[go: up one dir, main page]

RU2020118557A - Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения - Google Patents

Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения Download PDF

Info

Publication number
RU2020118557A
RU2020118557A RU2020118557A RU2020118557A RU2020118557A RU 2020118557 A RU2020118557 A RU 2020118557A RU 2020118557 A RU2020118557 A RU 2020118557A RU 2020118557 A RU2020118557 A RU 2020118557A RU 2020118557 A RU2020118557 A RU 2020118557A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
paragraphs
approximately
patient
aav
less
Prior art date
Application number
RU2020118557A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2818529C2 (ru
RU2020118557A3 (ru
Inventor
Брайан К. КАСПАР
Джеймс Майкл ХАТФИЛД
Джозеф БАЛЛЕЙДАЙЕР
Аллан Арман КАСПАР
Роберт Эмиль ХОДЖ
Original Assignee
Авексис Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Авексис Инк. filed Critical Авексис Инк.
Publication of RU2020118557A publication Critical patent/RU2020118557A/ru
Publication of RU2020118557A3 publication Critical patent/RU2020118557A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2818529C2 publication Critical patent/RU2818529C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
    • C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)

Claims (98)

1. Способ получения вирусного вектора на основе AAV, включающий:
a. культивирование адгезивных клеток;
b. трансфекцию адгезивных клеток плазмидой(-ами) с обеспечением продуцирования вирусного вектора на основе AAV;
c. лизис адгезивных клеток с выделением вирусного вектора на основе AAV;
d. подкисление и осветление клеточного лизата из (c);
e. очистку продукта из (d) с применением катионообменной хроматографии (CEX);
f. фильтрование продукта из (e) с применением фильтрации в тангенциальном потоке (TFF);
g. ультрацентрифугирование продукта из (f) в буфере с хлоридом цезия (CsCl); и
h. сбор вирусных векторов на основе AAV из продукта из (g).
2. Способ по п. 1, где AAV представляет собой AAV9.
3. Способ по п. 1 или 2, где AAV является самокомплементарным (scAAV).
4. Способ по любому из пп. 1-3, где адгезивные клетки представляют собой клетки HEK293.
5. Способ по п. 4, где стадия (а) включает посев клеток в крупномасштабный биореактор, который может обеспечивать непрерывную циркуляцию среды для культивирования клеток.
6. Способ по п. 5, где плотность посева составляет приблизительно 8000-12000 клеток/см2.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где стадия трансфекции (b) включает приведение в контакт адгезивной клетки с хелперной плазмидой (pHELP) для аденовируса, и с плазмидой, кодирующей гены rep AAV и cap AAV.
8. Способ по п. 7, где ген rep AAV представляет собой rep2, и ген cap AAV представляет собой cap9.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где стадия трансфекции (b) включает приведение в контакт адгезивных клеток с плазмидой, содержащей полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN), полинуклеотид, кодирующий MeCP2, или полинуклеотид, кодирующий SOD1 shRNA.
10. Способ по п. 9, где плазмида, содержащая полинуклеотид, кодирующий белок SMN1, содержит модифицированный ITR AAV2, промотор бета-актина курицы (CB), немедленно-ранний энхансер цитомегаловируса (CMV), модифицированный интрон поздней 16s SV40, сигнал полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (BGH) и немодифицированный ITR AAV2.
11. Способ по п. 9 или 10, где полинуклеотид кодирует белок SMN под SEQ ID NO: 2.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит SEQ ID NO: 1.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где стадия трансфекции включает приведение в контакт адгезивной клетки со средством для трансфекции, представляющим собой полиэтиленимин (PEI).
14. Способ по любому из пп. 1-13, где стадия трансфекции включает приведение в контакт адгезивной клетки со средой для трансфекции, которая не содержит сыворотку, кальций или глутамин.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где стадия лизиса включает применение буфера для лизиса с добавлением бензоназы и TWEEN.
16. Способ по любому из пп. 1-15, дополнительно включающий замораживание клеточного лизата из стадии (c) до стадии подкисления (d).
17. Способ очистки вирусного вектора на основе AAV от лизата культуры клеток, включающий стадии:
a. подкисления и осветления клеточного лизата;
b. очистки продукта из (a) с применением катионообменной хроматографии (CEX);
