RU2140287C1 - Способ получения альбумина - Google Patents
Способ получения альбумина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2140287C1 RU2140287C1 RU98116173A RU98116173A RU2140287C1 RU 2140287 C1 RU2140287 C1 RU 2140287C1 RU 98116173 A RU98116173 A RU 98116173A RU 98116173 A RU98116173 A RU 98116173A RU 2140287 C1 RU2140287 C1 RU 2140287C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- albumin
- concentration
- caprylate
- ethanol
- protein
- Prior art date
Links
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 35
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 77
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 17
- -1 caprylate ions Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 13
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 9
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 9
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 6
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 5
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- YHLAXQQNQYQQBC-UHFFFAOYSA-N ethanol;2,2,2-trichloroacetic acid Chemical compound CCO.OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YHLAXQQNQYQQBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010032608 Cohn fraction IV Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003441 Transfusion reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 238000010261 blood fractionation Methods 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000005137 deposition process Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к производству медицинских биологических препаратов, и может быть использовано при получении альбуминов из неиспользуемых, балластных альбуминсодержащих фракций. Альбумин получают из неиспользуемых альбуминсодержащих осадков экстракцией осадков при рН 7,7-8,8 водой или раствором натрия хлорида в присутствии каприлат-иона в концентрации 0,7-2,0% с дальнейшим разделением смеси белков этиловым спиртом в конечной концентрации 8,0-17,0 об.%. Центрифугируют, концентрируют альбумин из центрифугата ультрафильтрацией, удаляют спирт диафильтрацией и полученный раствор подвергают осветляющей стерилизующей фильтрации. Технический результат: получение альбумина, не содержащего агрегатов, с электрофоретической чистотой более 98%, стабильный при хранении. 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к производству медицинских биологических препаратов, и может быть использовано при получении альбуминов (A), из неиспользуемых, балластных альбуминсодержащих фракций.
A относится к категории препаратов, назначаемых пациентам по жизненным или неотложным показаниям - при шоке, острых кровопотерях, ожогах, нефротическом синдроме, поражении печени. В структуре маркетинга препаратов крови (1) - на долю A приходится - 45,1%.
Возможности увеличения производства A в настоящее время ограничены сырьевой базой - плазма крови. Поэтому многие фирмы и исследователи заняты как изменениями основного технологического процесса фракционирования плазмы с целью увеличения выхода A, так и поиском дополнительных источников сырья и разработкой специальных технологий применительно к каждому выбранному источнику выделения.
При фракционировании плазмы самым распространенным в мире методом Кона 6 многостадийный процесс осаждений приводит к значительной, до 20%, потере альбумина, который оказывается в балластных фракциях и практически не используется (2, 3). Это вынуждает вести работы по дополнительному выделению A из неутилизируемых в настоящее время альбуминсодержащих фракций плазмы - осадков IV-1, IV-4, IV-1,4 (по Кону, 1946), IV (по Кистлеру и Ничману, 1962), IV - "каприлатного осадка" (4). При этом качественные показатели выделяемого A по молекулярным параметрам, прозрачности, стабильности при хранении и другие должны соответствовать Национальным Фармакопеям, так как частота трансфузионных реакций прямо коррелирует как с увеличением содержания аггрегатов, так и с понижением электрофоретической чистоты (5).
Существует множество методов выделения A, но все они помимо положительных качеств не лишены и недостатков. Этанольные методы дополнительного извлечения A, например, из осадка фракции IV-4 по Кону используют критические концентрации этанола и предусматривают многочисленные стадии осаждения (6), что приводит к "антигенному" эффекту (5). Каприлатно-тепловые методы селективной денатурации балластных белков при выделении A из осадков IV-1, IV по Кону, имеют риск высоких рабочих температур - от 45 до 75oC и предполагают длительное выдерживание в этих условиях - до 3 ч (7), либо осложнены многочисленными дополнительными стадиями (8) - обработкой риванолом, неорганическим сорбентом, катионообменником, что значительно удлиняет производственный процесс, снижает выход и несет возможность денатурации и полимеризации A. Хроматографические способы дополнительного извлечения A, например, из осадка IV по Кону предусматривают одновременное использование трех различных хроматографических сорбентов (9), что также значительно продлевает и усложняет технологический процесс, несет опасность пирогенизации конечного продукта и приводит к удорожанию препарата. Применение миндальной кислоты для очистки осадков (10) не разрешено фармакопеей и нуждается в токсикологической сертификации в России.
