RU2098121C1

RU2098121C1 - Микрокапсула для длительного высвобождения физиологически активного пептида

Info

Publication number: RU2098121C1
Application number: RU93034781/14A
Authority: RU
Inventors: Окада Хироаки; Jp]; Иноуе Яйой; Огава Ясуаки
Original assignee: Такеда Кемикал Индастриз, Лтд.
Priority date: 1990-02-13
Filing date: 1993-06-29
Publication date: 1997-12-10
Also published as: AU645108B2; RU2018306C1; UY23276A1; DE69110150D1; MX9100721A; FI96278C; PT96727B; ES2073117T3; FI910674L; FI910674A0; EP0442671A2; IE68436B1; PT96727A; NO301405B1; NO910555D0; HU206986B; NZ239381A; JPH04321622A; JP2653255B2; LV10041B

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к микрокапсулам, предназначенным для длительного высвобождения физиологически активного пептида. Микрокапсула выполнена из высушенной эмульсии типа вода в масле, причем водная фаза эмульсии содержит от 20 до 70 мас. % полипептида, а масляная фаза эмульсии содержит сополимер со средней молекулярной массой от 7000 до 30000 молочной и гликолевой кислот при их соотношении не ниже 80:20. 2 с. и 9 з.п. ф-лы, 4 табл.

Description

Изобретение относится к микрокапсулам, предназначенным для длительного высвобождения физиологически активного пептида.

Для препаратов, назначаемых на длительный период, предлагались различные формы дозировки. Среди них японская опубликованная, не прошедшая экспертизу заявка (Toku-kai Shd 57-118512 и соответствующая ей ЕР-А-0052510) раскрывает приготовление микрокапсул способом фазовой сепарации с использованием коацервирующего агента, такого как минеральное масло или растительное масло. Toku-kai Sho 60-100516 (соответствующие пат. США 4652441 и 4711782), 62-208816 (соответствующая ЕР-А-0190833) и 63-41416 раскрывают способы приготовления микрокапсул посредством высушивания в воде. В соответствии с этими способами лекарство можно заключать в микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением.

В случае назначения лекарства в форме микрокапсул требование к микрокапсулам, имеющим большую зависимость от взаимосвязи с функциями живого организма, можно разделить на ряд фаз. Поскольку это связана с медициной, нужны микрокапсулы, которые смогли бы по возможности удовлетворить эти различные требования.

Существует много публикаций по микрокапсулам, включающим водорастворимое лекарство с использованием биоразлагающего полимера. Однако в случае использования водорастворимого лекарства, особенно физиологически активного пептида с относительно большим молекулярным весом, диффузия лекарства, заключенного таким образом в полимер, низкая, поэтому лекарство не высвобождается на первоначальной стадии до тех пор, пока не начнется разложение или пропитка полимера, и наоборот, в зависимости от способа приготовления трудно избежать большого выброса на первоначальной стадии, таким образом, при использовании в качестве лекарства часто возникают практические трудности. В частности, при длительном высвобождении фармацевтических композиций в течение большого периода времени постоянный выход лекарства с большой точностью является важным требованием, но микрокапсулы, удовлетворяющие этим требованиям, не были известны.

Учитывая эти обстоятельства, изобретатели занялись произведением интенсивных исследований с целью разработки фармацевтических композиций, пригодных для длительного высвобождения физиологически активного пептида в течение большого периода времени. В результате было выяснено, что микрокапсулы с использованием подобранной полимолочной кислоты с ограниченным молекулярным весом или молочной кислоты гликолевой кислоты (100/0 к 80/20) обладают хорошей длительной способностью высвобождения в течение долгого времени. Дальнейшая исследовательская работа по этому открытию привела к завершению настоящего изобретения. Основная цель изобретения создать микрокапсулу, предназначенную практически для нулевого высвобождения физиологически активного полипептида на протяжении по меньшей мере двух месяцев, которая готовится получением эмульсии вода-в-масле, включающей внутреннюю водную фазу, содержащую около 20-70% (вес-вес) упомянутого полипептида, и масляную фазу, содержащую сополимер или гомополимер со среднемассовой молекулярной массой от 7.000 до 30.000; с соотношением состава молочная кислота/гликолевая кислота 30/10-100/0 и затем подвержением микрокапсуляции указанной эмульсии вода-в-масле.

