RU2396968C2 - Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения - Google Patents
Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2396968C2 RU2396968C2 RU2008137775/15A RU2008137775A RU2396968C2 RU 2396968 C2 RU2396968 C2 RU 2396968C2 RU 2008137775/15 A RU2008137775/15 A RU 2008137775/15A RU 2008137775 A RU2008137775 A RU 2008137775A RU 2396968 C2 RU2396968 C2 RU 2396968C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lysate
- zeolite
- cells
- microorganisms
- drug
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 title abstract 3
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 49
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 49
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 47
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 46
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 claims abstract description 46
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 17
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 27
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 24
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 20
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 8
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 claims description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 70
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 12
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 11
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 abstract description 3
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 2
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 abstract 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 abstract 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 abstract 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 65
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 27
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 27
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 9
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 9
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 7
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 5
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 5
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 5
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 5
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 5
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 5
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 5
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 5
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 3
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 description 3
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 3
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 150000008273 hexosamines Chemical class 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 3
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 1
- 241001468196 Leuconostoc pseudomesenteroides Species 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 208000024798 heartburn Diseases 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 108010009355 microbial metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 108010027350 protosubtilin Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000012414 sterilization procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к средствам для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) на основе пробиотиков, а также их метаболитов. Предлагается препарат, содержащий (мас.%): цеолит - 70-80; гидролизата соевой муки - 15-25; стеарат кальция - 0,5-1,5; литические ферменты - 0,05-3,5; лизат клеток микроорганизмов - остальное. Способ включает в себя культивирование микроорганизмов, смешение метаболитной смеси с цеолитом и вспомогательными ингредиентами, стерилизацию и фасовку конечного продукта, причем полученные клетки микроорганизма-продуцента подвергают воздействию литических ферментов в течение 2-10 часов при температуре +20-50°С. При необходимости в композицию дополнительно вводят ферментные препараты до заданных параметров. Средство представляет собой препарат с широкой клинической эффективностью, рекомендовано в схемах терапии при лечении больных с дисбактериозом кишечника различного генеза. При реализации технологии получения средства обеспечивается постоянство биохимических характеристик состава заявляемого средства; исключается последующее появление в конечном продукте живых клеток продуцента; повышается устойчивость средства при хранении; упрощается процесс получения конечного средства за счет исключения стадии сушки. 8 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), полученным на основе пробиотических микроорганизмов и/или их метаболитов. Препараты данной группы при введении в организм оказывают позитивное воздействие на физиологические, биохимические и иммунные реакции хозяина через стабилизацию и оптимизацию функциональной активности нормальной микрофлоры ЖКТ и могут быть использованы в прикладной биотехнологии, медицине, пищевой промышленности, ветеринарии и смежных отраслях.
В настоящее время для нормализации деятельности ЖКТ в макроорганизм перорально вводят препараты, содержащие живые микроорганизмы, в частности биопрепараты на основе молочнокислых микроорганизмов [ЕР 0097484, 1984 кл. А23С 1/05: ЕР 0043962, 1980 кл. А23С 19/086: US 4289888, 1979, кл. А23С 9/123]. Как правило, в состав таких препаратов входят: клетки бактерий, остатки культуральной жидкости (КЖ), жиры, белки, лактоза, камедь и другие добавки. Конкретный состав таких композиций определяется особенностями используемых микроорганизмов и характером поставленной задачи.
Недостатком указанных препаратов является их относительно невысокая биологическая активность, связанная с процессом инактивации живых микрооргаганизмов при их прохождении через верхние отделы ЖКТ (желудок, двенадцатиперстная кишка), а также отсутствие стабильности их биологических свойств как при получении, так и при длительном хранении, что ведет к снижению эффективности лечебно-профилактических процедур.
Более стабильными при хранении являются пробиотические препараты, содержащие в качестве активного начала спорообразующие бактерии. Широкое распространение получили пробиотик Бактисубтил (фирма "Marion Merrell", Франция) и его аналог Флонивин БС (фирма "Galenika", Сербия), содержащие культуру штамма Bacillus cereus IP 5832 (коллекция Института Пастера, Париж), а также Энтерогермин (фирма "Sanofi Winthrop", Италия) и Цереобиоген ("Xing Jian", Китай), действующим началом которых являются различные штаммы В. cereus [Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных.// Микробиол. Журн., 1992, т.54, №6, с.82-93]. Недостатком указанных пробиотиков является ограниченность их спектра действия, так как они направлены против относительно узкой группы возбудителей заболеваний.
Известен лечебно-профилактический биопрепарат «Бактиспорин», применяемый для лечения широкого круга заболеваний. Он содержит высушенную лиофильным способом биомассу бактерий штамма Bacillus subtilis 3H и защитную среду на основе сахарозожелатиновой смеси или лактозы [RU 2130316, 1999]. Однако биопрепарат также имеет низкую эффективность против таких возбудителей острых кишечных инфекций, как Pseudomonas spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp.
Известны препараты «Биоспорин» и «Ирилис», которые характеризуются высокой антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно патогенных микроорганизмов. Препараты содержат живые клетки штаммов Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis, а также наполнитель [RU 1722502, 1992; RU 2264454, 2005]. Недостатком этих препаратов является чувствительность входящих в их состав микроорганизмов к антибиотикам, что исключает возможность их сочетанного применения с антибактериальными средствами. Терапевтические дозы антибиотиков априори вызывают гибель патогенных форм бактерий и неизбежное подавление функциональной активности живых штаммов пробиотических микроорганизмов. Это приводит к существенному снижению и/или отсутствию ожидаемого клинического эффекта, что ограничивает практическое применение таких схем лечения.
Из аналогов по технической сущности и заявляемому эффекту наиболее близким к заявляемому изобретению является препарат «Бактистатин» [RU 2287335, 2006], принимаемый перорально в виде капсул. В состав препарата входят (мас.%): стерилизованная культуральная жидкость (СКЖ), содержащая метаболиты штамма Bacillus subtilis - 0,1÷2,0, цеолит - 68,0÷85,0, гидролизат соевой муки (ГСМ) - 15,0÷30,0 и стеарат кальция (СК) - 0,5÷5,0.
Действие препарата «Бактистатин» базируется на том, что при его транзитном прохождении по ЖКТ в заданной зоне происходит разрушение защитной желатиновой капсулы и выделение в полость кишечника иммобилизованных на частицах цеолита компонентов пробиотика. В процессе движения частиц цеолита по ЖКТ с пористой поверхности адсорбента постепенно высвобождаются биологически активные соединения, что позволяет поддерживать в ЖКТ активность биологических компонентов пробиотика не менее суток, которое необходимо для восстановления и стимуляции функциональной активности нормальной микрофлоры кишечника. При этом эффект постепенного высвобождения с поверхности цеолита компонентов препарата приводит к появлению открытых поверхностей его структуры, что обеспечивает включение механизмов ионного обмена и избирательной адсорбции токсичных соединений.
