[go: up one dir, main page]

RU2299101C1 - Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land - Google Patents

Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land Download PDF

Info

Publication number
RU2299101C1
RU2299101C1 RU2005135260/13A RU2005135260A RU2299101C1 RU 2299101 C1 RU2299101 C1 RU 2299101C1 RU 2005135260/13 A RU2005135260/13 A RU 2005135260/13A RU 2005135260 A RU2005135260 A RU 2005135260A RU 2299101 C1 RU2299101 C1 RU 2299101C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
oil
arthrobacter
mia
strain
medium
Prior art date
Application number
RU2005135260/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Сергей Александрович Власов (RU)
Сергей Александрович Власов
Тать на Константиновна Крашенинникова (RU)
Татьяна Константиновна Крашенинникова
Наталь Валентиновна Краснопевцева (RU)
Наталья Валентиновна Краснопевцева
Ирина В чеславна Кузнецова (RU)
Ирина Вячеславна Кузнецова
на Галина Леонидовна Смол (RU)
Галина Леонидовна Смоляная
Алексей Николаевич Синицын (RU)
Алексей Николаевич Синицын
Анатолий Дмитриевич Украинцев (RU)
Анатолий Дмитриевич Украинцев
Original Assignee
ОАО "Биохиммаш"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ОАО "Биохиммаш" filed Critical ОАО "Биохиммаш"
Priority to RU2005135260/13A priority Critical patent/RU2299101C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2299101C1 publication Critical patent/RU2299101C1/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology and oil pollution elimination.
SUBSTANCE: biological preparation contains 40-60% of association of bacterium strains: Arthrobacter sp. MIA-89, Arthrobacter sp. MIA-74, and Arthrobacter sp. OS-1 taken in proportion 2:2:1; 2-4% of polyglucin (stabilizing component); and water to 100%.
EFFECT: increased utilization rate of crude oil and petroleum products at high concentrations thereof.
3 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается биопрепарата, включающего ассоциацию штаммов микроорганизмов, разрушающих нефть и нефтепродукты, и который может быть использован, например, для очистки загрязненных поверхностей.The invention relates to the microbiological industry and relates to a biological product, including the association of strains of microorganisms that destroy oil and oil products, and which can be used, for example, for cleaning contaminated surfaces.

Известна смесь специально селекционированных штаммов бактерий Rhodococcus erythropolis ВКПМ В-3078 (36а-1), Rhodococcus luteus ВКПМ В-3077(25) и Micrococcus flavus ВКПМ В-3079 (53) (ав.св. СССР №1493666, C 02 F 3/34, 1989), используемый для деструкции нефти и нефтепродуктов.A known mixture of specially selected strains of bacteria Rhodococcus erythropolis VKPM B-3078 (36a-1), Rhodococcus luteus VKPM B-3077 (25) and Micrococcus flavus VKPM B-3079 (53) (St. USSR No. 1493666, C 02 F 3 / 34, 1989), used for the destruction of oil and oil products.

Использование указанных культур микроорганизмов возможно только в аэротенках. Выращивание смеси культур возможно при больших материальных и энергозатратах.The use of these cultures of microorganisms is possible only in aeration tanks. The cultivation of a mixture of cultures is possible with large material and energy costs.

Известен штамм бактерий Arthrobacter sp. ОС-1, выделенный из образца загрязненных нефтью вод, полученных с месторождения Ван-Еган. Штамм депонирован в ВКПМ института ВНИИГенетики под номером Ас-1556 (пат. РФ 2128221).A known bacterial strain Arthrobacter sp. OS-1, isolated from a sample of oil-contaminated waters obtained from the Van Egan field. The strain is deposited in VKPM Institute VNIIGenetiki under the number Ac-1556 (US Pat. RF 2128221).

Известен штамм бактерий Arthrobacter sp. МИА-74, выделенный при воздействии космических излучений на штамм Arthrobacter sp. ОС-1. Штамм депонирован в ВКПМ института ВНИИГенетики под номером Ас-1575 (пат. РФ 2142996).A known bacterial strain Arthrobacter sp. MIA-74 isolated by exposure to cosmic radiation on a strain of Arthrobacter sp. OS-1. The strain was deposited with VKPM Institute VNIIGenetiki under the number Ac-1575 (US Pat. RF 2142996).

Известен штамм бактерий Arthrobacter sp. МИА-89, выделенный при воздействии космических излучений на штамм Arthrobacter sp. ОС-1. Штамм депонирован в ВКПМ института ВНИИГенетики под номером Ас-1576 (пат. РФ 2142997).A known bacterial strain Arthrobacter sp. MIA-89 isolated when exposed to cosmic radiation on a strain of Arthrobacter sp. OS-1. The strain was deposited in VKPM Institute VNIIGenetiki under the number Ac-1576 (US Pat. RF 2142997).

Указанные выше штаммы предназначены для разложения нефти и нефтепродуктов. Общим недостатком перечисленных выше штаммов является их сухая (лиофилизованная) форма, следствием чего низкая выживаемость микроорганизмов, высокие затраты на производство, необходимость предварительной подготовки (активизации) биопрепарата.The above strains are intended for the decomposition of oil and oil products. A common drawback of the above strains is their dry (lyophilized) form, which results in low survival of microorganisms, high production costs, the need for preliminary preparation (activation) of a biological product.

