[go: up one dir, main page]

RU2098109C1 - Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием - Google Patents

Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием Download PDF

Info

Publication number
RU2098109C1
RU2098109C1 RU9696118771A RU96118771A RU2098109C1 RU 2098109 C1 RU2098109 C1 RU 2098109C1 RU 9696118771 A RU9696118771 A RU 9696118771A RU 96118771 A RU96118771 A RU 96118771A RU 2098109 C1 RU2098109 C1 RU 2098109C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amount
microorganism
inflammatory
agent
allergic
Prior art date
Application number
RU9696118771A
Other languages
English (en)
Other versions
RU96118771A (ru
Inventor
Александр Григорьевич Чучалин
Нина Алексеевна Колганова
Елена Борисовна Галкина
Полина Львовна Заславская
Original Assignee
Александр Григорьевич Чучалин
Нина Алексеевна Колганова
Елена Борисовна Галкина
Полина Львовна Заславская
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Александр Григорьевич Чучалин, Нина Алексеевна Колганова, Елена Борисовна Галкина, Полина Львовна Заславская filed Critical Александр Григорьевич Чучалин
Priority to RU9696118771A priority Critical patent/RU2098109C1/ru
Priority to PCT/RU1997/000225 priority patent/WO1998013052A1/ru
Priority to AU37108/97A priority patent/AU3710897A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2098109C1 publication Critical patent/RU2098109C1/ru
Publication of RU96118771A publication Critical patent/RU96118771A/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/44—Staphylococcus
    • C12R2001/445—Staphylococcus aureus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Использование: биотехнология, медицина, как противоаллергические и противовоспалительные лекарственные средства и косметические средства того же действия. Сущность изобретения: средство противоаллергического и противовоспалительного действия представляет собой субстанцию, полученную из штамма микроорганизма Staphylococcus aureus C2 JUCK N222, прошедшего термофильную стадию развития, содержит белок в количестве 100 - 1000 PNU с биологической активностью по индексу устранения воспалительной реакции не менее 19%. Способ получения заключается в культивировании вышеупомянутого штамма микроорганизма на питательной среде жидкой или содержащей агар при T = 30 - 50oC в течение времени, обеспечивающего достаточный рост микроорганизма, затем выделяют микроорганизм из питательной среды, помещают в 0,5% раствор карболовой кислоты и обрабатывают полученную суспензию при T = 90 - 100oC, в течение времени, обеспечивающего деструкцию микроорганизма. Охлаждают полученную субстанцию и отфильтровывают остатки деструктурированного микроорганизма. Полученный раствор стерилизуют и разливают в ампулы для инъекций или во флаконы в качестве капель в нос или для наружного применения. Полученное средство используется в качестве целевой добавки для приготовления лечебных форм в виде мазей, свечей, а также косметических форм - кремов, лосьонов. 4 с. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к производству микробных препаратов, обладающих противоаллергическими и противовоспалительными свойствами.
Известны препараты, обладающие противовоспалительными свойствами, получаемые методами химического, биологического синтеза или комбинацией этих методов (экстракты трав, антибиотики, сульфамиды). Эти вещества не являются антиаллергическим препаратами и часто сами вызывают аллергию.
Аналогом предлагаемого средства являются гормоны-глюкокортикостероиды, получаемые методами химического синтеза и обладающие противоаллергическим и противовоспалительным действием. (Д.Мецлер, Биохимия. М. Мир, 1980, т. 2, с. 586). Однако последние помимо указанных лечебных свойств нарушают многие виды обмена человека водный, солевой, жировой и т.д. и приводят пациента к гормональной зависимости.
Наиболее близким аналогом-прототипом заявляемого средства является негормональный препарат "Paspat" Luitpold Werk Munchen (Germany), представляющий собой поливалентную смесь аутолизатов из восьми микроорганизмов, одним из которых является St. aureus, обладающий противоаллергическим действием и содержащим 18,0 30,0 мг/100 мл белкового азота или 18000 30000 PNU (0,01 мг/мл белкового азота соответствует 1000 PNU), то есть 1,1 1,87 мг/мл белка. Однако препарат обладает слабым противовоспалительным действием и не обладает высокой биологической активностью, так как содержит достаточно большое количество белка. Способ получения препарата сложен, так как предусматривает культивирование и обработку восьми различных микроорганизмов. По указанным причинам препарат не получил широкого распространения в медицинской практике.
Наиболее близким аналогом-прототипом способа получения предлагаемого средства является способ получения негормонального препарата "Paspat" Luitpold Werk Munchen (Germanu), который состоит из отдельного процесса культивирования каждого вида микроорганизмов, их деструкции и получения поливалентной смеси аутолизатов микроорганизмов [2]