В соответствии с изобретением получают микрокапсулы, предназначенные для высвобождения в нулевом порядке физиологически активного полипептида на протяжении по меньшей мере двух месяцев.

Физиологически активные пептиды, используемые в практике этого изобретения, включают пептиды, состоящие из двух или нескольких аминокислотных групп и имеющие молекулярный вес от 200 до 100.000.

Примеры указанных пептидов включают гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (ЛГ-рилизинг гормон) и его аналоги, например, вещества с похожей активностью как у ЛГ-рилизинг гормона (ссылка на пат. США 3853837, 4008209, 3972859 и 4234571, пат. Великобритании 1423083, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, sol. 78, p. 6509-6512 (1981) и антагонисты ЛГ-рилизинг гормона (ссылки на пат. 4086219, 4124577, 4253997 и 4317815). Далее можно упомянуть о пролактине, адренокартикотропном гормоне (АКТГ), меланоцитостимулирующем гормоне (МСГ), гормоне, высвобождающим тиреотропин (ТРГ), их солях и производных (Ce. Toku-kai Sho 50-121273, 51-116465), тиреостимулирующем гормоне (ТСГ), лютеинизирующем гормоне (ЛГ), фолликулостимулирующем гормоне (ФСГ), вазопрессине, производных вазопрессина (деомопрессин и т. п. ), окситоцине, кальцитонине, гормоне паращитовидной железы (ГПЩ) и его производных (сс. Toku-kai Sho 62-28799), клюкагоне, гастрине, вазоактивном кишечном пептиде (ВКП), липокортине, вазокортине, атриальном натримочегонном пептиде (АНП), эндотелите, секретине, панкреозимине, холецистокинине, ангиотензине, лактогене человеческой плаценты, хорионическом гонадотропине человека (ХГЧ) энкефалине, производных энкефалина (сс. пат. США 4382923, ЕП заявка 31567), эндорфине, киоторфине, инсулине, соматостатине, производных соматостатина (сс. пат. США 4087390, 4093574, 4100117 и 4253998), гормонах роста, факторах дифференцировки пролиферации различных клеток (напр. инсулиноподобном факторе роста (ИФР), факторе роста эпидермиса (ФРЭ), факторе роста фибробласта (ФРФ), факторе роста, полученного из тромбоцитов (ФРТ), костно-морфогенном факторе (КМФ), факторе васкуляризации, факторе задержки васкуляризации, фибронектине, ламинине и т.п.), интерфероне 1 α -, b - типа, интерлейкинах (I, II, III, IV, V, VI, VII), туфтсине, тимопойетине, тимосине, тимостимулине, тимусном гуморальном факторе (ТГФ), сывороточном тимусном факторе (СТФ), и его производных (сс. пат. США 4229438) и других тимусных факторах (с. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, sol. 78, p. 1162-1166 (1984), факторе некроза опухоли (ФНО), колоние-стимулирующем факторе (КСФ), мотилине, эритропойетине (ЭП), динофине, бомбезине, нейтротензине, церулеине, брадикине, урокиназе, проурокиназе, тканевом плазминогенном активаторе (t-ПА) и его производных (с. "Терапевтические пептиды и протеины". Cold Spring Harbor Laboratory, New York, p. 69-74, 1989), стрептокиназе, аспаргиназе, калликреине, веществе П. факторах свертываемости крови VIII и IX, лизосим хлориде, полимиксине В, колистине, грамицидине, бацитрацине и т.п.