Препарат получают следующим образом. Микроорганизмы В.subtilis выращивают методом глубинного культивирования. Затем культуральную жидкость (КЖ) с микроорганизмами подвергают центрифугированию и стерилизации, а полученную стерилизованную КЖ, содержащую метаболиты продуцента, смешивают с ГСМ, цеолитом и СК (как вариант, стерилизации подвергают смесь КЖ с цеолитом). Образовавшуюся смесь подвергают лиофилизации, при которой происходит иммобилизация биологически активных компонентов препарата на частицах цеолита, и фасуют в капсулы.
Недостатками препарата Бактистатина и способа его получения являются:
- нестабильность состава, обусловленная применением глубинного культивирования бактерий B.subtilis, при котором накопление в КЖ метаболитов продуцента зависит от большого количества факторов, а также наличие в препарате высокомолекулярных белков и пептидов, которые повышают вероятность развития аллергических реакций;
- относительно быстрое снижение активности препарата при длительном хранении без специального оборудования;
- возможность наличия в КЖ споровых форм продуцента, что заставляет применять жесткие методы стерилизации, приводящие одновременно к разрушению биологически активных веществ, составляющих действующее начало препарата.
Задачей, решаемой авторами изобретения, является создание стандартного по составу комплексного пробиотического средства, обладающего более высокой активностью и стабильностью при хранении, а также более экономичного и технологичного способа его получения.
Технический результат изобретения в отношении заявляемого «средства» заключается в том, что в качестве источника метаболитов и/или других биологически активных веществ (БАВ) используют не культуральную жидкость, содержащую метаболиты продуцента, а продукты расщепления клеток микроорганизмов литическими ферментами («лизат») в следующих соотношениях ингредиентов конечного средства (мас.%): цеолит - 70,0÷80,0; гидролизат соевой муки (ГСМ) - 15,0÷25,0; стеарат кальция (СК) - 0,5÷1,5; литические ферменты - 0,05÷3,5; лизат клеток продуцента - остальное.
Было показано, что значительное подавление роста тестовых культур микроорганизмов Sh.sonnei и S.aureus (таблица 1) по сравнению с препаратом-аналогом может быть достигнуто независимо от природы микроорганизмов. Литические ферменты либо остаются в композиции после завершения лизиса как часть лизата, либо, в частности, при введении в состав заявляемого средства низких концентраций лизата (менее 0,05÷0,1%) вводятся в композицию в виде вносимых извне ферментных препаратов.
Лучшие результаты по воздействию на указанные тестовые культуры микроорганизмов были достигнуты при использовании средства, получившего условное наименование «СЛ08», содержащего (мас.%): лизата клеток Bacillus subtilis - 0,10; литических ферментов - 0,5; цеолита - 76,0; гидролизата соевой муки - 22,4; стеарата кальция - 1,0. Средство «СЛ08» было снабжено кишечно-растворимой капсулой, покрытой кислотно-защитным слоем.
Технический результат изобретения в отношении «способа» заключается в том, что после культивирования выделяют клетки микроорганизмов и подвергают их воздействию литических ферментов в течение 2÷10 часов при температуре
+20,0÷50,0°С, после чего смешивают с вспомогательными веществами, а затем фасуют в желатиновые капсулы (по 0,5 или 1,0 г).
В результате использования заявляемого способа на стадии отделения клеток микроорганизмов от питательной основы из дальнейшей переработки исключается попадание нежелательных компонентов культуральной среды в конечную субстанцию «средства». Под воздействием литических ферментов происходит повышенное контролируемое выделение полезных метаболитов клеток, одновременно обеспечивается деструкция потенциальных аллергенов (белки, полисахариды и т.д.), а также исключается возможность попадания в конечный препарат живых микроорганизмов и спор. При этом нет необходимости использовать жесткие режимы стерилизационной обработки БАВ препарата, а стерилизация цеолита и/или ГСМ может проводиться обычными методами - например, автоклавированием или сухим жаром.
Кроме того, процесс последовательного перемешивания биологически активных компонентов заявляемого средства исключает применение последующей процедуры сушки получаемой конечной субстанции лиофильным или любым другим способом.
Таким образом, реализация вышеописанной технологии получения препарата на основе ферментативного лизата клеток микроорганизмов обеспечивает постоянство биохимических характеристик состава заявляемого «средства»; исключает последующее появление в конечном продукте живых клеток; повышает устойчивость композиции при хранении; упрощает процесс получения конечной субстанции композиции за счет исключения стадии сушки.
Пример 1. Микроорганизмы B.subtilis ВКПМ №В-2335(3) выращивали методом поверхностного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили механическое отделение клеток от культуральной среды. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента субтилизина (0,8 мас.%) в течение 2 часов при температуре +50°С. Полученный ферментативный лизат клеток смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизата клеток B.subtilis - 0,25; литических ферментов - 0,75; цеолита - 78,0; гидролизата соевой муки - 20,0; стеарата кальция - 1,0. Выход конечного продукта 200±5 кг.
Пример 2. Микроорганизмы B.subtilis штамм ВКПМ №8-2335(3) выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды центрифугированием. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента папаина (0,1 мас.%) в течение 3 часов при температуре +42°С. Полученный ферментативный лизат клеток B.subtilis смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 0,5; ГСМ - 20,2; цеолит - 78,2; СК - 1,0; литические ферменты - 0,1. Выход конечного продукта 180±5 кг.
Пример 3. Микроорганизмы B.subtilis штамм ТПИ 13-07.06.21-ДЕП/ВГНКИ выращивали методом поверхностного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили механическое отделение клеток от культуральной среды. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента пепсина (0,2 мас.%) в течение 6 часов при температуре +35°С. Полученный ферментативный лизат клеток B.subtilis смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации в автоклаве. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 1,65; ГСМ - 16,8; цеолит - 80,0; СК - 1,5; литические ферменты - 0,05. Выход конечного продукта 215±5 кг.
Пример 4. Микроорганизмы B.subtilis штамм ВКПМ №В4759 (3) выращивали методом поверхностного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды сепарацией. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента нейтральной протеазы (2,08 мас.%) в течение 4 часов при температуре +37°С. Полученный ферментативный лизат клеток B.subtilis смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 1,3; ГСМ - 25,0; цеолит - 72,4; СК - 0,5; литические ферменты - 0,8. Выход конечного продукта 140±5 кг.