Прототипом лечебного средства, используемого в качестве мази, является средство, содержащее в качестве основы ланолин (5,0) и вазелин (15,0) и в качестве целевой добавки пилокарпин гидрохлорид (0,2) (Виноградов В.М. с соавт. Фармакология с рецептурой. Л. Медицина, 1974), а также лечебное средство, которое в качестве основы содержит масло какао (2,0) и используется в форме свечей при болях, тенезмах, геморрое.
Известен штамм Staphylococcus auren C2 ГИСК N 222, используемый для изготовления противовоспалительного препарата [1]
Известны косметические средства, содержащие основу и различные целевые добавки. Прототипом заявляемого косметического средства является крем спермацетовый на основе природных жиров и масел и целевой добавки-экстракта спермацета (ГОСТ 29189-91).
Целью изобретения является получение высокоэффективного негормонального средства, обладающего противоаллергическим и противовоспалительным действием с высокой активностью белка и, соответственно, низким его содержанием в препарате.
Указанная цель достигается тем, что, негормональный препарат противоаллергического и противовоспалительного действия, получается путем обработки прошедшего термофильную стадию развития микроорганизма Staphylococcus aureus штамм C2 N 222, содержит белок в количестве 0,0063 - 0,063 мг/мл (белковый азот в количестве 100 1000 PNU), и имеет биологическую активность по индексу устранения воспалительной реакции не менее 19%
Биологическую активность предлагаемого средства определяли следующим образом. Пяти белым беспородным мышам (19 21 г) однократно внутривенно вводят 0,5 мл средства, разведенного в 100 раз 0,9%-ным раствором хлорида натрия для инъекций, пяти контрольным мышам вводят 0,5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида для инъекций. Через 60 мин в подушечку задней лапки каждого животного субплантарно вводят 0,02 мл водного раствора конканвалина A, содержащего 5 мг/мл. В контралатеральную конечность вводят 0,02 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида для инъекций. Через 90 мин животных забивают декапитацией, конечности отделяют по коленному суставу и взвешивают на аналитических весах.
Для каждого животного вычисляют индекс реакции по формуле:
ИР (P Pк)•100%/Pк,
где P масса конечности животных в мг с введенным конканвалином A;
Pк масса контралатеральной конечности в мг с введенным раствором натрия хлорида.
Описанный эксперимент повторяют 3 раза, вычисляют среднюю величину индекса реакции для опытной и контрольной групп животных. Для получения препарат микроорганизм St. aureus штамм C2 N222, прошедший термофильную стадию развития культивируют на питательной среде, жидкой или содержащей агар, при T 35 50oC в течение времени, обеспечивающего достаточный рост микроорганизма, обычно 18 24 ч, полученный микроорганизм отделяют от питательной среды, помещают в 0,5%-ный раствор карболовой кислоты и обрабатывают при T 90 100oC, в течение времени, обеспечивающего деструкцию микроорганизма, охлаждают полученную субстанцию до 20 22oC и отфильтровывают от деструктурированного микроорганизма. Культивирование Staphylococcus aureus штамм C2 N222 осуществляют поверхностным методом в пробирках, матрасах на питательных средах, содержащих агар, и в колбах и/или ферментерах на питательных средах, не содержащих агар. Для варианта осуществления процесса на питательных средах, не содержащих агар, культивирование микроорганизма, его деструктурирование, охлаждение культуральной жидкости и фильтрацию деструктурированного микроорганизма последовательно осуществляют в одном и том же биореакторе, оснащенном устройствами аэрации перемешивания, терморегулирования и фильтрации. Полученный препарат стерильно разливают в ампулы для подкожных инъекций или во флаконы для капель в нос или во флаконы для наружного применения. Результаты исследования препарата приведены ниже.
Другими лечебными формами, содержащими в качестве целевой добавки средство противоаллергического и противовоспалительного действия, полученного путем обработки прошедшего термофильную стадию развития St. aureus C2 N222 и содержащего белок в количестве 0,0063 0,063 мг/мл (белковый азот в количестве 100 1000 PNU), являются лечебные мази и свечи.
Мази содержат целевую добавку в количестве 5 10% а в качестве основы - ланолин, вазелин или их смеси в количестве 90 95%
Лечебные свечи содержат целевую добавку в количестве 5 10% а в качестве основы анестезирующее вещество в количестве 5 10% какао-масло в количестве 80 90%
Для повышения эффективности косметических средств предложенное средство вводится в них в качестве целевой добавки.
