RU2323740C1 - "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE - Google Patents
"NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE Download PDFInfo
- Publication number
- RU2323740C1 RU2323740C1 RU2006130206/13A RU2006130206A RU2323740C1 RU 2323740 C1 RU2323740 C1 RU 2323740C1 RU 2006130206/13 A RU2006130206/13 A RU 2006130206/13A RU 2006130206 A RU2006130206 A RU 2006130206A RU 2323740 C1 RU2323740 C1 RU 2323740C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- chickens
- novosibirsk
- vaccine
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 156
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 71
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 40
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 5
- 241001473385 H5N1 subtype Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 15
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 105
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 105
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 34
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 33
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 28
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 28
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 28
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 28
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 27
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 22
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 21
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 20
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 20
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 16
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 10
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 7
- 101710158312 DNA-binding protein HU-beta Proteins 0.000 description 7
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 7
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 7
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 101710118188 DNA-binding protein HU-alpha Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 101710144128 Non-structural protein 2 Proteins 0.000 description 5
- 101710199667 Nuclear export protein Proteins 0.000 description 5
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 5
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 5
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 5
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 4
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 3
- 101150080862 NA gene Proteins 0.000 description 3
- 206010040007 Sense of oppression Diseases 0.000 description 3
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241001231806 H5N9 subtype Species 0.000 description 2
- 101150031278 MP gene Proteins 0.000 description 2
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 2
- 101150098863 N1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150118742 NP gene Proteins 0.000 description 2
- 102000008731 Nuclear RNA export factor Human genes 0.000 description 2
- 108050000506 Nuclear RNA export factor Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 150000001541 aziridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- CWGBFIRHYJNILV-UHFFFAOYSA-N (1,4-diphenyl-1,2,4-triazol-4-ium-3-yl)-phenylazanide Chemical compound C=1C=CC=CC=1[N-]C1=NN(C=2C=CC=CC=2)C=[N+]1C1=CC=CC=C1 CWGBFIRHYJNILV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical group C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000006576 Althaea officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 101100508406 Caenorhabditis elegans ifa-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000272161 Charadriiformes Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101150105849 H5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010029660 Intrinsically Disordered Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150028431 N5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150076514 NS gene Proteins 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 101710132653 Protein M2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N Rimantadine hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 1
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000002161 passivation Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000008593 response to virus Effects 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000019722 synbiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к новому штамму Influenzae virus avicum, и может быть использовано для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гриппа типа А.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, in particular to a new strain of Influenzae virus avicum, and can be used to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines, as well as in the development and manufacture of diagnostic tools and specific prophylaxis of influenza type A.
Таксономически вирусы гриппа отнесены к семейству ортомиксовирусов (Ortho-myxoviridae, по классификации ICTV - 00.046).Taxonomically influenza viruses are assigned to the family of orthomyxoviruses (Ortho-myxoviridae, ICTV classification - 00.046).
В рамках семейства Orthomyxoviridae (по классификации ICTV - 00.046) вирусы типов А и В образуют род Genus Influenzavirus А (по классификации ICTV - 00.046.0.01, по классификации NCBI, соответственно, ID: 197911 и ID: 197912).Within the Orthomyxoviridae family (according to the ICTV classification - 00.046), type A and B viruses form the genus Genus Influenzavirus A (according to the ICTV classification - 00.046.0.01, according to the NCBI classification, respectively, ID: 197911 and ID: 197912).
Вирусы типа С образуют род Genus Influenzavirus С (по классификации ICTV - 00.046.02.001, по классификации NCBI ID: 197913).Type C viruses form the genus Genus Influenzavirus C (according to ICTV classification - 00.046.02.001, according to classification NCBI ID: 197913).
Принадлежность штамма вируса гриппа к одному из этих родов определяется консервативными элементами генома, задающими антигенные характеристики нуклеокапсидов.The affiliation of a strain of influenza virus to one of these genera is determined by conservative elements of the genome that specify the antigenic characteristics of nucleocapsids.
Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц, преобладающих в культуре клеток, 50-120 нм. Филаментовидные вирионы, доминирующие при размножении вируса в макроорганизме, имеют диаметр около 20 нм, длину 200-300 нм и более.Influenza virus virions are membranous, pleomorphic. The diameter of the sphere-like particles prevailing in the cell culture is 50-120 nm. The filamentous virions that dominate the reproduction of the virus in a macroorganism have a diameter of about 20 nm, a length of 200-300 nm or more.
На поверхности вириона находятся шипообразные выступы (спайки) длиной 10-14 нм, диаметром 4-6 нм, в количестве около 500. Спайк - гомотример молекул гемагглютинина (НА - hemagglutinin), укорененных в вирусной мембране гидрофобными доменами.On the surface of the virion are tenon-shaped protrusions (adhesions) 10-14 nm long, 4-6 nm in diameter, in an amount of about 500. Spike is a homotrimer of hemagglutinin molecules (HA - hemagglutinin), rooted in the viral membrane by hydrophobic domains.
В промежутках между кластерами спайков у вирусов типа А размещаются около 100 молекул экзо-альфа-сиалидазы (нейраминидазы) (NA - neuraminidase). Этот вирусный фермент расщепляет сиалоолигосахариды - производные N-ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты, которые используются вирусом в качестве рецепторов для прикрепления к клеточной мембране. Их синтетические аналоги - занамивир и озельтамивир - применяются для химиотерапии гриппа.Between the spike clusters of type A viruses, about 100 molecules of exo-alpha-sialidase (neuraminidase) (NA - neuraminidase) are located. This viral enzyme breaks down sialooligosaccharides, derivatives of N-acetylneuraminic (sialic) acid, which are used by the virus as receptors for attachment to the cell membrane. Their synthetic analogues, zanamivir and oseltamivir, are used for chemotherapy for influenza.
Помимо НА и NA на мембране вириона экспонированы тетрамеры белка М2, эктодомены которых, будучи намного мельче эктодоменов ГА, тем не менее, служат поверхностными антигенами, антитела к которым усиливают иммунитет к гриппу.In addition to HA and NA, tetramers of the M2 protein are exposed on the virion membrane, the ectodomains of which, being much smaller than the HA ectodomains, nevertheless serve as surface antigens, antibodies to which enhance immunity to influenza.
Молекулы М2 функционируют в качестве протонных каналов, необходимых для запуска функции слияния вирусной и эндосомной мембран. Эти каналы служат мишенями таких противовирусных химиопрепаратов, как ремантадин и амантадин.M2 molecules function as proton channels necessary to trigger the fusion function of the viral and endosomal membranes. These channels target antiviral chemotherapy drugs, such as remantadine and amantadine.
Внутри оболочки вириона размещаются восемь винтообразно закрученных нуклеокапсидов (в диаметре 9-15 нм, длиной от 50 до 130 нм) с петлей на одном из концов каждого из них. В нуклеокапсидах находятся фрагменты вирусного генома, представленные линейными одноцепочечными антисмысловыми молекулами РНК.Inside the shell of the virion are eight helically twisted nucleocapsids (in diameter 9-15 nm, lengths from 50 to 130 nm) with a loop at one end of each of them. The nucleocapsid contains fragments of the viral genome, represented by linear single-chain antisense RNA molecules.
Восемь генов вируса кодируют 10 белков. Все они, кроме NS1, представлены в составе вириона. Транскрипты генов NS и М испытывают сплайсинг, и с каждого из них транслируется по два белка - NS1, NS2 и М1, M2, соответственно. Сплайсинг осуществляется в клеточном ядре, куда рибонуклеопротеидные системы вируса импортируются в целях его репликации.Eight viral genes encode 10 proteins. All of them, except NS1, are represented in the virion. Transcripts of the NS and M genes undergo splicing, and two proteins are translated from each of them - NS1, NS2 and M1, M2, respectively. Splicing is performed in the cell nucleus, where the ribonucleoprotein systems of the virus are imported in order to replicate it.
Общий размер генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт).The total genome size is about 13,600 nucleotides (nt).
Фрагмент №1 (около 2350 нт) кодирует РВ2 (polymerase basic unite 2) - вторую субъединицу гетеротримерного РНК-полимеразного вирусного комплекса (основный белок 2), изоэлектрическая точка (pI) которого находится в щелочной области.Fragment No. 1 (about 2350 nt) encodes PB2 (polymerase basic unite 2), the second subunit of the heterotrimeric RNA polymerase virus complex (basic protein 2), whose isoelectric point (pI) is in the alkaline region.
Фрагмент №2 (как правило, чуть менее 2350 нт) кодирует другой компонент того же комплекса - основной белок РВ1 (polymerase basic unite 1).Fragment No. 2 (as a rule, slightly less than 2350 nt) encodes another component of the same complex - the main protein PB1 (polymerase basic unite 1).
Фрагмент №3 (около 2250 нт) кодирует кислый белок РНК-полимеразного комплекса PA (polymerase acidic unite).Fragment No. 3 (about 2250 nt) encodes an acidic protein of the PA RNA polymerase complex (polymerase acidic unite).
Комплекс РВ1-РВ2-РА осуществляет как транскрипцию, так и репликацию генов вируса. При этом РВ1 работает как «классическая» полимераза, обеспечивающая полимеризацию в сочетании с эндонуклеазным вырезанием; РВ2 специфически связывается с кэпом - 7-метил-гуанозиновым остатком на 5′- на конце плюс-РНК, пришитым к ней посредством 5′-5′-трифосфатного сегмента; РА задействована в репликации, элонгации и эндонуклеазной активности.The PB1-PB2-RA complex carries out both transcription and replication of virus genes. At the same time, PB1 works as a “classical” polymerase, which provides polymerization in combination with endonuclease excision; PB2 specifically binds to the cap, the 7-methyl-guanosine residue at the 5′- end of the plus-RNA attached to it via the 5′-5′-triphosphate segment; RA is involved in replication, elongation, and endonuclease activity.
В 5′ и 3′-концевых участках всех генов находятся повторяющиеся 13- и 12-нуклеотидные сегменты промоторов - специфических сайтов связывания РВ 1. Повторы 5′-концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5′-AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3′-конце. Кроме того, 3′-концевые области некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида.In the 5 ′ and 3′-terminal regions of all genes, there are repeating 13- and 12-nucleotide segments of promoters - specific binding sites of
Фрагмент №4 (около 1780 нт) кодирует гемагглютинин (НА).Fragment No. 4 (about 1780 nt) encodes hemagglutinin (HA).
Фрагмент №5 (ген NP, около 1575 нт) кодирует нуклеопротеин (NP).Fragment No. 5 (NP gene, about 1575 nt) encodes a nucleoprotein (NP).
Агрегаты синтезированного в зараженной клетке NP захватывают вирусные РНК с компонентами РНК-полимеразного комплекса (белками РА, ВР1, ВР2) и способствуют почкованию вирионов.The aggregates of NP synthesized in an infected cell capture viral RNA with components of the RNA polymerase complex (PA, BP1, BP2 proteins) and contribute to the budding of virions.
Фрагмент №6 (около 1420 нт) кодирует нейраминидазу (NA).Fragment No. 6 (about 1420 nt) encodes neuraminidase (NA).
Фрагмент №7 (ген МР, около 1050 нт) кодирует нуклеокапсидный матриксный белок М1 и мембранный матриксный белок М2. Их последовательности частично совпадают в N-концевых участках вследствие сплайдинга транскриптов гена М, создающего условия для неоднозначного синтеза и -РНК. При этом крупный С-концевой сегмент белка М2 транслируется со сдвигом рамки.Fragment No. 7 (the MP gene, about 1050 nt) encodes the nucleocapsid matrix protein M1 and membrane matrix protein M2. Their sequences partially coincide in the N-terminal regions due to the splicing of transcripts of the M gene, which creates the conditions for ambiguous synthesis and -RNA. In this case, a large C-terminal segment of the M2 protein is translated with a frame shift.