Пример 5. Микроорганизмы смешанной культуры Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus (культура Yo-Flex® для производства йогурта, компания Christian Hansen/Дания) выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды сепарацией. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента трипсина (2,1 мас.%) в течение 4 часов при температуре +37°С. Полученный ферментативный лизат клеток Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 2,5; ГСМ - 20,5; цеолит - 74,6; СК - 1,2; ферменты - 1,2. Выход конечного продукта 170±5 кг.
Пример 6. Микроорганизмы B.subtilis штамм ВКПМ №В4759 (3) выращивали методом поверхностного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды сепарацией. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента Биопрон (Нагасэ/Япония - 1,1 мас.%) в течение 10 часов при температуре +37°С. Полученный ферментативный лизат продуцента B.subtilis смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 0,1; ГСМ - 22,4; цеолит - 76,0; СК - 1,0; литические ферменты - 0,50. Выход конечного продукта 140±5 кг.
Пример 7. Микроорганизмы смешанной культуры Lactococcus lactis подвиды lactis и cremoris, Leuconostoc mesenteroides подвид cremoris и Leuconostoc pseudomesenteroides (культура eXact® для производства сметаны, творога и сыра, компания Christian Hansen/Дания) выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды микрофильтрацией. Затем клетки подвергали разрушению при помощи литического фермента химотрипсина (0,28 мас.%) в течение 2 часов при температуре +32°С. Полученный ферментативный лизат клеток смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 0,08; ГСМ - 24,0; цеолит - 73,9; СК - 1,5; литические ферменты - 0,52. Выход конечного продукта 185±5 кг.
Пример 8. Микроорганизмы B.subtilis штамм ТПИ 9 выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили отделение клеток от культуральной среды микрофильтрацией. Затем клетки подвергали разрушению при помощи протеолитического фермента кислой протеазы (1,2 мас.%) в течение 2 часов при температуре +32,0°С. В получаемый продукт вносили протеолитический бактериальный препарат Протозайм МН (фирма «Danisco», Нидерланды) - 1,5 мас.% и амилолитический бактериальный препарат Зимаджунт НТ340 (фирма «Enmex», Мексика) - 2,0 мас.%. Полученный ферментосодержащий лизат клеток B.subtilis смешивали с ГСМ, цеолитом и СК. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. В результате был получен препарат следующего состава (мас.%): лизат клеток - 0,02; ГСМ - 25,0; цеолит - 70,0; СК - 1,48; ферменты - 3,5. Выход конечного продукта 180±5 кг.
Пример 9. Микроорганизмы смешанной культуры Lactobacillus acidophilus, Bifldobacterium lactis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Bifidobacterium longum, Lactobacillus casei и Lactobacillus rhamnosus (культура Nu-Trish® для производства широкого ассортимента биопродуктов, компания Christian Hansen/Дания) выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили механическое отделение клеток от культуральной среды. Затем клетки подвергали разрушению при помощи панкреатина (0,5 мас.%) в течение 2 часов при температуре +20°С. В получаемый продукт вносили протеолитический бактериальный препарат Нейтраза (фирма «Novozymes», Дания) - 1,5 мас.% и амилолитический бактериальный препарат Ликвамил (фирма «Genencor», США) - 1,1 мас.%. Полученный ферментативный лизат клеток смешивали с ГСМ, цеолитом и СК в следующих соотношениях (мас.%): лизат клеток - 0,95; ГСМ - 15,0; цеолит - 80,0; СК - 1,45. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. Выход конечного продукта 160±5 кг.
Пример 10. Микроорганизмы Saccharomyces cerevisiae, раса 9 выращивали методом глубинного культивирования. После окончания процесса культивирования проводили механическое отделение клеток от культуральной среды. Затем клетки подвергали разрушению при помощи протеолитической композиции ферментов дрожжевых катепсинов (0,23 мас.%) в течение 10 часов при температуре 50°С. В получаемый продукт вносили протеолитический бактериальный препарат Протосубтилин Г3x - 1 мас.% и амилолитический бактериальный препарат Амилосубтилин Г3х - 0,45 мас.%. Полученный ферментативный лизат клеток S.cerevisiae смешивали с ГСМ, цеолитом и СК в следующих соотношениях (мас.%): лизат клеток - 0,05; ГСМ - 21,3; цеолит - 76,0; СК - 1,2. Перед смешиванием ГСМ и цеолит подвергали стерилизации сухим жаром. Выход конечного получаемого продукта 195±5 кг.
Пример 11. Изучение воздействия компонентного состава заявляемого средства на ингибирование роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры.
В таблице 1 приведены результаты влияния одинаковых доз препаратов (500 мг), полученных на основе заявляемого средства и препарата аналога, введенных в мясопептонный агар (МПА), на ингибирование роста Sh.sonnei и S.aureus 1479. Представленные результаты показывают, что, практически, во всех случаях происходит более эффективное ингибирование роста указанных микроорганизмов по сравнению с препаратом аналогом. Вместе с тем, при введении в МПА препарата, полученного по примеру №6 в следующих соотношениях компонентов (мас.%): лизат - 0,10; цеолит - 76,0; ГСМ - 22,4; литические ферменты - 0,50 и СК - 1,0, обеспечивается максимальное ингибирование роста Sh.sonnei (20,9 мм) и S.aureus 1479 (26,6 мм). В дальнейшем исследования проводились на препарате вышеуказанной рецептуры, получившей условное наименование «СЛ08».
Необходимо отметить наличие близких по величине эффектов ингибирования роста бактерий Sh.sonnei и S.aureus 1479 на МПА, которые были получены при введении в состав заявляемого средства лизатов других микроорганизмов. Следовательно, реализация технологии получения заявляемого средства на основе ферментативного лизата клеток различных видов микроорганизмов позволяет создать сходные по компонентному составу метаболитные препараты, обладающие как пробиотическими, так и пребиотическими свойствами.