Косметическое средство-крем содержит целевую добавку в количестве 1 5% а в качестве основы оно содержит эмульсионные воска в количестве 2 6% растительные масла в количестве 5 15% глицерин в количестве 1 6% высшие спирты в количестве 0,5 3% спирт этиловый в количестве 1 5% остальное вода.
Косметическое лечебное средство лосьон содержит целевую добавку в количестве 1 5% а в качестве основы оно содержит водно-спиртовую смесь с ароматическими веществами в количестве 95 99%
Способ получения противоаллергического и противовоспалительного средства заключается в следующем. Мезофильную культуру золотистого стафилококка St. aureus шт C2 N222 (Депонирован в Музее НИИСтандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов имени Н.А.Тарасевича), подготовленную многократным пересевами при температуре культивирования до 60 70oC, засевают на стерильную комплексную питательную среду, содержащую 20 22% бульона, 0,4 0,6% глицерина, 1,0 1,5% яичного альбумина и 0,5 1,0% агара, разлитую в пробирки, колбы или матрасы, культивируют в термостате при температуре 35- 50oC в течение 18 24 ч, смывают культуру с поверхности агара
Токсикологическое изучение проведено в кардиоцентре.
Итог. 1. Острая токсичность: однократно в/брюш. в/мышечн. п/кожно мышам и крысам Вистар в дозах 1,5; 7,5 и 15,0 мл/кг не вызывает признаков интоксикации гибели животных (дозы в 600, 3000 и 6000 раз превышали лечебную).
В связи с отсутствием гибели животных не удалось установить среднесмертельные дозы (ЛД50), практически нетоксичен.
II. Хроническая токсичность (3 и 6 мес). На крысах Вистар дозы в 5, 25 и 100 раз превышали терапевтические дозы, препарат не влияет на общее состояние, поведение, массу тела, кровь, общий белок, активность ферментов печени, ЩФ, ЛДГ, на поджелудочную железу, почки, ССС -N, гистология органо -N, нет местнораздражительного действия. На собаках тот же результат.
Противопоказаний не выявлено в дозе 0,0025 мл/кг.
В НИИ Фармакологической генетики выполнено исследование мутагенных свойств препарата.
Комплексное исследование мутагенных свойств не выявило мутагенной активности препарата при его испытаниях в дозах, соответствующих терапевтическим для человека. Данное наблюдение позволяет сделать заключение о генетической безопасности применения препарата в пределах дозировок, рекомендуемых для клинического испытания.
Эмбриотоксичность и тератогенность. Под влиянием препарата в 40- и 100 -кратных терапевтических дозах наблюдается снижение количества родившихся крысят. Вместе с тем, препарат не влияет на показатели постнатальной смертности и динамики массы тела крысят в течение первого месяца жизни.
Таким образом, нельзя исключить эмбриотоксического действия препарата, в связи с чем беременность следует считать противопоказанием для его назначения.
Иммунотоксичность и аллергенность препарата изучены в ВНЦ по безопасности биологически активных веществ.
Заключение. Не обладает иммунотоксичными и аллергенными свойствами.
0,5%-ным раствором карболовой кислоты прогревают на водяной бане при температуре 90 100oC в течение 1 ч, охлаждают до температуры 20 - 22oC, фильтруют через бактериальные фильтры и стандартизируют физиологическим раствором на основании определения концентрации белка в растворе. Другим вариантом осуществления способа согласно изобретению является культивирование мезофильного штамма золотистого стафилококка, подготовленного многократными пересевами при температуре культивирования до 60 70oC. Продуцент засевают в колбы или в ферментеры со стерильной комплексной средой, того же состава, но не содержащей агара, культивируют при температуре 35 - 50oC в течение 18 24 ч, отделяют биомассу, суспендируют осадок в 0,5%-ном растворе карболовой кислоты, прогревают суспензию при температуре 90 95oC в течение 1 ч, охлаждают до температуры 20 22oC, фильтруют через бактериальные фильтры и стандартизуют физиологическим раствором на основании определения концентрации белка в растворе. При осуществлении процесса культивирования в ферментерах деструктурирование микроорганизма, охлаждение культуральной жидкости и выделение целевого продукта последовательно осуществляются в том же биореакторе, оснащенном барботером, мешалкой с электроприводом, рубашкой для подачи теплоносителей, системой терморегулирования и устройством для фильтрации. Стерильно отфильтрованную от деструктурированного микроорганизма субстанцию стандартизуют физиологическим раствором, определяют биологическую активность путем нахождения индекса устранения воспалительной реакции и стерильно разливают в ампулы вместимостью 0,5 мл, используемые в медицинской практике для инъекций, или во флаконы вместимостью 10 мл для капель в нос, или во флаконы 50 мл для наружного применения.
