RU2248393C2 - Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin - Google Patents
Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2248393C2 RU2248393C2 RU2003110247/13A RU2003110247A RU2248393C2 RU 2248393 C2 RU2248393 C2 RU 2248393C2 RU 2003110247/13 A RU2003110247/13 A RU 2003110247/13A RU 2003110247 A RU2003110247 A RU 2003110247A RU 2248393 C2 RU2248393 C2 RU 2248393C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- thermolabile
- escherichia coli
- exotoxin
- preparing
- Prior art date
Links
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims abstract description 12
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 4
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 title claims description 4
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 title claims description 4
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 claims 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 13
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 239000004104 Oleandomycin Substances 0.000 description 1
- RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N Oleandomycin Natural products O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(C)C(=O)OC(C)C(C)C(O)C(C)C(=O)C2(OC2)CC(C)C(OC2C(C(CC(C)O2)N(C)C)O)C1C RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229960002351 oleandomycin Drugs 0.000 description 1
- RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N oleandomycin Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@H](C)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@]2(OC2)C[C@H](C)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N 0.000 description 1
- 235000019367 oleandomycin Nutrition 0.000 description 1
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для получения антигенов, применяемых при приготовлении диагностических и иммуногенных препаратов против колибактериоза сельскохозяйственных животных.The invention relates to veterinary microbiology and biotechnology, and can be used to obtain antigens used in the preparation of diagnostic and immunogenic preparations against colibacteriosis of farm animals.
Колибактериоз (эшерихиоз) - инфекционная болезнь, вызываемая энтеропатогенными эшерихиями, - широко распространен во многих странах мира и наносит значительный экономический ущерб животноводству за счет высокой смертности телят и поросят.Colibacteriosis (Escherichiosis) - an infectious disease caused by enteropathogenic Escherichia - is widespread in many countries of the world and causes significant economic damage to livestock due to the high mortality of calves and piglets.
Известно, что энтеропатогенные эшерихии обладают комплексом факторов вирулентности, из которых основными можно считать продуцирование термолабильных и термостабильных токсинов.Enteropathogenic Escherichia is known to have a complex of virulence factors, of which the production of thermolabile and thermostable toxins can be considered the main ones.
Известен штамм Escherichia coli ВГНКИ №422-16/37 (см. а.с. СССР №1412069, по кл. C 12 N 1/00, А 61 К 39/108, опубл. 27.10.95), представляющий собой моноплазмидный вариант культуры Е.coli С600 (рК99). Штамм содержит природную плазмиду, которая детерминирует продукцию антигена К99. Штамм используют для получения агглютинирующих сывороток для диагностики колибактериоза телят.Known strain of Escherichia coli VGNKI No. 422-16 / 37 (see AS USSR No. 1412069, class C 12 N 1/00, A 61 K 39/108, publ. 27.10.95), which is a monoplasmid variant cultures of E. coli C600 (pK99). The strain contains a natural plasmid that determines the production of K99 antigen. The strain is used to obtain agglutinating sera for the diagnosis of colibacillosis of calves.
Однако данный штамм обладает выраженными вирулентными свойствами (вирулентные свойства данного штамма), что не позволяет его эффективно использовать для повышения резистентности сельскохозяйственных животных.However, this strain has pronounced virulent properties (virulent properties of this strain), which does not allow it to be effectively used to increase the resistance of farm animals.
Известен также штамм Escherichia coli 234 - продуцент термолабильного энтеротоксина (см. заявку №94018861, по кл. C 12 N 1/20, опубл. 10.03.96). Штамм используют как антиген для иммунологической диагностики колиинфекций.Also known is a strain of Escherichia coli 234, a producer of thermolabile enterotoxin (see application No. 94018861, class C 12 N 1/20, publ. 10.03.96). The strain is used as an antigen for the immunological diagnosis of coli infections.
Однако данный штамм применяется только в медицинской практике и не используется при колибактериозах сельскохозяйственных животных.However, this strain is used only in medical practice and is not used for colibacteriosis of farm animals.
Наиболее близким к заявляемому является штамм Escherichia coli №305-37/12, продуцирующий термолабильный энтеротоксин (см. патент РФ №1149466, по кл. А 61 К 39/108, опубл. 10.12.95). Штамм имеет величину ЛД50 для мышей, равную 57 млн.Closest to the claimed is a strain of Escherichia coli No. 305-37 / 12, producing thermolabile enterotoxin (see RF patent No. 1149466, according to class A 61 K 39/108, publ. 10.12.95). The strain has a value of LD 50 for mice, equal to 57 million
Однако вирулентные свойства данного штамма достаточно высоки, что не позволяет его эффективно использовать для повышения резистентности животных.However, the virulent properties of this strain are quite high, which does not allow it to be effectively used to increase the resistance of animals.