| Таблица 1 | |||||||
| Влияние компонентных составов заявляемого средства и препарата-аналога на рост микроорганизмов на среде МПА | |||||||
| № примера | Состав заявляемого средства, мас.% | Зона угнетения роста Sh.sonnei через 24 ч, мм | Зона угнетения роста S.aureus 1479 через 24 ч, мм | ||||
| Лизат | Цеолит | ГСМ | Литические ферменты | СК | |||
| 1 | 0,25 | 78,0 | 20,0 | 0,75 | 1,0 | 18,2 | 25,7 |
| 2 | 0,5 | 78,2 | 20,2 | 0,10 | 1,0 | 19,2 | 18,2 |
| 3 | 1,65 | 80,0 | 16,8 | 0,05 | 1,5 | 18,5 | 19,3 |
| 4 | 1,3 | 72,4 | 25,0 | 0,80 | 0,5 | 17,4 | 22,2 |
| 5 | 2,5 | 74,6 | 20,5 | 1,2 | 1,2 | 19,8 | 25,6 |
| 6 | 0,10 | 76,0 | 22,4 | 0,50 | 1,0 | 20,9 | 26,6 |
| 7 | 0,08 | 73,9 | 24,0 | 0,52 | 1,5 | 20,2 | 24,1 |
| 8 | 0,02 | 70,0 | 25,0 | 3,5 | 1,48 | 16,4 | 24,7 |
| 9 | 0,95 | 80,0 | 15,0 | 2,6 | 1,45 | 16,7 | 24,9 |
| 10 | 0,05 | 76,0 | 21,3 | 1,45 | 1,2 | 19,4 | 25,6 |
| Препарат-аналог (оптимальный состав для сравнения) | |||||||
| - | СКЖ 1,0 | 78 | 20 | - | 1,0 | 16,7 | 24,2 |
Пример 12. Сопоставление компонентного состава заявляемого средства и препарата-аналога «Бактистатин»
Анализировали состав образцов заявляемого средства, полученного по примеру №1, и препарата-аналога (ПА) при одинаковом содержании в нем (мас.%): цеолита - 78, ГСМ - 20,0 и СК - 1,0. В таблице 2 представлены результаты высокоэффективной жидкостной хроматографии анализа веществ в образцах, содержащих ферментативный лизат клеток продуцента (ФЛКП, заявляемое средство) и СКЖ (Бактистатин). В таблице 3 показано содержание БАВ в конечных продуктах (готовых субстанциях) заявляемого средства и препарата-аналога «Бактистатин».
| Таблица 2 | ||
| Содержание БАВ в стерилизованной культуральной жидкости (СКЖ) и в ферментативном лизате клеток продуцента (ФЛКП) | ||
| Наименование анализируемых показателей | СКЖ | ФЛКП |
| Содержание белка*, мкг/см-3 | 541,5 | 496,0 |
| Протеолитическая активность (ПА), ед. ПА, дм-3 | 8,7 | 2,2 |
| Амилолитическая активность (АА), ед. АА, дм-3 | 42,7 | 19,2 |
| Суммарная концентрация общих аминокислот, мкг/см-3 | 568,8 | 2540 |
| Суммарная концентрация свободных аминокислот, мкг/см-3 | 60,8 | 357,0 |
| Концентрация гексозаминов, мкг/см-3 | 104,9 | 92,1 |
| Концентрация глюкозаминов, мкг/см-3 | 95,6 | 87,1 |
| Концентрация диаминопимелиновой кислоты, мкг/см-3 | 19,6 | 7,6 |
| Концентрация аденина / Ха**, мкг/см-3 | 12,2/3,2 | 20,8/0,2 |
| Концентрация гуанина / Хг**, мкг/см-3 | 0/16,3 | 0,6/5,7 |
| Концентрация тимина / Хт**, мкг/см-3 | 8,2/0 | 6,2/1,0 |
| Концентрация урацила / Ху**, мкг/см-3 | 11,4/8,6 | 4,7/1,6 |
| Концентрация цитозина / Хц**, мкг/см-3 | 0,0/12,1 | 0,0/3,9 |
| Примечания: *содержание белка определяли по методу Лоури; **Ха, Хг, Хт, Ху, Хц - неидентифицированные производные аденина, гуанина, тимина, урацила и цитозина в пересчете на основное вещество. | ||
| Таблица 3 | ||
| Содержание БАВ в конечных субстанциях препарата-аналога «Бактистатин» и заявляемого средства | ||
| Наименование анализируемых показателей | Препарат «Бактистатин» | Заявляемое средство |
| Протеолитическая активность (ПА), ед. ПА/г | 2,00 | 1,8 |
| Амилолитическая активность (АА), ед. АА/г | 30,20 | 21,2 |
| Суммарная концентрация общих аминокислот, мг/г | 109,00 | 610,00 |
| Суммарная концентрация свободных аминокислот, мг/г | 2,06 | 12,5 |
| Концентрация общих гексозаминов, мг/г | 50,2 | 62,3 |
| Концентрация общих глюкозаминов, мг/г | 45,6 | 41,2 |
| Концентрация диаминопимелиновой кислоты, мкг/г | 2,90 | 2,01 |
| Концентрация свободного/связанного аденина, мг/г | 0,02/0,26 | 0,26/0,20 |
| Концентрация свободного/связанного гуанина, мг/г | 0,00/1,03 | 0,10/2,02 |
| Концентрация свободного/связанного тимина, мг/г | 0,47/0,00 | 3,01/0,09 |
| Концентрация свободного/связанного урацила, мг/г | 0,08/1,06 | 0,35/0,11 |
| Концентрация свободного/связанного цитозина, мг/г | 0,00/1,82 | 0,00/1,15 |
Анализ результатов хроматографического анализа веществ, содержащихся как в образцах ФЛКП и СКЖ (таблица 2), так и в конечных готовых субстанциях препаратов (таблица 3) показывают, что в составе действующего начала заявляемого средства находятся все основные группы биохимических соединений, которые были обнаружены в действующем начале препарата-аналога «Бактистатин». При этом содержание нуклеиновых оснований (продукты расщепления нуклеиновых кислот), диаминопимелиновой кислоты и гексозаминов (продукты расщепления клеточной стенки продуцента), а также аминокислот (продукты расщепления клеточного белка) в составе заявляемого средства существенно выше, что свидетельствует о большей биологической ценности последнего. Кроме того, при получении заявляемого средства на основе ферментативного лизата клеток B.subtilis обеспечивается постоянство компонентного состава продукта за счет контролируемой концентрации вегетативных форм клеток данного микроорганизма при их обработке литическими ферментами, что в последующем также исключает возможность появления в конечной субстанции живых клеток.
Пример 13. Оценка иммунотропных эффектов заявляемого средства и препарата-аналога
Функциональная активность врожденного иммунитета неспецифична и реализуется за счет: механической защиты (кожа, слизистые оболочки); фагоцитоза; разрушения инфицированных клеток (комплемент, естественные киллеры); секреции цитокинов (интерферон, интерлейкины); синтеза антибактериальных пептидов, хемокинов и т.д. [Пальцев М.А., Онищенко Г.Г., Зверев В.В., Иванов А.А. и др. Биологическая безопасность./ М. Медицина.: 2006; 220-238; Pirofski L.A., Casadevall A. Immunomodulators as an antimicrobial tool. Curr. Opin. Microbiol. 2006; 9: 489-495; Cristofaro P., Opal S.M. Role of Toll-like receptors in infection and immunity: clinical implications. Drugs. 2006; 66: 15-29.]. Для активации этой системы могут использоваться как иммунотропные препараты микробного происхождения, содержащие лизаты микробных тел, так и частично очищенные клеточные элементы (липополисахариды, пептидогликаны) или биологически активные фрагменты, полученные путем синтеза (мурамилдипептид, глюкозаминмурамилдипептид). Применение таких препаратов позволяет активировать неспецифические факторы иммунитета, которые также принимают участие в формировании антиинфекционной защиты организма.
