RU2166328C2

RU2166328C2 - Dry vaccine against reoviral thenosynovitis in chickens

Info

Publication number: RU2166328C2
Application number: RU99103910/13A
Authority: RU
Inventors: Р.Н. Коровин; Б.Б. Трефилов; Н.В. Никитина; Л.И. Явдошак; Т.И. Горецка; Т.И. Горецкая
Original assignee: Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства
Priority date: 1999-02-23
Filing date: 1999-02-23
Publication date: 2001-05-10

Abstract

FIELD: veterinary science. SUBSTANCE: vaccine has 45-70 wt.-% of viral suspension of the strain ВНИВИП-ДЕП with activity 6.0 lg ТСД₅₀ ТЦД₅₀, not less, and peptone protective medium, the balance. Peptone protective medium has the following components, wt. -%: peptone, 15-35; gelatin, 3-10 and sucrose, the balance. Vaccine for subcutaneous and oral immunization does not show residual reactivity but shows good, rapid and without separating into layers water solubility. Vaccine makes immunity against reoviral infection in 95-100% of chickens in industrial poultry farming. Invention is designated for prophylaxis of reoviral thenosynovitis in chickens. EFFECT: enhanced effectiveness of vaccine. 4 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к вакцине против реовирусного теносиновита кур. The invention relates to the field of veterinary virology, namely to a vaccine against chickens reovirus tenosinovitis.

В настоящее время меры борьбы с реовирусным теносиновитом кур в основном направлены на предотвращение реовирусной инфекции у суточных цыплят. Это осуществляется путем иммунизации племенного стада с передачей пассивного иммунитета потомству [1] . Однако наиболее эффективным способом является вакцинация самих цыплят живыми вакцинами. Currently, measures to control reovirus tenosynovitis of chickens are mainly aimed at preventing reovirus infection in day old chickens. This is done by immunizing the breeding herd with the transfer of passive immunity to offspring [1]. However, the most effective way is to vaccinate the chickens themselves with live vaccines.

Известна вакцина TAD REO BACI [2] против реовирусного теносиновита цыплят, полученная на основе штамма S 1133 и предназначенная для подкожного или внутримышечного введения. Вакцина содержит 80% вирусной суспензии и 20% защитной среды (стабилизатор), защитная среда представляет собой 5%-ный раствор lactose-phosphate. Вакцина эффективна в дозе не менее чем 10⁴ ТЦД₅₀.Known vaccine TAD REO BACI [2] against chickens reovirus tenosinovitis, obtained on the basis of strain S 1133 and intended for subcutaneous or intramuscular injection. The vaccine contains 80% of the viral suspension and 20% of the protective environment (stabilizer), the protective environment is a 5% solution of lactose-phosphate. The vaccine is effective in a dose of not less than 10 ⁴ TCD ₅₀ .

Основным недостатком этой вакцины является ее остаточная реактогенность и то, что необходимый уровень иммуногенности достигается лишь при ее индивидуальном введении. The main disadvantage of this vaccine is its residual reactogenicity and the fact that the necessary level of immunogenicity is achieved only with its individual administration.

В качестве прототипа выбрана вакцина V.A. CHICK VAC [3] против реовирусного теносиновита кур (производство фирмы SOLVAY DUPHAR) из штамма TSV 1133. Вакцина получена лиофилизацией вируссодержащей культуральной жидкости и предназначена для подкожного или внутримышечного введения. The V.A. vaccine was selected as a prototype. CHICK VAC [3] against chicken reovirus tenosynovitis (manufactured by SOLVAY DUPHAR) from strain TSV 1133. The vaccine was obtained by lyophilization of virus-containing culture fluid and is intended for subcutaneous or intramuscular administration.

Вакцина содержит на 1000 доз вирус теносиновита - 10^6,2 ЭИД₅₀ и защитную среду, которая включает, мг:
Пептон - 225
Сахароза - 150
Глутамат натрия - 15
Основными недостатками вакцины-прототипа являются те же недостатки, что и у приведенного выше аналога: остаточная реактогенность и то, что необходимый уровень иммуногенности достигается лишь при ее индивидуальном введении.The vaccine contains per 1000 doses of tenosinovitis virus - 10 ^6.2 EID ₅₀ and a protective environment, which includes, mg:
Peptone - 225
Sucrose - 150
Monosodium glutamate - 15
The main disadvantages of the prototype vaccine are the same disadvantages as the above analogue: residual reactogenicity and the fact that the necessary level of immunogenicity is achieved only when it is individually administered.

