RS64067B1 - Modulatori aktivnosti komplementa - Google Patents

Description

Opis

Unkarsna referenca sa srodnim prijavama

[0001] Ova prijava se poziva na priorite provizione prijave broj 62/268,360 Sjedinjenih Američkih Država pod nazivom Modulators of Complement Activity podnete 16 Decembra 2015; provizione prijave broj 62/331,320 Sjedinjenih Američkih Država pod nazivom Modulators of Complement Activity podnete 3 Maja 2016; i provizione prijave broj 62/347,486 Sjedinjenih Američkih Država pod nazivom Modulators of Complement Activity podnete 8 Juna 2016.

Listing sekvenci

[0002] predmetna prijava sadrži Listing sekvenci koji je elektronski podnet u ASCII formatu. Ova ASCII kopija, je kreirana 7 Decembra 2016, i nazvana je 2011_1009PCT_SL.txt i velične je 1,099 bajtova.

Oblast pronalaska

[0003] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja, uključujući polipeptide, koja su korisna kao modulatori aktivnosti komplementa i njihovu upotrebu kao terapeutika.

STANJE TEHNIKE

[0004] Imunski odgovor kičmenjaka se sastoji od adaptivnih i urođenih imunih komponenti. Dok je adaptivni imunski odgovor selektivan za određene patogene i sporo reaguje, komponente urođenog imunskog odgovora prepoznaju širok spektar patogena i brzo reaguju na infekciju. Jedna takva komponenta urođenog imunskog odgovora je sistem komplementa.

[0005] Sistem komplementa uključuje oko 20 cirkulišućih proteina komponenti komplementa, sintetizovanih prvenstveno u jetri. Komponente ovog specifičnog imunskog odgovora su prvo nazvane "komplement" zbog zapažanja da dopunjuju odgovor antitela u uništavanju bakterija. Ovi proteini ostaju u neaktivnom obliku pre aktivacije kao odgovor na infekciju. Aktivacija se dešava putem puta proteolitičkog cepanja iniciranog prepoznavanjem patogena i koji dovodi do uništenja patogena. Tri takva puta su poznata u sistemu komplementa i nazivaju se klasičnim putem, lektinskim putem i alternativnim putem. Klasični put se aktivira kada se IgG ili IgM molekul veže za površinu patogena. Lektinski put pokreće protein lektina koji vezuje manan koji prepoznaje ostatke šećera na zidu bakterijske ćelije. Alternativni put ostaje aktivan pri niskim nivoima u odsustvu bilo kakvih specifičnih stimulusa. Dok se sva tri puta razlikuju u pogledu početnih događaja, sva tri puta konvergiraju sa cepanjem komponente C3 komplementa. C3 se cepa na dva proizvoda nazvana C3a i C3b. Od njih, C3b postaje kovalentno vezan za površinu patogena, dok C3a deluje kao difuzivni signal za promociju upale i regrutovanje cirkulišućih imunskih ćelija. Površinski povezan C3b formira kompleks sa drugim komponentama da bi pokrenuo kaskadu reakcija među potonjim komponentama sistema komplementa. Zbog zahteva za površinskim vezivanjem, aktivnost komplementa ostaje lokalizovana i uništavanje neciljnih ćelija svodi na minimum.

[0006] Patogen- povezan C3b olakšava uništavanje patogena na dva načina. Na jednom putu, C3b je prepoznat direktno od strane fagocitnih ćelija i dovodi do gutanja patogena. U drugom putu, pategen- povezan C3b inicira formiranje membranskog napadačkog kompleksa (MAC). U prvom koraku, C3b se kombinuje sa drugim komponentama komplementa da bi formirao kompleks C5-konvertaze. U zavisnosti od početnog puta aktivacije komplementa, komponente ovog kompleksa mogu se razlikovati. C5-konvertaza nastala kao rezultat klasičnog puta komplementa sadrži C4b i C2a pored C3b. Kada se formira alternativnim putem, C5-konvertaza se sastoji od dve podjedinice C3b kao i jedne Bb komponente.

[0007] Komponenta komplementa C5 se cepa bilo kojim kompleksom C5-konvertaze na C5a i C5b. C5a, slično kao C3a, difunduje u cirkulaciju i podstiče upalu, delujući kao hemoatraktant za inflamatorne ćelije. C5b ostaje vezan za površinu ćelije gde inicira formiranje MAC-a kroz interakcije sa C6, C7, C8 i C9. MAC je hidrofilna pora koja pokriva membranu i promoviše slobodan protok tečnosti u ćeliju i iz nje, čime je uništava.

[0008] Važna komponenta celokupne imunološke aktivnosti je sposobnost imunog sistema da napravi razliku između sopstvenih i stranih (non-self) ćelija. Patologija nastaje kada imuni sistem nije u stanju da napravi ovu razliku. U slučaju sistema komplementa, ćelije kičmenjaka eksprimiraju proteine koji ih štite od efekata kaskade komplementa. Ovo osigurava da su ciljevi sistema komplementa ograničeni na patogene ćelije. Mnogi poremećaji i bolesti povezani sa komplementom su povezani sa abnormalnim uništavanjem sopstvenih ćelija kaskadom komplementa. U jednom primeru, subjekti koji pate od paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH) nisu u stanju da sintetišu funkcionalne verzije regulatornih proteina komplementa CD55 i CD59 na hematopoetskim matičnim ćelijama. Ovo dovodi do hemolize posredovane komplementom i niza nizvodnih komplikacija. Drugi poremećaji i bolesti povezani sa komplementom uključuju, ali nisu ograničeni na autoimune bolesti i poremećaje; neurološke bolesti i poremećaje; bolesti i poremećaje krvi; i infektivne bolesti i poremećaje. Eksperimentalni dokazi sugerišu da se mnogi poremećaji povezani sa komplementom ublažavaju inhibicijom aktivnosti komplementa. Stoga, postoji potreba za kompozicijama i postupcima za selektivno blokiranje uništavanja ćelija posredovanog komplementom za lečenje srodnih indikacija. Ovaj pronalazak zadovoljava ovu potrebu obezbeđivanjem srodnih kompozicija i metoda.

SUŠTINA PRONALASKA

[0009] Ovaj pronalazak obezbeđuje vodenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži polipeptid inhibitora C5 koji ima jezgro sekvence SEQ ID NO: 1, so i puferski agens.

[0010] Dalji aspekti pronalaska su dati u zahtevima.

[0011] Reference koja upućuje na metode lečenja terapijom ili operacijom ili metode in vivo dijagnoze u ovom opisu treba da tumačiti kao reference na farmaceutske kompozicije ovog pronalaska za upotrebu u tim metodama.

[0012] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 25 mM do oko 1 00 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM. R5000 može da bude prisutan u koncentraciji od oko 1 mg/mL do oko 400 mg/mL. Farmaceutska kompozicija može da sadrži pH od oko 6,5 do oko 7,5. R5000 može da se veže za C5 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) od oko 0,1 nM do oko 1 nM. R5000 može da blokira proizvodnju C5a nakon aktivacije alternativnog puta aktivacije komplementa. R5000 može blokirati formiranje membranskog napadačkog kompleksa (MAC) nakon aktivacije klasičnog puta, alternativnog puta ili lektinskog puta aktivacije komplementa.

[0013] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje metod inhibicije hemolize kod subjekta koji uključuje davanje/administraciju farmaceutske kompozicije koja sadrži R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 5 m M od do oko 100 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM. Farmaceutska kompozicija se može administrirati u dozi dovoljnoj da postignu nivoi R5000 u plazmi od oko 0,1 ug/mL do oko 20 µg/mL. Hemoliza može da bude inhibirana od oko 25% do 100% nakon administracije. Farmaceutska kompozicija se može adminstrirati dnevno najmanje dva dana. Farmaceutska kompozicija se može administrirati dnevno tokom 7 dana. Farmaceutska kompozicija se može administrirati dnevno najmanje 100 dana. Prema nekim metodama, nikakvi neželjeni efekti na kardiovaskularni, respiratorni i/ili centralni nervni sistem (CNS) nisu primećeni tokom najmanje 1 meseca nakon administracije. Prema nekim metodama, ne primećuju se promene u srčanom ritmu i/ili arterijskom krvnom pritisku najmanje 1 mesec nakon administracije. Prema nekim metodama, nisu primećene promene u brzini disanja, disajnoj zapremini i/ili minutnom volumenu najmanje 1 mesec nakon primene.

[0014] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje metod inhibicije hemolize kod subjekta koji uključuje administraciju farmaceutske kompozicije koja sadrži R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 5 m M od do oko 100 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM, pri čemu farmaceutska kompozicija može da se administrira subkutano (SC) ili intravenozno (IV). Vreme poluživota (t1/2) nivoa R5000 u plazmi ispitanika može da bude najmanje 4 sata. Vrednosti t1/2 nivoa R5000 u plazmi ispitanika mogu da iznose od oko 1 dan do oko 10 dana. Stacionarni volumen distribucije R5000 u plazmi ispitanika može da bude od oko 10 mL/kg do oko 200 mL/kg. Stacionarni volumen distribucije R5000 u plazmi ispitanika može da bude jednak najmanje 50% ukupne zapremine krvi. Ukupna brzina klirensa R5000 u plazmi ispitanika može da bude od oko 0,04 mL/hr/kg do oko 4 mL/hr/kg. Tmax R5000 u plazmi ispitanika može da bude od oko 1 sat do oko 48 sati. Prisustvo merljivih količina R5000 može biti značajno ograničeno na komponentu plazme. Farmaceutska kompozicija se može administrirati u dozi dovoljnoj da isporuči od oko 0,01 mg do oko 2 mg R5000 po kg težine subjekta. Od oko 50% do oko 99% aktivacije C5 kod subjekta može da bude inhibirano. Farmaceutska kompozicija se može administrirati u dozi dovoljnoj da isporuči od oko 0,1 mg do oko 0,4 mg R5000 po kg težine subjekta. Farmaceutska kompozicija se može primeniti subkutano ili intravenozno. Farmaceutska kompozicija se može administrirati jednom ili više puta na dan. Farmaceutska kompozicija se može administrirati u periodu od 7 dana. Procenat inhibicije hemolize može biti najmanje 90% do oko 95% ili više, do 3 sata nakon prve administracije. Procenat inhibicije hemolize može da bdue od najmanje 90% do oko 95% ili više, mereno najmanje 7 dana nakon primene. Procenat inhibicije hemolize može da bude najmanje 90% do oko 95% ili više tokom najmanje 4 dana nakon administracije. Maksimalna inhibicija hemolize i/ili maksimalna inhibicija aktivnosti komplementa može se postići od oko 2 sata nakon administracije do oko 4 sata nakon primene.

[0015] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje metod inhibicije hemolize kod subjekta koji uključuje davanje farmaceutske kompozicije koja uključuje R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 5 m M od do oko 100 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM, pri čemu se R5000 primenjuje/administrira u dozi od 0,2 mg/kg. Hemoliza može da bude ≤ 3% na 24 sata nakon poslednje primene. Aktivnost komplementa može biti smanjena na oko 1 procenat do oko 10 procenata tokom perioda od 7 dana. Aktivnost komplementa može da bude ≤ 5% na 24 sata nakon poslednje primene. Farmaceutska kompozicija se može administrirati dnevno subkutanom ili intravenskom injekcijom u dozi dovoljnoj da isporuči od oko 0,1 mg/dan do oko 60 mg/dan od R5000 po kg težine subjekta. Maksimalna postignuta koncentracija u serumu (Cmax) može da iznosi od oko 0,1 µg/mL do oko 1000 µg/mL. Površina ispod krive (AUC) može da iznosi oko 200 µg∗hr/mL do oko 10,000 µg∗hr/mL.

[0016] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH) kod subjekta kome je to potrebno, što uključuje subkutanu ili intravensku primenu farmaceutske kompozicije koja sadrži R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 25 mM do oko 100 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM. Subjekt je možda ranije bio lečen lekom zasnovanom na antitelu. PNH kod subjekta može da bude otporan ili ne reaguje na tretman lekom zasnovanom na antitelu. Lek zasnovan na antitelu može da bude ekulizumab.

[0017] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje komplet koji uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži R5000 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, pri čemu farmaceutski prihvatljiv ekscipijens uključuje natrijum hlorid u koncentraciji od oko 25 mM do oko 100 mM i natrijum fosfat u koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM

[0018] U nekim realizacijama, ovo otkriće obezbeđuje uređaj sa auto-injektorom koji sadrži farmaceutsku kompoziciju predmetnog pronalaska, gde so je natrijum hlorid u koncentraciji od oko 25 mM do oko 100 mM i pufer je natrijum fosfat pri koncentraciji od oko 10 mM do oko 100 mM.

Kratak opis slika

[0019]

Slika 1 je dijagram rasejanja koji pokazuje R5000 inhibiciju proizvodnje C5a.

Slika 2 je dijagram rasejanja koji prikazuje R5000 inhibiciju membranskog napadačkog kompleksa.

Slika 3 je dijagram rasejanja koji pokazuje aktivnost inhibitora R5000 u modelu majmuna Cynomolgus.

Slika 4A je dijagram rasejanja koji prikazuje farmakokinetičku i farmakodinamičku korelaciju R5000 kod mužjaka Cynomolgus majmuna nakon višestrukih subkutanih administracija od 0,21 mg/kg.

Slika 4B je dijagram rasejanja koji prikazuje farmakokinetičku i farmakodinamičku korelaciju R5000 kod mužjaka Cynomolgus majmuna nakon višestrukih subkutanih administracija od 4,2 mg/kg.

Slika 5A je grafikon koji prikazuje nivoe R5000 tokom vremena nakon subkutane administracije kod pacova i majmuna.

Slika 5B je grafikon koji pokazuje koncentracije u plazmi tokom vremena nakon subkutane administracije više doza od 0,21 i 4,2 mg/kg kod majmuna.

Slika 6 je grafikon koji prikazuje predviđene koncentracije R5000 u plazmi kod čoveka pri dnevnoj dozi od R5000.

Slika 7 je linijski grafikon koji pokazuje koncentracije R5000 kod Cynomolgus majmuna nakon prve doze u toksikološkoj studiji ponovljenih doza.

Slika 8 je linijski grafikon koji pokazuje koncentracije R5000 kod Cynomolgus majmuna nakon poslednje doze u toksikološkoj studiji ponovljenih doza.

Slika 9A je grafikon koji pokazuje promene u procentu hemolize u odnosu na koncentraciju R5000 u studiji sa više doza na ljudima.

Slika 9B je grafik koji prikazuje koncentracije R5000 u plazmi tokom vremena u studiji sa više doza na ljudima.

Slika 10A je grafikon koji pokazuje promene u aktivnosti komplementa tokom vremena tretmanom sa R5000 u studiji sa više doza na ljudima.

Slika 10B je grafik koji prikazuje promene u aktivnosti komplementa tokom dužeg perioda tretmanom sa R5000 u ispitivanju sa više doza na ljudima.

Slika 11A je grafikon koji prikazuje maksimalne nivoe koncentracije u plazmi zavisne od doze R5000 u kliničkoj studiji sa jednom rastućom dozom na ljudima.

Slika 11B je grafikon koji prikazuje koncentracije u plazmi tokom vremena nakon primene pojedinačne doze R5000.

Slika 12A je grafikon koji pokazuje procenat hemolize tokom vremena nakon primene pojedinačne doze R5000 tokom 4 dana kod ljudi.

Slika 12B je grafikon koji pokazuje procenat CH50 tokom vremena nakon primene pojedinačne doze R5000 kod ljudi.

Slika, 12C je grafikon koji prikazuje procenat hemolize sa različitim dozama tokom trajanja od 28 dana kod ljudi.

Slika 13 je grafik koji prikazuje procenat aktivnosti komplementa tokom vremena nakon primene jedne doze R5000 kod ljudi.

Detaljan opis

I. Jedinjenja i kompozicije

[0020] U skladu sa predmetnim pronalaskom, obezbeđene su kompozicije koje funkcionišu tako da moduliraju aktivnost komplementa. Takve kompozicije pronalaska uključuju inhibitore C5. Kao što se ovde koristi, "aktivnost komplementa" uključuje aktivaciju kaskade komplementa, formiranje proizvoda cepanja od komponente komplementa kao što je C3 ili C5, sklapanje nizvodnih kompleksa nakon događaja cepanja, ili bilo koji proces ili događaj koji prati, ili nastaje kao rezultat, cepanja komponente komplementa, na primer, C3 ili C5. Inhibitori C5 blokiraju aktivaciju komplementa na nivou komponente C5 komplementa. Inhibitori C5 mogu da vežu C5 i spreče njegovo cepanje, pomoću C5 konvertaze, u proizvode cepanja C5a i C5b. Kao što se ovde koristi, "komponenta komplementa C5" ili "C5" je definisana kao kompleks koji se cepa C5 konvertazom u najmanje proizvode cepanja, C5a i C5b. "Inhibitori C5", prema pronalasku, obuhvataju bilo koje jedinjenje ili kompoziciju koja inhibira procesuiranje ili cepanje kompleksa C5 prethodno odcepljene komponente komplementa ili proizvoda cepanja komponente C5 komplementa.

[0021] Smatra se da inhibicija cepanja C5 sprečava sklapanje i aktivnost a membranskog napadačkog kompleksa (MAC) na eritrocite sa nedostatkom adherentnog proteina glikozilfosfatidilinozitola (GPI). Kao takvi, u nekim slučajevima, inhibitori C5 pronalaska mogu takođe da vežu C5b, sprečavajući vezivanje C6 i naknadno sklapanje C5b-9 MAC-a.

Jedinjenja na bazi peptida

[0022] Inhibitori C5 pronalaska su polipeptidi. Prema predmetnom pronalasku, bilo koji molekul na bazi amino kiselina (prirodnih ili neprirodih) može se nazvati "polipeptidom" i ovaj termin obuhvata "peptide", "peptidomimetike" i "proteine". Tradicionalno se smatra da "peptidi" imaju veličinu od oko 4 do oko 50 aminokiselina. Polipeptidi veći od oko 50 aminokiselina se generalno nazivaju "proteini".

[0023] Polipeptidi inhibitora C5 mogu da budu linearni ili ciklični. Ciklični polipeptidi obuhvataju sve polipeptide koji kao deo svoje strukture imaju jednu ili više cikličnih karakteristika kao što su petlja i/ili unutrašnja veza. Ciklični polipeptidi se mogu formirati kada molekul deluje kao premošćavajući deo za povezivanje dva ili više regiona polipeptida. Kako se ovde koristi, izraz "premošćavajući deo" odnosi se na jednu ili više komponenti mosta formiranog između dve susedne ili ne susedne aminokiseline, neprirodne aminokiseline ili ostacima koji nisu amino kiseline. Premošćavajući delovi mogu da budu bilo koje veličine ili sastava. Premošćavajući delovi mogu da sadrže jednu ili više hemijskih veza između dve susedne ili ne susedne aminokiseline, neprirodne aminokiseline, ostatka koji nisu amino kiselina ili njihove kombinacije. Takve hemijske veze mogu biti između jedne ili više funkcionalnih grupa na susednim ili ne susednim amino kiselinama, prirodnim amino kiselinama i neprirodnim aminokiselinama, ostacima koji nisu amino kiseline ili njihovim kombinacijama. Premoošćavajući delovi mogu da obuhvataju jednu ili više od amidne veze (laktam), disulfidne veze, tioetarske veze, aromatični prsten, triazolni prstena i ugljovodonični lanac. Premošćavajući delovi mogu uključiti amidnu vezu između aminske funkcionalne grupe i karboksilatne funkcionalne grupe, od kojih je svaka prisutna u bočnom lancu aminokiseline, amino kiseline koja se ne nalazi u prirodi ili ostatka koji nije amino kiselina . Funkcionalnosti amina ili karboksilata da budu mogu biti ostatka koji nije amino kiselina ili ostatka aminokilseline koja se ne nalazi u prirodi.

[0024] Polipeptidi inhibitora C5 mogu biti ciklizovani preko karboksi kraja, amino kraja ili preko bilo koje druge pogodne tačke vezivanja, kao što je, na primer, preko sumpora u cisteinu (npr. kroz formiranje disulfidnih veza između dva cisteinska ostatka u sekvencu) ili bilo koji bočni lanac aminokiselinskog ostatka. Dalje veze koje formiraju ciklične petlje mogu da obuhvate, ali nisu ograničene na, maleimidne veze, amidne veze, estarske veze, etarske veze, tiol etarske veze, hidrazonske veze ili acetamidne veze.

[0025] Ciklični polipeptidnii inhibitora C5 mogu se formirati korišćenjem laktamskog dela. Takvi ciklični polipeptidi mogu da se formiraju, na primer, sintezom na čvrstom nosaču Wang smole korišćenjem standardne Fmoc hemije. U nekim slučajevima, Fmoc-ASP(alil)-OH i Fmoc-LIS(alloc)-OH su ugrađeni u polipeptide da služe kao prekursorski monomeri za formiranje laktamskog mosta.

[0026] Polipeptidi inhibitora C5 mogu biti peptidomimetici. "Peptomimetik" ili "polipeptidni mimetik" je polipeptid u kojem molekul sadrži strukturne elemente koji se ne nalaze u prirodnim polipeptidima (tj. polipeptidi koji se sastoje od samo 20 proteinogenih aminokiselina). Peptidomimetik može na mnogo načina da se razlikuje od prirodnih polipeptida, na primer kroz promene u strukturi osnovnog lanca ili kroz prisustvo aminokiselina koje se ne javljaju u prirodi. U nekim slučajevima, peptidomimetici mogu da uključivuju aminokiseline sa bočnim lancima koji se ne nalaze među poznatih 20 proteinogenih amino kiselina; premošćavajući delovi koji nisu bazirani na polipeptidima koji se koriste za ciklizaciju između krajeva ili unutrašnjih delova molekula; supstitucije vodoničnog dela amidne veze metil grupama (N-metilacija) ili drugim alkil grupama; zamena peptidne veze hemijskom grupom ili vezom koja je otporna na hemijske ili enzimske tretmane; modifikacije N- i C-terminala; i/ili konjugacije sa nepeptidnim produžetkom (kao što su polietilen glikol, lipidi, ugljeni hidrati, nukleozidi, nukleotidi, nukleozidne baze, različiti mali molekuli ili fosfatne ili sulfatne grupe).

