RU2194983C2 - Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases - Google Patents
Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases Download PDFInfo
- Publication number
- RU2194983C2 RU2194983C2 RU2000118015/14A RU2000118015A RU2194983C2 RU 2194983 C2 RU2194983 C2 RU 2194983C2 RU 2000118015/14 A RU2000118015/14 A RU 2000118015/14A RU 2000118015 A RU2000118015 A RU 2000118015A RU 2194983 C2 RU2194983 C2 RU 2194983C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood serum
- nerve
- neurotoxicity
- ringer
- liver
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 title claims description 16
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 title claims description 16
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 title claims description 16
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 title claims description 16
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 title claims description 13
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 17
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 4
- 239000004020 conductor Substances 0.000 claims 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract 2
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 abstract 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 8
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 8
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 7
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 7
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 5
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 5
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 3
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 3
- 241000239220 Limulus polyphemus Species 0.000 description 3
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 3
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 3
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 2
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 2
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 208000027232 peripheral nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 2
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003840 Autonomic nervous system imbalance Diseases 0.000 description 1
- 206010061666 Autonomic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- PQUCIEFHOVEZAU-UHFFFAOYSA-N Diammonium sulfite Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])=O PQUCIEFHOVEZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020575 Hyperammonaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 206010046996 Varicose vein Diseases 0.000 description 1
- 206010047141 Vasodilatation Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003403 autonomic nervous system Anatomy 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000010102 embolization Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 235000021149 fatty food Nutrition 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 208000022821 personality disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 208000007232 portal hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000001020 rhythmical effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 208000027765 speech disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000955 splenic vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002972 tibial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 208000027185 varicose disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно способам оценки нейротоксичности сыворотки крови больных диффузными заболеваниями печени, позволяющим оценить риск развития периферических нейропатий при недостаточности функций печени и уточнить лечебную тактику. The invention relates to medicine, namely to methods for assessing the neurotoxicity of blood serum of patients with diffuse diseases of the liver, allowing to assess the risk of developing peripheral neuropathies in case of insufficiency of liver functions and to clarify therapeutic tactics.
Известно, что у больных заболеваниями печени в ряде случаев могут развиваться нарушения функций периферической нервной системы. Такие поражения в значительной части случаев клинически мало выражены. У большинства больных нейропатии могут проявляться в виде локомоторных расстройств и расстройств чувствительности [1] , а также сопровождаться вегетативными дисфункциями, обусловливающими нарушения регуляции секреции и ритмической активности внутренних органов [2-5]. Отсутствие доступных методов оценки степени этих неврологических расстройств и их связи с недостаточностью функции печени приводит к тому, что в клинической практике им не уделяется должного внимания. Степень поражения периферической нервной системы не коррелирует с показателями, характеризующими белоксинтезирующую и желчевыводительную функции печени, а также сохранность структуры гепатоцитов [6]. Периферические неврологические расстройства могут развиться и прогрессировать у больных с удовлетворительными данными рутинных исследований функций печени, свидетельствующими о компенсированности основного заболевания, и при отсутствии других значимых нервно-психических нарушений. Эти обстоятельства определяют необходимость в оценке степени нейротоксичности сыворотки крови больных с патологией печени для уточнения прогноза и коррекции проводимой терапии. It is known that in patients with liver diseases in some cases, dysfunctions of the peripheral nervous system may develop. Such lesions in a significant part of cases are clinically poorly expressed. In most patients, neuropathies can manifest themselves as locomotor and sensitivity disorders [1], as well as accompanied by autonomic dysfunctions that cause dysregulation of the secretion and rhythmic activity of internal organs [2-5]. The lack of available methods for assessing the degree of these neurological disorders and their relationship with liver function insufficiency leads to the fact that in clinical practice they are not given due attention. The degree of damage to the peripheral nervous system does not correlate with indicators characterizing the protein synthesizing and biliary functions of the liver, as well as the preservation of the structure of hepatocytes [6]. Peripheral neurological disorders can develop and progress in patients with satisfactory data from routine studies of liver functions, indicating compensation for the underlying disease, and in the absence of other significant neuropsychiatric disorders. These circumstances determine the need to assess the degree of neurotoxicity of the blood serum of patients with liver pathology in order to clarify the prognosis and correction of the therapy.
Снижение детоксицирующей функции печени при диффузных заболеваниях органа приводит к развитию эндотоксемии. В свою очередь эндотоксемия при циррозе печени (как и при септических состояниях) может выступать как медиатор гемодинамических, неврологических и гематологических расстройств [7, 8]. Проявлениями системной эндотоксемии могут быть пирогенная реакция, ДВС-синдром, нарушение функции почек, эндотоксический шок и другие [9]. Повышение уровня эндотоксинов в крови усугубляет поражение печеночных клеток. Появление эндотоксемии, вероятно, связано с нарушением функций клеток Купфера [10]. A decrease in the detoxifying function of the liver in diffuse diseases of the organ leads to the development of endotoxemia. In turn, endotoxemia in cirrhosis (as in septic conditions) can act as a mediator of hemodynamic, neurological and hematological disorders [7, 8]. The manifestations of systemic endotoxemia can be a pyrogenic reaction, DIC, impaired renal function, endotoxic shock, and others [9]. An increase in the level of endotoxins in the blood exacerbates damage to the liver cells. The appearance of endotoxemia is probably associated with impaired Kupffer cell function [10].
Поражение нервной системы может появляться задолго до наступления декомпенсации процесса и вносить свой вклад в прогрессирование заболевания и ухудшение качества жизни больных. Выявление поражения нервной системы возможно при проведении клинических тестов оценки состояния автономной нервной системы (проба Вальсальвы, тест оценки функции потовых желез [11]). Однако для оценки прогноза, выявления тяжести поражения и коррекции проводимой терапии необходимо проведение оценки степени нейротоксичности сыворотки крови больных. Damage to the nervous system can appear long before the onset of decompensation of the process and contribute to the progression of the disease and the deterioration of the quality of life of patients. Identification of lesions of the nervous system is possible during clinical tests to assess the state of the autonomic nervous system (Valsalva test, test to assess the function of sweat glands [11]). However, to assess the prognosis, identify the severity of the lesion, and correct the therapy, it is necessary to assess the degree of neurotoxicity of the blood serum of patients.