В основу изобретения поставлена комплексная задача создания универсальной иммуногенной вакцины против реовирусного теносиновита кур для подкожной и пероральной иммунизации, не обладающей остаточной реактогенностью и хорошо (быстро и без расслоений) растворимой в воде. The basis of the invention is the comprehensive task of creating a universal immunogenic vaccine against reoviral tenosinovitis of chickens for subcutaneous and oral immunization, which does not have residual reactogenicity and is readily (quickly and without delamination) soluble in water.

Поставленная задача решается тем, что в сухой вакцине против реовирусного теносиновита кур, содержащей вирусную суспензию и пептонную защитную среду, согласно изобретению в качестве вирусной суспензии используют вирусную суспензию штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТДЦ₅₀ при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Вирусная суспензия штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТДЦ₅₀ - 45-70
Пептонная защитная среда - Остальное
Наилучший результат достигается в случае, если пептонная защитная среда содержит пептон, желатин, сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пептон - 15-35
Желатин - 3-10
Сахароза - Остальное
Заявляемые свойства вакцины определяются в первую очередь наличием в ее составе вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀, а также соотношением ее ингредиентов. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов под номером "ВНИВИП-ДЕП".The problem is solved in that in a dry vaccine against rheovirus tenosinovitis of chickens containing a viral suspension and a peptone protective environment, according to the invention, a viral suspension of the strain VNIVIP-DEPT with an activity of at least 6.0 lg TDC _{50 is} used as a virus suspension in the following ratio of components, wt.%:
Viral suspension of strain VNIVIP-DEPT with activity of at least 6.0 lg TDC ₅₀ - 45-70
Peptone protective environment - Else
The best result is achieved if the peptone protective medium contains peptone, gelatin, sucrose in the following ratio of components, wt.%:
Peptone - 15-35
Gelatin - 3-10
Sucrose - Else
The claimed properties of the vaccine are determined primarily by the presence in its composition of a viral suspension of the strain VNIVIP-DEPT with an activity of at least 6.0 lg TCD ₅₀ , as well as the ratio of its ingredients. The strain is deposited in the collection of the All-Russian State Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines under the number "VNIVIP-DEP".

Количественное соотношение вирусной суспензии и пептонной защитной среды определяется максимумом биологической активности вакцины. При большем содержании пептонной защитной среды снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет. Увеличение количества вирусной суспензии свыше заявляемого значения приводит к ее необоснованному перерасходу и возникновению поствакцинальных осложнений у привитой птицы (остаточной реактогенности), а также к сокращению срока хранения вакцины. The quantitative ratio of viral suspension and peptone protective environment is determined by the maximum biological activity of the vaccine. With a higher content of peptone protective environment, the activity of the vaccine decreases and insufficient immunity is generated to protect against the disease. An increase in the amount of viral suspension above the declared value leads to its unreasonable cost overrun and the occurrence of vaccine-related complications in the vaccinated bird (residual reactogenicity), as well as to a reduction in the shelf life of the vaccine.

Количественное соотношение ингредиентов пептонной защитной среды диктуется ее функциональными особенностями и технологическими свойствами компонентов. Повышение содержания желатина свыше заявляемого влечет за собой расслоение компонентов вакцины при ее растворении перед применением. Повышение количества сахарозы и пептона свыше заявляемого предела приводит к снижению растворимости вакцины. Снижение количества каждого из вышеуказанных компонентов ниже заявляемых пределов также приводит к снижению срока годности вакцины. The quantitative ratio of the peptone protective environment ingredients is dictated by its functional features and technological properties of the components. The increase in gelatin content over the claimed entails the separation of the components of the vaccine when it is dissolved before use. An increase in the amount of sucrose and peptone above the claimed limit leads to a decrease in the solubility of the vaccine. Reducing the amount of each of the above components below the claimed limits also reduces the shelf life of the vaccine.

Заявляемую вакцину получают с соблюдением мер асептики смешением суспензии клеток куриных эмбрионов, инфицированной аттенуированным штаммом ВНИВИП-ДЕП реовируса теносиновита и пептонной защитной среды. Указанную защитную среду получают смешением растворов ее ингредиентов. Полученную смесь лиофильно высушивают. The inventive vaccine is obtained in compliance with aseptic measures by mixing a suspension of chicken embryo cells infected with an attenuated strain of VNIVIP-DEPT of tenosinovitis reovirus and peptone protective environment. The specified protective environment is obtained by mixing solutions of its ingredients. The resulting mixture was freeze-dried.