Фрагмент №8 (ген NS, около 900 нт), транскрипт которого содержит крупный нитрон и подвергается сплайсингу, кодирует белки NS2 и NS1.Fragment No. 8 (NS gene, about 900 nt), the transcript of which contains large nitron and undergoes splicing, encodes NS2 and NS1 proteins.
Их последовательности частично перекрываются вследствие неоднозначной трансляции. При этом крупный С-концевой сегмент белка NS1 (аналогично С-концевому сегменту белка М2) синтезируется при трансляции со сдвигом рамки. Белок NS2, ответственный за транспорт нуклеопротеидных компонентов вируса в клеточное ядро, иногда упоминают как NEF (nuclear exportfactor). Некоторое время его считали неструктурным белком, но позднее обнаружили в составе вирионов. Неструктурный белок NS1 регулирует сплайсинг и трансляцию РНК, а также модулирует синтез интерферона клеткой в ответ на заражение вирусом.Their sequences partially overlap due to ambiguous translation. In this case, the large C-terminal segment of the NS1 protein (similar to the C-terminal segment of the M2 protein) is synthesized during translation with a frame shift. Protein NS2, responsible for the transport of the nucleoprotein components of the virus into the cell nucleus, is sometimes referred to as NEF (nuclear exportfactor). For some time it was considered an unstructured protein, but was later found in virions. The non-structural NS1 protein regulates RNA splicing and translation, and also modulates interferon synthesis by the cell in response to virus infection.
Общая молекулярная масса вириона составляет примерно 250×106, плотность 1,19 г/см3, коэффициент седиментации сфероподобных частиц 700-800 S20w. Вирионы чувствительны к воздействию растворителей липидов, неионных детергентов, формальдегида, окислителей, бета-пропиолактона, производных азиридина, быстро инактивируется при нагревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при снижении рН ниже 5,0 [ICTV - International Committee on Taxonomy of Viruses (2006).The total molecular weight of the virion is approximately 250 × 10 6 , density 1.19 g / cm 3 , sedimentation coefficient of sphere-like particles 700-800 S 20w . Virions are sensitive to the effects of lipid solvents, nonionic detergents, formaldehyde, oxidizing agents, beta-propiolactone, aziridine derivatives, are rapidly inactivated by heating (56 ° C), ultraviolet radiation and when the pH drops below 5.0 [ICTV - International Committee on Taxonomy of Viruses (2006).
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/]
Грипп А - контагиозное вирусное заболевание, которое вызывает сезонные эпизоотии и панзоотии с различным уровнем смертности в зависимости от степени патогенности возбудителей.Influenza A is a contagious viral disease that causes seasonal epizootics and panzootia with various mortality rates, depending on the degree of pathogenicity of the pathogens.
Вирус гриппа А широко распространен в природе, поражает многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного экологических комплексов. От диких птиц выделены вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания. Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течении длительного времени (6-8 месяцев), инфицирование происходит водно-фекальным путем.Influenza A virus is widespread in nature and affects many species of mammals and birds, mainly aquatic and near-water ecological complexes. Viruses with all known combinations of surface proteins were isolated from wild birds, while the infection in wild birds proceeds in the form of enteritis, with no visible signs of the disease. This indicates a high degree of adaptation of influenza A viruses to wild birds, which are the natural hosts of influenza viruses. The virus persists in water for a long time (6-8 months), infection occurs by water-fecal route.
Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: НА и NA. Установлено, что антитела хозяина к НА и NA обеспечивают основу гуморального иммунитета, при этом ведущую роль играют протективные антитела к НА. Известно 16 антигенных подтипов НА (Н1-Н16) и 9 подтипов NA (N1-N9). Вирус гриппа обладает сегментированным геномом. состоящим их 8 сегментов, которые обладают высокой способностью к реассортации.Influenza A virus has a high degree of variability, especially for the surface glycoproteins of the virion: HA and NA. It has been established that host antibodies to HA and NA provide the basis for humoral immunity, while protective antibodies to HA play a leading role. There are 16 known antigenic subtypes of HA (H1-H16) and 9 subtypes of NA (N1-N9). The influenza virus has a segmented genome. consisting of 8 segments, which have a high ability to reassort.
Различные комбинации НА и NA способны привести к появлению высоковирулентных штаммов вируса, вызывающих высокий процент смертности.Various combinations of HA and NA can lead to the emergence of highly virulent strains of the virus, causing a high mortality rate.
В настоящее время наблюдается распространение гриппа птиц (ГП). вызванного вирусом типа А, подтипа H5N1, на территории Евразии. Считается, что этот подтип является одним из наиболее опасных в плане возникновения пандемий (1).The spread of avian influenza (GP) is currently observed. caused by type A virus, subtype H5N1, in Eurasia. It is believed that this subtype is one of the most dangerous in terms of pandemics (1).
Заболевание, вызванное высокопатогенными штаммами возбудителя ГП типа А (H5N1), наносит колоссальный экономический ущерб в промышленном птицеводстве, что подтверждается недавними эпизоотическими вспышками «куриного гриппа» в Сибирском, Центральном и Южном регионах Российской Федерации, а также на территории стран ближнего и дальнего зарубежья.The disease, caused by highly pathogenic strains of the pathogen type A (H5N1), causes tremendous economic damage in industrial poultry farming, as evidenced by recent epizootic outbreaks of "chicken flu" in the Siberian, Central and Southern regions of the Russian Federation, as well as in the countries of the near and far abroad.
Важными условиями успешной борьбы с этим заболеванием являются своевременная и правильная его диагностика и проведение мер специфической профилактики.Important conditions for the successful fight against this disease are its timely and correct diagnosis and the implementation of specific preventive measures.
При сравнении выделенных изолятов вируса ГП обнаруживается чрезвычайно высокая их генетическая и антигенная вариабельность. Это обстоятельство вынуждает вести постоянный поиск новых изолятов вируса ГП, пригодных для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.When comparing the isolated isolates of the HPV virus, their extremely high genetic and antigenic variability is found. This circumstance forces us to conduct a constant search for new isolates of the GP virus, suitable for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.
В странах, где отмечены вспышки этого заболевания, специфическая профилактика ГП проводится с помощью инактивированных и рекомбинантных вакцин.In countries where outbreaks of the disease are noted, specific prophylaxis of GP is carried out using inactivated and recombinant vaccines.
Известен ряд зарубежных штаммов вируса ГП, используемых для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (2-7).A number of foreign strains of the GP virus are known that are used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (2-7).
Известен штамм H7N1/Rostock (№ доступа последовательности в Genbank=х 52226) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (8).The known strain H7N1 / Rostock (access sequence number in Genbank = x 52226) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (8).
Известен штамм А /turkey/Ontario/7732/66 (H5N9) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (9-11).A known strain A / turkey / Ontario / 7732/66 (H5N9) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (9-11).
Известен штамм A /chicken/Pakistan/95 (H7N3) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (12).A known strain A / chicken / Pakistan / 95 (H7N3) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (12).
Известен штамм А /chicken /Queretaro/14588-19/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Queretaro / 14588-19 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /turkey/Wisconsin 68 (H5N9) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / turkey / Wisconsin 68 (H5N9) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /turkey/Oregon/71 (H7N3) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / turkey / Oregon / 71 (H7N3) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /mallard/Ohio/556/87 (H5N9) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / mallard / Ohio / 556/87 (H5N9) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Mexico/31381-7/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Mexico / 31381-7 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Mexico/26654-1374/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Mexico / 26654-1374 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /turkey/Minnesota/10734-5/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / turkey / Minnesota / 10734-5 / 95 (H5N2) of the GP virus used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Jalisco/14589-660/94 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Jalisco / 14589-660 / 94 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Veracruz/28159-398/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Veracruz / 28159-398 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Puebla/28159-474/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Puebla / 28159-474 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /chicken/Chiapas/28159-488/95 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (13).A known strain A / chicken / Chiapas / 28159-488 / 95 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (13).
Известен штамм A /turkey/Minnesota/3689-1551/81 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).A known strain A / turkey / Minnesota / 3689-1551 / 81 (H5N2) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Известен штамм A /duck/Singapore/F119/97 (H5N3) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).A known strain A / duck / Singapore / F119 / 97 (H5N3) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Известен штамм A /Hong Kong/156/97 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).A known strain A / Hong Kong / 156/97 (H5N1) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Известен штамм A /Hong Kong/483/97 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).A known strain A / Hong Kong / 483/97 (H5N1) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Известен штамм A /duck/Potsdam/1402/86 (H5N2) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).A known strain A / duck / Potsdam / 1402/86 (H5N2) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Известен штамм A /duck/Potsdam/2243/84 (H5N6) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (15).A known strain A / duck / Potsdam / 2243/84 (H5N6) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (15).
Известен штамм A /ck/Italy/473/99 (H7N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (15).A known strain A / ck / Italy / 473/99 (H7N1) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (15).
Известен штамм A /duck/Potsdam/15/80 (H7N7) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (15).A known strain A / duck / Potsdam / 15/80 (H7N7) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (15).
Известен штамм A /ck/UAE/415/99 (H7N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (15).A known strain A / ck / UAE / 415/99 (H7N1) of the GP virus is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (15).
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм A /Hong Kong/483/97 (H5N1) вируса ГП, используемый для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (14).The closest to the invention according to the set of essential features is the strain A / Hong Kong / 483/97 (H5N1) of the GP virus, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations (14).
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала штаммов вируса ГП, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде, сохраняющих антигенную и иммуногенную активность после инактивации, обеспечивая тем самым получение чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и вакцинных препаратов, создающих эффективную защиту домашней птицы против гомологичного вируса и предотвращающих выделение вакцинированной птицей возбудителя инфекции в окружающую среду.The problem to which the present invention is directed, is to expand the arsenal of strains of the virus of GP with high infectious, antigenic and immunogenic activity in their native form, preserving antigenic and immunogenic activity after inactivation, thereby providing sensitive and highly specific diagnosticum and vaccine preparations that create effective protection of poultry against a homologous virus and preventing the pathogen from spreading the vaccine to the environment Wednesday
Указанная задача решена получением штамма «Новосибирский» (авторское наименование) ГП типа А, подтипа H5N1, используемого для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ГП.This problem was solved by obtaining the strain "Novosibirsk" (copyright) type A GP, subtype H5N1, used to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prophylaxis of GP.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма «Новосибирский», был выделен в ФГУ «ВНИИЗЖ» в августе 2005 г. из проб, поступивших 22 июля того же года из села Копкуль Купинского района Новосибирской области. Это были ткани трахеи, легких, селезенки и головного мозга, взятые у заболевших одномесячных утят домашней утки (Anas platyrhynchos domesticus).The viral isolate that served as the source for the Novosibirsk strain was isolated at VNIIZZH in August 2005 from samples received on July 22 of the same year from the village of Kopkul, Kupinsky District, Novosibirsk Region. These were tissues of the trachea, lungs, spleen and brain taken from diseased one-month-old ducklings of the domestic duck (Anas platyrhynchos domesticus).
При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали метод формирования бляшек под агаром на культуре клеток MDCK. Для пассирования каждый раз отбирали вирус из одной бляшки, имевшей типичные размеры. После 15 пассажей получена вирусная популяция, обладающая относительно стабильными инфекционными и иммунологическими свойствами. Титр инфекционной активности для клеток MDCK составлял 108,5 ЦПД50, титр в реакции гемагглютинации (РГА) составил 1:128.When isolating the virus in order to obtain a homogeneous population with optimal biotechnological properties, the method of forming plaques under agar on an MDCK cell culture was used. For passivation, each time a virus was selected from one plaque, which had typical sizes. After 15 passages, a viral population was obtained with relatively stable infectious and immunological properties. The titer of infectious activity for MDCK cells was 10 8.5 CPD 50 , the titer in the hemagglutination reaction (RGA) was 1: 128.
