Claims (63)
1. Полипептид, содержащий связывающий FcRn рекомбинантно сконструированный вариант последовательности стефина, который связывается с человеческим FcRn с Kd 1×10-6 М или менее при рН 6,0, и (возможно) с Kd для связывания с человеческим FcRn при рН 7,4, которая по меньшей мере на половину log больше, чем Kd для связывания при рН 6,0.1. A polypeptide comprising an FcRn binding recombinantly engineered stefin sequence variant that binds to human FcRn with a K d of 1×10 -6 M or less at pH 6.0, and (optionally) with a K d for binding to human FcRn at pH 7 .4, which is at least half a log greater than the Kd for binding at pH 6.0.
2. Полипептид по п. 1, содержащий (1) связывающийся с FcRn рекомбинантно сконструированный вариант полипептидной последовательности стефина, который связывается с человеческим FcRn, и (2) гетерологический полипептид, ковалентно соединенный со связывающим FcRn рекомбинантно сконструированным вариантом полипептидной последовательности стефина (возможно в виде слитого белка или химически конъюгированного), который обладает терапевтической активностью у пациентов-людей.2. The polypeptide of claim 1, comprising (1) an FcRn-binding recombinantly engineered variant of the stefin polypeptide sequence that binds to human FcRn, and (2) a heterologous polypeptide covalently linked to the FcRn-binding recombinantly engineered variant of the stefin polypeptide sequence (possibly in the form fusion protein or chemically conjugated) that has therapeutic activity in human patients.
3. Полипептид по п. 1, содержащий связывающий FcRn рекомбинантно сконструированный вариант полипептидной последовательности стефина, который связывается с человеческим FcRn и имеет аминокислотную последовательность, которая может кодироваться нуклеиновой кислотой, имеющей кодирующую последовательность, которая гибридизируется с любой из SEQ ID NO: 888-1181 в жестких условиях 6Х хлорида натрия/цитрата натрия (SSC) при 45°С с последующим промыванием в 0,2Х SSC при 65°С.3. The polypeptide of claim 1, comprising an FcRn binding recombinantly engineered variant of the stefin polypeptide sequence that binds to human FcRn and has an amino acid sequence that can be encoded by a nucleic acid having a coding sequence that hybridizes to any of SEQ ID NO: 888-1181 under severe conditions of 6X sodium chloride/sodium citrate (SSC) at 45°C followed by rinsing in 0.2X SSC at 65°C.
4. Полипептид по п. 1, где связывающийся с FcRn рекомбинантно сконструированный вариант последовательности стефина связывается с FcRn с Kd 1×10-7 М или менее при рН 6,0, Kd 1×10-8 М или менее при рН 6,0, или Kd 1×10-9 М или менее при рН 6,0.4. The polypeptide of claim 1, wherein the FcRn-binding recombinantly engineered stefin sequence variant binds to FcRn with a K d of 1×10 -7 M or less at pH 6.0, a K d of 1×10 -8 M or less at pH 6 .0, or K d 1×10 -9 M or less at pH 6.0.
5. Полипептид по п. 1, где связывающийся с FcRn рекомбинантно сконструированный вариант последовательности стефина связывается с FcRn при рН 7,4 с Kd, которая по меньшей мере на один log больше, чем Kd для связывания с FcRn при рН 6,0, по меньшей мере на 1,5 log больше, чем Kd для связывания с FcRn при рН 6, по меньшей мере на 2 log больше, чем the Kd для связывания с FcRn при рН 6, или по меньшей мере на 2,5 log больше, чем the Kd для связывания с FcRn при рН 6.5. The polypeptide of claim 1, wherein the FcRn-binding recombinantly engineered stefin sequence variant binds to FcRn at pH 7.4 with a K d that is at least one log greater than the K d for FcRn binding at pH 6.0 , at least 1.5 log greater than the K d for binding to FcRn at pH 6, at least 2 log greater than the K d for binding to FcRn at pH 6, or at least 2.5 log is greater than the K d for binding to FcRn at pH 6.