Общепризнано, выделение A из плазмы является более легкой процедурой, чем его извлечение из балластных осадков, содержащих денатурированные белки и повышенные концентрации труднорастворимых липопротеинов и гликопротеинов. Поэтому использование в качестве фракционирующего агента одного этанола бывает недостаточным.
С другой стороны дополнительное или совместное с этанолом использование иных фракционирующих агентов - трихлоруксусной кислоты (11) или хлороформа (12) при выделении препаратов A, по мнению некоторых исследователей, остается под вопросом. Поскольку трихлоуксусная кислота (13) и хлороформ (14), энергично связываются с осаждаемым или очищаемым ими A, а указанные вещества являются высокотоксичными соединениями. Следовательно, применение таких A в качестве препаратов проблематично. По мнению тех же авторов, A теряет при обработке хлороформом, трихлоруксусной кислотой свою функциональную активность.
Поэтому более предпочтительным для очистки A одновременное использование этанола и каприлат-иона. Тем более, что более чем 40 летний опыт использования каприлата натрия в качестве стабилизатора A при пастеризации и его присутствие в конечном препарате показало отсутствие побочных эффектов.
Наиболее близким техническим решением предлагаемому способу получения A является метод (15), включающий следующие технологические этапы: проводят экстракцию альбуминсодержащего - осадка при pH 2,0-7,5 водой или раствором натрия хлорида, разделяют смесь белков этиловым спиртом в концентрации 18-35% (по объему) в присутствии каприлат-иона 0,1-0,6% при 0-30oC и pH 2,0-5,0. Отделяют осадок центрифугированием с последующим извлечением альбумина из центрифугата осаждением. Концентрируют и отделяют спирт известными приемами. Препарат подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации.
Данный способ очистки A снижает pH до 2,0-5,0, при котором возможна максимальная очистка от гемпигментов, контаминантных протеаз. Используемая при этом температура - не более 30oC и не менее 0oC, и всего одна стадия осаждения A позволяет отнести указанный метод к наиболее экономичным. Кроме того, каприлатные способы выделения A гарантируют не только инактивацию (16) возможно присутствующих вирусов, но и их удаление (17) из препарата A.
Однако данный "каприлатный" способ был разработан применительно к растворам белков, содержащим относительно высокие концентрации A: непосредственно к плазме или к центрифугатам II+III по Кону, после удаления фракции иммуноглобулинов. A, полученный этим способом из неиспользуемых осадков характеризовался наличием агрегатов, нестабильностью при хранении, более низкой электрофоретической чистотой.
В отличие от плазмы - стандартного источника сырья, существующей в виде раствора и готовой для фракционирования, осадки, содержащие A, необходимо перевести в максимально растворимое состояние на начальной стадии выделения препарата. Поэтому на стадии экстракции балластных осадков, обычно труднорастворимых в стандартных растворах со слабокислым или нейтральным pH - pH 4,8-7,5 (18,19), используют щелочной pH от 9,0 до 12,0 (20), что, помимо более полного растворения осадков, приводит к полимеризации, денатурации и утрате функциональной активности A.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является разработка способа дополнительного получения препарата A из отходов производства - альбуминсодержащих неиспользуемых осадков.
Технический результат заключается в получении препарата A не содержащего агрегатов, с электрофоретической чистотой более 98% и стабильного при хранении. Кроме того, заявляемый способ позволяет получить высокий выход конечного продукта при низкой стоимости препарата.
Сущность метода заключается в следующем.
Альбумин получают из неиспользуемых альбуминсодержащих осадков, экстракцией осадков при pH 7,7-8,8 водой или раствором натрия хлорида в присутствии каприлат-иона в концентрации 0,7-2,0% с дальнейшим разделением смеси белков этиловым спиртом в конечной концентрации 8,0-17,0 об.%. Центрифугируют, концентрируют альбумин из центрифугата ультрафильтрацией, удаляют спирт диафильтрацией и полученный раствор подвергают осветляющей, стерилизующей фильтрации.
