RU2337693C1 - Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate - Google Patents
Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate Download PDFInfo
- Publication number
- RU2337693C1 RU2337693C1 RU2007110116/15A RU2007110116A RU2337693C1 RU 2337693 C1 RU2337693 C1 RU 2337693C1 RU 2007110116/15 A RU2007110116/15 A RU 2007110116/15A RU 2007110116 A RU2007110116 A RU 2007110116A RU 2337693 C1 RU2337693 C1 RU 2337693C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- effect
- methotrexate
- miliacin
- day
- animals
- Prior art date
Links
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 title claims abstract description 41
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 title claims abstract description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 11
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 title abstract 3
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 title abstract 3
- DYWBABNJDLLCOR-UHFFFAOYSA-N Miliacin Natural products COC1CCC2(C)C3CCC4(C)C5=CC(C)(C)CCC5(C)CCC4(C)C3(C)CCC2(C)C1(C)C DYWBABNJDLLCOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- YZBNXQLCEJJXSC-UHFFFAOYSA-N O-Methyl-germanicol Natural products C12CCC3C4=CC(C)(C)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(OC)C1(C)C YZBNXQLCEJJXSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- YZBNXQLCEJJXSC-LZBBLKFASA-N (3S,4aR,6aS,6aR,6bR,8aR,14aR,14bR)-3-methoxy-4,4,6a,6b,8a,11,11,14b-octamethyl-1,2,3,4a,5,6,6a,7,8,9,10,13,14,14a-tetradecahydropicene Chemical compound C1([C@H]2CC[C@H]34)=CC(C)(C)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](OC)C1(C)C YZBNXQLCEJJXSC-LZBBLKFASA-N 0.000 claims abstract description 20
- 230000001917 lymphotoxic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 13
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 10
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 7
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 5
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 231100001025 bone marrow hyperplasia Toxicity 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 241000694414 Sapindus saponaria Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010052645 Thymus hypoplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- -1 cyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000005427 lymphocyte apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 150000002966 pentacyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 150000008130 triterpenoid saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и иммунологии, и может найти применение при иммунореабилитации после использования иммунодепрессантов.The invention relates to medicine, namely to oncology and immunology, and may find application in immunorehabilitation after the use of immunosuppressants.
Антагонист фолиевой кислоты метотрексат (МТ), используемый в клинической онкологии, является классическим иммунодепрессантом (Юшков В.В., Юшкова Т.А., Казьянин А.В., 2002). Этот побочный эффект ограничивает применение МТ, сокращает продолжительность лечения и затрудняет назначение повторных курсов. Представляется перспективным использование с этой целью биологически активных веществ растительного происхождения, обладающих иммуномодулирующим действием и минимальными побочными эффектами. Среди последних заслуживают внимания тритерпеноиды как вещества с выраженной иммунотропной активностью. В частности, установлен стимулирующий эффект тритерпеноидов мыльного дерева на продукцию антител к оболочечным антигенам вируса гриппа (S.Behboudi et al., 1996), к вирусу Эпштейн-Барра у высоко- (СВА; Н-2К) и низкоотвечающих (Balb/c; H-2D) линий мышей (Е. Dotsika et al., 1997), который связывают с усилением активности антигенпрезентирующих клеток и Тх1 - лимфоцитов (S.Behboudi et al., 1997; В.Morein et al., 1998). Данные, полученные в последние годы, свидетельствуют о проявлении иммуностимулирующего влияния и у других тритерпеноидных сапонинов (S.Loganbal et al., 2000), а также у самих тритерпенов - глицерризиновой и уросоловой кислот и их дериватов (Т.Н.Ильичева с соавт., 2001). Несмотря на столь обширные биологические свойства тритерпеноидов, литературные данные об ограничении лимфотоксического эффекта метотрексата отсутствуют.The folic acid antagonist methotrexate (MT) used in clinical oncology is a classic immunosuppressant (Yushkov V.V., Yushkova T.A., Kazyanin A.V., 2002). This side effect limits the use of MT, reduces the duration of treatment, and makes it difficult to prescribe repeated courses. It seems promising the use for this purpose of biologically active substances of plant origin with immunomodulatory effects and minimal side effects. Among the latter, triterpenoids as substances with pronounced immunotropic activity deserve attention. In particular, the stimulating effect of soap tree triterpenoids on the production of antibodies to envelope antigens of the influenza virus (S. Behboudi et al., 1996), to the Epstein-Barr virus in high- (CBA; H-2K) and low-response (Balb / c; H-2D) lines of mice (E. Dotsika et al., 1997), which is associated with increased activity of antigen-presenting cells and T x1 lymphocytes (S. Behboudi et al., 1997; B. Morein et al., 1998). The data obtained in recent years indicate the manifestation of an immunostimulating effect in other triterpenoid saponins (S. Loganbal et al., 2000), as well as in the triterpenes themselves - glycerrhizic and urosolic acids and their derivatives (T.N. Il'icheva et al. , 2001). Despite the extensive biological properties of triterpenoids, there are no published data on the limitation of the lymphotoxic effect of methotrexate.