1

[0027] Kao što se ovde koristi, izraz "amino kiselina" uključuje ostatke prirodnih amino kiselina kao i neprirodnih amino kiselina. 20 prirodnih proteinogenih aminokiselina je identifikovano i ovde se navode jednoslovnim ili troslovnim oznakama kao što sledi: asparaginska kiselina (Asp:D), izoleucin (Ile:I), treonin (Thr:T), leucin ( Leu:L), serin (Ser:S), tirozin (Tyr:I), glutaminska kiselina (Glu:E), fenilalanin (Phe:F), prolin (Pro:P), histidin (His:H), glicin ( Gly:G), lizin (Lys:K), alanin (Ala:A), arginin (Arg:R), cistein (Cys:C), triptofan (Trp:W), valin (Val:V), glutamin (Gln :K) metionin (Met:M), asparagin (Asn:N). Prirodne aminokiseline postoje u svojim levorotacionim (L) stereoizomernim oblicima. Amino kiseline koje se ovde pominju su L-stereoizomeri osim gde je drugačije naznačeno. Termin "amino kiselina" takođe uključuje amino kiseline koje nose standardnu amino zaštitnu grupu (npr. acetil ili benziloksikarbonil), kao i prirodne i neprirodne aminokiseline zaštićene na karboksi kraju (npr. kao (C1-C6) alkil, fenil ili benzil estar ili amid ili kao alfa-metilbenzil amid). Druge pogodne amino i karboksi zaštitne grupe poznate su stručnjacima u ovoj oblasti (videti na primer, Greene, T. W.; Wutz, P. G. M., Protecting Groups In Organic Synthesis; second edition, 1991, New York, John Wiley & sons, Inc i dokumenta koja su tamo navedena).

[0028] „Neprirodne“ aminokiseline imaju bočne lance ili druge karakteristike koje nisu prisutne u 20 prirodnih aminokiselina navedenih gore i uključuju, ali nisu ograničene na: N-metil amino kiseline, N-alkil amino kiseline, alfa, alfa supstituisane aminokiseline, beta-amino kiseline, alfa-hidroksi amino kiseline, D-amino kiseline i druge neprirodne aminokiseline poznate u struci (videti, npr., Josephson et al., (2005) J. Am. Chem. Soc. 127: 11727-11735; Forster, A.C. et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 6353-6357; Subtelny et al., (2008) J. Am. Chem. Soc. 130: 6131-6136; Hartman, M.C.T. et al. (2007) PLoS ONE 2:e972; i Hartman et al., (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4356-4361). Dalje neprirodne amino kiseline korisne za optimizaciju polipeptida i/ili polipeptidnih kompozicija obuhvataju, ali nisu ograničene na 1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-1-karboksilnu kiselinu, 1-amino-2,3-hidro-1H-inden -1-karboksilnu kiselinu, homolizin, homoarginin, homoserin, 2-aminoadipinsku kiselinu, 3-aminoadipinsku kiselinu, beta-alanin, aminopropionsku kiselinu, 2-aminobuternu kiselinu, 4-aminobuternu kiselinu, 5-aminopentansku kiselinu, 5-aminoheksansku kiselinu, 6-aminokapronsku kiselinu, 2-aminoheptanska kiselina, 2-aminoizobuterna kiselina, 3-aminoizobuterna kiselina, 2-aminopimelinska kiselina, dezmozin, 2,3-diaminopropionska kiselina, N-etilglicin, N-etilasparagin, homoprolin, hidroksilizin, alo-hidroksilzin, 3-hidroksiprolin, 4-hidroksiprolin, izodezmozin, alo-izoleucin, Nmetilpentilglicin, naftilalanin, ornitin, pentilglicin, tioprolin, norvalin, terc-butilglicin, fenilglicin, azatripofan, -5-azatripofan, 7-azatriptofan, 4-fluorofenilalanin , penicilamin, sarkozin, homocistein, 1-aminociklopropankarboksilnu kiselinu, 1-aminociklobutankarboksilnu kiselinu, 1-aminociklopentankarboksilnu kiselinu, 1-aminocikloheksankarboksilnu kiselinu, 4-aminotetrahidro-2H-piran-4-karboksilnu kiselinu, (S)-2-amino-3-(1H-tetrazol-5-il)propansku kiselinu, ciklopentilglicin, cikloheksilglicin, ciklopropilglicin, η-ω -metil-arginin, 4-hlorfenilalanin, 3-hlortirozin, 3-fluortirozin, 5-fluortriptofan, 5-hlortriptofan, citrulin, 4-hlorhomofenilalanin, 4-aminometil-fenilalanin, 3-aminometil-fenilalanin, oktilglicin, norleucin, traneksaminsku kiselinu, 2-amino pentansku kiselinu, 2-amino heksansku kiselinu, 2-amino heptansku kiselinu, 2-amino oktansku kiselinu, 2-amino nonansku kiselinu, 2-amino dekansku kiselinu, 2 -amino undekansku kiselinu, 2-amino dodekansku kiselinu, aminovalerijansku kiselinu i 2-(2-aminoetoksi) sirćetnu kiselinu, pipekolinsku kiselinu, 2-karboksi azetidin, heksafluorleucin, 3-fluorvalin, 2-amino-4,4-difluor-3 -metilbutansku kiselinu, 3-fluor-izoleucin, 4-fluorizoleucin, 5-fluorizoleucin, 4-metilfenilglicin, 4-etil-fenilglicin, 4-izopr opil-fenilglicin, (S)-2-amino-5-azidopentansku kiselinu (ovde se takođe naziva " XO2"), (S)-2-aminohept-6-ensku kiselinu (ovde označena kao " X30"), (S)-2-aminopent-4-inoisku kiselinu (ovde se takođe naziva " X31"), (S)-2-aminopent-4-enoisku kiselinu (ovde takođe označena kao "X12"), (S)- 2-amino-5-(3-metilgvanidino) pentansku kiselinu, (S)-2-amino-3-(4-(aminometil)fenil)propansku kiselinu, (S)-2-amino-3-(3-(aminometil) )fenil)-propansku kiselinu, (S)-2-amino-4-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)butansku kiselinu, (S)-leucinol, (S)-valinol, (S)-terc- leucinol, (R)-3-metilbutan-2-amin, (S)-2-metil-1-fenilpropan-1-amin i (S)-N,2-dimetil-1-(piridin-2-il) propan-1-amin, (S)-2-amino-3-(oksazol-2-il)propansku kiselinu, (S)-2-amino-3-(oksazol-5-il)propansku kiselinu, (S)- 2-amino-3-(1,3,4-oksadiazol-2-il)propansku kiselinu, (S)-2-amino-3-(1,2,4-oksadiazol-3-il)propansku kiselinu, (S )-2-amino-3-(5-fluor-1H-indazol-3-il)propansku kiselinu i (S)-2-amino-3-(1H-indazol-3-il)propansku kiselinu, (S) -2-amino-3-(oksazol-2-il)buternu kiseline, (S)- 2-amino-3-(oksazol-5-il) buternu kiselinu, (S)-2-amino-3-(1,3,4-oksadiazol-2-il) buternu kiselinu, (S)-2-amino- 3-(1,2,4-oksadiazol-3-il) buternu kiselinu, (S)-2-amino-3-(5-fluor-1H-indazol-3-il) buternu kiselinu i (S)-2 -amino-3-(1H-indazol-3-il) buternu kiselina, 2-(2'MeOfenil)-2-amino sirćetnu kiselinu, tetrahidro 3-izohinolinkarboksilnu kiselinu i njihove stereoizomere (uključujući, ali ne ograničavajući se na D i L izomere).

[0029] Dodatne neprirodne aminokiseline koje su korisne u optimizaciji polipeptida ili polipeptidnih kompozicija uključuju, ali nisu ograničene na fluorovane amino kiseline u kojima je jedan ili više atoma vodonika vezanih za ugljenik zamenjeno fluorom. Broj uključenih atoma fluora može da se kreće od 1 do i uključujući sve atome vodonika. Primeri takvih amino kiselina uključuju, ali nisu ograničeni na 3-fluorprolin, 3,3-difluorprolin, 4-fluorprolin, 4,4-difluorprolin, 3,4-difluorprolin, 3,3,4,4-tetrafluorprolin, 4-fluootriptofan , 5-fluortriptofan, 6-fluortriptofan, 7-fluortriptofan i njihovi stereoizomeri.

[0030] Ostale neprirodne amino kiseline koje su korisne u optimizaciji polipeptida uključuju, ali nisu ograničene na one koje su disupstituisane na α -ugljeniku. Tu spadaju aminokiseline u kojima su dva supstituenta na α –ugljeniku, ista, na primer α -amino izobuterna kiselina i 2-amino-2-etil buterna kiselina, kao i one kod kojih su supstituenti različiti, na primer α -metilfenilglicin i α -metilprolin. Dalje, supstituenti na α -ugljeniku se mogu posmatrati zajedno tako da formiraju prsten, na primer 1-aminociklopentan karboksilna kiselina, 1-aminociklobutan karboksilna kiselina, 1-aminocikloheksan karboksilna kiselina, 3-aminotetrahidrofuran-3-karboksilna kiselina, 3-aminotetrahidro-karboksilna kiselina kiselina, 4-aminotetrahidropiran-4-karboksilna kiselina, 3-aminopirolidin-3-karboksilna kiselina, 3-aminopiperidin-3-karboksilna kiselina, 4-aminopiperidin-4-karboksilna kiselina i njihovi stereoizomeri.

[0031] Dodatne ne prirodne aminokiseline koje su korisne u optimizaciji polipeptida ili polipeptidnih kompozicija uključuju, ali nisu ograničene na analoge triptofana u kojima je sistem indolnog prstena zamenjen drugim 9 ili 10-članim bicikličnim prstenastim sistemom koji se sastoji od 0, 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno izabrana od N, O ili S. Svaki sistem prstena može da bude zasićen, delimično nezasićen ili potpuno nezasićen. Sistem prstena može da bude supstituisan sa 0, 1, 2, 3 ili 4 supstituenta na bilo kom atomu koji se može supstituisati. Svaki supstituent može da bude nezavisno izabran između H, F, Cl, Br, CN, COOR, CONRR', okso, OR, NRR'. Svaki R i R' mogu biti nezavisno da budu izabrani između H, C1-C20 alkila ili C1-C20 alkil-O-C1-20 alkila.

[0032] Analozi triptofana (koji se ovde takođe nazivaju " triptofan analozi ") mogu da budu korisni u optimizaciji polipeptida ili polipeptidnih kompozicija. Analozi triptofana mogu da obuhvate, ali nisu ograničeni na 5-fluortriptofan [(5-F)W], 5-metil-O-triptofan [(5-MeO)W], 1-metiltriptofan [(1-Me-W) ili (1-Me)W], D-triptofan (D-Trp), azatriptofan (uključujući, ne ograničavajući se na 4-azatriptofan, 7-

1

azatriptofan i 5-azatriptofan,) 5-hlortriptofan, 4-fluortriptofan, 6-fluortriptofan, 7-fluortriptofan i njihovi stereoizomeri. Osim tamo gde je drugačije naznačeno, izraz "azatriptofan" i njegova skraćenica, "azaTrp", kako se ovde koristi, odnose se na 7-azatriptofan.

[0033] Modifikovani ostaci aminokiselina da budu korisni za optimizaciju polipeptida i/ili polipeptidnih kompozicija uključuju, ali nisu ograničeni na one koji su hemijski blokirani (reverzibilno ili ireverzibilno); hemijski modifikovani na svojoj N-terminalnoj amino grupi ili njenim grupama na bočnom lancu; hemijski modifikovani u amidnom skeletu, kao na primer, N-metilovani, D (ne prirodne aminokiseline) i L (prirodne aminokiseline) stereoizomeri; ili ostaci u kojima su funkcionalne grupe bočnog lanca hemijski modifikovane u drugu funkcionalnu grupu. Modifikovane amino kiseline uključuju bez ograničenja metionin sulfoksid; metionin sulfon; asparaginsku kiselinu-(beta-metil estar), modifikovanu amino kiselinu asparaginske kiseline; N-etilglicin, modifikovanu aminokiselinu glicina; alanin karboksamid; i/ili modifikovanu aminokiselinu alanina. Ne prirodne aminokiseline se mogu nabaviti od Sigma-Aldrich (Sent Luis, MO), Bachem (Torrance, CA) ili drugih dobavljača. Ne prirodne aminokiseline mogu dalje da obuhvate bilo koju od onih navedenih u tabeli 2 objavljenog US patenta US 2011/0172126.

[0034] Kako se ovde koristi, izraz "derivat" se koristi kao sinonim za izraz "varijanta" i odnosi se na molekul koji je modifikovan ili izemenjen na bilo koji način u odnosu na referentni molekul ili polazni molekul.

[0035] Polipeptidi mogu da obuhvataju bilo koju od sledećih komponenti, karakteristika ili delova, za koje ovde korišćene skraćenice uključuju: "Ac" i "NH2" označavaju acetil i amidovane krajeve, respektivno; "Nvl" označava norvalin; "Phg" označava fenilglicin; "Tbg" označava terc-butilglicin; "Chg" označava cikloheksilglicin; „(N-Me)x“ označava N-metilovani oblik aminokiseline označen slovnim ili troslovnim kodom aminokiseline umesto promenljive „X “ napisan kao N-metil-X [npr. (N-Me)D ili (N-Me)Asp označava N-metilovani oblik asparaginske kiseline ili N-metil-asparaginsku kiselinu]; "azaTrp" označava azatriptofan; "(4-F)Phe" označava 4-fluorfenilalanin; "Tyr(OMe)" označava O-metil tirozin, "Aib" označava amino izobuternu kiselinu; "(homo)F" ili "(homo)Phe" označava homofenilalanin; "(2-OMe)Phg" se odnosi na 2-O-metilfenilglicin; "(5-F)W" se odnosi na 5-fluorotriptofan; "D-X" se odnosi na D-stereoizomer date amino kiseline "X" [npr. (D-Chg) označava D-cikloheksilglicin]; "(5-MeO)W" se odnosi na 5-metil-O-triptofan; "homoC" se odnosi na homocistein; "(1-Me-W)" ili "(1-Me)w" se odnosi na 1-metiltriptofan; "Nle" se odnosi na norleucin; "Tiq" se odnosi na ostatak tetrahidroizohinolina; "Asp(T)" se odnosi na (S)-2-amino-3-(lH-tetrazol-5-il)propansku kiselinu; "(3-Cl-Phe)" se odnosi na 3-hlorfenilalanin; "[(N-Me-4-F)Phe]" ili "(N-Me-4-F)Phe" se odnosi na N-metil-4-fluorfenilalanin; "(m-Clhomo)Phe" se odnosi na meta-hlorhomofenilalanin; "(des-amino)C" se odnosi na 3-tiopropionsku kiselinu; "(alfa-metil)D" se odnosi na alfa-metil L-asparaginsku kiselinu; "2Nal" se odnosi na 2-naftilalanin; "(3-aminometil)Phe" se odnosi na 3-aminometil-L-fenialanin; "Cle" se odnosi na cikloleucin; "Ac-Pyran" se odnosi na 4-amino-tetrahidro-piran-4-karboksilnu kiselinu; "(Lys-C16)" se odnosi na N- εpalmitoil lizin; "(Lys-C12)" se odnosi na N- ε-lauril lizin; "(Lys-C10)" se odnosi na N- ε--kapril lizin; "(Lys-C8)" se odnosi na N- ε-kaprilni lizin; "[xXylyl(y, z)]" se odnosi na ksilil premošćavajući deo između dve aminokiseline koje sadrže tiol gde x može da bude m, p ili o da bi se ukazalo na upotrebu meta-, para- ili ortodibromoksilena (respektivno) za stvaranje premošćavajućih ostataka i numerički identifikatori, y i z, određuju položaj aminokiselina unutar polipeptida amino kiselina koje učestvuju u ciklizaciji; "[ciklo(y,z)]" se odnosi na formiranje veze između dva aminokiselinska ostatka gde numerički identifikatori, y i z, određuju položaj ostataka koji učestvuju u vezi; "[ciklo-olefinil(y,z)]" se odnosi na formiranje veze između dva aminokiselinska ostatka olefin metateza gde numerički identifikatori, y i z, označavaju položaje ostataka koji učestvuju u vezi; "[ciklotioalkil(y,z)]" se odnosi na formiranje tioetarske veze između dva aminokiselinska ostatka gde numerički identifikatori, i i z, označavaju položaj ostataka koji učestvuju u vezi; "[ciklo-triazolil(y,z)]" se odnosi na formiranje triazolnog prstena između dva aminokiselinska ostatka gde numerički identifikatori, y i z, određuju položaj ostataka koji učestvuju u vezi. „B20“ se odnosi na N- ε -(PEG2- γ -glutaminsku kiselinu-N- α -oktadekandionsku kiselinu) lizin [takođe poznat kao (1S,28S)-1-amino-7,16,25,30-tetraokso-9,12,18,21-tetraoksa-6,15,24,29-tetraazaheksatetrakontan-1,28,46-trikarboksilna kiselina.]

"B28" označava N-ε-(PEG24-γ-glutaminska kiselina -N-αheksadecanoil)lizin.

1

[0037] "K14" označava N-ε-1-(4,4-dimetil-2,6-dioksocikloheks-1-iliden)-3-metilbutil-L-lizin. Svi ostali simboli se odnose na standardni jednoslovni kod aminokiselina.

[0038] Osnovna aminokiselinska sekvenca R5000 (SEQ ID NO: 1) sadrži 15 amino kiselina (sve L-amino kiseline), uključujući 4 ne prirodne aminokiseline, osnosno (N-metil-asparaginsku kiselinu, terc-butilglicin, 7-azatriptofan, i cikloheksilglicin); laktamski most između K1 i D6 polipeptidne sekvence; i C-terminalni lizin se nalaze sa modifikovanim bočnim lancem, formirajući ostatak N-ε-(PEG24-γ-glutaminska kiselina-N-a-heksadekanoil)lizin (koji se ovde takođe naziva "B28"). Modifikacija bočnog lanca C-terminalnog lizina uključuje polietilenglikol (PEG) spejser (PEG24), pri čemu je PEG24 vezan za ostatak L- y glutaminske kiseline koji je derivatizovan sa palmitoil grupom.

[0039] Vezivanje inhibitora se može proceniti određivanjem stepena asocijacije i/ili disocijacije sa određenim ciljem. U nekim slučajevima, jedinjenja pokazuju snažnu i brzu asocijaciju sa ciljem u kombinaciji sa sporim stepenom disocijacije. U nekim realizacijama, inhibitori C5 pronalaska pokazuju snažnu i brzu asocijaciju sa C5. Takvi inhibitori mogu dalje da ispolje spor stepen disocijacije sa C5.

[0040] inhibitori C5 pronalaska koji se vezuju za protein C5 komplementa, mogu da se vežu za protein C5 komplementa sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) od oko 0,001 nM do oko 0,01 nM, od oko 0,005 nM do oko 0,05 nM, od oko 0,01 nM do oko 0,1 nM, od oko 0,05 nM do oko 0,5 nM, od oko 0,1 nM do oko 1.0 nM, od oko 0,5 nM do oko 5.0 nM, od oko 2 nM do oko 10 nM, od oko 8 nM do oko 20 nM, od oko 15 nM do oko 45 nM, od oko 30 nM do oko 60 nM, od oko 40 nM do oko 80 nM, od oko 50 nM do oko 100 nM, od oko 75 nM do oko 150 nM, od oko 100 nM do oko 500 nM, od oko 200 nM do oko 800 nM, od oko 400 nM do oko 1,000 nM ili najmanje 1,000 nM.

1

[0041] U nekim realizacijama, inhibitori C5 pronalaska blokiraju formiranje ili stvaranje C5a iz C5. U nekim slučajevima, formiranje ili stvaranje C5a je blokirano nakon aktivacije alternativnog puta aktivacije komplementa. U nekim slučajevima, inhibitori C5 pronalaska blokiraju formiranje membranskog napadačkog kompleksa (MAC). Takva inhibicija formiranja MAC-a može biti posledica vezivanja inhibitora C5 za podjedinice C5b. Vezivanje inhibitora C5 za podjedinice C5b može da spreči vezivanje C6, što rezultira blokadom formiranja MAC-a. U nekim realizacijama, ova inhibicija formiranja MAC-a se javlja nakon aktivacije klasičnog, alternativnog ili lektinskog puta.

[0042] Inhibitori C5 pronalaska mogu se sintetizovati hemijskim procesima. U nekim slučajevima, takva sinteza eliminiše rizike povezane sa proizvodnjom bioloških proizvoda u ćelijskim linijama sisara. U nekim slučajevima, hemijska sinteza može da bude jednostavnija i isplativija od bioloških proizvodnih procesa.

Izotopske varijacije

[0043] Polipeptidi predmetnog pronalaska mogu da sadrže jedan ili više atoma koji su izotopi. Kao što se ovde koristi, izraz "izotop" se odnosi na hemijski element koji ima jedan ili više dodatnih neutrona. U jednom aspektu, polipeptidi predmetnog pronalaska mogu da budu deuterisani. Kao što se ovde koristi, izraz "deuterisan" se odnosi na supstancu koja ima jedan ili više atoma vodonika zamenjenih izotopima deuterijuma. Izotopi deuterijuma su izotopi vodonika. Jezgro vodonika sadrži jedan proton, dok jezgra deuterijuma sadrže i proton i neutron. Farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu da budu deuterisane da bi se promenila fizička svojstva, kao što je stabilnost, ili da bi se omogućilo njihovo korišćenje u dijagnostičkim i eksperimentalnim primenama.

II. Metode upotrebe

[0044] Ovde su obezbeđene metode modulacije aktivnosti komplementa korišćenjem kompozicija pronalaska.

Terapeutske indikacije

[0045] Važna komponenta celokupne imunološke aktivnosti (urođene i adaptivne) je sposobnost imunog sistema da pravi razliku između sopstvenih i ne sopstvenih ćelija. Patologija nastaje kada imuni sistem nije u stanju da napravi ovu razliku. U slučaju sistema komplementa, ćelije kičmenjaka eksprimiraju inhibitorne proteine koji ih štite od efekata kaskade komplementa i to osigurava da je sistem komplementa usmeren protiv mikrobnih patogena. Mnogi poremećaji i bolesti

1

povezani sa komplementom su povezani sa nekontrolisanim uništavanjem sopstvenih ćelija kaskadom komplementa.

[0046] Metode pronalaska obuhvataju postupke za lečenje poremećaja povezanih sa komplementom pomoću kompozicija pronalaska. "Poremećaj vezan za komplement", kako se ovde navodi, može da uključi bilo koje stanje povezano sa disfunkcijom sistema komplementa, npr. cepanje ili procesiranje komponente komplementa kao što je C5.

[0047] U nekim realizacijama, metode pronalaska uključuju metode inhibicije aktivnosti komplementa kod subjekta. U nekim slučajevima, procenat aktivnosti komplementa inhibirane kod subjekta može da bude najmanje10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje , 85%, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, najmanje 99.5%, ili najmanje 99.9%. U nekim slučajevima, ovaj nivo inhibicije i/ili maksimalne inhibicije aktivnosti komplementa može se postići za oko 1 sat nakon primene do oko 3 sata nakon primene, od oko 2 sata nakon primene do oko 4 sata nakon primene, od oko 3 sata posle primene do oko 10 sati nakon primene, od oko 5 sati nakon primene do oko 20 sati nakon primene, ili od oko 12 sati nakon primene do oko 24 sata nakon primene. Inhibicija aktivnosti komplementa može se nastaviti tokom perioda od najmanje 1 dana, od najmanje 2 dana, od najmanje 3 dana, od najmanje 4 dana, od najmanje 5 dana, od najmanje 6 dana, od najmanje 7 dana, od najmanje 2 nedelje, od najmanje 3 nedelje, odnosno najmanje 4 nedelje. U nekim slučajevima, ovaj nivo inhibicije se može postići svakodnevnom primenom. Takva dnevna primena može uključivati admonistraciju tokom najmanje 2 dana, najmanje 3 dana, najmanje 4 dana, najmanje 5 dana, najmanje 6 dana, najmanje 7 dana, najmanje 2 nedelje, najmanje 3 nedelje, najmanje 4 nedelje , za najmanje 2 meseca, za najmanje 4 meseca, za najmanje 6 meseci, za najmanje 1 godinu, ili za najmanje 5 godina. U nekim slučajevima, subjektima se mogu administrirati kompozicije predmetnog otkrića tokom života ovih subjekata.