Наиболее близким аналогом является биопрепарат для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов, содержащий ассоциацию микроорганизмов и стабилизирующий агент (пат РФ №2180276). В качестве ассоциации штаммов используют бактериальные культуры-нефтеразрушители Rhodococcus ruber ИЭГМ 327, Rhodococcus erythropolis ИЭГМ 708. В качестве стабилизирующего агента используют биосуфроктант Rhodococcus.The closest analogue is a biological product for cleaning the soil from oil and oil products, containing an association of microorganisms and a stabilizing agent (RF Pat. No. 2180276). Rhodococcus ruber IEGM 327, Rhodococcus erythropolis IEGM 708 bacterial oil-destroying cultures are used as an association of strains. Rhodococcus biosuccant is used as a stabilizing agent.

Недостатком известного биопрепарата является недостаточная скорость утилизации нефти и неспособность осуществлять утилизацию нефти и нефтепродуктов при высоком содержании их к объему загрязненного объекта.A disadvantage of the known biological product is the insufficient speed of oil utilization and the inability to dispose of oil and oil products at a high content to the volume of the contaminated object.

Целью данного изобретения является получение биопрепарата, содержащего ассоциацию штаммов, характеризующуюся высокой скоростью утилизации нефти и нефтепродуктов, которые являются единственными источниками углерода и энергии, и технологичность получения биопрепарата.The aim of this invention is to obtain a biological product containing an association of strains, characterized by a high rate of utilization of oil and oil products, which are the only sources of carbon and energy, and the manufacturability of the biological product.

Поставленная цель достигается тем, что предлагается использовать биопрепарат, содержащей ассоциацию штаммов бактерий Arthrobacter sp. МИА-89, бактерий Arthrobacter sp. МИА-74, бактерий Arthrobacter sp. ОС-1, взятых при соотношении соответственно 2:2:1, и стабилизирующий агент - полиглюкин, при следующем соотношении компонентов, мас.%:This goal is achieved by the fact that it is proposed to use a biological product containing the association of bacterial strains Arthrobacter sp. MIA-89, bacteria Arthrobacter sp. MIA-74, bacteria Arthrobacter sp. OS-1, taken at a ratio of 2: 2: 1, respectively, and the stabilizing agent is polyglucin, in the following ratio of components, wt.%:

Ассоциация бактерийBacteria association 40-6040-60 ПолиглюкинPolyglukin 2-42-4 ВодаWater до 100%up to 100%

Биопрепарат имеет форму концентрата суспензии.The biological product is in the form of a suspension concentrate.

Идентификация каждого штамма была осуществлена на основании изучения его культурально-морфологических и физиолого-биохимических характеристик в соответствии с описанием, данным в определении бактерий Bergey / Bergey Smanual of Systematic Bacteriology vol. 1.1984р./.Identification of each strain was carried out on the basis of a study of its cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics in accordance with the description given in the definition of bacteria Bergey / Bergey Smanual of Systematic Bacteriology vol. 1.1984 r. /.

Выращивание проводили в колбах вместимостью 750 мл на качалках при скорости вращения 220 об/мин, объем питательной среды 100 мл.Growth was carried out in flasks with a capacity of 750 ml on a rocking chair at a rotation speed of 220 rpm, the volume of the nutrient medium 100 ml.

Хранятся штаммы на агаризованных питательных средах при температуре 4-6°С в течение месяца. Более длительное хранение штамма осуществляется в герметично запаянных ампулах в лиофильно-высушенном состоянии. Составы среды для хранения штамма:The strains are stored on agarized nutrient media at a temperature of 4-6 ° C for a month. Longer storage of the strain is carried out in hermetically sealed ampoules in a freeze-dried state. The composition of the medium for storage of the strain:

Мясопептонный агар (г/л):Meat peptone agar (g / l):

Мясная водаMeat water 100,0100.0 АгарAgar 20,020,0 NaClNaCl 5,05,0 ПептонPeptone 10,010.0 ГлюкозаGlucose 7,07.0 Вода водопроводнаяTap water до 1 литраup to 1 liter

Культурально-морфологические признаки Arthrobacter sp. МИА-89. Культура представляет собой подвижные, грамвариабельные, короткие палочковидные, мелкие клетки, расположенные хаотично. Культура полиморфна. Клетки подвижные, спор не образуют. Размер клеток в пределах 0,5-0,7-1,5 мкм.Cultural and morphological characteristics of Arthrobacter sp. MIA-89. The culture is a mobile, gramvariable, short rod-shaped, small cells located randomly. Culture is polymorphic. Cells are mobile, do not form a spore. The cell size is in the range of 0.5-0.7-1.5 microns.

Штамм МИА-89 растет на многих натуральных и синтетических средах. На МПА через 2 суток роста при температуре 30°С культура образует колонии неправильной формы, сероватого цвета, не очень крупные, плоские, маслянистой консистенции. Как правило, при выращивании на плотных средах на 2-3 сутки обнаруживается сплошной рост по штриху в виде образований сероватого цвета.Strain MIA-89 grows on many natural and synthetic environments. On MPA after 2 days of growth at a temperature of 30 ° C, the culture forms colonies of irregular shape, grayish in color, not very large, flat, oily consistency. As a rule, when grown on solid media for 2–3 days, a continuous growth along the line in the form of grayish-colored formations is detected.