После вышеописанного клонирования была проведена адаптация вируса к эмбрионам кур посредством семи последовательных пассажей в эмбрионах SPF-кур, после чего был получен штамм «Новосибирский», имеющий стабильные биотехнологические свойства, которые позволяют использовать его в качестве производственной расплодки для получения антигенного материала при изготовлении диагностикумов и вакцинных препаратов.After the cloning described above, the virus was adapted to chicken embryos by means of seven consecutive passages in SPF chicken embryos, after which the Novosibirsk strain was obtained, which has stable biotechnological properties that allow it to be used as a production seed for producing antigenic material in the manufacture of diagnostic kits and vaccine preparations.
Штамм «Новосибирский» вируса ГП типа А, подтипа H5N1, депонирован 12 апреля 2006 г. во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой) - производственный штамм «ВНИИЗЖ» №125-ДЕП «Новосибирский» вируса ГП типа А, подтипа H5N1.The Novosibirsk strain of type A HPV virus, subtype H5N1, was deposited on April 12, 2006 with the All-Russian State Collection of Microorganism Strains Used in Veterinary and Animal Husbandry, Federal State Institution All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed (FGU) “VGNKI”) under the registration number (link) is the production strain “ARRIAH” No. 125-DEP “Novosibirsk” of the type A virus, subtype H5N1.
По сравнению с исходным изолятом штамм имеет генетические и фенотипические особенности. В отличие от исходного изолята, он воспроизводимым образом клонируется в культуре MDCK, продуцируя однородные бляшки; обладает высокой вирулентностью, дает хороший урожай при размножении в эмбрионах кур и лучше сохраняет антигенную силу после инактивации. Экспериментально подтверждена возможность его использования для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики и диагностики ГП.Compared to the original isolate, the strain has genetic and phenotypic features. Unlike the original isolate, it reproducibly clones in the MDCK culture, producing uniform plaques; It has high virulence, gives a good harvest when propagated in chicken embryos, and better retains antigenic strength after inactivation. The possibility of its use for monitoring the immunogenic and antigenic activity of vaccines and for the preparation of biological products for specific prophylaxis and diagnosis of GP has been experimentally confirmed.
Сущность изобретения пояснена чертежами, на которых на:The invention is illustrated by drawings, in which:
фиг.1 представлена дендрограмма, отражающая результаты филогенетического анализа последовательностей нуклеотидов фрагмента гена Н5 (731-1113 нт) изолятов высокопатогенного вируса ГП. Выделены группы: I - российские изоляты и изоляты Qinghai; II - изоляты генетической линии A/Guangdong/1/96, -figure 1 presents the dendrogram reflecting the results of phylogenetic analysis of the nucleotide sequences of the H5 gene fragment (731-1113 nt) of isolates of the highly pathogenic GP virus. The following groups were distinguished: I - Russian isolates and isolates of Qinghai; II - isolates of the genetic line A / Guangdong / 1/96, -
фиг.2 - дендограмма, отражающая результаты филогенетического анализа последовательностей нуклеотидов фрагмента гена N1 (605-937 нт) изолятов высокопатогенного вируса ГП. Выделены группы: I - российские изоляты и изоляты Qinghai; II - изоляты генетической линии A/Guangdong/1/96, -figure 2 is a dendogram reflecting the results of phylogenetic analysis of the nucleotide sequences of a fragment of the N1 gene (605-937 nt) isolates of highly pathogenic virus GP. The following groups were distinguished: I - Russian isolates and isolates of Qinghai; II - isolates of the genetic line A / Guangdong / 1/96, -
а также в перечне последовательностей, в котором:as well as in the sequence listing, in which:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена ВР2 штамма «Новосибирский» вируса ГП;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the BP2 gene of the Novosibirsk strain of the GP virus;
SEQ ID NO:2 - последовательность нуклеотидов гена ВР1;SEQ ID NO: 2 — nucleotide sequence of the BP1 gene;
SEQ ID NO:3 - последовательность нуклеотидов гена РА;SEQ ID NO: 3 — nucleotide sequence of the RA gene;
SEQ ID NO:4 - последовательность нуклеотидов гена НА;SEQ ID NO: 4 — nucleotide sequence of the HA gene;
SEQ ID NO:5 - последовательность нуклеотидов гена NA;SEQ ID NO: 5 — nucleotide sequence of the NA gene;
SEQ ID NO:6 - последовательность нуклеотидов гена NP;SEQ ID NO: 6 — nucleotide sequence of the NP gene;
SEQ ID NO:7 - последовательность нуклеотидов гена МР;SEQ ID NO: 7 — nucleotide sequence of the MP gene;
SEQ ID NO:8 - последовательность нуклеотидов гена NS;SEQ ID NO: 8 — NS nucleotide sequence;
SEQ ID NO:9 - последовательность аминокислот белка ВР2 штамма «Новосибирский» вируса ГП;SEQ ID NO: 9 — amino acid sequence of the BP2 protein of the Novosibirsk strain of the GP virus;
SEQ ID NO:10 - последовательность аминокислот белка ВР1;SEQ ID NO: 10 — amino acid sequence of protein BP1;
SEQ ID NO:11 - последовательность аминокислот белка PA;SEQ ID NO: 11 — PA amino acid sequence;
SEQ ID NO:12 - последовательность аминокислот белка НА;SEQ ID NO: 12 — amino acid sequence of the HA protein;
SEQ ID NO:13 - последовательность аминокислот белка NA;SEQ ID NO: 13 — amino acid sequence of the NA protein;
SEQ ID NO:14 - последовательность аминокислот белка NP;SEQ ID NO: 14 — NP amino acid sequence;
SEQ ID NO:15 - последовательность аминокислот белка М1;SEQ ID NO: 15 — amino acid sequence of protein M1;
SEQ ID NO:16 - последовательность аминокислот белка М2;SEQ ID NO: 16 — amino acid sequence of protein M2;
SEQ ID NO:17 - последовательность аминокислот белка NS1;SEQ ID NO: 17 — amino acid sequence of NS1 protein;
SEQ ID NO:18 - последовательность аминокислот белка NS2;SEQ ID NO: 18 — amino acid sequence of NS2 protein;
Штамм «Новосибирский» вируса ГП характеризуется следующими признаками и свойствами.The strain "Novosibirsk" of the GP virus is characterized by the following features and properties.
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «Новосибирский» вируса ГП относится к семейству Orthomyxoviridae, серотипу А, подтипу H5N1 и обладает морфологическими признаками, характерными для вируса гриппа типа А.The strain "Novosibirsk" of the GP virus belongs to the family Orthomyxoviridae, serotype A, subtype H5N1 and has morphological characteristics characteristic of influenza virus type A.
Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц 50-120 нм; филаментовидные частицы около 20 нм в диаметре, длиной 200-300 нм и более. На поверхности вириона, возвышаясь над липидной мембраной на 10-14 нм, находятся около 500 шипообразных выступов (спайков), образованных гомотримерами НА.Influenza virus virions are membranous, pleomorphic. The diameter of the sphere-like particles is 50-120 nm; filamentous particles about 20 nm in diameter, 200-300 nm in length or more. On the surface of the virion, towering above the lipid membrane by 10-14 nm, there are about 500 spike-like protrusions (spikes) formed by HA homotrimers.
В промежутках между кластерами спайков у вирусов типа А размещаются, как правило, около 100 молекул NA.In the intervals between spike clusters in type A viruses, as a rule, about 100 NA molecules are located.
Липидная мембрана окружает петлеобразные филаменты нуклеокапсидов с восемью фрагментами вирусного генома, каждый из которых представлен линейной одноцепочечной антисмысловой РНК.The lipid membrane surrounds loop-like filaments of nucleocapsids with eight fragments of the viral genome, each of which is represented by a linear single-stranded antisense RNA.
Общая длина генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт). Наиболее крупный фрагмент (№1) содержит около 2350 нт; №2 - чуть менее 2350 нт; №3, как правило, - 2250 нт; №4 - 1780 нт; №5 - 1575 нт; №6 - 1420 нт; №7 - 1050 нт; №8 - 900 нт.The total genome length is about 13,600 nucleotides (nt). The largest fragment (No. 1) contains about 2350 nt; No. 2 - a little less than 2350 nt; No. 3, as a rule, - 2250 nt; No. 4 - 1780 nt; No. 5 - 1575 nt; No. 6 - 1420 nt; No. 7 - 1050 nt; No. 8 - 900 nt.
На обоих концах каждой геномной цепи РНК содержатся повторяющиеся отрезки, причем повторы 5′-концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5′-AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3′-конце. Кроме того, 3′-концевые участки некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses (2006). http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/].At both ends of each RNA genomic chain, repeating segments are contained, and repeats of the 5′-terminal region (for type A viruses they look like 5′-AGUAGAAACAAGG) are complementary to inverted repeats located at the 3′-end. In addition, the 3'-terminal sections of some fragments of the genome contain conserved segments typical of viral strains that infect subjects of a particular biological species [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses (2006). http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB/].
Антнгенные свойстваAntenna properties
По своим антигенным свойствам штамм «Новосибирский» вируса ГП относится к типу А, подтипу H5N1.By its antigenic properties, the strain "Novosibirsk" of the GP virus belongs to type A, subtype H5N1.
Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой.The virus is stably neutralized by homologous antiserum.
Инактивированный вирус индуцирует антитела, выявляемые методами РТГА, РН, РДП и ИФА. Так, через 12 дней после однократной иммунизации цыплят инактивированной вакциной из штамма «Новосибирский» титр антител к НА, обеспечивающих реакцию торможения гемагглютинации, составил 5,0 log2; титр антител, определяемых методом ИФА, равнялся 1:1243, преципитирующие антитела обнаруживались при разведении исследуемых сывороток от 1:2 до 1:4 (см. табл.1)Inactivated virus induces antibodies detected by RTGA, PH, RDP and ELISA. So, 12 days after a single immunization of chickens with an inactivated vaccine from the Novosibirsk strain, the titer of antibodies to HA providing the hemagglutination inhibition response was 5.0 log 2 ; the titer of antibodies determined by ELISA was 1: 1243, precipitating antibodies were detected by diluting the test sera from 1: 2 to 1: 4 (see table 1)
Определение и сравнительный анализ первичной структуры амплифицированных фрагментов кДНК показал, что исследованная проба содержала фрагменты генома полевых изолятов вируса ГП. Первичная структура сайта разрезания белка NA изолята имела вид PQGRERRRKKR*GLF, что свидетельствует о том, что он относится к группе высокопатогенных штаммов вируса ГП.The determination and comparative analysis of the primary structure of amplified cDNA fragments showed that the test sample contained fragments of the genome of field isolates of the GP virus. The primary structure of the cutting site of the NA isolate protein was PQGRERRRKKR * GLF, which indicates that it belongs to the group of highly pathogenic strains of the GP virus.
