметные стекла, растирали на воздухе, а затем фиксировали над пламенем горелки в течение 1-2 мин. На фиксированный препарат наносили метиленовый синий по Леффлеру и проводили окраску в течение 3 мин) и по Цилю (наносили несколько капель основного фуксина Циля на фиксированный мазок и окрашивали препарат в течение 1-3 мин.) одновременно, разведенными в дистиллированной воде в соотношении 1:1:18, высушивали окрашенный мазок при комнатной температуре и подвергали микроскопии под большим увеличением с иммерсией (x1000), определяя вид возбудителя, приобретавшего бледно-голубой цвет с четкими контурами и внутренним содержимым.Example: In a centrifuge tube, the blood of animals is mixed with a solution of diluted table vinegar at a rate of 1: 5 (where 1-1 ml of blood is taken, and 5-5 ml of an aqueous solution of table acetic acid). The resulting mixture was stirred with a glass rod and settled in a dark, cold place for 30 minutes. Then, centrifugation was carried out in 2 stages: first, the mixture was centrifuged for 3 minutes, and then after the supernatant was drained, 2-3 drops of methylene blue were added to the precipitate, and the precipitate was centrifuged again for 3 minutes. Then the supernatant was discarded and the precipitate was transferred onto a glass slide where a wet smear was prepared. The smear was dried and fixed over the flame of the burner (spirit lamp) for 10 seconds. After fixation, the smear was stained with Leffler methylene blue solutions (the test material was applied to clean fat-free glass slides, triturated in air, and then fixed over the burner flame for 1-2 minutes. Leffler methylene blue was applied to the fixed preparation and stained for 3 min) and Zil (applied a few drops of the main fuchsin Zil on a fixed smear and stained the drug for 1-3 min.) At the same time, diluted in distilled water in a ratio of 1: 1: 18, dried painted first smear at room temperature and subjected under high magnification microscope with immersion (x1000), determining the type of pathogen acquires a pale blue color with clear contours and internal contents.
Было обследовано 536 служебных собак, в т.ч. 67 собак оказались инвазированными. Экстенсивность инвазии составила 12,5±1,4%.536 service dogs were examined, including 67 dogs were invasive. The invasion intensity was 12.5 ± 1.4%.
Основные преимущества заявляемого решения по сравнению с прототипом является: использование разведенного столового уксуса менее токсично для экспериментатора, менее дорогостояще и более быстрое при постановке диагноза.The main advantages of the proposed solution compared to the prototype is: the use of diluted table vinegar is less toxic for the experimenter, less expensive and faster when diagnosed.
Источники информацииInformation sources
1. Архипов И.А., Архипова Д.Р. Дирофиляриоз, М., 2004., 194 стр.1. Arkhipov I.A., Arkhipova D.R. Dirofilariasis, M., 2004., 194 pp.
2. Новикова Т. Лабораторная диагностика эндопаразитов у собак и кошек, Москва, Аквариум, 2005, С.98.2. Novikova T. Laboratory diagnosis of endoparasites in dogs and cats, Moscow, Aquarium, 2005, S. 98.