Культура не лизогенна, после хранения на плотных питательных средах в течение 2-3 недель негативных пятен не обнаружено (при Т=30-35°С).The culture is not lysogenic; after storage on solid nutrient media for 2-3 weeks, no negative spots were detected (at T = 30-35 ° C).

На мясопептонном бульоне при 30°С через 3 суток наблюдается помутнение среды, беловатый осадок, заметно образование тонкого пристеночного кольца, небольшое количество агломератов клеток в толще среды в виде хлопьев, слабая пленка на поверхности среды. Оптимум роста (28-30)°С, рН 6,8-7,2.On the meat and peptone broth at 30 ° C after 3 days, a turbidity of the medium, a whitish precipitate, the formation of a thin wall ring, a small amount of agglomerates of cells in the thickness of the medium in the form of flakes, a weak film on the surface of the medium are noticeable. The optimum growth (28-30) ° C, pH 6.8-7.2.

Размножение и хранение культуры осуществляли путем пересева ее на мясопептонном агаре следующего состава, г/л:Propagation and storage of the culture was carried out by reseeding it on meat and peptone agar of the following composition, g / l:

Мясная водаMeat water 100,0100.0 АгарAgar 20,020,0 NaClNaCl 5,05,0 ПептонPeptone 10,010.0 ГлюкозаGlucose 7,07.0 ВодаWater до 1 лup to 1 l

Условия культивирования Arthrobacter sp. МИА-89, на ферментационной среде: температура - (28-30)°С, рН 6,8-7,2, продолжительность культивирования 22 часа. Состав ферментационной среды (вес.%):Cultivation conditions Arthrobacter sp. MIA-89, on a fermentation medium: temperature - (28-30) ° С, pH 6.8-7.2, cultivation time 22 hours. The composition of the fermentation medium (wt.%):

Кормовые дрожжи (БВК)Fodder Yeast (BVK) 22 Кукурузный экстрактCorn extract 1one Вода водопроводнаяTap water до 100up to 100

Физико-биохимические признаки штамма МИА-89:Physico-biochemical characteristics of the strain MIA-89:

Факультативный анаэроб, растет в диапазоне температур от 18° до 30°С. Крахмал гидролизует слабо, молоко не пептонизирует, желатину не разжижает, казеин не гидролизует, некислотоустойчивый, каталазоположительный. Хорошо растет на МПБ, разбавленной средой Раймонда в отношении 1:1, с NaCl в концентрации 0,5%.Optional anaerobic grows in the temperature range from 18 ° to 30 ° C. Starch weakly hydrolyzes, milk does not peptone, gel does not liquefy, casein does not hydrolyze, non-acid-resistant, catalase-positive. It grows well on BCH diluted with Raymond medium in a ratio of 1: 1, with NaCl at a concentration of 0.5%.

Отношение к источнику углерода.Relation to a carbon source.

Штамм МИА-89 ассимилирует углеводы с образованием кислот. Слабо усваивает сахарозу, мальтозу, рамнозу. Данный штамм проявляет хорошую способность к росту на углеводородных субстратах: парафине (С1013), гексадекане и сырой нефти. На жидкой среде Раймонда способен усваивать нефть и парафины в концентрации до 20%.Strain MIA-89 assimilates carbohydrates with the formation of acids. Poorly assimilates sucrose, maltose, rhamnose. This strain exhibits good growth ability on hydrocarbon substrates: paraffin (C 10 -C 13 ), hexadecane and crude oil. In a liquid medium, Raymond is able to absorb oil and paraffins in a concentration of up to 20%.

Отношение к источникам азота.Attitude to nitrogen sources.

Штамм МИА-89 хорошо растет на средах с аммонийным и нитратным азотом, когда нефть выступает в качестве единственного источника углерода. На производственной питательной среде продуктивность культуры по биомассе составляет 2-3×104 кл/мл, активность на песке с нефтью - на 7-е сутки биодеградация нефти отмечается в разведении 101-108. Культура Arthrobacter sp. МИА-89 наиболее активно потребляет тяжелые фракции нефти (С2433).Strain MIA-89 grows well on environments with ammonium and nitrate nitrogen, when oil acts as the sole source of carbon. In a production nutrient medium, biomass culture productivity is 2-3 × 10 4 cells / ml, activity in sand with oil - on the 7th day, biodegradation of oil is noted in a dilution of 10 1 -10 8 . Culture Arthrobacter sp. MIA-89 most actively consumes heavy fractions of oil (C 24 -C 33 ).

Культура Arthrobacter sp. МИА-74 характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками.Culture Arthrobacter sp. MIA-74 is characterized by the following cultural and morphological characters.

Культура представляет собой подвижные, грамвариабельные короткие палочковидные мелкие клетки и клетки округлой формы, расположенные парами или по несколько в цепочке, а также и по одиночке, расположенные под углом друг к другу, а также отдельные кокковидные клетки. Клетки подвижные, спор не образуют. Размер клеток в пределах 0,7-0,8-2,5 мкм.The culture consists of mobile, gram-shaped short, rod-shaped small cells and round cells arranged in pairs or several in a chain, as well as individually, located at an angle to each other, as well as individual cocciform cells. Cells are mobile, do not form a spore. The cell size is in the range of 0.7-0.8-2.5 microns.