В связи с этим актуален поиск средств, направленных на ограничение лимфотоксического действия МТ и повышение эффективности иммунореабилитации после его применения.In this regard, the search for funds aimed at limiting the lymphotoxic effect of MT and increasing the effectiveness of immunorehabilitation after its use is relevant.
К числу тритерпеноидов, нашедших практическое применение в медицине, относится и милиацин, входящий в состав просяного масла (Олифсон Л.Е., Осадчая Н.Д., Нузов Б.Г. и др., 1991), используемого для лечения трофических язв, инфицированных ран и некоторых других заболеваний (Б.Г.Нузов с соавт., 2001). Экспериментально показано, что, обладая широким спектром биологической активности, милиацин стимулирует факторы неспецифической защиты и предотвращает их выраженную депрессию в условиях токсического поражения (М.М.Павлова, 1984), вызывает гиперцеллюлярность лимфоидных органов (Кириллова А.В., Корнеев Г.И., 2003), стимулирует иммунный ответ (Кириллова А.В., Скачков М.В., Панфилова Т.В. и др., 2003), обладает антиоксидантной активностью (Панфилова Т.В., Штиль А.А., Фролов Б.А., 2006) и ограничивает апоптоз лимфоцитов, индуцированный глюкокортикоидами (Панфилова Т.В., Штиль А.А., Полосухина Е.Р. и др., 2003).Among the triterpenoids that have found practical application in medicine, is miliacin, which is part of millet oil (Olifson L.E., Osadchaya N.D., Nuzov B.G. et al., 1991), used to treat trophic ulcers, infected wounds and some other diseases (B.G. Nuzov et al., 2001). It has been experimentally shown that, having a wide spectrum of biological activity, miliacin stimulates nonspecific protection factors and prevents their severe depression in conditions of toxic damage (M.M. Pavlova, 1984), causes hypercellular lymphoid organs (Kirillova A.V., Korneev G.I. ., 2003), stimulates the immune response (Kirillova A.V., Skachkov M.V., Panfilova T.V. et al., 2003), has antioxidant activity (Panfilova T.V., Shtil A.A., Frolov B.A., 2006) and limits glucocorticoid-induced lymphocyte apoptosis (Panf TV fishing, Calm AA Polosuhina ER et al., 2003).
Новизной изобретения является свойство растительного тритерпеноида милиацина ослаблять лимфотоксическое действие метотрексата и обеспечивать более быстрое восстановление морфологических показателей в центральных (тимус, костный мозг) и периферических (селезенка) органах системы иммуногенеза.The novelty of the invention is the property of plant triterpenoid miliacin to weaken the lymphotoxic effect of methotrexate and to provide faster restoration of morphological parameters in the central (thymus, bone marrow) and peripheral (spleen) organs of the immunogenesis system.
Существенным отличием предлагаемого изобретения является то, что применяют милиацин в качестве средства, ограничивающего лимфотоксический эффект метотрексата.A significant difference of the invention is that miliacin is used as a means of limiting the lymphotoxic effect of methotrexate.
Предложенное средство 3-β-метокси-Δ18-олеанен (милиацин) относится к группе природных циклических тритерпеноидов, содержится в просяном масле и представляет собой вещество белого цвета с температурой плавления 285-286°С. Он оптически активен, нерастворим в воде, слаборастворим в этиловом спирте, диэтиловом эфире, ацетоне, хорошо растворим в хлороформе. Милиацин обладает хорошей переносимостью в диапазоне доз от 2 до 1000 мг/кг. ЛД50 этого соединения больше 1000 мг/кг (Олифсон Л.Е. с соавт., 1991), что свидетельствует об отсутствии у него токсических свойств.The proposed tool 3-β-methoxy-Δ18-oleanen (mylacin) belongs to the group of natural cyclic triterpenoids, is contained in millet oil and is a white substance with a melting point of 285-286 ° C. It is optically active, insoluble in water, slightly soluble in ethyl alcohol, diethyl ether, acetone, soluble in chloroform. Milyacin has good tolerance in the range of doses from 2 to 1000 mg / kg. The LD 50 of this compound is more than 1000 mg / kg (Olifson L.E. et al., 1991), which indicates the absence of toxic properties.