Таким образом, оценка нейротоксичности сыворотки крови при заболеваниях печени остается важной и до конца не решенной задачей. Во многом это связано с тем, что до конца не выяснена природа субстрата нейротоксичности при печеночной патологии, а прямые корреляции между выраженностью этого осложнения и степенью нарушения доступных рутинной оценке функций печени не выявлены. Имеются данные о способах оценки содержания эндотоксинов в организме посредством выявления пирогенной реакции у кроликов и оценки жизнеспособности куриных эмбрионов, а также посредством выявления генерализованного тромбообразования в сосудах Limulus polyphemus после взаимодействия тестовых объектов со средами, содержащими эндотоксин [12]. Для выявления эндотоксинов в крови применяют тетрахилиновый тест по методу Ирлиной Н.С. в модификации [13] , основанный на оценке жизнеспособности микроорганизмов при воздействии тестируемой сыворотки. Thus, the assessment of the neurotoxicity of blood serum in liver diseases remains an important and not completely solved task. This is largely due to the fact that the nature of the substrate of neurotoxicity in hepatic pathology has not been fully elucidated, and no direct correlations between the severity of this complication and the degree of impairment of the routine assessment of liver function have been identified. There is evidence of methods for assessing the endotoxin content in the body by detecting a pyrogenic reaction in rabbits and assessing the viability of chicken embryos, as well as by detecting generalized thrombosis in Limulus polyphemus vessels after the interaction of test objects with media containing endotoxin [12]. To detect endotoxins in the blood, a tetrachilin test is used according to the method of N. Irlina. in modification [13], based on the assessment of the viability of microorganisms under the influence of the tested serum.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности и значению получаемого результата является способ выявления эндотоксинов с помощью Люмулюс-теста [14], позволяющий косвенно судить о степени нейротоксичности сыворотки крови больных с заболеваниями печени по содержанию в ней липополисахаридного эндотоксина, взятый в качестве прототипа [15]. Closest to the invention according to the technical nature and significance of the result obtained is a method for detecting endotoxins using the Lumulus test [14], which allows indirectly judge the degree of neurotoxicity of the blood serum of patients with liver diseases by the content of lipopolysaccharide endotoxin in it, taken as a prototype [15 ].
Способ-прототип основан на том, что под действием эндотоксина у Limulus polyphemus происходит ферментативное превращение тромбообразующего протеина, которое ведет к фатальной внутрисосудистой коагуляции. Тестируемая сыворотка крови предварительно обрабатывается хлорной кислотой (НСlO4) [16]. Набор для проведения анализа включает лиэат из клеток крови Limulus polyphemus и хромогенный субстрат (синтетический субстрат для тромбообразующего протеина с присоединенным к нему хромофором - паранитроанилином, который отщепляется под действием активированного эндотоксином тромбообразующего протеина).The prototype method is based on the fact that, under the action of endotoxin, Limulus polyphemus undergoes an enzymatic transformation of a thrombus-forming protein, which leads to fatal intravascular coagulation. The test blood serum is pretreated with perchloric acid (HClO 4 ) [16]. The analysis kit includes a blood cell lyate Limulus polyphemus and a chromogenic substrate (a synthetic substrate for a thrombogenic protein with a chromophore attached to it - paranitroaniline, which is cleaved by the action of an endotoxin-activated thrombogenic protein).
При проведении анализа смешивают обработанную сыворотку крови, лизат и хромогенный субстрат, смесь инкубируют, последовательно обрабатывают нитритом натрия, сульфитом аммония, 1-нафтилендиамина гидрохлоридом и измеряют оптическую плотность раствора, содержащего продукты реакции диазосочетания. По величине оптической плотности определяют концентрацию эндотоксина в тестируемой сыворотке крови [17]. During the analysis, the processed blood serum, lysate and chromogenic substrate are mixed, the mixture is incubated, sequentially treated with sodium nitrite, ammonium sulfite, 1-naphthylenediamine hydrochloride and the optical density of the solution containing the diazocomposition reaction products is measured. By the value of optical density, the concentration of endotoxin in the tested blood serum is determined [17].
Показано, что частота выявления эндотоксина с помощью Люмулюс-теста и его количество увеличиваются при прогрессировании заболеваний печени и при появлении различных осложнений (кровотечение из расширенных вен пищевода, асцит, энцефалопатия). Стадии энцефалопатии связываются с конкретными цифрами эндотоксемии, определяемыми хромогенным Люмулюс-тестом [18]. Однако Люмулюс-тест позволяет оценить вклад только одного фактора в развитие поражения нервной системы при дисфункции печени, в то время как в патогенезе таких поражений доказана роль гипераммонийемии, аутоиммунных нарушений и других факторов. Выявление эндотоксина с помощью Люмулюс-теста напрямую не позволяет оценить степень нейротоксичности сыворотки крови. It was shown that the frequency of detecting endotoxin using the Lumulus test and its amount increase with the progression of liver diseases and with the appearance of various complications (bleeding from dilated veins of the esophagus, ascites, encephalopathy). The stages of encephalopathy are associated with specific numbers of endotoxemia determined by the chromogenic Lumulus test [18]. However, the Lumulus test allows us to assess the contribution of only one factor to the development of damage to the nervous system during liver dysfunction, while the role of hyperammonemia, autoimmune disorders, and other factors in the pathogenesis of such lesions is proved. The detection of endotoxin using the Lumulus test directly does not allow to assess the degree of neurotoxicity of blood serum.
Кроме того, несмотря на высокую чувствительность (до 10 пг/мл эндотоксина) и реактогенность, Люмулюс-тест обладает целым рядом недостатков [12, 15, 19]:
- дозозависимое ингибирование реакции при применении антикоагулянтов;
- изменение результатов реакции при употреблении жирной пищи;
- возможность получения ложноположительного результата при взаимодействии компонентов реакции с фибриногеном и в результате формирования комплексов с липопротеинами плазмы, а также при появлении в крови β-глюкана;
- возможность получения ложноотрицательного результата в результате неспецифической амидолитической активности плазмы;
- необходимость предварительной обработки сыворотки крови (нагревание, разведение, обработка НСlO4) для уменьшения вероятности ложных результатов;
- отсутствие отечественной сырьевой базы и высокая стоимость набора тест-системы Люмулюс-теста, составляющая около 70 долларов США.In addition, despite the high sensitivity (up to 10 pg / ml endotoxin) and reactogenicity, the Lumulus test has a number of disadvantages [12, 15, 19]:
- dose-dependent inhibition of the reaction with the use of anticoagulants;
- change in the results of the reaction when eating fatty foods;
- the possibility of obtaining a false-positive result in the interaction of reaction components with fibrinogen and as a result of the formation of complexes with plasma lipoproteins, as well as when β-glucan appears in the blood;
- the possibility of obtaining a false negative result as a result of nonspecific amidolytic activity of the plasma;
- the need for pre-treatment of blood serum (heating, dilution, processing HclO 4 ) to reduce the likelihood of false results;
- the lack of a domestic raw material base and the high cost of a set of test system Lumulus test, amounting to about 70 US dollars.