Изобретение направлено на решение задачи создания апатогенного штамма Escherichia coli Б-5, продуцирующего только термолабильный токсин, обладающий иммуногенными свойствами.The invention is aimed at solving the problem of creating a pathogenic strain of Escherichia coli B-5, producing only a thermolabile toxin with immunogenic properties.
Штамм выделен из селезенки павшего поросенка 10-дневного возраста, депонирован во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и кормов (ФГУ ВГНКИ), хранится в Саратовской научно-исследовательской ветеринарной станции (НИВС).The strain was isolated from the spleen of a fallen piglet of 10 days of age, deposited at the All-Russian State Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines and Feed (FGU VGNKI), stored in the Saratov Scientific Research Veterinary Station (NIVS).
Штамм Escherichia coli Б-5 характеризуется следующими признаками.The strain Escherichia coli B-5 is characterized by the following features.
Культуральные и морфологические признаки.Cultural and morphological characters.
Культивирование осуществляют вначале на мясопептонном бульоне (МПБ), затем на мясопептонном агаре (МПА) при температуре 37°С в течение от 18 до 48 часов при аэробных условиях. При этом на МПБ колонии растут диффузно, образуя интенсивную муть и легко разбивающийся осадок, на МПА вначале образуются гладкие, выпуклые, блестящие с ровными краями колонии S-формы. В последующем возможно образование переходных от S- к R-форме колоний и суховатых с неровными краями R-форм колоний (до 50%). На агаре Эндо формируются темно-красные с металлическим блеском колонии.Cultivation is carried out first on meat and peptone broth (MPB), then on meat and peptone agar (MPA) at a temperature of 37 ° C for 18 to 48 hours under aerobic conditions. At the same time, colonies grow diffusely on the MPB, forming an intense haze and easily breaking sediment, on the MPA, initially S-shaped colonies are smooth, convex, shiny with smooth edges. Subsequently, the formation of transitional from S- to R-shaped colonies and dry with uneven edges of the R-shaped colonies (up to 50%) is possible. On the Endo agar, dark red colonies are formed with a metallic sheen.
Ферментативные свойства.Enzymatic properties.
Микроорганизм обладает подвижностью, проявляет каталазную активность, дает положительную реакцию с метилротом, продуцирует индол, ферментирует глюкозу с газообразованием, а также лактозу, арабинозу, маннит, мальтозу, ксилозу, сорбит, дульцит.The microorganism has mobility, exhibits catalase activity, gives a positive reaction with methylroth, produces indole, ferments glucose with gas formation, as well as lactose, arabinose, mannitol, maltose, xylose, sorbitol, dulcite.
Условия и состав сред для токсинообразования: бульон Хоттингера.Conditions and composition of media for toxin formation: Hottinger broth.
Антигенные свойства.Antigenic properties.
Продукт, синтезируемый штаммом Escherichia coli Б-5, - термолабильный экзотоксин, не подверженный нейтрализации поливалентной антитоксической сывороткой против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных.The product synthesized by the strain Escherichia coli B-5 is a thermolabile exotoxin that is not susceptible to neutralization with polyvalent antitoxic serum against colibacteriosis (Escherichiosis) of farm animals.
Молекулярно-генетическая особенность штамма - треки штамма как в S-, так и в R-формах имеют репликон размером около 0,3 кб, в данном репликоне имеется ген, кодирующий В-субъединицу термолабильного токсина (ЛТ), обуславливающий иммуногенную активность штамма. Структурные гены ЛТ дополнительно интегрированы и в хромосому микробной клетки. В клетках штамма имеется репликон, несущий генетическую информацию регуляторного свойства, необходимую для синтеза ЛТ-продукции. У штамма имеется в наличии иммуногенный эпитоп, но отсутствует репликон, ответственный за реактогенность эшерихий.The molecular genetic feature of the strain is that the tracks of the strain in both S and R forms have a replicon of about 0.3 kb in size, in this replicon there is a gene encoding the B subunit of the thermolabile toxin (LT), which determines the immunogenic activity of the strain. LT structural genes are additionally integrated into the chromosome of the microbial cell. In the cells of the strain there is a replicon that carries genetic information of regulatory properties necessary for the synthesis of LT products. The strain has an immunogenic epitope, but there is no replicon responsible for the reactogenicity of Escherichia.
Чувствительность к антибиотикам (зона задержки роста в мм): полимиксин - 11, стрептомицин - 25, левомицетин - 25, рифампицин - 9, карбенициллин - 15; не чувствителен к: оксациллину, доксициклину, линкомицину, тетрациклину, олеандомицину, ампициллину, пенициллину.Sensitivity to antibiotics (growth retardation zone in mm): polymyxin - 11, streptomycin - 25, chloramphenicol - 25, rifampicin - 9, carbenicillin - 15; not sensitive to: oxacillin, doxycycline, lincomycin, tetracycline, oleandomycin, ampicillin, penicillin.