В отличие от прототипа, в заявляемом способе экстракцию альбумина из альбуминсодержащих неутилизируемых осадков ведут в присутствии каприлат-иона 0,7-2,0% при pH 7,7-8,8, осаждение примесных и денатурированных белков осуществляют при концентрации этанола 8,0-17,0%, минуя стадию осаждения альбумина концентрируют его ультрафильтрацией и проводят удаление спирта диафильтрацией.
Совокупность отличительных признаков заявляемого способа позволили получить следующие преимущества. Применение каприлат-иона в концентрации 0,7-2,0% на начальной стадии фракционирования в качестве экстрагирующего иона приводит к более полному избирательному растворению неденатурированного A.
Увеличение pH до 7,7-8,8 при экстракции создает оптимальные условия для максимального растворения осадков и увеличивает выход неагрегированного альбумина.
Так как в осадках по сравнению с плазмой содержится повышенное содержание примесей, то сохранение указанной концентрации каприлатиона (0,7-2,0%) на стадии разделения белков этанолом - способствует увеличению электрофоретической чистоты A, а снижение концентрации этилового спирта до 8,0-17,0% - обеспечивает увеличение выхода A и предотвращает агрегацию и повышенную димеризацию.
Вместо проведения концентрирования и удаления спирта из A, подвергнутого осаждению этанолом, т. е. лишенного каприлат-иона с центрифугатом, в предлагаемом способе применяется ультрафильтрация в присутствии каприлат-иона (стабилизатора), что сохраняет мономерность, стабильность A в процессе ультрафильтрации и диафильтрации.
Как видно из представленных данных (табл. 1 в конце описания) использование предлагаемого способа в отличие от способа прототипа позволяет получать препарат A не содержащий агрегаты, с высокой электрофоретической чистотой более 98%, минимальным содержанием димеров - менее 3%, большим содержанием мономеров - более 97%. Сравнение с прототипом наглядно показывает значительное увеличение выхода альбумина с 1 кг различных типов осадков.
Важным для препарата альбумина является не только нативность свежеприготовленного альбумина, но и стабильность его во время хранения. Тест на стабильность - измерение мутности (прозрачности) при прогревании в течение 50 ч при 57oC, рассматривался в качестве аналога условий хранения. Представленные данные по термостабильности в табл. 2 (см. в конце описания) указывают на отсутствие достоверных различий в прозрачности альбумина, полученного согласно заявляемого способа в отличие от способа прототипа.
Достигнутые результаты объясняются применением каприлат-иона на всех стадиях процесса: - начальной - экстракции, разделения смеси белков этанолом, ультрафильтрации, диафильтрации, осветляющей и стерилизующей фильтрации, что обусловлено стабилизацией жирной кислотой или анионным детергентом (каприлатом натрия) открытых гидрофобных участков в молекуле A - гидрофилизацией и увеличением отрицательного заряда молекул альбумина - одноименное отталкивание белковых молекул.
Способ осуществляют следующим образом.
В качестве сырья используются любые альбуминсодержащие неиспользуемые осадки, полученные различными методами. Источниками сырья могут выступать альбумин-содержащие фракции плазмы в виде осадков, например, - IV-1, IV-4, IV-1,4 (по Кону, 1946), IV (по Кистлеру и Ничману, 1962), IV - "каприлатный осадок" (денатурированный осадок белков, образуемый в присутствии каприлата натрия) и другие.
Фракцию осадка разрушают на кусочки и гомогенизируют в пропорции от 4 до 10 л экстрагента на кг пасты в экстрагирующем растворе, с pH 7,7-8,8 и концентрацией хлорид-иона от 0 до 0,2 М, каприлат-иона 0, 7-2, 0%, поддерживая указанный pH во время растворения осадка. Экстракцию ведут при температуре от 0 до 15oC, в течение 12±6 ч. В полученный раствор белков вводят этанол с температурой от минус 40 до 0oC до концентрации 8,0-17,0% (объемных). В качестве источника этанола возможно использование отхода производства - центрифугата A1 или 1 (21), содержащего 24-26% этанола и используемого в технологии получения иммуноглобулинов для удаления остатков альбумина. Затем в смеси устанавливают температуру 0-30oC и pH 2-5. Отделяют осадок центрифугированием с последующим концентрированием альбумина из центрифугата ультрафильтрацией и удалением спирта диафильтрацией на плоскорамниках или полых волокнах или спиральных картриджах с пределом задержания 10-50 КДа при температуре 0-45oC и pH 5,2- 7,6. В полученный раствор альбумина добавляют каприлат натрия до концентрации 0,3% после его количественного определения (22) и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации.