6. Полипептид по п. 1, который имеет период полувыведения из сыворотки крови у пациентов-людей более 10 часов, более 24 часов, более 48 часов, более 72 часов, более 96 часов, более 120 часов, более 144 часов, более 168 часов, более 192 часов, более 216 часов, более 240 часов, более 264 часов, более 288 часов, более 312 часов, более 336 часов или более 360 часов.6. The polypeptide of claim 1, which has a serum half-life in human patients greater than 10 hours, greater than 24 hours, greater than 48 hours, greater than 72 hours, greater than 96 hours, greater than 120 hours, greater than 144 hours, greater than 168 hours , more than 192 hours, more than 216 hours, more than 240 hours, more than 264 hours, more than 288 hours, more than 312 hours, more than 336 hours or more than 360 hours.
7. Полипептид по п. 1, который имеет период полувыведения из сыворотки крови у пациентов-людей, составляющий более 50%, более 60%, более 70% или более 80% от периода полувыведения из сыворотки крови IgG, и/или7. The polypeptide of claim 1, which has a serum half-life in human patients that is greater than 50%, greater than 60%, greater than 70%, or greater than 80% of the serum half-life of IgG, and/or
который имеет период полувыведения из сыворотки крови у пациентов-людей, составляющий более 50%, более 60%, более 70% или более 80% от периода полувыведения из сыворотки крови сывороточного альбумина.which has a serum half-life in human patients that is greater than 50%, greater than 60%, greater than 70%, or greater than 80% of the serum half-life of serum albumin.
8. Полипептид по п. 1, который не ингибирует связывание человеческого сывороточного альбумина с человеческим FcRn, который не ингибирует связывание IgG с человеческим FcRn, и/или где связывание полипептида с человеческим FcRn облегчает транспорт данного полипептида от апикальной стороны к базальной стороне эпителиального клеточного слоя.8. The polypeptide of claim 1, which does not inhibit the binding of human serum albumin to human FcRn, which does not inhibit the binding of IgG to human FcRn, and/or wherein binding of the polypeptide to human FcRn facilitates transport of the polypeptide from the apical side to the basal side of the epithelial cell layer .
9. Полипептид по п. 1, содержащий аминокислотную последовательность, представленную общей формулой (I)9. The polypeptide according to claim 1, containing the amino acid sequence represented by the general formula (I)
гдеWhere
FR1 представляет собой аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью с MIPGGLSEAK PATPEIQEIV DKVKPQLEEK TNETYGKLEA VQYKTQVLA (SEQ ID NO: 1);FR1 is an amino acid sequence having at least 70% identity with MIPGGLSEAK PATPEIQEIV DKVKPQLEEK TNETYGKLEA VQYKTQVLA (SEQ ID NO: 1);
FR2 представляет собой аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью с GTNYYIKVRA GDNKYMHLKV FKSL (SEQ ID NO: 2);FR2 is an amino acid sequence having at least 70% identity with GTNYYIKVRA GDNKYMHLKV FKSL (SEQ ID NO: 2);
FR3 представляет собой аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью с EDLVLTGYQV DKNKDDELTG F (SEQ ID NO: 3); иFR3 is an amino acid sequence having at least 70% identity with EDLVLTGYQV DKNKDDELTG F (SEQ ID NO: 3); And
Хаа, индивидуально для каждого случая, представляет собой аминокислоту, n представляет собой целое число от 3 до 20, и m представляет собой целое число от 3 до 20.Haa, individually for each case, represents an amino acid, n represents an integer from 3 to 20, and m represents an integer from 3 to 20.
10. Полипептид по п. 9, где:10. Polypeptide according to claim 9, where:
FR1 имеет по меньшей мере 80%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 96%, или по меньшей мере 98% идентичность с SEQ ID NO: 1;FR1 has at least 80%, at least 82%, at least 84%, at least 86%, at least 88%, at least 90%, at least 92%, at least 94%, at least 96%, or at least 98% identity with SEQ ID NO: 1;
FR2 имеет по меньшей мере 80%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 92%, или по меньшей мере 96% идентичность с SEQ ID NO: 2; и/или.FR2 has at least 80%, at least 84%, at least 88%, at least 92%, or at least 96% identity with SEQ ID NO: 2; and/or.
FR3 имеет по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% идентичность с SEQ ID NO: 3.FR3 has at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identity with SEQ ID NO: 3.
11. Полипептид по п. 9, где:11. Polypeptide according to claim 9, where:
FR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1;FR1 contains the amino acid sequence SEQ ID NO: 1;
FR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; и/илиFR2 contains the amino acid sequence SEQ ID NO: 2; and/or
FR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.FR3 contains the amino acid sequence SEQ ID NO: 3.