Штамм МИА-74 растет на многих натуральных и синтетических средах. На МПА через 2 суток роста при 30°С культура образует круглые колонии, не очень крупные, чуть выпуклые, с матовой поверхностью и ровными краями, слегка кожистой консистенции, с розовым пигментом. Как правило, при выращивании на плотных средах на 2-3 сутки обнаруживается сплошной рост по штриху в виде образований розового цвета.Strain MIA-74 grows on many natural and synthetic environments. On MPA, after 2 days of growth at 30 ° C, the culture forms round colonies, not very large, slightly convex, with a matte surface and smooth edges, slightly leathery consistency, with pink pigment. As a rule, when grown on solid media for 2–3 days, a continuous growth along the line in the form of pink formations is detected.

Культура не лизогенна, после хранения на плотных питательных средах в течение 2-3 недель негативных пятен не обнаружено (при Т=30-35°С).The culture is not lysogenic; after storage on solid nutrient media for 2-3 weeks, no negative spots were detected (at T = 30-35 ° C).

На мясопептонном бульоне при 30°С через 3 суток наблюдается помутнение среды, беловатый осадок, заметно образование тонкого пристеночного кольца, небольшое количество агломератов клеток в толще среды в виде хлопьев, слабая пленка на поверхности среды. Оптимум роста (28-30)°С, рН 6,8-7,2.On the meat and peptone broth at 30 ° C after 3 days, a turbidity of the medium, a whitish precipitate, the formation of a thin wall ring, a small amount of agglomerates of cells in the thickness of the medium in the form of flakes, a weak film on the surface of the medium are noticeable. The optimum growth (28-30) ° C, pH 6.8-7.2.

На минеральной среде Раймонда с нефтью в качестве единственного источника углерода наблюдается легкая опалесцирующая муть в толще среды. Визуально нефть значительно деградирована.On Raymond's mineral medium with oil as the only carbon source, light opalescent turbidity is observed in the thickness of the medium. Visually, oil is significantly degraded.

Размножение культуры осуществляли путем пересева на мясопептонном агаре, состав которой указан выше (Среда №1).Cultivation was carried out by reseeding on meat peptone agar, the composition of which is indicated above (Wednesday No. 1).

Условия культивирования Arthrobacter sp. МИА-74 на ферментационной среде при следующих условиях: температура (28-30)°С, рН 6,8-7,2, время культивирования 22 часа. Состав ферментационной среды (вес.%):Cultivation conditions Arthrobacter sp. MIA-74 on a fermentation medium under the following conditions: temperature (28-30) ° C, pH 6.8-7.2, cultivation time 22 hours. The composition of the fermentation medium (wt.%):

Кормовые дрожжи (БВК)Fodder Yeast (BVK) 22 Кукурузный экстрактCorn extract 1one Вода водопроводнаяTap water до 100up to 100

Физико-биохимические признаки штамма МИА-74:Physico-biochemical characteristics of the strain MIA-74:

Факультативный анаэроб растет в диапазоне температур от 18° до 30°С. Крахмал гидролизует слабо, молоко не пептонизирует, желатину не разжижает, казеин не гидролизует, некислотоустойчивый, каталазоположительный. Хорошо растет на МПБ, разбавленной средой Раймонда в отношении 1:1, с NaCl в концентрации 0,5%.Optional anaerobic grows in the temperature range from 18 ° to 30 ° C. Starch weakly hydrolyzes, milk does not peptone, gel does not liquefy, casein does not hydrolyze, non-acid-resistant, catalase-positive. It grows well on BCH diluted with Raymond medium in a ratio of 1: 1, with NaCl at a concentration of 0.5%.

Отношение к источнику углерода.Relation to a carbon source.

Штамм МИА-74 ассимилирует углеводы с образованием кислот. Слабо усваивает сахарозу, мальтозу, рамнозу. Данный штамм проявляет хорошую способность к росту на углеводородных субстратах: парафине (C10-C13), гексадекане и сырой нефти. На жидкой среде Раймонда способен усваивать нефть в концентрации до 20%.Strain MIA-74 assimilates carbohydrates with the formation of acids. Poorly assimilates sucrose, maltose, rhamnose. This strain exhibits good growth ability on hydrocarbon substrates: paraffin (C 10 -C 13 ), hexadecane and crude oil. In a liquid medium, Raymond is able to absorb oil in a concentration of up to 20%.

Отношение к источникам азота.Attitude to nitrogen sources.

Штамм МИА-74 хорошо растет на средах с аммонийным и нитратным азотом, когда нефть выступает в качестве единственного источника углерода. На производственной питательной среде продуктивность культуры по биомассе составляет 2-3×109 кл/мл, активность на песке с нефтью - на 7 сутки биодеградация нефти отмечается в разведении 101-108.Strain MIA-74 grows well on environments with ammonium and nitrate nitrogen, when oil acts as the sole source of carbon. In a production nutrient medium, biomass culture productivity is 2-3 × 10 9 cells / ml, activity in sand with oil - on day 7, biodegradation of oil is noted in a dilution of 10 1 -10 8 .

Культура Arthrobacter sp. МИА-74 наиболее активно потребляет легкие нефтяные фракции(С1013), ароматические соединения, тяжелые фракции нефти (С2433).Culture Arthrobacter sp. MIA-74 most actively consumes light oil fractions (C 10 -C 13 ), aromatic compounds, heavy oil fractions (C 24 -C 33 ).