[0048] U nekim realizacijama, metode pronalaska uključuju metode inhibicije aktivnosti C5 kod subjekta. "Aktivnost komplementa zavisna od C5" ili "aktivnost C5", kako se ovde koristi, odnosi se na aktivaciju kaskade komplementa kroz cepanje C5, nizvodno sklapanje proizvoda cepanja C5, ili bilo koji drugi proces ili događaj koji prati, ili je rezultat, cepanja C5. U nekim slučajevima, procenat aktivnosti inhibiranog C5 kod subjekta može da iznosi najmanje 10%, najmanje

1

20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje , 85 %, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, najmanje 99,5%, ili najmanje 99,9%.

[0049] U nekim realizacijama, metode pronalaska mogu uključivati metode inhibicije hemolize administracijom jedne ili više kompozicija pronalaska subjektu ili pacijentu kome je to potrebno. Prema nekim od takvih metoda, hemoliza se može smanjiti od oko 25% do oko 99%. U drugim realizacijama, hemoliza je smanjena za oko 10% do oko 40%, od oko 25% do oko 75%, od oko 30% do oko 60%, od oko 50% do oko 90%, od oko 75% do oko 95%, od oko 90% do oko 99%, ili od oko 97% do oko 99,5%. U nekim slučajevima, hemoliza je smanjena za najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 95%.

[0050] Prema nekim metodama, procenat inhibicije hemolize je od oko ≥90% do oko ≥99% (npr. ≥91%, ≥92%, ≥93%, ≥94%, ≥95%, ≥96% , ≥97%, ≥98%). U nekim slučajevima, ovaj nivo inhibicije i/ili maksimalne inhibicije hemolize može se postići za od oko 1 sat nakon primene do oko 3 sata nakon primene, od oko 2 sata nakon primene do oko 4 sata nakon primene, od oko 3 sata nakon primene do oko 10 sati nakon primene, od oko 5 sati nakon primene do oko 20 sati nakon primene ili od oko 12 sati nakon primene do oko 24 sata nakon primene. Inhibicija nivoa aktivnosti hemolize može se nastaviti tokom perioda od najmanje 1 dan, od najmanje 2 dana, od najmanje 3 dana, od najmanje 4 dana, od najmanje 5 dana, od najmanje 6 dana, od najmanje 7 dana, od najmanje 2 nedelje, od najmanje 3 nedelje, ili najmanje 4 nedelje. U nekim slučajevima, ovaj nivo inhibicije se može postići svakodnevnom primenom. Takva dnevna primena može da obuhvati administraciju u trajanju od najmanje 2 dana, najmanje 3 dana, najmanje 4 dana, najmanje 5 dana, najmanje 6 dana, najmanje 7 dana, najmanje 2 nedelje, najmanje 3 nedelje, najmanje 4 nedelje , za najmanje 2 meseca, za najmanje 4 meseca, za najmanje 6 meseci, za najmanje 1 godinu, ili za najmanje 5 godina. U nekim slučajevima, subjektima se mogu administrirati kompozicije ovog otkrića tokom života ovih subjekata.

[0051] Inhibitori C5 mogu da se upotrebe za lečenje jedne ili više indikacija, pri čemu se kao rezultat tretmana inhibitorom C5 javlja malo ili nimalo neželjenih efekata. U nekim slučajevima se ne javljaju štetni efekti na kardiovaskularni, respiratorni i/ili centralni nervni sistem (CNS). U nekim slučajevima ne dolazi do promena u srčanom ritmu i/ili arterijskom krvnom pritisku. U nekim slučajevima se

1

ne dešavaju promene u brzini disanja, volumenu pri spontanom udisaju bez napora (VT) i/ili minutnom volumenu

[0052] Pod "nižim" ili "smanjivanjem" u kontekstu markera bolesti ili simptoma se podrazumeva značajno smanjenje tog nivoa, često statistički značajno. Smanjenje može da iznosi, na primer, najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40% ili više, i poželjno je do nivoa koji je prihvaćen kao u granicama normalne vrednosti za pojedinca bez takvog poremećaja.

[0053] Pod "rastom" ili "povećanjem" u kontekstu markera bolesti ili simptoma podrazumeva se značajno povećanje tog nivoa, često statistički značajno. Povećanje može da iznosi, na primer, najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40% ili više, i poželjno je do nivoa koji je prihvaćen kao u granicama normalne vrednosti za pojedinca bez takvog poremećaja.

[0054] Efekat lečenja ili prevencije je očigledan kada postoji značajno poboljšanje, često statistički značajno, u jednom ili više parametara statusa bolesti, ili neuspehom da se pogoršaju ili razviju simptomi gde bi se inače očekivali. Na primer, povoljna promena od najmanje 10% u merljivom parametru bolesti, a poželjno najmanje 20%, 30%, 40%, 50% ili više može da bude pokazatelj efikasnog lečenja. Efikasnost za dato jedinjenje ili kompoziciju se takođe može proceniti na eksperimentalnom životinjskom modelu za datu bolest kao što je poznato u tehnici. Kada se koristi eksperimentalni životinjski model, efikasnost lečenja se dokazuje kada je primećen statistički značajna modulacija u markeru ili simptomu.

Paroksizmalna noćna hemoglobinurija

[0055] U nekim realizacijama, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH) sa farmaceutskim kompozicijama pronalaska. PNH je redak poremećaj povezan sa komplementom uzrokovan stečenom mutacijom u biosintezi glikozilfosfatidilinozitol - sidra, gena klase A (PIG-A) koji potiče od multipotentne hematopoetske matične ćelije (Pu, J.J. et al., Clin Transl Sci. 2011. ;4(3):219-24). PNH je okarakterisan oboljenjem koštane srži, hemolitičkom anemijom i trombozom. PIG-A genski proizvod je neophodan za proizvodnju glikolipidnog sidra, glikozilfosfatidilinozitola (GPI), koji se koristi za vezivanje proteina za plazma membranu. Dva proteina regulacije komplementa odgovorna za zaštitu ćelija od litičke aktivnosti terminalnog kompleksa komplementa, CD55 (faktor ubrzavanja raspada) i CD59 (membranski inhibitor

2

reaktivne lize), postaju nefunkcionalni u odsustvu GPI. Ovo dovodi do aktivacije C5 i akumulacije specifičnih proteina komplementa na površini crvenih krvnih zrnaca (RBC) što dovodi do uništenja ovih ćelija posredovanog komplementom.

[0056] Pacijent sa PNH u početku je prisutan sa hemoglobinurijom, bolom u stomaku, distonijom glatkih mišića i umorom, npr. simptomima ili poremećajima povezanim sa PNH. PNH takođe karakteriše intravaskularna hemoliza (primarna klinička manifestacija bolesti) i venska tromboza. Venska tromboza se može javiti na neuobičajenim mestima, uključujući, ali ne ograničavajući se na hepatične, mezenterične, cerebralne i dermalne vene. (Parker, C. et al., 2005. Blood.106: 3699-709 i Parker, C.J., 2007. Exp Hematol.35: 523-33). Trenutno je ekulizumab (SOLIRIS®, Alekion Pharmaceuticals, Cheshire, CT), monoklonsko antitelo inhibitora C5, jedini odobreni tretman za PNH.

[0057] Tretman ekulizumabom dovodi do odgovarajuće kontrole intravaskularne hemolize kod većine pacijenata sa PNH (Schrezenmeier, H. et al., 2014. Haematologica. 99: 922-9). Međutim, Nišimura i njegove kolege su opisali 11 pacijenata u Japanu (3,2% pacijenata sa PNH) koji imaju mutacije u genu C5 koje sprečavaju vezivanje ekulizumaba za C5 i ne reaguju na lečenje antitelom (Nishimura, J-I. et al. , 2014. N Engl J Med. 370: 632-9). Dalje, ekulizumab se primenjuje svake 2 nedelje kao IV infuzija pod nadzorom zdravstvenog radnika, što je nezgodno i predstavlja opterećenje za pacijente

[0058] Dugotrajna IV primena ima potencijal da dovede do ozbiljnih komplikacija kao što su infekcije, lokalna tromboza, hematomi i progresivno smanjeni venski pristup. Pored toga, ekulizumab je veliki protein i povezan je sa rizikom od imunogenosti i preosetljivosti. Konačno, dok ekulizumab vezuje C5 i sprečava stvaranje C5b, bilo koji C5b generisan nepotpunom inhibicijom može da pokrene formiranje MAC-a i izazove hemolizu.

[0059] Periferna krv pacijenata sa PNH može da varira u proporcijama normalnih i abnormalnih ćelija. Bolest je podklasifikovana prema Međunarodnoj PNH Interest Group na osnovu kliničkih karakteristika, karakteristika koštane srži i procenta polimorfonuklearnih leukocita (PMN) sa nedostatkom GPI-AP (GPI-AP-deficijentni polimorfonuklearni leukociti (PMNs). Kako su GPI-AP-deficijentna crvena krvna zrnca osetljivija na uništavanje kod pacijenata sa PNH, smatra se analiza PMN protočnom citometrijom pruža više informacija (Parker, C.J., 2012.

Curr Opin Hematol. 19: 141-8). Analiza protočne citometrije kod klasične PNH pokazuje 50 do 100% PMN sa nedostatkom GPI-AP.

[0060] Hemolitička anemija PNH je nezavisna od autoantitela (Coombs negativna) i rezultat je nekontrolisane aktivacije alternativnog puta (AP) komplementa.

[0061] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska su posebno korisne u lečenju PNH. Takve kompozicije uključuju R5000. Inhibitori C5 pronalaska, korisni za lečenje PNH, mogu, u nekim slučajevima, da blokiraju cepanje C5 na C5a i C5b. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se mogu koristiti kao alternativa terapiji ekulizumabom za PNH. Za razliku od ekulizumaba, inhibitori C5 pronalaska mogu da vežu C5b, sprečavajući vezivanje C6 i naknadno sklapanje C5b-9 MAC-a.

[0062] U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje PNH kod subjekata. Ovii subjekti mogu da uključe subjekte koji su imali neželjene efekte, odnosno nisu reagovali na njih, pokazali su smanjenu reakciju ili su pokazali otpornost na druge tretmane (npr. sa ekulizumabom). U nekim realizacijama, tretman sa kompozicijama prema ovom pronalasku može da inhibira hemolizu PNH eritrocita na način koji zavisi od doze.

[0063] R5000 se može administrirati u kombinaciji sa ekulizumabom u režimu koji može da uključi paralelni ili serijski tretman.

[0064] Na osnovu sekvenci i strukturnih podataka, R5000 može da bude posebno koristan za lečenje PNH kod ograničenog broja pacijenata sa mutacijama u C5 genu koje sprečavaju vezivanje ekulizumaba za C5. Primer takvih pacijenata su oni sa jednom misens heterozigotnom mutacijom C5, c.2654G->A, koja predviđa polimorfizam p.Arg885His (za opis ovog polimorfizma videti Nishimura, J. et al., N Engl J Med.2014. 370(7):632-9 ).Kao i ekulizumab, R5000 blokira proteolitičko cepanje C5 na C5a i C5b. Za razliku od ekulizumaba, R5000 se takođe može vezati za C5b i blokirati vezivanje sa C6, sprečavajući naknadno sklapanje MAC-a. Prema tome, poželjno je da bilo koji C5b koji nastane usled nepotpune inhibicije sa R5000 bude sprečen da veže C6 i da završi sklapanje MAC-a.

[0065] U nekim slučajevima, R5000 se koristi kao terapeutska alternativa ekulizumabu za pacijente sa PNH koji može da ponudi dodatnu efikasnost bez neprijatnosti i izazova IV primene i poznatih rizika imunogenosti i preosetljivosti povezanih sa monoklonskim antitelima. Dalje, ozbiljne komplikacije dugotrajne IV primene, kao što su infekcije, gubitak venskog pristupa, lokalna tromboza i hematomi, mogu se prevazići sa R5000 datim subkutanom (SC) injekcijom.

Inflamatorne indikacije

[0066] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje subjekata sa bolestima, poremećajima i/ili stanjima povezanim sa upalom/iflamacijom. Upala se može pojačati tokom proteolitičke kaskade sistema komplementa. Iaka upala može imati korisne efekte, prekomerni inflamacija zapaljenje može dovesti do različitih patologija (Markiewski et al.2007. Am J Pathol.17: 715-27). Shodno tome, kompozicije predmetnog pronalaska se mogu koristiti za smanjenje ili eliminisanje upale povezane sa aktivacijom komplementa.

Sterilna inflamacija

[0067] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu se upotrebiti za lečenje, prevenciju ili odlaganje razvoja sterilne inflamacije. Sterilna inflamacija je upala koje se javlja kao odgovor na druge stimuluse osim infekcije. Sterilna inflamacija može da bude uobičajen odgovor na stres kao što je genomski stres, hipoksični stres, stres hranljivih materija ili stres endoplazmatskog retikuluma uzrokovan fizičkim, hemijskim ili metaboličkim štetnim stimulancima. Sterilna inflamacija može da doprinese patogenezi mnogih bolesti kao što su, ali ne ograničavajući se na, povrede izazvane ishemijom, reumatoidni artritis, akutne povrede pluća, povrede jetre izazvane lekovima, inflamatorne bolesti creva i/ili druge bolesti, poremećaji ili stanja. Mehanizam sterilne inflamacije i metode i kompozicije za lečenje, prevenciju i/ili odlaganje simptoma sterilne inflamacije mogu uključiti bilo koji od onih koje su poučavali Rubartelli et al. u Frontiers in Immunology, 2013, 4:398-99, Rock et al. u Annu Rev Immunol.2010, 28:321-342 ili u US Patentu br.8,101,586.

Sistemski inflamatorni odgovor (SIRS) i sepsa

[0068] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se koriste za lečenje i/ili prevenciju sindroma sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS). SIRS je upala koja pogađa celo telo. Kada je SIRS uzrokovan infekcijom, oyna;en je kao sepsa. SIRS takođe može biti uzrokovan neinfektivnim događajima kao što su traume, povrede, opekotine, ishemija, krvarenje i/ili druga stanja. Među negativnim ishodima povezanim sa SIRS-om i/ili sepsom je zatajenje više organa (MOF). Inhibicija komplementa na nivou C3 kod Gram-

2

negativne sepse značajno štiti organe od progresivnog MOF izazvanog E. coli, ali takođe otežava klirens bakterija. Inhibitori C5 komplementa se mogu administrirati subjektima sa sepsom kako bi se obezbedile prednosti zaštite organa bez štetnog menjanja klirensa bakterija.

[0069] U nekim realizacijama, predmetno otkriće obezbeđuje metode lečenja sepse. Sepsa može biti izazvana mikrobnom infekcijom. Mikrobna infekcija može uključivati najmanje jedan Gram-negativni infektivni agens. Kao što se ovde koristi, izraz "infektivni agens" se odnosi na bilo koji entitet koji napada ili na drugi način inficira ćeliju, tkivo, organ, odeljak ili tečnost uzorka ili subjekta. U nekim slučajevima, infektivni agensi mogu biti bakterije, virusi ili drugi patogeni. Gram negativni infektivni agensi su Gram-negativne bakterije. Gram-negativni infektivni agensi mogu da obuhvate, ali nisu ograničeni na E. coli.

[0070] Postupci lečenja sepse mogu uključiti primenu farmaceutske kompozicije pronalaska. Prema nekim metodama, aktivacija komplementa može biti smanjena ili sprečena. Smanjenje ili prevencija aktivnosti komplementa može se odrediti detekcijom jednog ili više proizvoda aktivnosti komplementa u uzorku subjekta. Takvi proizvodi mogu da uključe proizvode cepanja C5 (npr. C5a i C5b) ili nizvodne komplekse formirane kao rezultat cepanja C5 (npr. C5b-9). U nekim realizacijama, nivoi C5a i/ili C5b-9 su smanjeni ili eliminisani kod subjekta i/ili u najmanje jednom uzorku dobijenom od subjekta. Na primer, nivoi C5a i/ili C5b-9 mogu biti sniženi kod subjekata kojima je dat R5000 (ili u uzorcima dobijenim od takvih subjekata) za od oko 0% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0,1% do oko 5%, od oko 0,5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima (ili uzorcima ispitanika) koji nisu lečeni sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili prilikom poređenja sa istim subjektom (ili uzorcima ispitanika) tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

[0071] U nekim realizacijama, nivoi C5b-9 sniženi tretmanom R5000 su nivoi C5b-9 povezani sa jednim ili više klasičnih puteva aktivacije komplementa, alternativnim putem aktivacije komplementa i lektinskim putem aktivacije komplementa.

[0072] U nekim realizacijama, prisustvo, odsustvo i/ili nivoi jednog ili više faktora povezanih sa sepsom mogu se modulisati administracijom R5000 subjektu sa

24

sepsom. Prisustvo ili odsustvo takvih faktora može da se utvrdi korišćenjem testova za njihovu detekciju. Promene u nivoima faktora mogu se odrediti određivanjem nivoa takvih faktora kod subjekta sa sepsom nakon tretmana sa R5000 i poređenjem tih nivoa sa ranijim nivoima kod istog subjekta (bilo pre tretmana sa R5000 ili tokom jednog ili više ranijih perioda lečenja) ili nivoi kod subjekata koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte sa sepsom koji ne primaju terapiju ili subjekte koji primaju neki drugi oblik lečenja). Poređenja se mogu predstaviti procentualnim razlikama u nivoima faktora između subjekata koji su tretirani sa R5000 i subjekata koji nisu tretirani sa R5000.

[0073] Proizvod C5 cepanja može da uključi bilo koje proteine ili komplekse koji mogu nastati usled cepanja C5. U nekim slučajevima, proizvodi cepanja C5 mogu da obuhvate, ali nisu ograničeni na, C5a i C5b. Proizvod cepanja C5b može dalje da formira kompleks sa proteinima komplementa C6, C7, C8 i C9 (koji se ovde pominju kao "C5b-9"). Shodno tome, proizvodi cepanja C5 koji uključuju C5b-9 mogu se detektovati i/ili kvantifikovati da bi se utvrdilo da li je aktivnost komplementa smanjena ili sprečena. Detekcija taloženja C5b-9 može da bude izvedena, na primer, upotrebom kompleta WIESLAB<®>ELISA (Euro Diagnostica, Malme, Sweden), Švedska). Kvantifikacija proizvoda cepanja može da se meriti u „komplementarnim proizvoljnim jedinicama“ (CAU) kako su drugi opisali (npr. videti Bergseth G et al., 2013. Mol Immunol.56:232-9).

[0074] U nekim realizacijama, tretiranje sepse inhibitorom C5 (npr. R5000) može da smanji ili spreči proizvodnju C5b-9.

[0075] Prema predmetnom pronalasku, adminisstracija R5000 subjektu može da dovede do modulacije klirensa bakterija kod subjekta i/ili u najmanje jednom uzorku dobijenom od subjekta. Bakterijski klirens, kako je ovde navedeno, je delimično ili potpuno uklanjanje/smanjenje bakterija iz subjekta ili uzorka. Klirens se može sprovesti ubijanjem ili na drugi način onemogućavanjem bakterija za rast i/ili reprodukciju. U nekim slučajevima, bakterijski klirens se može sprovesti kroz bakterijsku lizu i/ili imunološku destrukciju (npr. fagocitozom, lizom bakterijskih ćelija, opsonizacijom, itd.). Prema nekim metodama, bakterijski klirens kod subjekata tretiranih sa R5000 može da nema efekta ili da ima blagotvoran efekat na bakterijski klirens. Ovo se može desiti zbog odsustva ili smanjenog efekta na nivoe C3b sa inhibicijom C5. U nekim realizacijama, metode lečenja sepse sa R5000 mogu da izbegnu interferenciju opsonizacije zavisne od C3b ili da poboljšaju opsonizaciju zavisnu od C3b.

2

[0076] U nekim slučajevima, bakterijski klirens sa tretmanom sa R5000 može da bude poboljšan u poređenju sa klirensom bakterija kod nelečenog subjekta ili kod subjekta koji je lečen drugim oblikom inhibitora komplementa, na primer, inhibitorom C3. U nekim realizacijama, subjekti sa sepsom koji su tretirani sa R5000 mogu da dožive 0% do najmanje 100% poboljšani bakterisjki klirens u poređenju sa bakterijskim klirensom kod subjekata koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su treatirani drugim inhibitorima komplementa) ili kada se porede sa ranijim bakterijskim klirensom nivoi kod istog subjekta pre tretmana sa R5000 ili tokom ranijeg perioda treatiranja sa R5000. Na primer, klirens bakterija kod subjekata tretiranih sa R5000 i/ili u najmanje jednom uzorku dobijenom od ovih subjekata može da bude poboljšan za od oko 0% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2 %, od oko 0,1% do oko 5%, od oko 0,5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20 % do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) i/ili kada se uporede sa uzorcima dobijenim od takvih subjekte ili kada se uporede sa istim subjektom tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja i/ili kada se uporede sa uzorcima dobijenim od istog subjekta tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

[0077] Bakterijski klirens se može meriti kod subjekta direktnim merenjem nivoa bakterija u subjektu i/ili uzorku subjekta ili merenjem jednog ili više indikatora bakterijskog klirensa (npr. nivoi bakterijskih komponenti oslobođenih posle bakterijske lize). Nivoi bakterijskog klirensa se zatim mogu odrediti upoređivanjem sa prethodnim merenjem nivoa bakterija/indikatora ili sa nivoima bakterija/indikatora kod subjekta koji ne prima nikakav tretman ili drugi tretman. U nekim slučajevima, jedinice koje formiraju kolonije (cfu) iz prikupljene krvi (npr. za stvaranje cfu/ml krvi) se ispituju da bi se odredili nivoi bakterija.

[0078] U nekim realizacijama, tretman sepse sa R5000 se može izvesti bez efekta na fagocitozu ili bez značajnog oštećenja fagocitoze. Ovo može da uključi fagocitozu zavisnu od neutrofila i/ili fagocitozu zavisnu od monocita. Neoštećena ili suštinski neoštećena fagocitoza tretmanom sa R5000 može da bude posledica ograničenih ili nepostojećih promena nivoa C3b tretmanom sa R5000.

[0079] Oksidativni udar je proces zavisan od C5a, koji se karakteriše proizvodnjom peroksida od strane određenih ćelija, posebno makrofaga i

2

neutrofila, nakon izazivanja patogena (videti Mollnes T. E. et al., 2002. Blood 100, 1869-1877).