Полученную субстанцию также используют для получения лечебных и косметических средств, содержащих основу и целебную добавку противоаллергическое и противовоспалительное средство, полученное путем обработки прошедшего термофильную стадию развития St. aureus штамм C2 N222 и содержащего белок в количестве 0,0063 0,063 мг/мл (белковый азот в количестве 100 1000 ЗТГ).
Целевую добавку при изготовлении лечебной мази добавляют в количестве 5
10% в предварительно подогретую до 60 70oC, перемешанную основу, содержащую ланолин в количестве 50 90% вазелин в количестве 50 90% или смеси этих компонентов. Полученную смесь гомогенизируют и расфасовывают в специально подготовленные банки или тубы.
Лечебные свечи изготавливают путем добавления целевой добавки в количестве 5 10% в предварительно гомогенизированную основу, содержащую анестезирующую добавку 5 10% какао-масло 80 90% при температуре 50 - 70oC. Полученную смесь подвергают гомогенизации и заливают в специально подготовленные формы.
Для получения косметического крема предварительно готовится основа: эмульсионные воска в количестве 2 6% сплавляют с растительными маслами в количестве 5 15% и высшими молекулярными спиртами в количестве 0,5 3% при температуре 90oC, фильтруют через марлевый фильтр и охлаждают до 60oC; глицерин в количестве 1 6% смешивается со спиртом этиловым в количестве 1 - 5% и к этой смеси прибавляют предварительно смешанную целевую добавку в количестве 1 5% с водой в количестве 81% полученный раствор маленькими порциями при интенсивном перемешивании добавляют в подготовленную вязкую фазу, поддерживая температуру смеси 60oC. Полученный крем расфасовывают в предварительно подготовленные банки, имеющие вкладыш-контейнер.
При изготовлении косметических лосьонов в основу, представляющую собой водно-спиртовую смесь с ароматическими веществами в количестве 95 99% добавляют целевую добавку в количестве 1 5% перемешивают и разливают во флаконы.
Практическое осуществление способа иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Мезофильную культуру золотистого стафилококка St. aureus штамм C2 N222, подготовленную многократными пересевами при температуре культивирования до 60 70oC, засевают в пробирки с 10 мл стерильной скошенной комплексной питательной среды, содержащий 20% мартеновского бульона, 0,6% глицерина, 1,0% яичного альбумина и 0,5% агара, культивируют в термостате при 37oC в течение 24 ч, смывают культуру с поверхности агара 0,5%-ным раствором карболовой кислоты в физрастворе, прогревают на водяной бане при температуре 92oC в течение 1,5 ч, фильтруют через бактериальные фильтры фирмы "Миллипор" с диаметром пор 0,22 мкм и впоследствии стандартизируют физиологическим раствором на основании определения концентрации белка в растворе. Количество белка, полученного данным способом после фильтрации 0,1 мг/мл. Биологическая активность препарата, определяемая индексом устранения воспалительной реакции равна 30%
В результате получают производительность процесса с литра питательной среды 5,8 мг/ч.
Стандартизованное противоаллергическое и противовоспалительное средство для концентрации белкового азота 300 PNU, добавляют в качестве целевой добавки в лечебный косметический крем в количестве 2%
Для получения косметического крема предварительно готовят основу: эмульсионные воска в количестве 6% сплавляют с косточковым маслом в количестве 8% и высшими молекулярными спиртами в количестве 1% при температуре 90oC, фильтруют через марлевый фильтр и охлаждают до 60oC; глицерин в количестве 2% смешивают со спиртом этиловым в количестве 2% и к этой смеси прибавляют предварительно смешанную целевую добавку в количестве 2% с водой в количестве 81% полученный раствор маленькими порциями при интенсивном перемешивании добавляют в подготовленную вязкую фазу, поддерживая температуру смеси 60oC. Полученный крем расфасовывают в предварительно подготовленные банки вместимостью 75 мл, имеющие вкладыш-контейнер.
Пример 2. Мезофильную культуру золотистого стафилококка St. aureus штамм C2 N222, подготовленную многократными пересевами при температуре культивирования до 60 70oC засевают в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл на среду без агара, содержащую 100 мл стерильной комплексной среды, следующего состава, мясопептонный бульон 22; глицерин 0,5; 0 яичный альбумин 1,0, культивируют в термостате при температуре 40±1oC в течение промежутка времени до 24 ч на круговой качалке со скоростью вращения 220 об/мин, отфуговывают биомассу на центрифуге при 3000 об/мин, суспендируют осадок в 10 мл 0,5%-ной карболовой кислоты, прогревают суспензии при 90oC в течение 1 ч, фильтруют через бактериальные фильтры фирмы "Миллипор" с диаметром пор 0,22 мкм и стандартизуют физиологическим раствором на основании определения концентрации белка в растворе. При указанном варианте способа получают концентрацию белка после фильтрации 0,4 мг/мл, биологическая активность препарата по индексу устранения воспалительной реакции равна 37% Производительность процесса с 1 л питательной среды 11,11 мг белка в час.