Целью изобретения является создание способа оценки нейротоксичности сыворотки крови больных с диффузным поражением печени для прогнозирования развития и выяснения причин расстройств функций периферической нервной системы при коррекции проводимой лечебной терапии. The aim of the invention is to provide a method for assessing the neurotoxicity of blood serum of patients with diffuse liver damage to predict the development and elucidate the causes of disorders of the functions of the peripheral nervous system in the correction of therapeutic therapy.
Оценку нейротоксичности сыворотки крови больных производили на переживающем препарате седалищного нерва декапитированных лягушек, помещенном в модифицированный раствор Рингера (модификация для холоднокровных [20]). Assessment of the neurotoxicity of the blood serum of patients was performed on a surviving sciatic nerve preparation of decapitated frogs placed in a modified Ringer's solution (modification for cold-blooded [20]).
Выделение седалищного нерва и подготовку препарата для исследований выполняли по стандартному алгоритму [21, 22], включающему последовательное выполнение декапитации лягушки, иссечение пояса верхних конечностей кожи с последующим удалением брюшного органокомплекса и продольным рассечением позвоночника пополам. Из подготовленного костномышечного препарата выделяли седалищный нерв на бедре. После препаровки седалищный нерв пересекали острой бритвой ниже разветвления на мало- и большеберцовый нервы. Органокомплекс позвоночника и седалищного нерва помещали на предметное стекло в раствор Рингера, после чего нерв при помощи острых препаровальных игл расщепляли поволоконно под визуальным контролем с помощью бинокулярной лупы при увеличении х40-80. Разволокненный нерв размещали на предметном стекле, поперечно направлению нерва помещали 3-4 волокна стекловаты, нерв накрывали сверху покровным стеклом размером 18•18 мм, отсекали части нерва, выступающие за покровное стекло. Таким образом, между предметным и покровным стеклами создавали микрокамеру, содержащую раствор Рингера, глубина которой определялась толщиной волокон стекловаты. Для смены содержимого камеры на противоположные края покровного стекла помещали прямоугольные кусочки сухой и смоченной раствором Рингера фильтровальной бумаги размером 1 см2, создавая на покровном стекле проточную систему для переживания нервного волокна. Качество приготовленного препарата седалищного нерва оценивали под микроскопом при помощи фазовоконтрастного устройства, а также контролировали отсутствие реакции волокон нерва на смену раствора Рингера.Sciatic nerve isolation and preparation of the preparation for studies were performed according to the standard algorithm [21, 22], including sequential decapitation of the frog, excision of the upper limb of the skin, followed by removal of the abdominal organ complex and longitudinal dissection of the spine in half. The sciatic nerve on the thigh was isolated from the prepared bone-muscle preparation. After preparation, the sciatic nerve was crossed with an acute razor below the branching on the tibial nerves. The organocomplex of the spine and sciatic nerve was placed on a glass slide in Ringer's solution, after which the nerve was split using sharp dissecting needles using a binocular magnifier under visual control with a magnification of x40-80. The fibered nerve was placed on a glass slide, 3-4 glass wool fibers were placed transversely to the nerve direction, the nerve was covered from above with a glass cover measuring 18 x 18 mm, and the parts of the nerve protruding beyond the coverslip were cut off. Thus, between the slide and the cover slip, a micro-chamber was created containing Ringer's solution, the depth of which was determined by the thickness of the glass wool fibers. To change the contents of the chamber, rectangular pieces of dry and wetted Ringer's solution of filter paper 1 cm 2 in size were placed on opposite edges of the coverslip, creating a flow system on the cover glass for experiencing nerve fiber. The quality of the prepared preparation of the sciatic nerve was evaluated under a microscope using a phase-contrast device, and the absence of the reaction of nerve fibers to a change in Ringer's solution was monitored.
Тестируемую сыворотку крови больных разводили раствором Рингера в соотношении 1:5 для нивелирования возможного осмотического эффекта на нервные волокна лягушки. The test blood serum of patients was diluted with Ringer's solution in a ratio of 1: 5 to level the possible osmotic effect on the frog nerve fibers.
Разведенную сыворотку вводили в проточную систему через 30 мин после адаптации нервов в растворе Рингера, посредством накапывания ее на фильтровальную бумагу с одной стороны покровного стекла. Быстрая смена среды достигалась быстрой сменой фильтровальной бумаги с другой стороны покровного стекла. Diluted serum was introduced into the flow system 30 minutes after the adaptation of nerves in Ringer's solution by dropping it onto filter paper on one side of a coverslip. A quick change of medium was achieved by a quick change of filter paper on the other side of the coverslip.
Определение нейротоксичности сыворотки крови проводили путем сравнительного изучения микроскопических изменений волокон седалищного нерва с использованием следующих контрольных образцов:
1. седалищных нервов лягушки, которые переживали в течение всего времени в растворе Рингера, препараты которых готовили из контралатеральной конечности при каждом исследовании;
2. седалищных нервов, которые переживали в растворе Рингера с добавлением сыворотки крови людей без клинических и лабораторных признаков патологии печени. Контрольные образцы допустимо тестировать не реже одного раза в неделю и при приготовлении нового раствора Рингера.The determination of serum neurotoxicity was carried out by a comparative study of microscopic changes in sciatic nerve fibers using the following control samples:
1. sciatic nerves of frogs that experienced during the whole time in Ringer's solution, preparations of which were prepared from the contralateral limb in each study;
2. sciatic nerves that experienced in Ringer's solution with the addition of blood serum of people without clinical and laboratory signs of liver pathology. Control samples can be tested at least once a week and when preparing a new Ringer's solution.