12. Полипептид по п. 9, где (Хаа)n представляет собой аминокислотную последовательность, представленную общей формулой12. The polypeptide according to claim 9, where (Xaa) n is an amino acid sequence represented by the general formula
-Хаа-Хаа2-Хаа3-Хаа4-Хаа5-Хаа6-Хаа7-Хаа-Хаа- (SEQ ID NO: 4), где Хаа, Хаа2, Хаа3, Хаа4, Хаа5, Хаа6 и Хаа7, индивидуально для каждого случая, представляет собой аминокислотный остаток, при условии, что (1) по меньшей мере два из Хаа2, Хаа3, Хаа4 или Хаа5 выбраны из His, Lys или Arg, или (2) по меньшей мере два из Хаа4, Хаа5, Хаа6 или Хаа7 выбраны из His, Lys или Arg.-Haa-Haa2-Haa3-Haa4-Haa5-Haa6-Haa7-Haa-Haa- (SEQ ID NO: 4), where Haa, Haa2, Haa3, Haa4, Haa5, Haa6 and Haa7, individually for each case, represents the amino acid residue, provided that (1) at least two of Xaa2, Xaa3, Xaa4 or Xaa5 are selected from His, Lys or Arg, or (2) at least two of Xaa4, Xaa5, Xaa6 or Xa7 are selected from His, Lys or Arg.
13. Полипептид по п. 12, где по меньшей мере три, и предпочтительно четыре из Хаа2, Хаа3, Хаа4, Хаа5, Хаа6 или Хаа7 выбраны из His, Lys или Arg.13. The polypeptide of claim 12, wherein at least three, and preferably four, of Xaa2, Xaa3, Xaa4, Xaa5, Xaa6 or Xaa7 are selected from His, Lys or Arg.
14. Полипептид по п. 9, где (Хаа)n по меньшей мере на 75% идентична последовательности петли 2, выбранной из SEQ ID NO: 6-299 и 1182.14. The polypeptide of claim 9, wherein (Xaa) n is at least 75% identical to the loop 2 sequence selected from SEQ ID NOs: 6-299 and 1182.
15. Полипептид по п. 9, где (Хаа)m представляет собой аминокислотную последовательность, представленную общей формулой15. The polypeptide according to claim 9, where (Xaa) m is an amino acid sequence represented by the general formula
-Xaa-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa- (SEQ ID NO: 5),-Xaa-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa- (SEQ ID NO: 5),
где Хаа, Хаа8, Хаа9, Xaa10, Xaa11, Хаа12, Хаа13 и Хаа14, индивидуально для каждого случая, представляет собой аминокислотный остаток, при условии, что по меньшей мере три из Хаа8, Хаа9, Xaa10, Xaa11, Хаа12, Хаа13 и Хаа14 выбраны из His, Lys или Arg, и по меньшей мере дополнительные два из Хаа8, Хаа9, Xaa10, Xaa11, Хаа12, Хаа13 и Xaa14 выбраны из His, Lys, Arg, Phe, Tyr или Trp.where Xaa, Xaa8, Xaa9, Xaa10, Xaa11, Xaa12, Xaa13 and Xaa14, individually for each case, represents an amino acid residue, provided that at least three of Xaa8, Xaa9, Xaa10, Xaa11, Xaa12, Xa13 and Xaa14 are selected of His, Lys or Arg, and at least an additional two of Xaa8, Xaa9, Xaa10, Xaa11, Xaa12, Xaa13 and Xaa14 are selected from His, Lys, Arg, Phe, Tyr or Trp.
16. Полипептид по п. 9, где (Хаа)m по меньшей мере на 75% идентична последовательности петли 4, выбранной из SEQ ID NO: 300-593 и 1183.16. The polypeptide of claim 9, wherein (Xaa) m is at least 75% identical to the sequence of loop 4 selected from SEQ ID NOs: 300-593 and 1183.