Стандартизованное противоаллергическое и противовоспалительное средство стандартизуют до концентрации белкового азота 500 PNU, используют в качестве противоаллергических и противовоспалительных капель в нос, стерильно разлитых во флаконы вместимостью 10 мл или во флаконы вместимостью 50 мл для наружного применения, а также в качестве целевой добавки при получении косметических лосьонов. При изготовлении косметического лосьона в основу, представляющую собой водно-спиртовую смесь с ароматическими веществами в количестве 96% добавляют целевую добавку в количестве 4% перемешивают и разливают во флаконы.
Пример 3. Мезофильную культуру золотистого стафилококка St. aureus штамм C2 N222, подготовленную многократными пересевами при температуре культивирования до 60 70oC засевают на среду без агара, содержащую следующие компоненты, мясопептоннsq бульон 20; глицерин 0,5; яичный альбумин 1,0. Выращивание культуры проводят в лабораторном ферментере производства швейцарской фирмы "Хемап" вместимостью 15 л, оснащенном двухъярусной мешалкой турбинного типа с электроприводом на основе двигателя постоянного тока с регулировкой скорости вращения от 0 до 1000 об/мин. Ферментер также оборудован системой автоматического регулирования температуры. Объем среды в ферментере составляет 10 л, аэрацию поддерживают на уровне 4 л/мин (0,4 об/об мин), а перемешивание 220 об/мин, температуру поддерживают на уровне 40±1oC. После 18 ч культивирования отключают мешалку, перекрывают выход воздуха и под действием избыточного давления отфильтровывают микроорганизмы от среды культивирования через фильтр производства фирмы "Миллипор" с мембраной, имеющей диаметр пор 0,22 мкм, смонтированный в нижней части ферментера. После удаления из ферментера всей жидкой фазы в него передают 1 л стерильного физраствора, содержащего 0,5% карболовой кислоты. Включают мешалку и доводят температуру жидкости в ферментере до 90 95oC. При включенной мешалке 25 50 об/мин выдерживают жидкость, содержащую целевой продукт, при температуре 90oC в течение 50 мин, затем охлаждают эту жидкость до температуры 20oC. После охлаждения производят выделение (стерилизующую фильтрацию) раствора, содержащего препарат через фильтр производства фирмы "Миллипор" с мембраной, имеющей диаметр пор 0,22 мкм. В результате фильтрации получают (с учетом потерь) 0,8 л стерильного раствора противоаллергического и противовоспалительного препарата с концентрацией белка 0,5 мг/мл. Биологическая активность препарата определяется индексом устранения воспалительной реакции равна 47% При этом производительность процесса составляет 14,7 мг белка в час. Стандартизованное противоаллергическое и противовоспалительное средство до концентрации белкового азота 300 PNU используют в качестве инъекционного раствора, стерильно разлитого в ампулы вместимостью 0,5 мл, а также в качестве стерильной субстанции для приготовления лечебных мазей и свечей.
Целевую добавку при изготовлении лечебной мази добавляют в количестве 7% в предварительно подогретую до 60 70oC перемешанную основу, содержащую ланолин в количестве 50% вазелин в количестве 43% Полученную смесь гомогенизируют и расфасовывают в специально подготовленные тубы вместимостью 50 мл.
Лечебные свечи изготавливают путем добавления целевой добавки в количестве 8% в предварительно гомогенизированную основу, содержащую анестезирующую добавку 7% какао-масло 85% при температуре 50 70oC. Полученную смесь подвергают гомогенизации и заливают в специально подготовленные формы.
В специальных экспериментах показана необходимость и достаточность заявляемого интервала температур культивирования. Установлено, что при температуре ниже 35oC и выше 50oC наблюдается замедление роста микроорганизма и снижение биологической активности целевого продукта. Также подтверждена необходимость и достаточность заявляемого температурного диапазона для стадии деструктурирования микроорганизма. При этом показано, что для температуры ниже 90oC не происходит полного извлечения целевого продукта из культуральной жидкости. При температуре выше 100oC ухудшаются реологические свойства культуральной жидкости, что приводит к дополнительным потерям на стадии фильтрации и, соответственно, к снижению производительности процесса.
Преимущества заявляемого средства по сравнению с прототипом (препарат Paspat) подтверждены в специальных медикобиологических экспериментах.
В первой серии экспериментов проведена сравнительная оценка противоаллергических свойств при лечении наиболее распространенных аллергических заболеваний. По две группы больных проходили курс лечения соответственно предлагаемым средством и препаратом по прототипу. Больные страдали аллергическими ринитами, крапивницей, бронхиальной астмой. Курс состоял из 6 10 инъекций подкожно по 0,2 мл 1 раз в неделю. Белковая нагрузка по предлагаемому способу на одну инъекцию составляют 0,00125 0,0125 мг, а по прототипу 0,225 0,375 мг, то есть в 30 180 раз выше.
