RU2138268C1 - Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки - Google Patents
Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2138268C1 RU2138268C1 RU97115918A RU97115918A RU2138268C1 RU 2138268 C1 RU2138268 C1 RU 2138268C1 RU 97115918 A RU97115918 A RU 97115918A RU 97115918 A RU97115918 A RU 97115918A RU 2138268 C1 RU2138268 C1 RU 2138268C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- avermectins
- normal cells
- concentration
- tumor cells
- Prior art date
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 35
- 230000034994 death Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 claims description 44
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004224 protection Effects 0.000 abstract description 3
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 abstract description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 abstract 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940058299 avermectines Drugs 0.000 abstract 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 7
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 4
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 2
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102100027562 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101000650297 Homo sapiens 39S ribosomal protein L36, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101710186630 Insulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001964 calcium overload Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- VWVSBHGCDBMOOT-IIEHVVJPSA-N desoximetasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H](C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VWVSBHGCDBMOOT-IIEHVVJPSA-N 0.000 description 1
- 229960002593 desoximetasone Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000002438 stress hormone Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармакологии и касается нового применения биологически активных веществ, получаемых путем микробиологического синтеза. Предложено новое средство для применения в медицине и ветеринарии при разработке лекарственных препаратов для лечения различных онкологических заболеваний при одновременной защите нормальных клеток. Сущность изобретения заключается в применении авермектинов (16-членных макролидов, продуцируемых актиномицетом Streptomycеs avermitilis) качестве средства, подавляющего пролиферацию, функциональную активность и вызывающего гибель опухолевых клеток при одновременной защите нормальных клеток. Изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения.
Description
Изобретение относится к фармакологии, а именно к биологически активным веществам, получаемым путем микробиологического синтеза, которые могут применяться в медицине и ветеринарии при разработке лекарственных средств для лечения различных онкологических заболеваний, в качестве иммуно- и кардиопротекторов, а также в биологических исследованиях.
Известно, что актиномицет Streptomyces avermitilis при культивировании в присутствии источников углерода, азота и фосфора при постоянной аэрации продуцирует восемь близких по строению веществ, названных авермектинами (патент GB 1573955, 1980 г.). Все авермектины по химическому строению являются 16-членными макролидами и отличаются между собой заместителями у 5 и 26 атомов углеродного кольца. Индивидуальные авермектины получили обозначения A1a, A1b, A2a, A2b, B1a, B1b, B2a и B2b. Известно их антипаразитарное действие, что позволяет использовать авермектины в препаратах для защиты животных и растений (патенты US 4310519, 1982 г.; US 5376678, 1994 г.; RU 2048250, 1995 г.; RU 2054483, 1996 г. и другие).
Применение авермектинов по другому назначению до настоящего времени описано не было.
Предлагаемое изобретение основано на ранее неизвестных свойствах авермектинов, выявленных экспериментальным путем.
В частности, установлено, что авермектины вызывают гибель опухолевых клеток, подавляют их пролиферацию, защищают иммунные клетки от повреждения ионизирующим излучением и гормонами стресса, защищают сердечные клетки от Ca перегрузки в гиперкальциевых условиях, а также подавляют вход ионов кальция через потенциал-зависимые каналы.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Пример 1. Клетки лимфолейкоза P-388 лимфоидного происхождения привили мышам (около 106 клеток на мышь) и выращивали в брюшной полости мышей. Через 7 дней после прививки клетки извлекли из брюшной полости, отмыли центрифугированием и инкубировали при 37oC в среде RPMJ-1640 с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки, 10 мМ HEPES и 40 мкг/мл гентамицина при концентрации 106 клеток/мл. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл).
Действие авермектинов на выживаемость клеток лимфолейкоза оценивали по изменению количества живых клеток через 22 ч инкубации. Мертвые клетки определяли по окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. При концентрации авермектинов 0,2 мкг/мл выживаемость клеток P-388 снизилась по сравнению с контрольным опытом на 50%.
Однако в аналогичном опыте с клетками асцитной карциномы Эрлиха авермектины не оказали заметного влияния на выживаемость указанных клеток.