Культура Arthrobacter sp. ОС-1 представляет собой подвижные, грамвариабельные короткие палочковидные мелкие клетки и клетки округлой формы, расположенные парами, а также и по одиночке, реже соединенные в цепочки по 3 и более клеток. Культура полиморфна. Встречаются ветвящиеся цепочки и палочки, расположенные под углом друг к другу, а также отдельные более мелкие кокковидные клетки. Образует цисты. Клетки подвижные, образуют капсулу, спор не образуют. Размер клеток в пределах 0,7-0,8-2,5 мкм.Culture Arthrobacter sp. OS-1 is a movable, gravable short rod-shaped small cells and round cells arranged in pairs, as well as individually, less often connected in chains of 3 or more cells. Culture is polymorphic. There are branching chains and sticks located at an angle to each other, as well as individual smaller cocciform cells. Forms cysts. The cells are motile, form a capsule, do not form spores. The cell size is in the range of 0.7-0.8-2.5 microns.

Штамм ОС-1 растет на многих натуральных и синтетических средах. На МПА через 2 суток роста при 30°С культура образует плоские колонии, круглые с матовым слегка приподнятым центром полупрозрачным ровным опалесцирующим на свету краем. На МПА, содержащем вместо глюкозы 0,5% нефти, образует сильно выпуклые, круглые, блестящие, беловато-кремового цвета колонии. Как правило, при выращивании на плотных средах на 2-3 сутки обнаруживается сплошной рост по штриху в виде выпуклых слизистых образований беловато-кремового цвета с маслянистым блеском.Strain OS-1 grows on many natural and synthetic environments. On MPA, after 2 days of growth at 30 ° C, the culture forms flat colonies, round with a dull center slightly raised, a translucent, even opalescent edge in the light. On MPA, containing instead of glucose 0.5% oil, forms a strongly convex, round, shiny, whitish-cream-colored colony. As a rule, when grown on solid media for 2–3 days, a continuous growth is found along the line in the form of convex mucous formations of a whitish-cream color with an oily sheen.

Культура не лизогенна, после хранения на плотных питательных средах в течение 2-3 недель негативных пятен не обнаружено (при Т=30-35°С).The culture is not lysogenic; after storage on solid nutrient media for 2-3 weeks, no negative spots were detected (at T = 30-35 ° C).

На мясопептонном бульоне при 30°С через 3 суток наблюдается помутнение среды, беловатый осадок, заметно образование тонкого пристеночного кольца, небольшое количество агломератов клеток в толще среды в виде хлопьев, слабая пленка на поверхности среды. Оптимум роста (28-30)°С, рН 6,8-7,2.On the meat and peptone broth at 30 ° C after 3 days, a turbidity of the medium, a whitish precipitate, the formation of a thin wall ring, a small amount of agglomerates of cells in the thickness of the medium in the form of flakes, a weak film on the surface of the medium are noticeable. The optimum growth (28-30) ° C, pH 6.8-7.2.

На минеральной среде Раймонда с нефтью в качестве единственного источника углерода наблюдается легкая опалесцирующая муть в толще среды.On Raymond's mineral medium with oil as the only carbon source, light opalescent turbidity is observed in the thickness of the medium.

Размножение и хранение культуры осуществляли путем пересева на мясопептонном агаре, состав которой указан выше (Среда №1).Propagation and storage of the culture was carried out by reseeding on meat and peptone agar, the composition of which is indicated above (Wednesday No. 1).

Условия культивирования Arthrobacter sp. ОС-1 на ферментационной среде: температура (28-30)°С, рН 6,8-7,2, продолжительность культивирования 22 часа. Состав ферментационной среды (вес.%):Cultivation conditions Arthrobacter sp. OS-1 on a fermentation medium: temperature (28-30) ° С, pH 6.8-7.2, cultivation time 22 hours. The composition of the fermentation medium (wt.%):

Кормовые дрожжи (БВК)Fodder Yeast (BVK) 22 Кукурузный экстрактCorn extract 1one Вода водопроводнаяTap water до 100up to 100

Физико-биохимические признаки штамма ОС-1:Physico-biochemical characteristics of the strain OS-1:

Факультативный анаэроб растет в диапазоне температур от 18° до 30°С. Крахмал гилролизует слабо, молоко не пептонизирует, желатину не разжижает, казеин не гидролизует, некислотоустойчивый, каталазоположительный. Хорошо растет на МПБ, разбавленной средой Раймонда в отношении 1:1, с NaCl в концентрации 0,5%.Optional anaerobic grows in the temperature range from 18 ° to 30 ° C. Starch does not hydrolyze slightly, milk does not peptone, it does not dilute gelatin, casein does not hydrolyze, it is non-acid-resistant, catalase-positive. It grows well on BCH diluted with Raymond medium in a ratio of 1: 1, with NaCl at a concentration of 0.5%.

Отношение к источнику углерода.Relation to a carbon source.

Штамм ОС-1 ассимилирует углеводы с образованием кислот. Слабо усваивает сахарозу, мальтозу, рамнозу. Данный штамм проявляет хорошую способность к росту на углеводородных субстратах: парафине (С10-C13), гексадекане и сырой нефти, нефтепродуктах (мазут, дизельное топливо). На жидкой среде Раймонда способен усваивать нефть и парафины в концентрации до 20%.Strain OS-1 assimilates carbohydrates to form acids. Poorly assimilates sucrose, maltose, rhamnose. This strain shows good ability to grow on hydrocarbon substrates: paraffin (C 10 -C 13 ), hexadecane and crude oil, petroleum products (fuel oil, diesel fuel). In a liquid medium, Raymond is able to absorb oil and paraffins in a concentration of up to 20%.