Результаты сравнительного анализа действия препаратов Paspat и препарата по предлагаемому способу на больных с аллергическими заболеваниями представлены в табл. 1.
Под улучшением состояния при рините, атоническом дерматите, крапивнице и отеке Квинке подразумевается переход в более легкие формы заболевания.
Излечение подразумевает отсутствие симптомов аллергического воспаления после курса лечения по предлагаемому способу и по прототипу. Одновременно у больных, прошедших курс лечения предлагаемым препаратом, отмечалось снижение уровня дисбактериоза, значительно более выраженного, чем при использовании препарата по прототипу (препарат Paspat). Во второй серии экспериментов проведена сравнительная оценка противовоспалительных свойств предлагаемого средства и прототипа при лечении наиболее распространенных воспалительных заболеваний.
По две группы больных проходили курс лечения соответственно предлагаемым средством и препаратом по прототипу. Больные страдали воспалительными заболеваниями хронический бронхит, хронический ринит (неаллергический), повышенная чувствительность к инфекциям, фурункулез Курс состоял из 6 10 инъекций подкожно по 0,2 мл 1 раз в неделю. Белковая нагрузка по предлагаемому способу на одну инъекцию составляет 0,00125 0,0125 мг, а по прототипу 0,225 0,375 мг, то есть в 30 180 раз выше.
Результаты сравнительного анализа действия препаратов Paspat и препарата по предлагаемому способу на больных с воспалительными заболеваниями представлены в табл. 2.
Проведена проверка действия в формах каплей в нос и раствора для наружного применения, а также мазей и свечей, содержащих препарат в качестве целевой добавки. В связи с тем, что препарат по прототипу выпускается только в виде лекарственной формы для инъекций, сопоставительный анализ лечебных свойств перечисленных выше форм препарата по прототипу не представляется корректным. Поэтому проведена оценка противоаллергического и противовоспалительного действия данных форм только для предлагаемого средства. Результаты приведены в табл. 3.
Использование мази с целевой добавкой по предлагаемому способу при лечении больных с хроническим неаллергическим ринитом, а также для наружного применения в местах лихенизации кожи при аллергическом дерматите привело к значительному улучшению состояния в 80% случаях. Лечебные свечи с добавлением целевой добавки по предлагаемому способу применялись для больных, у которых в аллергический процесс вовлечены слизистая желудочно-кишечного тракт и с раздражением анального отверстия. Улучшение состояния наблюдалось у 84% пролеченных больных. Таким образом, предлагаемое средство имеет негормональное происхождение, обладает высоким противоаллергическим и противовоспалительным действием, обладает белковой нагрузкой на пациента в 30 180 раз меньше, чем препарат по прототипу, является продуктом жизнедеятельности только одного микроорганизма, прошедшего термофильную стадию развития в отличие от прототипа, где препарат является продуктом аутолиза восьми микроорганизмов. Следует отметить, что хотя косметические и лечебные средства изобретения были описаны применительно к кремам, лосьонам, мазям и свечам, изобретение можно использовать и применительно к таким косметическим средствам как шампуни, зубные пасты, мыла и т.п. Поэтому формула изобретения сформулирована достаточно широко.
Испытание косметического крема было проведено на белых беспородных мышах, крысах и кроликах.
Было установлено, что крем с 2%-ным содержанием основного действующего вещества не обладает раздражающим и аллергизирующим действием на моделях конъюктивальной и кожно-резоротивной пробы.
Клиническая апробация крема проведена в лаборатории по изучению репаративных процессов в коже ММА им. И.М. Сеченова на 25 женщинах от 18 до 42 лет с аллергическими дерматитами, у некоторых осложненных угреватой сыпью.
Крем хорошо впитывается и переносится испытуемыми, не вызывает сенсибилизации и местнораздражающего действия.
Крем снимает очаги аллергического воспаления, угревой сыпи, уменьшается краснота, отечность, шелушение. Уменьшается блеск и сальность кожи.
Состав крема,
Эмульсионные воски 6
Глицерин 2
Спирт этиловый 2
высшие спирты 1
Масло косточковое 8
Вентол 0,05 0,1
Активное начало 2
Одушка 0,2 0,5
Вода питьевая До 100
Основным действующим веществом крема, обуславливающим его противоаллергическое и противовоспалительное действие, является средство из Staphylococcus aureus, прошедшего термофильную стадию обработки.
Крем применяется в качестве неспецифического антиаллергического средства, представляет собой эмульсию типа масло/вода густой консистенции. Крем обладает сильным противовоспалительным действием.