В микрокапсуле, содержащей в качестве физиологически активного пептида аналог ЛГ-рилизинг гормона, который является водорастворимым и имеет молекулярную массу 1.000 или больше, например, ТАР-144, выраженный (пир) Glu-His-Trp-Scr-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHC₂H₅ или антагонист ЛГ-РГ, выраженный (пир) Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Tyr-Leu-Arg-Pro-Glu-NHC₂H₅, непрерывное двигательное высвобождение осуществляется на протяжении большого периода времени.

Эти физиологически активные пептиды используются в количествах, выбранных в зависимости от вида пептида, желаемых фармакологических действий, длительности этих действий и в количествах от 0,01 мг до 5 г, более предпочтительно от 0,1 мг до 2 г как дозировка микрокапсул. Концентрация в микрокапсуле зависит от физико-химических свойств лекарства и она выбирается в пределах около 0,01%-50% (вес/вес), более предпочтительно 0,1%-30%
Концентрация во внутренней водной фазе микрокапсулы около 20-70% (в/в), предпочтительно 25-65% (в/в), еще более предпочтительно 35-60% и зависит от физико-химических свойств, таких как растворимость в воде.

Примеры полимера, используемого в качестве вещества, контролирующего высвобождение, включают сополимеры или гомополимеры из молочной кислоты/гликолевой кислоты, которые имеют кислотную группу в молекуле, слабо растворимы или нерастворимы в воде и биосовместимы. Их соотношение зависит от срока, необходимого для длительного высвобождения, и выбирается в пределах от 100/0 до 80/20, предпочтительно 100/0-90/10, еще более предпочтительно 100/0. В качестве молочной кислоты можно использовать L-, D- и DL-молочную кислоту. В частности, сополимер или гомополимер, полученный при полимеризации мономера или олигомера DL-молочной кислоты.

Как сополимер или гомополимер, состоящий из DL-молочной кислоты/гликолевой кислоты, хорошо используется такие полимеры, практически не содержащие катализатора, полученные полимеризаций в отсутствие катализатора (с. Toku-kai Sho 61-285215). Предпочтительны полимеры со степенью дисперсии (коэффициент среднемассовой молекулярной массы к среднечисловой молекулярной массе) от 1,5 до 3,0, в частности, 1,5-2,5.

Длительность периода непрерывного пролонгированного высвобождения микрокапсул в большой степени зависит от молекулярной массы полимера и состава молочной/гликолевой кислоты. В случае приготовления, например, микрокапсул с непрерывным высвобождением нулевого порядка на три месяца, по меньшей мере при соотношении состава молочной/гликолевой кислот 100/0, предпочтительная средняя молекулярная масса полимера колеблется от 7.000 до 25.000; при 90/10 от 7.000 до 30.000; и при 80/20 от 12.000 до 30.000.

В настоящем описании молекулярная масса и степень дисперсии означают величины, которые определяются посредством хроматографии гель-проницаемости с использованием коммерчески доступного полистирена стандартной молекулярной массы.

Концентрация полимера в масляной фазе при приготовлении микрокапсул выбирается в пределах от 0,5 до 90% (в/в), более предпочтительно 2-60% (в/в).

Раствор (масляная фаза), содержащий вышеупомянутый полимер, представляет собой полимер, растворенный в органическом растворителе.

Данный органический растворитель может быть любым органическим растворителем с точкой кипения не выше 120^oC и плохо смешиваемым с водой. Примерами являются галогенизированные алканы (напр. дихлорметан, хлороформ, хлорэтан, трихлорэтан, тетрахлорид углерода и т.п.), этиловый ацетат, этиловый эфир, бензол, толуол и т.п. Их можно использовать как смесь двух или нескольких компонентов.

В изобретении микрокапсулы с меньшим первоначальным высвобождением можно приготовить без добавления вещества, сохраняющего лекарство, но его можно добавить при необходимости. Веществом, сохраняющим лекарство, является соединение, придающее повышенную вязкость внутренней водной фазе или затвердение под действием введения в температурных условиях иона или соединения с основной остаточной группой с протонным зарядом, которое взаимодействует с полимером и увеличивает вязкость эмульсии в/м.

