RU2302867C1 - Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения - Google Patents
Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2302867C1 RU2302867C1 RU2006122060/15A RU2006122060A RU2302867C1 RU 2302867 C1 RU2302867 C1 RU 2302867C1 RU 2006122060/15 A RU2006122060/15 A RU 2006122060/15A RU 2006122060 A RU2006122060 A RU 2006122060A RU 2302867 C1 RU2302867 C1 RU 2302867C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- temperature
- bladder
- solution
- months
- drug
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 39
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 16
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 8
- 244000309466 calf Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 13
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009434 installation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 9
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 4
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 abstract description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 abstract 1
- 239000013029 homogenous suspension Substances 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 abstract 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 58
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 35
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 7
- 206010036940 Prostatic adenoma Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003202 urodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010024421 Libido increased Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 206010046555 Urinary retention Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000037020 contractile activity Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 206010013990 dysuria Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 231100000064 subacute toxicity study Toxicity 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к выделению биологически активного вещества из мочевого пузыря животных и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее тонус мочевого пузыря. Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах 74 до 394 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из мочевого пузыря телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка. Предлагаемый способ получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, заключается в том, что мочевой пузырь телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°C ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2. Изобретение обеспечивает технологию выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход; а также то, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья по молекулярной массе входящих в него пептидных компонентов, по его нетоксичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей. 2 н.п. ф-лы, 2 ил, 2 табл.
Description
Группа изобретений относится к лекарственному средству и способу его получения из органов животных, в частности к выделению биологически активного вещества из мочевого пузыря и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее тонус мочевого пузыря.
Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из животного сырья (а.с. SU №1218521, 1994; а.с. SU №1227198, 1986; патент РФ 1298879, 1993; патент РФ №1448443, 1994; а.с. SU №1522486, 1993; патент РФ №2075944, 1997; патент РФ №2161501, 2001; патент РФ №1522486, 1993; патентов №4341765 патент GB 1161896, 1969; патент FR 2583982, 1987).
Известно средство, обладающее тонизирующим действием на гладкую мускулатуру вен, мочевого пузыря и предстательной железы (патент РФ №2058780, 1996, А61К 35/38), являющееся наиболее близким аналогом для предлагаемого средства, нормализующего тонус мочевого пузыря.
Известны способы получения комплексных пептидных препаратов, обладающих тканеспецифическим действием (патент РФ №944191, 1994; патент РФ №1122606, 1993; патент РФ №1417244, 1993; патент РФ №2104702, 1998).
Известен способ получения указанных препаратов (Морозов В.Г, Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы. СПб.:, Наука, 1996. 74 с.), включающий получение биологически активного вещества из органов и тканей животных, путем экстракции 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка и обработкой надосадочной жидкости ацетоном, являющийся наиболее близким аналогом для предлагаемого способа получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря.
К недостаткам указанного способа следует отнести извлечение в процессе экстракции из ткани большого количества (более 70%) веществ непептидной природы - балластных компонентов, которые, являясь примесями, не определяют биологическую активность выделенного активного вещества, а также его низкий выход.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача разработки способа получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, в виде лекарственной формы для парентерального введения, выделенного из мочевого пузыря телят не старше 12-месячного возраста или свиней, техническим результатом которого является оптимальная технология выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да и получения водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход.
Экспериментальная проверка показала, что предлагаемый способ обеспечивает фармацевтическую стабильность, максимальную биологическую ценность и терапевтическую эффективность средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, что подтверждено результатами экспериментов, приводимыми в примерах, иллюстрирующих изобретение.
Другим аспектом изобретения является средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, в виде лекарственной формы для парентерального введения, представляющее собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, технический результат которого заключается в том, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе (от 500 до 1500 Да) входящих в него пептидных компонентов (патенты РФ №№1298879, 2104702, 2163129), а также по его нетоксичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей.
В ходе исследований в экспериментах на животных выявлено, что полученный водный раствор средства в концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл является терапевтически эффективной дозой, что позволяет считать показанным использование средства при различных видах патологии мочевого пузыря. Это подтверждается приводимыми ниже примерами.