Сравнение полученных последовательностей с последовательностями гена НА типа Н5 и гена NA типа N1 из банка данных «Flu. The Influenza Sequence Database» (http://www.flu.lanl.gov/) показало, что НА штамма «Новосибирский» относится к подтипу Н5, а его NA - к подтипу N1. Последовательности того и другого белка состоят в близком родстве с соответствующими последовательностями обширной линии изолятов филогенетической группы A/Goose/Guandong/1/96 (H5N1), выделенных на территории Китая и Юго-Восточной Азии после 1997 года (см. фиг.1 и 2).Comparison of the obtained sequences with the sequences of the HA gene type H5 and the NA gene type N1 from the database “Flu. The Influenza Sequence Database ”(http://www.flu.lanl.gov/) showed that the Novosibirsk strain NA belongs to the H5 subtype, and its NA to the N1 subtype. The sequences of both proteins are closely related to the corresponding sequences of the extensive line of isolates of the phylogenetic group A / Goose / Guandong / 1/96 (H5N1), isolated in China and Southeast Asia after 1997 (see figures 1 and 2 )
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «Новосибирский» проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность, предназначен для получения диагностических препаратов и для изготовления инактивированной вакцины против вируса ГП.Strain "Novosibirsk" shows a high biological, antigenic and immunogenic activity, is intended for the production of diagnostic products and for the manufacture of inactivated vaccines against the GP virus.
Штамм репродуцируется в 10-12-суточных эмбрионах кур при температуре 37,0±0,5°С и влажности 50-70%. Заражение в дозе в пределах от 1 до 104,0 ЭЛД50 вызывает специфическую гибель эмбрионов кур в период от 24 до 48 часов инкубирования. При этом вирус накапливается с титрами от 9,0 до 10,2 lg ЭЛД50/мл. Такой урожай обеспечивает приготовление 50-70 прививных доз вакцины из одного погибшего эмбриона. Штамм «Новосибирский» вируса ГП является стабильным, обладает высокой вирулентностью и адаптирован к размножению в эмбрионах кур.The strain is reproduced in 10-12-day-old chicken embryos at a temperature of 37.0 ± 0.5 ° C and a humidity of 50-70%. Infection in a dose in the range from 1 to 10 4.0 ELD 50 causes a specific death of chicken embryos during the period from 24 to 48 hours of incubation. In this case, the virus accumulates with titers from 9.0 to 10.2 lg ELD 50 / ml. Such a crop provides the preparation of 50-70 vaccinated doses of the vaccine from one dead embryo. The strain "Novosibirsk" of the GP virus is stable, has high virulence and is adapted for reproduction in chicken embryos.
Хемо- и генотаксономическая характеристикаChemo- and genotaxonomic characterization
Геном штамма «Новосибирский» вируса ГП состоит из восьми неодинаковых по размеру (900-2350 нт) фрагментов односпиральной минус-РНК, суммарная длина которых составляет около 14 тыс. нуклеотидов с молекулярной массой 4,5 МД. Вирионная РНК не обладает инфекционностью. В вирионах обнаружено 10 белков. Белки делятся на поверхностные (НА, NA, M2) и внутренние (РВ1, РВ2, PA, NP, M1, NS1, NS2).The genome of the Novosibirsk strain of the GP virus consists of eight unequal (900-2350 nt) fragments of single-stranded minus RNA, the total length of which is about 14 thousand nucleotides with a molecular weight of 4.5 MD. Virionic RNA is not infectious. 10 proteins were found in virions. Proteins are divided into surface (HA, NA, M2) and internal (PB1, PB2, PA, NP, M1, NS1, NS2).
НА и NA имеют важнейшие антигенные сайты, на которые вырабатывается защитный иммунитет, в первую очередь в виде нейтрализующих антител.HA and NA have the most important antigenic sites on which protective immunity is generated, primarily in the form of neutralizing antibodies.
Физические свойстваPhysical properties
Молекулярная масса вирионов составляет 250 МД, плавучая плотность в сахарозе 1,19 г/см3, коэффициент седиментации вирионов 700-800 S 20w.The molecular weight of the virions is 250 MD, the floating density in sucrose is 1.19 g / cm 3 , the sedimentation coefficient of the virions is 700-800 S 20w.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «Новосибирский» вируса ГП чувствителен к детергентам, формальдегиду, бета-пропиолактону, производным азиридина, быстро инактивируется при прогревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при рН ниже 5,0.The strain "Novosibirsk" of the GP virus is sensitive to detergents, formaldehyde, beta-propiolactone, derivatives of aziridine, is rapidly inactivated by heating (56 ° C), ultraviolet radiation and at pH below 5.0.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.Immunogenic activity - immunogen in the composition of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойства не обладает. Иммунизация цыплят дозой, в два раза превышающей прививную, не вызывает видимых клинических изменений в общем состоянии птицы, а также локальных поражений ткани в месте введения.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties. Immunization of chickens with a dose twice the vaccination dose does not cause visible clinical changes in the general condition of the bird, as well as local tissue lesions at the injection site.
Патогенность - высокая (внутривенный индекс 2,87, что соответствует высокопатогенным штаммам вируса ГП).Pathogenicity is high (intravenous index of 2.87, which corresponds to highly pathogenic strains of the GP virus).
Вирулентность - 100% гибель внутримышечно зараженных цыплят в дозе 106,0 ЭЛД50.Virulence - 100% death of intramuscularly infected chickens at a dose of 10 6.0 ELD 50 .
Онкогенность - отсутствует.Oncogenicity is absent.
Контагиозность - контагиозен. Неиммунные цыплята заражаются при совместном содержании с зараженными.Contagiousness is contagious. Non-immune chickens become infected when kept together with infected ones.
Стабильность штамма отмечена при проведении 5 последовательных пассажей на чувствительных цыплятах.Stability of the strain was observed with 5 consecutive passages on sensitive chickens.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1Example 1
Определение подтиповой антигенной характеристики штамма проводили с помощью перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с референтными гипериммунными сыворотками к антителам 15 Н-типов вируса ГП и гетерологичной сывороткой к вирусу ньюкаслской болезни. Испытуемый антиген исследовали с использованием набора референтных сывороток в РТГА.The determination of the subtype antigenic characteristics of the strain was carried out using a cross-reaction of inhibition of hemagglutination (RTGA) with reference hyperimmune sera to antibodies of 15 H-types of the GP virus and heterologous serum to the Newcastle disease virus. The test antigen was investigated using a set of reference sera in rtga.
Было отмечено торможение гемагглютинирующей активности штамма в разведениях от 1:32 до 1:256, как при использовании референтных сывороток, специфичных по отношению к вирусам подтипа Н5, так и при проверке экспериментальной сыворотки, полученной от цыплят при введении инактивированного препарата, приготовленного из штамма «Новосибирский» (см. табл.2). Это позволило отнести новый штамм к подтипу Н5 вируса гриппа типа А.Inhibition of the hemagglutinating activity of the strain in dilutions from 1:32 to 1: 256 was noted, both when using reference sera specific for the H5 subtype viruses and when testing experimental serum obtained from chickens with the introduction of an inactivated preparation prepared from the strain Novosibirsk ”(see table 2). This made it possible to attribute the new strain to the H5 subtype of type A influenza virus.
Для выявления генома вируса ГП из проб тканей птиц и экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) зараженных эмбрионов кур выделяли общую РНК, которую использовали для реакций ОТ и ПЦР. Первичную индикацию гена М проводили, используя праймеры AIVM49F и AIVM941R. После амплификации ДНК, полученной с применением указанных праймеров, был синтезирован вирусспецифический фрагмент кДНК размером 892 пар нуклеотидов (п.нт).To identify the genome of the GP virus, total RNA was isolated from samples of bird tissues and extraembryonic fluid (EEG) of infected chicken embryos, which was used for RT and PCR reactions. The primary indication of the M gene was carried out using primers AIVM49F and AIVM941R. After amplification of the DNA obtained using the indicated primers, a virus-specific cDNA fragment of 892 pairs of nucleotides (bp) was synthesized.
В случае получения положительного результата реакций ОТ и ПЦР проводили дифференциацию штамма. Посредством амплификации с применением праймеров aivH5_av_667F1, aivH5_av_1065R, nl_nov_408f, nl_nov_912r, был синтезирован вирусспецифический фрагмент кДНК размером 398 п.нт (Н5 ген) и 432 п.нт (N1 ген).In the case of a positive result of the RT and PCR reactions, the strain was differentiated. By amplification using the primers aivH5_av_667F1, aivH5_av_1065R, nl_nov_408f, nl_nov_912r, a virus-specific cDNA fragment of 398 bp (N5 gene) and 432 bp (N1 gene) was synthesized.
Анализ первичной структуры амплифицированных фрагментов кДНК показал, что исследованная проба содержала фрагменты генома полевых изолятов вируса ГП. Первичная структура сайта разрезания белка NA изолята имела вид PQGRERRRKKR*GLF, что свидетельствует о его принадлежности группе высокопатогенных штаммов вируса ГП.Analysis of the primary structure of amplified cDNA fragments showed that the test sample contained fragments of the genome of field isolates of the GP virus. The primary structure of the cutting site of the NA isolate protein was PQGRERRRKKR * GLF, which indicates its belonging to the group of highly pathogenic strains of the GP virus.
Проведено сравнение полученных последовательностей с последовательностями гена НА типа Н5 и гена NA типа N1 из банка данных «Flu. The Influenza Sequence Database» (http://www.flu.lanl.gol/). Показано, что НА выделенного изолята принадлежит к подтипу Н5, а NA к подтипу N1 обширной линии изолятов вируса ГП A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1), выделенных на территории Юго-Восточной Азии (включая Индонезию) и Китая, начиная с 1996 г. и по настоящее время (см. фиг.1 и 2).The obtained sequences were compared with the sequences of the HA gene type H5 and the NA gene type N1 from the Flu. The Influenza Sequence Database ”(http://www.flu.lanl.gol/). It was shown that the HA of the isolated isolate belongs to the H5 subtype, and NA to the N1 subtype of the extensive line of the A / Goose / Guangdong / 1/96 (H5N1) virus virus isolates isolated in Southeast Asia (including Indonesia) and China, starting from 1996 and to the present (see figures 1 and 2).
Ближайшими аналогами российских изолятов являются изоляты с озера Qinghai в одноименной провинции КНР (северо-восток Тибета), выделенные в мае 2005 г. во время вспышки гриппа у дикой водной птицы - гусей и чаек. У отдельных изолятов (как китайских, так и российских) обнаружены 1 или 2 аминокислотные и 2 или 3 нуклеотидные замены. В случае российских изолятов прослеживается корреляция определенных замен с географическим положением участков, на которых эти вирусные изоляты были получены.The closest analogues of Russian isolates are isolates from Qinghai Lake in the province of the same name in the PRC (northeast of Tibet), isolated in May 2005 during an outbreak of wild waterbird - geese and gulls. In individual isolates (both Chinese and Russian), 1 or 2 amino acid and 2 or 3 nucleotide substitutions were found. In the case of Russian isolates, there is a correlation of certain substitutions with the geographical location of the sites in which these virus isolates were obtained.
По результатам ПЦР получено заключение о принадлежности штамма «Новосибирский» семейству Orthomyxoviridae, вирусам гриппа А, подтипу H5N1.According to PCR results, a conclusion was obtained on the belonging of the Novosibirsk strain to the Orthomyxoviridae family, influenza A viruses, and the H5N1 subtype.
Таким образом, по данным серологического (с помощью РТГА) и молекулярно-биологического методов исследований (посредством ПЦР) установлена принадлежность штамма «Новосибирский» семейству Orthomyxoviridae, вирусам гриппа А, подтипу H5N1.Thus, according to the data of serological (using RTGA) and molecular biological methods of research (by PCR), the Novosibirsk strain belongs to the Orthomyxoviridae family, influenza A viruses, subtype H5N1.