Веществами, сохраняющими лекарство, являются желатин, агар, альгиновая кислота, поливиниловый спирт, или основная аминокислота, такая как аргинин, лизин, и т. п. полипептид, содержащий основную аминокислоту, органическое основание, такое как N-метил глюкамин и природный или синтетический основной полимер.

Эти соединения могут использоваться отдельно или как смесь двух или нескольких из них. Хотя количество используемых соединений зависит от их вида, желательно иметь концентрацию во внутренней водной фазе от 0,05% до 90% (в/в), более предпочтительно от 0,1% до 80% (в/в).

В качестве традиционных способов контроля высвобождения из этих микрокапсул упоминается способ изменения скорости гидролиза (Biomaterials, sol. 5, 237-240 (1984) и способ, включающий введение водорастворимого соединения в матрицу микрокапсул для создания водных каналов для высвобождения лекарства. Однако недостатком первого способа является тенденция сокращать длительность высвобождения, а второй стимулирует только первоначальный выброс, таким образом, вряд ли можно достичь высвобождения нулевого порядка (Chem. Pharm Bull. sol. 36(4)1502-1507 (1988). И в последнем случае возникает опасность появления нежелательных побочных действий благодаря увеличению лекарства в крови на первоначальной стадии. Кроме того, существует также известный способ (Toku-kai, Sho 57-150609), который включает такое соотношение полимеризации молочной/гликолевой кислот ПТМК с тем, чтобы увеличить время длительности высвобождения. Этот способ, однако, направлен на увеличение скорости разложения полимера, который, естественно, сокращает длительности высвобождения, и это является ограничением в реализации непрерывного высвобождения в течение долгого периода времени.

Микрокапсулы с пролонгированным высвобождением по изобретению, готовят, например, следующим способом.

Вначале физиологически активный пептид добавляют к воде в количестве для упомянутой концентрации, к которой далее при необходимости добавляется вещество, сохраняющее лекарство, такое, как вышеупомянутый желатин или основная аминокислота, чтобы раствор или суспензия имели нужную концентрацию для получения внутренней водной фазы.

К этой внутренней водной фазе можно добавить pH-регулирующий агент для поддержания стабильности или растворимости физиологически активного пептида, такой как угольная кислота, уксусная, щавелевая, лимонная, фосфорная, соляная кислоты, гидроокись натрия, аргинин, лизин и их соли. Еще можно добавить в качестве стабилизатора физиологически активного пептида белок, желатин, лимонную кислоту, натрий этилендиамин тетраацетат, декстрин, кислый сульфит натрия или полиоловое соединение, такое как полиэтилен гликоль, или в качестве консерватора можно ввести обычные вещества, такие, как пара-оксибензойной кислоты эфир (напр. метилпарабен, пропилпарабен), бензоловый спирт, хлорбутанол или тимерозал.

Полученную таким образом внутреннюю водную фазу добавляют к полимерсодержащему раствору (масляная фаза) с последующим эмульгированием для получения эмульсии типа в/м. Для процедуры эмульгирования используется известный способ получения дисперсии. Как, например, способ перемежающегося встряхивания, использующий миксер типа пропеллерной мешалки, турбинной мешалки или т. п. коллоидную мельницу, способ гомогенизации или ультразвуковой способ.

Далее приготовленная таким образом в/м эмульсия подвергается микрокапсулированию. Как средство для микрокапсулирования можно использовать способ высушивания в воде или фазовой сепарации. В случае приготовления микрокапсул высушиванием в воде указанную в/м эмульсии далее добавляют к третьей водной фазе для получения тройной в/м/в эмульсии и после этого растворитель в масляной фазе выпаривают до получения микрокапсул.

