Claims (18)
1. Линейка биологически активных генно-терапевтических субстанций для коррекции патологических состояний клеток органов и тканей и/или органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-1 цепи коллагена I типа, каждая из которых представляет собой генетическую конструкцию на основе векторной плазмиды, содержащей нативную кДНК гена COL1A1 SEQ ID No:1 или одну из модифицированных кДНК гена COL1A1, и содержащей также регуляторные элементы, обеспечивающие транскрипцию этой последовательности в эукариотических клетках, в частности в клетках органов и тканей человека и способную обеспечить высокий уровень экспрессии гена COL1A1 и увеличить количество белка альфа-1 цепи коллагена I типа в клетках органов и тканей и/или органах и тканях человека, в частности, в гемопоэтических клетках, или мезенхимальных стволовых клетках, или хондробластах, или миоцитах, или миобластах, или фибробластах, или остеобластах, или кератоцитах, или эпителиальных клетках, или клетках роговицы, или эндотелиальных клетках, или эпителиальных клетках, в сочетании с транспортной молекулой или без нее при трансфекции этими биологически активными генно-терапевтическими субстанциями клеток органов и тканей человека и/или в органах и тканях человека в частности, в соединительнотканных структурах, или коже, или суставах, или хрящевой ткани, или костной ткани, или мышечной ткани, или сухожилиях, или связках, или кровеносных сосудах, или стенке артерий, или роговице глаза, или склере, или плаценте, или дентине, или строме внутренних органов, в сочетании с транспортной молекулой или без нее при введении этих биологически активных генно-терапевтических субстанций в органы и ткани человека.1. A line of biologically active gene-therapeutic substances for the correction of pathological conditions of cells of organs and tissues and / or organs and human tissues associated with a quantitative decrease in type I collagen chain alpha-1 protein, each of which is a genetic construct based on a vector plasmid, containing native cDNA of the COL1A1 gene SEQ ID No: 1 or one of the modified cDNAs of the COL1A1 gene, and also containing regulatory elements that ensure transcription of this sequence in eukaryotic cells, in particular cells in organs and tissues of a person and capable of providing a high level of expression of the COL1A1 gene and increasing the amount of type I collagen alpha-1 protein in cells of organs and tissues and / or organs and tissues of a person, in particular in hematopoietic cells or mesenchymal stem cells or chondroblasts, or myocytes, or myoblasts, or fibroblasts, or osteoblasts, or keratocytes, or epithelial cells, or corneal cells, or endothelial cells, or epithelial cells, in combination with a transport molecule or without it during transfection with these biologically active gene therapeutic substances of cells of human organs and tissues and / or in human organs and tissues, in particular in connective tissue structures, or skin, or joints, or cartilage, or bone, or muscle tissue, or tendons, or ligaments, or blood vessels, or arterial wall, or cornea, or sclera, or placenta, or dentin, or stroma of internal organs, in combination with or without a transport molecule with the introduction of these biologically active genes therapeutic substances in human organs and tissues.
2. Линейка биологически активных генно-терапевтических субстанций по п. 1, отличающаяся тем, что генетическая конструкция с кДНК гена COL1A1 содержит последовательность нуклеотидов, включающую в себя белок-кодирующую область кДНК гена COL1A1, которая несет модификации не затрагивающие структуру белка альфа-1 цепи коллагена I типа, а именно: делеции 5' нетранслируемых областей или делеции 3'-нетранслируемых областей, или нуклеотидные замены, не приводящие к аминокислотным заменам или обрыву аминокислотной цепи, или комбинации вышеперечисленных модификаций и, соответственно, не влияющие на кодируемую этой последовательностью аминокислотную последовательность.2. The line of biologically active gene therapeutic substances according to claim 1, characterized in that the genetic construct with the cDNA of the COL1A1 gene contains a nucleotide sequence including the protein coding region of the cDNA of the COL1A1 gene, which carries modifications that do not affect the structure of the alpha-1 protein type I collagen, namely: deletions of 5 'untranslated regions or deletions of 3'-untranslated regions, or nucleotide substitutions that do not lead to amino acid substitutions or termination of the amino acid chain, or a combination of the above m codification of and, accordingly, do not affect the sequence of the encoded amino acid sequence.
3. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:2.3. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 2 is used.
4. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:3.4. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 3 is used.
5. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:4.5. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 4 is used.
6. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:5.6. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 5 is used.
7. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:6.7. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 6 is used.
8. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что в качестве модифицированной кДНК гена COL1A1 используют SEQ ID No:7.8. Biologically active gene therapeutic substance according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that as the modified cDNA of the COL1A1 gene, SEQ ID No: 7 is used.
9. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве транспортной молекулы используют липосомы.9. A biologically active gene therapeutic substance according to claim 1, characterized in that liposomes are used as a transport molecule.
10. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве транспортной молекулы используют дендримеры 5-го и выше поколений.10. A biologically active gene therapeutic substance according to claim 1, characterized in that dendrimers of the 5th and higher generations are used as a transport molecule.
11. Биологически активная генно-терапевтическая субстанция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве транспортной молекулы используют амфифильные блоксополимеры.11. A biologically active gene therapeutic substance according to claim 1, characterized in that amphiphilic block copolymers are used as a transport molecule.