[0080] U nekim realizacijama, oksidativni prasak može biti smanjen ili sprečen kod subjekata sa sepsom nakon tretmana sa R5000. Ovo se može desiti usled smanjenja nivoa C5a sa inhibicijom C5 zavisne od R5000. Oksidativni prasak može da bude smanjen kod subjekata kojima je administriran R5000 sa od oko 0% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0.1% do oko 5%, od oko 0.5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili kada se uporede sa istim subjektom tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

[0081] Lipopolisaharid (LPS) je komponenta omotača bakterijskih ćelija koja je poznati imuni stimulator. Bakterioliza zavisna od komplementa može da dovede do oslobađanja LPS-a, doprinoseći inflamatornim odgovorima, poput onih karakterističnih za sepsu. U nekim realizacijama, tretiranje sepse sa R5000 može da smanji nivoe LPS. Ovo može da bude posledica smanjenja bakteriolize posredovane komplementom uz inhibiciju C5-zavisne aktivnosti komplementa. U nekim realizacijama, nivoi LPS mogu da budu smanjeni ili eliminisani kod subjekata kojima je administriran R5000 (ili u uzorcima dobijenim od takvih subjekata) za od oko 0% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0.1% do oko 5%, od oko 0.5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima (ili uzorcima ispitanika) koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili u poređenju sa istim subjektom (ili uzorcima ispitanika) tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

[0082] U nekim realizacijama, nivoi LPS mogu da budu smanjeni za 100% kod subjekata (ili uzoraka ispitanika) sa sepsom koji su tretirani sa R5000 u poređenju sa subjektima (ili uzorcima ispitanika) sa sepsom koji nisu lečeni sa R5000 (uključujući subjekte koji primaju jedan ili više drugih oblika lečenja) ili kada se uporede sa istim subjektom (ili uzorkom subjekta) tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

2

[0083] U nekim realizacijama predmetnog otkrića, nivoi jednog ili više citokina izazvani sepsom mogu biti smanjeni tretmanom sa R5000. Citokini uključuju brojne ćelijske signalne molekule koji stimulišu imuni odgovor na infekciju. „Citokinska oluja“ je dramatično povećanje regulacije najmanje četiri citokina, interleukina (IL)-6, IL-8, monocitnog hemotaksnog proteina-1 (MCP-1) i faktora nekroze tumora alfa (TNFα), koji može biti rezultat bakterijske infekcije i doprinose sepsi. Poznato je da C5a indukuje sintezu i aktivnost ovih citokina. Inhibitori C5, stoga, mogu da smanje nivoe citokina smanjenjem nivoa C5a. Nivoi citokina se mogu proceniti kod subjekata ili uzoraka ispitanika da bi se procenila sposobnost inhibitora C5 da smanje nivoe jednog ili više inflamatornih citokina koji su povećani tokom sepse. Nivoi IL-6, IL-8, MCP-1 i/ili TNFα mogu da budu sniženi kod subjekata kojima je administriran R5000 od oko 0% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0.1% do oko 5%, od oko 0.5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili kada se uporede sa istim subjektom tokom perioda pre- tretiranja ili ranijeg perioda lečenja. U nekim realizacijama, nivoi IL-6, IL-8, MCP-1 i/ili TNFα mogu da budu sniženi za 100% kod subjekata sa sepsom koji se tretiraju sa R5000 u poređenju sa subjektima sa sepsom koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji primaju jedan ili više drugih oblika lečenja) ili kada se uporede sa istim subjektom tokom perioda pre tretiranja ili ranijeg perioda lečenja.

[0084] Jedna komplikacija povezana sa sepsom je disregulacija puteva koagulacije i/ili fibrinolize (Levi M., et al., 2013. Seminars in thrombosis and hemostasis 39, 559-66; Rittirsch D., et al., 2008. Nature Reviews Immunology 8, 776-87; i Dempfle C., 2004. A Thromb Haemost. 91(2):213-24). Dok je kontrolisana lokalna aktivacija ovih puteva važna za odbranu od patogena, sistemska, nekontrolisana aktivacija može da bude štetna. Aktivnost komplementa povezana sa bakterijskom infekcijom može da podstakne disregulaciju koagulacije i/ili fibrinolize usled povećanog oštećenja ćelija domaćina i tkiva povezanog sa formiranjem MAC-a. U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može da normalizuje puteve koagulacije i/ili fibrinolize.

[0085] Disregulacija koagulacije i/ili fibrinolize povezana sa sepsom može da obuhvati diseminovanu intravaskularnu koagulaciju (DIC). DIC je stanje koje

2

dovodi do oštećenja tkiva i organa usled aktivacije koagulacije i stvaranja krvnih ugrušaka u malim krvnim sudovima. Ova aktivnost smanjuje dotok krvi u tkiva i organe i troši krvne faktore neophodne za koagulaciju u ostatku tela. Odsustvo ovih faktora krvi u krvotoku može dovesti do nekontrolisanog krvarenja u drugim delovima tela. U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može da smanji ili eliminiše DIC.

[0086] Disfunkcija koagulacije povezana sa sepsom može se otkriti merenjem aktiviranog parcijalnog tromboplastinskog vremena (APTT) i/ili protrombinskog vremena (PT). Ovo su testovi koji se vrše na uzorcima plazme da bi se utvrdilo da li su nivoi faktora koagulacije niski. Kod ispitanika sa DIC, produžena su APTT i/ili PT zbog sniženih nivoa faktora koagulacije. U nekim realizacijama, tretman sepse sa R5000 kod subjekta može da smanji i/ili normalizuje APTT i/ili PT u uzorcima dobijenim od lečenih subjekata.

[0087] Disfunkcija koagulacije povezana sa sepsom može dalje da se proceni analizom nivoa kompleksa trombin-antitrombin (TAT) i/ili ekspresije leukocita mRNK tkivnog faktora (TF). Povišeni nivoi TAT kompleksa i leukocitna ekspresija TF mRNK su povezani sa disfunkcijom koagulacije i u skladu su sa DIC. U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može da dovede do sniženja nivoa TAT i/ili nivoa leukocitnog TF mRNK od oko 0,005% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2 %, od oko 0,1% do oko 5%, od oko 0,5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20 % do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili kada se uporede sa istim subjektom tokom perioda pre lečenja ili ranijeg perioda lečenja. U nekim realizacijama, nivoi TAT i/ili nivoi leukocitnog TF mRNK mogu da budu smanjeni za 100% kod subjekata sa sepsom koji su tretirani sa R5000 u poređenju sa subjektima sa sepsom koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji primaju jedan ili više drugih oblika tretman) ili kada se uporedi sa istim subjektom tokom perioda pre lečenja ili ranijeg perioda lečenja.

[0088] Faktor XII je faktor važan za normalnu koagulaciju u plazmi. Nivoi faktora XII mogu da budu sniženi u uzorcima plazme uzetim od subjekata sa disfunkcijom koagulacije (npr. DIC) zbog utroška faktora XII povezanog sa koagulacijom u malim krvnim sudovima. U nekim realizacijama, tretman sepse sa R5000 može da smanji potrošnju Faktora XII. Shodno tome, nivoi faktora XII mogu biti da budu

2

povišeni u uzorcima plazme uzetim od subjekata sa sepsom nakon tretmana sa R5000. Nivoi faktora XII mogu da budu povećani u uzorcima plazme za od oko 0,005% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0,1% do oko 5%, od oko 0,5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15%, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa subjektima koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili kada se uporede sa uzorcima plazme uzetim od istog subjekta tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja. U nekim realizacijama, nivoi faktora XII mogu da budu povećani za 100% u uzorcima plazme od subjekata sa sepsom koji su tretirani sa R5000 u poređenju sa uzorcima plazme od subjekata sa sepsom koji nisu tretirani sa R5000 (uključujući subjekte koji primaju jedan ili više drugih oblika tretmana) ili u poređenju sa uzorcima plazme uzetim od istog subjekta tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja.

[0089] Fibrinoliza je razlaganje fibrina usled enzimske aktivnosti, što je proces kritičan za formiranje ugruška. Disregulacija fibrinolize može se javiti u teškoj sepsi i prijavljeno je da utiče na normalno zgrušavanje kod pavijana obolelih od E. coli (P. de Boer J.P., et al., 1993. Circulatory shock. 39, 59-67). Disfunkcije fibrinolize zavisne od sepse Indikatori u plazmi (uključujući, ali ne ograničavajući se na disfunkciju fibrinolize povezanu sa DIC) mogu da obuhvate, ali nisu ograničene na snižene nivoe fibrinogena (što ukazuje na smanjenu sposobnost formiranja fibrinskih ugrušaka), povišeni nivoi aktivatora tkivnog plazminogena (tPA), povipeni nivoi inhibitora aktivatora plazminogena tipa 1 (PAI-1), povišeni nivoi plazmin-antiplazmina (PAP), povećani proizvodi razgradnje fibrinogena/fibrina i povećani nivoi D-dimera. U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može da dovede do smanjenja nivoa fibrinogena u plazmi i/ili povećanja nivoa tPA, PAI-1, PAP, fibrinogena/proizvoda razgradnje fibrina i/ili D-dimera od oko 0,005% do oko 0,05%, od oko 0,01% do oko 1%, od oko 0,05% do oko 2%, od oko 0,1% do oko 5%, od oko 0,5% do oko 10%, od oko 1% do oko 15 %, od oko 5% do oko 25%, od oko 10% do oko 50%, od oko 20% do oko 60%, od oko 25% do oko 75%, od oko 50% do oko 100% u poređenju sa nivoima u uzorcima plazme od subjekata koji nisu tretriani sa R5000 (uključujući subjekte koji su lečeni drugim inhibitorima komplementa) ili u poređenju sa nivoima u uzorcima plazme uzetim od istog subjekta tokom perioda pre tretmana ili ranijeg perioda lečenja. U nekim realizacijama, smanjenje nivoa fibrinogena u plazmi povezano sa sepsom i/ili povećanje nivoa tPA, PAI-1, PAP, fibrinogena/proizvoda razgradnje fibrina i/ili D-dimera povezano sa sepsom može da se razlikuje za najmanje 10,000% u poređenju sa nivoima u uzorcima plazme kod subjekata sa sepsom koji su tretirani sa R5000.

[0090] Još jedna posledica prekomerne aktivnosti komplementa povezane sa sepsom je smanjenje crvenih krvnih zrnaca usled hemolize zavisne od komplementa i/ili opsonizacije zavisne od C3b. Metode tretiranja sepse sa R5000 prema ovom pronalasku mogu da obuhvate smanjenje hemolize zavisne od komplementa. Jedna metoda procene hemolize zavisne od komplementa povezane sa sepsom uključuje dobijanje kompletne krvne slike. Celokupan broj krvnih zrnaca se može dobiti putem automatizovanih procesa koji broje tipove ćelija prisutnih u uzorcima krvi. Rezultati kompletne analize krvnih zrnaca obično uključuju nivoe hematokrita, broj crvenih krvnih zrnaca (RBC), broj belih krvnih zrnaca (WBC) i trombocita. Nivoi hematokrita se koriste za određivanje procenta krvi (po zapremini) koja se sastoji od crvenih krvnih zrnaca. Nivoi hematokrita, nivoi trombocita, nivoi eritrocita RBC i nivoi belih krvnih zrnaca WBC mogu se smanjiti u sepsi zbog hemolize. U nekim realizacijama, tretiranje sepse sa R5000 povećava nivoe hematokrita, nivoe trombocita, nivoe RBC i/ili nivoe belih krvnih zrnaca WBC. Povećanja mogu biti trenutna ili se mogu javiti tokom vremena tokom lečenja (npr. tretmani sa jednom ili više doza).

[0091] U nekim realizacijama, tretman subjekta sa R5000 može da smanji aktivaciju leukocita (npr. neutrofila i makrofaga) povezanu sa sepsom. "Aktivacija", kako se ovde koristi u kontekstu leukocita, odnosi se na mobilizaciju i/ili sazrevanje ovih ćelija za obavljanje povezanih imunoloških funkcija. Smanjena aktivacija leukocita tretmanom sa R5000 može se odrediti procenom subjekta koji se leči ili uzorka dobijenog od subjekta koji se leči.

[0092] U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može poboljšati jedan ili više vitalnih znakova kod subjekata koji se tretiraju. Takvi vitalni znaci mogu da uključe, ali nisu ograničeni na, otkucaje srca, srednji sistemski arterijski pritisak (MSAP), brzinu disanja, zasićenost kiseonikom i telesnu temperaturu.

[0093] U nekim realizacijama, lečenje sepse sa R5000 može stabilizovati ili smanjiti kapilarno curenje i/ili disfunkciju endotelne barijere povezanu sa sepsom (tj., da održi ili poboljša kapilarno curenje i/ili disfunkciju endotelne barijere). Stabilizacija ili smanjenje kapilarnog curenja i/ili disfunkcije endotelne barijere

1

može se utvrditi merenjem nivoa ukupnih proteina u plazmi i/ili nivoa albumina u plazmi. Povećanje bilo kog nivoa u poređenju sa nivoima u plazmi povezano sa sepsom može da ukaže na smanjeno kapilarno curenje. Shodno tome, lečenje sepse sa R5000 može povećati nivoe ukupnog proteina u plazmi i/ili albumina u plazmi.

[0094] Metode ovog otkrića mogu uključiti metode lečenja sepse, pri čemu su nivoi jednog ili više proteina akutne faze sniženii. Proteini akutne faze su proteini koje proizvodi jetra pod inflamatornim stanjem. Tretman sa R5000 može da smanji upalu povezanu sa sepsom i dovede do smanjene proizvodnje proteina akutne faze u jetri.

[0095] Prema nekim metodama pronalaska, oštećenje organa izazvano sepsom i/ili disfunkcija organa mogu se smanjiti, poništiti ili sprečiti tretmanom sa R5000. Indikatori koji mogu da budu smanjeni sa poboljšanom funkcijom organa mogu da uključe, ali nisu ograničeni na laktat u plazmi (pokazujući poboljšanu vaskularnu perfuziju i klirens), kreatinin, azot uree u krvi (oba ukazuju na poboljšanu funkciju bubrega) i transaminaze jetre (što ukazuje na poboljšanu funkciju jetre) . U nekim realizacijama, febrilni odgovor, rizik od sekundarne infekcije i/ili rizik od ponovnog javljanja sepse je smanjen kod subjekata lečenih od sepse sa R5000.

[0096] Metode ovog otkrića mogu uključiti sprečavanje smrti povezane sa sepsom i/ili poboljšanje vremena preživljavanja subjekata obolelih od sepse tretmanom sa R5000. Poboljšano vreme preživljavanja može se odrediti upoređivanjem vremena preživljavanja kod subjekata koji su lečeni R5000 sa vremenom preživljavanja kod netretiranih subjekata (uključujući subjekte koji su lečeni jednim ili više drugih oblika lečenja). U nekim realizacijama, vreme preživljavanja se povećava za najmanje 1 dan, najmanje 2 dana, najmanje 3 dana, najmanje 4 dana, najmanje 5 dana, najmanje 6 dana, najmanje 7 dana, najmanje 2 nedelje, najmanje 1 mesec, najmanje 2 meseca, najmanje 4 meseca, najmanje 6 meseci, najmanje 1 godine, najmanje 2 godine, najmanje 5 godina ili najmanje 10 godina.

[0097] U nekim realizacijama, administracija R5000 se sprovodi u jednoj dozi. U nekim realizacijama, administracija R5000 se sprovodi u više doza. Na primer, primena R5000 može uključivati davanje početne doze, nakon čega sledi jedna ili više ponovljenih doza. Ponovljene doze se mogu davati od oko 1 sat do oko 24

2

sata, od oko 2 sata do oko 48 sati, od oko 4 sata do oko 72 sata, od oko 8 sati do oko 96 sati, od oko 12 sati do oko 36 sati, ili od oko 18 sati do oko 60 sati nakon prethodne doze. U nekim slučajevima, ponovljene doze se mogu davati 1 dan, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 2 nedelje, 4 nedelje, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci ili više od 6 meseci nakon prethodne doze. U nekim slučajevima, ponovljene doze se mogu primeniti po potrebi da se stabilizuje ili umanji sepsa ili da se stabilizuje ili smanji jedan ili više efekata povezanih sa sepsom kod subjekta. Ponovljene doze mogu uključivati istu količinu od R5000 ili mogu uključivati drugu količinu.

[0098] Kompozicije pronalaska se mogu koristiti za kontrolu i/ili balansiranje aktivacije komplementa za prevenciju i lečenje SIRS, sepse i/ili MOF. Metode primene inhibitora komplementa za lečenje SIRS-a i sepse mogu uključiti one u US objavi br. US2013/0053302 ili u patentu Sjedinjenih Država br. 8,329,169.

Akutni respiratorni distres sindrom (ARDS)

[0099] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje i/ili prevenciju razvoja akutnog respiratornog distres sindroma (ARDS). ARDS je široko rasprostranjena upala pluća i može biti uzrokovana traumom, infekcijom (npr. sepsa), teškom upalom pluća i/ili udisanjem štetnih supstanci. ARDS je tipično teška komplikacija opasna po život. Studije sugerišu da neutrofili mogu doprineti razvoju ARDS-a utičući na akumulaciju polimorfonuklearnih ćelija u povređenim plućnim alveolama i intersticijskom tkivu pluća. Shodno tome, kompozicije prema pronalasku se mogu primeniti da bi se smanjila i/ili sprečila proizvodnja tkivnog faktora u alveolarnim neutrofilima. Kompozicije pronalaska se dalje mogu koristiti za lečenje, prevenciju i/ili odlaganje ARDS-a, u nekim slučajevima u skladu sa bilo kojim od metoda opisanih u međunarodnoj publikaciji br. WO2009/014633.

Parodontitis

[0100] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje ili prevenciju razvoja parodontitisa i/ili povezanih stanja. Parodontitis je široko rasprostranjena, hronična upala koja dovodi do razaranja parodontalnog tkiva koje je tkivo koje podržava i okružuje zube. Stanje takođe uključuje gubitak alveolarne kosti (kosti koja drži zube). Parodontitis može biti uzrokovan nedostatkom oralne higijene što dovodi do nakupljanja bakterija na liniji desni, poznatog i kao zubni plak. Određena zdravstvena stanja kao što su dijabetes ili neuhranjenost i/ili navike kao što je pušenje mogu povećati rizik od parodontitisa. Parodontitis može da poveća rizik od moždanog udara, infarkta miokarda, ateroskleroze, dijabetesa, osteoporoze, prevremenih porođaja, kao i drugih zdravstvenih problema. Studije pokazuju korelaciju između parodontitisa i lokalne aktivnosti komplementa. Parodontalne bakterije mogu ili da inhibiraju ili aktiviraju određene komponente kaskade komplementa. Shodno tome, kompozicije pronalaska se mogu koristiti za prevenciju i/ili lečenje parodontitisa i povezanih bolesti i stanja. Metode lečenja mogu da uključe bilo koju od onih koje je Hajishengallis pbjavio u Biochem Pharmacol.2010, 15; 80(12): 1 i Lambris ili u US publikaciji br. US2013/0344082.

Dermatomiozitis

[0101] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije se mogu upotrebiti za lečenje dermatomiozitisa. Dermatomiozitis je inflamatorna miopatija koju karakteriše slabost mišića i hronična upala mišića. Dermatomiozitis često počinje osipom na koži koji je istovremeno povezan ili prethodi slabosti mišića. Kompozicije pronalaska se mogu upotrebiti za smanjenje ili prevenciju dermatomiozitisa.

Rane i povrede

[0102] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje i/ili pospe[ivanje zarastanja različitih tipova rana i/ili povreda. Kao što se ovde koristi, izraz "povreda" se obično odnosi na fizičku traumu, ali može da uključi lokalizovanu infekciju ili procese bolesti. Povrede mogu da budu okarakterisane povredom, oštećenjem ili razaranjem izazvanim spoljašnjim događajima koji utiču na delove tela i/ili organe. Rane su povezane sa posekotinama, udarcima, opekotinama i/ili drugim udarima na kožu, ostavljajući kožu raspuklom ili oštećenom. Rane i povrede su često akutne, ali ako se ne zaleče kako treba, mogu dovesti do hroničnih komplikacija i/ili upale.

Rane i rane od opekotina

[0103] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu upotrebiti za lečenje i/ili za pospešivanje zarastanja rana. Zdrava koža pruža vodootpornu, zaštitnu barijeru od patogena i drugih uticaja životne sredine. Koža takođe kontroliše telesnu temperaturu i isparavanje tečnosti. Kada je koža oštećena, ove funkcije su poremećene, što otežava zarastanje kože. Ranjavanje pokreće skup fizioloških procesa vezanih za imuni sistem koji obnavljaju i

4

regenerišu tkivo. Aktivacija komplementa je jedan od ovih procesa. Studije aktivacije komplementa su identifikovale nekoliko komponenti komplementa koje su uključene u zarastanje rana, kako su objavili van de van de Goot et al. in J Burn Care Res 2009, 30:274-280 i Cazander et al. Clin Dev Immunol, 2012, 2012:534291. U nekim slučajevima, aktivacija komplementa može da bude prekomerna, uzrokujući ćelijsku smrt i pojačanu upalu (što dovodi do otežanog zarastanja rana i hroničnih rana). U nekim slučajevima, kompozicije predmetnog pronalaska se mogu upotrebiti za smanjenje ili eliminisanje takve aktivacije komplementa da bi se promovisalo zarastanje rana. Tretman sa kompozicijama pronalaska može da bude izvedeno prema bilo kom od metoda za lečenje rana otkrivenih u Međunarodnoj publikaciji broj WO2012/174055.

Povreda glave

[0104] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu upotrebiti za lečenje i/ili pospešivanje zarastanja traume glave. Traume glave uključuju povrede vlasišta, lobanje ili mozga. Primeri traume glave uključuju, ali nisu ograničeni na potrese mozga, kontuzije, frakture lobanje, traumatske povrede mozga i/ili druge povrede. Traume glave mogu biti manje ili teške. U nekim slučajevima, trauma glave može dovesti do dugotrajnih fizičkih i/ili mentalnih komplikacija ili smrti. Studije pokazuju da traume glave mogu izazvati nepravilnu intrakranijalnu aktivaciju kaskade komplementa, što može da dovede do lokalnih inflamatornih odgovora koji doprinose sekundarnom oštećenju mozga razvojem edema mozga i/ili neuronske smrti (Stahel et al. Brain Research Reviews, 1998, 27: 243 -56). Kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje traume glave i/ili za smanjenje ili prevenciju povezanih sekundarnih komplikacija. Metode upotrebe kompozicija pronalaska za kontrolu aktivacije kaskade komplementa kod traume glave mogu uključiti bilo koji od onih koje su podučavali Holers et al. u US patentu br.8,911,733.