К внешней водной фазе может быть добавлен эмульгирующий агент. В качестве такового можно использовать любой способный образовать стабильную м/в эмульсию, например, анионное поверхностно-активное вещество (напр. олеат натрия, стеарат натрия, натрий лаурил сульфат и т.п.), неионное поверхностно-активное вещество (напр. полиоксиэтиленсорбентный эфир жирной кислоты (Twen 80, Tween 60, продукты Atlas Powder Co.), полиоксипроизводное касторового масла (НСО-60, НСО-50, продукты Nikko-Chtmicals) и т.п. поливинил пирролидон, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлозу, лецитин или желатин. Такие эмульгаторы можно использовать по отдельности или в комбинации. Концентрацию эмульгирующего агента выбирают в пределах 0,0-20% предпочтительно 0,05-10%
Для выпаривания растворителя из масляной фазы используют любой из традиционных способов. Способ осуществляют постепенным снижением давления с одновременным перемешиванием пропеллерной или магнитной мешалкой или использованием вращающегося испарителя с регулированием степени вакуума. В том случае необходимое время можно уменьшить постепенным согреванием в/м/в эмульсии после затвердевания полимера до некоторой степени, чтобы полнее удалить растворитель.

Полученные таким образом микрокапсулы собирают центрифугованием или фильтрацией, промывают несколько раз дистиллированной водой для удаления свободного физиологически активного пептида, вещества, сохраняющего лекарство, и эмульгирующего агента, прилипшего к поверхности микрокапсулы, с последующей дисперсией полученного в дистиллированной воде и высушиванием при температуре ниже 0^oC, при необходимости согреванием при пониженном давлении для более полного удаления влаги в микрокапсулах и растворителя в стенке микрокапсулы.

В случае приготовления микрокапсул способом фазовой сепарации агент коацервации медленно добавляют к упомянутой в/с эмульсии при перемешивании, чтобы дать полимеру осесть и затвердеть.

Агентом коацервации может быть любое способное смешиваться с растворителем полимерное соединение, соединения минерального или растительного масла, как например, силиконовое масло, кунжутное, соевое, кукурузное, хлопковое, кокосовое, льняное, минеральные масла, н-гексан, н-гептан и т.д. Их можно использовать в смеси из двух или нескольких.

Полученные микрокапсулы собирают фильтрацией и промывают, например, гептаном, повторно, чтобы удалить бедный растворитель полимера. Далее удаление свободного лекарства и отделение растворителя проводится также, как и в способе высушивания в воде. Для противодействия слипанию микрокапсул одна с другой во времени промывания может быть добавлен агент.

Микрокапсулы изобретения, предназначенные для продолжительного высвобождения, полученные вышеупомянутым способом высушивания в воде, обладают лучшими и более стабильными свойствами длительного высвобождения на протяженности большого периода времени.

Микрокапсулы согласно изобретению назначают в виде инъекций, имплантаций и в виде агентов, поглощаемых слизистой оболочкой прямой кишки или матки.

После легкого дробления при необходимости микрокапсулы просеивают для удаления слишком больших из них. Средних размер гранул микрокапсул от 0,5 до 1000 м, желательно и предпочтительно от 2 до 500 mм. Если микрокапсулы используют в виде инъекций в форме суспензии, размер гранул должен быть достаточным и удовлетворять требованиям дисперсности и введению в виде инъекций, например, в пределах 2 100 μм.

Микрокапсулы, полученные способами по этому изобретению, имеют много преимуществ. Например, они почти не подвержены слипанию при изготовлении. Можно изготовить микрокапсулы, которые могут быть сферическими по форме с разным размером. Степень удаления растворителя из масляной фазы легко проконтролировать, следовательно, также можно контролировать поверхностную структуру микрокапсул, что является решающим фактором в скорости высвобождения лекарства.

Микрокапсулы, полученные способом изобретения, можно свободно назначать в виде инъекций и имплантировать внутримышечно, подкожно, внутривенно или на орган, суставную полость или на поражение, такое как опухоли. Их также можно назначать в различной дозировке и, таким образом, использовать как материалы в приготовлении таких форм дозировок.