Определение молекулярных параметров альбумина - содержания полимеров, димеров, мономеров, фрагментов осуществлялось согласно требований Европейской Фармакопеи (23) методом гель-фильтрации на Ультрагеле AсA34 (Serva, ФРГ). Электрофоретическая чистота A определялась на ацетат-целлюлозной пленке согласно Немецкой Фармакопее (24). Тест на стабильность - по измерению мутности при прогревании при 57oC в течение 50 ч (25).
Пример 1. Сырье - 63 кг осадка IV (4), отход производства альбумина из гемолизированного сырья, суспендируют в 630 л дистиллированной воды с pH 8,8, содержащей 0,8% каприлат-иона, при температуре 1oC в течение 12 ч, поддерживая указанный pH 8,8 во время экстракции. В полученный раствор, объемом 680 л вводят этанол с температурой минус 30oC до концентрации 17% (146 л 96% этанола) со скоростью 30 л/ч. Белково-спиртовую смесь подогревают до температуры 16oC и смещают pH до 3,3, перемешивают 15 минут, повышают pH до 4,6 и центрифугируют. Увеличивают pH до 7,3 и концентрируют центрифугат до 7% белка ультрафильтрацией на полых волокнах ВПУ-15000 Да. Удаляют этанол диафильтрацией против 5 объемов дистиллированной воды при температуре 10oC и осуществляют окончательное концентрирование до 12% по содержанию белка. Доводят содержание каприлата натрия до 0,3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 10%, натрия хлорида до 0,6%, и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 37,93 л 10%-ного раствора альбумина (выход 60,2 г альбумина с 1 кг осадка IV) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,29, мономеры - 97,71, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,5%; прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,036, после прогрева - 0,036.
Пример 2. Сырье - 60 кг осадка IV-1 по Кону, отход производства альбумина, суспендируют в 240 л дистиллированной воды с pH 7,7, содержащей 2,0% каприлат-иона, при температуре 10oC в течение 6 ч, поддерживая указанный pH во время экстракции. В полученный раствор, объемом 288 л приливают равный объем центрифугата A1 (21), содержащего 2,0% каприлата натрия, с температурой минус 20oC до концентрации этанола около 12%. Белково-спиртовую смесь подогревают до температуры 18oC и смещают pH до 4,6 и центрифугируют. Увеличивают pH до 5,3 и концентрируют центрифугат до 6% белка ультрафильтрацией на спиральном картридже S40Y30 (Amicon, США) при температуре 4oC. Удаляют этанол диафильтрацией против 4 объемов дистиллированной воды при температуре 8oC и осуществляют окончательное концентрирование до 7% по содержанию белка. Доводят содержание каприлата натрия до 0.3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 5%, натрия хлорида до 0,8%, pH до 7,0 и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 36,60 л 5%-ного раствора альбумина (выход 30,5 г альбумина с 1 кг осадка IV-1) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,26, мономеры - 97,74, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,4%: прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,035, после прогрева - 0, 035.
Пример 3. Сырье - 60 кг осадка IV-4 по Кону, отход производства альбумина, суспендируют в 300 л дистиллированной воды с pH 8,3, содержащей 1,4% каприлат-иона, при температуре 15oC в течение 7 ч, поддерживая указанный pH во время экстракции. В полученный раствор, объемом 348 л, приливают 174 л центрифугата A1 (21), содержащего 1,4% каприлата натрия, с температурой минус 15oC до концентрации этанола около 8%. Белково-спиртовую смесь отепляют до температуры 14oC и смещают pH до 4,4 и центрифугируют. Увеличивают pH до 6,6 и концентрируют центрифугат до 8% белка ультрафильтрацией на плоскорамниках с мембранами УПМ-50000 Да при температуре 4oC. Удаляют этанол диафильтрацией против 6 объемов дистиллированной воды при температуре 6oC и осуществляют окончательное концентрирование до 22% по содержанию белка при температуре 45oC. Доводят содержание каприлата натрия до 0,3% путем добавления 10%-ного раствора каприлата, белка до 20% и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Получают 7,65 л 20%-ного раствора альбумина (выход 25,5 г альбумина с 1 кг осадка IV- 4) со следующими характеристиками: молекулярные параметры - агрегаты 0, димеры - 2,30, мономеры - 97,70, фрагменты - 0%; электрофоретическая чистота - 99,2%; прозрачность (E 1 см, 10%) до прогрева при 57oC 50 ч - 0,034, после прогрева - 0,034.