Вирулентные свойства.Virulent properties.
Внутрибрюшинное введение культуры штамма в концентрации 5·108 м.к./ см3 и объеме 0,5 мл гибели белых мышей не вызывает. LД50 - 1,2·1010 м.к./см3. Гибель белых мышей наступает в течение суток.Intraperitoneal administration of the strain culture at a concentration of 5 · 10 8 m.k./cm 3 and a volume of 0.5 ml of death of white mice does not cause. LD 50 - 1.2 · 10 10 m.k./cm 3 . The death of white mice occurs within 24 hours.
Определение энтеротоксигенных свойств штамма.Determination of enterotoxigenic properties of the strain.
Для определения токсинообразования культивирование штамма проводили в питательном составе Mundeli в течение 20 часов. Полученную бульонную культуру разделяли на токсиносодержащий материал и бакмассу методом стерилизующей фильтрации. Культуральная жидкость, лишенная бактериального компонента, служила материалом, содержащим экзотоксин Е.coli.To determine the toxin formation, the strain was cultured in the nutritional composition of Mundeli for 20 hours. The resulting broth culture was divided into toxin-containing material and Bakmass by sterilizing filtration. The culture fluid devoid of the bacterial component served as a material containing E. coli exotoxin.
Устойчивость к температуре определяли прогреванием токсиносодержащего материала в течение 10-минутного кипячения при 100°С и последующим его введением белым мышам.Temperature resistance was determined by heating the toxin-containing material for 10 minutes at 100 ° С and then introducing it into white mice.
Определение ТЛ-токсина проводили с использованием: прогретого токсиносодержащего материала, непрогретого и питательной среды Mundeli - в качестве отрицательного контроля.The determination of TL-toxin was carried out using: heated toxin-containing material, unheated and nutrient medium Mundeli as a negative control.
Культивирование штамма можно осуществлять, например, на разработанной и запатентованной Саратовской НИВС (патент №2142505) питательной среде следующего состава, мас.%: аминокровин 5-20; пептон 0,6-1,5; хлористый аммоний 0,08-0,18; хлористый натрий 0,09-0,11; гидролизат казеина 9-20; питательная среда “ИГЛА” 52-61; дистиллированная вода - остальное. На данной среде культивирование осуществляют в течение 7 суток при температуре 37°С, затем суспензию центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочная жидкость являлась энтеротоксигенным материалом.The cultivation of the strain can be carried out, for example, on the developed and patented Saratov NIVS (patent No. 2142505) nutrient medium of the following composition, wt.%: Aminokrov 5-20; peptone 0.6-1.5; ammonium chloride 0.08-0.18; sodium chloride 0.09-0.11; casein hydrolyzate 9-20; nutrient medium “Igla” 52-61; distilled water - the rest. On this medium, cultivation is carried out for 7 days at a temperature of 37 ° C, then the suspension is centrifuged at 6000 rpm for 30 minutes. The supernatant was an enterotoxigenic material.
Пример.Example.
Доказательства наличия термолабильного (ТЛ) токсина осуществляли на биологических моделях с помощью теста отека лап белых мышей. Тест основан на способности энтеротоксинов при их подкожном введении вызывать отек близлежащих тканей.Evidence for the presence of thermolabile (TL) toxin was carried out on biological models using the test of paw edema in white mice. The test is based on the ability of enterotoxins, when administered subcutaneously, to cause edema of nearby tissues.