Химическая структура пентациклического тритерпеноида - милиацина (3-β-метокси-Δ18-олеанена)The chemical structure of the pentacyclic triterpenoid - miliacin (3-β-methoxy-Δ18-oleanene)
Описание экспериментаExperiment description
Эксперименты выполнены на 219 мышах-самцах (СВАхС57Bl6)F1, разделенных на 4 группы: 1) интактные мыши (14 животных); 2) мыши, получавшие МТ (74 животных); 3) мыши, получавшие МТ с последующим введением растворителя милиацина - твина-21 в физиологическом растворе (1,6×10-7 моль/кг; 71 животное), и 4) мыши, получавшие МТ с последующим введением милиацина (60 животных). МТ применялся однократно внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг. Милиацин или растворитель вводили внутрибрюшинно в разовой дозе 2 мг/кг 3-кратно на протяжении 3 дней: через 1 час после инъекции МТ и в последующие 2 дня. Животных выводили из эксперимента на 4, 7, 10, 14 и 21 сутки после введения МТ дислокацией шейных позвонков с соблюдением "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных". Определяли массу лимфоидных органов (тимуса, селезенки), затем органы фиксировали в 10% нейтральном формалине, готовили гистологические препараты по стандартной методике и окрашивали гематоксилином и эозином. Определяли площади зон коркового и мозгового вещества тимуса, Т- и В-зависимых зон селезенки, а также плотность клеток в этих зонах с помощью морфометрической сетки (Автандилов Г.Г. 1973). Из каждого органа готовили 1-5 препаратов (срезов), в каждом препарате анализировали 10 полей зрения (70×70 мкм). Определяли количество миелокариоцитов (из бедренной кости) и оценивали относительное содержание клеток различных ростков кроветворения в мазках костного мозга, окрашенных по Паппенгейму. В каждом мазке подсчитывали не менее 500 кариоцитов. Данные обрабатывали стандартными методами вариационной статистики из пакета прикладных программ Microsoft Excel с использованием t-критерия Стъюдента.The experiments were performed on 219 male mice (CBAxC 57 Bl 6 ) F 1 , divided into 4 groups: 1) intact mice (14 animals); 2) mice treated with MT (74 animals); 3) mice treated with MT followed by administration of the solvent of miliacin - Tween-21 in physiological saline (1.6 × 10 -7 mol / kg; 71 animals), and 4) mice treated with MT followed by the administration of miliacin (60 animals). MT was administered once intraperitoneally at a dose of 10 mg / kg. Miliacin or solvent was administered intraperitoneally in a single dose of 2 mg /
Полученные результаты представлены в таблицах 1, 2 и 3 и графиках к ним, отражающих влияние милиацина на морфологические особенности тимуса, селезенки и красного костного мозга мышей, подвергнутых воздействию метотрексата.The results are presented in tables 1, 2 and 3 and graphs for them, reflecting the effect of miliacin on the morphological features of the thymus, spleen and red bone marrow of mice exposed to methotrexate.
В ранний период (4-е сутки) после введения МТ происходит резкая гипоплазия тимуса, сопровождающаяся снижением массы органа (на 72,6±2,3% от значений в контрольной группе), площади его мозговой (на 57,7±2,6%) и корковой (на 73,7±2,1%) зон с уменьшением в них плотности клеточного инфильтрата соответственно на 41,0±2,5% и 36,4±1,5% (табл.1 и графики 1а, 1б, 1в на фиг. 1, 2, 3). В указанных зонах появлялись клетки разных размеров с образованием дезориентированных тяжей. Наиболее выраженные изменения регистрировались в мозговой зоне, где в отдельных клетках отмечалась фрагментация ядер, формирование клеточных конгломератов (из 5-6 клеток), образующих по 3-4 подобных очага. На 7-е сутки наблюдения отмечалось незначительное восстановление плотности клеток в мозговой и корковой зонах при сохраняющейся картине дегенеративных изменений. К 10 суткам прирост исследуемых показателей был более выражен, а к 14 суткам плотность клеток в зоне мозгового вещества достигала исходного уровня. Однако нормализация плотности клеточного инфильтрата в зоне коркового вещества выявлялась лишь на 21 сутки. Полное восстановление морфологической картины тимуса не отмечено даже к этому сроку, поскольку показатели площадей исследуемых зон и соответственно масса органа оставались уменьшенными.In the early period (4th day) after MT administration, a sharp thymus hypoplasia occurs, accompanied by a decrease in organ mass (by 72.6 ± 2.3% of the values in the control group), and its cerebral area (by 57.7 ± 2.6 %) and cortical (by 73.7 ± 2.1%) zones with a decrease in the density of cell infiltrate in them by 41.0 ± 2.5% and 36.4 ± 1.5%, respectively (Table 1 and graphs 1a, 1b, 1c in Fig. 1, 2, 3). In these zones, cells of various sizes appeared with the formation of disoriented cords. The most pronounced changes were recorded in the brain zone, where fragmentation of nuclei, the formation of cell conglomerates (from 5-6 cells), forming 3-4 such foci, were noted in individual cells. On the 7th day of observation, there was a slight restoration of cell density in the brain and cortical areas with a continuing picture of degenerative changes. By 10 days, the growth of the studied parameters was more pronounced, and by 14 days the cell density in the area of the medulla reached the initial level. However, the normalization of the density of cellular infiltrate in the cortical zone was detected only on 21 days. A complete restoration of the morphological picture of the thymus was not noted even by this time, since the indicators of the areas of the studied zones and, accordingly, the mass of the organ remained reduced.