Предложенная технология переработки неутилизируемых осадков для получения альбумина в присутствии стабилизатора на всех стадиях технологического процесса позволяет получать препарат, не содержащий агрегатов, с высокой электрофоретической чистотой - более 98% и стабильный при хранении.
Источники информации
1) Faure A. Human blood Fractionation. 8th International Biotechnology Symposium, Paris, 1988, 669-678.
1) Faure A. Human blood Fractionation. 8th International Biotechnology Symposium, Paris, 1988, 669-678.
2) More J.E., Harvey M.J. Purification Technologies for human plasma albumin. Cold ethanol fractionation. In: Blood separation and plasma fractionation, Ed. J.R. Harris, 1991, Wiley-Liss, Inc., 255-256.
3) Vogelaar E. F. , Brummelhuis H.G.J., Beentjes S.P. and Krunen H.W. Contributions to the optimal use of human blood. Vox sang, 1972, 23, 481-492.
4) Опытно-промышленный регламент производства раствора альбумина 5%, 10%, 20% из гемолизированной плазмы и сыворотки. -М., 1978.
5) Schneider W. , Wolter D., McCarty L.J. Heat-ethanol isolated serum albumin: discussion. Folia Haematol., Leipzig, 1977, 104, 1, 119-120.
6) Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов донорской крови. Приложение 17. Дополнительное извлечение альбумина из осадка фракции IV-4. М., 1979, 295.
7) Способ получения альбумина. Патент СССР N 743564, A 61 K 37/02. 25.06.80.
8) Метод получения раствора протеинов, стабильных к температурной обработке. Патент США N 4017470, A 61 K 37/02. 12.04.1977.
9) Eriksson S., Berglof J.H., Hamalainen E., Suomela H. Recovery of human albumin from Cohn fraction IV paste. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the International Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983, 90-94.
10) Способ выделения альбумина. АС РФ N 1127525 A, A 61 K 37/02.
11) Способ получения альбумина. АС N 591126, F 61 R 37/02. 30.01.78.
12) Therniault D.G., Taylor J.F. Dimerization of serum albumin on extraction with an organic solvent. Blochem. and Biophys Res. Communs, 1960, 3, 5, 560-565.
13) Scatchard G., Black E.S. J.Phys. Colloid. Chem. 1949, 53, 1, 88-99.
14) Способ очистки сывороточного альбумина. Патент РФ N 2007423 C1, C 07 K 3/12. 15.02.94.
15) Способ получения сывороточного альбумина. АС РФ N 467536, A 61 K 23/02.
16) Lundblad J.L., Sing R.L. Inactivation of lipid-enveloped viruses in proteins by caprylate. Vox Sang, 1991, 60, 75-81.
17) Патент ЧССР N 239715. Способ производства инфузионного раствора сывороточного альбумина. A 61 K 37/02. 13.06.85.
18) Schneider W., Lefevre H., Fiedler H. and McCarty L.J. An alternative method of large scale plasma fractionation for the isolation of serum albumin. Blut, 1975, 30, 121-134.
19) Harvey M. J., Brown R.A., Rott J., Lloyd D., Lane R.S. The purification of albumin by affinity chromatography. Separation of plasma proteins. Ed. by J.M. Curling. Plenary lectures and posters presented at the Joint Meeting of the 19th Congress of the International Society of Haematology and the 17th Congress of the international Society of Blood Transfusion, Budapest, August 1-7, 1982. Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden, 1983, 80-88.
20) Способ получения альбумина ветеринарного. Патент РФ N 2055523 C1, A 61 B 10/00. 10.03.96.