Например, при изготовлении микрокапсул по этому для инъекций они диспергируются в водной среде вместе с диспергирующим агентом (напр. Tween 80, НСО-60, карбоксимотилцеллюлоза, алгинат натрия и т.п.), консервантом (напр. метилпарабен, пропилпарабен и т. п.), изотонирующим агентом (напр. хлорид натрия, маннит, сорбит, глюкоза и т.д.) или суспендируют в водной среде вместе с растительным маслом, таким как кунжутное масло или кукурузное. Такую дисперсию или суспензию формируют в практически используемый инъекционный раствор пролонгированного действия.

Далее микрокапсулированный инъекционный раствор с пролонгированным действием можно преобразовать в более стабильный инъекционный раствор добавлением дополнительного наполнителя (напр. маннит, сорбит, лактоза, глюкоза и т. д. ), повторным диспергированием полученной смеси и отвердением посредством высушивания при температуре ниже 0^oC или распылительным высушиванием с добавлением дистиллированной воды для инъекции или какого-либо соответствующего диспергирующего агента.

Доза препарата с длительным высвобождением в соответствии с изобретением может изменяться в зависимости от вида и количества физиологически активного пептида, который является активным ингредиентом, формы дозировки, длительности или высвобождения лекарства, животного- реципиента (например, теплокровных животных, таких как мышь, крыса, кролик, овца, свинья, корова, лошадь, человек) и цели назначения, но должна быть в пределах диапазона эффективной дозы данного активного ингредиента, например, разовую дозу микрокапсул на данное животное адекватно выбрать в пределах от 0,1 мг до 100 мг/кг веса тела, предпочтительно 0,2 мг-50 мг/кг веса тела.

Таким образом, получена фармацевтическая композиция, приготовленная в форме микрокапсул, которые включают эффективное, но большее количество физиологически активного пептида по сравнению с обычной единой дозой и биосовместимый полимер, и способная высвобождать лекарство непрерывно на протяжении длительного периода времени.

Препарат длительного высвобождения в соответствии с изобретением обладает среди других следующими характеристиками:
1. непрерывное длительное высвобождение физиологически активного пептида достигается в различных формах дозировки. В частности, там, где требуется долгосрочное лечение инъекцией, желаемых терапевтических эффектов можно достичь при стабильном действии инъекций препарата раз в три месяца или раз в шесть месяцев вместо ежедневного назначения. Таким образом, указанный препарат достигает длительного высвобождения лекарства на протяжении большего периода по сравнению с обычными препаратами такого действия;
2. если препарат, в котором используется биоразлагаемый полимер, назначают в форме инъекции, такая хирургическая операция как имплантация больше не требуется, и препарат можно назначать подкожно, внутримышечно или на орган или пораженный участок с легкостью таким же образом, как обычные суспензионные инъекции. И нет необходимости удалять матрицу из тела после завершения высвобождения лекарства.

Стандартный пример 1. В четырехгорлую колбу, снабженную термометром, холодильником и вводом для азота, загружают 160 г 85%-го водного раствора DL-молочной кислоты. Раствор нагревают при понижении давления 6 ч в потоках азота при внутренней температуре и давлении в пределах от 105^oC и 350 мм рт. ст. до 150^oC и 30 мм рт.ст. для удаления дистиллированной таким образом воды. Реакцию продолжают при 175^oC 90 ч при пониженном давлении от 3 до 5 мм рт. ст. далее содержимое охлаждают до комнатной температуры и получают 98 г практически бесцветного плотного полимера. Этот полимер растворяют в тетрагидрофуране и среднемассовую молекулярную массу и степень дисперсии определяют посредством гелепроницаемой хроматографии с использованием коммерчески доступного полистирола со стандартной молекулярной массой 17,200 и 1,89 соответственно.