Была проведена оценка изменений факторов неспецифического иммунитета на фоне энтерального введения в организм заявляемого средства «СЛ08», полученного по примеру №6, и препарата-аналога «Бактистатин». Для решения поставленной задачи определяли функциональную активность факторов неспецифической резистентности организма при различной продолжительности введения заявляемого средства и препарата-аналога.
Исследования проведены на белых беспородных мышах-самцах массой 16-18 г, полученных из питомника «Рапполово». В процессе эксперимента животных распределили на две группы и содержали в стандартных условиях на полноценном рационе питания. Первой группе животных энтерально вводили «СЛ08» по следующей схеме: 1 раз в сутки, доза - 1,5 мг/мышь, продолжительность введения - 1, 5, 10 и 20 дней. Второй группе животных энтерально вводили Бактистатин по аналогичной схеме. До введения препаратов, а также на следующий день после окончания соответствующей продолжительности их курсового введения у животных обеих групп проводили взятие крови для оценки динамики изменений факторов неспецифической резистентности. При этом определяли следующие показатели: переваривающую активность гранулярных лейкоцитов, концентрации лизоцима и миелопероксидазы.
Переваривающую активность гранулярных лейкоцитов периферической крови животных оценивали следующим образом. Для этого от каждого животного соответствующей группы производили взятие крови в центрифужную пробирку, содержавшую 0,1 мл раствора гепарина в разведении 1:10. Для исключения свертывания крови полученную суспензию тщательно перемешивали. Общий объем суспензии составлял 1,0 мл. Затем в пробирку вносили 0,1 мл тест-объекта фагоцитоза - односуточную культуру M.lysodeicticus в концентрации 109 КОЕ/мл, выращенную на мясопептонном агаре при температуре 37,0°С. Полученную смесь крови с тест-объектом помещали в термостат на 15 минут. По истечении этого времени делали мазок крови на предметном стекле. После этого пробирку с кровью снова помещали в термостат на 15 минут. По истечении этого времени делали еще один мазок крови на предметном стекле. Мазки высушивали при комнатной температуре, фиксировали в 96° этаноле и окрашивали по Романовскому-Гимзе. Мазки просматривали в световом микроскопе под иммерсией (объектив ×40).
В мазках, полученных, соответственно, через 15 и 30 мин, подсчитывали на 100 гранулоцитов количество фагоцитирующих клеток, содержащих 1 или более поглощенных объектов фагоцитоза. В качестве оцениваемого показателя определяли индекс переваривания (ИП), представляющий собой отношение количества фагоцитирующих клеток в мазке через 30 мин инкубации крови с тест-объектом фагоцитоза к количеству фагоцитирующих клеток в мазке через 15 мин инкубации крови с тест-объектом фагоцитоза. Значения ИП определяли по формуле:
где А - количество фагоцитирующих клеток на 100 просчитанных в мазке гранулярных лейкоцитов, поглотивших тест-объект в течение 15 мин инкубации; В - количество фагоцитирующих клеток на 100 просчитанных в мазке гранулярных лейкоцитов, поглотивших тест-объект в течение 30 мин инкубации. При удовлетворительном функционировании гранулярных лейкоцитов периферической крови значения ИП всегда >1. Эту величину выражали в относительных единицах (о.е.).
Концентрацию лизоцима в сыворотке крови определяли следующим образом. Кровь от животного собирали в центрифужную пробирку и получали сыворотку. Далее, 0,1 мл сыворотки крови переносили в бактериологическую пробирку, в которую добавляли 0,9 мл физиологического раствора. Полученную смесь перемешивали и к ней добавляли 1,5 мл суспензии тест-объекта (культуры M.lysodeicticus), которую предварительно стандартизовали на ФЭК-56М до экстинкции 0,66 (против зеленого светофильтра №6). Тест-объект выращивали на мясопептонном агаре в течение 24 ч в термостате при температуре +37,0°С. Готовую суспензию, содержащую тест-объект и исследуемую сыворотку, перемешивали и помещали в термостат на 30 мин при температуре +37,0°С. По завершении времени инкубации пробирки с материалом вынимали из термостата и определяли его экстинкцию на ФЭК-56М. Полученные в ходе определения величины экстинкции с помощью специиальных таблиц переводили в значения, характеризующие концентрацию лизоцима в сыворотке крови, и выражали в мкг/мл.
Уровень миелопероксидазы в сыворотке крови определяли спектрофотометрическим методом. Кровь от животного собирали в центрифужную пробирку и получали сыворотку. Затем 0,1 мл сыворотки крови переносили в лунку с плоским дном панели для ИФА и в эту же лунку вносили 0,1 мл 5% раствора бензидина. В контрольную лунку вместо исследуемой сыворотки вносили 0,1 мл физиологического раствора. Исследуемые пробы аккуратно перемешивали в планшетах и помещали в термостат на 60 мин при температуре 37,0°С. По окончании времени инкубации планшеты доставали из термостата и просматривали на вертикальном спектрофотометре фирмы «Dynatech» при длине волны 492 нм. Концентрацию миелопероксидазы в сыворотке крови получали в единицах экстинкции и выражали в единицах активности (ЕА/мл).
Статистическую обработку результатов эксперимента проводили с помощью пакета анализа данных, включенного в электронные таблицы Excel. При этом использовали однофакторный дисперсионный анализ с фиксированными эффектами [Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований. СПб.; ВМедА: 2005; 292.; Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б. Статистика в медицине и биологии./ Под ред. Ю.М. Комарова. T.1. Теоретическая статистика. М.: 2000; 412].
В таблице 4 представлены результаты сравнительной оценки динамики изменений факторов неспецифической резистентности у животных первой и второй группы при различной продолжительности энтерального введения заявляемого средства и препарата-аналога. Анализ результатов показывает, что динамика изменений значения факторов неспецифической резистентности животных первой и второй группы на фоне введения указанных препаратов практически идентична. Об этом свидетельствует отсутствие статистически значимых различий (Р>0,05) между значениями исследуемых факторов, регистрируемых у животных двух групп через 1, 5, 10 и 20 дней после введения заявляемого средства и препарата-аналога.
Вместе с тем, динамика развития изменений факторов неспецифического иммунитета у животных двух групп по отношению к фону (контрольные значения факторов до введения препаратов) имеет статистически значимые различия (Р<0,05). Это свидетельствует о достоверном повышении функциональной активности факторов неспецифического иммунитета у животных на фоне энтерального введения заявляемого средства и препарата-аналога.