Изменения нервов оценивали по результатам непосредственного визуального наблюдения и по данным серийной фотосъемки, которую проводили в течение 2,5 ч переживания при помощи микроскопа, оборудованного фазовоконтрастным устройством. Изменения нервов оценивали через каждые 30 мин эксперимента. Выполняли трехкратное испытание одного образца сыворотки на седалищных нервах разных лягушек. Nerve changes were evaluated by direct visual observation and by serial photography, which was carried out for 2.5 hours of experience with a microscope equipped with a phase-contrast device. Nerve changes were evaluated every 30 minutes of the experiment. A triple test of one serum sample was performed on the sciatic nerves of different frogs.
Критериями оценки служили выраженность и динамика изменений структурных элементов нервного волокна, приведенные в таблице. The evaluation criteria were the severity and dynamics of changes in the structural elements of the nerve fiber shown in the table.
Появление признаков нарушения проведения по волокну (нарушение непрерывности осевого цилиндра, значительное набухание перикариона леммоцита со сдавлением осевого цилиндра, расширение щели перехвата, появление "вторичного" конуса перехвата, значительное набухание и расслоение миелиновых ламелл) свидетельствовало о возможности развития периферической нейропатии и необходимости ее предупреждения или коррекции. The appearance of signs of impaired conduction along the fiber (violation of the continuity of the axial cylinder, significant swelling of the pericarion of the lemmocyte with compression of the axial cylinder, the expansion of the interception gap, the appearance of a “secondary” interception cone, significant swelling and stratification of myelin lamellae) indicated the possibility of developing peripheral neuropathy and the need to prevent it or correction.
Возможность постижения цели изобретения доказывается следующими примерами. The ability to achieve the objectives of the invention is proved by the following examples.
Пример 1. Example 1
Взята сыворотка крови обследованного здорового человека, у которого не обнаружено признаков периферической нейропатии и который никогда не страдал заболеваниями печени. The blood serum of the examined healthy person was taken, who did not show signs of peripheral neuropathy and who never suffered from liver diseases.
При наблюдении за перехватами Ранвье (фиг.1а) выявлено незначительное набухание миелиновых ламелл луковиц перехвата к окончанию времени переживания. В более поздние сроки наблюдения отмечено усиление четкости краевой линии волокна в области щели перехвата без увеличения ее размеров. When observing the Ranvier intercepts (Fig. 1a), a slight swelling of the myelin lamellae of the interception bulbs was revealed by the end of the experience. In later periods of observation, an increase in the sharpness of the edge line of the fiber in the region of the interception gap was noted without increasing its size.
При наблюдении за перикарионом леммоцита и прилежащей к нему части волокна (фиг.1б) установлено незначительное набухание ламелл миелина на стороне перикариона, которое появлялось через 1.4 часа после введения сыворотки крови. Изменения соотношения размеров перикариона, миелиновой оболочки и осевого цилиндра не отмечено. Непрерывность осевого цилиндра не нарушалась во все сроки наблюдения. When observing the pericarion of the lemmocyte and the adjacent portion of the fiber (Fig. 1b), a slight swelling of the myelin lamellae was found on the side of the pericarion, which appeared 1.4 hours after the introduction of blood serum. No change in the size ratio of the pericarion, myelin sheath, and axial cylinder was noted. The continuity of the axial cylinder was not violated at all times of observation.
Пример 2. Example 2
Для оценки нейротоксичности взята сыворотка крови больной Б. Диагноз заболевания - хронический вирусный гепатит. Приблизительная продолжительность клинически выраженного заболевания - 1.5 года. Симптомы энцефалопатии (нарушения сна, нарушения памяти, спутанность сознания, расстройства личности, расстройства речи, нарушения зрения) не выражены. По результатам лабораторного исследования цитолитические процессы в печени незначительно выражены (активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) 82 ЕД/л, γ-глутанилтрансферазы (ГГТП) 54 ЕД/л, лактатдегидрогеназы (ЛДГ) 521 ME, щелочной фосфатазы (ЩФ) 233 Ед, содержание общего билирубина 17,22 мкммоль/л), отмечается диспротеинемия. Больная отмечает покалывание в дистальных отделах нижних конечностей, зябкость нижних конечностей, при неврологическом исследовании выявлены нарушения чувствительности в виде гипо- и парастезий в дистальных отделах нижних конечностей и снижение чувствительности на верхних конечностях на участках, расположенных в виде пятен. To assess neurotoxicity, the blood serum of patient B. was taken. The diagnosis of the disease is chronic viral hepatitis. The approximate duration of a clinically expressed disease is 1.5 years. Symptoms of encephalopathy (sleep disturbances, memory impairments, confusion, personality disorders, speech disorders, visual impairment) are not expressed. According to the results of a laboratory study, cytolytic processes in the liver are slightly expressed (the activity of alanine aminotransferase (ALT) 82 IU / l, γ-glutanyl transferase (GGTP) 54 IU / l, lactate dehydrogenase (LDH) 521 ME, alkaline phosphatase (ALP) 233 IU, the content of total bilirubin 17.22 μmol / L), dysproteinemia is noted. The patient notes tingling in the distal parts of the lower extremities, coldness of the lower extremities, neurological examination revealed impaired sensitivity in the form of hypo- and parasthesia in the distal parts of the lower extremities and a decrease in sensitivity in the upper extremities in areas located as spots.
При сравнении изменений перехватов Ранвье, которые переживали в растворе Рингера, и перехватов, которые переживали в растворе Рингера с добавлением сыворотки крови больной Б. (фиг.2а), было отмечено, что в то время как в первом случае перехваты за 2,5 часа менялись незначительно (слабое набухание миелиновых ламелл), то во втором случае отмечалось значительное набухание и расслоение ламелл луковиц перехватов, появление вторичных миелиновых конусов и заметное расширение щели перехвата и усиление ее размытости соответственно примерно через 0,5 часа и 1,5 часа после введения сыворотки крови. When comparing changes in Ranvier intercepts that were experienced in Ringer's solution and interceptions that were experienced in Ringer's solution with the addition of blood serum of patient B. (Fig. 2a), it was noted that while in the first case the intercepts took 2.5 hours changed insignificantly (weak swelling of the myelin lamellae), then in the second case there was a significant swelling and stratification of the lamellae of the intercept bulbs, the appearance of secondary myelin cones and a noticeable expansion of the interception gap and an increase in its blur after about 0.5 hours and 1.5 hours after administration of blood serum.