c. фильтрования продукта из (b) посредством фильтрации в тангенциальном потоке;
d. ультрацентрифугирования продукта из (c) с применением 2 - 4 М буфера с хлоридом цезия (CsCl);
e. сбора вирусных векторов на основе AAV из продукта из (d);
f. фильтрования продукта из (e) посредством фильтрации в тангенциальном потоке.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где стадия подкисления включает подкисление клеточного лизата до значения pH, составляющего приблизительно 3,0 - 4,0.
19. Способ по любому из пп. 1-18, где ультрацентрифугирование проводят при 40000 - 50000 об/мин.
20. Способ по любому из пп. 1-19, где буфер с CsCl содержит приблизительно 3 M CsCl, Tris, MgCl2 и полоксамер 188, и pH составляет приблизительно рН от 7,5 до 8,5.
21. Способ по любому из пп. 1-20, где клеточный лизат инкубируют с Tween до стадии подкисления.
22. Способ по любому из пп. 1-21, где стадия осветления предусматривает фильтрование клеточного лизата посредством глубинного фильтра.
23. Способ по любому из пп. 1-22, где CEX предусматривает смолу с сульфонильными группами.
24. Способ по любому из пп. 1-23, где по меньшей мере одна стадия TFF предусматривает применение целлюлозных мембран с порогом отсечения по молекулярной массе, представляющим собой MW приблизительно 300 кДа.
25. Способ по любому из пп. 1-24, где количество пустых вирусных капсидов составляет менее 7%, менее 5%, менее 3% или менее 1% от общего количества вирусных капсидов после сбора вирусных векторов на основе AAV из клеточного лизата, подвергнутого ультрацентрифугированию.
26. Способ по любому из пп. 17-25, где вирусные векторы на основе AAV, собранные после стадии второй TFF, хранят в растворе, содержащем Tris, MgCl2, NaCl и полоксамер 188, и pH составляет приблизительно рН от 7,5 до 8,5.
27. Способ по любому из пп. 17-26, где вирусные векторы на основе AAV, собранные после второй TFF, содержат менее приблизительно 30 мкг/г или менее приблизительно 20 мкг/г CsCl.
28. Способ по любому из пп. 17-27, где концентрация вирусных векторов на основе AAV, собранных после второй TFF, составляет приблизительно 3×1013 г. в./мл или больше.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где получаемый выход AAV составляет более 5×1015 г. в., или более 8×1015 г. в., или более 1×1016 г. в. на одну производственную партию.
30. Способ по любому из пп. 1-29, где вирусный вектор на основе AAV содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN), полинуклеотид, кодирующий белок MeCP2, или полинуклеотид, кодирующий SOD1 shRNA.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая вирусный вектор на основе AAV9, полученный в соответствии со способом по любому из пп. 1-30.
32. Фармацевтическая композиция по п. 31, содержащая по меньшей мере одно из следующего:
a. менее приблизительно 0,09 нг бензоназы на 1,0×1013 г. в.,
b. менее приблизительно 30 мкг/г (ppm) цезия,
c. приблизительно 20-80 ppm полоксамера 188,
d. менее приблизительно 0,22 нг BSA на 1,0×1013 г. в.,
e. менее приблизительно 6,8×105 пг остаточной плазмидной ДНК на 1,0×1013 г. в.,
f. менее приблизительно 1,1×105 пг остаточной hcDNA на 1,0×1013 г. в.,
g. менее приблизительно 4 нг rHCP на 1,0×1013 г. в.,
h. значение pH приблизительно 7,7-8,3,
i. приблизительно 390-430 мОсм/кг,
j. менее приблизительно 600 частиц размером ≥ 25 мкм на контейнер,
k. менее приблизительно 6000 частиц размером ≥ 10 мкм на контейнер,
l. геномный титр, составляющий приблизительно 1,7×1013 - 2,3×1013 г. в./мл,
m. инфекционный титр, составляющий приблизительно 3,9×108 - 8,4×1010 МЕ на 1,0×1013 г. в.,
n. общий белок, составляющий приблизительно 100-300 мкг на 1,0×1013 г. в.,
o. относительную активность, составляющую приблизительно 70-130%, и
p. менее приблизительно 5% пустых капсидов.
33. Фармацевтическая композиция, содержащая:
а. от 1 до 8×1013 геномов вирусного вектора на основе AAV9/мл (г. в./мл);
b. менее чем приблизительно 7% пустых вирусных капсидов;
c. менее чем приблизительно 100 нг/мл белка клетки-хозяина на 1×1013 г. в./мл;
d. менее чем приблизительно 5×106 пг/мл остаточной ДНК клетки-хозяина на 1×1013 г. в./мл;
и при этом по меньшей мере приблизительно 80% из 1 - 8×1013 геномов вирусного вектора на основе AAV9/мл являются функциональными.
34. Композиция по п. 33, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN), полинуклеотид, кодирующий белок MeCP2, или полинуклеотид, кодирующий SOD1 shRNA.