Povreda od nagnječenja

[0105] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje i/ili pospešivanje zarastanja povreda pri nagnječenju. Povrede od prignječenja su povrede izazvane silom ili pritiskom na telo koje izazivaju krvarenje, modrice, prelome, povrede nerava, rane i/ili druga oštećenja tela. Kompozicije pronalaska mogu da se koriste za smanjenje aktivacije komplementa posle povreda od prignječenja, čime se promoviše zarastanje nakon povreda od gnječenja (npr. promovisanjem regeneracije nerva, promovisanjem zarastanja preloma, sprečavanjem ili lečenjem upale i/ili drugih srodnih komplikacija). Kompozicije pronalaska mogu da se koriste za podsticanje zarastanja prema bilo kom od metoda opisanih u US patentu br. 8,703,136; Međunarodnim publikacijama br. WO2012/162215; WO2012/174055 ili US publikacijama br. US2006/0270590.

Ishemija/reperfuzijska povreda

[0106] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije ovog otkrića mogu se koristiti za lečenje povreda povezanih sa ishemijom i/ili reperfuzijom. Takve povrede mogu biti povezane sa hirurškom intervencijom (npr. transplantacijom). Shodno tome, kompozicije prema ovom pronalasku mogu se koristiti za smanjenje ili prevenciju ishemije i/ili reperfuzionih povreda.

Autoimuna bolest

[0107] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu se koristiti za lečenje subjekata sa autoimunim bolestima i/ili poremećajima. Imuni sistem može da se podeli na urođeni i adaptivni sistem, koji se odnosi na nespecifične neposredne mehanizme odbrane i složenije antigen-specifične sisteme, respektivno. Sistem komplementa je deo urođenog imunog sistema, koji prepoznaje i eliminiše patogene. Pored toga, proteini komplementa mogu modulirati adaptivni imunitet, povezujući urođene i adaptivne odgovore. Autoimune bolesti i poremećaji su imunološke abnormalnosti koje uzrokuju da sistem cilja na vlastita tkiva i supstance. Autoimuna bolest može da zahvati određena tkiva ili organe tela. Kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za modulaciju komplementa u lečenju i/ili prevenciji autoimunih bolesti. U nekim slučajevima, takve kompozicije mogu da se upotrebe prema metodama predstavljenim u Ballanti et al. Immunol Res (2013) 56:477-491.

Antifosfolipidni sindrom (APS) i katastrofalni antifosfolipidni sindrom (CAPS)

[0108] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje antifosfolipidnog sindroma (APS) kontrolom aktivacije komplementa. APS je autoimuno stanje uzrokovano antifosfolipidnim antitelima koja uzrokuju zgrušavanje krvi. APS može da dovede do rekurentne venske ili arterijske tromboze u organima i komplikacija u placentnoj cirkulaciji koje izazivaju komplikacije vezane za trudnoću kao što su pobačaj, mrtvorođenje, preeklampsija, prevremeni porođaj i/ili druge komplikacije. Katastrofalni antifosfolipidni sindrom (CAPS) je ekstremna i akutna verzija sličnog stanja koje dovodi do okluzije vena u nekoliko organa istovremeno. Studije sugerišu da aktivacija komplementa može da doprinese komplikacijama vezanim za APS, uključujući komplikacije vezane za trudnoću, trombotičke (zgrušavanje) komplikacije i vaskularne komplikacije. Kompozicije pronalaska se mogu upotrebiti za lečenje stanja povezanih sa APS smanjenjem ili eliminacijom aktivacije komplementa. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje APS i/ili komplikacija povezanih sa APS prema metodama koje su poučavali Salmon et al. Ann Rheum Dis 2002;61(Suppl II):ii46-ii50 i Mackworth-Young in Clin Exp Immunol 2004, 136:393-401.

Bolest hladnih aglutinina

[0109] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje bolesti hladnih aglutinina (CAD), koja se takođe naziva hemolizom posredovanom hladnim aglutininima. CAD je autoimuna bolest koja je rezultat visoke koncentracije IgM antitela u interakciji sa crvenim krvnim zrncima na niskim telesnim temperaturama [Engelhardt et al. Blood, 2002, 100(5):1922-23]. CAD može da dovede do stanja kao što su anemija, umor, dispneja, hemoglobinurija i/ili akrocijanoza. CAD je povezan sa snažnom aktivacijom komplementa i studije su pokazale da CAD možem da se leči terapijama inhibitorima komplementa. Shodno tome, predmetni pronalazak obezbeđuje metode lečenja CAD korišćenjem kompozicija pronalaska. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje CAD prema metodama koje su Roth et al. u Blood, 2009, 113:3885-86 ili u međunarodnoj publikaciji br. WO2012/139081.

Mijastenija gravis

[0110] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje mijastenije gravis. Miastenija gravis je neuromišićno oboljenje uzrokovano autoimunošću. Kompozicije pronalaska mogu da se uptorebe za smanjenje ili prevenciju neuromišićnih problema povezanih sa miastenijom gravis.

Gilen - Bareov sindrom

[0111] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje Gilen-Bareovog sindroma (GBS). GBS je autoimuna bolest koja uključuje autoimuni napad perifernog nervnog sistema. Kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za smanjenje ili prevenciju perifernih nervnih problema povezanih sa GBS.

Vaskularne indikacije

[0112] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje vaskularnih indikacija koje utiču na krvne sudove (npr. arterije, vene i kapilare). Takve indikacije mogu uticati na cirkulaciju krvi, krvni pritisak, protok krvi, funkciju organa i/ili druge telesne funkcije.

Trombotička mikroangiopatija (TMA) [0113] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje i/ili prevenciju trombotičke mikroangiopatije (TMA) i povezanih bolesti. Mikroangiopatije utiču na male krvne sudove (kapilare) tela, što dovodi do toga da zidovi kapilara postaju debeli, slabi i skloni krvarenju i usporavaju cirkulaciju krvi. TMA imaju tendenciju da dovedu do razvoja vaskularnih trombova, oštećenja endotelnih ćelija, trombocitopenije i hemolize. Ovim mogu da budu pogođeni organi kao što su mozak, bubrezi, mišići, gastrointestinalni sistem, koža i pluća. TMA mogu nastati iz medicinskih operacija i/ili stanja koja uključuju, ali nisu ograničena na, transplantaciju hematopoetskih matičnih ćelija (HSCT), poremećaje bubrega, dijabetes i/ili druga stanja. TMA mogu da budu uzrokovane osnovnom disfunkcijom sistema komplementa, kao što su opisali Meri et al. u European Journal of Internal Medicine, 2013, 24: 496-502. Generalno, TMA mogu nastati kao rezultat povećanih nivoa određenih komponenti komplementa koji dovode do tromboze. U nekim slučajevima, ovo može da bude uzrokovano mutacijama u proteinima komplementa ili srodnim enzimima. Nastala disfunkcija komplementa može da dovede do ciljanja komplementa na endotelne ćelije i trombocite što dovodi do povećane tromboze. U nekim realizacijama, TMA se mogu sprečiti i/ili lečiti kompozicijama pronalaska. U nekim slučajevima, metode lečenja TMA sa kompozicijama pronalaska mogu da se izvedu u skladu sa onima opisanim u US publikacijama br. US2012/0225056 ili US2013/0246083

Diseminovana intravaskularna koagulacija (DIC)

[0114] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje diseminovane intravaskularne koagulacije (DIC) kontrolom aktivacije komplementa. DIC je patološko stanje gde je kaskada zgrušavanja u krvi široko aktivirana i rezultira stvaranjem krvnih ugrušaka, posebno u kapilarima. DIC može da dovede do opstrukcije protoka krvi u tkivima i na kraju može da ošteti organe. Pored toga, DIC utiče na normalan proces zgrušavanja krvi što može da dovedei do ozbiljnog krvarenja. Kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje, prevenciju ili smanjenje ozbiljnosti DIC modulacijom aktivnosti komplementa. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe u skladu sa bilo kojim od metoda tretmana DIC opisanih u US patentu br.8,652,477.

Vaskulitis

[0115] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje vaskulitisa. Uopšteno govoreći, vaskulitis je poremećaj povezan sa upalom krvnih sudova, uključujući vene i arterije, koji karakteriše to da bela krvna zrnca napadaju tkiva i izazivaju oticanje krvnih sudova. Vaskulitis može da bude povezan sa infekcijom, kao što je pegava groznica Stenovitih planina (Rocky Mountain), ili autoimunost. Primer vaskulitisa povezanog sa autoimunošću je vaskulitis antineutrofilnih citoplazmatskih antitela (ANCA). ANCA vaskulitis je uzrokovan abnormalnim antitelima koja napadaju sopstvene ćelije i tkiva. ANCA napadaju citoplazmu određenih belih krvnih zrnaca i neutrofila, uzrokujući da napadaju zidove sudova u određenim organima i tkivima tela. ANCA vaskulitis može uticati na kožu, pluća, oči i/ili bubrege. Studije sugerišu da ANCA bolest aktivira alternativni put komplementa i generiše određene komponente komplementa koje stvaraju petlju za pojačavanje upale što rezultira vaskularnom povredom (Jennette et al.2013, Semin Nephrol.33(6): 557-64). U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska se mogu koristiti za prevenciju i/ili lečenje ANCA vaskulitisa inhibiranjem aktivacije komplementa.

Atipični hemolitičko-uremijski sindrom

[0116] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije ovog otkrića mogu da budu korisne za lečenje atipičnog hemolitičko-uremičkog sindroma (aHUS). aHUS je retka bolest uzrokovana neproverenom aktivacijom komplementa koju karakteriše stvaranje krvnih ugrušaka u malim krvnim sudovima. Kompozicije pronalaska mogu da budu korisne za smanjenje ili prevenciju aktivacije komplementa povezane sa aHUS.

Neurološke indikacije

[0117] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju, lečenje i/ili ublažavanje simptoma neuroloških indikacija, uključujući, ali ne ograničavajući se na, neurodegenerativne bolesti i srodne poremećaje. Neurodegeneracija se generalno odnosi na gubitak strukture ili funkcije neurona, uključujući smrt neurona. Ovi poremećaji mogu da se leče inhibiranjem efekta komplementa na neuronske ćelije upotrebom kompozicija pronalaska. Neurodegenerativni poremećaji uključuju, ali nisu ograničeni na, amijelotrofičnu lateralnu sklerozu (ALS), multiplu sklerozu (MS), Parkinsonovu bolest i Alchajmerovu bolest.

Amiotrofična lateralna skleroza (ALS)

[0118] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju, lečenje i/ili ublažavanje simptoma ALS. ALS je fatalna bolest motornih neurona koju karakteriše degeneracija neurona kičmene moždine, moždanog stabla i motornog korteksa. ALS uzrokuje gubitak mišićne snage što na kraju dovodi do respiratorne insuficijencije. Disfunkcija komplementa može doprineti ALS-u, i stoga se ALS može sprečiti, lečiti i/ili simptomi mogu da budu ublaže terapijom kompozicijama pronalaska koje ciljaju aktivnost komplementa. U nekim slučajevima, i kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za promovisanje regeneracije nerva. U nekim slučajevima, kompozicije prema pronalasku mogu da se koriste kao inhibitori komplementa prema bilo kom od metoda opisanih u US publikaciji br. US2014/0234275 ili US2010/0143344.

4

Alchajmerova bolest

[0119] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje Alchajmerove bolesti kontrolom aktivnosti komplementa. Alchajmerova bolest je hronična neurodegenerativna bolest sa simptomima koji mogu da obuhvate dezorijentaciju, gubitak pamćenja, promene raspoloženja, probleme u ponašanju i na kraju gubitak telesnih funkcija. Smatra se da je Alchajmerova bolest uzrokovana ekstracelularnim depozitima amiloida u mozgu koji su povezani sa proteinima povezanim sa upalom, kao što su proteini komplementa (Sjoberg et al.2009. Trends in Immunology.30(2): 83-90). U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se koriste kao inhibitori komplementa prema bilo kom od metoda lečenja Alchajmerove bolesti koje su opisane u US publikaciji br. US2014/0234275.

Indikacije vezane za bubrege

[0120] Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se koriste za lečenje određenih bolesti, poremećaja i/ili stanja povezanih sa bubrezima, u nekim slučajevima inhibicijom aktivnosti komplementa. Bubrezi su organi odgovorni za uklanjanje metaboličkih otpadnih proizvoda iz krvotoka. Bubrezi regulišu krvni pritisak, urinarni sistem i homeostatske funkcije i stoga su neophodni za različite telesne funkcije. Bubrezi mogu da budu ozbiljnije pogođeni upalom (u poređenju sa drugim organima) zbog jedinstvenih strukturnih karakteristika i izloženosti krvi. Bubrezi takođe proizvode sopstvene proteine komplementa koji mogu da se aktiviraju nakon infekcije, bolesti bubrega i transplantacije bubrega. U nekim slučajevima, kompozicije prema pronalasku mogu da se upotrebe kao inhibitori komplementa u lečenju određenih bolesti, stanja i/ili poremećaja bubrega prema metodama koje podučava Quigg, J Immunol 2003; 171:3319-24.

Lupusni nefritis

[0121] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje lupus nefritisa inhibiranjem aktivnosti komplementa. Lupusni nefritis je zapaljenje bubrega uzrokovano autoimunom bolešću koja se naziva sistemski eritematozni lupus (SLE). Simptomi lupus nefritisa uključuju visok krvni pritisak; penasti urin; oticanje nogu, stopala, šaka ili lica; bol u zglobovima; bol u mišićima; groznica; i osip. Lupusni nefritis može da se lečiti inhibitorima koji kontrolišu aktivnost komplementa, uključujući kompozicije predmetnog pronalaska. Metode i kompozicije za prevenciju i/ili lečenje lupus nefritisa inhibicijom komplementa mogu uključiti bilo koje od onih opisanih u US publikaciji br. US2013/0345257 ili u US patentu br.8,377,437.

Membranski glomerulonefritis (MGN)

[0122] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu se koristiti za prevenciju i/ili lečenje poremećaja membranskog glomerulonefritisa (MGN) inhibiranjem aktivacije određenih komponenti komplementa. MGN je poremećaj bubrega koji može dovesti do upale i strukturnih promena. MGN je uzrokovan antitelima koja se vezuju za rastvorljivi antigen u bubrežnim kapilarama (glomerulus). MGN može da utiče na funkcije bubrega, kao što je filtriranje tečnosti i može dovesti do otkazivanja bubrega. Kompozicije pronalaska se mogu koristiti u skladu sa postupcima prevencije i/ili lečenja MGN inhibicijom komplementa koji su navedeni u US publikaciji br. US2010/0015139 ili u međunarodnoj publikaciji br. WO2000/021559.

Komplikacije hemodijalize

[0123] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se koriste za prevenciju i/ili lečenje komplikacija povezanih sa hemodijalizom inhibicijom aktivacije komplementa. Hemodijaliza je medicinska procedura koja se koristi za održavanje funkcije bubrega kod osoba sa zatajenjem bubrega. U hemodijalizi, uklanjanje otpadnih proizvoda kao što su kreatinin, urea i slobodna voda iz krvi se vrši eksterno. Česta komplikacija lečenja hemodijalizom je hronična upala izazvana kontaktom krvi i dijalizne membrane. Još jedna česta komplikacija je tromboza koja se odnosi na stvaranje krvnih ugrušaka koji ometaju cirkulaciju krvi. Studije su pokazale da su ove komplikacije povezane sa aktivacijom komplementa. Hemodijaliza se može kombinovati sa terapijom inhibitorom komplementa da bi se obezbedila sredstva za kontrolu inflamatornih odgovora i patologija i/ili prevenciju ili lečenje tromboze kod subjekata koji prolaze kroz hemodijalizu zbog zatajenja bubrega. Postupci upotrebe kompozicija pronalaska za lečenje komplikacija hemodijalize mogu da se sprovedu prema bilo kom od metoda koje su opisali DeAngelis et al u Immunobiology, 2012, 217(11): 1097-1105 ili Kourtzelis et al. Blood, 2010, 116(4):631-639.

Bolesti oka

[0124] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje određenih bolesti oka, poremećaja i/ili stanja. U zdravom oku sistem komplementa je aktiviran na niskom nivou i kontinuirano se reguliše membranski vezanim i rastvorljivim intraokularnim proteinima koji štite od patogena. Stoga aktivacija komplementa igra važnu ulogu u nekoliko komplikacija vezanih za oko i kontrola aktivacije komplementa se može primeniti za lečenje takvih bolesti. Kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe kao inhibitori komplementa u lečenju bolesti oka prema bilo kom od metoda koje su poučavali Jha et al. u Mol Immunol.2007; 44(16): 3901-3908 ili u US Patent No.

8,753,625.

Senilna makularna degeneracija (AMD)

[0125] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje makularne degeneracije (AMD) povezane sa starenjem inhibiranjem aktivacije komplementa oka. AMD je hronična bolest oka koja uzrokuje zamagljen centralni vid, slepe tačke u centralnom vidu i/ili eventualni gubitak centralnog vida. Centralni vid utiče na sposobnost čitanja, upravljanja vozilom i/ili prepoznavanja lica. AMD se generalno deli na dva tipa, neeksudativnu (suvu) i eksudativnu (mokru). Suva AMD se odnosi na propadanje makule koja je tkivo u centru mrežnjače. Vlažna AMD se odnosi na otkazivanje krvnih sudova ispod mrežnjače što dovodi do curenja krvi i tečnosti. Nekoliko studija na ljudima i životinjama identifikovalo je proteine komplementa koji su povezani sa AMD, a nove terapijske strategije su uključivale kontrolu puteva aktivacije komplementa, kao što su opisali Jha et al. u Mol Immunol.2007; 44(16): 3901-8. Metode pronalaska koje uključuju upotrebu kompozicija pronalaska za prevenciju i/ili lečenje AMD-a mogu uključiti bilo koji od onih opisanih u US publikacijama br. US2011/0269807 ili US2008/0269318.

Bolest rožnjače

[0126] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se koriste za prevenciju i/ili lečenje bolesti rožnjače inhibiranjem aktivacije komplementa oka. Sistem komplementa igra važnu ulogu u zaštiti rožnjače od patogenih čestica i/ili inflamatornih antigena. Rožnjača je krajnji prednji deo oka koji pokriva i štiti šarenicu, zenicu i prednju komoru i stoga je izložena spoljašnjim faktorima. Bolesti rožnjače uključuju, ali nisu ograničene na, keratokonus, keratitis, očni herpes i/ili druge bolesti. Komplikacije rožnjače mogu izazvati bol, zamagljen vid, suzenje, crvenilo, osetljivost na svetlost i/ili ožiljke na rožnjači. Sistem komplementa je kritičan za zaštitu rožnjače, ali aktivacija komplementa može prouzrokovati oštećenje tkiva rožnjače nakon što se infekcija očisti pošto

4

su određena jedinjenja komplementa ynatno eksprimirana. Metode za modulaciju aktivnosti komplementa u lečenju bolesti rožnjače mogu da obuhvate bilo koji od onih koje su opisali Jha et al. u Mol Immunol.2007; 44(16): 3901-8.

Autoimunski uveitis

[0127] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu se koristiti za prevenciju i/ili lečenje uveitisa, koji je zapaljenje uvealnog sloja oka. Uvea je pigmentirano područje oka koje se sastoji od horoida, irisa i cilijarnog tela oka. Uveitis izaziva crvenilo, zamagljen vid, bol, sinehiju i na kraju može izazvati slepilo. Studije su pokazale da su proizvodi aktivacije komplementa prisutni u očima pacijenata sa autoimunim uveitisom i da komplement igra važnu ulogu u razvoju bolesti. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje i/ili prevenciju uveitisa prema bilo kom od metoda identifikovanih u Jha et al. u Mol Immunol.2007. 44(16): 3901-8.

Dijabetesna retinopatija

[0128] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje dijabetesne retinopatije koja je bolest uzrokovana promenama u krvnim sudovima mrežnjače kod pacijenata sa dijabetesom. Retinopatija može da izazove oticanje krvnih sudova i curenje tečnosti i/ili rast abnormalnih krvnih sudova. Dijabetena retinopatija utiče na vid i može na kraju dovesti do slepila. Studije su pokazale da aktivacija komplementa ima važnu ulogu u razvoju dijabetičke retinopatije. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe u skladu sa postupcima lečenja dijabetičke retinopatije opisanim u Jha et al. Mol Immunol.2007; 44(16): 3901-8.

Optički neuromijelitis (NMO)

[0129] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za lečenje optičkog neuromijelitisa (NMO). NMO je autoimuna bolest koja dovodi do uništenja optičkog nerva. U nekim realizacijama, uništavanje nerva kod subjekata sa NMO je sprečeno.

Sjogrenov sindrom

[0130] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se koriste za lečenje Sjorgenovog sindroma. Sjorgenov sindrom je bolest oka koju karakterišu suve oči koje mogu da peku i/ili svrbe. To je autoimuni poremećaj gde imuni sistem cilja žlezde u očima i ustima koje su odgovorne za vlaženje tih regiona. Kompozicije prema ovom pronalasku mogu da se upotrebe za lečenje i/ili ublažavanje simptoma Sjorgenovog sindroma.

Preeklampsija i HELLP-sindrom

[0131] U nekim realizacijama, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se upotrebe za prevenciju i/ili lečenje preeklampsije i/ili sindroma HELLP (skraćenica koja označava karakteristike sindroma od 1) hemolize, 2) povišenih enzima jetre i 3) niskog broja trombocita) terapijom inhibitorima komplementa. Preeklampsija je poremećaj trudnoće sa simptomima uključujući povišen krvni pritisak, otok, kratak dah, disfunkciju bubrega, oštećenu funkciju jetre i/ili nizak broj trombocita u krvi. Preeklampsija se obično dijagnostikuje visokim nivoom proteina u urinu i visokim krvnim pritiskom. HELLP sindrom je kombinacija hemolize, povišenih enzima jetre i niskih stanja trombocita. Hemoliza je bolest koja uključuje pucanje crvenih krvnih zrnaca koje dovodi do oslobađanja hemoglobina iz crvenih krvnih zrnaca. Povišeni enzimi jetre mogu da ukažu na stanje jetre izazvano trudnoćom. Nizak nivo trombocita dovodi do smanjene sposobnosti zgrušavanja, izazivajući opasnost od prekomernog krvarenja. HELLP je povezan sa preeklampsijom i poremećajem jetre. HELLP sindrom se obično javlja u kasnijim fazama trudnoće ili nakon porođaja. Obično se dijagnostikuje testovima krvi koji ukazuju na prisustvo tri stanja koja uključuje. Obično se HELLP leči izazivanjem porođaja.

[0132] Studije sugerišu da se aktivacija komplementa dešava tokom HELLP sindroma i preeklampsije i da su određene komponente komplementa prisutne u povećanim nivoima tokom HELLP i preeklampsije. Inhibitori komplementa se mogu koristiti kao terapeutski agensi za prevenciju i/ili lečenje ovih stanja. Kompozicije pronalaska se mogu koristiti u skladu sa metodama prevencije i/ili lečenja HELLP i preeklampsije koje su poučavali Heager et al. u Obstetrics & Gynecology, 1992, 79(1): 19-26 ili u Međunarodnoj publikaciji br. WO201/078622.