Изменений перикариона леммоцитов в первом случае практически не наблюдалось. Несколько набухший перикарион сохранялся в течение всего времени наблюдения. Во втором случае (фиг.2б) в течение всего времени наблюдения общий диаметр волокна и перикариона практически не менялся. Размеры перикариона не изменились, в то время как значительно уменьшился диаметр осевого цилиндра. Увеличилась толщина миелиновой оболочки с противоположной перикариону стороны волокна. Произошло расслоение миелиновых ламелл волокна на стороне, прилежащей к перикариону. Changes in the pericarion of lemmocytes in the first case were practically not observed. A somewhat swollen pericarion persisted throughout the observation period. In the second case (figb) during the entire observation time, the total diameter of the fiber and pericarion practically did not change. The size of the pericarion has not changed, while the diameter of the axial cylinder has significantly decreased. The thickness of the myelin sheath on the opposite side of the pericarion of the fiber increased. There was a stratification of myelin lamellae on the side adjacent to the pericarion.
Изменения перехватов и леммоцитов были неодинаково выражены по ходу нервного волокна. Changes in interceptions and lemmocytes were unevenly expressed along the nerve fiber.
В данном примере видно, что отсутствие признаков энцефалопатии и приведенные клинические данные о состоянии периферической нервной системы не могут свидетельствовать об отсутствии периферической нейропатии. С применением заявляемого способа выявлена возможность поражения периферической нервной системы, которое заслуживает внимания. Лечебная коррекция состояния прежде всего должна быть связана с нормализацией функции печени. In this example, it is seen that the absence of signs of encephalopathy and the clinical data presented on the state of the peripheral nervous system cannot indicate the absence of peripheral neuropathy. Using the proposed method revealed the possibility of damage to the peripheral nervous system, which deserves attention. Therapeutic correction of the condition should primarily be associated with the normalization of liver function.
Пример 3. Example 3
Для оценки нейротоксичности взята сыворотка крови больного С. Клинический диагноз заболевания - цирроз печени, портальная гипертензия (варикозно расширенные вены пищевода III степени), рецидивирующее кровотечение, постгеморрагическая анемия, состояние после эмболизации селезеночной вены. Продолжительность заболевания - примерно 4 года. У больного найдены признаки энцефалопатии, в том числе прогрессирующее в последнее время нарушение зрения, неустойчивость в позе Ромберга. Отмечена заторможенность больного. У пациента найдены клинические признаки периферической нейропатии (парастезии в виде "мурашек", "ватность" ног, особенно по утрам). При неврологическом исследовании были найдены расстройства чувствительности по типу гипостезии на кончиках пальцев нижних конечностей, отмечено появление патологических рефлексов. По результатам лабораторного исследования крови больного установлено, что цитолитические процессы в печени незначительно выражены (АЛТ 82 ЕД/л, содержание общего билирубина 18,45 мкммоль/л), наруен белково-азотистый обмен (снижено количество альбумина, отмечена диспротеинемия). To assess neurotoxicity, the blood serum of patient C. was taken. The clinical diagnosis of the disease is cirrhosis of the liver, portal hypertension (varicose veins of the esophagus, grade III), recurrent bleeding, posthemorrhagic anemia, and the state after splenic vein embolization. The duration of the disease is approximately 4 years. The patient found signs of encephalopathy, including recent progressive visual impairment, instability in the Romberg position. Inhibition of the patient is noted. The patient found clinical signs of peripheral neuropathy (parasthesia in the form of "goose bumps", "cottoniness" of the legs, especially in the morning). In a neurological study, sensitivity disorders were found by the type of hyposthesia at the fingertips of the lower extremities, the appearance of pathological reflexes was noted. According to the results of a laboratory study of the patient’s blood, it was found that cytolytic processes in the liver are slightly expressed (ALT 82 U / l, total bilirubin content of 18.45 μmol / l), protein-nitrogen metabolism is violated (the amount of albumin is reduced, dysproteinemia is noted).
При сравнении изменений перехватов Ранвье, которые переживали в растворе Рингера, и перехватов, которые переживали в растворе Рингера с добавлением сыворотки крови больного С. (фиг.3а), было отмечено, что в то время как в первом случае перехваты за 2,5 часа менялись незначительно (слабое набухание миелиновых ламелл), во втором случае произошло набухание волокна в области луковиц перехвата, в конечные сроки наблюдения началось формирование вторичного конуса одной из луковиц. Через 1 час 15 минут после введения сыворотки крови больного отмечено расслоение миелиновых ламелл конуса перехвата. When comparing changes in Ranvier intercepts that were experienced in Ringer's solution and interceptions that were experienced in Ringer's solution with the addition of blood serum of patient C. (Fig. 3a), it was noted that while in the first case the intercepts took 2.5 hours changed insignificantly (weak swelling of myelin lamellae), in the second case, fiber swelling occurred in the area of interception bulbs, and at the final observation time the formation of the secondary cone of one of the bulbs began. 1 hour 15 minutes after the administration of the patient's blood serum, a stratification of the myelin lamellae of the interception cone was noted.
Изменений перикариона леммоцитов в первом случае практически не наблюдалось (несколько набухший перикарион сохранялся в течение всего времени наблюдения). Во втором случае в течение всего времени наблюдения, начиная с 30 минут после введения сыворотки крови больного С. (фиг.3б), происходило набухание перикариона леммоцита и насечки Шмидта-Лантермана, которая располагалась на противоположной перикариону стороне волокна. Параллельно происходило уменьшение диаметра осевого цилиндра на участке между перикарионом и насечкой. Через 2 часа после введения сыворотки крови нарушалась непрерывность осевого цилиндра. In the first case, there were practically no changes in the pericarion of lemmocytes (a somewhat swollen pericarion persisted throughout the entire observation period). In the second case, during the entire observation period, starting from 30 minutes after the administration of the blood serum of patient C. (Fig.3b), the pericarion of the lemmocyte and the Schmidt-Lanterman notch swelled, which was located on the opposite side of the fiber. In parallel, there was a decrease in the diameter of the axial cylinder in the area between the pericarion and the notch. 2 hours after the introduction of blood serum, the continuity of the axial cylinder was disrupted.