Кроме того, доказана генетическая близость штамма «Новосибирский» и обширного набора изолятов вируса подтипа H5N1, выделенных на территории Юго-Восточной Азии в период с 1996 г. по настоящее время, а также группе российских изолятов, выделенных в 2005 г. Это обстоятельство позволяет использовать указанный штамм для изготовления вакцины, предназначенной для защиты домашних птиц от заражения особо опасными актуальными штаммами вируса гриппа.In addition, the genetic affinity of the Novosibirsk strain and the extensive set of isolates of the H5N1 subtype virus isolated in Southeast Asia from 1996 to the present, as well as the group of Russian isolates isolated in 2005, is proved. the specified strain for the manufacture of a vaccine intended to protect poultry from infection with particularly dangerous topical strains of the influenza virus.
Пример 2Example 2
Для оценки патогенности штамма использовали внутривенный индекс патогенности (IVPI), определяя его по методу, описанному в издании OIE «Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals». С учетом данных, представленных нами в таблице 3, этот индекс составил 2,9. Согласно критериям OIE данный штамм можно считать высокопатогенным.To assess the pathogenicity of the strain, the intravenous pathogenicity index (IVPI) was used, determining it according to the method described in OIE's Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals. Based on the data presented by us in table 3, this index was 2.9. According to the OIE criteria, this strain can be considered highly pathogenic.
Пример 3Example 3
Штамм «Новосибирский» высокопатогенен и действует очень быстро - его «полулетальная» доза вызывает гибель 50% эмбрионов кур в период от 24-х до 48-ми часов после заражения, что практически во всех случаях позволяет не сомневаться в специфичности гибели. При этом инфекционная активность ЭЭЖ, содержащейся в яйце с погибшим эмбрионом, составляла 9,2-10,2 lg ЭЛД50/мл (см. табл.4). Вирусного материала, полученного из одного эмбриона, хватает на производство 50-70 прививных доз инактивированной эмульсионной вакцины.Strain "Novosibirsk" is highly pathogenic and acts very quickly - its "semi-lethal" dose causes the death of 50% of chicken embryos in the period from 24 to 48 hours after infection, which in almost all cases allows you to doubt the specificity of death. In this case, the infectious activity of the EEG contained in the egg with the dead embryo was 9.2-10.2 lg ELD 50 / ml (see table 4). The viral material obtained from one embryo is enough to produce 50-70 vaccinated doses of an inactivated emulsion vaccine.
Доза вируса, достаточная для гибели всех зараженных эмбрионов кур в течение вторых суток после заражения, составляла 10-1000 ЭЛД50/0,2 мл.The virus dose sufficient for the death of all infected chicken embryos during the second day after infection was 10-1000 ELD 50 / 0.2 ml.
В результате проведенных исследований были определены оптимальные параметры культивирования исследуемого штамма. Штамм ВНИИЗЖ №125-ДЕП «Новосибирский» вируса ГП типа А, подтипа H5N1, репродуцируется в 10-12-суточных эмбрионов кур при температуре 37,0±0,5°С и влажности 50-70%. Заражающая доза в пределах от 101,0 до 104,0 ЭЛД50 вызывает специфическую гибель эмбрионов кур, ограниченную временным промежутком от 24 до 48 часов инкубирования. В течение указанного промежутка времени вирус накапливается в титрах от 9,2 до 10,2 lg ЭЛД50/мл.As a result of the studies, the optimal cultivation parameters of the studied strain were determined. Strain ARRIAH No. 125-DEP "Novosibirsk" of type A virus, subtype H5N1, is reproduced in 10-12-day-old chicken embryos at a temperature of 37.0 ± 0.5 ° C and a humidity of 50-70%. An infectious dose ranging from 10 1.0 to 10 4.0 ELD 50 causes a specific death of chicken embryos, limited to a time interval of 24 to 48 hours of incubation. During the specified period of time, the virus accumulates in titers from 9.2 to 10.2 lg ELD 50 / ml.
Пример 4Example 4
Гипериммунную сыворотку получали с использованием цыплят в возрасте 30-60 дней, у которых отсутствовали антитела к НА вируса гриппа. Для этого их иммунизировали штаммом «Новосибирский» внутримышечно в область грудной группы мышц или подкожно в область средней трети шеи дозой 0,5 мл двукратно с интервалом 21 сутки. Для иммунизации использовали инактивированный препарат с масляным адъювантом, прививная доза составляла не менее 7,0 lg ЭЛД50/0,5 мл препарата, определенная до инактивации. Затем не ранее чем через 28 суток после второй иммунизации цыплят обескровливали, получали сыворотку и определяли ее активность.Hyperimmune serum was obtained using chickens aged 30-60 days, which lacked antibodies to influenza HA. For this, they were immunized with the Novosibirsk strain intramuscularly into the region of the thoracic muscle group or subcutaneously into the region of the middle third of the neck with a dose of 0.5 ml twice with an interval of 21 days. For immunization, an inactivated preparation with an oil adjuvant was used; the vaccination dose was not less than 7.0 lg ELD 50 / 0.5 ml of the preparation, determined before inactivation. Then, not earlier than 28 days after the second immunization, the chickens were bled, serum was obtained, and its activity was determined.
Затем сыворотку дополняли стабилизирующими добавками, лиофильно высушивали и использовали в качестве достоверно положительного тест-препарата, специфического по отношению к штамму «Новосибирский» при проведении серологических исследований (РТГА, РДП, РН, ИФА и др.).Then the serum was supplemented with stabilizing additives, freeze-dried and used as a significantly positive test drug specific for the Novosibirsk strain during serological studies (RTGA, RDP, RN, ELISA, etc.).
Результаты исследований полученной сыворотки представлены в таблице 5.The research results of the obtained serum are presented in table 5.
Пример 5Example 5
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют 10-12-суточные эмбрионы SPF-кур. ЭЭЖ очищают от балластных примесей центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10-15 мин. После центрифугирования вирусный материал сливают в 10-20-литровые бутыли и подвергают инактивации. Перед инактивацией инфекционная активность вируса должна быть не ниже 9,0 lg ЭЛД50/мл, а НА-активность не ниже 1:64.For the manufacture of the vaccine, 10-12-day-old SPF-chicken embryos are used as a sensitive biological system. EEG is purified from ballast impurities by centrifugation at 1000 rpm for 10-15 minutes. After centrifugation, the viral material is poured into 10-20 liter bottles and subjected to inactivation. Before inactivation, the infectious activity of the virus should be at least 9.0 lg ELD 50 / ml, and HA activity at least 1:64.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), формальдегид или бета-пропиолактон (16).For inactivation of the virus, aminoethylethyleneimine (AEEI), formaldehyde or beta-propiolactone are used (16).
АЭЭИ добавляют в вирусосодержащую суспензию при перемешивании в виде 10%-ного раствора до конечной концентрации 0,1-0,2%, формальдегид - до конечной концентрации 1/1000, а бета-пропиолактон - до конечной концентрации 1/2000-1/4000. Инактивацию вируса проводят в течение 24 часов при температуре от 20 до 37°С. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением тиосульфата натрия в суспензию антигенного материала.AEEI is added to the virus-containing suspension with stirring in the form of a 10% solution to a final concentration of 0.1-0.2%, formaldehyde to a final concentration of 1/1000, and beta-propiolactone to a final concentration of 1 / 2000-1 / 4000 . Inactivation of the virus is carried out for 24 hours at a temperature of from 20 to 37 ° C. At the end of inactivation, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to a suspension of antigenic material.
После контроля на стерильность и авирулентность антиген подвергают повторной очистке от балластных примесей, пропуская его через промежуточную центрифугу ОТР-102К-01 при 15000-17000 об/мин со скоростью подачи антигена 40-50 л/час и фильтровальную установку.After checking for sterility and avirulence, the antigen is subjected to repeated purification from ballast impurities, passing it through an OTR-102K-01 intermediate centrifuge at 15000-17000 rpm with an antigen feed rate of 40-50 l / h and a filter unit.
Очищенный и авирулентный антигенный материал должен иметь НА-активность не менее 1:64 и рН в пределах 7,2-7,4.The purified and avirulent antigenic material must have a HA activity of at least 1:64 and a pH in the range of 7.2–7.4.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования очищенного и авирулентного антигенного материала с масляным адъювантом в соотношении, мас.%, 30:70-40:60.An emulsion vaccine is obtained by dispersing a purified and avirulent antigenic material with an oil adjuvant in the ratio, wt.%, 30: 70-40: 60.
Из адъювантов целесообразно использовать масляный адъювант на основе минерального масла «Marcol-52» и эмульгаторов - неионогенных поверхностно-активных веществ (алкилмодифицированный полиоксиалкилен-силоксановый сополимер (АПС) и ланолин) или коммерческий масляный адъювант марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция).Of the adjuvants, it is advisable to use an oil adjuvant based on Marcol-52 mineral oil and emulsifiers - nonionic surfactants (alkyl-modified polyoxyalkylene-siloxane copolymer (APS) and lanolin) or commercial oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70 manufactured by Seppic ( France).
Содержание антигенного материала и масляного адъюванта в прививной дозе вакцины в соотношении, мас.%, 30:70-40:60 является оптимальным, так как обеспечивает толерантную презентацию антигена в организме иммунизированной птицы.The content of antigenic material and oil adjuvant in the vaccine dose in the ratio, wt.%, 30: 70-40: 60 is optimal, as it provides a tolerant presentation of antigen in the body of an immunized bird.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета типа «вода в масле». Допускается в верхней части флакона наличие слоя масляного адъюванта. При интенсивном встряхивании однородность содержимого легко восстанавливается.The resulting vaccine is a homogeneous white emulsion of the type "water in oil". A layer of oil adjuvant is allowed at the top of the vial. With vigorous shaking, the uniformity of the contents is easily restored.
Полученную вакцину контролируют на соответствие показателям, установленным стандартом организации.The resulting vaccine is monitored for compliance with the indicators established by the standard of the organization.
Пример 6Example 6
В лабораторных условиях проведено определение иммуногенной активности производственной серии №1 инактивированной эмульсионной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский», приготовленной так, как описано в примере 5, и содержащей, мас.%:In laboratory conditions, the immunogenic activity of production series No. 1 of an inactivated emulsion vaccine against GP from the strain Novosibirsk was prepared, prepared as described in example 5 and containing, wt.%:
Для определения протективной активности вакцины использовали 5 цыплят в возрасте 50 дней. Каждого из них иммунизировали внутримышечно в область грудной группы мышц дозой 0,5 мл. Через 16 суток после иммунизации цыплят заражали живым вирусом штамма «Новосибирский» в дозе 6,0 lg ЭЛД50 внутримышечно.To determine the protective activity of the vaccine, 5 chickens at the age of 50 days were used. Each of them was immunized intramuscularly in the area of the thoracic muscle group with a dose of 0.5 ml. 16 days after immunization, the chickens were infected with the live virus of the Novosibirsk strain at a dose of 6.0 lg ELD 50 intramuscularly.
Совместно с опытной группой иммунизированных цыплят (группа №1) в одной клетке находилась контрольная группа (группа №2), состоявшая из невакцинированных и незараженных особей. Через 60 часов в клетку к указанным цыплятам были помещены цыплята еще одной контрольной группы - ее членов, не вакцинировав, заразили (группа №3). Результаты осмотров, проводившихся с интервалами 12 ч, представлены в таблице 6. Они позволяют сделать ряд выводов:Together with the experimental group of immunized chickens (group No. 1) in one cage there was a control group (group No. 2), consisting of unvaccinated and uninfected individuals. After 60 hours, the chickens of another control group were placed in the cage of these chickens - they infected the members without vaccination (group No. 3). The results of examinations conducted at intervals of 12 hours are presented in table 6. They allow a number of conclusions to be drawn:
1. Цыплята группы №3, невакцинированные и зараженные штаммом «Новосибирский», заболели и погибли после проявления клинических признаков и при обнаружении патологоанатомических признаков, характерных для тяжелой формы ГП.1. Chickens of group No. 3, unvaccinated and infected with the Novosibirsk strain, became ill and died after the onset of clinical signs and the detection of pathological signs characteristic of severe GP.