3. Методические указания «Профилактика дирофиляриоза» МУ 3.2.1880-04, Москва, Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава РФ, 2004.3. Guidelines "Prevention of Dirofilariasis" MU 3.2.1880-04, Moscow, Federal Center for State Sanitary and Epidemiological Supervision of the Ministry of Health of the Russian Federation, 2004.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130662/13A RU2506926C1 (en) | 2012-07-17 | 2012-07-17 | Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012130662/13A RU2506926C1 (en) | 2012-07-17 | 2012-07-17 | Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2506926C1 true RU2506926C1 (en) | 2014-02-20 |
Family
ID=50113179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012130662/13A RU2506926C1 (en) | 2012-07-17 | 2012-07-17 | Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2506926C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2773944C1 (en) * | 2021-12-06 | 2022-06-14 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" | Method for detecting types of dirofilariasis pathogens dirofilaria repens and dirofilaria immitis using real-time pcr |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA64513A (en) * | 2003-06-19 | 2004-02-16 | Ivan Stepanovych Dakhno | Method for diagnosing canine dirofilariasis in live animals |
| RU2371145C2 (en) * | 2007-08-15 | 2009-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный университет" (АГУ) | Method of detecting dogs' infection with dirofilaria immitis |
-
2012
- 2012-07-17 RU RU2012130662/13A patent/RU2506926C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA64513A (en) * | 2003-06-19 | 2004-02-16 | Ivan Stepanovych Dakhno | Method for diagnosing canine dirofilariasis in live animals |
| RU2371145C2 (en) * | 2007-08-15 | 2009-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный университет" (АГУ) | Method of detecting dogs' infection with dirofilaria immitis |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Алтухов Н.М., Афанасьев В.И., Башкиров Б.А. и др. Справочник ветеринарного врача, 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1996, с.293. * |
| Есаулова Н.В., Акбаев М.Ш., Давыдова О.Е. и др. Диагностика и лечебно-профилактические мероприятия при дирофиляриозах плотоядных животных. Методические рекомендации. - М., 2007. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2773944C1 (en) * | 2021-12-06 | 2022-06-14 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" | Method for detecting types of dirofilariasis pathogens dirofilaria repens and dirofilaria immitis using real-time pcr |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2944596C (en) | Method for the quantification of parasite eggs in feces | |
| Traversa et al. | Zoonotic intestinal parasites and vector-borne pathogens in Italian shelter and kennel dogs | |
| Dabrowska et al. | Assessment of viability of the nematode eggs (Ascaris, Toxocara, Trichuris) in sewage sludge with the use of LIVE/DEAD Bacterial Viability Kit | |
| JP2018044920A (en) | Reagent composition for immunochromatography | |
| RU2506926C1 (en) | Diagnostic technique for dirofilariasis in animals and human | |
| JP6358942B2 (en) | Reagent for measuring endotoxin and method for measuring endotoxin | |
| RU2683324C2 (en) | Kit for complex diagnostics of endoparazites of animals by coproscopy | |
| RU2362995C1 (en) | Way of blood protozoan diseases diagnostics | |
| Yucesan et al. | Molecular Detectıon of Canine Leishmaniasis in Northern Anatolia, Turkiye | |
| CN115184594A (en) | Fluorescent color development method for detecting clonorchis sinensis | |
| RU2218565C1 (en) | Method for predicting hemoparasitic diseases | |
| RU2641961C1 (en) | Method for diagnosing parasitic diseases in birds and animals | |
| RU2810589C1 (en) | Method of performing an immunofluorescence reaction for diagnosing bovine leukemia | |
| RU2783710C1 (en) | Method for detecting the causative agent of pseudotuberculosis | |
| RU2834042C2 (en) | Rapid test for toxocariasis and methods of making components therefor | |
| RU2736806C2 (en) | Diagnostic technique for cruciferous vascular bacteriosis by dot-immunoassay | |
| RU2379685C2 (en) | Method of carrying out express nbt-test of leukocytes in peripheral blood of dogs | |
| RU2803893C1 (en) | Accelerated method for post-mortem diagnosis of bovine leukemia using enzyme immunoassay | |
| RU2287154C2 (en) | Method for predicting toxoplasmosis in dogs and cats | |
| RU2367607C1 (en) | Method for determining immune complexes in white mice under stress | |
| Gunasekara et al. | Utility of a modified silver staining technique for detection of Leptospira | |
| Dong et al. | Protocol for building an in vivo model for observation and evaluation of neutrophil extracellular trapping nets in influenza virus-infected mice | |
| RU1791454C (en) | Method of mareck disease diagnosis | |
| RU2120628C1 (en) | Method of assay of mucus species in calves and piglets feces | |
| HAMMED et al. | New and ModifiedStaining TechniquesforRapid Diagnosis of Hemoparasites in Blood Smears of Cows |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140718 |