В представленном примере показано, что сыворотка крови больного С. обладает выраженным токсическим действием на периферические нервы, что проявляется не только в нарушении проведения по волокну, но и в полном перерыве осевого цилиндра. Косвенно о токсическом поражении нервной системы свидетельствуют клинические признаки поражения периферических нервов и выраженная энцефалопатия. Таким образом, приведенные примеры показывают, что, несмотря на разведение сыворотки, сохраняются ее токсические свойства в отношении периферических нервов, что может свидетельствовать о неосмотическом механизме поражения. Поскольку изменения в седалищном нерве лягушки появляются в течение 2,5 часов переживания в сыворотке крови больных, то можно предположить, что постоянное пребывание в подобной среде обусловит появление у больных еще более выраженных изменений. In the presented example, it is shown that the blood serum of patient C. has a pronounced toxic effect on the peripheral nerves, which is manifested not only in violation of the fiber, but also in a complete break of the axial cylinder. Clinical signs of peripheral nerve damage and severe encephalopathy indirectly indicate toxic damage to the nervous system. Thus, the above examples show that, despite the dilution of serum, its toxic properties against peripheral nerves are preserved, which may indicate a neosmotic mechanism of damage. Since changes in the sciatic nerve of the frog appear within 2.5 hours of experiencing in the blood serum of patients, it can be assumed that a constant stay in such an environment will cause the appearance of even more pronounced changes in patients.
Выполнение описанного алгоритма действий приводит к определению нейротоксичности сыворотки крови больных с диффузными хроническими заболеваниями печени, причем критерием изменений периферических нервов является морфологическая оценка сохранности или нарушения структуры нервного волокна. The implementation of the described algorithm of actions leads to the determination of the neurotoxicity of the blood serum of patients with diffuse chronic liver diseases, and the criterion for changes in peripheral nerves is a morphological assessment of the safety or impairment of the structure of the nerve fiber.
Заявляемое изобретение удовлетворяет критерию "новизна", так как впервые предложен способ комплексного определения нейротоксичности сыворотки крови больных с заболеваниями печени, который предполагает не оценку косвенных данных, а изучение непосредственной реакции живого нервного волокна. The claimed invention meets the criterion of "novelty", since the first proposed method for the comprehensive determination of the neurotoxicity of blood serum of patients with liver diseases, which involves not assessing indirect data, but the study of the direct reaction of living nerve fiber.
Заявляемое изобретение удовлетворяет критерию "изобретательский уровень", так как в нем не используются известные технические решения. По сравнению с известным способом-прототипом для оценки возможности сыворотки крови вызывать токсические изменения нервной системы используется прямое наблюдение за реакцией нервного волокна, в отличие от определения токсических свойств по косвенному показателю в способе-прототипе (определение концентрации эндотоксина в сыворотке крови). В отличие от способа-прототипа, оценивается влияние на периферические нервы не одного, а всех токсичных факторов сыворотки крови больного. The claimed invention meets the criterion of "inventive step", since it does not use well-known technical solutions. Compared with the known prototype method, direct monitoring of the reaction of the nerve fiber is used to assess the ability of blood serum to cause toxic changes in the nervous system, in contrast to the determination of toxic properties by an indirect indicator in the prototype method (determination of the concentration of endotoxin in blood serum). In contrast to the prototype method, the effect on the peripheral nerves of not one but all toxic factors of the patient's blood serum is evaluated.
Соответствие критерию "пригодность для промышленного применения" доказывается результатами приведенных исследований, из которых видно, что изобретение может широко применяться в лабораторной практике, поскольку метод определения очень прост и может быть реализован в любой морфологической лаборатории специалистами, имеющими представление о ведении морфологических исследований. Compliance with the criterion of "suitability for industrial use" is proved by the results of the above studies, from which it can be seen that the invention can be widely used in laboratory practice, since the determination method is very simple and can be implemented in any morphological laboratory by specialists with knowledge of morphological studies.
Источники информации
1. Коновалов Н.В. Гепато-церебральная дистрофия. - М.: Медгиз, 1960. - 136 с.Sources of information
1. Konovalov N.V. Hepato-cerebral dystrophy. - M .: Medgiz, 1960 .-- 136 p.
2. Гайворонский И.В., Чепур С.В. Портальная гипертензия: морфофункциональное исследование. - СПб.: Сезар, 1997. - 130 с. 2. Gaivoronsky I.V., Chepur S.V. Portal hypertension: a morphofunctional study. - St. Petersburg: Cesar, 1997 .-- 130 p.
3. Gentle S. , Perretti A., Persico М. et al. Clinical and electrophysiological stydu on peripheral neuropathy in liver cirrhosis // J. Hepatol. - 1995. - Vol. 23, N 3. - P. 248-252. 3. Gentle S., Perretti A., Persico M. et al. Clinical and electrophysiological stydu on peripheral neuropathy in liver cirrhosis // J. Hepatol. - 1995. - Vol. 23, N 3. - P. 248-252.
4. Knill-Jones R., Goodwill С., Dayan A. et al. Peripheral neuropathy in сhronical liver disease: clinical, electrodiagnostic and nerve biopsy findings // Neurol. Neurosurg. Psychiat. -1972. - Vol. 35, N 1. - P. 22-30. 4. Knill-Jones R., Goodwill C., Dayan A. et al. Peripheral neuropathy in chronic liver disease: clinical, electrodiagnostic and nerve biopsy findings // Neurol. Neurosurg. Psychiat. -1972. - Vol. 35, N 1. - P. 22-30.
5. Мiralles R., Espadalir J. Autonomic neuropathy in chronic alcoholism: evaluation of cardiovascular, pupillary and symptoms skin responses // J. Eur. Neurol. - 1995. - Vol. 35, N 5 - P. 287-292. 5. Miralles R., Espadalir J. Autonomic neuropathy in chronic alcoholism: evaluation of cardiovascular, pupillary and symptoms skin responses // J. Eur. Neurol. - 1995. - Vol. 35, N 5 - P. 287-292.
6. Подымова С.Д. Болезни печени: Руководство для врачей. -3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. - 704 с. 6. Podymova S.D. Liver Disease: A Guide for Physicians. 3rd ed., Revised. and add. - M .: Medicine, 1998 .-- 704 p.
7. Fulenwider J. Т., Sibley С., Stein S. F. et al. Endotoxaemia of cirrhosis: an observation not substantiated // Gastroenterology. - 1980. - Vol. 78, N 5. - P. 1001-1004. 7. Fulenwider J. T., Sibley C., Stein S. F. et al. Endotoxaemia of cirrhosis: an observation not substantiated // Gastroenterology. - 1980. - Vol. 78, N 5. - P. 1001-1004.