В качестве примера получения вакцины можно привести следующий. К вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ объемом 50 см³ добавляют такое же количество защитной среды. Последнюю получают смешением 1% раствора желатина с 4% раствором пептона и 10% раствором сахарозы. Общую полученную смесь перемешивают на магнитной мешалке в течение 5-10 мин, причем температура смеси не должна превышать 2-6 град.C, расфасовывают во флаконы, замораживают и лиофильно высушивают.An example of a vaccine preparation is the following. The viral suspension of the strain VNIVIP-DEPT with activity of at least 6.0 lg TCD ₅₀ with a volume of 50 cm ³ add the same amount of protective medium. The latter is obtained by mixing 1% gelatin solution with 4% peptone solution and 10% sucrose solution. The total mixture obtained is stirred on a magnetic stirrer for 5-10 minutes, and the temperature of the mixture should not exceed 2-6 degrees C. C, packaged in bottles, frozen and freeze-dried.

Влияние соотношения компонентов на биологическую активность вакцины представлено в таблице 1. The effect of the ratio of components on the biological activity of the vaccine is presented in table 1.

Как видно из таблицы 1, максимальная биологическая активность вакцины (6,0 и более lg ТЦД₅₀) достигается при содержании в вакцине вирусной суспензии от 45 до 70%.As can be seen from table 1, the maximum biological activity of the vaccine (6.0 or more lg TCD ₅₀ ) is achieved when the content of the virus suspension from 45 to 70%.

Влияние активности вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП на иммуногенность вакцины представлено в таблице 2. The effect of the activity of the viral suspension of the strain VNIVIP-DEPT on the immunogenicity of the vaccine are presented in table 2.

Данные таблицы 2 показывают, что активность вируса ниже 6,0 lg ТЦД₅₀ не создает напряженного поствакцинального иммунитета и вызывает увеличение расхода компонентов вакцины в 5-10 раз.The data in table 2 show that the activity of the virus below 6.0 lg TCD ₅₀ does not create intense post-vaccination immunity and causes an increase in the consumption of components of the vaccine 5-10 times.

Пример 1. Для подкожного введения берут вакцину, например, следующего состава: 50% вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ и 50% защитной среды, содержащей 6,6% желатина, 26,7% пептона и 66,7% сахарозы. Вакцину разводят стерильным физиологическим раствором из расчета 1 доза вакцины в 0,2 см³ и вводят в нижнюю треть шеи. Цыплят различной породы вакцинируют двукратно в 7-10- и 35-40-суточном возрасте.Example 1. For subcutaneous administration, a vaccine is taken, for example, of the following composition: 50% of a virus suspension of the VNIVIP-DEP strain with activity of at least 6.0 lg TCD ₅₀ and 50% of a protective medium containing 6.6% gelatin, 26.7% peptone and 66.7% sucrose. The vaccine is diluted with sterile saline at the rate of 1 dose of the vaccine in 0.2 cm ³ and injected into the lower third of the neck. Chickens of different breeds are vaccinated twice at 7-10 and 35-40 days of age.

Вакцина быстро и без расслоения растворяется. Она вызывает формирование активного поствакцинального иммунитета против реовирусного теносиновита кур через 21 сут после вакцинации продолжительностью 2-3 мес. The vaccine dissolves quickly and without delamination. It causes the formation of active post-vaccination immunity against chickens reoviral tenosynovitis 21 days after vaccination lasting 2-3 months.

Пример 2. Для перорального введения берут вакцину, например, следующего состава: 45% вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ и 55% защитной среды, содержащей 8,3% желатина, 26,4% пептона и 65,3% сахарозы. Вакцину разводят питьевой водой из расчета цыплятам 7-10-суточного возраста -1 дозу вакцины на голову в 5 см³, а цыплятам 35-40-суточного возраста -1 дозу вакцины в 10 см³.Example 2. For oral administration, a vaccine is taken, for example, of the following composition: 45% of the virus suspension of the strain VNIVIP-DEPT with activity of at least 6.0 lg TCD ₅₀ and 55% of the protective medium containing 8.3% gelatin, 26.4% peptone and 65.3% sucrose. The vaccine is diluted with drinking water at the rate of chickens of 7-10 days of age -1 dose of vaccine per head in 5 cm ³ , and for chickens of 35-40 days of age -1 dose of vaccine in 10 cm ³ .

В таблице 3 приведены иммуногенные свойства заявляемой вакцины при пероральном введении. Table 3 shows the immunogenic properties of the claimed vaccine when administered orally.