Claims (10)

1. Средство противоаллергического и противовоспалительного действия, отличающееся тем, что представляет собой субстанцию, полученную из штамма Staphylococcus aureus С2 ГИСК N 222, предварительно прошедшего термофильную стадию развития и обладает биологической активностью по индексу устранения воспалительной реакции не менее 19% содержит белок в количестве 0,0063 - 0,063 мг/мл, белковый азот в количестве 100 1000 PNU.
2. Способ получения средства противоаллергического и противовоспалительного действия, отличающийся тем, что культивируют штамм Staphylococcus aureus С2 ГИСК N 222, прошедший термофильную стадию развития, на питательной среде, жидкой или содержащей агар, при 30 50o С в течение времени, обеспечивающего достаточный рост микроорганизма, полученную биомассу отделяют от питательной среды, помещают в 0,5%-ный раствор карболовой кислоты и обрабатывают при 90 100oС в течение времени, обеспечивающего деструкцию биомассы, охлаждают полученную субстанцию и отфильтровывают от деструктурированных остатков биомассы, стерилизуют и разливают в ампулы для инъекций или во флаконы в качестве капель в нос или для наружного применения.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что культивирование штамма микроорганизма осуществляют в течение 18 24 ч.
4. Способ по п. 2 или З, отличающийся тем, что охлаждение субстанции проводят до 20 22oС.
5. Способ по п. 2, или 3, или 4, отличающийся тем, что при использовании жидкой питательной среды культивирование и деструкцию биомассы микроорганизма, охлаждение полученной субстанции и ее фильтрацию от деструктурированных остатков биомассы последовательно осуществляют в одном и том же биореакторе, оснащенном устройствами аэрации-перемешивания, терморегулирования и фильтрации.
6. Лечебное средство противовоспалительного и противоаллергического действия, содержащее основу и целевую добавку, отличающееся тем, что в качестве целевой добавки оно содержит средство противовоспалительного и противоаллергического действия, охарактеризованное в п. 1, в количестве 5 10 мас.
7. Средство по п. 6, отличающееся тем, что оно выполнено в виде мази, содержащей в качестве основы ланолин, вазелин или их смесь в количестве 90 - 95 мас.
8. Средство по п.6, отличающееся тем, что оно выполнено в виде свечей, содержащих в качестве основы 5 10 мас. анестезирующего вещества и 80 90 мас. масла какао.
9. Косметическое средство, содержащее основу и целевую добавку, отличающееся тем, что в качестве целевой добавки оно содержит 1 5 мас. средства противоаллергического и противовоспалительного действия, охарактеризованного в п. 1.
10. Средство по п. 9, отличающееся тем, что оно выполнено в виде крема, содержащего в качестве основы, мас.
Эмульсионные воски 2 6
Растительные масла 5 15
Глицерин 1 6
Высшие спирты 0,5 3
Спирт этиловый 1 5
Вода Остальное
11. Средство по п. 9, отличающееся тем, что в качестве основы оно содержит водно-спиртовую смесь с ароматизирующими веществами.
RU9696118771A 1996-09-26 1996-09-26 Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием RU2098109C1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU9696118771A RU2098109C1 (ru) 1996-09-26 1996-09-26 Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
PCT/RU1997/000225 WO1998013052A1 (fr) 1996-09-26 1997-07-18 Produit anti-allergique et anti-inflammatoire, procede de production de ce produit, produit cosmetique et produit hygienique
AU37108/97A AU3710897A (en) 1996-09-26 1997-07-18 Anti-allergic and anti-inflammatory product, method for producing the same, cosmetic product and hygienic product