Отношение к источникам азота.Attitude to nitrogen sources.

Штамм ОС-1 хорошо растет на средах с аммонийным и нитратным азотом, когда нефть выступает в качестве единственного источника углерода. На производственной питательной среде продуктивность культуры по биомассе составляет 2-3×109 кл/мл, активность на песке с нефтью - на 7-е сутки биодеградация нефти отмечается в разведении 101-108.Strain OS-1 grows well on environments with ammonium and nitrate nitrogen, when oil acts as the sole source of carbon. In a production nutrient medium, biomass culture productivity is 2-3 × 10 9 cells / ml, activity in sand with oil - on the 7th day, biodegradation of oil is noted in a dilution of 10 1 -10 8 .

Культура Arthrobacter sp. ОС-1 наиболее активно потребляет легкие нефтяные фракции (С1013) и средние нефтяные фракции (С1420).Culture Arthrobacter sp. OS-1 most actively consumes light oil fractions (C 10 -C 13 ) and medium oil fractions (C 14 -C 20 ).

Пример 1. Получение биопрепаратаExample 1. Obtaining a biological product

Для получения ассоциации используют штаммы бактерий Arthrobacter sp. МИА-89, бактерий Arthrobacter sp. МИА-74, бактерий Arthrobacter sp. ОС-1, взятые при соотношении соответственно 2:2:1 в количестве 40-60 мас.%. По окончании процесса ферментации каждого штамма полученную постферментационную жидкость подвергают процессу концентрирования. Смешение отдельно наработанных концентратов культур осуществляли непосредственно перед внесением с соответствующим контролем плотности бактериальной суспензии (титр - количество клеток в мл суспензии).Bacterial strains of Arthrobacter sp. MIA-89, bacteria Arthrobacter sp. MIA-74, bacteria Arthrobacter sp. OS-1, taken at a ratio of 2: 2: 1, respectively, in an amount of 40-60 wt.%. At the end of the fermentation process of each strain, the obtained post-fermentation liquid is subjected to a concentration process. Mixing separately prepared culture concentrates was carried out immediately before the introduction of the density of the bacterial suspension with the appropriate control (titer - the number of cells in ml of suspension).

В концентрат бактериальной суспензии, полученной в результате смешения бактерий, вводят полиглюкин в объеме 2-4 мас.%.Polyglucin in the volume of 2-4 wt.% Is introduced into the concentrate of the bacterial suspension obtained by mixing the bacteria.

№№составаNo. of composition Штаммы, соотношениеStrains ratio Кол-во ассоциаций, мас%Number of associations, wt% Полиглюкин, %Polyglukin,% МИА-89MIA-89 МИА-74MIA-74 ОС-1OS-1 1one 22 22 1one 6060 4four 22 22 22 1one 50fifty 33 33 22 22 1one 4040 22

Полученный биопрепарат хранят при температуре не выше 10°С. Непосредственно перед использованием препарат разбавляют водой в различных соотношениях.The resulting biological product is stored at a temperature not exceeding 10 ° C. Immediately before use, the drug is diluted with water in various proportions.

Основные преимущества предложенного биопрепарата: повышенная степень взаимодействия с углеводородами нефти, в результате которой бактерии-нефтедеструкторы вступают в непосредственный контакт с загрязнителем: обеспечение биодоступности нефтепродуктов в результате их десорбции с почвенных частиц; высокая биодеградабельность. Препарат характеризуется высокой жизнеспособностью входящих в его состав бактерий, удобен в хранении и транспортировке, прост в подготовке к использованию.The main advantages of the proposed biological product: an increased degree of interaction with oil hydrocarbons, as a result of which oil-destructing bacteria come into direct contact with the pollutant: ensuring bioavailability of oil products as a result of their desorption from soil particles; high biodegradability. The drug is characterized by high viability of the bacteria included in its composition, convenient in storage and transportation, easy to prepare for use.

Пример 2.Example 2

Экспериментальная оценка способности биопрепарата биодеградировать нефть проводилась в лабораторных условиях, в пилотных и полевых экспериментах комплексно по следующим показателям: убыли суммы углеводородов, изменению фракционного состава нефти в процессе биодеструкции, изменению площади остаточной нефти по отношению к общей площади загрязненной поверхности.An experimental assessment of the biodegradability of a biological product was carried out under laboratory conditions, in pilot and field experiments comprehensively by the following indicators: a decrease in the amount of hydrocarbons, a change in the fractional composition of oil during biodegradation, a change in the area of residual oil relative to the total area of the contaminated surface.

Для биообработки водных поверхностей биопрепарат заявляемого состава разводили до конечной концентрации клеток 1×106 кл/мл в пресной воде, добавляли 0,2% нитроаммофоски. Наносили готовый раствор из расчета 10 л/м2 поверхности почвы. Через 10-15 дней проводили повторную биообработку загрязненной поверхности. При необходимости, в случае высокого уровня загрязнения, проводили третью биообработку через 10-15 дней после второй. На почвах при пересыхании обрабатываемой поверхности проводили полив и рыхление, если это было возможно. Обработку почвы и воды в пилотных испытаниях осуществляли из садовых леек, в полевых - с помощью поливальной или пожарной машины вместимостью 5-10 м3.For the biological treatment of water surfaces, a biological product of the claimed composition was diluted to a final cell concentration of 1 × 10 6 cells / ml in fresh water, 0.2% nitroammophoski was added. The prepared solution was applied at the rate of 10 l / m 2 of the soil surface. After 10-15 days, repeated bioprocessing of the contaminated surface was carried out. If necessary, in the case of a high level of contamination, a third bioprocessing was carried out 10-15 days after the second. On soils, when the treated surface dries, watering and loosening were carried out, if possible. The soil and water in the pilot tests were carried out from garden watering cans, in the field - using an irrigation or fire truck with a capacity of 5-10 m 3 .