В процессе проведения исследований была установлена важность следующих стадий способа получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения (далее - препарат):
- повторное осаждение образовавшегося гомогенизированного осадка двукратными объемами ацетона не менее двух раз и последующее промывание на нутч-фильтре двукратными объемами ацетона до получения осадка светло-серого цвета, что свидетельствует о полной очистке осадка от примесей, таких как липидные, белковые, фосфолипидные и другие;
- получение водного раствора экстракта в концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл; его центрифугирование, фильтрование, с последующей ультрафильтрационной очисткой на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, и добавлении в ультрафильтрат гликокола до конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6;
- стерилизующая фильтрация, ампулирование и автоклавирование в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2, что обеспечивает стабильность препарата при сохранении терапевтической эффективности.
Режим и время автоклавирования были установлены экспериментально.
Указанный технический результат достигается тем, что средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из мочевого пузыря телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.
Указанный технический результат достигается также тем, что предлагаемый способ получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, характеризуется тем, что мочевой пузырь телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°C, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°C, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2.
Сущность изобретения поясняется фигурами и таблицами.
На фиг.1 изображено влияние препарата на развитие эксплантатов стенки мочевого пузыря.
На фиг.2 изображено влияние препарата на напряжение полоски мочевого пузыря крысы in vitro.
В таблице 1 показано влияние препарата на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.
В таблице 2 показано влияние препарата на состояние уродинамики у больных с аденомой предстательной железы
Изобретение иллюстрируется следующими примерами: пример 1 - способ получения препарата; примеры 2 и 3, подтверждающие биологическую активность препарата; пример 4 - изучение токсичности препарата; пример 5, подтверждающий терапевтическую эффективность препарата, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.
Пример 1. Способ получения препарата
В качестве сырья используется мочевой пузырь телят (не старше 12-месячного возраста) или свиней, который замораживают при температуре не менее минус 40°С и выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев.
В реактор для экстракции перекачивают 500 л 3%-ного раствора уксусной кислоты и охлаждают до температуры (20±5)°С, затем в реактор при постоянном перемешивании загружают 100 кг измельченного до получения гомогенной массы сырья. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры плюс 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч.
Экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием при (5000±500) об/мин в течение 1 ч. К экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5. Выдерживают при температуре плюс 3±5°С в течение 4 ч. Образовавшийся осадок гомогенизируют и повторно осаждают ацетоном не менее двух раз. Затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета. Промытый осадок протирают через металлическое сито, выкладывают тонким слоем в эмалированные кюветы, закрывают двойным слоем ткани хлопчатобумажной и высушивают при периодическом помешивании в вытяжном шкафу до полного удаления запаха ацетона.
Выход активного вещества (порошка биологически активного пептидного комплекса, выделенного из мочевого пузыря) составляет 40 г на 1 кг исходного сырья.
Полученный порошок растворяют в дистиллированной воде при постоянном перемешивании при комнатной температуре в течение 40 мин до концентрации пептидов 2,5÷2,9 мг/мл. Полученный раствор центрифугируют при (3000±200) об/мин в течение (20±5)мин. Центрифугат фильтруют через фильтр типа АР-15 или аналогичный.
Фильтрат подвергают ультрафильтрационной очистке на установке для ультрафильтрации при противодавлении не более 1,0 кгс/см2, через материалы с задерживающей способностью 15000 Да.
В ультрафильтрат добавляют расчетную навеску гликокола, до его конечной концентрации 10±20 мг/мл, перемешивают до полного растворения гликокола при сохранении рН 5,6÷6,0.
Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, которую проводят под давлением, не превышающим 2,0, кгс/см2.
Полученный раствор разливают в ампулы по 2,0 мл и автоклавируют, причем ампулы с препаратом подвергают стерилизации в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении не более 1,1 кгс/см2.
Препарат представляет собой бесцветный, прозрачный раствор и содержит пептидный комплекс с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.