Введение растворителя (твин-21) на фоне МТ не сказывалось ни на выраженности клеточного опустошения тимуса и снижении его массы, ни на последующей динамике этих показателей.The introduction of a solvent (tween-21) against the background of MT did not affect the severity of the cellular emptying of the thymus and its weight reduction, nor the subsequent dynamics of these indicators.
На 4-е сутки в тимусе мышей, получавших милиацин на фоне введения МТ, регистрировалось значительно меньшее снижение площади мозгового (на 47,9±4,8%) и коркового (на 51,5±2,4%) вещества (график 16), менее выраженное уменьшение плотности клеток в мозговой (на 16,1±3,2%) и корковой (на 19,6±2,0%) зонах (график 1в) и соответственно значительно меньшее снижение его массы (на 56,0±1,5%) по сравнению с животными, получавшими только МТ или МТ с растворителем (график 1а). Значительно реже регистрировались цитологические нарушения в виде дегенерации ядер, образования клеточных тяжей и клеточных конгломератов. На 7-е сутки наблюдения площадь коркового вещества у мышей, получавших милиацин, была в 2 раза выше, чем у животных, подвергнутых только воздействию МТ или МТ с растворителем. Аналогичный сдвиг отмечен и для мозгового вещества тимуса, площадь которого на 7 сутки у животных, получавших МТ + милиацин, на 33,3% превышала таковую у мышей групп 2 и 3. В группе 4 клетки этих зон имели четкие границы и практически одинаковые размеры без признаков дегенеративных изменений ядер. Подобная закономерность выявлена на протяжении последующих сроков наблюдения. В результате плотность клеточного инфильтрата восстанавливалась к 14 суткам не только в мозговой, но и в корковой зоне органа; к 21 суткам нормализовались размеры площадей указанных зон и масса тимуса.On the 4th day, in the thymus of mice receiving mylacin during MT administration, a significantly smaller decrease in the area of the brain (by 47.9 ± 4.8%) and cortical (by 51.5 ± 2.4%) substances was recorded (Figure 16) ), a less pronounced decrease in cell density in the brain (by 16.1 ± 3.2%) and cortical (by 19.6 ± 2.0%) zones (graph 1c) and, accordingly, a significantly smaller decrease in its mass (by 56.0 ± 1.5%) compared with animals that received only MT or MT with a solvent (graph 1a). Cytological abnormalities in the form of nuclear degeneration, the formation of cell strands and cell conglomerates were recorded much less frequently. On the 7th day of observation, the area of cortical substance in mice treated with miliacin was 2 times higher than in animals exposed only to MT or MT with a solvent. A similar shift was noted for the thymus medulla, whose area on
На 4 сутки после введения МТ регистрировалось снижение массы селезенки (на 36,6±4,0% по сравнению с интактными животными) и уменьшение площадей В-зависимой (на 45,2±4,4%) и Т-зависимой (на 77,9±3,8%) зон органа (табл.2 и графики 2а, 2б, 2в на фиг. 4, 5, 6). Этот эффект сопровождался снижением плотности клеток в указанных зонах, соответственно, на 36,2±1,8% и 26,6±1,8% (график 2в на фиг. 6). К 7-м суткам плотность клеточного инфильтрата восстанавливалась и возрастала площадь Т- и В-зависимых зон селезенки (график 2б на фиг. 5). Однако если площадь Т-зависимой зоны достигала исходного уровня, то площадь В-зависимой зоны сохранялась несколько сниженной (на 17,3±5,6%). Обращает внимание, что на 10-е сутки после введения МТ плотность клеток в В-зависимой зоне продолжала возрастать до значений, превосходящих исходный уровень на 11,7±3,2%. Этот сдвиг сопровождался увеличением массы селезенки, которая к указанному сроку наблюдения превосходила исходный показатель на 23,2±4,1% (график 2а на фиг. 4). Начиная с 14 суток наблюдения морфологические особенности селезенки у животных данной группы соответствовали таковым у интактных мышей.On the 4th day after MT administration, a decrease in spleen mass was recorded (by 36.6 ± 4.0% compared with intact animals) and a decrease in the areas of B-dependent (by 45.2 ± 4.4%) and T-dependent (by 77 9 ± 3.8%) of the organ zones (Table 2 and graphs 2a, 2b, 2c in Figs. 4, 5, 6). This effect was accompanied by a decrease in cell density in these zones, respectively, by 