В лабораторных условиях обработку почвы, искусственно загрязненной нефтью, осуществляли в лабораторной посуде объемом 0,25-0,50 л. Лабораторные эксперименты проводили при комнатной температуре.In laboratory conditions, the treatment of soil artificially contaminated with oil was carried out in laboratory glassware with a volume of 0.25-0.50 liters. Laboratory experiments were performed at room temperature.

Пилотные испытания проводили на поверхности водоемов площадью 1-2 м2 и более или на аварийно загрязненных почвах, где предварительно определяли уровень загрязнения.Pilot tests were carried out on the surface of water bodies with an area of 1-2 m 2 or more or on accidentally contaminated soils, where the level of contamination was previously determined.

Полевые испытания проводили на природных объектах после аварийных разливов нефти на них. И пилотные и полевые испытания проводили в летне-осенний период.Field tests were carried out at natural sites after emergency oil spills on them. Both pilot and field tests were carried out in the summer-autumn period.

Пробы для анализов изначально и в динамике отбирали по пятиточечной схеме стандартным пробоотборником.Samples for analysis were initially and dynamically taken according to a five-point scheme using a standard sampler.

Массовый анализ исходного уровня загрязнения и дальнейший мониториг процесса очистки почвенных объектов и воды от нефтяных загрязнений проводили гравиметрическим методом. Качественный состав загрязняющего агента проводили методами газожидкостной хроматографии. Количественный состав нефтяных фракций определяли с помощью площади пиков, качественный - по времени удержания. В качестве контроля использовали нативную нефть, не подвергавшуюся биодеградации.Mass analysis of the initial level of pollution and further monitoring of the process of cleaning soil objects and water from oil pollution was carried out by the gravimetric method. The qualitative composition of the contaminant was carried out by gas-liquid chromatography. The quantitative composition of the oil fractions was determined using the peak area, and the qualitative composition was determined by the retention time. As a control, native oil that was not subjected to biodegradation was used.

Эффективность биодеградации загрязнения оценивали по убыли углеводородов нефти в процессе проведения биообработок, принимая за 100% исходную концентрацию загрязнения.The effectiveness of biodegradation of pollution was estimated by the loss of oil hydrocarbons in the process of bioprocessing, taking as 100% the initial concentration of pollution.

Учет численности живых клеток микроорганизмов во всех экспериментах проводили общепринятым методом предельных разведений на элективных средах.The number of living cells of microorganisms in all experiments was taken into account by the generally accepted method of limiting dilutions on elective media.

В табл.1, 2, 3 приведены результаты тестирования биодеградирующей способности биопрепарата в лабораторных условиях, полевых и пилотных экспериментах.Tables 1, 2, 3 show the results of testing the biodegradable ability of a biological product in laboratory conditions, field and pilot experiments.

В табл.1 приведены результаты сравнительного тестирования деградирующей способности биопрепарата и препарата Деворойл на модели почвы в лабораторных условиях. В качестве модели был использован образец загрязненной почвы республики Башкортостан предприятия по обеспечению нефтепродуктами. Контролем служил загрязненный углеводородами образец почвы с того же участка без внесения каких бы то ни было дополнительных микроорганизмов.Table 1 shows the results of comparative testing of the degrading ability of a biological product and Devoroil on a model of soil in laboratory conditions. As a model, a sample of contaminated soil of the Republic of Bashkortostan of an enterprise providing oil products was used. The control was a soil sample contaminated with hydrocarbons from the same site without introducing any additional microorganisms.

Figure 00000001
Figure 00000001

В табл.2 представлены результаты полевых тестов биодеградирующей способности биопрепарата на природном объекте (река Черная), загрязненном углеводородами (УВ) в результате аварийных разливов нефти.Table 2 presents the results of field tests of the biodegradable ability of a biological product at a natural object (Chernaya River) contaminated with hydrocarbons (HC) as a result of accidental oil spills.

Figure 00000002
Figure 00000002

В табл.3 представлены результаты тестирования биопрепарата в сравнении с отечественным препаратом в пилотных экспериментах, которые были поставлены на застарелом нефтяном загрязнении.Table 3 presents the results of testing the biological product in comparison with the domestic drug in pilot experiments, which were put on chronic oil pollution.

Figure 00000003
Figure 00000003

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью заявляемого биопрепарата может быть достигнута интенсивная деградация при высоком содержании ее в объекте загрязненного субстрата и он может быть использован для удаления нефтяных загрязнений с поверхности почвы и водоемов.Thus, the obtained results indicate that with the help of the claimed biological product can be achieved intense degradation with a high content of contaminated substrate in the object and it can be used to remove oil pollution from the surface of the soil and water bodies.