Тестирование на отсутствие высокомолекулярных белковых компонентов осуществляют путем добавления к содержимому 1 ампулы препарата 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Прозрачность раствора свидетельствует об отсутствии высокомолекулярных белковых компонентов.
Для определения в препарате пептидных связей к его раствору добавляют биуретовый реактив. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в препарате пептидных связях.
С целью определения в препарате полипептидов и их фракций используют методы ультрафиолетовой спектрофотометрии, гель-хроматографии, масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.
Ультрафиолетовый спектр раствора препарата снимают в области длин волн от 250 до 350 нм: максимум поглощения отмечается при длине волны 270±5 нм.
Молекулярную массу полипептидов, входящих в препарат, определяют следующими методами:
методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6×60 см используют Peptide Molecuar Weight Kit MS III («Serva», Германия);
методом масс-спектрометрии. Спектры получают на времяпролетном масс-спектрометре Voyager DE Biospectrometry с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF) при относительной интенсивности азотного лазера 2300-2400, ускоряющем напряжении 25000 В, времени задержки 90 нс и давлении в вакуумной камере 2,6·106 Торр;
методом электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле в сравнении со стандартным набором маркерных белков.
Перечисленными выше методами установлено, что в состав препарата входят полипептиды с молекулярной массой от 74 до 394 Да.
С помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2×62 мм), установлено, что в состав препарата входят преимущественно низкомолекулярные фракции - от 70 до 90%, а высокомолекулярные компоненты в препарате отсутствуют.
Пирогенность препарата определяют на кроликах общепринятым методом (ГФ XI, вып.2, с.183) при тест-дозе препарата 0,25 мг на 1 кг массы животного в 1,0 мл изотонического 0,9%-ного раствора натрия хлорида для инъекций. Показано, что препарат является апирогенным.
Таким образом, вышеизложенным способом получен препарат - лекарственная форма для парентерального введения, представляющая собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл.
Пример 2. Влияние препарата на развитие эксплантатов стенки мочевого пузыря
Эксперименты проведены на 38 фрагментах стенки мочевого пузыря крыс линии «Wistar» с массой тела 150÷200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35%-ного раствора Игла, 25%-ной фетальной сыворотки теленка, 35%-ного раствора Хенкса, 5%-ного куриного эмбрионального экстракта; в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты стенки мочевого пузыря помещали в эту среду и культивировали на коллагеновой подложке в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли препарат в концентрациях 1, 10, 50, 100, 200 и 400 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента стенки мочевого пузыря. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.
На фиг.1 показано влияние препарата на развитие эксплантатов стенки мочевого пузыря.
Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-и сутки культивирования при концентрации препарата 100 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 34% по сравнению с контрольными значениями ИП. При исследовании эксплантатов стенки мочевого пузыря на более длительных сроках культивирования (7 дней) было выявлено аналогичное стимулирующее действие препарата в той же концентрации.
Таким образом, в отношении ткани стенки мочевого пузыря препарат оказывал тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.
Пример 3. Влияние препарата на гладкомышечные клетки детрузора мочевого пузыря in vitro
Эксперименты проводили на полоске ткани мочевого пузыря крыс линии «Wistar», установленной между фиксированным стержнем и датчиком силы, помещенной в специальную ванночку с раствором Кребса. В раствор добавляли препарат в концентрациях 8, 16 и 32 мкг/мл, затем регистрировали авторитмическую сократительную активность полоски мочевого пузыря.
Установлено, что под действием препарата происходит дозозависимое изменение фазно-тонических сокращений гладкомышечных клеток.
На фиг.2 показано влияние препарата на напряжение полоски мочевого пузыря крысы in vitro.
Максимальное напряжение, развиваемое мышцей в ответ на действие препарата, также росло по мере увеличения его концентрации в перфузате. Так, если в контрольном растворе максимальное напряжение равнялось 92,8 г/см2, то при действии наименьшей из исследуемых концентраций препарата значение показателя возрастало до 172,3 г/см2 (фиг.2).
Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о стимулирующем действии препарата на тонус гладких мышц мочевого пузыря, при этом наибольший эффект препарат оказывает в дозировке 32 мкг/мл. В дальнейших экспериментах эта концентрация была принята за терапевтически эффективную дозу - 5 мг для человека.
Пример 4. Изучение токсичности препарата
Общетоксическое действие препарата исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении препарата.
Исследование по изучению острой токсичности проведено на 78 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 19÷23 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 35 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9%-ного раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9%-ный раствор NaCl.
Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 68 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 170÷190 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9%-ного раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9%-ный раствор NaCl. До введения препарата на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.
Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев, исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата на 84 морских свинках-самцах массой 250÷280 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно препарат в течение 6 месяцев в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9%-ного раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9%-ный раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинномозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.
При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого препарата животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.
Изучение подострой и хронической токсичности препарата свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 300÷3000 раз. При исследовании влияния препарата на морфологический состав и биохимические показатели периферической крови морских свинок через 3 и 6 месяцев после начала введения препарата достоверного изменения показателей не выявлено (таблица 1).
При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.
Следовательно, препарат, полученный предлагаемым способом, при длительном введении животным не обладает токсическими свойствами, препятствующими дальнейшему его применению в качестве лекарственного средства, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.
Пример 5. Эффективность применения препарата у больных с аденомой предстательной железы
Исследование проведено с участием 33 больных в возрасте 51÷67 лет с аденомой предстательной железы I-II стадии. Характерными симптомами патологического состояния у больных с аденомой предстательной железы были упорная дизурия, не поддающаяся общепринятым методам лечения, ослабленная струя мочи, снижение способности к совершению половых актов. Все больные ранее получали общепринятые лекарственные средства симптоматического и патогенетического действия, при применении которых отмечался кратковременный терапевтический эффект, требующий увеличения дозы препаратов на курс лечения и продолжительного их приема.
19 Пациентам, которые составили основную группу, вводили исследуемый препарат внутримышечно в дозе 5 мг в 2,0 мл физиологического раствора однократно ежедневно в течение 10 дней.
Контрольная группа включала 14 пациентов, получавших общепринятое лечение.
Эффективность лечения оценивали на основании динамики жалоб больных, лабораторного исследования крови и мочи. Степень брюшного давления при мочеиспускании и характер струи мочи выражали в баллах от 1 до 5 (1 - норма, 5 - наибольшие изменения показателя). Определяли максимальную, среднюю скорость и время мочеиспускания, время достижения максимальной скорости мочевыделения, оценивали флуорометрический индекс.
Динамика результатов исследования у больных с аденомой предстательной железы до и после окончания курса лечения препаратом представлена в таблице 2.
Состояние больных с аденомой предстательной железы после лечения препаратом характеризовалось достоверным улучшением субъективных и объективных показателей уродинамики по сравнению с показателями у пациентов, получавших лечение общепринятыми средствами (таблица 2). У 37,3% больных отмечалось усиление либидо.
Таким образом, результаты проведенного клинического исследования свидетельствуют о лечебной эффективности препарата в дозе 5 мг и целесообразности его применения в комплексном лечении дизурических расстройств различного генеза, обсуловленных нарушением тонуса мочевого пузыря, в дозе 5 мг (2,5 мг/мл) внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.