35. Композиция по п. 33 или 34, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит модифицированный ITR AAV2, промотор бета-актина курицы (CB), немедленно-ранний энхансер цитомегаловируса (CMV), модифицированный интрон поздней 16s SV40, сигнал полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (BGH) и немодифицированный ITR AAV2.
36. Композиция по п. 34 или 37, где полинуклеотид кодирует белок SMN под SEQ ID NO: 2.
37. Композиция по любому из пп. 33-36, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит SEQ ID NO: 1.
38. Композиция по любому из пп. 33-37, содержащая 1,7-2,3×1013 г. в. на основе AAV9/мл.
39. Композиция по любому из пп. 33-38, где композиция представляет водный фармацевтический состав.
40. Композиция по п. 39, где водный фармацевтический состав содержит Tris-буфер, MgCl2, NaCl и полаксамер 188.
41. Композиция по п. 39 или 40, где водный фармацевтический состав не содержит консерванта.
42. Композиция по п. 40 или 41, где:
(i) концентрация Tris-буфера составляет приблизительно 10-30 нМ;
(ii) pH состава составляет от приблизительно 7,7 до приблизительно 8,3;
(iii) концентрация MgCl2 составляет приблизительно 0,5-1,5 мМ;
(iv) концентрация NaCl составляет приблизительно 100-300 мМ;
(v) состав содержит приблизительно 0,005% вес./об. полоксамера 188;
(vi) водный фармацевтический состав имеет осмоляльность, составляющую 390-430 мОсм/кг.
43. Способ лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) типа I у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение композиции по любому из пп. 34-42 пациенту, где пациент:
a. характеризуется возрастом, составляющим девять месяцев или меньше;
b. имеет массу тела по меньшей мере приблизительно 2,6 кг;
c. имеет биаллельные нулевые мутации или делеции в SMN1 и
d. имеет по меньшей мере одну функциональную копию SMN2.
44. Способ по п. 43, где вирусный вектор вводят в дозе, составляющей приблизительно 1-2,5×1014 г. в./кг.
45. Способ по любому из пп. 43 или 44, где вес тела пациента составляет не более приблизительно 8,5 кг.
46. Способ по любому из пп. 43-45, где у пациента нет замены c.859G> C в экзоне 7 по меньшей мере одной копии гена SMN2.
47. Способ по любому из пп. 43-46, где средство для лечения вводят пациенту до возраста 6 месяцев или до появления одного или нескольких симптомов SMA, выбранных из гипотонии, задержки развития двигательных навыков, слабого удержания головы, сутулой осанки и гипермобильности суставов.
48. Способ по любому из пп. 43-47, где вирусный вектор вводят в приблизительно 5-20 мл/кг, приблизительно 10-20 мл/кг или приблизительно 5,5-6,5 мл/кг солевого раствора, забуференного с помощью Tris.
49. Способ по любому из пп. 43-48, где эффективность определяют с применением шкалы CHOP-INTEND.
50. Способ по пп. 43-49, включающий введение объема дозы, выбранного из группы, состоящей из дозы 16,5 мл для пациента с весом тела 2,6-3,0 кг, дозы 19,3 мл для пациента с весом тела 3,1-3,5 кг, дозы 22,0 мл для пациента с весом тела 3,6-4,0 кг, дозы 24,8 мл для пациента с весом тела 4,1-4,5 кг, дозы 27,5 мл для пациента с весом тела 4,6-5,0 кг, дозы 30,3 мл для пациента с весом тела 5,1-5,5 кг, дозы 33,0 мл для пациента с весом тела 5,6-6,0 кг, дозы 35,8 мл для пациента с весом тела 6,1-6,5 кг, дозы 38,5 мл для пациента с весом тела 6,6-7,0 кг, дозы 41,3 мл для пациента с весом тела 7,1-7,5 кг, дозы 44,0 мл для пациента с весом тела 7,6-8,0 кг и дозы 46,8 мл для пациента с весом тела 8,1-8,5 кг.
51. Способ по любому из пп. 43-50, где композицию вводят внутривенной или интратекальной инфузией пациенту, нуждающемуся в этом.
52. Способ по п. 51, где инфузию вирусного вектора осуществляют в течение приблизительно 45 - 75 мин.
53. Набор, содержащий флаконы, содержащие приблизительно 5,5 мл или приблизительно 8,3 мл вирусного вектора на основе AAV9, содержащего полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN), и составленного в концентрации, составляющей приблизительно 2,0×1013 г. в./мл, в 20 мМ Tris, 1 мМ MgCl2, 200 мМ NaCl, 0,005% вес/об. полоксамера 188 при pH 7,7-8,3.
RU2020118557A 2017-11-08 2018-11-01 Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения RU2818529C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762583035P 2017-11-08 2017-11-08
US62/583,035 2017-11-08
PCT/US2018/058744 WO2019094253A1 (en) 2017-11-08 2018-11-01 Means and method for preparing viral vectors and uses of same