8. McCabe W. R. Endotoxin: niorobiological, chemical, pathophysiologic and clinical correlation // Semin. Infect. Dis. -1980. - Vol. 3, N 1. - P. 38-88. 8. McCabe W. R. Endotoxin: niorobiological, chemical, pathophysiologic and clinical correlation // Semin. Infect. Dis. -1980. - Vol. 3, N 1. - P. 38-88.
9. Schussler P., Eisenburg J., Kruis W. et al. New aspects of the value of endotoxins in various gastrointestinal diseases // Fortschr. Mod. - 1978. - Vol. 98, N 41(2). - P. 2059-2083. 9. Schussler P., Eisenburg J., Kruis W. et al. New aspects of the value of endotoxins in various gastrointestinal diseases // Fortschr. Mod. - 1978. - Vol. 98, N 41 (2). - P. 2059-2083.
10. Shiratori Y., Takikawa H., Кawase Т. et al. Superoxide anion generating capacity and lysosomal enzyme activities of Kupffer cells in galactosamine induced hepatitis // Gastroente-rol. Jpn. - 1986. - Vol. 21, N 2. - P. 135-144. 10. Shiratori Y., Takikawa H., Kawase, T. et al. Superoxide anion generating capacity and lysosomal enzyme activities of Kupffer cells in galactosamine induced hepatitis // Gastroente-rol. Jpn. - 1986. - Vol. 21,
11. Menforte R. , Estruch R., Valls-Sol S. et al. Autonomic and peripheral neuropathies in patient with chronic alcoholism. A doserelated tonic effect of alcohol // Arch. Neurol. - 1995. -Vol. 52, N 1. - P. 45-51. 11. Menforte R., Estruch R., Valls-Sol S. et al. Autonomic and peripheral neuropathies in patient with chronic alcoholism. A doserelated tonic effect of alcohol // Arch. Neurol. - 1995. -Vol. 52, N 1. - P. 45-51.
12. Sveen К. , Hofstad Т. , Milner К.С. Lethality for mice and chick embryos, pyrogenicity in rabbits and ability to gelate lysate from amoebocytes of Limulus polyphemus by lypopolysaccharides from Bacteroides, Fusobacterium and Veillonella // Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. - 1997. - Vol. 85, N 4. - P. 388-396. 12. Sveen K., Hofstad T., Milner K.S. Lethality for mice and chick embryos, pyrogenicity in rabbits and ability to gelate lysate from amoebocytes of Limulus polyphemus by lypopolysaccharides from Bacteroides, Fusobacterium and Veillonella // Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. - 1997. - Vol. 85, N 4. - P. 388-396.
13. Полозова Е.В. Обоснование применения эмульсии перфторуглеродов для лечения эндотоксикоза при острых отравлениях карбофосом и психотропными лекарственными препаратами: Автореф. дисс. канд. мед. наук. - СПб, 2000. - 22 с. 13. Polozova E.V. The rationale for the use of perfluorocarbon emulsion for the treatment of endotoxemia in acute poisoning with malathion and psychotropic drugs: Abstract. diss. Cand. honey. sciences. - St. Petersburg, 2000 .-- 22 p.
14. Cooper J.F., Pearson S.M. Detection of endotoxin in biological products by the limulus test // Dev. Biol. Stand. 1977. - Vol. 34. N 1. - P. 7-13. 14. Cooper J.F., Pearson S.M. Detection of endotoxin in biological products by the limulus test // Dev. Biol. Stand. 1977. - Vol. 34. N 1. - P. 7-13.
15. Hurley J. C. Endotoxemia: methods of detection and clinical correlates//clin. Microbiol. Rev.-1995.-Vol.8, 2. - P 268-292. 15. Hurley J. C. Endotoxemia: methods of detection and clinical correlates // clin. Microbiol. Rev.-1995.-Vol.8, 2.- P 268-292.
16. Tamura H., Obayashi T., Takagi K. et al. Perchloric acid treatment of human blood for quantitative endotoxin assay using synthetic сhromogenic substrate for horseshoe crab clotting enzyme // Thromb. Res. - Vol. 27, N1. - P. 51-57. 16. Tamura H., Obayashi T., Takagi K. et al. Perchloric acid treatment of human blood for quantitative endotoxin assay using synthetic chromogenic substrate for horseshoe crab clotting enzyme // Thromb. Res. - Vol. 27, N1. - P. 51-57.
17. Yajima Y., Fukuda I., Otsuki M. et al. Endotoxemia in liver diseases: detection by a quantitative assay using chromogenic substrate with perchloric acid pretreatment // J. Exp. Med. - 1985. - Vol. 147, N. 4. - P. 411-419. 17. Yajima Y., Fukuda I., Otsuki M. et al. Endotoxemia in liver diseases: detection by a quantitative assay using chromogenic substrate with perchloric acid pretreatment // J. Exp. Med. - 1985. - Vol. 147, N. 4. - P. 411-419.
18. Bigatello L.M., Broitman S. A., Fattori L. et al. Endotoxemia, encephalopathy and mortality in cirrhotic patients // Am. J. Gastroenterol. - 1987. - Vol. 82, N 1. - P. 11-15. 18. Bigatello L. M., Broitman S. A., Fattori L. et al. Endotoxemia, encephalopathy and mortality in cirrhotic patients // Am. J. Gastroenterol. - 1987. - Vol. 82, N 1. - P. 11-15.
19. Nakao A., Yasui M., Kawagoe Т. et al. False-positive endotoxemia derives from gauze glucan after hepatectomy for he-patocellular carcinoma with cirrhosis // Hepatogastroenterology. - 1997. - Vol. 44, N 5. - P. 1413-1418. 19. Nakao A., Yasui M., Kawagoe, T. et al. False-positive endotoxemia derives from gauze glucan after hepatectomy for he-patocellular carcinoma with cirrhosis // Hepatogastroenterology. - 1997. - Vol. 44, N 5. - P. 1413-1418.
20. Блаттнер Р. , Классен X., Денерт X. и др. Эксперименты на изолированных препаратах гладких мышц. - M.: Мир, 1983. - 206 с. 20. Blattner R., Klassen X., Denert X. et al. Experiments on isolated preparations of smooth muscles. - M .: Mir, 1983 .-- 206 p.