Пример 2. Клетки мышиной миеломы NS/0 вырастили in vitro в среде DMEM с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки, 80 мкг/мл гентамицина. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на пролиферацию клеток в течение трех суток. При концентрации 0,01 мкг/мл рост клеток незначительно, но достоверно ускорялся за счет сокращения лаг-фазы: клетки после посева без задержки вступали в миотический цикл (в контроле задержка 4 ч). При больших концентрациях авермектины подавляли рост клеток. Эффект прогрессивно увеличивался с ростом концентрации. При концентрации 0,25 мкг/мл рост клеток подавлялся полностью: через трое суток инкубации количество клеток равнялось исходному. При дальнейшем повышении концентрации количество клеток уменьшалось по сравнению с исходным, что указывает на цитотоксическое действие авермектинов.
Пример 3. Клетки мышиной нейробластомы NB-103 вырастили in vitro в среде DMEM с добавлением 10%-ной телячьей сыворотки и антибиотиков (100 ед./мл). Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на пролиферацию клеток в течение 3 суток.
Характерной особенностью опухолевых клеток линии NB-103 является зависимость скорости роста клеток от их концентрации в среде. При концентрации 100 тыс./мл и меньше клетки практически не размножаются и при культивировании в течение нескольких суток дифференцируются, выбрасывая отростки и образуя нейронную сеть. При 200 тыс./мл клетки интенсивно пролиферируют с периодом удвоения порядка 10 ч и к концу третьих суток образуют монослой.
При концентрации клеток 100 тыс. /мл авермектины в концентрации 0,25 мкг/мл достоверно не влияли на образование отростков и нейронной сети в культуре. При концентрации клеток 200 тыс./мл авермектины в той же концентрации 0,25 мкг/мл в первые 48 ч резко подавляли пролиферацию, а к концу третьих суток приводили к 100%-ной гибели всех клеток, в то время как в контроле наблюдалось образование монослоя.
Пример 4. Исследовали действие авермектинов в широком диапазоне концентраций на выживаемость и фрагментацию ДНК контрольных, обработанных дексаметазоном и облученных ионизирующим излучением тимоцитов крыс-самцов Вистар (160 г). После декапитации животных тимус протирали через капроновую ткань и центрифугированием отделяли тимоциты. Инкубацию тимоцитов при 37oC проводили в среде RPMJ-1640 c добавлением 10%-ной бычей сыворотки, 10 мМ HEPES и 40 мкг/мл гентамицина в 96-луночных планшетах при концентрации 1,5•107 клеток/мл. Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл).
Изучали действие авермектинов на апоптоз - программируемую гибель тимоцитов. Такая форма гибели характерна для лимфоидных клеток. Ее показателем является межнуклеосомная фрагментация ДНК, которую в данном примере определяли по доле низкомолекулярной ДНК в клетках. ДНК разделяли центрифугированием (13000g, 30 мин), окрашивали дифениламином и количественно определяли по поглощению при λ = 600 нм на спектрофотометре. Апоптоз инициировали с помощью ионизирующего излучения и аналога глюкокортикоидных гормонов - дексаметазона.
После облучения с дозой 4 Гр доля фрагментированной ДНК увеличилась за 6 ч инкубации до 50% (в контрольном опыте без облучения за тот же срок инкубации - 18%). Авермектины подавляли фрагментацию ДНК и гибель клеток, инициированную облучением. Эффективная доза, снижающая фрагментацию ДНК на 50% (ЭД50) составила 0,14 мкг/мл.
Обработка тимоцитов дексаметазоном (2•10-7 М) снижала выживаемость тимоцитов до 68±5% и увеличивала фрагментацию ДНК до 39±3%. Авермектины защищали клетки по обоим показателям повреждения. Доза авермектина, снижающая фрагментацию ДНК на 50% (ЭД50), равна 0,1 мкг/мл.