2. Судя по тому, что цыплята группы №2 с задержкой на 7-8 дней также заболели и погибли с клиническими и патологоанатомическими признаками, характерными для тяжелой формы ГП, можно полагать, что они заразились от цыплят группы №3.2. Judging by the fact that the chickens of group No. 2 with a delay of 7-8 days also fell ill and died with clinical and pathological signs characteristic of a severe form of GP, we can assume that they became infected from chickens of group No. 3.
3. Цыплята, иммунизированные испытуемой вакциной, имели абсолютную защиту против заражения высокопатогенным штаммом вируса гриппа типа А, подтипа H5N1.3. Chickens immunized with the test vaccine had absolute protection against infection with a highly pathogenic type A influenza virus strain, subtype H5N1.
Таким образом, инактивированная вакцина против ГП из штамма «Новосибирский» обладает высокой протективной активностью в отношении гомологичного штамма «Новосибирский» ГП типа А, подтипа H5N1.Thus, the inactivated vaccine against GP from the Novosibirsk strain has a high protective activity against the homologous Novosibirsk strain of the type A GP, subtype H5N1.
Для более полной характеристики иммуногенной активности инактивированной вакцины против ГП проводили исследование антигенной активности сывороток крови опытных групп цыплят. В таблице 7 представлены результаты определения антигенной активности сывороток крови методом РТГА.To more fully characterize the immunogenic activity of the inactivated vaccine against GP, a study was made of the antigenic activity of the blood serum of experimental groups of chickens. Table 7 presents the results of determining the antigenic activity of blood serum by rtga.
Из представленных в таблице 7 данных можно сделать вывод, что титр антител, равный 5,8 log2 у иммунизированных испытуемой вакциной цыплят (гр. №1) на момент заражения (16 сутки после иммунизации), был достаточным для обеспечения 100% иммунитета против заболевания ГП. Контрольное заражение вирулентным штаммом вируса ГП «Новосибирский» не вызвало подъема уровня специфических антител в крови опытных цыплят.From the data presented in table 7, we can conclude that the antibody titer of 5.8 log 2 in chickens immunized with the test vaccine (gr. No. 1) at the time of infection (16 days after immunization) was sufficient to provide 100% immunity against the disease GP. Control infection with the virulent strain of the virus of the state virus "Novosibirsk" did not cause an increase in the level of specific antibodies in the blood of experimental chickens.
Суммируя вышесказанное, можно сделать вывод, что инактивированная вакцина против ГП из штамма «Новосибирский» обладает высокой иммуногенной активностью.Summarizing the above, we can conclude that the inactivated vaccine against GP from the strain "Novosibirsk" has a high immunogenic activity.
Штамм ВНИИЗЖ №125-ДЕП «Новосибирский» вируса ГП, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной и протективной активностью, расширяет арсенал штаммов вируса ГП, пригодных для изготовления высокоиммуногенных и безвредных вакцинных препаратов.Strain ARRIAH No. 125-DEP "Novosibirsk" of the GP virus, obtained in accordance with the invention, has a high biological, antigenic and protective activity, expands the arsenal of strains of the GP virus, suitable for the manufacture of highly immunogenic and harmless vaccine preparations.
Пример 7Example 7
Проведены испытания антигенной активности инактивированной вакцины против ГП (серия №1), полученной так, как описано в примерах 5 и 6.Tests of the antigenic activity of the inactivated vaccine against GP (series No. 1), obtained as described in examples 5 and 6.
Цель исследований - изучить формирование иммунитета к ГП у цыплят разного возраста, привитых вакциной в объеме 0,25 мл, а также формирование иммунитета к ГП у птиц разного вида: утят, гусят и индюшат.The purpose of the research was to study the formation of immunity to HP in chickens of different ages vaccinated with a vaccine in the amount of 0.25 ml, as well as the formation of immunity to GP in birds of different types: ducklings, goslings and turkey poults.
Для изучения иммунитета у цыплят разного возраста были сформированы 4 опытные и 4 контрольные группы цыплят, свободных от антител к вирусу гриппа. Опытные и контрольные группы содержали по 5 цыплят одинакового возраста. Цыплят опытных групп иммунизировали инактивированной эмульсионной вакциной внутримышечно в область правой грудки в объеме 0,25 мл.To study the immunity in chickens of different ages, 4 experimental and 4 control groups of chickens free of antibodies to the influenza virus were formed. The experimental and control groups contained 5 chickens of the same age. The chickens of the experimental groups were immunized intramuscularly with an inactivated emulsion vaccine in the region of the right breast in a volume of 0.25 ml.
В пробах сыворотки крови, отобранной у цыплят в разные сроки, определяли активность антител к НА в РТГА.In samples of blood serum taken from chickens at different times, the activity of antibodies to HA in rtga was determined.
Представленные в таблице 8 результаты исследований свидетельствуют, что испытуемая вакцина против ГП эмульсионная инактивированная из штамма «Новосибирский» обладает высокой антигенной активностью и способна вызывать формирование антигемагглютинирующих антител у вакцинированных цыплят в возрасте от 1 до 30 суток при введении им вакцины в объеме 0,25 мл.The research results presented in table 8 indicate that the tested vaccine against GP emulsion inactivated from the Novosibirsk strain has high antigenic activity and can cause the formation of antihemagglutinating antibodies in vaccinated chickens aged 1 to 30 days when the vaccine is administered in a volume of 0.25 ml .
Для изучения формирования иммунитета у птиц разного вида были сформированы 3 опытных и 3 контрольных группы из утят, гусят и индюшат, свободных от антител к вирусу гриппа. Птиц опытных групп иммунизировали испытуемой вакциной в объеме 0,5 мл.To study the formation of immunity in birds of different species, 3 experimental and 3 control groups of ducklings, goslings and turkey poults free of antibodies to the influenza virus were formed. The birds of the experimental groups were immunized with the test vaccine in a volume of 0.5 ml.
В пробах сыворотки крови, отобранной у птиц разного вида в разные сроки, определяли активность антител к НА в РТГА.In samples of blood serum taken from birds of different species at different times, the activity of antibodies to HA in RTGA was determined.
Представленные в таблице 9 результаты исследований свидетельствуют, что испытуемая вакцина обладает высокой антигенной активностью и способна вызвать формирование антигемагглютинирующих антител у птиц разного вида при введении им вакцины в объеме 0,5 мл.The research results presented in table 9 indicate that the test vaccine has high antigenic activity and can cause the formation of antihemagglutinating antibodies in birds of various types when the vaccine is administered in a volume of 0.5 ml.
Пример 8Example 8
Проведены испытания антигенной активности инактивированной вакцины против ГП (серия №1), полученной так, как описано в примерах 5 и 6.Tests of the antigenic activity of the inactivated vaccine against GP (series No. 1), obtained as described in examples 5 and 6.
Антигенную активность вакцины изучали на цыплятах 45-суточного возраста, свободных от антител к вирусу ГП. Для этого было сформировано две группы цыплят по 5 голов в каждой, одна из которых была контрольной (непривитой). Цыплят опытной группы иммунизировали однократно внутримышечно в область правой грудки в объеме 0,5 мл инактивированной вакциной из штамма «Новосибирский». Цыплят содержали в изолированном боксе с созданием отрицательного атмосферного давления в клетке, автопоения и кормления.The antigenic activity of the vaccine was studied in 45-day old chickens free of antibodies to the GP virus. For this, two groups of chickens were formed, 5 animals each, one of which was a control (unvaccinated). The chickens of the experimental group were immunized once intramuscularly in the region of the right breast in a volume of 0.5 ml inactivated vaccine from the strain "Novosibirsk". The chickens were kept in an isolated box with the creation of negative atmospheric pressure in the cage, self-singing and feeding.
В пробах сыворотки крови, отобранной у цыплят в разные сроки, определяли активность антител к НА в РТГА.In samples of blood serum taken from chickens at different times, the activity of antibodies to HA in rtga was determined.
Представленные в таблице 10 результаты исследований свидетельствуют, что испытуемая вакцина обладает высокой антигенной активностью и способна вызывать формирование напряженного иммунитета против ГП типа A (H5N1).The research results presented in table 10 indicate that the test vaccine has high antigenic activity and can cause the formation of intense immunity against type A (H5N1) GP.
Пример 9Example 9
Проведены испытания антигенной активности вакцины против ГП инактивированной эмульсионной (серия №1), полученной так, как описано в примерах 5 и 6.Tests of the antigenic activity of the vaccine against GP inactivated emulsion (series No. 1), obtained as described in examples 5 and 6.
В опытах использовали свободных от антител к вирусу ГП цыплят в возрасте 38 суток породы «Хайсекс коричневый», полученных на птицефабрике «Кинешемская» Ивановской области.In experiments we used chickens free of antibodies to the HPV virus at the age of 38 days of the breed "Hayseks brown" obtained at the poultry farm "Kineshemskaya" Ivanovo region.
Для проведения опыта были сформированы две опытных и одна контрольная группы птиц. Схема опыта представлена в таблице 11.For the experiment, two experimental and one control group of birds were formed. The experimental design is presented in table 11.
Для постановки РТГА в качестве положительного контроля использовали сыворотку крови к вирусу ГП подтипа H5N9 («Институт зоопрофилактики», Венеция, Италия), в качестве отрицательного контроля - нормальную сыворотку крови кур (ФГУ «ВНИИЗЖ»), а в качестве антигена - инактивированный вирус ГП подтипа H5N1 штамма «Новосибирский». Количество испытуемых сывороток соответствует числу цыплят в опыте. Для постановки иммуноферментного анализа (ИФА) использовали коммерческий набор Avian Influenza Virus Antibody Test Kit (фирма «Synbiotics Co», Франция, cep. №OSUCAIV+45003, 16.11.2005 г.).To set up rtga, the serum to the H5N9 subtype HPV virus was used as a positive control (Institute of Zooprophylaxis, Venice, Italy), the normal blood serum of chickens (FGU ARRIAH) was used as the negative control, and the inactivated GP virus as antigen subtype of H5N1 strain "Novosibirsk". The number of test sera corresponds to the number of chickens in the experiment. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed using the commercial Avian Influenza Virus Antibody Test Kit (Synbiotics Co, France, cep. No. OSUCAIV + 45003, November 16, 2005).
Постановку ИФА проводили согласно методике, приложенной к набору. Положительным считали титр выше 273.The ELISA was performed according to the methodology attached to the kit. A titer higher than 273 was considered positive.
Представленные в таблице 12 результаты исследования сывороток в РТГА свидетельствуют, что уровень антител к вирусу ГП подтипа H5N1 через 28 суток после иммунизации составил 8,3 log2 для птиц, привитых в объеме 0,5 мл, и 8,4 log2 для птиц, иммунизированных вакциной в объеме 0,25 мл.The results of a study of sera in rtga presented in table 12 indicate that the level of antibodies to the Hepatitis virus virus subtype H5N1 28 days after immunization was 8.3 log 2 for birds vaccinated in a volume of 0.5 ml, and 8.4 log 2 for birds, immunized with a vaccine in a volume of 0.25 ml.
Представленные в таблице 13 результаты исследований в ИФА сывороток крови птиц, иммунизированных испытуемой вакциной, свидетельствуют, что препарат обладает высокой антигенной активностью.The results of studies in ELISA of blood serum of birds immunized with the test vaccine presented in Table 13 indicate that the drug has high antigenic activity.