36.2 ± 1.8% and 26.6 ± 1.8% (graph 2c in Fig. 6). By the 7th day, the density of cell infiltrate was restored and the area of T- and B-dependent spleen zones increased (graph 2b in Fig. 5). However, if the area of the T-dependent zone reached the initial level, the area of the B-dependent zone remained somewhat reduced (by 17.3 ± 5.6%). It is noteworthy that on the 10th day after the introduction of MT, the cell density in the B-dependent zone continued to increase to values exceeding the initial level by 11.7 ± 3.2%. This shift was accompanied by an increase in spleen mass, which by the indicated observation period exceeded the initial value by 23.2 ± 4.1% (graph 2a in Fig. 4). Starting from the 14th day of observation, the morphological features of the spleen in animals of this group corresponded to those in intact mice.
Введение растворителя не приводило к существенным изменениям исследуемых показателей и их динамики по сравнению с животными, получавшими только МТ.The introduction of the solvent did not lead to significant changes in the studied parameters and their dynamics compared with animals that received only MT.
В группе животных, получавших милиацин после МТ, на 4-е сутки наблюдения отмечено значительно меньшее снижение массы селезенки (лишь на 12,4±4,5% по сравнению с интактными животными), практическое отсутствие редукции В-зависимой зоны органа и менее значимый показатель уменьшения его Т-зависимой зоны (на 63,0±2,7%), чем у мышей групп 2 и 3 (графики 2а и 2б на фиг. 4 и 5). На фоне применения тритерпеноида регистрировалось менее выраженное клеточное опустошение В-зависимой зоны (на 16,7±3,3%) селезенки, чем у мышей, получавших только МТ или МТ с растворителем (график 2в на фиг. 6). Защитное действие милиацина проявлялось и в отношении ограничения клеточного опустошения Т-зависимой зоны селезенки (снижение количества клеток на 12,2±1,8%). В последующие сроки наблюдения позитивное влияние милиацина на морфологические показатели селезенки животных, получавших МТ, не проявлялось в связи с фактическим восстановлением этих показателей у мышей групп 2 и 3. При этом милиацин не предотвращал возрастание плотности клеточного инфильтрата в В-зависимой зоне органа (график 2в на фиг. 6) и не влиял на увеличение массы селезенки на 10 сутки наблюдения (график 2а на фиг. 4).In the group of animals treated with miliacin after MT, on the 4th day of observation, a significantly smaller decrease in spleen mass was noted (only 12.4 ± 4.5% compared with intact animals), the practical absence of reduction of the B-dependent area of the organ and less significant an indicator of a decrease in its T-dependent zone (by 63.0 ± 2.7%) than in mice of
МТ вызывал опустошение красного костного мозга, что выражалось в резком снижении содержания миелокариоцитов, составившем на 4 сутки наблюдения 40,5±5,7% по отношению к интактным животным (табл.3 и графики 3а и 3б на фиг. 7 и 8). Начиная с 7 суток, регистрировалось восстановление пула миелокариоцитов, которое завершалось к 10 суткам наблюдения (график 3а на фиг. 7). Применение растворителя не оказывало влияния ни на выраженность клеточного опустошения красного костного мозга, ни на последующую динамику его восстановления. В противоположность этому милиацин оказывал выраженный защитный эффект, выражавшийся, прежде всего, в менее значимой убыли миелокариоцитов на 4 сутки наблюдения (9,8±3,5%) и значительно более быстром восстановлении этого показателя уже к 7 суткам. Более того, под влиянием милиацина отмечалась гиперплазия красного костного мозга на 7, 10 и 14 сутки наблюдения: количество миелокариоцитов превосходило таковое у интактных животных соответственно на 15,7±3,7%, 16,7±3,8% и 17,7±1,7%.MT caused devastation of the red bone marrow, which was expressed in a sharp decrease in the content of myelocaryocytes, which amounted to 40.5 ± 5.7% on intact animals on the 4th day of observation (Table 3 and graphs 3a and 3b in Figs. 7 and 8). Starting from