Пример 5. Изолированные сердечные клетки крысы, полученные ферментативной обработкой целого сердца, сохраняли в среде с повышенной концентрацией ионов Ca2+ (5 мМ). Авермектины растворили в 96%-ном этаноле (1 мг/мл). Действие авермектинов оценивали по влиянию на гибель кардиоцитов в течение 10 ч методами световой микроскопии по ультраструктуре и окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. Авермектины в концентрации 0,25 мкг/мл более чем вдвое замедляли скорость гибели клеток. После трех часов инкубации в среде с авермектинами содержалось вдвое больше функционально активных, сохранивших нормальную морфологию клеток. После шести часов инкубации в контроле функционально активных клеток не наблюдалось, в то время как в среде с авермектинами их количество составляло 20-25% от исходного числа.
Пример 6. Методом фиксации потенциала на мембране регистрировали Ca2+ токи на изолированных сердечных клетках крысы в контроле и в присутствии авермектинов в различных концентрациях (от 0,08 до 8,0 мкг/мл). Авермектины в исследуемых концентрациях уменьшали Ca2+ токи. При концентрации 0,08 мкг/мл уменьшение пикового тока составило 10%, при концентрации 0,8 мкг/мл - 23%, при 8,0 мкг/мл - 30%.
Пример 7. Кусочки нормальной ткани толстого кишечника человека поместили в условия инкубирования органной культуры на среде следующего состава: среда Игла и среда RPMJ (1:1) - 80%, эмбриональная телячья сыворотка - 15%, сыворотка крови донора - 1,5%, глютамин - 0,5 мг/мл, дезоксиметазон - 10-6 М, инсулин - 1 мг/мл, гентамицин - 120 ед/мл. Культивирование проводили в течение трех недель. Через две недели после начала культивирования в культуру добавили авермектин в концентрации 0,3 мг/мл. В процессе дальнейшего культивирования наблюдали состояние ядер клеток. На 21-й день культивирования эксплантант окрасили прижизненным красителем (этидиум бромид) и обследовали под люминесцентным микроскопом. В этом случае живые ядра окрашиваются в зеленый цвет, а мертвые - в красный. В данном примере красных ядер не было совсем, что свидетельствует об отсутствии негативного влияния авермектинов на нормальные клетки.
Пример 8. Изучали влияние авермектинов на нормальные тимоциты крысы. Авермектины в концентрациях 0,03 - 3,0 мкг/мл добавляли в культуральную жидкость изолированных тимоцитов крысы породы Вистар и инкубировали клетки в течение суток при 37oC. После этого определяли жизнеспособность клеток по их прокрашиванию раствором трипанового синего. Также определяли фрагментацию ДНК путем выделения ДНК из клеток с последующим разделением при центрифугировании интактной ДНК (осадок) и мелких фрагментов ДНК (супернатант), специфическим прокрашиванием полученных фракций дифениламином и спектрофотометрическим определением доли поврежденной ДНК.
Во всем диапазоне изученных концентраций жизнеспособность клеток, обработанных авермектинами, оставалась на уровне контрольных клеток (94-100%), а доля фрагментированной ДНК не превышала контрольных значений 14 ± 1,5%. То есть в условиях опытов авермектины не оказывали негативного влияния на нормальные тимоциты крысы.
Пример 9. Изолированные сердечные клетки крысы культивировали в нормальной среде (содержание Ca2+ составляло 1,8 мМ). Авермектины добавили в концентрации 0,25 мкг/мл. Действие авермектинов на кардиоциты оценивали методом световой микроскопии по ультраструктуре и окраске 0,04%-ным раствором трипанового синего. В присутствии авермектинов кардиоциты переживали в течение 18 ± 5 ч, тогда как при культивировании без авермектинов их переживание наблюдалось только в течение 10 ± 3 ч.
Полученные данные показывают возможность применения авермектинов в качестве вещества, обладающего избирательным противоопухолевым и иммунопротекторным действием, а также в качестве мягкого кальциевого антагониста в клинической медицине.