Claims (1)

Биопрепарат для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов, содержащий ассоциацию микроорганизмов и стабилизирующий агент, отличающийся тем, что в качестве ассоциации микроорганизмов препарат содержит бактериальные культуры Arthrobacter sp.МИА-89, Arthrobacter sp.МИА-74, Arthrobacter sp.ОС-1, взятые при соотношении соответственно 2:2:1, и в качестве стабилизирующего агента полиглюкин при следующем соотношении компонентов, мас.%:A biological product for cleaning the soil from oil and oil products, containing an association of microorganisms and a stabilizing agent, characterized in that, as an association of microorganisms, the preparation contains bacterial cultures of Arthrobacter sp. MIA-89, Arthrobacter sp. MIA-74, Arthrobacter sp. OS-1, taken in a ratio of 2: 2: 1, respectively, and as a stabilizing agent, polyglucin in the following ratio of components, wt.%: Ассоциация бактерийBacteria association 40-6040-60 ПолиглюкинPolyglukin 2-42-4 ВодаWater Остальное до 100%The rest is up to 100%
RU2005135260/13A 2005-11-15 2005-11-15 Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land RU2299101C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2005135260/13A RU2299101C1 (en) 2005-11-15 2005-11-15 Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2005135260/13A RU2299101C1 (en) 2005-11-15 2005-11-15 Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2299101C1 true RU2299101C1 (en) 2007-05-20

Family

ID=38164054

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2005135260/13A RU2299101C1 (en) 2005-11-15 2005-11-15 Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2299101C1 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2624061C1 (en) * 2016-03-23 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Arthrobacter strain rhombi arc 15 vkpm as-1989 - destructor of oil and oil products
RU2624063C1 (en) * 2016-03-23 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" STRAIN ARTHROBACTER RHOMBI ARC 16 VKPM Ac-1988 - DESTRUCTOR OF OIL AND OIL PRODUCTS
RU2624054C2 (en) * 2015-12-07 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Strain leucobacter aridicollis arc 6 vkpm as-1992 destructor of oil and oil products
RU2624052C2 (en) * 2015-12-07 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Strain arthrobacter rhombi arc 8 vkpm as-1987-destructor of oil and oil products

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRASHENINNIKOVA Т.К. Influence of Space-Flight Factors on the Properties of Microorganisms. Producers of Biologically Active Substances. Cosmic Research, vol. 39, № 4, Julu 2001, p.333-337. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2624054C2 (en) * 2015-12-07 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Strain leucobacter aridicollis arc 6 vkpm as-1992 destructor of oil and oil products
RU2624052C2 (en) * 2015-12-07 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Strain arthrobacter rhombi arc 8 vkpm as-1987-destructor of oil and oil products
RU2624061C1 (en) * 2016-03-23 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" Arthrobacter strain rhombi arc 15 vkpm as-1989 - destructor of oil and oil products
RU2624063C1 (en) * 2016-03-23 2017-06-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" STRAIN ARTHROBACTER RHOMBI ARC 16 VKPM Ac-1988 - DESTRUCTOR OF OIL AND OIL PRODUCTS

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nwaogu et al. Degradation of diesel oil in a polluted soil using Bacillus subtilis
RU2553338C2 (en) Pseudomonas azotoformans STRAIN FOR CLEANING SEA WATER AND COASTAL AREAS FROM OIL IN HIGH LATITUDE CONDITIONS
Burghal et al. Mycodegradation of crude oil by fungal species isolated from petroleum contaminated soil
RU2337069C1 (en) Preparation for soil and water purufication from oil and oil products
RU2484130C1 (en) STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas panipatensis VKPM V-10593 - DESTRUCTOR OF OIL AND OIL PRODUCTS
RU2509150C2 (en) Association of strains of bacteria-oil decomposers, and remediation method of oil-contaminated objects
RU2299101C1 (en) Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from land
RU2142997C1 (en) Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products
RU2257409C1 (en) Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products
RU2142996C1 (en) Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products
RU2694610C1 (en) Pseudomonas extremaustralis arc 38 vkpm b-13084 strain - destructor of oil and oil products
RU2093478C1 (en) Method of water and soil treatment from oil, petroleum products and polymeric additions in drilling fluid
RU2533800C2 (en) Strain pseudomonas migulae for cleaning soil, water and bottom sediments of water reservoirs from oil pollutions
RU2300561C1 (en) Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products
RU2257410C1 (en) Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products
RU2114174C1 (en) Consortium of yeast candida maltosa for biodegradation of petroleum pollution
RU2299239C1 (en) Strain rhodococcus globerulus for destruction of oil and petroleum products
RU2266958C2 (en) Destructor microorganism strains zoogloea sp.14h, arthrobacter sp.13h, arthrobacter sp.15h, bacillus sp.3h, bacillus sp.12h, useful in remediation of ponds and soils contaminated with petroleum and petroleum product, and strain association based on the same
RU2270808C2 (en) Biologically active composition for treatment of surface water, soil and ground from petroleum pollution
RU2128221C1 (en) Strain arthrobacter species for petroleum and petroleum products decomposition
RU2257411C1 (en) Strain pseudomonas graminis for decomposition of petroleum and petroleum products
RU2304614C1 (en) Pandora sp kp-2 strain for decomposition of crude oil and petroleum products
RU2617950C1 (en) STRAIN OF BACTERIA Stenotrophomonas maltophilia - OIL AND OILPRODUCT DESTRUCTOR
RU2634399C2 (en) Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal
RU2634397C2 (en) Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20081116