| Таблица 1 | ||||
| Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения | ||||
| Показатель | Введение препарата (10 мг/кг) | |||
| 3 месяца | 6 месяцев | |||
| Контроль (n=21) | Препарат (n=21) | Контроль (n=21) | Препарат (n=21) | |
| Эритроциты, ×1012/л | 5,2±0,8 | 5,2±0,4 | 5,3±0,7 | 5,4±0,2 |
| Гемоглобин, г/л | 14,3±1,4 | 14,3±1,0 | 14.2±1,1 | 14,4±1,3 |
| Ретикулоциты, % | 1,1 ±0,06 | 1,3±0,05 | 1,2±0,03 | 1,1 ±0,5 |
| Тромбоциты, ×109л | 145,3±5,3 | 143,4±6,3 | 144,2±7,1 | 144.9±5,9 |
| Лейкоциты, ×109/л | 9,6±0,1 | 9,7±0,3 | 9,8±0,1 | 9,5±0,3 |
| Нейтрофилы палочкоядерные, % | 0,32±0,01 | 0,34±0,05 | 0,33±0,04 | 0,34±0,02 |
| Нейтрофилы сегментоядерные, % | 43,2±2,3 | 44,2±2,1 | 43,6±1,7 | 45,2±2,5 |
| Эозинофилы, % | 0,72±0,03 | 0,70±0,04 | 0,68±0,05 | 0,71 ±0,04 |
| Базофилы, % | 0,67±0,07 | 0,69±0,03 | 0,71 ±0,02 | 0,72±0,06 |
| Моноциты, % | 2,5±0,03 | 2,4±0,06 | 2,3±0,04 | 2,5±0,02 |
| Лимфоциты, % | 48,2±1,8 | 50,4±1,5 | 52,5±2,1 | 48,7±1,7 |
| СОЭ, мм/ч | 1,77±0,06 | 1,82±0,07 | 1,93±0,06 | 1,88±0,04 |
| Резистентность эритроцитов, % NaCl | ||||
| - максимальная | 0,41±0,03 | 0,40±0,03 | 0,43±0,04 | 0,41 ±0,03 |
| -минимальная | 0,31±0,02 | 0,33±0,03 | 0,32±0,03 | 0,30±0,05 |
| Общий белок в сыворотке крови, г/л | 72,4±1,9 | 74,1±2,5 | 73,7±2,8 | 72,4±2,2 |
| Натрий в сыворотке крови, ммоль/л | 151,5±5,8 | 153,2±5,9 | 152,6±6,5 | 153,2±7,1 |
| Калий в сыворотке крови, ммоль/л | 5,2±1,8 | 5,2±2,3 | 5,3±2,1 | 5,1±2,6 |
| Таблица 2 | |||
| Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения | |||
| Показатель | До лечения | После лечения с применением общепринятых средств | После лечения с применением исследуемого препарата |
| Время задержки мочеиспускания | 4,6±0,3 | 3,8±0,4 | 2,5±0,1*# |
| Количество мочеиспусканий - в дневное время | 8,4±0,5 | 7,2±0,3 | 6,3±0,Г |
| - в ночное время | 4,5±0,1 | 3,6±0,2 | 1,7±0,1*# |
| Степень брюшного давления (баллы) | 3,2 | 3,0 | 2,1* |
| Характер струи мочи (баллы) | 3,3 | 2,9 | 2,1* |
| Средняя скорость мочеиспускания (мл/с) | 11,3±1,2 | 12,8±1,9 | 17,5±1,6*# |
| Максимальная скорость мочеиспускания (мл/с) | 16,1±2,3 | 18,2±2,6 | 20,5±3,1 |
| Время достижения максимальной скорости мочеиспускания (мл/с) | 6,6±0,2 | 5,7±0,3 | 4,5±0,1* |
| * - Р<0,05 по сравнению с показателем до лечения; | |||
| # - Р<0,05 по сравнению с показателем у пациентов контрольной группы. | |||
Claims (2)
1. Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 74 до 394 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из мочевого пузыря телят не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.