Claims (1)
- Применение авермектинов в качестве средства, подавляющего пролиферацию и вызывающего гибель опухолевых клеток при одновременной защите нормальных клеток.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (ru) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки |
| PCT/RU1998/000293 WO1999015185A1 (en) | 1997-09-22 | 1998-09-21 | Agent for modifying the proliferation, functional activity and death of natural and tumoral cells |
| AU92860/98A AU9286098A (en) | 1997-09-22 | 1998-09-21 | Agent for modifying the proliferation, functional activity and death of natural and tumoral cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (ru) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU97115918A RU97115918A (ru) | 1999-06-27 |
| RU2138268C1 true RU2138268C1 (ru) | 1999-09-27 |
Family
ID=20197431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97115918A RU2138268C1 (ru) | 1997-09-22 | 1997-09-22 | Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU9286098A (ru) |
| RU (1) | RU2138268C1 (ru) |
| WO (1) | WO1999015185A1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2185172C2 (ru) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Способ коррекции показателей крови и увеличения продолжительности жизни больных т-лимфолейкозом животных |
| RU2250775C2 (ru) * | 2002-11-06 | 2005-04-27 | Мосин Владимир Александрович | Средство, усиливающее противоопухолевую активность химиопрепаратов, и способ лечения онкологических заболеваний |
| RU2350333C2 (ru) * | 2003-04-24 | 2009-03-27 | Галдерма С.А. | Применение ивермектина для лечения дерматологических расстройств |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011011632A1 (en) * | 2009-07-22 | 2011-01-27 | Tufts University | Methods and compositions for modulating membrane potential to influence cell behavior |
| WO2012150543A1 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | Universite De Geneve | Macrocyclic lactones and use thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5089480A (en) * | 1985-07-27 | 1992-02-18 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents |
| WO1992005262A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-04-02 | The John Hopkins University | Methods and compositions for genetic therapy and potentiation of anti-tumor immunity |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2533827A1 (fr) * | 1982-09-30 | 1984-04-06 | Anvar | Composition possedant des proprietes immunoregulatrices, notamment d'adjuvants immunologiques non specifiques, a base de muramylpeptide et d'un derive d'aluminium |
| US5189026A (en) * | 1991-06-07 | 1993-02-23 | Fractal Laboratories, Inc. | Treatment of human diseases involving dysregulation or dysfunction of the nervous system |
| GB9201749D0 (en) * | 1992-01-28 | 1992-03-11 | Smithkline Beecham Plc | Medicaments |
| WO1994022452A1 (en) * | 1993-04-01 | 1994-10-13 | Sam Amer & Co., Inc. | Inhibition of anoxia or hypoxia-induced endothelium-mediated vasospasm with avermectins |
| DE4324877A1 (de) * | 1993-07-25 | 1995-01-26 | Leskovar Peter Dr Dr Habil | Neuartige therapeutische Ansätze, basierend auf der Verhinderung der intrazellulären Ca·2··+·¶i¶-Überladung und der Ca·2··+·¶i¶-unabhängigen Beeinflußung des intrazellulären pH¶i¶-Wertes von immunkompetenten Zellen |
-
1997
- 1997-09-22 RU RU97115918A patent/RU2138268C1/ru not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-09-21 AU AU92860/98A patent/AU9286098A/en not_active Abandoned
- 1998-09-21 WO PCT/RU1998/000293 patent/WO1999015185A1/ru active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5089480A (en) * | 1985-07-27 | 1992-02-18 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents |
| WO1992005262A1 (en) * | 1990-09-14 | 1992-04-02 | The John Hopkins University | Methods and compositions for genetic therapy and potentiation of anti-tumor immunity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 3. Вядро М.М., Навашин С.М. Новые противоопухолевые антибиотики. Новые аналоги, модификаторы биологических реакций, ингибиторы онкогенов. Антибиотики и химиотерапия. - М.: Медицина, 1991, т.36, N 2, с.44-48. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2185172C2 (ru) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Способ коррекции показателей крови и увеличения продолжительности жизни больных т-лимфолейкозом животных |