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2024110309A Division RU2024110309A (ru) 2017-11-08 2018-11-01 Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2020118557A true RU2020118557A (ru) 2021-12-08
RU2020118557A3 RU2020118557A3 (ru) 2022-04-15
RU2818529C2 RU2818529C2 (ru) 2024-05-02

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
MX2020004830A (es) 2020-11-11
AU2025203480A1 (en) 2025-06-05
JP2025017361A (ja) 2025-02-05
US20250066813A1 (en) 2025-02-27
AU2018365677B2 (en) 2025-04-03
JP2021502123A (ja) 2021-01-28
WO2019094253A1 (en) 2019-05-16
IL314692A (en) 2024-10-01
EP3707264A1 (en) 2020-09-16
CO2020006900A2 (es) 2020-06-19
TW201930590A (zh) 2019-08-01
CN111566220A (zh) 2020-08-21
AU2018365677A1 (en) 2020-05-14
JP7587422B2 (ja) 2024-11-20
CA3082136A1 (en) 2019-05-16
IL274430A (en) 2020-06-30
US12168777B2 (en) 2024-12-17
IL274430B1 (en) 2024-09-01
SG11202004406VA (en) 2020-06-29
CL2020001193A1 (es) 2020-11-13
EP4585229A2 (en) 2025-07-16
CN119033965A (zh) 2024-11-29
TWI827560B (zh) 2024-01-01
IL274430B2 (en) 2025-01-01
BR112019013268A2 (pt) 2019-12-17
RU2020118557A3 (ru) 2022-04-15
KR20200086292A (ko) 2020-07-16
US20210317474A1 (en) 2021-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10927150B2 (en) Recombinant AAV1, AAV5, and AAV6 capsid mutants and uses thereof
JP2021502123A5 (ru)
US10308957B2 (en) rAAV vectors and methods for transduction of photoreceptors and RPE cells
US5843742A (en) Adeno-associated derived vector systems for gene delivery and integration into target cells
DE60117550T2 (de) Doppelsträngige parvovirus-vektoren
DE69633572T2 (de) Hilfsfunktionen fuer die rekombinante aav-virionherstellung
JP2002516345A (ja) 第ｖｉｉｉ因子活性のアデノ随伴ウイルスベクター媒介性発現
WO1996040272A1 (en) Aav transduction of myoblasts
CN114231532B (zh) 在哺乳动物肌肉中特异性启动基因的启动子序列及其应用
DE69930625T2 (de) Rekombinante aav-vektoren für die gentherapie von hämophilie a
US8926958B2 (en) Prevention and treatment of vascular disease with recombinant adeno-associated virus vectors encoding apolipoprotein A-I and apolipoprotein A-I milano
WO2023169115A1 (zh) 一种神经系统高亲和性的aav载体及其应用
RU2020118557A (ru) Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения
WO2003046142A2 (en) Methods for producing stocks of recombinant aav virions
US20070275449A1 (en) Method for Large-Scale Production, Isolation, Purification and the Uses of Multi-Type Recombinant Adeno-Associated Virus Vectors
US20230183741A1 (en) Disease correction by delivery of aav8 vectors expressing codon optimized naglu
US6207457B1 (en) Targeted nucleotide sequence delivery and integration system
US20240335506A1 (en) Aqp1 gene therapy to prevent radiation induced salivary hypofunction
US20150191527A1 (en) Methods of treating alzheimer's disease with apo a-1 milano
US20230338582A1 (en) Methods of Treating Human X-Linked Retinoschisis Using Gene Therapy
US20240425879A1 (en) Compositions and methods for adeno-associated (aav) virus dnase expression
RU2024110309A (ru) Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения
CN118955653A (zh) 腺相关病毒衣壳蛋白的突变体、编码其的核酸及应用
WO2025076463A1 (en) Gene therapy for lafora disease
CN115948403A (zh) 在哺乳动物肌肉中特异性启动基因的启动子序列及其应用