Максимальная активность факторов неспецифической резистентности у двух групп животных отмечается на 5-10 день после введения препаратов. Затем, на 20 сутки применения препаратов происходит снижение функциональной активности этих показателей. Возможно, что при продолжительном введении препаратов (более 20 дней) начинают развиваться иммунодепрессивные эффекты, которые объясняются невозможностью бесконечной стимуляции как всей системы иммунитета, так и ее отдельных компонентов. Одинаковая динамика развития степени выраженности и направленности изменений факторов неспецифического иммунитета у животных, которым энтерально вводили заявляемое средство и препарат-аналог, а также сходство компонентного состава данных препаратов доказывают возможность использования заявляемого средства по показаниям, которые были приведены для препарата-аналога.
Таким образом, практическое применение заявляемого средства на основе ферментативного лизата продуцента Bacillus subtilis в виде лекарственного средства и/или пищевой добавки, получаемого по заявляемой технологии, является, по сравнению с препаратом-аналогом, более целесообразным.
Дальнейшая оценка возможности повышения функциональной активности указанных факторов неспецифического иммунитета была проведена на фоне энтерального введения в организм животных заявляемого средства, полученного по примеру №10, и препарата-аналога «Бактистатин». Для этого использовали аналогичную схему эксперимента (дозы препаратов, группы животных и т.д.), которая была представлена выше. Однако в этом случае продолжительность энтерального введения животным заявляемого средства и препарата-аналога составляла: 1, 5 и 10 дней. Кроме того, образцы вводимых препаратов имели основные различия по источникам получения микробных метаболитов, а также содержанию (мас.%) в их составе лизата клеток и литических ферментов (таблица 1).
| Таблица 4 | |||
| Факторы неспецифической резистентности животных при различной продолжительности энтерального введения заявляемого средства и препарата-аналога | |||
| Названия факторов неспецифической резистентности | Длительность введения препаратов животным, сутки/дни | Значения факторов при введении «СЛ08» | Значения факторов при введении Бактистатина |
| Индекс переваривающей активности гранулярных лейкоцитов, относительные единицы, о.е. | 0 фон, контроль | 1,21±0,015 δ=0,05 (N=12) |
1,21±0,015 δ=0,05 (N=12) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 |
 |
 |
|
| 20 |
 |
 |
|
| Концентрация лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл | 0 фон, контроль | 6,95±0,025 δ=0,50 (N=12) |
6,95±0,025 δ=0,50 (N=12) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 |
 |
 |
|
| 20 |
 |
 |
|
| Концентрация миелопероксидазы в сыворотке крови, ЕА/мл | 0 фон, контроль | 1,57±0,10 δ=0,063 (N=12) |
1,57±0,10 δ=0,063 (N=12) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 |
 |
 |
|
| 20 | 1,48±0,52 δ=0,35 (N=10 |
1,61±0,44 δ=0,34 (N=10) |
|
| Примечание: М±m - среднее значение и его ошибка; δ - стандартное отклонение; N - число животных; подчеркнутые значения факторов имеют статистически значимые различия по отношению к фону (контроль, до введения препаратов) при Р<0,05 | |||
В таблице 5 представлены результаты сравнительной оценки динамики изменений факторов неспецифической резистентности у животных двух групп при различной продолжительности энтерального введения заявляемого средства, полученного на основе лизата клеток Saccharomyces cerevisiae, раса 9, и препарата-аналога, полученного на основе метаболитов продуцента B.subtilis штамм ВКПМ №В-2335(3).
Результаты эксперимента, представленные в таблице 5, показывают, что динамика изменений значений факторов неспецифической резистентности у животных двух групп также имеет одинаковую направленность и, практически, не зависит от видового источника микробных метаболитов, на основе которых были приготовлены образцы заявляемого средства и препарата-аналога. Об этом свидетельствует отсутствие статистически значимых различий (Р>0,05) между значениями исследуемых факторов, регистрируемых у животных, через 1, 5 и 10 дней введения образцов указанных препаратов.
Следовательно, компонентные составы заявляемого средства, в том числе, приготовленного на основе лизата клеток Saccharomyces cerevisiae, и препарата-аналога, приготовленного на основе метаболитов клеток B.subtilis, обеспечивают сопоставимые биологические эффекты, связанные со стимуляцией неспецифиеских факторов иммунитета. Это означает, что для производства заявляемого средства могут быть использованы ферментативные лизаты клеток различных видов пробиотических штаммов микроорганизмов.
| Таблица 5 | |||
| Факторы неспецифической резистентности животных при различной продолжительности энтерального введения заявляемого средства, полученному по примеру №10, и препарата-аналога «Бактистатин» | |||
| Названия факторов неспецифической резистентности | Длительность введения препаратов животным, сутки/дни | Значения факторов при введении заявляемого средства, пример №10 | Значения факторов при введении препарата-аналога «Бактистатин» |
| Индекс переваривающей активности гранулярных лейкоцитов, относительные единицы, о.е. | 0 фон, контроль | 1,23±0,014 δ=0,05 (N=10) |
1,23±0,014 δ=0,05 (N=10) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 |
 |
 |
|
| Концентрация лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл | 0 фон, контроль | 6,97±0,024 δ=0,52 (N=10) |
6,97±0,024 δ=0,52 (N=10) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 |
 |
 |
|
| Концентрация миелопероксидазы в сыворотке крови, ЕА/мл | 0 фон, контроль | 1,62±0,10 δ=0,063 (N=10) |
1,62±0,10 δ=0,063 (N=10) |
| 1 |
 |
 |
|
| 5 |
 |
 |
|
| 10 | 2,95±0,26 δ=0,50 (N=10) |
2,69±0,33 δ=0,46 (N=10) |
|
| Примечание: М±m - среднее значение и его ошибка; δ - стандартное отклонение; N - число животных; подчеркнутые значения факторов имеют статистически значимые различия по отношению к фону (контроль, до введения препаратов) при Р<0,05 | |||
Необходимо отметить, что заявляемое средство содержит в своем составе существенно меньше (мас.%) ферментативного лизата клеток Saccharomyces cerevisiae (0,05%) и, соответственно, метаболитов, чем их содержится (мас.%) в составе препарата-аналога (1,0%). Следовательно, для получения сопоставимого повышения функциональной активности факторов неспецифического иммунитета в составе заявляемого препарата могут использоваться более низкие концентрации метаболитов, чем у препарата-аналога, что снижает риск потенциального развития нежелательных явлений, которые наблюдаются у людей при приеме иммунобиологических препаратов микробного происхождения.