17. Полипептид по п. 1, включающий по меньшей мере один цистеин, который (возможно) доступен для химической конъюгации, и который (возможно) располагается на С-конце или N-конце полипептида, и/или дополнительно содержащий гетерологичный полипептид, ковалентно связанный через амидную связь с образованием непрерывного слитого белка.17. The polypeptide of claim 1, comprising at least one cysteine that is (possibly) available for chemical conjugation, and that is (possibly) located at the C-terminus or N-terminus of the polypeptide, and/or further comprising a heterologous polypeptide covalently linked through an amide bond to form a continuous fusion protein.
18. Полипептид по п. 17, где гетерологичный полипептид включает терапевтический полипептид.18. The polypeptide of claim 17, wherein the heterologous polypeptide includes a therapeutic polypeptide.
19. Полипептид по п. 18, где терапевтический полипептид выбран из группы, состоящей полипептидных гормонов, полипептидных цитокинов, полипептидных хемокинов, факторов роста, активных полипептидов гемостаза, ферментов и токсинов,19. The polypeptide according to claim 18, where the therapeutic polypeptide is selected from the group consisting of polypeptide hormones, polypeptide cytokines, polypeptide chemokines, growth factors, active hemostatic polypeptides, enzymes and toxins,
где терапевтический полипептид выбран из группы, состоящей из ловушек рецепторов и лигандов рецепторов,wherein the therapeutic polypeptide is selected from the group consisting of receptor decoys and receptor ligands,
где последовательность терапевтического полипептида выбрана из группы, состоящей из ангиогенных средств и антиангиогенных средств,wherein the sequence of the therapeutic polypeptide is selected from the group consisting of angiogenic agents and antiangiogenic agents,
где последовательность терапевтического полипептида представляет собой нейромедиатор, и возможно где нейромедиатор представляет собой нейропептид Y,wherein the therapeutic polypeptide sequence is a neurotransmitter, and optionally wherein the neurotransmitter is a neuropeptide Y,
где последовательность терапевтического полипептида представляет собой агент, стимулирующий эритропоэз, и возможно где агент, стимулирующий эритропоэз, представляет собой эритропоэтин или миметик эритропоэтина,wherein the therapeutic polypeptide sequence is an erythropoiesis-stimulating agent, and optionally wherein the erythropoiesis-stimulating agent is erythropoietin or an erythropoietin mimetic,
где терапевтический полипептид представляет собой инкретин, и возможно где инкретин выбран из группы, состоящей из глюкагона, гастроингибиторного пептида (GIP), глюкагоноподобно го пептида-1 (GLP-1), глюкагоноподобного пептида-2 (GLP-2), пептида YY (PYY) и оксинтомодулина (ОХМ),wherein the therapeutic polypeptide is an incretin, and optionally wherein the incretin is selected from the group consisting of glucagon, gastroinhibitory peptide (GIP), glucagon-like peptide-1 (GLP-1), glucagon-like peptide-2 (GLP-2), peptide YY (PYY ) and oxyntomodulin (OXM),
где терапевтический полипептид представляет собой противораковый иммуностимулирующий агент, такой как ингибитор иммунных контрольных точек, агонист костимулирующего рецептора или индуктор врожденного иммунитета,wherein the therapeutic polypeptide is an anticancer immunostimulatory agent, such as an immune checkpoint inhibitor, a costimulatory receptor agonist, or an innate immune inducer,
где терапевтический полипептид представляет собой противовоспалительный иммуноингибирующий агент, такой как агонист контрольных точек, антагонист костимулирующего рецептора или ингибитор врожденного иммунитета.wherein the therapeutic polypeptide is an anti-inflammatory immunoinhibitory agent, such as a checkpoint agonist, a costimulatory receptor antagonist, or an innate immune inhibitor.
20. Фармацевтическая композиция, подходящая для терапевтического применения у пациента-человека, содержащая полипептид по п. 1 и фармацевтически приемлемый эксципиент.20. A pharmaceutical composition suitable for therapeutic use in a human patient, comprising the polypeptide of claim 1 and a pharmaceutically acceptable excipient.
21. Фармацевтическая композиция по п. 20, которая изготовлена для легочной доставки или местного применения.21. The pharmaceutical composition according to claim 20, which is formulated for pulmonary delivery or topical use.
22. Фармацевтическая композиция по п. 21, где легочная доставка представляет собой интраназальную доставку.22. The pharmaceutical composition according to claim 21, wherein pulmonary delivery is intranasal delivery.
23. Полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую полипептид по п. 1.23. A polynucleotide containing a sequence encoding the polypeptide according to claim 1.