| RU2250775C2 (ru) * | 2002-11-06 | 2005-04-27 | Мосин Владимир Александрович | Средство, усиливающее противоопухолевую активность химиопрепаратов, и способ лечения онкологических заболеваний |
| RU2350333C2 (ru) * | 2003-04-24 | 2009-03-27 | Галдерма С.А. | Применение ивермектина для лечения дерматологических расстройств |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1999015185A1 (en) | 1999-04-01 |
| AU9286098A (en) | 1999-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lieberman et al. | A probable role for protein synthesis in intestinal epithelial cell damage induced in vivo by cytosine arabinoside, nitrogen mustard, or X-irradiation | |
| Allen et al. | Analysis of sister chromatid exchange formation in vivo in mouse spermatogonia as a new test system for environmental mutagens | |
| DE69028694T2 (de) | Verfahren und zubereitungen zur krebsbehandlung mit oligonukleotiden | |
| Simard | Specific nuclear and nucleolar ultrastructural lesions induced by proflavin and similarly acting antimetabolites in tissue culture | |
| Hibasami et al. | Isolation of five types of flavonol from seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) and induction of apoptosis by some of the flavonols in human promyelotic leukemia HL-60 cells | |
| Furmanowa et al. | Rhodiola rosea L.(Roseroot): In vitro regeneration and the biological activity of roots | |
| Ózsvári et al. | A myristoyl amide derivative of doxycycline potently targets cancer stem cells (CSCs) and prevents spontaneous metastasis, without retaining antibiotic activity | |
| RU2138268C1 (ru) | Средство, подавляющее пролиферацию и вызывающее гибель опухолевых клеток, при этом защищающее нормальные клетки | |
| Tepper et al. | Teniposide induces nuclear but not mitochondrial DNA degradation | |
| KR101591429B1 (ko) | 신규 숙취개선 및 간보호용 조성물 | |
| EP2331092B1 (en) | Methods and compositions for administration of 3-halopyruvate and related compounds for the treatment of cancer | |
| CN114685414A (zh) | 用于治疗用途的糖脂及其药物组合物 | |
| Silverman | DNA methyltransferase inhibitors in myelodysplastic syndrome | |
| Horwitz et al. | Chemosterilant action of anthramycin: A proposed mechanism | |
| WO2005087798A1 (de) | An der hydroxylgruppe midifizierte ‘d-ser!8-cyclosporine mit schaltbarer hemmung der proteinphosphatase calzineurin und dadurch gezielter manipulierbarkeit der immunosuppressiven wirkung unter beibehaltung der peptidyl-prolyl-cis-trans-isomerase (ppi) inhibition z.b. zur behandlung von autoimmunerkrankungen | |
| Sakamoto et al. | Stimulators of Gambierdiscus toxicus (Dinophyceae) growth: the possible role of gambieric acid-A as an endogenous growth enhancer | |
| Jeong et al. | Apoptosis induction of human leukemia cells by Streptomyces sp. SY-103 metabolites through activation of caspase-3 and inactivation of Akt | |
| Chaube et al. | Protective effect of deoxycytidylic acid (CdMP) on hydroxyurea‐induced malformations in rats | |
| Abolhassani et al. | Characterization of the release of DNA by a human leukemia-cell line hl-60 | |
| Lampidis et al. | Nuclear and mitochondrial effects of adriamycin in singly isolated pulsating myocardial cells | |
| US20030104007A1 (en) | Pseudopterosin compounds of Symbiodinium spp isolated from Pseudopterogorgia elisabethae | |
| Goodman et al. | Nucleoprotein methylation in salivary gland chromosomes of Sciara coprophila: Correlation with DNA synthesis | |
| Soukup et al. | The effect of ethylnitrosourea on chromosome aberrations in vitro and in vivo | |
| Wigler et al. | Cytotoxic nucleotide analogs as potential anticancer agents. 5-Bromodeoxyuridine 5'-methylphosphonate | |
| Pisciotta et al. | Studies on agranulocytosis. VIII. Inhibition of mitosis in phytohemagglutinin-stimulated lymphocytes by chlorpromazine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150923 |