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU9696118771A RU2098109C1 (ru) 1996-09-26 1996-09-26 Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2098109C1 true RU2098109C1 (ru) 1997-12-10
RU96118771A RU96118771A (ru) 1998-12-27

Family

ID=20185643

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU9696118771A RU2098109C1 (ru) 1996-09-26 1996-09-26 Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU3710897A (ru)
RU (1) RU2098109C1 (ru)
WO (1) WO1998013052A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA017436B1 (ru) * 2006-04-26 2012-12-28 УАЙТ ЭлЭлСи Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6819930B1 (en) 2000-11-03 2004-11-16 Lucent Technologies Inc. Apparatus and method for use in allocating a channel resource in wireless multiple access communications systems
ES2764674T3 (es) 2010-06-04 2020-06-04 Wyeth Llc Formulaciones vacunales

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2077101B (en) * 1980-05-12 1984-08-08 Kyokuto Fatty Acid Corp Antiallergic composition containing streptococci
SE8604587D0 (sv) * 1986-10-28 1986-10-28 Pharmacia Ab Lekemedelssats for sarlekningsstimulering samt sett att anvenda och tillverka satsen
SU1723116A1 (ru) * 1988-04-15 1992-03-30 Оренбургский Государственный Медицинский Институт Штамм бактерий BacILLUS SUвтILIS, используемый дл получени препарата дл профилактики и лечени воспалительных процессов и аллергических заболеваний
EP0450015B1 (en) * 1989-10-06 1995-06-07 János SZABO Pharmaceutical composition for the treatment of skin diseases, especially pyogenous and atopic dermatitis and process for the preparation thereof
CH680045A5 (ru) * 1990-02-16 1992-06-15 Om Lab Sa

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. RU, патент, 2058387, С 12 N 1/20, 1996. 2. GB, патент, 2240922, A 61К 35/74, 1991. 3. Справочник Видаль "Лекарственные препараты в России". - М.: АстраФармСервис, 1995, с. 715. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA017436B1 (ru) * 2006-04-26 2012-12-28 УАЙТ ЭлЭлСи Новые составы, стабилизирующие иммуногенные композиции и ингибирующие их осаждение

Also Published As

Publication number Publication date
WO1998013052A1 (fr) 1998-04-02
AU3710897A (en) 1998-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4918008A (en) Process for the preparation of protein hydrolysate and medicaments containing these hydrolysates
CN113855718A (zh) 青蒿提取物及其应用
CN107429228B (zh) 干细胞材料及制备方法
EP1330262B1 (de) Verwendung von aus ciliaten gewonnenen enzymen als verdauungsfördernde arzneimittel
JP6510004B2 (ja) イミダゾールジペプチドを含有するエクソソーム調節剤、およびエクソソームを含有する神経細胞活性化剤
RU2098109C1 (ru) Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебное и косметическое средства с его использованием
EP2730585B1 (en) Protein-polypeptide complex obtained from tissues of embryos of hoofed animals , use on skin tissue, method for producing said complex and pharmaceutical composition
JP2013523869A (ja) エンドウペプチド加水分解物の保湿活性作用剤としての使用
CN100512808C (zh) 促进创面修复愈合的复方氨基酸外用制剂及制法和其应用
EP2730586B1 (en) Protein-polypeptide complex obtained from tissues of hoofed livestock embryos, process for preparing same and pharmaceutical composition
EP2730584B1 (en) Protein-polypeptide complex obtained from nervous tissue of hoofed livestock embryos, process for preparing same and pharmaceutical composition
JPS6127912A (ja) 溶解ハフニア抽出物を含有する新規な化粧用組成物
Osipchuk et al. The use of biologically active substances from plant raw materials in certain physiological conditions of cows
EP1541162A1 (en) Intravaginal washing agent
Lisnawati et al. Formulation and evaluation of antibacterial activity of nanoparticles ointment preparation using Blimbi extract
JP7357645B2 (ja) 敏感肌の処置のための抽出物および該抽出物を含む皮膚科用組成物
JPH08163983A (ja) ヒアルロン酸産生促進剤
RU2372925C2 (ru) Линимент бальзамический сапропелевый
RU2326681C2 (ru) Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек различной этиологии
Basir et al. Antibacterial activity test of Moringa leaf ethanol extract ointment of Moringa oleifera Lamk. on Staphylococcus aureus bacteria
CZ308231B6 (cs) Kombinované několikastupňové mikrobiální přípravky a způsob jejich aplikace
KR102700425B1 (ko) 혈액 유래 활성분획물을 유효성분으로 함유하는 탈모예방 및 개선용 조성물
RU2528065C1 (ru) РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ШТАММА Trichoderma harzianum Rifai
RU2774843C1 (ru) Способ получения кормовой добавки для выращивания цыплят бройлеров
RU96118771A (ru) Противоаллергическое, противовоспалительное средство, способ его получения, лечебные и косметические средства с его использованием

Legal Events

Date Code Title Description
QZ4A Changes in the licence of a patent

Effective date: 20030915

QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE

Effective date: 20110906