Уровень антител в сыворотке крови привитых цыплят определяют иммуноферментным анализом. The level of antibodies in the blood serum of vaccinated chickens is determined by enzyme immunoassay.

Данные таблицы 3 показывают, что у однократно вакцинированных цыплят на 21 сутки титр антител составляет 1:100 -1:200, а у двукратно вакцинированных цыплят - 1:200 -1:400. При заражения цыплят на 22 сут после вакцинации вирулентным вирусом теносиновита (штаммы СП -73 и М-4) в дозе 10³ ИД₅₀ все вакцинированные цыплята оставались клинически здоровыми в течение 30 суток (срок наблюдения) в отличие от невакцинированных (контрольной группы), 50-60% которых заболели на 9-12 сутки после заражения с клиническими признаками теносиновита.The data in table 3 show that in single-shot vaccinated chickens on day 21, the antibody titer is 1: 100 -1: 200, and in double-vaccinated chickens - 1: 200 -1: 400. When chickens were infected 22 days after vaccination with virulent tenosinovitis virus (strains SP-73 and M-4) at a dose of 10 ³ ID _50, all vaccinated chickens remained clinically healthy for 30 days (observation period), in contrast to unvaccinated (control group), 50-60% of which became ill on the 9-12th day after infection with clinical signs of tenosynovitis.

В таблице 4 приведены результаты изучения остаточной реактогенности вакцины заявляемого состава. Table 4 shows the results of a study of the residual reactogenicity of the vaccine of the claimed composition.

Из данных таблицы 4 видно, что цыплята, иммунизированные в дозах, в 5 и 10 раз превышающих вакцинальную (1 x 10³), оставались клинически здоровыми в течение 30 суток (срок наблюдения).From the data of table 4 it can be seen that chickens immunized in doses 5 and 10 times higher than the vaccine (1 x 10 ³ ) remained clinically healthy for 30 days (observation period).

Таким образом, вакцина против реовирусного теносиновита кур, состоящая на 45 -70% из сухой вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП, остальное - защитная пептонная среда, создает у 95-100% цыплят иммунитет против реовирусного теносиновита кур при пероральной или подкожной вакцинации и не обладает реактогенностью. Thus, the vaccine against chickens reovirus tenosynovitis, consisting of 45–70% of the dry virus suspension of the VNIVIP-DEP strain, the rest is a protective peptone medium, creates 95-100% chickens immunity against chickens reovirus tenosynovitis with oral or subcutaneous vaccination and does not have reactogenicity.

Вакцина найдет широкое применение для профилактики реовирусной инфекции кур в промышленном птицеводстве. The vaccine will be widely used to prevent reovirus infection of chickens in industrial poultry farming.

Источники информации
1. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В. Реовирусная инфекция птиц. - СПб. Информационный листок N 2-96, ВНИВИП, 1996.Sources of information
1. Trefilov B.B., Nikitina N.V. Reovirus infection of birds. - SPb. Information leaflet N 2-96, VNIVIP, 1996.

2. L. van der Heide, J Geissler, E.S. Bryant. Infektious tenosynovitis: Serologic and Histopathologic response after experimental infection uith a connecticut isolate.- Avian Dis., 1974, vol. 18, n.3, p. 289-296. 2. L. van der Heide, J Geissler, E.S. Bryant. Infektious tenosynovitis: Serologic and Histopathologic response after experimental infection uith a connecticut isolate. — Avian Dis., 1974, vol. 18, n.3, p. 289-296.

3. Проспект фирмы SOLVAY DUPHAR "V.A.CHICK VAC.," 1993. 3. The prospectus of the company SOLVAY DUPHAR "V.A.CHICK VAC.," 1993.

Claims

1. A dry vaccine against chickens reovirus tenosynovitis, containing a viral suspension and a peptone protective environment, characterized in that a virus suspension of the VNIVIP-DEP strain of chickens reovirus tenosynovitis with an activity of at least 6.0 lg TCD _{50 is used} in the following ratio components, wt.%:
Viral suspension of the strain "VNIVIP-DEP" reovirus tenosynovitis chickens with activity of at least 6.0 lg TCD ₅₀ - 45 - 70
Peptone protective environment - Else
2. The dry vaccine according to claim 1, characterized in that the peptone protective medium contains peptone, gelatin, sucrose in the following ratio, wt.%:
Peptone - 15 - 35
Gelatin - 3 - 10
Sucrose - Else