21. Сотников О. С. Функциональная морфология живого мякотного нервного волокна. - Л.: Наука, 1978. - 99 с. 21. Sotnikov O.S. Functional morphology of live pulp nerve fiber. - L .: Nauka, 1978.- 99 p.
22. Сотников О.С. Динамика структуры живого нейрона. - Л.: Наука, 1985. - 159 с. 22. Sotnikov O.S. The dynamics of the structure of a living neuron. - L .: Nauka, 1985 .-- 159 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000118015/14A RU2194983C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000118015/14A RU2194983C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000118015A RU2000118015A (en) | 2002-07-20 |
| RU2194983C2 true RU2194983C2 (en) | 2002-12-20 |
Family
ID=20237507
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000118015/14A RU2194983C2 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2194983C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2238568C1 (en) * | 2003-11-06 | 2004-10-20 | Государственное образовательное учреждение Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова | Method for predicting hepatitis syndrome in patients with chronic renal failure at chronic hemodialysis |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1364984A1 (en) * | 1985-05-05 | 1988-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт общей и судебной психиатрии им.В.П.Сербского | Method of diagnostics of acute alcoholic psychosis |
| SU1476382A1 (en) * | 1987-03-17 | 1989-04-30 | Тернопольский государственный медицинский институт | Method of analysing toxicity of blood serum |
| RU2104539C1 (en) * | 1995-06-23 | 1998-02-10 | Войсковая часть 61469 | Method for evaluating viability of liver's microsomatic system exposed to effect of alkylating-type xenobiotics |
| RU2125448C1 (en) * | 1991-12-20 | 1999-01-27 | Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети Термекек Дьяра РТ | Pharmaceutical composition and a method of its preparing, method of treatment of disorders caused by neurodegenerative processes |
| US5961470A (en) * | 1997-07-09 | 1999-10-05 | Wagner; David A. | Breath test for assessing hepatic function |
-
2000
- 2000-06-30 RU RU2000118015/14A patent/RU2194983C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1364984A1 (en) * | 1985-05-05 | 1988-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт общей и судебной психиатрии им.В.П.Сербского | Method of diagnostics of acute alcoholic psychosis |
| SU1476382A1 (en) * | 1987-03-17 | 1989-04-30 | Тернопольский государственный медицинский институт | Method of analysing toxicity of blood serum |
| RU2125448C1 (en) * | 1991-12-20 | 1999-01-27 | Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети Термекек Дьяра РТ | Pharmaceutical composition and a method of its preparing, method of treatment of disorders caused by neurodegenerative processes |
| RU2104539C1 (en) * | 1995-06-23 | 1998-02-10 | Войсковая часть 61469 | Method for evaluating viability of liver's microsomatic system exposed to effect of alkylating-type xenobiotics |
| US5961470A (en) * | 1997-07-09 | 1999-10-05 | Wagner; David A. | Breath test for assessing hepatic function |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Hurley J.C. Endotoxemis: methods of detection and clinical correlates Clin. Microbiol. Rev., 1985, v.8, N2, p.288-292. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2238568C1 (en) * | 2003-11-06 | 2004-10-20 | Государственное образовательное учреждение Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова | Method for predicting hepatitis syndrome in patients with chronic renal failure at chronic hemodialysis |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Campobasso et al. | Sudden cardiac death and myocardial ischemia indicators: a comparative study of four immunohistochemical markers | |
| Deb et al. | Lactated ringer’s solution and hetastarch but not plasma resuscitation after rat hemorrhagic shock is associated with immediate lung apoptosis by the up-regulation of the Bax protein | |
| Turkstra et al. | Reliable rapid blood test for the exclusion of venous thromboembolism in symptomatic outpatients | |
| Yilmaz et al. | Decreased plasma levels of soluble receptor for advanced glycation endproducts (sRAGE) in patients with nonalcoholic fatty liver disease | |
| Kodama et al. | Clinical features of hepatocellular carcinoma in nonalcoholic fatty liver disease patients without advanced fibrosis | |
| Aboelnasr et al. | Diabetic kidney disease in patients newly diagnosed with type-2 diabetes mellitus: incidence and associations | |
| Zografou et al. | Validation of neuropad in the assessment of peripheral diabetic neuropathy in patients with diabetes mellitus versus the Michigan neuropathy screening instrument, 10g monofilament application and biothesiometer measurement | |
| Che et al. | A case-based narrative review of pregnancy-associated atypical hemolytic uremic syndrome/complement-mediated thrombotic microangiopathy | |
| Hirooka et al. | Spleen stiffness in patients with chronic liver disease evaluated by 2‐D shear wave elastography with ultrasound multiparametric imaging | |
| RU2194983C2 (en) | Method for evaluating blood serum neurotoxicity in patients suffering from hepatic diseases | |
| Rafalska et al. | Stratifying risk for progression in IgA nephropathy: how to predict the future | |
| Schiavetti et al. | Venous thrombosis in children with solid tumors | |
| Angulo | Noninvasive assessment of fibrosis and steatosis in NASH and ASH | |
| Sakata et al. | Selective perimetry in glaucoma diagnosis | |
| Ibrahim et al. | Clinical profile of diabetic sensorimotor polyneuropathy in a tertiary hospital in Northwestern Nigeria | |
| Nouh et al. | The role of portal congestion index in prediction of esophageal varices in hepatitis C virus-infected patients | |
| Janssens | Recognizing and differentiating uncommon body fluids: considerations and tools for a proper practical approach | |
| Ali et al. | Detection of hemoglobinopathies in hypochromic, microcytic and sickeled cell blood films by hemoglobin electrophoresis | |
| RU2694531C1 (en) | Method for diagnosing lipidemia | |
| da Silva Franco et al. | Doppler ultrasonography: A non‐invasive method used to diagnose and follow up patients with chronic hepatitis C | |
| Marziah et al. | Correlation between platelet to lymphocyte ratio and coronary artery narrowing | |
| RU2749117C1 (en) | Method for prediction of risk of development of hepatocellular carcinoma in patients with chronic hepatitis c | |
| Cairo | Prevalence of NAFLD and cardiovascular risk assessment in patients with newly diagnosed of familial combined hyperlipidemia | |
| Frings et al. | High prevalence of metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease in patients with hidradenitis suppurativa: A guide to easily assess the clinical risk of comorbid liver disease | |
| Huang et al. | Acute Injury in Natural Diet-Induced Fatty Livers-A Model for Therapy Development |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060701 |