Formulacije

[0133] Farmaceutske kompozicije pronalaska su formulisane u vodenim rastvorima. Vodeni rastvori dalje uključuju jednu ili više soli i jedan ili više puferskih agenasa. Soli mogu da obuhvate natrijum hlorid koji može biti uključen u koncentracijama od oko 0,05 mM do oko 50 mM, od oko 1 mM do oko 100 mM, od oko 20 mM do oko 200 mM ili od oko 50 mM do oko 500 mM. Dalji rastvori mogu da sadrže najmanje 500 mM natrijum hlorida. U nekim slučajevima, vodeni

4

rastvori uključuju natrijum fosfat. Natrijum fosfat može da bude uključen u vodene rastvore u koncentraciji od oko 0,005 mM do oko 5 mM, od oko 0,01 mM do oko 10 mM, od oko 0,1 mM do oko 50 mM, od oko 1 mM do oko 100 mM, od oko 5 mM do oko 150 mM, ili od oko 10 mM do oko 250 mM. U nekim slučajevima se koriste koncentracije natrijum fosfata od najmanje 250 mM.

[0134] Kompozicije pronalaska mogu da sadrže inhibitore C5 u koncentraciji od oko 0,001 mg/mL do oko 0,2 mg/mL, od oko 0,01 mg/mL do oko 2 mg/mL, od oko 0,1 mg/mL do oko 10 mg/mL, od oko 0,5 mg/mL do oko 5 mg/mL, od oko 1 mg/mL do oko 20 mg/mL, od oko 15 mg/mL do oko 40 mg/mL, od oko 25 mg/mL do oko 75 mg/mL, od oko 50 mg/mL do oko 200 mg/mL, ili od oko 100 mg/mL do oko 400 mg/mL. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska uključuju C5 inhibitore u koncentraciji od najmanje 400 mg/mL.

[0135] Kompozicije pronalaska mogu da sadrže inhibitore C5 u koncentraciji od približno, približno ili tačno bilo koje od sledećih vrednosti: 0,001 mg/mL, 0,2 mg/mL, 0,01 mg/mL, 2 mg/mL, 0,1 mg/mL , 10 mg/mL, 0,5 mg/mL, 5 mg/mL, 1 mg/mL, 20 mg/mL, 15 mg/mL, 40 mg/mL, 25 mg/mL, 75 mg/mL, 50 mg/mL , 200 mg/mL, 100 mg/mL ili 400 mg/mL. U nekim slučajevima, kompozicije pronalaska uključuju inhibitore C5 u koncentraciji od najmanje 40 mg/mL.

[0136] U nekim realizacijama, kompozicije pronalaska obuhvataju vodene kompozicije koje dalje uključuju vodu

[0137] Formulacije vodenog inhibitora C5 pronalaska mogu imati pH nivoe od oko 2,0 do oko 3,0, od oko 2,5 do oko 3,5, od oko 3,0 do oko 4,0, od oko 3,5 do oko 4,5, od oko 4,0 do oko 5,0, od oko 4,5 do oko 5,5, od oko 5,0 do oko 6,0, od oko 5,5 do oko 6,5, od oko 6,0 do oko 7,0, od oko 6,5 do oko 7,5, od oko 7,0 do oko 8,0, od oko 7,5 do oko 8,5, od oko 8,0 do oko 9,0, od oko 8,5 do oko 9,5, ili od oko 9,0 do oko 10,0.

U nekim slučajevima, kompozicije prema pronalasku se pripremaju u skladu sa dobrom proizvodnom praksom (GMP) i/ili važećim GMP (cGMP). Smernice koje se koriste za primenu GMP i/ili cGMP mogu se dobiti od jedneili više od Američke agencije za hranu i lekove (FDA), Svetske zdravstvene organizacije (SZO) i Međunarodne konferencije o harmonizaciji (ICH).

Doziranje i primena

[0138] Za lečenje ljudskih subjekata, inhibitori C5 su formulisani kao farmaceutske kompozicije. U zavisnosti od predmeta koji se leči, način primene i

4

željeni tip lečenja (npr. prevencija, profilaksa ili terapija) inhibitori C5 mogu se formulisati na načine koji su u skladu sa ovim parametrima. Sažetak takvih tehnika nalazi se u Remingtonu: Nauka i praksa farmacije, 21. izdanje, Lippincott Williams i Wilkins, (2005); Enciklopedija farmaceutske tehnologije, izdanja J. Swarbrick i J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nju Jork.

[0139] inhibitori C5 ovog pronalaska se mogu obezbediti u terapeutski efikasnoj količini. U nekim slučajevima, terapeutski efikasna količina inhibitora C5 ovog pronalaska može se postići primenom doze od oko 0,1 mg do oko 1 mg, od oko 0,5 mg do oko 5 mg, od oko 1 mg do oko 20 mg, od oko 5 mg do oko 50 mg, od oko 10 mg do oko 100 mg, od oko 20 mg do oko 200 mg, ili najmanje 200 mg jednog ili više inhibitora C5.

[0140] U nekim slučajevima, subjektima se može davati terapeutska količina inhibitora C5 na osnovu njihove težine. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se primenjuju u dozi od oko 0,001 mg/kg do oko 1,0 mg/kg, od oko 0,01 mg/kg do oko 2,0 mg/kg, od oko 0,05 mg/kg do oko 5,0 mg/kg, od oko 0,03 mg/kg do oko 3,0 mg/kg, od oko 0,01 mg/kg do oko 10 mg/kg, od oko 0,1 mg/kg do oko 2,0 mg/kg, od oko 0,2 mg/kg do oko 3.0 mg/kg, od oko 0,4 mg/kg do oko 4,0 mg/kg, od oko 1,0 mg/kg do oko 5,0 mg/kg, od oko 2,0 mg/kg do oko 4,0 mg/kg, od oko 1,5 mg/kg do oko 7,5 mg/kg, od oko 5,0 mg/kg do oko 15 mg/kg, od oko 7,5 mg/kg do oko 12,5 mg/kg, od oko 10 mg/kg do oko 20 mg/kg, od oko 15 mg/kg do oko 30 mg/kg, od oko 20 mg/kg do oko 40 mg/kg, od oko 30 mg/kg do oko 60 mg/kg, od oko 40 mg/kg do oko 80 mg/kg, od oko 50 mg/kg do oko 100 mg/kg, ili najmanje 100 mg/kg. Takvi opsezi mogu uključivati opsege pogodne za davanje ljudskim subjektima. Nivoi doze mogu u velikoj meri zavisiti od prirode stanja; efikasnosti leka; stanja pacijenta; presude stručnjaka; i učestalosti i načina primene.

[0141] U nekim slučajevima, inhibitori C5 ovog pronalaska su obezbeđeni u koncentracijama prilagođenim za postizanje željenog nivoa inhibitora C5 u uzorku, biološkom sistemu, ili subjekta (npr. nivo plazme kod subjekta).U nekim slučajevima, željene koncentracije inhibitora C5 u uzorku, biološkom sistemu ili subjektu mogu uključivati koncentracije od oko 0,001 µM do oko 0,01 µM, od oko 0,005 µM do oko 0,05 µM, od oko 0,02 µM do oko 0,2 µM, od oko 0,03 µM do oko 0,3 µM, od oko 0,05 µM do oko 0,5 µM, od oko 0,01 µM do oko 2.0 µM, od oko 0,1 µM do oko 50 µM, od oko 0,1 µM do oko 10 µM, od oko 0,1 µM do oko 5 µM, ili od oko 0,2 µM do oko 20 µM. U nekim slučajevima, željene koncentracije inhibitora C5 u plazmi subjekta mogu biti od oko 0,1 µg/mL do oko 1000 µg/mL.

4

U drugim slučajevima, željene koncentracije inhibitora C5 u plazmi subjekta mogu biti od oko 0,01 µg/mL do oko 2 µg/mL, od oko 0,02 µg/mL do oko 4 µg/mL, od oko 0,05 µg/mL do oko 5 µg/mL, od oko 0,1 µg/mL do oko 1,0 µg/mL, od oko 0,2 µg/mL do oko 2,0 µg/mL, od oko 0,5 µg/mL do oko 5 µg/mL, od oko 1 µg/mL do oko 5 µg/mL, od oko 2 µg/mL do oko 10 µg/mL, od oko 3 µg/mL do oko 9 µg/mL, od oko 5 µg/mL do oko 20 µg/mL, od oko 10 µg/mL do oko 40 µg/mL. od oko 30 µg/mL do oko 60 µg/mL, od oko 40 µg/mL do oko 80 µg/mL, od oko 50 µg/mL do oko 100 µg/mL, od oko 75 µg/mL do oko 150 µg/mL, ili najmanje 150 µg/mL. U drugim realizacijama, inhibitori C5 se primenjuju u dozi dovoljnoj da se postigne maksimalna koncentracija u serumu (Cmax) u količini od najmanje 0,1 µg/mL, najmanje 0,5 µg/mL, najmanje 1 µg/mL, najmanje 5 µg/mL, najmanje 10 µg/mL, najmanje 50 µg/mL, najmanje 100 µg/mL, ili najmanje 1000 µg/mL.

[0142] U nekim realizacijama, doze dovoljne da održe nivoe inhibitora C5 od oko 0,1 µg/mL do oko 20 µg/mL su obezbeđene za smanjenje hemolize kod subjekta od oko 25% do oko 99%.

[0143] U nekim realizacijama, inhibitori C5 se primenjuju dnevno u dozi koja je dovoljna za isporuku od oko 0,1 mg/dan do oko 60 mg/dan po kilogramu težine subjekta. U nekim slučajevima, Cmax je postignut sa svakom dozom od oko 0,1 µg/mL do oko 1000 µg/mL. U ovakvim slučajevima, površina ispod krivine (AUC) između doza može biti od oko 200 µg<∗>sat/mL do oko 10.000 µg<∗>sat/mL.

[0144] Prema nekim metodama pronalaska, inhibitori C5 pronalaska su obezbeđeni u koncentracijama potrebnim za postizanje željenog efekta. U nekim slučajevima, jedinjenja i kompozicija pronalaska su obezbeđene u količini potrebnoj da se data reakcija ili proces smanje za polovinu. Koncentracija potrebna za postizanje takvog smanjenja se ovde naziva polovinom maksimalne inhibitorne koncentracije,, iliti "ICso." Alternativno, jedinjenja i kompozicije mogu da budu obezbeđene u količini koja je neophodna za povećanje date reakcije, aktivnosti ili procesa za polovinu njihove vrednosti. Koncentracija potrebna za takvo povećanje se ovde naziva polovinom maksimalne efektivne koncentracije iliti "EC50."

[0145] inhibitori C5 ovog pronalaska mogu biti prisutni u vrednostima ukupno 0.1-95% po težini ukupne težine kompozicije. U nekim slučajevima inhibitori C5 obezbeđuju se intravenoznom (IV) primenom. U nekim slučajevima, inhibitori C5 obezbeđuju se subkutanom (SC) primenom.

4

[0146] Primenom SC inhibitora C5 pronalaska, u nekim slučajevima, može imati prednost u odnosu na IV primenu. Primena SC može omogućiti pacijentima da sami sebe leče. Takav tretman može biti koristan jer pacijenti može imati samostalno kućno lečenje, uz izbegavanje potrebe da se putuje do pružaoca usluga ili medicinske ustanove. Dalje, SC tretman može omogućiti pacijentima da izbegnu dugoročne komplikacije povezane sa IV primenom, kao što su infekcije, gubitak venskog pristupa, lokalna tromboza i hematomi. U nekim realizacijama, SC tretman može povećati usklađenost pacijenata, zadovoljstvo pacijenata, kvalitet života, smanjiti troškove lečenja i/ili potrebe za lekovima.

[0147] U nekim slučajevima, dnevna SC primena obezbeđuje stabilne koncentracije inhibitora C5 koje se postižu za 1-3 doze, 2-3 doze, 3-5 doza ili 5-10 doza. U nekim slučajevima, dnevne SC doze od 0,1 mg/kg mogu postići trajne nivoe inhibitora C5 veće od ili jednake 2,5 µg/mL i/ili inhibiciju aktivnosti komplementa veću od 90%.

[0148] inhibitori C5 pronalaska mogu pokazati sporu kinetiku apsorpcije (vreme do maksimalne uočene koncentracije veće od 4-8 sati) i visoku bioraspoloživost (od oko 75% do oko 100%) posle SC tretmana.

[0149] U nekim realizacijama, doza i/ili primena se menja da bi se moduliralo poluvreme (t1/2) nivoa inhibitora C5 kod subjekta ili u tečnostima subjekta (npr. plazme).U nekim slučajevima, t1/2 je najmanje 1 sat, najmanje 2 sata, najmanje 4 sata, najmanje 6 sati, najmanje 8 sati, najmanje 10 sati, najmanje 12 sati, najmanje 16 sati, najmanje 20 sati, najmanje 24 sata, najmanje 36 sati, najmanje 48 sati, najmanje 60 sati, najmanje 72 sata, najmanje 96 sati, najmanje 5 dana, najmanje 6 dana, najmanje 7 dana, najmanje 8 dana, najmanje 9 dana, najmanje 10 dana, najmanje 11 dana, najmanje 12 dana, najmanje 2 nedelje, najmanje 3 nedelje, najmanje 4 nedelje, najmanje 5 nedelja, najmanje 6 nedelja, najmanje 7 nedelja, najmanje 8 nedelja, najmanje 9 nedelja, najmanje 10 nedelja, najmanje 11 nedelja, najmanje 12 nedelja, ili najmanje 16 nedelja.

[0150] U nekim realizacijama, inhibitori C5 pronalaska mogu da ispolje dugi terminalni t1/2. Produženi terminalni t1/2 može biti posledica ekstenzivnog vezivanja za cilj i/ili dodatnog vezivanja za proteine plazme. U nekim slučajevima, pronalaska pokazuju t1/2 vrednosti veće od 24 sata i u plazmi i u celoj krvi. U nekim slučajevima, inhibitori C5 ne gube funkcionalnu aktivnost nakon inkubacije u punoj ljudskoj krvi na 37°C tokom 16 sati.

4

[0151] U nekim realizacijama, doziranje i/ili primena se menjaju da bi se modulirao volumen distribucije inhibitora C5 u stabilnom stanju. U nekim slučajevima, stabilni volumen distribucije inhibitora C5 je od oko 0,1 mL/kg do oko 1 mL/kg, od oko 0,5 mL/kg do oko 5 mL/kg, od oko 1 mL/kg do oko 10 mL /kg, od oko 5 mL/kg do oko 20 mL/kg, od oko 15 mL/kg do oko 30 mL/kg, od oko 10 mL/kg do oko 200 mL/kg, od oko 20 mL/kg do oko 60 mL/kg, od oko 30 mL/kg do oko 70 mL/kg, od oko 50 mL/kg do oko 200 mL/kg, od oko 100 mL/kg do oko 500 mL/kg, ili najmanje 500 mL/kg . U nekim slučajevima, doza i/ili primena inhibitora C5 se prilagođava kako bi se obezbedilo da je zapremina distribucije u stanju dinamičke ravnoteže jednaka najmanje 50% ukupne zapremine krvi. U nekim realizacijama, distribucija inhibitora C5 može biti ograničena na odeljak plazme.

[0152] U nekim realizacijama, inhibitori C5 pronalaska pokazuju ukupnu stopu klirensa od oko 0,001 mL/sat/kg do oko 0,01 mL/sat/kg, od oko 0,005 mL/sat/kg do oko 0,05 mL/sat/kg, od oko 0,01 mL/sat/kg do oko 0,1 mL/sat/kg, od oko 0,05 mL/sat/kg do oko 0,5 mL/sat/kg, od oko 0,1 mL/sat/kg do oko 1 mL/sat/kg, od oko 0,5 mL/sat/kg do oko 5 mL/sat/kg, od oko 0,04 mL/sat/kg do oko 4 mL/sat/kg, od oko 1 mL/sat/kg do oko 10 mL/sat/kg , od oko 5 mL/sat/kg do oko 20 mL/sat/kg, od oko 15 mL/sat/kg do oko 30 mL/sat/kg, ili najmanje 30 mL/sat/kg.

[0153] Vremenski periodi tokom kojih se održava maksimalna koncentracija inhibitora C5 kod subjekata (npr. u serumu subjekta) (Tmax vrednosti) mogu se podesiti promenom doze i/ili administracije (npr. subkutana primena).U nekim slučajevima, inhibitori C5 imaju Tmax vrednosti od oko 1 min do oko 10 min, od oko 5 min do oko 20 min, od oko 15 min do oko 45 min, od oko 30 min do oko 60 min, od oko 45 min do oko 90 min, od oko 1 sat do oko 48 sati, od oko 2 sati do oko 10 sati, od oko 5 sati do oko 20 sati, od oko 10 sati do oko 60 sati, od oko 1 dan do oko 4 dana, od oko 2 dana do oko 10 dana ili najmanje 10 dana.

[0154] U nekim realizacijama , inhibitori C5 pronalaska mogu se primenjivati bez efekata van cilja. U nekim slučajevima, inhibitori C5 pronalaska ne sprečavaju hERG (ljudski gen povezan sa etar-a-go-go), čak i sa koncentracijama manjim ili jednakim 300 µM. SC injekcija inhibitora C5 pronalaska sa nivoima doze do 10 mg/kg mogu se dobro tolerisati i neće dovesti do bilo kakvih štetnih efekata na kardiovaskularni sistem (na primer, povećan rizik od produžene repolarizacije komora) i/ili respiratornog sistema.

[0155] Doze inhibitora C5 mogu se odrediti korišćenjem nivoa bez uočenih štetnih efekata (NOAEL) primećenog kod druge vrste. Takve vrste mogu uključivati, ali nisu ograničene na majmune, pacove, zečeve i miševe. U nekim slučajevima, humane ekvivalentne doze (HED) mogu se odrediti alometrijskim skaliranjem iz NOAEL-a uočenih kod drugih vrsta. U nekim slučajevima, HED rezultiraju terapeutskim marginama od oko 2 puta do oko 5 puta, od oko 4 puta do oko 12 puta, od oko 5 puta do oko 15 puta, od oko 10 puta do oko 30 puta ili najmanje 30 puta. U nekim slučajevima, terapijske margine se određuju korišćenjem ekspozicije kod primata i procenjenih ljudi Cmax nivoa kod ljudi.

[0156] U nekim realizacijama , inhibitori C5 pronalaska omogućavaju brz period ispiranja u slučajevima infekcije gde produžena inhibicija sistema komplementa pokaže štetnost.

[0157] Primenom inhibitora C5 prema pronalasku može biti modifikovana da bi se smanjio potencijalni klinički rizik za subjekte. Infekcija sa Neisseria meningitidis je poznati rizik od inhibitora C5, uključujući ekulizumab. U nekim slučajevima, rizik od infekcije sa Neisseria meningitides je minimiziran uvođenjem jednog ili više profilaktičkih koraka. Takvi koraci mogu uključivati isključivanje subjekata koji su možda već kolonizovani ovim bakterijama. U nekim slučajevima, profilaktički koraci mogu uključivati istovremenu primenu jednog ili više antibiotika. U nekim slučajevima, ciprofloksacin se može primenjivati istovremeno. U nekim slučajevima, ciprofloksacin se može istovremeno primenjivati oralno u dozi od oko 100 mg do oko 1000 mg (npr.500 mg).

[0158] U nekim slučajevima , primena inhibitora C5 se može izvršiti korišćenjem uređaja za auto-injekciju. Takvi uređaji mogu omogućiti samoadministriranje (npr. svakodnevnu administraciju).

Učestalost doziranja

[0159] U nekim realizacijama , inhibitori C5 pronalaska daju se sa učestalošću svaki sat, svaka 2 sata, svaka 4 sati, svakih 6 sati, svakih 12 sati, svakih 18 sati, svakih 24 sati, svakih 36 sati, svakih 72 sati, svakih 84 sati, svakih 96 sati, svakih 5 dana, svakih 7 dana, svakih 10 dana, svakih 14 dana, svake nedelje, svake dve nedelje, svake 3 nedelje, svake 4 nedelje, svakog meseca, svaka 2 meseca, svaka 3 meseca, svaka 4 meseca, svakih 5 meseci, svakih 6 meseci, svake godine ili najmanje svake godine.U nekim slučajevima, inhibitori C5 se primenjuju

1

jednom dnevno ili se primenjuju kao dve, stanja ili više poddoza u odgovarajućim intervalima tokom dana.

[0160] U nekim realizacijama , inhibitori C5 se primenjuju u više dnevnih doza. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se daju dnevno tokom 7 dana. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se daju dnevno tokom 7 do 100 dana. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se daju dnevno najmanje 100 dana. U nekim slučajevima, inhibitori C5 se daju dnevno tokom perioda koji nije ograničen.

[0161] inhibitori C5 koji se isporučuju intravenozno mogu se davati infuzijom tokom određenog vremenskog perioda, kao što je period od 5 minuta, 10 minuta, 15 minuta, 20 minuta ili 25 minuta. Primena se može ponavljati, na primer, redovno, kao što je na sat, dnevno, nedeljno, dvonedeljno (tj. svake dve nedelje), tokom jednog meseca, dva meseca, tri meseca, četiri meseca ili više od četiri meseca . Nakon inicijalnog režima lečenja, tretmani se mogu primenjivati ređe. Na primer, nakon dvonedeljne primene tokom tri meseca, primena se može ponoviti jednom mesečno, šest meseci ili godinu dana ili duže. Primena inhibitora C5 može smanjiti, smanjiti, povećati ili promeniti vezivanje ili bilo koji fiziološki štetan proces (npr. u ćeliji, tkivu, krvi, urinu ili drugom kompartmentu pacijenta) za najmanje 10%, najmanje 15%, najmanje 20%, najmanje 25%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80% ili najmanje 90% ili više.

[0162] Pre primene pune doze inhibitora C5 i/ili C5 inhibitora, pacijentima se može primeniti manja doza, kao što je 5% pune doze, i onda treba pratiti pojavu neželjenih efekata , kao što je alergijska reakcija ili reakcija na infuziju, ili za povišene nivoe lipida ili krvni pritisak. U drugom primeru, pacijent se može pratiti zbog neželjenih imunostimulatornih efekata, kao što je povećanje citokina (npr. TNF-alfa, 11-1, 11-6 ili 11-10).

[0163] Genetska predispozicija igra ulogu u nastanku nekih bolesti ili poremećaja. Stoga, pacijent kome je potreban inhibitor C5 može se identifikovati uzimanjem porodične istorije, ili, na primer, skrining za jedan ili više genetskih markera ili varijanti. Pružalac zdravstvene nege, kao što je lekar, medicinska sestra ili član porodice, može analizirati porodičnu istoriju pre prepisivanja ili primene terapijske kompozicije ovog pronalaska.

2

III. Kompleti

[0164] Tipični kompleti mogu uključivati najmanje jednu bočicu, epruvetu, bocu, bočicu, špric i/ili drugi kontejner ili uređaj, u koji se stavljaju formulacije inhibitora C5, poželjno, na odgovarajući način.