Анализ относительного содержания лимфоцитов на 4 и 7 сутки наблюдения не выявил статистически достоверного снижения у животных, получавших МТ + растворитель и животных, получавших только МТ. Напротив, у мышей группы 4 (МТ + милиацин) отмечалось существенное снижение этого показателя, составляя на 4 сутки 21,6±6,6%, а на 7 сутки - 36,6±5,8% от соответствующих показателей у интактных животных. На 10 сутки наблюдения снижение относительного содержания лимфоцитов отмечено во всех группах животных, а к 14 суткам происходило его восстановление до уровня, определяемого у интактных мышей (график 3б на фиг. 8).Analysis of the relative content of lymphocytes on the 4th and 7th day of observation did not reveal a statistically significant decrease in animals treated with MT + solvent and animals treated with MT alone. In contrast, group 4 mice (MT + miliacin) showed a significant decrease in this indicator, amounting to 21.6 ± 6.6% on day 4 and 36.6 ± 5.8% of the corresponding indices on
Оценивая эти результаты, следует отметить, что отсутствие падения относительного содержания лимфоцитов у животных групп 2 и 3 происходило на фоне клеточного опустошения костного мозга и, следовательно, не могло являться результатом усиления пролиферации и дифференцировки костномозговых предшественников лимфоцитов. Основу этого феномена составляет миграция в красный костный мозг внекостномозговых лимфоцитов, в основном, тимусного происхождения, необходимая для стимуляции подавленного гемопоэза. Такая миграция известна как реакция лимфоидной ткани при действии на организм стрессовых факторов физической и химической (включая цитотоксические лекарства) природы, обладающих выраженным миелоингибирующим действием (Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В. 1983). Милиацин ограничивал указанный сдвиг, уменьшая выраженность клеточного опустошения костного мозга и тимуса. Снижение относительного содержания лимфоцитов на 10 сутки наблюдения в группе 4 отражает количество собственных кариоцитов, поскольку к указанному сроку лимфоциты-"мигранты" в красном костном мозге уже не обнаруживаются (Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Хлусов И.А. 1999). Результатом восстановления относительного содержания лимфоцитов и гиперплазии красного костного мозга у животных, получавших МТ + милиацин, был значимый прирост абсолютного числа лимфоцитов к 14 суткам наблюдения (график 3б на фиг. 8).Assessing these results, it should be noted that the absence of a decrease in the relative content of lymphocytes in animals of
Таким образом, противоопухолевый препарат метотрексат проявляет выраженное лимфотоксическое действие, характеризующееся клеточным опустошением костного мозга и лимфоидных органов, уменьшением соответствующих зон распределения лимфоцитов и плотности клеточного инфильтрата. Данный эффект более выражен в Т-звене иммунитета (по степени уменьшения исследуемых показателей и длительности их депрессии). Тритерпеноид растительного происхождения милиацин ослабляет лимфотоксическое действие метотрексата и обеспечивает более быстрое восстановление морфологических показателей в центральных и периферических органах иммуногенеза. Полученные результаты расширяют представления о процессах, обусловливающих защитные эффекты милиацина в организме, и обосновывают перспективность этого соединения как иммунокорректора.Thus, the antitumor drug methotrexate exhibits a pronounced lymphotoxic effect, characterized by cellular depletion of the bone marrow and lymphoid organs, a decrease in the corresponding areas of the distribution of lymphocytes and the density of cell infiltrate. This effect is more pronounced in the T-link of immunity (by the degree of decrease in the studied parameters and the duration of their depression). The plant-derived triterpenoid miliacin weakens the lymphotoxic effect of methotrexate and provides a more rapid restoration of morphological parameters in the central and peripheral organs of immunogenesis. The obtained results expand the understanding of the processes that determine the protective effects of miliacin in the body and substantiate the potential of this compound as an immunocorrector.
ЛитератураLiterature
1. Автандилов Г.Г. Морфометрия в патологии. М.: Медицина, 1973. 248 с.1. Avtandilov G.G. Morphometry in pathology. M .: Medicine, 1973. 248 p.
2. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В. Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза. Томск. 1983. 159 с.2. Goldberg E.D., Dygay A.M., Karpova G.V. The role of lymphocytes in the regulation of hematopoiesis. Tomsk 1983. 159 p.
3. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Хлусов И.А. Бюлл. эксп. биол. мед. 1999. Т.127. №5. С.484-494.3. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zhdanov V.V., Khlusov I.A. Bull. exp biol. honey. 1999.V. 127. No. 5. S.484-494.
4. Ильичева Т.Н., Проняева Т.Р., Шульц Э.Э. и др. Журн. микробиол. эпидемиол. иммунол. 2001. №2. С.53-56.4. Ilyicheva T.N., Pronyaeva T.R., Schulz E.E. et al. microbiol. epidemiol. immunol. 2001. No2. S.53-56.
5. Кириллова А.В., Корнеев Г.И. // Морфология. 2003. Т.124. №5. С.54.5. Kirillova A.V., Korneev G.I. // Morphology. 2003.V. 124. No. 5. S.54.
6. Кириллова А.В., Скачков М.В., Панфилова Т.В. и др. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. №6. С.36-38.6. Kirillova A.V., Skachkov M.V., Panfilova T.V. and others. Epidemiology and vaccination. 2003. No.6. S.36-38.
7. Нузов Б.Г. Стадников А.А., Бородин В.И. Анн. травм, и ортопед. - 2001. - №2. - С.50-51.7. Nuzov B.G. Stadnikov A.A., Borodin V.I. Ann injuries, and orthopedist. - 2001. - No. 2. - S.50-51.
8. Олифсон Л.Е. Осадчая Н.Д., Нузов Б.Г. и др. Вопросы питания. 1991. №2. С.57-59.8. Olifson L.E. Osadchaya N.D., Nuzov B.G. et al. Nutrition issues. 1991. No2. S.57-59.
9. Павлова М.М. Изучение влияния активного стероида проса (3-β-метокси-Δ18-олеанена) при токсическом поражении печени CCl4 в эксперименте: Автореф. дисс... канд. биол. наук. - Оренбург, 1984. - С.21.9. Pavlova M.M. Study of the effect of the active steroid of millet (3-β-methoxy-Δ 18 -oleanene) in case of toxic liver damage CCl 4 in the experiment: Abstract. diss ... cand. biol. sciences. - Orenburg, 1984. - P.21.
10. Панфилова Т.В., Штиль А.А., Полосухина Е.Р. и др. Бюлл. эксп. биол. мед. 2003. Т.136. №10. С.382-385.10. Panfilova T.V., Shtil A.A., Polosukhina E.R. et al. Bull. exp biol. honey. 2003.V. 136. No. 10. S.382-385.
11. Панфилова Т.В., Штиль А.А., Фролов Б.А. Бюлл. эксп. биол. мед. 2006. Т.141. №6. С.633-635.11. Panfilova T.V., Shtil A.A., Frolov B.A. Bull. exp biol. honey. 2006.V.141. No. 6. S.633-635.
12. Юшков В.В., Юшкова Т.А., Казьянин А.В. Иммунокорректоры. Екатеринбург. ООО "ИРА УТК". 2002. 255 с.12. Yushkov V.V., Yushkova T.A., Kazyanin A.V. Immunocorrectors. Yekaterinburg. LLC "IRA UTK". 2002.255 s.
13. Behboudi S., Morem В., Villacress-Eriksson М. Clin. Exp. Immunol. - 1996. - Vol.105. - P.26-30.13. Behboudi S., Morem B., Villacress-Eriksson M. Clin. Exp. Immunol. - 1996 .-- Vol.105. - P.26-30.
14. Behboudi S., Morem В., Villacress-Eriksson М. Cytokine. - 1997. - Vol.9. - P.682-687.14. Behboudi S., Morem B., Villacress-Eriksson M. Cytokine. - 1997 .-- Vol. 9. - P.682-687.
15. Dotsika E., Karagouni E., Sundquist В., Morgan A., Villacress-Eriksson М. Scan. J. Immunol. - 1997. - Vol.45. - P.261-268.15. Dotsika E., Karagouni E., Sundquist B., Morgan A., Villacress-Eriksson M. Scan. J. Immunol. - 1997. - Vol. 45. - P.261-268.
16. Logambal S.M., Michael R.D. Indian J. Exp. Biol. 2000. Vol.38. P.1092-1096.16. Logambal S.M., Michael R. D. Indian J. Exp. Biol. 2000. Vol. 38. P.1092-1096.