Пример 14. Оценка эффективности «СЛ08» на больных с эрозивным антральным гастритом после курса эрадикационной терапии
В исследование эффективности использования препарата «СЛ08» было включено 20 больных с H.pylori-ассоциированными кислотозависимыми заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки в стадии обострения. Возраст больных варьировал от 20 до 60 лет. Больные были разделены на две группы по 10 человек - испытуемая группа (больные получали препарат в дозе 2 капсулы 2 раза в день во время еды «СЛ08» в схеме терапии) и 10 - контрольная группа (больные получали только базисную терапию).
Результаты исследований представлены в таблице 6. Как видно из данных таблицы, средство «СЛ08» эффективно для купирования явлений желудочной и кишечной диспепсии у больных с кислотозависимыми заболеваниями верхних отделов ЖКТ. Применение данного препарата у больных с эрозивным антральным гастритом приводило к четкому положительному клиническому эффекту у большинства больных, проявляющемуся в виде уменьшения симптомов кишечной диспепсии, развивающемуся на фоне эрадикационной терапии. В процессе лечения «СЛ08» все больные отмечали хорошую переносимость препарата, побочных эффектов не выявлено.
| Таблица 6 | ||||||
| Динамика выраженности клинических проявлений у больных эрозивным антральным гастритом в основной (испытуемой) и контрольной группах до и на фоне лечения | ||||||
| Названия симптома | Больные испытуемой группы | Больные контрольной группы | ||||
| до лечения (%) | 10 день лечения(%) | 30 день лечения (%) | до лечения (%) | 10 день лечения (%) | 30 день лечения (%) | |
| Боли в животе | 90 | 40 | 0 | 90 | 60 | 0 |
| Тяжесть и дискомфорт в животе | 90 | 30 | 10** | 90 | 50 | 40 |
| Тошнота | 40 | 10 | 0 | 70 | 20 | 10 |
| Изжога | 60** | 10** | 0 | 90 | 50 | 20 |
| Рвота | 20 | 0 | 0 | 10 | 0 | 0 |
| Горечь во рту | 60** | 20** | 0 | 20 | 20 | 0 |
| Урчание в животе | 90 | 40** | 20** | 90 | 80 | 70 |
| Вздутие живота | 90** | 10** | 0** | 20 | 80 | 50 |
| Частота стула (раз в день) | 0,86* | 1,0 | 1,2** | 0,86 | 2,06 | 1,7 |
| Характер стула по Бристольской шкале | 2,12* | 3* | 3,2* | 3,5 | 5,2 | 4,01 |
| Примечания: **р<0,05 (различия статистически достоверны) | ||||||
Пример 15. Оценка эффективности использования «СЛ08» для лечения больных с целиакией с дисбиотическими нарушениями толстой кишки различной степени выраженности
Под наблюдением находилось 10 человек с целиакией. У всех пациентов был установлен клинический диагноз глютеновой энтеропатии на основании данных клинического течения заболевания, морфометрического исследования слизистой оболочки 12-перстной кишки, иммунологического исследования крови. Препарат назначался в течение шести недель по 2 капсулы 2 раза в день. Анализ кала на дисбактериоз проводили до лечения и на 25-31 дни после лечения. Результаты исследования изменений микробиоценоза у больных целиакией до и после лечения представлены в таблице 7.
| Таблица 7 | ||||
| Изменение показателей состава микрофлоры толстой кишки после лечения препаратом «СЛ08» у больных целиакией | ||||
| Название группы микроорганизмов | Количество больных с измененным показателем до лечения | Изменение показателя после лечения (количество больных, %) - Процент указан от количества измененных показателей | ||
| Повышение количества | Снижение количества | Неизменился | ||
| Бифидумбактерии | 8 (80%) | 6 (60%) | 1 (10%) | 1(10%) |
| Лактобактерии | 10(100%) | 7(70%) | 0 | 3(30%) |
| Бактероиды | 5 (50%) | 3 (30%) | 2 (20%) | 0 |
| Е. coli с нормальной ферментативной активностью | 9(90%) | 9(90%) | 0 | 0 |
| Е. coli со сниженной ферментативной активностью | 5(50%) | 0 | 5(50%) | 0 |
| Энтерококки | 5 (50%) | 0 | 4 (40%) | 1(10%) |
| Гемолитические микроорганизмы | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Условно-патогенные бактерии | 4 (40%) | 0 | 4 (40%) | 0 |
| Staph. aureus | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Staph. saprophyticus, epidermidis | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Грибы рода Candida | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Клостридии | 0 | 0 | 0 | 0 |
Изучение микробиоценоза у больных с целиакией позволило выявить выраженные изменения в составе микрофлоры толстой кишки, характеризующиеся значительным снижением содержания вредной биофлоры. На фоне приема препарата отмечалось значительное улучшение показателей, как анаэробной флоры, так и аэробной составляющей. Отмечалось увеличение бифидобактерий и лактобактерий, бактероидов, наблюдалось увеличение количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью при снижении процента кишечной палочки с измененными свойствами. После проведенной терапии уменьшилось количество гемолитических организмов, условно-патогенных бактерий.
Пример 16. Изучение воздействия препаратов «СЛ08» и препарата-аналога «Бактистатин» на ингибирование роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры в процессе хранения при +4,0°С
Проводилось изучение ингибирующей активности препаратов «СЛ08» и препарата «Бактистатин» аналогичного состава в условиях различных сроков хранения на рост Sh.sonnei и S.aureus 1479 при введении 500 мг препарата в мясопептонный агар (МПА). Ингибирующую активность препаратов оценивали в мм.
Полученные результаты приведены в таблице 8. Приведенные данные свидетельствуют, что заявляемое средство соизмеримо по активности и эффективности воздействия на организм с препаратом «Бактистатин», но существенно превосходит его по стабильности и по технологичности процессов получения.
| Таблица 8 | |||
| Влияние срока хранения средства на рост микроорганизмов на МПА | |||
| Сроки хранения, дни, при +18°С | Название препаратов | Зона угнетения роста Sh.sonnei через 24 ч, мм | Зона угнетения роста S.aureus 1479 через 24 ч, мм |
| 1 | Бактистатин | 16,7 | 24,2 |
| 1 | СЛ08 | 20,9 | 26,6 |
| 14 | Бактистатин | 16,6 | 24,7 |
| 14 | СЛ08 | 20,9 | 26,8 |
| 30 | Бактистатин | 12,0 | 18,2 |
| 30 | СЛ08 | 19,6** | 25,4 |
| 60 | Бактистатин | 10,6 | 15,8 |
| 60 | СЛ08 | 17,4** | 23,0** |
| 90 | Бактистатин | 5,6 | 9,4 |
| 90 | СЛ08 | 15,8** | 21,3** |
| 180 | Бактистатин | 0,5 | 1,4 |
| 180 | СЛ08 | 16,2** | 20,7** |
| 360 | Бактистатин | 0,2 | 0,2 |
| 360 | СЛ08 | 15,4** | 17,7** |
| Примечание: ** р<0,05 (различия статистически достоверны). | |||
Claims (8)
1. Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, содержащее источник микробных метаболитов, цеолит, гидролизат соевой муки, стеарат кальция, отличающийся тем, что в качестве источника метаболитов заявляемое средство содержит ферментативный лизат микроорганизмов, а также дополнительно литические ферменты при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:
Цеолит 70÷80
Гидролизат соевой муки 15÷25
Стеарат кальция 0,5÷1,5
Литические ферменты 0,05÷3,5
Ферментативный лизат клеток микроорганизмов остальное
2. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве лизата микроорганизмов оно содержит лизат клеток Bacillus subtilis.
3. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве лизата микроорганизмов оно содержит лизат клеток молочнокислых бактерий.
4. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве лизата микроорганизмов оно содержит лизат клеток дрожжей.
5. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит, мас.%: лизат клеток Bacillus subtilis 0,10; литические ферменты 0,5; цеолит 76,0; гидролизат соевой муки 22,4; стеарат кальция 1,0.
6. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно снабжено кишечно-растворимой капсулой, покрытой кислотно-защитным слоем.
7. Способ получения средства для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта по п.1 на основе микробных метаболитов, включающий в себя культивирование микроорганизмов, полученные клетки микроорганизма-продуцента подвергают воздействию литических ферментов в течение 2-10 ч при температуре +20-50°С, затем ферментативный лизат клеток микроорганизмов смешивают с цеолитом, гидролизатом соевой муки и стеаратом кальция, стерилизуют и фасуют конечный продукт.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что в композицию дополнительно вводят ферментные препараты до заданных параметров.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008137775/15A RU2396968C2 (ru) | 2008-09-24 | 2008-09-24 | Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008137775/15A RU2396968C2 (ru) | 2008-09-24 | 2008-09-24 | Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008137775A RU2008137775A (ru) | 2010-04-10 |
| RU2396968C2 true RU2396968C2 (ru) | 2010-08-20 |
Family
ID=42670747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008137775/15A RU2396968C2 (ru) | 2008-09-24 | 2008-09-24 | Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2396968C2 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2476205C1 (ru) * | 2012-02-15 | 2013-02-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Лаборатория технологии оздоровительных препаратов" (ООО "Л-ТОП") | Композиция с противоинфекционной активностью |
| RU2552006C1 (ru) * | 2013-11-21 | 2015-06-10 | Александр Владимирович Синица | Биологически активная добавка к пище |
| RU2668123C1 (ru) * | 2017-11-09 | 2018-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ лечения больных целиакией с желчнокаменной болезнью 1-й стадии на фоне аномалии желчного пузыря |
-
2008
- 2008-09-24 RU RU2008137775/15A patent/RU2396968C2/ru active IP Right Revival
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2476205C1 (ru) * | 2012-02-15 | 2013-02-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Лаборатория технологии оздоровительных препаратов" (ООО "Л-ТОП") | Композиция с противоинфекционной активностью |
| RU2552006C1 (ru) * | 2013-11-21 | 2015-06-10 | Александр Владимирович Синица | Биологически активная добавка к пище |
| RU2668123C1 (ru) * | 2017-11-09 | 2018-09-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ лечения больных целиакией с желчнокаменной болезнью 1-й стадии на фоне аномалии желчного пузыря |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008137775A (ru) | 2010-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2179028B1 (en) | A novel strain of bifidobacterium and active peptides against rotavirus infections | |
| EP0555618B1 (en) | Dietetic and/or pharmaceutical compositions containing lyophilized lactic bacteria | |
| RU2439145C2 (ru) | Штамм микроорганизма bacillus smithii tbmi12 mscl p737 и применение его в качестве пищевой или кормовой добавки, или компонента пробиотической композиции и пробиотическая композиция | |
| JPS5927833A (ja) | コレステロール乃至トリグリセリド低下剤 | |
| CN114774315B (zh) | 鼠李糖乳杆菌菌株LRa05在制备增强免疫力制品和/或缓解湿疹制品方面的用途 | |
| EP1229923A1 (en) | Inhibition of pathogens by bacillus coagulans strains | |
| RU2580002C1 (ru) | Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии | |
| RU2460778C1 (ru) | Способ получения аутопробиотика на основе enterocuccus faecium, представителя индигенной микрофлоры кишечника хозяина | |
| CN114480231A (zh) | 一种抗幽门螺杆菌感染的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| RU2396968C2 (ru) | Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения | |
| RU2553372C1 (ru) | Способ профилактики постинфекционного синдрома раздраженной кишки | |
| CN117286078B (zh) | 一种改善胃肠道健康的植物乳植杆菌及其应用 | |
| RU2287335C1 (ru) | Препарат для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "бактистатин" | |
| JPH0930981A (ja) | 免疫賦活組成物 | |
| CN111743158A (zh) | 一种具有增强免疫功能的益生菌片剂及其制备方法 | |
| RU2298032C2 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis 1719-ПРОДУЦЕНТ АНТАГОНИСТИЧЕСКИ АКТИВНОЙ БИОМАССЫ В ОТНОШЕНИИ БОЛЕЗНЕТВОРНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, А ТАКЖЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ, АМИЛОЛИТИЧЕСКИХ И ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ | |
| RU2589843C2 (ru) | Средство для лечения кишечных инфекций и состояний, вызванных дисбактериозом, "биобаланс а" | |
| RU2454238C1 (ru) | Биопрепарат балис для профилактики и лечения инфекционных болезней | |
| Corthier | Antibiotic-associated diarrhoea: treatments by living organisms given by the oral route (probiotics) | |
| CN114574405B (zh) | 植物乳杆菌菌株wka86及其在制备防治口臭制品方面的用途与制品 | |
| RU2475254C1 (ru) | ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА "ТоксиБиоВит" | |
| RU2302877C2 (ru) | Биологическая активная добавка к пище для лечения и профилактики кишечных инфекций, осложненных дисбактериозом, и повышения неспецифической резистентности организма | |
| RU2176668C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS N.V.EP 317/402 "НАРИНЭ" ТНСи, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ ПРИГОТОВЛЕНИИ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ КИШЕЧНОЙ МИКРОФЛОРЫ | |
| CN118383523B (zh) | 凝结芽孢杆菌bc07在制备增强免疫功能食品和/或免疫调节药物和/或抑菌剂方面的用途 | |
| CN118562689B (zh) | 一株抗幽门螺杆菌的凝结魏茨曼氏菌vb320及其应用与培养装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100925 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20120227 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20120423 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20120918 |