[0165] U nekim realizacijama, kompozicije pronalaska su obezbeđene u borosilikatnim bočicama. Takve bočice mogu da sadrže poklopac (npr. gumeni čep). U nekim slučajevima, kapice uključuju gumene čepove obložene FLUROTEC®-om. Poklopci mogu da se pričvrste na mestu pomoću zaptivke, uključujući, ali ne ograničavajući se na aluminijumsku preklopnu zaptivku.

[0166] Kompleti mogu dalje da sadrže uputstva za korišćenje komponenti kompleta, kao i upotrebu bilo kog drugog reagensa koji nije uključen u komplet. Uputstva mogu da sadrže i varijacije koje se mogu dodati.

IV. Definicije

[0167] Biološka raspoloživost: Kako se ovde koristi, izraz "bioraspoloživost" se odnosi na sistemsku dostupnost date količine jedinjenja (npr., inhibitora C5) primenjenog subjektu. Bioraspoloživost se može proceniti merenjem površine ispod krive (AUC) ili maksimalne koncentracije u serumu ili plazmi (Cmax) nepromenjenog oblika jedinjenja nakon davanja jedinjenja subjektu. AUC je određivanje površine ispod krive prilikom crtanja koncentracije u serumu ili plazmi jedinjenja duž ordinate (Y-ose) u odnosu na vreme duž apscise (X-ose). Generalno, AUC za određeno jedinjenje se može izračunati korišćenjem metoda poznatih onima koji su obično verzirani u ovu oblast i/ili kao što je opisano u G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v.72, Marcel Dekker, Njujork, Inc., 1996

[0168] Biološki sistem: Kako se ovde koristi, izraz "biološki sistem" se odnosi na ćeliju, grupu ćelija, tkivo, organ, grupu organa, organelu, biološku tečnost, biološki signalni put (npr. signalni put aktiviran receptorom, signalni put aktiviran naelektrisanjem, metabolički put, ćelijski signalni put, itd.), grupa proteina, grupa nukleinskih kiselina ili grupa molekula (uključujući, ali ne ograničavajući se na biomolekule) koji obavljaju najmanje jednu biološku funkciju ili biološki zadatak unutar ćelijskih membrana, ćelijskih odeljaka, ćelija, ćelijskih kultura, tkiva, organa, sistema organa, organizama, višećelijskih organizama, bioloških tečnosti ili bilo kojih bioloških entiteta. U nekim realizacijama, biološki sistemi su ćelijski signalni putevi koji se sastoje od intracelularnih i/ili ekstracelularnih signalnih biomolekula. U nekim realizacijama, biološki sistemi uključuju proteolitičke kaskade (npr. kaskadu komplementa).

[0169] Puferski agens: Kako se ovde koristi, izraz "puferski agens" se odnosi na jedinjenje koje se koristi u rastvoru u svrhu otpora promenama pH. Takva jedinjenja mogu uključivati, ali nisu ograničena na sirćetnu kiselinu, adipinsku kiselinu, natrijum acetat, benzojevu kiselinu, limunsku kiselinu, natrijum benzoat, maleinsku kiselinu, natrijum fosfat, vinsku kiselinu, mlečnu kiselinu, kalijum metafosfat, glicin, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat , natrijum citrat i natrijum tartarat.

[0170] Vreme klirensa: Kako se ovde koristi, izraz "vreme klirensa" se odnosi na brzinu kojom se određeno jedinjenje uklanja iz biološkog sistema ili tečnosti.

[0171] Jedinjenje: Kako se ovde koristi, izraz "jedinjenje" se odnosi na poseban hemijski entitet. U nekim realizacijama, određeno jedinjenje može postojati u jednom ili više izomernih ili izotopskih oblika (uključujući, ali ne ograničavajući se na stereoizomere, geometrijske izomere i izotope). U nekim realizacijama, jedinjenje se daje ili koristi samo u jednom takvom obliku. U nekim realizacijama, jedinjenje se obezbeđuje ili koristi kao mešavina dva ili više takvih oblika (uključujući, ali ne ograničavajući se na racemsku mešavinu stereoizomera). Stručnjaci će razumeti da neka jedinjenja postoje u različitim oblicima, pokazuju različita svojstva i/ili aktivnosti (uključujući, ali ne ograničavajući se na biološke aktivnosti). U takvim slučajevima je u okviru uobičajene prakse onih u ovoj oblasti da izaberu ili izbegnu određene oblike jedinjenja. Na primer, jedinjenja koja sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika mogu se izolovati u optički aktivnim ili racemskim oblicima.

[0172] Ciklični : Kako se ovde koristi, izraz "ciklični" se odnosi na prisustvo kontinuirane petlje. Ciklični molekuli ne moraju biti kružni, samo spojeni da formiraju neprekinuti lanac podjedinica. Ciklični polipeptidi mogu uključivati "cikličnu petlju", formiranu kada su dve aminokiseline povezane premošćujućim delom. Ciklična petlja obuhvata aminokiseline duž polipeptida prisutne između premoštenih amino kiselina. Ciklične petlje mogu da sadrže 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više aminokiselina.

[0173] Nizvodni događaj: Kako se ovde koristi, izraz "nizvodno" ili "nizvodni događaj" odnosi se na bilo koji događaj koji se dogodio nakon i/ili kao rezultat drugog događaja. U nekim slučajevima, nizvodni događaji su događaji koji se

4

dešavaju nakon i kao rezultat cepanja i/ili aktivacije komplementa C5. Takvi događaji mogu uključivati, ali nisu ograničeni na stvaranje proizvoda cepanja C5, aktivaciju MAC-a, hemolizu i bolesti povezane sa hemolizom (npr. PNH).

[0174] Konstanta disocijacije ravnoteže: Kako se ovde koristi, izraz "konstanta ravnoteže disocijacije" ili "KD" se odnosi na vrednost koja predstavlja tendenciju dva ili više agenasa (npr. dva proteina) da se reverzibilno odvajaju.U nekim slučajevima, KD označava koncentraciju primarnog agensa pri kojoj je polovina ukupnih nivoa sekundarnog agensa povezana sa primarnim agensom.

[0175] Poluživot: Kako se ovde koristi, izraz "poluživot" ili "t1/2" odnosi se na vreme potrebno da određeni proces ili koncentracija jedinjenja dostigne polovinu konačne vrednosti. "Terminalni poluživot" ili "terminalni t1/2" odnosi se na vreme potrebno da se koncentracija faktora u plazmi smanji za polovinu nakon što koncentracija faktora dostigne pseudo-ravnoteža.

[0176] Hemoliza: Kako se ovde koristi, izraz "hemoliza" se odnosi na uništavanje crvenih krvnih zrnaca.

[0177] Identitet: Kako se ovde koristi, termin "identitet", kada se odnosi na polipeptide ili nukleinske kiseline, odnosi se na uporedni odnos između sekvenci. Termin se koristi da opiše stepen povezanosti sekvenci između polimernih sekvenci i može uključivati procenat odgovarajućih monomernih komponenti sa poravnanjem praznina (ako postoje) kojima se bavi određeni matematički model ili računarski program (tj. „algoritmi“).Identitet srodnih polipeptida može se lako izračunati poznatim metodama. Takve metode uključuju, ali nisu ograničene na, one koje su prethodno opisali drugi (Lesk, A.M., ur., Računska molekularna biologija, Okford Universiti Press, Njujork, 1988; Smith, D.V., ur., Biokompjuting: projekti informatike i genoma, Academic Press, Nju Jork, 1993; Griffin, A. M. et al., ed., Computer Analysis of Sequence Data, 1 deo, Humana Press, New Jersey, 1994; von Heinje, G., Sequence Analysis in Molecular Biology, Academic Press, 1987; Gribskov, M. et al., ed., Sequence Analysis Primer, M. Stockton Press, New York, 1991; i Carillo et al., Applied Math, SIAM J, 1988, 48, 1073).

[0178] Inhibitor: Kako se ovde koristi, izraz "inhibitor" se odnosi na bilo koji agens koji blokira ili uzrokuje smanjenje pojave specifičnog događaja; ćelijski signal; hemijski put; enzimska reakcija; ćelijski proces; interakcija između dva ili više entiteta; biološki događaj; bolest; poremećaj; ili stanje.

[0179] Intravenozno: Kako se ovde koristi, izraz "intravenozno" se odnosi na područje unutar krvnog suda. Intravenska primena se tipično odnosi na doziranje jedinjenja u krv putem injekcije u krvni sud (npr., venu).

[0180] In vitro: Kako se ovde koristi, termin "in vitro" se odnosi na događaje koji se dešavaju u veštačkoj sredini (npr. u epruveti ili reakcionom sudu, u ćelijskoj kulturi, u Petrijevoj posudi, itd.), a ne u organizmu (npr. životinja, biljka ili mikrob).

[0181] In vivo: Kako se ovde koristi, izraz "in vivo" se odnosi na događaje koji se dešavaju u organizmu (npr. životinja, biljka ili mikrob ili njihova ćelija ili tkivo).

[0182] Laktamski most: Kako se ovde koristi, izraz "laktamski most" se odnosi na amidnu vezu koja formira most između hemijskih grupa u molekulu. U nekim slučajevima, laktamski mostovi se formiraju između aminokiselina u polipeptidu.

[0183] Linker: Termin "linker" kako se ovde koristi odnosi se na grupu atoma (npr.

10-1.000 atoma), molekula(e), ili druga jedinjenja koja se koriste za spajanje dva ili više entiteta. Linkeri se mogu pridružiti takvim entitetima kovalentnim ili nekovalentnim (npr. jonskim ili hidrofobnim) interakcijama. Linkeri mogu uključivati lance od dve ili više jedinica polietilen glikola (PEG). U nekim slučajevima, linkeri se mogu odcepiti.

[0184] Minutna zapremina: Kako se ovde koristi, izraz "minutna zapremina" se odnosi na zapreminu vazduha koji se udahne ili izdahne iz pluća subjekta u minuti.

[0185] Neproteinogeni: Kako se ovde koristi, izraz "neproteinogeni" odnosi se na bilo koji neprirodni protein, kao što su oni sa neprirodnim komponentama, kao što su neprirodne aminokiseline.

[0186] Pacijent: Kako se ovde koristi, "pacijent" se odnosi na subjekta koji može da traži ili mu je potreban tretman, koji zahteva lečenje, koji se leči, će dobiti lečenje ili subjekt koji je pod brigom obučenog stručnjaka za određenu bolest ili stanje.

[0187] Farmaceutska kompozicija: Kako se ovde koristi, izraz "farmaceutska kompozicija" se odnosi na kompoziciju koja sadrži najmanje jedan aktivni sastojak (npr., inhibitor C5) u obliku i količini koji omogućava da aktivni sastojak bude terapeutski efikasan.

[0188] Farmaceutski prihvatljiva: Izraz "farmaceutski prihvatljiva" se odnosi na jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa ljudskim tkivima ljudskih bića i životinjama bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika.

[0189] Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti: Izraz "farmaceutski prihvatljiv ekscipijens", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koji sastojak osim aktivnih agenasa (npr. R5000 ili njegove varijante) prisutnih u farmaceutskoj kompoziciji i imaju svojstva da su suštinski netoksični i neinflamatorni kod pacijenta. U nekim realizacijama, farmaceutski prihvatljiv ekscipijens je vehikulum sposoban da suspenduje ili rastvori aktivni agens. Ekscipijenti mogu uključivati, na primer: antiadherente, antioksidante, veziva, obloge, sredstva za kompresiju, dezintegrante, boje (boje), emolijense, emulgatore, punila (razblaživače), sredstva za stvaranje filma ili obloge, arome, mirisi, klizači (pojačivači protoka), maziva, konzervansi, štamparske boje, sorbenti, sredstva za suspenziju ili disperziju, zaslađivači i vode za hidrataciju. Primeri ekscipijenata uključuju, ali nisu ograničeni na: butilovani hidroksitoluen (BHT), kalcijum karbonat, kalcijum fosfat (dvobazni), kalcijum stearat, kroskarmeloza, umreženi polivinil pirolidon, limunska kiselina, krospovidon, cistein, etilceluloza, želatin, hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, magnezijum stearat, maltitol, manitol, metionin, metilceluloza, metil paraben, mikrokristalna celuloza, polietilen glikol, polivinil pirolidon, povidon, preželatinizovani skrob, propil paraben, retinil palmitat, šelak, silicijum-zvezdioksid, solicijum-dioksid oksid, silicijum-dioksid sorbitol, skrob (kukuruz), stearinska kiselina, saharoza, talk, titanijum dioksid, vitamin A, vitamin E, vitamin C i ksilitol.

[0190] Odeljak za plazmu: Kako se ovde koristi, izraz "odeljak za plazmu" se odnosi na intravaskularni prostor koji zauzima krvna plazma.

[0191] So: Kako se ovde koristi, izraz "so" se odnosi na jedinjenje sačinjeno od katjona sa vezanim anjonom. Takva jedinjenja mogu uključivati natrijum hlorid (NaCl) ili druge klase soli uključujući, ali ne ograničavajući se na acetate, hloride, karbonate, cijanide, nitrite, nitrate, sulfate i fosfate.

[0192] Uzorak: Kako se ovde koristi, termin "uzorak" se odnosi na alikvot ili deo uzet iz izvora i/ili dat za analizu ili obradu. U nekim realizacijama, uzorak je iz biološkog izvora kao što je tkivo, ćelija ili sastavni deo (npr. telesna tečnost, uključujući, ali ne ograničavajući se na krv, sluz, limfnu tečnost, sinovijalnu tečnost, cerebrospinalnu tečnost, pljuvačku, amnionsku tečnost, krv amnionske vrpce, urin, vaginalna tečnost i sperma). U nekim realizacijama, uzorak može biti ili se sastojati od homogenata, lizata ili ekstrakta pripremljenog od celog organizma ili podskupa njegovih tkiva, ćelija ili sastavnih delova, ili njihove frakcije ili dela, uključujući, ali ne ograničavajući se na, npr., plazma, serum, kičmena tečnost, limfna tečnost, spoljašnji delovi kože, respiratorni, crevni i genitourinarni trakt, suze, pljuvačka, mleko, krvna zrnca, tumori ili organi.U nekim realizacijama, uzorak je ili sadrži medijum, kao što je hranljiva supa ili gel, koji može sadržati ćelijske komponente, kao što su proteini. U nekim realizacijama, "primarni" uzorak je alikvot izvora. U nekim realizacijama, primarni uzorak se podvrgava jednom ili više procesa obrade (npr. odvajanje, prečišćavanje, itd.) kako bi se uzorak pripremio za analizu ili drugu upotrebu.

[0193] Potkožno: Kako se ovde koristi, izraz "potkožno" se odnosi na prostor ispod kože. Subkutana primena je davanje jedinjenja ispod kože.

[0194] Subjekat: Kako se ovde koristi, termin "subjekat" se odnosi na bilo koji organizam na kome se jedinjenje može primeniti, npr., u eksperimentalne, dijagnostičke, profilaktičke i/ili terapeutske svrhe. Tipični subjekti su životinje (npr. sisari kao što su miševi, pacovi, zečevi, svinje, primati koji nisu ljudi i ljudi).

[0195] U suštini: Kako se ovde koristi, termin "u suštini/u biti" se odnosi na kvalitativno stanje ispoljavanja ukupnog ili skoro potpunog obima ili stepena karakteristike ili svojstva od interesa. Neko sa uobičajenim veštinama u biološkim umetnostima razumeće da biološki i hemijski fenomeni retko, ako ikada, idu do kraja i/ili nastavljaju do potpunosti ili postižu ili izbegavaju apsolutni rezultat. Izraz "u suštini" se stoga ovde koristi da obuhvati potencijalni nedostatak kompletnosti svojstven mnogim biološkim i hemijskim fenomenima.

[0196] Terapijski efikasna količina: Kako se ovde koristi, izraz "terapijski efikasna količina" označava količinu agensa koja se isporučuje (npr. C5 inhibitor) koja je dovoljna, kada se daje subjektu koji pati ili je podložan bolesti, poremećaju i/ili stanju, radi lečenja, poboljšanja simptoma, dijagnostikovanja, sprečavanja i/ili odlaganja početka bolesti, poremećaja i/ili stanja.

[0197] Disajni volumen: Kako se ovde koristi, izraz "disajni volumen" se odnosi na normalnu zapreminu pluća izmeštenog između udisaja (u odsustvu bilo kakvog dodatnog napora).

[0198] Tmax: Kako se ovde koristi, izraz "Tmax" se odnosi na vremenski period tokom kojeg se održava maksimalna koncentracija jedinjenja u subjektu ili tečnosti. [0199] Lečenje: Kako se ovde koristi, izraz "lečenje" se odnosi na delimično ili potpuno ublažavanje, poboljšanje, poboljšanje, ublažavanje, odlaganje početka, inhibiranje progresije, smanjenje ozbiljnosti, i/ili smanjenje incidencije jednog ili više simptoma ili karakteristika određene bolesti, poremećaja i/ili stanja. Tretman se može dati subjektu koji ne pokazuje znake bolesti, poremećaja i/ili stanja i/ili subjektu koji pokazuje samo rane znake bolesti, poremećaj, i/ili stanje u cilju smanjenja rizika od razvoja patologije povezane sa bolešću, poremećajem i/ili stanjem.

[0200] Zapremina distribucije: Kako se ovde koristi, izraz "zapremina distribucije" ili "Vdist" odnosi se na zapreminu tečnosti koja je potrebna da sadrži ukupnu količinu jedinjenja u telu u istoj koncentraciji kao u krvi ili plazmi. Zapremina distribucije može odražavati stepen u kojem je jedinjenje prisutno u ekstravaskularnom tkivu. Velika zapremina distribucije odražava tendenciju jedinjenja da se veže za komponente tkiva u poređenju sa komponentama proteina plazme. U kliničkom okruženju, Vdist može se koristiti za određivanje pune doze jedinjenja da bi se postigla koncentracija tog jedinjenja u stabilnom stanju.

[0201] U patentnim zahtevima, članovi na englskom kao što su "a", "an" i "the" odnosno u prevodu jedan, jedan, i neki, mogu značiti jedan ili više od jednog osim ako nije naznačeno suprotno ili na drugi način očigledno iz konteksta. Tvrdnje ili opisi koji uključuju „ili“ između jednog ili više članova grupe smatraju se ispunjenim ako je jedan, više od jednog ili svi članovi grupe prisutni u, zaposleni u, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili proces, osim ako nije naznačeno naprotiv ili na drugi način evidentno iz konteksta. Pronalazak uključuje realizacije u kojima je tačno jedan član grupe prisutan, upotrebljen u, ili na drugi način relevantan za dati proizvod ili proces. Pronalazak uključuje realizacije u kojima je više od jednog, ili svi članovi grupe prisutni u, upotrebljeni u, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili proces.

[0202] Takođe se napominje da izraz „sastoji“ treba da bude otvoren i dozvoljava, ali ne zahteva uključivanje dodatnih elemenata ili koraka. Kada se ovde koristi izraz "sadrži", izrazi "koji se sastoji od" i "ili uključuje" su stoga takođe obuhvaćeni i otkriveni.

[0203] Tamo gde su dati opsezi, uključene su i krajnje tačke. Štaviše, treba razumeti da osim ako nije drugačije naznačeno ili na drugi način očigledno iz konteksta i razumevanja stručnjaka u ovoj oblasti, vrednosti koje su izražene kao opsezi mogu da pretpostavljaju bilo koju specifičnu vrednost ili podopseg unutar navedenih opsega u različitim realizacijama pronalaska, do desetine jedinice donje granice opsega, osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.

MODULATORI AKTIVNOSTI KOMPLEMENTA PRIMERI

Primer 1. Priprema vodenog rastvora R5000

[0204] Polipeptidi su sintetisani upotrebom standardnih Fmoc/tBu metoda čvrste faze. Sinteza je izvedena na Liberti automatizovanom mikrotalasnom peptidnom sintesajzeru (CEM, Matthevs NC) korišćenjem standardnih protokola sa Rink amidnom smolom, iako se mogu koristiti i drugi automatizovani sintesajzeri bez sposobnosti primene mikrotalasa. Sve aminokiseline su dobijene iz komercijalnih izvora. Upotrebljeni reagens za kuplovanje bio je 2-(6-hlor-1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3,-tetrametilamonijum heksafluorofosfat (HCTU), a baza je bila diizopropiletilamin (DIEA). Polipeptidi su uklanjani sa smole pomoću 95% TFA, 2,5% TIS i 2,5% vode tokom 3 sata i izolovani su precipitacijom etrom. Sirovi polipeptidi su prečišćeni na preparativnoj HPLC reversne faze koristeći C18 kolonu, sa gradijentom acetonitril/voda 0,1% TFA od 20%-50% tokom 30 min. Frakcije koje sadrže čiste polipeptide su sakupljene i liofilizovane, a svi polipeptidi su analizirani pomoću LC-MS.

[0205] R5000 (SEQ ID NO: 1) je sintetisan kao ciklični peptid koji sadrži 15 aminokiselina (od kojih 4 nisu prirodne aminokiseline) sa acetilovaniм N-terminusом i C-terminalnом karboksilnоm kiselinоm. C-terminalni lizin iz jezgra peptida ima modifikovani bočni niz, formirajući N- ε-(PEG24- γ-glutaminska kiselina-N- α-heksadekanoil) ostatak lizina. Ovaj modifikovani bočni niz uključuje polietilenglikolni spejser (PEG24) vezan za ostatak L-y glutaminske kiseline koji je derivatizovan palmitoil grupom. Ciklizacija R5000 vrši se preko laktamskog mosta između bočnih nizova L-Lis1 i L-Asp6. Sve aminokiseline u R5000 su L-amino kiseline. R5000 ima molekulsku težinu od 3562,23 g/mol i hemijsku formulu C172H278N24O55.

[0206] Slično eculizumab-u, R5000 blokira proteolitičko raskidanje C5 na C5a i C5b. Za razliku od eculizumab-a, R5000 se takođe može vezati za C5b i blokirati C6 vezivanje što sprečava naknadno sklapanje MAC-a.

[0207] R5000 je pripremljen kao vodeni rastvor za injekcije koji sadrži 40 mg/mL R5000 u formulaciji od 50 mM natrijum fosfata i 75,7 mM natrijum hlorida pri pH od 7,0 ± 0,3.

Primer 2. Administracija R5000 i skladištenje

[0208] R5000 se primenjuje supkutanom (SC) ili intravenskom (IV) injekcijom, a primenjena doza (volumen doze) se prilagođava na osnovu težine subjekta na bazi mg/kg. Ovo se postiže upotrebom seta fiksnih doza usklađenih sa skupom težinskih zagrada. Ukupno uzevši, doziranje ljudima uključuje širok težinski raspon od 43 do 109 kg. Subjekti koji imaju veću telesnu težinu (>109 kg) prilagođavaju se od slučaja do slučaja, uz konsultaciju sa medicinskim osobljem.

[0209] R5000 se skladišti na temperaturi od 2°C do 8°C [36° do 46°F]. Kada se jednom preda korisnicima, R5000 se čuva na kontrolisanoj sobnoj temperaturi (20°C do 25°C [68°F do 77°F]) do 30 dana i zaštićen je od izvora prekomernih temperaturnih fluktuacija kao što su povišena toplota ili izlaganje svetlosti. Poželjno je izbegavati skladištenje R5000 van sobne temperature. R5000 se može čuvati do 30 dana pod ovim uslovima.