12. Способ получения биологически активной генно-терапевтической субстанции для коррекции патологических состояний клеток органов и тканей и/или органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-1 цепи коллагена I типа по п. 1,12. A method of obtaining a biologically active gene-therapeutic substance for the correction of pathological conditions of cells of organs and tissues and / or organs and tissues of a person associated with a quantitative decrease in the type-1 collagen chain alpha-1 protein according to claim 1,
отличающийся тем, что получают кДНК гена COL1A1, затем помещают кДНК в векторную плазмиду, способную обеспечить высокий уровень экспрессии этой кДНК в клетках различных органов и тканей человека, наращивают и выделяют необходимое количество генетической конструкции, затем комбинируют генетическую конструкцию с транспортной молекулой для трансфекции полученной биологически активной генно-терапевтической субстанцией клеток органов и тканей и/или введения полученной биологически активной генно-терапевтической субстанции в органы и ткани человека.characterized in that the cDNA of the COL1A1 gene is obtained, then the cDNA is placed in a vector plasmid capable of providing a high level of expression of this cDNA in cells of various human organs and tissues, the required amount of the genetic construct is increased and secreted, then the genetic construct is combined with a transport molecule to transfect biologically obtained active gene-therapeutic substance of cells of organs and tissues and / or the introduction of the obtained biologically active gene-therapeutic substance in organs and tissues and man.
13. Способ получения биологически активной генно-терапевтической субстанции для коррекции патологических состояний клеток различных органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-1 цепи коллагена I типа по п. 1,13. A method of obtaining a biologically active gene-therapeutic substance for the correction of pathological conditions of cells of various organs and human tissues associated with a quantitative decrease in the alpha-1 protein of the type I collagen chain according to claim 1,
отличающийся тем, чтоcharacterized in that
получают кДНК гена COL1A1, модифицируют его по п. 3, 4, 5, 6, 7 или 8, затем помещают модифицированную кДНК в векторную конструкцию, способную обеспечить высокий уровень экспрессии этой кДНК в клетках различных органов и тканей человека, наращивают и выделяют необходимое количество генетической конструкции, затем комбинируют генетическую конструкцию с транспортной молекулой для трансфекции полученной биологически активной генно-терапевтической субстанцией клеток органов и тканей и/или введения полученной биологически активной генно-терапевтической субстанции в органы и ткани человека.receive the cDNA of the COL1A1 gene, modify it according to claim 3, 4, 5, 6, 7 or 8, then place the modified cDNA in a vector construct capable of providing a high level of expression of this cDNA in cells of various organs and human tissues, increase and secrete the required amount genetic construct, then the genetic construct is combined with a transport molecule to transfect the obtained biologically active gene therapeutic substance of cells of organs and tissues and / or introduce the obtained biologically active gene therapist matic substances in human organs and tissues.
14. Способ использования каждой из созданных и представленных в линейке биологически активных генно-терапевтических субстанций для коррекции патологических состояний клеток органов и тканей и/или органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-1 цепи коллагена I типа, заключается в трансфекции созданной биологически активной генно-терапевтической субстанцией по п. 1, выбранной с учетом индивидуальных особенностей каждого конкретного пациента на основе предварительного эксперимента по определению наиболее эффективного варианта из созданных и представленных в линейке биологически активных генно-терапевтических субстанций, клеток органов и тканей человека.14. The method of using each of the biologically active gene therapeutic substances created and presented in the line to correct the pathological conditions of cells of organs and tissues and / or organs and tissues of a person associated with a quantitative decrease in type I collagen chain alpha-1 protein is to transfect the created biologically active gene therapeutic substance according to claim 1, selected taking into account the individual characteristics of each individual patient on the basis of a preliminary experiment to determine the most ffektivnogo embodiment of the generated and represented in the range of biologically active substances, gene therapy, cells, organs and tissues.
15. Способ использования каждой из созданных и представленных в линейке биологически активных генно-терапевтических субстанций для коррекции патологических состояний клеток органов и тканей и/или органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-1 цепи коллагена I типа, заключается во введении одной из созданных биологически активных генно-терапевтических субстанций по п. 1, выбранной именно для данного пациента на основе предварительного эксперимента по определению наиболее эффективного варианта из созданных и представленных в линейке биологически активных генно-терапевтических субстанций, в органы и ткани этого пациента, и/или во введении аутологичных клеток пациента, трансфицированных одной из созданных биологически активных генно-терапевтических субстанций, выбранной именно для данного пациента на основе предварительного эксперимента по определению наиболее эффективного варианта из созданных и представленных в линейке биологически активных генно-терапевтических субстанций, в органы и ткани этого пациента.15. The method of using each of the biologically active gene-therapeutic substances created and presented in the line to correct pathological conditions of cells of organs and tissues and / or organs and tissues of a person associated with a quantitative decrease in type I collagen chain alpha-1 protein is to introduce one of the created biologically active gene therapeutic substances according to claim 1, selected specifically for this patient on the basis of a preliminary experiment to determine the most effective option from and presented in the line of biologically active gene-therapeutic substances, into the organs and tissues of this patient, and / or in the introduction of autologous cells of the patient transfected with one of the created biologically active gene-therapeutic substances, selected specifically for this patient on the basis of a preliminary experiment to determine the most effective option from created and presented in the line of biologically active gene-therapeutic substances into the organs and tissues of this patient.