Пример 1. ТАР-144 (400 мг) растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды для получения водной фазы. Водный раствор добавляют к раствору 4 г поли-DL-молочной кислоты (Lot N 870818, среднемассовая молекулярная масса 18.000 / микрокапсула Lot N 244.245) и Lоt N 880622, среднемассовая молекулярная масса 18.200, дисперсность 1; 76 ( микрокапсула Lot N 248) в 7,5 мл дихлорметана. Смесь перемешивают в гомогенизаторе небольшого размера (Polytron продукт Kinematica Швейцария) около 60 с для получения в/м эмульсии. Эту эмульсию охлаждают до 15^oC (поливинилового спирта (ПСВ), которые перемешивают с небольшим гомогенизатором для получения в/м/в эмульсии, чтобы таким образом отвердить внутреннюю в/м эмульсию с последующим сбором такого отвердевшего материала центрифугованием. Материал вновь диспергируют в дистиллированной воде с последующим центрифугованием, промыванием лекарства, и диспергирующий агент затем выделяют в свободном состоянии. Собранные таким образом микрокапсулы подвергают высушиванию при температуре ниже 0^oC для удаления растворителя и более полного обезвоживания и получения порошкообразного продукта. Содержание лекарства, захваченного в капсулах (Lot 244, 245, 248) указывалось, как 9% и коэффициент захвата составлял 100% или больше. Эти микрокапсулы назначают крысам (n=5) для подкожного применения, затем ТАР-144, остающийся в микрокапсулах, определяют количественно в месте введения инъекции для измерения in vivo скорости высвобождения лекарства. Результаты даны в табл. 1. Эти капсулы не показывают первоначального выброса, а продолжительное высвобождение ТАР-144 наблюдалось в течение 14 нед, т.е. больше 3 мес с хорошей воспроизводимостью.

Пример 2. Таким же образом ТАР-144 (400 мг) растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды для получения водной фазы, 4 г поли-DL-молочной кислоты со среднемассовой молекулярной массой 8.400 (Lot 870304, микрокапсула Lot 312) растворяют в 5 мл дихлорметана для получения масляной фазы. Водную фазу и масляную фазу смешивают, как описано выше для получения в/с эмульсии. Эту эмульсию охлаждают до 13^oC, выливают в 1,000 мл 0,25%-го водного раствора поливинилового спирта (ПВС). Смесь обрабатывают таким же образом, как описано выше для получения в/м/в эмульсии, которая готовилась в микрокапсулы. Далее 550 мг ТАР-144 растворяют в 1 мл дистиллированной воды. С другой стороны, 4 мг каждого из трех образцов поли-DL-молочной кислоты (Lot N 890717, молекулярная масса 14,100, дисперсность 2,00 микрокапсула Lot N 402, Lot N 890720, молекулярная масса 17,200, дисперсность 1,89, микрокапсула N 405; Lot N 890721, молекулярная масса 17,500, дисперсность 1,87, микрокапсула Lot N 406) растворялись в 7,5 мл каждый в дихлорметане. Указанный водный раствор добавляют к каждому из трех образцов, растворенных в дихлорметане с последующей обработкой таким же образом, как и ранее для получения трех образцов в/м эмульсии. Полученные эмульсии выливают в 1,000 мл каждого из трех образцов 0,25% -го водного раствора ПВС, предварительно охлажденного при 15^oC (первый) и при 18^oC (второй и третий), которые обрабатывают, соответственно, таким же образом для получения микрокапсул. Коэффициенты захвата лекарства были 101% 113% и 103% соответственно. В табл. 2 показаны скорости выхода лекарства в соответствующих микрокапсулах, измеряемых также, как указано выше.

Высвобождение лекарства после небольшого количества первоначальной дозы демонстрирует непрерывное продолжительное высвобождение на протяжении свыше 2 мес. Срок высвобождения зависит от скорости гидролиза используемого высокомолекулярного полимера.