2. Способ получения средства, нормализующего тонус мочевого пузыря, характеризующийся тем, что мочевой пузырь телят не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее двух раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см2 через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см2, разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см2.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122060/15A RU2302867C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения |
| EA200700622A EA010722B1 (ru) | 2006-06-22 | 2007-04-11 | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006122060/15A RU2302867C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2302867C1 true RU2302867C1 (ru) | 2007-07-20 |
Family
ID=38431012
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006122060/15A RU2302867C1 (ru) | 2006-06-22 | 2006-06-22 | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA010722B1 (ru) |
| RU (1) | RU2302867C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2827697C1 (ru) * | 2023-09-15 | 2024-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Пептидпро" | Фармацевтическая композиция для лечения гиперактивного мочевого пузыря у пациентов и способ ее применения |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4125024A1 (de) * | 1991-07-29 | 1993-02-04 | Steigerwald Arzneimittelwerk | Arzneimittel auf pflanzlicher basis zur tonuserhoehung und zur tonusmodulierung der glatt muskulaeren organe |
| RU2104702C1 (ru) * | 1996-10-16 | 1998-02-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Клиника Института биорегуляции и геронтологии" | Способ получения из животного сырья комплекса биологически активных полипептидов, нормализующих функции головного мозга, фармакологическая композиция и ее применение |
-
2006
- 2006-06-22 RU RU2006122060/15A patent/RU2302867C1/ru active
-
2007
- 2007-04-11 EA EA200700622A patent/EA010722B1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МОРОЗОВ В.Г. и др. «Пептидные биорегуляторы», СПб, Наука, 1996, С.74. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2827697C1 (ru) * | 2023-09-15 | 2024-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Пептидпро" | Фармацевтическая композиция для лечения гиперактивного мочевого пузыря у пациентов и способ ее применения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA010722B1 (ru) | 2008-10-30 |
| EA200700622A1 (ru) | 2007-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2302874C1 (ru) | Средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, и способ его получения | |
| RU2302867C1 (ru) | Средство, нормализующее тонус мочевого пузыря, и способ его получения | |
| RU2301071C1 (ru) | Гепатопротекторное средство и способ его получения | |
| UA91135C2 (ru) | Пептид, имеющий иммуногеропротекторное действие, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения | |
| RU2301678C1 (ru) | Пептид, стимулирующий регенерацию нейронов центральной нервной системы, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения | |
| RU2302875C1 (ru) | Средство, нормализующее функции щитовидной железы, и способ его получения | |
| RU2303454C1 (ru) | Средство, нормализующее репродуктивную функцию у женщин, и способ его получения | |
| CN114209716B (zh) | 一种改性溶酶体作为制备治疗蛋白错误折叠或加工类疾病药物的应用 | |
| RU2302871C1 (ru) | Средство, нормализующее функции головного мозга, и способ его получения | |
| RU2302868C1 (ru) | Средство, нормализующее функции почек, и способ его получения | |
| CN115353550A (zh) | 一种靶向血管细胞黏附分子-1的自组装硒肽、硒肽纳米药物及其制备方法和应用 | |
| RU2301072C1 (ru) | Средство, нормализующее функции кровеносных сосудов, и способ его получения | |
| RU2302872C1 (ru) | Средство, нормализующее функции хрящевой ткани, и способ его получения | |
| RU2302870C1 (ru) | Средство, обладающее геропротекторной активностью, и способ его получения | |
| RU2152219C1 (ru) | Пептиды, обладающие иммуностимулирующей активностью, способ их получения, лекарственный препарат на их основе спленопид и его применение | |
| NO138852B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av et nytt hormon, litoralon | |
| US7101854B2 (en) | Tetrapeptide stimulating the functional activity of hepatocytes, pharmacological substance on its basis and the method of its application | |
| RU2801151C1 (ru) | Способ получения биологически активного белково-полипептидного гидролизата из тканей мозга | |
| RU2797514C1 (ru) | Фармакологическая субстанция мембранотропных гомеостатических тканеспецифических биорегуляторов, выделенных из различных тканей и биологических жидкостей животных | |
| CN1042493C (zh) | 人胎胸腺素的制备方法 | |
| RU2033796C1 (ru) | Пептидсодержащая фракция из селезенки млекопитающих, обладающая иммуностимулирующей активностью и способ ее получения | |
| RU2341272C1 (ru) | Средство для неспецифической иммунотерапии | |
| WO2010138024A2 (ru) | Средство для защиты клеток мозга | |
| AU785360B2 (en) | New class of bioactive glycoprotein | |
| RU2134581C1 (ru) | Средство для лечения облученных млекопитающих |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20180727 Effective date: 20180727 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20180727 Effective date: 20191230 |