Пример 10Example 10
Проведены испытания антигенной активности вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульсионной (серия №2 и серия №3), изготовленной так, как описано в примере 5, и содержащей, мас.%:Tests of antigenic activity of the vaccine against avian influenza virus inactivated emulsion (series No. 2 and series No. 3), manufactured as described in example 5, and containing, wt.%:
В опытах использовали свободных от антител к вирусу ГП цыплят в возрасте 40 суток.In experiments, chickens aged 40 days free of antibodies to the HPV virus were used.
Для проведения опыта было сформировано 4 опытных и одна контрольная группы цыплят. Схема опыта представлена в таблице 14.For the experiment, 4 experimental and one control group of chickens were formed. The experimental design is presented in table 14.
Для постановки РТГА в качестве положительного контроля использовали сыворотку крови к вирусу ГП подтипа H5N9 («Институт зоопрофилактики», Венеция, Италия), в качестве отрицательного контроля - нормальную сыворотку крови кур (ФГУ «ВНИИЗЖ»), а в качестве антигена - инактивированный вирус ГП подтипа H5N1 штамма «Новосибирский». Количество испытуемых сывороток соответствует числу цыплят, взятых в опыт.To set up rtga, the serum to the H5N9 subtype HPV virus was used as a positive control (Institute of Zooprophylaxis, Venice, Italy), the normal blood serum of chickens (FGU ARRIAH) was used as the negative control, and the inactivated GP virus as antigen subtype of H5N1 strain "Novosibirsk". The number of test sera corresponds to the number of chickens taken in the experiment.
Представленные в таблице 15 результаты исследования сывороток в РТГА свидетельствуют, что уровень титров антител зависел от срока, прошедшего после иммунизации: через 23 суток средние титры антител составляли от 7,9 до 8,2 log2, через 12 суток - от 4,9 до 7,0 log2 в зависимости от прививного объема вакцины.The results of a study of sera in rtga presented in table 15 indicate that the level of antibody titers depended on the period after immunization: after 23 days, the average titers of antibodies ranged from 7.9 to 8.2 log 2 , after 12 days from 4.9 to 7.0 log 2 depending on the vaccine vaccine volume.
Уровень титров антител у цыплят выше 4,0 log2 через 12 суток после иммунизации свидетельствует о высокой антигенной активности испытуемой вакцины.The level of antibody titers in chickens above 4.0
Пример 11Example 11
Проведены испытания протективной активности инактивированной вакцины против ГП (серия №1), полученной так, как описано в примерах 5 и 6.Tests of the protective activity of the inactivated vaccine against GP (series No. 1), obtained as described in examples 5 and 6.
Изучение протективной активности вакцины по отношению к гомологичному штамму «Новосибирский» вируса ГП проводили двумя методами: путем помещения в одну клетку с вакцинированными зараженными цыплятами цыплят-«контактников» и по выделению вируса в эмбрионах SPF-кур из клоакальных мазков опытных цыплят (как группы вакцинированных цыплят, так и группы цыплят-«контактников»). Для контроля выделения вируса от всех групп цыплят с временных интервалом в 12 часов проводили отбор клоакальных мазков. Для выделения вируса из каждой пробы использовали по 3 эмбриона кур.The study of the protective activity of the vaccine with respect to the homologous Novosibirsk strain of the HPV virus was carried out by two methods: by placing contact chickens in vaccinated infected chickens in the same cell and by isolating the virus in embryos of SPF hens from cloacal smears of experimental chickens (as a group of vaccinated chickens, as well as groups of chickens, “contactees”). To control the selection of the virus from all groups of chickens with a time interval of 12 hours, cloacal smears were selected. To isolate the virus from each sample, 3 chicken embryos were used.
Присутствие или отсутствие вируса в эмбрионах подтверждали исследованием аллантоисной жидкости в РГА. В таблице 16 представлены результаты выделения вируса из клоакальных мазков опытных цыплят, отобранных во временном интервале от 0 до 60 часов после контрольного заражения, и результаты РГА. Представленные в таблице 16 данные свидетельствуют:The presence or absence of the virus in the embryos was confirmed by the study of allantoic fluid in the RGA. Table 16 presents the results of virus isolation from cloacal smears of experimental chickens, selected in the time interval from 0 to 60 hours after control infection, and the results of the RGA. The data presented in table 16 indicate:
1) в течение 60 часов после заражения вирулентным штаммом «Новосибирский» вируса ГП подопытные цыплята (вакцинированные (гр. №1) и невакцинированные (гр. №2) вирус с фекалиями не выделяли;1) experimental chickens (vaccinated (gr. No. 1) and unvaccinated (gr. No. 2) virus with feces were not isolated within 60 hours after infection with the virulent strain "Novosibirsk" of the GP virus;
2) вакцинированные цыплята были защищены от заражения гомологичным штаммом вируса ГП.2) vaccinated chickens were protected from infection with a homologous strain of the GP virus.
В таблице 17 представлены результаты продолжения опыта по изучению протективной активности инактивированной вакцины против ГП. Через 60 часов после контрольного заражения вакцинированных цыплят (гр. №1) в этот же бокс поместили контрольную группу неиммунных цыплят (гр. №3), которую заразили штаммом «Новосибирский» вируса ГП. Для контроля выделения вируса от всех групп цыплят с временным интервалом в 12 часов проводили отбор клоакальных мазков. Для выделения вируса из каждой пробы использовали по 3 эмбриона кур.Table 17 presents the results of a continuation of the study of the protective activity of the inactivated vaccine against GP. 60 hours after the control infection of the vaccinated chickens (gr. No. 1), the control group of non-immune chickens (gr. No. 3), which was infected with the Novosibirsk strain of the GP virus, was placed in the same box. To control the selection of the virus from all groups of chickens with a time interval of 12 hours, cloacal smears were selected. To isolate the virus from each sample, 3 chicken embryos were used.
Согласно таблице 17 от 2-х неиммунных зараженных цыплят, начиная с 24 часов после заражения, происходило выделение вируса, что подтверждается специфической гибелью эмбрионов кур и положительным титром в РГА. Вирус от всех цыплят этой группы выделяли через 60 часов после заражения. При этом заболевание в этот промежуток времени проявилось ярко: два цыпленка болели с острым течением, а один погиб. Через 72 часа после заражения погибли оставшиеся два цыпленка. От цыплят-«контактников» (гр. №2) вирус выделяли от одного цыпленка через 36 и 48 часов после контрольного заражения. Через 84 часа у одного цыпленка обнаружили клинические признаки заболевания, через 120 часов все три цыпленка из этой группы погибли. Вакцинированные цыплята (гр. №1) не болели и не выделяли вирус.According to table 17, from 2 non-immune infected chickens, starting from 24 hours after infection, the virus was isolated, which is confirmed by the specific death of chicken embryos and a positive titer in the RGA. The virus was isolated from all chickens in this group 60 hours after infection. At the same time, the disease in this period of time manifested itself vividly: two chickens were sick with an acute course, and one died. 72 hours after infection, the remaining two chickens died. From chickens “contactees” (gr. No. 2), the virus was isolated from one chicken 36 and 48 hours after infection control. After 84 hours, one chicken showed clinical signs of the disease, after 120 hours, all three chickens from this group died. Vaccinated chickens (gr. No. 1) were not sick and did not secrete the virus.
Таким образом, результаты данного эксперимента показали высокую вирулентность штамма «Новосибирский» и способность передаваться алиментарным путем и вызывать гибель неиммунных цыплят. В то же время вакцинированные цыплята были полностью защищены от заражения вирулентным вирусом, что доказано отсутствием клинических признаков заболевания и отсутствием его репликации.Thus, the results of this experiment showed a high virulence of the Novosibirsk strain and the ability to be transmitted alimentarily and cause the death of non-immune chickens. At the same time, vaccinated chickens were completely protected from infection with a virulent virus, which was proved by the absence of clinical signs of the disease and the absence of its replication.
Приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:The above information indicates the fulfillment when using the invention of the following set of conditions:
- штамм «Новосибирский» вируса ГП, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;- strain "Novosibirsk" virus GP, embodying the invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью представленных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;- for the proposed invention in the form described in the independent claim, the possibility of its implementation using the means and methods presented in the application or known prior to the priority date is confirmed;
- штамм «Новосибирский», воплощающий настоящее изобретение, расширяет арсенал штаммов вируса ГП, пригодных для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ГП.- strain "Novosibirsk", embodying the present invention, expands the arsenal of strains of the virus of GP, suitable for monitoring the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of GP.
Источники информацииInformation sources
1. Гребенникова Т.В., Забережный А.Д. и Алипер Т.И. «Диагностика гриппа А с использованием молекулярных методов». Ветеринарная жизнь, 2006, №2 (50), 4.1. Grebennikova T.V., Zaberezhny A.D. and Alipper T.I. "Diagnosis of influenza A using molecular methods." Veterinary life, 2006, No. 2 (50), 4.
2. Перадзе Т.В., Фридман Э.А., Шилд Дж. Противогриппозные профилактические препараты. - М.: Медицина, 1986, 100-139.2. Peradze TV, Fridman EA, Shild J. Anti-influenza prophylactic drugs. - M .: Medicine, 1986, 100-139.
3. Ямникова С.С., Смоленский В.И., Власов Н.А. и др. Стратегия профилактики и борьбы с гриппом птиц. - Мат. II Междунар. вет. конгресса по птицеводству. - М.: 21-23 марта 2006 г. - С.38-41.3. Yamnikova S. S., Smolensky V. I., Vlasov N. A. et al. Prevention and control strategy for avian influenza. - Mat. II International vet. congress on poultry farming. - M .: March 21-23, 2006 - S.38-41.
4. Пат. Франции №2751225; А61К 48/00, 39/225, 39/17, 39/215; C12N 15/85; 23.01.1998 г.4. Pat. France No. 2751225; A61K 48/00, 39/225, 39/17, 39/215;
5. Пат. США №5916879, 514/44, 29.06.1999 г.5. Pat. US No. 5916879, 514/44, 06/29/1999
6. WO 03/086453; A61K 39/295, 39/145; 23.10.2003 г.6. WO 03/086453; A61K 39/295, 39/145; 10/23/2003
7. FAO Recommendations on the Prevention, Control and Eradication of Highly Pathogenic Avian Influenza (HPAI) in Asia. - September 2004, 1-59.7. FAO Recommendations on the Prevention, Control and Eradication of Highly Pathogenic Avian Influenza (HPAI) in Asia. - September 2004, 1-59.
8. Ronda E., Garcia-Gancedo A., Alonso M.L. et al. Вакцина против классической чумы птиц, изготовленная из клеток куриного эмбриона, инактивированная бега-пропиолактоном. Матер. IX Междунар. конгресса по микробиологии. Тез. докл., М., 1966. 465.8. Ronda E., Garcia-Gancedo A., Alonso M.L. et al. Classical bird plague vaccine made from chicken embryo cells inactivated by running propiolactone. Mater. IX International congress on microbiology. Thes. Dokl., M., 1966.465.
9. Narayan G., Rouse B.T., Lang G. A virus infection in turkeys. VI Artificial immunization against the Malignant virus strain Turkey/Ontario/7732/66/ - Gen. J. Сотр. Med., 1970. 34, 1, 72-79.9. Narayan G., Rouse B.T., Lang G. A virus infection in turkeys. VI Artificial immunization against the Malignant virus strain Turkey / Ontario / 7732/66 / - Gen. J. Sotr. Med., 1970. 34, 1, 72-79.