Пример 3. Микрокапсулы готовят так же, как в примере 1 из водной фазы, полученной растворением 400 мг ТАР-144 в 0,5 мл дистиллированной воды, и масляную фазу готовят растворением 4 г полимолочной-гликолевой кислот (90/10/Lot N 870320 / среднемассовая молекулярная масса 19,000), микрокапсула Lot N 315, lot N 891020 / среднемассовая молекулярная масса 13,800, микрокапсула Lot N 410. Относительно микрокапсулы Lot N 410 водный раствор готовят растворением 550 мг ТАР-144 в 1 мл дистиллированной воды и используют как внутреннюю водную фазу и температуры в/м эмульсии и внешней фазы доводят до 15^oC и 18^oC соответственно. Коэффициенты захвата лекарства в этих микрокапсулах были 106% и 100% соответственно. Эти микрокапсулы вводят крысам подкожно так же, как описывалось выше, и in vivo оценивают скорости высвобождения лекарства. В табл. 3 показано действие микрокапсул с продолжительным высвобождением на протяжении непрерывного периода свыше 2 мес.

Пример 4. Микрокапсулы готовят так же, как в примере 1 из водной фазы, полученной растворением 280 мг ТРГ¹ в свободной форме (ТРГ¹ тиреорилизинг гормон, гормон, высвобождающий тиреотропин) в 0,25 мл дистиллированной воды и масляной фазы, полученной растворением в 6 мл дихлорметана поли-DL-молочной кислоты (средняя молекулярная масса 17,200, дисперсность 1,89), используемый в примере 2, и доведением температуры в/м эмульсии и внешней водной фазы до 15^oC. Коэффициент захвата лекарства в полученных микрокапсулах (Lot N P-103) составляет 85,8% Табл. 4 показывает, что высвобождение лекарств в таких микрокапсулах составляет большой период - около 3 меск

Claims

1. Микрокапсула для длительного высвобождения физиологически активного пептида по нулевому порядку в течение не менее двух месяцев, выполненная из высушенной эмульсии типа вода в масле, отличающаяся тем, что водная фаза эмульсии содержит 20 70 мас. полипептида, а масляная фаза эмульсии содержит сополимер со средней мол.м. 7000 30000 молочной и гликолевой кислот при их соотношении не ниже 80 20.

2. Микрокапсула по п. 1, отличающаяся тем, что полипептид содержит не менее двух аминокислотных остатков с мол.м. 200 100000.

3. Микрокапсула по п.1, отличающаяся тем, что полипептидом является гормон, высвобождающий лютенизирующий гормон (LH RH), и вещество, аналогичное LH RH, водорастворимое и обладающее мол.м. не менее 1000.

4. Микрокапсула по п. 1, отличающаяся тем, что полипептидом является (Пир) Glu His Trp Ser Tyr D Leu Leu Arg ProNHC₂H₅ (TAP-144).

5. Микрокапсула по п.1, отличающаяся тем, что полипептидом является гормон, высвобождающий тиротропин (TRH).

6. Микрокапсула по п.1, отличающаяся тем, что соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты составляет не менее 90 10.

7. Микрокапсула для длительного высвобождения физиологически активного пептида по нулевому порядку в течение не менее двух месяцев, выполненная из высушенной эмульсии типа вода в масле, отличающаяся тем, что водная фаза эмульсии содержит 20 70 мас. полипептида, а масляная фаза эмульсии содержит гомополимер молочной кислоты со средней мол.м. 7000 30000.

8. Микрокапсула по п. 7, отличающаяся тем, что полипептид содержит не менее двух аминокислотных остатков с мол.м. 200 100000.

9. Микрокапсула по п.7, отличающаяся тем, что полипептидом является гормон, высвобождающий лютенизирующий гормон (LH RH), и вещество, аналогичное LH RH, водорастворимые и обладающие мол.м. не менее 1000.

10. Микрокапсула по п. 7, отличающаяся тем, что полипептидом является (пир) Glu His Trp Ser Tyr D Leu Leu Arg - ProNHC₂H₅ (TAP-144).

11. Микрокапсула по п. 7, отличающаяся тем, что полипептидом является гормон, высвобождающий тиротропин (TRH).