С опытным и контрольным материалом проведен “тест отека лап белых мышей”. Испытуемые материалы вводили в подушечку задней лапы в объеме 0,05 мл. В каждой группе было по 5 белых мышей (всего 15). Отек лап учитывали через 48 часов. После умерщвления лабораторных животных инъецированные конечности отсекали по голеностопному суставу и взвешивали на электронных весах. Вес отсеченной конечности у мышей, подвергнутых инъецированию нативным токсиносодержащим материалом, превысил массу ампутированных конечностей мышей, которым вводили термоинактивированный материал и стерильную питательную среду, на 78 мг. Проведенные исследования свидетельствуют о продуцировании Е.coli штаммом Б-5 термолабильного токсина.With experimental and control material, a “test of swelling of the paws of white mice” was carried out. The test materials were injected into the hind paw pad in a volume of 0.05 ml. In each group, there were 5 white mice (total 15). Paw edema was counted after 48 hours. After the killing of laboratory animals, the injected limbs were cut off at the ankle joint and weighed on an electronic balance. The weight of the cut off limb in mice injected with native toxin-containing material exceeded the weight of amputated limbs of mice injected with heat-inactivated material and sterile culture medium by 78 mg. Studies have shown the production of E. coli strain B-5 thermolabile toxin.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003110247/13A RU2248393C2 (en) | 2003-04-09 | 2003-04-09 | Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003110247/13A RU2248393C2 (en) | 2003-04-09 | 2003-04-09 | Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003110247A RU2003110247A (en) | 2004-12-27 |
| RU2248393C2 true RU2248393C2 (en) | 2005-03-20 |
Family
ID=35454359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003110247/13A RU2248393C2 (en) | 2003-04-09 | 2003-04-09 | Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2248393C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2539105C1 (en) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Preparation for treatment of necrotic stomatitis of cattle |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2043409C1 (en) * | 1992-02-18 | 1995-09-10 | Владимир Евгеньевич Алаторцев | Strain of bacterium escherichia coli used for recombinant proteins preparing |
| RU2144954C1 (en) * | 1998-04-15 | 2000-01-27 | Лившиц Виталий Аркадьевич | Strain of bacterium escherichia coli m17/p colap used for probiotic preparation producing |
-
2003
- 2003-04-09 RU RU2003110247/13A patent/RU2248393C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2043409C1 (en) * | 1992-02-18 | 1995-09-10 | Владимир Евгеньевич Алаторцев | Strain of bacterium escherichia coli used for recombinant proteins preparing |
| RU2144954C1 (en) * | 1998-04-15 | 2000-01-27 | Лившиц Виталий Аркадьевич | Strain of bacterium escherichia coli m17/p colap used for probiotic preparation producing |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2539105C1 (en) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Preparation for treatment of necrotic stomatitis of cattle |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107812183A (en) | A kind of clostridium septicum alpha toxin recombinant subunit vaccine and its production method | |
| CN111925426B (en) | Clostridium perfringens alpha toxin mutant, expression system, preparation method and application | |
| RU2043771C1 (en) | Vaccine against escherichiosis in animals | |
| RU2248393C2 (en) | Strain escherichia coli b-5 used for preparing thermolabile exotoxin | |
| RU2129441C1 (en) | Mixed vaccine against anaerobic enterotoxemia and escherichiosis in piglets | |
| CN112063561A (en) | Streptococcus suis type 3 vaccine strain and its application | |
| RU2263143C2 (en) | Strain of bacterium streptococcus pyogenes 289 used for preparing vaccine against streptococcosis in fur animal | |
| RU2043772C1 (en) | Method of preparing antiadhesive and antitoxic serum against escherichiosis in agriculture animals | |
| RU2325183C1 (en) | Production method of animal colibacillosis vaccine | |
| RU2521651C1 (en) | STRAINS OF BACTERIA Moraxella bovoculi "SH-CH6 N-DEP" USED TO MANUFACTURE DIAGNOSTIC PREPARATIONS AND VACCINES AGAINST INFECTIOUS KERATOCONJUNCTIVITIS OF CATTLE | |
| RU1092947C (en) | Strain pseudomonas acruginosa sepotype 11 n 48 used for obtaining pseudomonous antigen | |
| RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2145353C1 (en) | Strain of bacterium moraxella bovis "g97-vnivi" used for preparing diagnostica and vaccines against infectious keratoconjunctivitis in cattle | |
| CA2303722A1 (en) | Campylobacter vaccine | |
| RU2248806C1 (en) | Alive vaccine against porcine colibacteriosis | |
| CN103721254A (en) | Method for preparing swine A-type clostridium perfringens aluminum hydroxide inactivated vaccine | |
| KR20150142706A (en) | Novel Edwardsiella tarda ET-191 and inactivated vaccine against edwardsiellosis in fish comprising thereof | |
| RU2288006C1 (en) | Live vaccine against colibacteriosis in calves | |
| RU2178713C2 (en) | Method to prevent salmonella-caused abortion in mares | |
| RU2830616C1 (en) | Moraxella bovoculi "вк-2" strain, used for making diagnostics and agents for specific prevention of infectious keratoconjunctivitis in cattle | |
| RU1149467C (en) | Vaccine against colibacteriosis of young cattle and sheep | |
| RU2218177C2 (en) | Strain of bacterium salmonella enteritidis = 22 used for preparing vaccine and diagnostic preparation | |
| RU2222592C2 (en) | Strain of bacterium escherichia coli = 27 0138:k88 used for preparing vaccine and diagnostic preparations | |
| RU2222591C2 (en) | Strain of bacterium escherichia coli = 2809:k99 used for preparing vaccine and diagnostic preparation | |
| RU2261109C1 (en) | Strain of bacterium streptococcus agalactiae 71 for preparing vaccine against streptococcosis in fur animal |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180410 |