24. Вирусный вектор, содержащий полинуклеотид по п. 23.24. Viral vector containing the polynucleotide according to claim 23.
25. Плазмида или мини-кольцо, содержащая(ее) полинуклеотид по п. 23.25. Plasmid or minicircle containing the polynucleotide according to claim 23.
26. Клетка, содержащая полипептид по п. 1, полинуклеотид по п. 23, вирусный вектор по п. 24, или плазмиду или мини-кольцо по п. 25.26. A cell containing the polypeptide of claim 1, the polynucleotide of claim 23, the viral vector of claim 24, or the plasmid or minicircle of claim 25.
27. Способ увеличения периода полувыведения из сыворотки крови терапевтической молекулы, включающий конъюгирование полипептида по любому из пп. 1-19 с терапевтической молекулой.27. A method for increasing the half-life of a therapeutic molecule from blood serum, including conjugating a polypeptide according to any one of claims. 1-19 with a therapeutic molecule.
28. Полипептид по п. 1 для применения в способе лечения аутоиммунного заболевания и/или воспалительного заболевания.28. The polypeptide of claim 1 for use in a method of treating an autoimmune disease and/or an inflammatory disease.
29. Полипептид по п. 1 для применения в способе лечения рака.29. A polypeptide according to claim 1 for use in a method of treating cancer.
30. Полипептид по п. 1 для применения в способе лечения сердечно-сосудистого или метаболического заболевания или расстройства.30. The polypeptide of claim 1 for use in a method of treating a cardiovascular or metabolic disease or disorder.
31. Способ получения полипептида по п. 1, включающий экспрессию в клетке-хозяине нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, и возможно выделение полипептида из клетки-хозяина.31. A method for producing a polypeptide according to claim 1, including expression in a host cell of a nucleic acid encoding the polypeptide, and possibly isolating the polypeptide from the host cell.
32. Белок, содержащий связывающийся с FcRn рекомбинантно сконструированный вариант полипептидной последовательности стефина, который связывается с человеческим FcRn и ингибирует связывание человеческого IgG с человеческим FcRn.32. A protein containing an FcRn-binding recombinantly engineered variant of the stefin polypeptide sequence that binds to human FcRn and inhibits the binding of human IgG to human FcRn.
33. Белок по п. 32 для применения в способе лечения аутоиммунного или воспалительного расстройства или заболевания.33. The protein of claim 32 for use in a method of treating an autoimmune or inflammatory disorder or disease.
34. Фармацевтическая композиция, подходящая для терапевтического применения у пациента-человека, содержащая белок по п. 32 и фармацевтически приемлемый эксципиент.34. A pharmaceutical composition suitable for therapeutic use in a human patient, comprising the protein of claim 32 and a pharmaceutically acceptable excipient.
35. Полипептид по п. 1 содержащий аминокислотную последовательность петли 2 в соответствии с любой из SEQ ID NO: 6-299 и 1182.35. The polypeptide according to claim 1 containing the amino acid sequence of loop 2 in accordance with any of SEQ ID NO: 6-299 and 1182.
36. Полипептид по п. 1, содержащий аминокислотную последовательность петли 4 в соответствии с любой из SEQ ID NO: 300-593 и 1183.36. The polypeptide according to claim 1, containing the amino acid sequence of loop 4 in accordance with any of SEQ ID NO: 300-593 and 1183.
37. Полипептид по п. 1, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100% идентичностью с последовательностью любой из SEQ ID NO: 594-887 или 1184.37. The polypeptide according to claim 1, containing an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98% or 100% sequence identity with any of SEQ ID NO: 594-887 or 1184.
38. Полипептид по п. 1, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, обладающей по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100% идентичностью с последовательностью любой из SEQ ID NO: 888-1181.38. The polypeptide according to claim 1, encoded by a nucleic acid sequence having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98% or 100% sequence identity to any of SEQ ID NO: 888-1181.
39. Применение полипептида по п. 1 для нацеливания на FcRn.39. Use of a polypeptide according to claim 1 for targeting FcRn.
40. Применение полипептида п. 1 для увеличения периода полувыведения терапевтической молекулы из сыворотки крови.40. Use of the polypeptide of claim 1 to increase the half-life of a therapeutic molecule from blood serum.