17. Morem В., Villacress-Eriksson М., Lovgren-Bengtsson К. Dev. Biol. Stand. - 1998. - Vol.92. - P.33-39.17. Morem B., Villacress-Eriksson M., Lovgren-Bengtsson K. Dev. Biol. Stand. - 1998 .-- Vol. 92. - P.33-39.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007110116/15A RU2337693C1 (en) | 2007-03-19 | 2007-03-19 | Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007110116/15A RU2337693C1 (en) | 2007-03-19 | 2007-03-19 | Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2337693C1 true RU2337693C1 (en) | 2008-11-10 |
Family
ID=40230195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007110116/15A RU2337693C1 (en) | 2007-03-19 | 2007-03-19 | Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2337693C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2724891C2 (en) * | 2017-07-20 | 2020-06-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Оренбургский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for reducing gemotoxic action of benzene on an organism |
-
2007
- 2007-03-19 RU RU2007110116/15A patent/RU2337693C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Автореф. КИРИЛЛОВА А.В. Иммунотропная активность милиацина. Автореф. дис.на соиск. учен. степ.канд. мед. наук. Код спец. 14.00.36. - Пермь, 2004, ОЛИФСОН Л.Е. и др. Химическая природа и биологическая активность милиацина. - Вопросы питания, 1991, №2, март-апрель, с.57-59. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2724891C2 (en) * | 2017-07-20 | 2020-06-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Оренбургский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for reducing gemotoxic action of benzene on an organism |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6857214B2 (en) | Sustained release composition for injection and its use for treating joint inflammation and associated pain | |
| Rao et al. | Bergenin loaded gum xanthan stabilized silver nanoparticles suppress synovial inflammation through modulation of the immune response and oxidative stress in adjuvant induced arthritic rats | |
| Jiang et al. | Inhibitory effects of ursolic acid on osteoclastogenesis and titanium particle-induced osteolysis are mediated primarily via suppression of NF-κB signaling | |
| Wu et al. | Daphnetin attenuates LPS‐induced osteolysis and RANKL mediated osteoclastogenesis through suppression of ERK and NFATc1 pathways | |
| Li et al. | Ginkgolic acid exerts an anti-inflammatory effect in human umbilical vein endothelial cells induced by ox-LDL | |
| Liu et al. | Protection effect of curcumin for macrophage-involved polyethylene wear particle-induced inflammatory osteolysis by increasing the cholesterol efflux | |
| Xiang et al. | Effects of the stem extracts of Schisandra glaucescens Diels on collagen-induced arthritis in Balb/c mice | |
| RU2337693C1 (en) | Agent limiting lymphotoxin effect of methotrexate | |
| CA2995132C (en) | Method for treating pulmonary fibrosis comprising application of dimethylamino micheliolide | |
| ELhabal et al. | Transdermal fluocinolone acetonide loaded decorated hyalurosomes cellulose acetate/polycaprolactone nanofibers mitigated Freund’s adjuvant-induced rheumatoid arthritis in rats | |
| Mirshafiey et al. | Alginate and its comonomer mannuronic acid: medical relevance as drugs | |
| US11058655B2 (en) | Compositions and methods for treatment of inflammation | |
| CN1111407C (en) | Anti-cancer composition | |
| Abbas et al. | Histopathological Changes in Brain Tissues Associated with Oral Administration of Tramadol in Male Rats. | |
| RU2411947C1 (en) | Medication increasing antitumour effect of methotrexate | |
| Firdausy et al. | Acute toxicity of non-hexane fraction of ethanolic extract of ant-plant (Myrmecodia tuberose (Jack) Bl.) hypocotyls in rats | |
| HASSAN et al. | Evaluation of the changes induced by tramadol and the possible protective effect of vitamin C on the kidney. | |
| JP2015091772A (en) | Use of patchouli extract for production of composition with antimicrobial action | |
| EP4223282A1 (en) | Microspheres for extended release of fenofibrate | |
| CN110201115B (en) | Traditional Chinese medicine composition for treating stubborn arthralgia and osteoarticular pain, ostealgia paste and preparation method of ostealgia paste | |
| Khalili et al. | Curcumin modulates the level of IL-17 and IL-10 cytokines in two models of experimental liver injury in male rats | |
| FI129856B (en) | Pharmaceutical composition for the treatment of skin burn lesions | |
| WO2018138678A1 (en) | New compositions for the treatment of articular disorders | |
| CN104189223B (en) | A kind of pharmaceutical composition promoting wound healing and preparation method thereof | |
| Bobyntsev et al. | Morphological changes in immune and endocrine organs of stressed mice after administration of a gonadotropin-releasing hormone analogue |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090320 |