10. Rouse B.T., Lang G. and Narayan G. A new Influenza A virus Infection in Turkeys. VII. Comparative Immunology. - Canad. J. Comp. Med., 1971, 35, 44-51.10. Rouse B.T., Lang G. and Narayan G. A new Influenza A virus Infection in Turkeys. VII. Comparative Immunology. - Canad. J. Comp. Med., 1971, 35, 44-51.
11. Kiyoko Iwatsuki-Horimoto et. al. The index influenza A virus subtype H5N1 isolated from a human in 1997 differs in its receptor-binding properties from a virulent avian influenza virus. - J. of Gen. Virol., 2004, 85, 1001-1005.11. Kiyoko Iwatsuki-Horimoto et. al. The index influenza A virus subtype H5N1 isolated from a human in 1997 differs in its receptor-binding properties from a virulent avian influenza virus. - J. of Gen. Virol., 2004, 85, 1001-1005.
12. WO 03/086453; A61K 39/295, A61K 39/145; 23.10.2003 г.12. WO 03/086453; A61K 39/295, A61K 39/145; 10/23/2003
13. Swayne D.E., Beck J.R., Garcia М. et. al. Influents of virus strain and antigen mass on efficacy of H5 avian influenza inactivated vaccines. - Avian Pathol., 1999, 28, 245-255.13. Swayne D.E., Beck J.R., Garcia M. et. al. Influents of virus strain and antigen mass on efficacy of H5 avian influenza inactivated vaccines. - Avian Pathol., 1999, 28, 245-255.
14. Swayne D.E., Beck J.R., Perdue M.L. et. al. Efficacy of vaccines in Chickens against Highly Pathogenic Hong Kong H5N1 Avian Influenza. - Avian Dis., 2001, 45, N2, 355-365.14. Swayne D.E., Beck J.R., Perdue M.L. et. al. Efficacy of vaccines in Chickens against Highly Pathogenic Hong Kong H5N1 Avian Influenza. - Avian Dis., 2001, 45, N2, 355-365.
15. Website: www.intervet.com.15. Website: www.intervet.com.
16. Пат. РФ №594771, А61К 39/12, 07.07.1993 г.16. Pat. RF №594771, А61К 39/12, 07/07/1993
Результаты исследования сывороток крови кур, иммунизированных инактивированной вакциной против гриппа птиц H5N1 (ВНИИЗЖ), серия 1Table 1
The results of the study of blood serum of chickens immunized with inactivated vaccine against avian influenza H5N1 (ARRIAH),
Антигемагглютинирующая активность референтных сывороток к 15 Н типам вируса ГА и к вирусу Ньюкаслской болезни по отношению к штамму «Новосибирский»table 2
Antihemagglutinating activity of reference sera to 15 N types of HA virus and to Newcastle disease virus in relation to Novosibirsk strain
Постановка интравенозного индекса патогенности (IVPI) штамма ВГА H5N1 «Новосибирский» (Novosibirsk/duck/H5N1/1/2005)Table 3
Statement of the intravenous pathogenicity index (IVPI) of the H5N1 HVA strain Novosibirsk (Novosibirsk / duck / H5N1 / 1/2005)
Культуральная характеристика штамма «Новосибирский» в отношении эмбрионов курTable 4
The cultural characteristics of the strain "Novosibirsk" in relation to chicken embryos
Количественные показатели активности положительной к штамму «Новосибирский» сыворотки крови птицTable 5
Quantitative indicators of activity of bird serum positive for the Novosibirsk strain
Клиническое состояние цыплят после проведения контрольного заражения штаммом ГП H5N1 «Новосибирский»Table 6
Clinical state of chickens after infection with the H5N1 "Novosibirsk"
Титры специфических антител у цыплят, определенных с помощью РТГА, после проведения контрольного заражения штаммом «Новосибирский» вируса ГПTable 7
The titers of specific antibodies in chickens determined using rtga after control infection with the strain of the Novosibirsk virus of GP
Изучение формирования иммунитета у цыплят разного возраста к ГП, привитых инактивированной вакциной из штамма «Новосибирский» в объеме 0,25 млTable 8
The study of the formation of immunity in chickens of different ages to GP vaccinated with inactivated vaccine from the strain Novosibirsk in the amount of 0.25 ml
Изучение формирования иммунитета у птиц разного вида к ГП, иммунизированных инактивированной вакциной из штамма «Новосибирский» в объеме 0,5 млTable 9
The study of the formation of immunity in birds of different species to GP immunized with an inactivated vaccine from the strain Novosibirsk in a volume of 0.5 ml
Антигенная активность инактивированной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский»Table 10
Antigenic activity of inactivated vaccine against GP from the strain "Novosibirsk"
Схема постановки опыта по проверке антигенной активности инактивированной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский»Table 11
Scheme of setting up an experiment to test the antigenic activity of an inactivated vaccine against GP from the Novosibirsk strain
Результаты определения антигенной активности инактивированной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский» методом ИФАTable 13
The results of determining the antigenic activity of an inactivated vaccine against GP from the strain "Novosibirsk" by ELISA
Схема постановки опыта по проверке антигенной активности инактивированной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский»Table 14
Scheme of setting up an experiment to test the antigenic activity of an inactivated vaccine against GP from the Novosibirsk strain
Результаты определения антигенной активности инактивированной вакцины против ГП из штамма «Новосибирский»Table 15
The results of determining the antigenic activity of an inactivated vaccine against GP from the strain "Novosibirsk"
Результаты исследования выделения вируса из клоакальных мазков цыплят после проведения контрольного заражения штаммом «Новосибирский» вируса ГП (во временном промежутке от момента заражения до 60 часов после заражения)Table 16
The results of the study of the isolation of the virus from cloacal smears of chickens after the control of infection with the strain "Novosibirsk" virus GP (in the time interval from the moment of infection to 60 hours after infection)
Результаты исследования выделения вируса из клоакальных мазков цыплят после проведения контрольного заражения штаммом «Новосибирский» вируса ГП (во временном промежутке от 72 до 120 часов после заражения)Table 17
The results of the study of the selection of the virus from cloacal smears of chickens after the control of infection with the strain "Novosibirsk" virus GP (in the time interval from 72 to 120 hours after infection)
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006130206/13A RU2323740C1 (en) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006130206/13A RU2323740C1 (en) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2323740C1 true RU2323740C1 (en) | 2008-05-10 |
Family
ID=39799875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006130206/13A RU2323740C1 (en) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2323740C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2366709C1 (en) * | 2008-05-13 | 2009-09-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | AVIAN INFLUENZA STRAIN A/Goose/Krasnoozerskoye/627/05 SUBTYPE H5N1 FOR STUDY OF STRENGTH OF THERAPEUTIC AND PREVENTIVE INFLUENZA AGENTS |
| RU2647566C1 (en) * | 2017-06-06 | 2018-03-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 |
| RU2796987C1 (en) * | 2022-08-03 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Yamal strain of avian influenza virus of alphainfluenzavirus genus of influenza a virus subtype h5n1 species for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type a subtype h5 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2163637C1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-02-27 | Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН /учреждение/ | Strain of avian influenza a virus (h5n2) gkv n 2340 for influenza infection modelling |
| RU2300564C1 (en) * | 2005-09-19 | 2007-06-10 | Вирусологический центр НИИ Микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Avian influenza virus strain a/bak/russia/o5, subtype h5nq designated for development of agents and methods of biological protection |
-
2006
- 2006-08-21 RU RU2006130206/13A patent/RU2323740C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2163637C1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-02-27 | Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН /учреждение/ | Strain of avian influenza a virus (h5n2) gkv n 2340 for influenza infection modelling |
| RU2300564C1 (en) * | 2005-09-19 | 2007-06-10 | Вирусологический центр НИИ Микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Avian influenza virus strain a/bak/russia/o5, subtype h5nq designated for development of agents and methods of biological protection |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2366709C1 (en) * | 2008-05-13 | 2009-09-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | AVIAN INFLUENZA STRAIN A/Goose/Krasnoozerskoye/627/05 SUBTYPE H5N1 FOR STUDY OF STRENGTH OF THERAPEUTIC AND PREVENTIVE INFLUENZA AGENTS |
| RU2647566C1 (en) * | 2017-06-06 | 2018-03-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain a/goose/kalmykia/813/16 h5n8 virus avicum bird influenza virus avicum influenza type a and substitute h5 for control of antigen and immunizing activity of vaccine against avian influenza and for the manufacture of biopreparations for diagnostics and specific prevention of influenza birds of type a of substitute h5 |
| RU2796987C1 (en) * | 2022-08-03 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Yamal strain of avian influenza virus of alphainfluenzavirus genus of influenza a virus subtype h5n1 species for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type a subtype h5 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| De Jong et al. | Influenza virus: a master of metamorphosis | |
| RU2318871C1 (en) | Strain of influenza virus gkv 2389 for production of living intranasal and inactivated influenza vaccine | |
| CN101448520A (en) | Avian influenza viruses, vaccines, compositions, formulations, and methods | |
| CN102257135A (en) | Production of viral vaccine | |
| CN107949636A (en) | Live attenuated viruses and methods of production and use | |
| CN104232594A (en) | Recombinant homologous avian H1N1 influenza virus inactivated vaccine strain (JS40/PR8) as well as preparation method and application of inactivated vaccine strain | |
| CN103328629A (en) | Novel vaccines against the a/H1N1 pandemic flu virus | |
| MX2014001754A (en) | VACCINES AGAINST INFLUENZA H5. | |
| Ma | Orthomyxoviridae | |
| Ibrahim et al. | A single dose of inactivated oil-emulsion bivalent H5N8/H5N1 vaccine protects chickens against the lethal challenge of both highly pathogenic avian influenza viruses | |
| RU2734118C2 (en) | Recombinant virus-like particles (vlp) using bovine immunodeficiency virus group-specific antigen (gag) protein | |
| Radwan et al. | Separation and purification of chicken IgY with its field efficacy in controlling avian influenza in Muscovy ducks | |
| RU2736786C1 (en) | Strain "a/chicken/primorsk/419/2018 h9n2" of avian influenza virus of genus alphainfluenzavirus type influenza a virus subtype h9 for controlling antigenic and immunogenic activity of vaccines for avian influenza and for making biopreparations for diagnosis and specific prevention of avian influenza type a subtype h9 | |
| CN103468647A (en) | Swine flu H1N1 and H3N2 subtype bivalent inactivated vaccine | |
| RU2323740C1 (en) | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE | |
| CN104073470A (en) | Spinner-flask culture method for H9N2 subtype of avian influenza virus | |
| CN117224667B (en) | A kind of avian influenza, Newcastle disease virus vaccine composition and its application | |
| US11547754B2 (en) | H5 avian influenza vaccine strain which differentiates infected from vaccinated animals, preparation method therefor, and application | |
| RU2323741C2 (en) | Anti- bird flue inactivated emulsion vaccine | |
| Wen et al. | Efficacy of a high-growth reassortant H1N1 influenza virus vaccine against the classical swine H1N1 subtype influenza virus in mice and pigs | |
| CN108300702B (en) | Chicken-derived H9N2 avian influenza virus cold-adapted strain screening method and application thereof | |
| RU2736788C1 (en) | Strain a/chiken/kostroma/3175/17 h5n2 of avian influenza virus subtype h5n2 infuenza a virus of genus alphainfluenzavirus to control antigenic and immunogenic activity of avian influenza vaccines and for making antigen-containing diagnosticums | |
| CN108640981A (en) | H7N9 subtype influenza virus recombinant protein and viral vaccine | |
| Xu et al. | Hemagglutinin amino acids related to receptor specificity could affect the protection efficacy of H5N1 and H7N9 avian influenza virus vaccines in mice | |
| CN102747045B (en) | Swine influenza virus H1N1 SIVTJ inactivated vaccine and preparation method thereof |