21) Типовой комплексный регламент производства белковых препаратов донорской крови. Получение иммуноглобулина. М., 1979, 169.
22) Yu M.W., Finlayson J.S. Quantitative determination of the stabilizers octanolc acid and N-acetyl-DL-tryptophan in human albumin products. J. Pharm. Sci., 1984, 73, 82-86.
23) European Pharmacopoeia (EP), 1995, 255-255-5.
24) Deutsches Arzneibuch 10. Ausgabe 1991 mit 2. Nachtrag 1993 Monographien A-F, Grundlfg. (V. 6. 21).
25) Hao Y.L. A simple method for the preparation of human serum albumin. Vox Sang, 1979, 36, 313-320.
Claims (1)
- Способ получения альбумина из альбуминсодержащих неиспользуемых осадков, включающий экстракцию осадка водой или раствором натрия хлорида, разделение смеси белков этиловым спиртом в присутствии каприлат-иона, центрифугирование, осветляющую и стерилизующую фильтрацию, отличающийся тем, что экстракцию осадков ведут при pH 7,7 - 8,8 в присутствии каприлат-иона в концентрации 0,7 - 2,0%, осаждение примесей ведут при концентрации этанола 8,0 - 17,0 об. %, альбумин из центрифугата концентрируют ультрафильтрацией и удаляют спирт диафильтрацией.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (ru) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Способ получения альбумина |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (ru) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Способ получения альбумина |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2140287C1 true RU2140287C1 (ru) | 1999-10-27 |
Family
ID=20209914
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98116173A RU2140287C1 (ru) | 1998-08-25 | 1998-08-25 | Способ получения альбумина |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2140287C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10370456B2 (en) | 2004-09-09 | 2019-08-06 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
-
1998
- 1998-08-25 RU RU98116173A patent/RU2140287C1/ru active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10370456B2 (en) | 2004-09-09 | 2019-08-06 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
| US11767370B2 (en) | 2004-09-09 | 2023-09-26 | Genentech, Inc. | Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0322786B1 (en) | Extraction of process chemicals from labile biological mixtures with halogenated hydrocarbons | |
| JP3297433B2 (ja) | ウイルスで汚染された薬理組成物中のウイルスの不活性化方法 | |
| AU621148B2 (en) | Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography | |
| FI60400B (fi) | Foerfarande foer utvinning av albumin ur blodplasma | |
| JP4211894B2 (ja) | 血漿から得られるフィブリノーゲン濃縮物及びその製法 | |
| FI63673C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gammaglobulin innehaollandeintravenoest applicerbart pyrogenfritt och haollbart seru mpoteinpreparat ur en proteinloesning av maenskoblod | |
| JP2000513377A (ja) | プリオンのクロマトグラフィー除去方法 | |
| JPH06321994A (ja) | アンチトロンビン調製物およびその調製方法 | |
| EP0011739B1 (en) | Process for obtaining blood coagulation factor xiii derived from human placenta | |
| JPS62181220A (ja) | 冷沈澱により抗血友病因子を製造し且つ得られる抗血友病因子製品の溶解度を改善するための方法 | |
| RU2140287C1 (ru) | Способ получения альбумина | |
| JP2002540912A (ja) | 生物学的混入物の除去 | |
| JP2008505065A (ja) | ウイルス安全性生物学的流体の調製のための方法 | |
| RU2089204C1 (ru) | Способ получения пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
| RU2158136C1 (ru) | Способ получения igm-содержащего концентрата иммуноглобулина | |
| US6372510B1 (en) | Method for removing unconventional transmissible agents from a protein solution | |
| RU2125888C1 (ru) | Способ получения мономерного альбумина | |
| RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| US10266561B2 (en) | Method for separating proteins from animal or human plasma, or plants, using a pH gradient method | |
| RU2205020C2 (ru) | Способ получения раствора альбумина | |
| JPS62195331A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| RU2352358C1 (ru) | Способ приготовления вирусинактивированных растворов иммуноглобулинов | |
| RU2648468C1 (ru) | Мембранный способ получения лекарственного средства на основе пептидов тимуса телят | |
| RU2143267C1 (ru) | Способ очистки белков плазмы от липопротеинов (его варианты) | |
| JPS6237009B2 (ru) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20180716 |