Primer 3. Ispitivanje stabilnosti

[0210] Ispitivanje stabilnosti se sprovodi prema Međunarodnoj konferenciji o harmonizaciji (ICH) K1A „Stabilnost novih supstanci i proizvoda za lekove“. Uzorci iz vodenog rastvora Primera 1 drže se na 3 temperature: -20°C, 5°C i 25°C. Intervali testiranja su na 1, 2 i 3 meseca, a nakon toga svaka 3 meseca do 24 meseca. Uzorci se testiraju na izgled (npr. bistrinu, boju, prisustvo taloga), pH, osmolalnost, koncentraciju, čistoću, ciljnu aktivnost (npr. testom lize eritrocita), nivoe čestica, nivoe endotoksina i sterilnost. Uzorci se smatraju stabilnim ako, pri svakom od testiranih temperaturnih uslova, uzorci imaju jasan, bezbojan izgled bez vidljivih čestica; pH od 7 ± 0,3; osmolalnost od 260 do 340 mOsm/kg; čistoću ≥ 95% (i bez pojedinačnih nečistoća > 3%); ciljna aktivnost koja je uporediva sa referentnim standardom; nivoi čestica od ≤ 6.000 čestica po bočici za čestice od ≥ 10 µm i nivoi od ≤ 600 čestica po bočici za čestice od ≥ 25 µm; nivoi endotoksina ≤ 100 EU/mL; a nema rasta mikroorganizama.

Primer 4. Stabilnost prilikom smrzavanja-odmrzavanja

[0211] Sprovedena je studija za ispitivanje stabilnosti vodenog rastvora iz Primera 1 kada je izložen višestrukim ciklusima zamrzavanja i odmrzavanja.

1

R5000 nije pokazao degradaciju ili druge promene nakon 5 ciklusa zamrzavanja i odmrzavanja.

Primer 5. Procena vezivanja zasnovana na površinskoj plazmonskoj rezonanciji (SPR).

[0212] Interakcija vezivanja između R5000 i C5 je merena pomoću površinske plazmonske rezonance. R5000 vezuje C5 sa konstantom disocijacije ravnoteže (KD) od 0,42 nM na 25°C (n=3) i KD od 0,78 nM na 37°C (n=3). Podaci o ukupnoj površinskoj plazmonskoj rezonanciji, kada se kombinuju sa analizom ko-kristalne strukture visoke rezolucije, pokazuju da R5000 pokazuje specifičnu, jaku i brzu povezanost sa C5, kao i malu brzinu disocijacije.

Primer 6. Procena inhibicije raskidanja C5

[0213] R5000 je procenjen na inhibiciju raskidanja C5 na C5a i C5b. Inhibitorska aktivnost R5000 sa domaćinom C5 je važan faktor u izboru odgovarajućih životinjskih modela za bezbednost leka. Inhibicija raskidanja C5 je osnova za kliničku efikasnost eculizumab-a, trenutno jedine odobrene terapije za lečenje PNH. R5000 je pokazao dozno zavisnu inhibiciju formiranja C5a nakon aktivacije klasičnog puta (IC50 = 4,8 nM; slika 1) i dozno zavisnu inhibiciju C5b (mereno formiranjem C5b-9 ili MAC) posle aktivacije klasičnog i Alternativinih puteva komplementa (IC50 = 5,1 nM; slika 2).

Primer 7. Inhibicija hemolize crvenih krvnih zrnaca (RBC) izazvane komplementom

[0214] Test lize eritrocita je pouzdan metod za testiranje inhibitora komplementa u serumima/plazmi različitih vrsta i upoređivanje relativnih aktivnosti ispitivanog uzorka. Za procenu inhibitorne aktivnosti peptida upotrebljen je funkcionalni in vitro test, uključujući R5000, uz poređenje sa funkcijama komplementa kod nekoliko vrsta. Ovaj esej testira funkcionalnu sposobnost komponenti komplementa klasičnog puta za lizu eritrocita ovaca koji su prethodno obloženi zečjim anti-ovčijim RBC antitelima. Kada se eritrociti obloženi antitelima inkubiraju sa test serumom, aktivira se klasični put komplementa i nastaje hemoliza koja se prati oslobađanjem hemoglobina. Ovčija crvena krvna zrnca osetljiva na antitela su korišćena kao nosač za lizu u ovom testu, a serumi i/ili plazma iz različitih vrsta su korišćeni pri njihovoj unapred određenoj 50% aktivnosti hemolitičkog komplementa (CH50).

2

[0215] R5000 je pokazao snažnu inhibiciju komplementom izazvane hemolize eritrocita u serumu i/ili plazmi ljudi, primata koji nisu ljudi, i svinja (videti sledeću tabelu).

Tabela 1. Inhibicija hemolize crvenih krvnih zrnaca pomoću R5000 kod više vrsta

[0216] Slaba aktivnost je primećena u plazmi pacova (> 100 puta niža nego kod Cynomolgus majmuna) i mala ili pojedinačne SC doze od 0,4 mg/kg dovele su do izlaganja u plazmi (AUClast) od R5000 nakon iv i sc doza od 429,638 i 325,317 ng∗h/mL, respektivno. Maksimalna koncentracija u plazmi (Cmax) R5000 nakon IV i SC doziranja bila je 4,745,5 odnosno 2,490 ng/mL, respektivno, a Tmax nakon SC doziranja je 8 sati. Utvrđeno je da supkutana bioraspoloživost pri dozi od 0,4 mg/kg iznosi 75,7%. Srednja vrednost t1/2 bila je 182,5 i 177,5 sati za IV i SC doze, respektivno. Utvrđeno je da je srednji volumen distribucije povezan sa terminalnom fazom (Vz) i klirensom (CL) za IV dozu 175,5 mL/kg i 0,011 mL/min/kg. Ovaj profil je u suprotnosti od onog kod pacova kod kojih se nije očekivalo značajno vezivanje na osnovu in vitro studija aktivnosti i stoga je t1/2 R5000 bio 4-5 sati (videti sliku 5A).nikakva aktivnost nije primećena kod drugih glodara, pasa ili zečeva. Strukturni podaci dobijeni kokristalizacijom humanog C5 sa molekulom koji je usko povezan sa R5000 pružili su objašnjenje za selektivnost ove vrste kroz pažljivu analizu primarne aminokiselinske sekvence na mestu vezivanja leka za ciljni protein. Dok su sekvence primata 100% očuvane unutar ostataka odgovornih za interakcije R5000, postojale su značajne razlike u ovim ostacima kod glodara, a posebno kod pasa gde ne postoje identični delovi proteina. Ove razlike u aminokiselinama bile su dovoljne da objasne profile aktivnosti R5000 kod različitih vrsta.

[0217] Takođe je testirana sposobnost R5000 da inhibira komplementom posredovanu lizu eritrocita putem klasičnog i alternativnog puta aktivacije komplementa. Klasični put je procenjen pomoću dva različita testa koji su koristili ovčije eritrocite osetljive na antitela. U jednoj metodi, hemoliza je procenjena upotrebom 1% normalnog humanog seruma, dok su u drugom testu korišćeni 1,5% humani serumi osiromašeni u C5 koji sadrži 0,5 nM humanog C5. Inhibicija alternativnog puta aktivacije komplementa je procenjena pomoću zečijih eritrocita u 6% normalnom humanom serumu u odsustvu kalcijuma (videti sledeću tabelu).

Tabela 2. Inhibicija hemolize puteva aktivacije komplementa pomoću R5000

[0218] R5000 je pokazao komplementom posredovanu lizu u oba testa klasičnog puta kao i u testu alternativnog puta.

Primer 8. Farmakodinamika kod Cynomolgus majmuna

[0219] R5000 je snažan inhibitor komplementa kod primata, tako da su Cynomolgus majmuni odabrani za studije sa više doza da bi se procenila inhibitorna aktivnost R5000 na životinjskom modelu. Koncentracije leka u plazmi su određene pomoću LC-MS i aktivnost komplementa je analizirana pomoću testa lize RBC opisanog u prethodnom primeru. Ukupni rezultati ovih studija su pokazali da nivoi leka u plazmi majmuna treba da budu na nivou od 2,5 µg/mL ili višem da bi se postigla > 90% inhibicija aktivnosti komplementa (videti sliku 3).

[0220] R5000 je primenjivan Cynomolgus majmunima u višestrukim dnevnim dozama putem potkožnih injekcija (SC) u 7-dnevnoj studiji. Analizirani su uzorci krvi na hemolizu kao indikator aktivnosti komplementa u naznačenim vremenskim tačkama (za 1, 4 i 7 dan, podaci su prijavljeni kao dani nakon prve doze, ali pre doziranja odgovarajućeg dana) korišćenjem ex vivo testa lize eritrocita ovaca sa 1 % plazme u testu. Nivoi leka su određeni iz istog uzorka pomoću LC-MS metode specifične za R5000. Kao što je prikazano u sledećoj tabeli i na slici 4A i 4B, kada je R5000 davan dnevno tokom 7 dana u dozi od 0,21 ili 4,2 mg/kg, primećena je minimalna aktivnost komplementa (< 3% pre doze) tokom perioda doziranja.

4

Tabela 3. Srednje farmakodinamičke vrednosti

[0221] Hemoliza u ex vivo testu je održavana ispod 90% početne vrednosti nakon prve doze u grupi od 0,21 mg/kg, tokom perioda doziranja i do 24 sata nakon poslednje doze. Povećani nivoi hemolize su primećeni nakon što je tretman prekinut. Do 4. dana (264 sata na slici 4A) nakon primene poslednje doze, hemoliza je bila > 75% početne vrednosti. Ovo dobro koreliše sa izmerenim nivoima jedinjenja u plazmi tokom i posle doziranja (isprekidana linija na slici 4A). Drugoj grupi životinja u studiji sa više doza davana je dnevna doza od 4,2 mg/kg R5000. U ovoj grupi, hemoliza je u suštini bila potpuno inhibirana (na < 1%) tokom doziranja i ostala je ispod 3% 48 sati nakon poslednje doze (9. dan; 216 sati na slici 4B). Četiri dana nakon konačne doze (264 sata na slici 4B), hemoliza je dostigla približno 10% početne vrednosti. Ovaj rezultat je ponovo pokazao supresiju aktivnosti komplementa tokom perioda doziranja (u poređenju sa rezultatima pre doze) u korelaciji sa koncentracijama leka u plazmi i pokazao odličnu korelaciju između farmakokinetičkih i farmakodinamičkih vrednosti.

[0222] Inhibitorna aktivnost komplementa R5000 je procenjena u studiji sa ponovljenim dozama od 28 dana kod Cynomolgus majmuna pomoću ex vivo testa hemolize RBC. R5000 je davan dnevno putem supkutane injekcije tokom 28 dana u dozama od 0, 1, 2 ili 4 mg/kg/dan (1. dan: slika 7 i dan 28: slika 8). Rezultati su pokazali potpunu inhibiciju hemolize od 2 sata nakon primene prve doze do 28 dana doziranja, sa procentima hemolize od < 5% u grupama od 1, 2 i 4 mg/kg/dan, u poređenju sa > 90% u kontrolnoj grupi. grupa. Posle perioda oporavka od 28 dana, vrednosti uzorka su se vratile na skoro početne nivoe hemolize i primećeno je malo ili nikakva inhibicija sistema komplementa. Odsustvo aktivnosti inhibicije komplementa na kraju perioda oporavka ukazuje na uklanjanje leka iz životinja.

[0223] Inhibicija komplementa je takođe testirana kao deo studije sa ponovljenim dozama od 13 nedelja na Cynomolgus majmunu. Uzorci majmuna su analizirani ex vivo testom hemolize RBC. R5000 je davan dnevno putem supkutane injekcije tokom 13 nedelja u dozama od 0, 0,25, 1, 2 ili 10 mg/kg/dan. Slično 28-dnevnoj studiji, rezultati 13-nedeljne studije su pokazali potpunu inhibiciju hemolize ex vivo od 2 sata nakon primene prve doze do 13 nedelja doziranja, sa procentima hemolize od < 5% u grupama od 0,25, 1, 2 i grupe od 10 mg/kg/dan, u poređenju sa > 90% u kontrolnoj grupi. Posle perioda oporavka od 28 dana, vrednosti uzorka su se vratile na skoro početne nivoe hemolize i primećeno je malo ili nimalo inhibicije sistema komplementa. Odsustvo aktivnosti inhibicije komplementa na kraju perioda oporavka ukazuje na uklanjanje leka iz životinja.

Primer 9. Farmakologija bezbednosti

[0224] Nisu primećeni neželjeni efekti na parametre kardiovaskularnog, respiratornog ili centralnog nervnog sistema kada je R5000 primenjen Cynomolgus majmunima. Bezbednosni farmakološki parametri su procenjeni in vitro korišćenjem eseja humanog ether-a-go-go gena (hERG) i in vivo u majmunima za kardiovaskularne, respiratorne i CNS parametre. Farmakološka procena bezbednosti CNS sprovedena je kao deo 28-dnevne toksikološke studije nehumanih primata. Rezime farmakoloških studija bezbednosti sa R5000 je predstavljen u sledećoj tabeli.

Tabela 4. Rezultati farmakoloških studija bezbednosti

[0225] In vitro efekat R5000 na struju kloniranih hERG kalijumovih kanala (surogat za IKr, brzo aktivirajuću, odloženu ispravljačku srčanu kalijumovu struju) izražen u ćelijama 293 ljudskog embrionalnog bubrega je procenjen upotrebom paralelnog sistema patch-clamp. Najviša testirana koncentracija (300 µM) nije rezultirala inhibicijom hERG-a većom od 50%, i stoga je procenjeno da je IC50 za R5000 veći od 300 µM (1,07 mg/mL).

[0226] Farmakološka studija o kardiovaskularnoj i respiratornoj bezbednosti in vivo sprovedena je na svesnim mužjacima Cynomolgus majmuna. Nije bilo smrtnih slučajeva niti značajnih kliničkih događaja nakon primene R5000. Nisu primećeni efekti povezani sa R5000 na morfologiju i potpune intervale otkucaja srca ni u jednoj od doza R5000 (2 ili 10 mg/kg dan 1 i dan 8). Uočene su samo normalne, cirkadijalne varijacije na elektrokardiogramima i telesnim temperaturama (uporedivo sa očitanjima tretiranim nosačem). Pored toga, nije bilo promena u pulsu niti arterijskom krvnom pritisku koje bi se mogle pripisati R5000 pri dozama do 10 mg/kg i pri nivoima leka u plazmi do 79,1 µg/mL.

[0227] Nije bilo promena ni u jednom od respiratornih parametara (brzina disanja, disajni volumen i minutni volumen) nakon tretmana sa R5000 u dozi od 2 ili 10 mg/kg u poređenju sa pre-dozom ili sa vrednostima dobijenim nakon primene nosača.

[0228] R5000 je primenjivan dnevnom potkožnim injektiranjem Cynomolgus majmunima u dozi od 1, 2 ili 4 mg/kg/dan i proučavani su njegovi efekti na centralni nervni sistem (CNS). Parametri za evaluaciju uključivali su opšti stav, ponašanje, motoričke funkcije, kranijalne nerve, propriocepciju, posturalne reakcije i kičmene nerve. Nisu primećene neurološke promene nakon tretmana sa R5000.

[0229] U zaključku, supkutana (SC) injekcija R5000 u nivoima doze do 10 mg/kg koja je rezultirala Cmax od 79,1 µg/mL dobro se podnosila i nije rezultovala bilo kakvim štetnim efektima na kardiovaskularni sistem (bez povišenog rizika od produženja QT intervala, mera odložene ventrikularne repolarizacije), respiratorni ili centralni nervni sistem svesnih Cynomolgus majmuna.

Primer 10. Farmakokinetika i metabolizam lekova kod životinja

[0230] Studije kojima procenjuju in vitro i in vivo apsorpcija, distribucija, metabolizam i izlučivanje R5000 su navedene u sledećoj tabeli. U sledećoj tabeli, CIP se odnosi na enzim citohrom P450, a UGT na enzim UDP-glukuronoziltransferazu.

Tabela 5. R5000 ne-kliničke studije metabolizma i farmakokinetike (DMPK)

[0231] Iako je R5000 visoko stabilan in vitro, u plazmi pacova, majmuna i ljudi, farmakokinetički profil nakon intravenske (IV) i SC primene bio je drugačiji kod majmuna u poređenju sa pacovima (slika 5A). Kinetika spore eliminacije viđena kod majmuna bila je u velikoj meri vođena interakcijom visokog afiniteta sa ciljnim proteinom C5 i drugim proteinima plazme (npr. albuminom). Nedostatak specifičnog vezivanja za cilj kod pacova je doveo do brže eliminacije R5000, što se odrazilo na terminalni t1/2 od 4-5 sati u poređenju sa > 3 dana kod majmuna.

[0232] Ukupno uzevši, preklinički podaci su pokazali visoku bioraspoloživost (> 75%) R5000 nakon supkutane primene. Kod majmuna, maksimalne koncentracije u krvi (tmax) se postižu između 8 i 16 sati nakon SC primene, što ukazuje na relativno sporu apsorpciju iz potkožnog prostora. Zbirni podaci, uključujući zapreminu distribucije, visok stepen vezivanja za proteine plazme i podelu u odeljak plazme u punoj krvi ukazuju na to da je R5000 pretežno ograničen na prostor plazme, sa malom distribucijom u tkivima.

Apsorpcija

[0233] Farmakokinetičke (PK) studije su sprovedene na pacovima (jedna doza) i Cynomolgus majmunima (jednokratna i višestruka doza) korišćenjem R5000 u fosfatnim puferskim formulacijama fiziološkog rastvora (pH 7,0).

[0234] Za studije na pacovima, pojedinačna doza R5000 je ubrizgana supkutano mužjacima Sprague Davlei pacova (n=3) u dozi od 1 mg/kg, ili 10 mg/kg. Izmereni farmakokinetički (PK) parametri su uključivali Cmax (maksimalna koncentracija leka u plazmi), Tmax (vreme potrebno da se postigne maksimalna koncentracija u plazmi po primeni leka), t1/2 (poluživot), AUC0-last (površina ispod krive koncentracije u plazmi-vreme između prve i poslednje doze) i AUC0-∞ (površina ispod krive koncentracija-vreme u plazmi od vremena nula do beskonačnosti). Rezultati su sumirani u sledećoj tabeli.

Tabela 6. Farmakokinetički parametri

[0235] Prosečna poslednja vrednost AUC0-last pri 1 mg/kg i 10 mg/kg ukazuje na izloženost proporcionalnu primenjenoj dozi.

[0236] Za studije na primatima, farmakokinetička analiza je sprovedena kod Cynomolgus majmuna nakon pojedinačne intravenske ili supkutane doze od 0,4 ili 0,5 mg/kg. Izmereni farmakokinetički (PK) parametri su uključivali klirens (CL), Vz (volumen distribucije), Vss (prividni volumen distribucije u mirovanju), Cmax (maksimalna koncentracija leka u plazmi), Tmax (vreme potrebno da se postigne maksimalna koncentracija u plazmi nakon primene leka), t1/2 (poluživot), AUC0-last (površina ispod krive koncentracije leka u odnosu na vreme između prve i poslednje doze), AUC0-∞ (površina ispod krive koncentracije leka u odnosu na vreme od nule do beskonačnosti) , i %F(razlomci). Rezultati su predstavljeni u sledećoj tabeli; NA ukazuje da nije primenljivo.

Tabela 7. Farmakokinetički parametri kod Cynomolgus majmuna

[0237] Pojedinačne SC doze od 0,4 mg/kg dovele su do koncentracije R5000 u plazmi (AUClast) posle iv i sc doza od 429.638 i 325.317 ng∗h/mL, redom.

Maksimalna koncentracija u plazmi (Cmax) R5000 posle IV i SC doziranja bila je 4.745,5 odnosno 2,490 ng/mL, respektivno, a Tmax nakon SC doziranja je 8 sati. Utvrđeno je da supkutana bioraspoloživost pri dozi od 0,4 mg/kg iznosi 75,7%. Srednja vrednost t1/2 bila je 182,5 i 177,5 sati za IV i SC doze, respektivno. Utvrđeno je da je srednji volumen distribucije povezan sa terminalnom fazom (Vz) i klirensom (CL) za IV dozu 175,5 mL/kg i 0,011 mL/min/kg. Ovaj profil je u suprotnosti od onog kod pacova kod kojih se nije očekivalo značajno vezivanje na osnovu in vitro studija aktivnosti i stoga je t1/2 R5000 bio 4-5 sati (videti sliku 5A).

[0238] Farmakokinetičke studije ponovljenih doza na majmunima uključivale su dva nivoa supkutane doze od 0,21 i 4,2 mg/kg primenjene svaki dan tokom 7 dana, sa procenom PK svakog dana i 14 dana nakon poslednje doze. U studijama sa višestrukim dozama sprovedenim na majmunima, Cmax se povećavao sa narednim dozama sve dok se ne postigne stabilan maksimum i najniži nivo leka (posle 2 do 3 doze; videti slike 4A, 4B i 5B). Koncentracije u plazmi u grupama sa dozama od 0,2 i 4 mg/kg dostigle su prosečnu Cmax posle prve doze od 2.615 i 51.700 ng/mL, redom. Cmax se povećavao u obe grupe sa svakom uzastopnom dozom zbog dugog poluživota molekula. Do četvrte doze, srednja vrednost Cmax za grupe sa dozom od 0,21 i 4,2 mg/kg bila je 5.305 i 68.750 ng/mL, ili 2,0 odnosno 1,3 puta veće od prve doze, redom.

[0239] Sve u svemu, apsorpcija se može okarakterisati kao spora iz SC prostora, sa visokom bioraspoloživošću SC doze.

Distribucija

[0240] Vezivanje za proteine plazme in vitro bilo je > 99,9% u plazmi ljudi, pacova i majmuna, kao što je utvrđeno ravnotežnom dijalizom pri koncentraciji leka od 10 i 100 µM. Visoko vezivanje za proteine i ograničen volumen distribucije ukazuju na to da R5000 može biti primarno ograničen na odeljak plazme i da se ne distribuira lako u perivaskularni prostor.

Particionisanje u krvi

[0241] Izračunat je odnos leka podeljenog između plazme i crvenih krvnih zrnaca, pošto je to kritičan parametar potreban za procenu farmakokinetičkih svojstava leka (pogledajte sledeću tabelu). U sledećoj tabeli, RBC označava crvena krvna zrnca, P označava plazmu, a WB označava punu krv.

Tabela 8. Particionisanje R5000 u krvi

[0242] U testovima raspodele pune krvi pronađeno je da je R5000 pretežno prisutan u frakciji plazme i nije pokazao značajnu distribuciju u frakciji eritrocita.

Farmakokinetička interakcija lekova

[0243] Ciklosporin (CsA) je lek koji se obično daje pacijentima sa paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom (PNH). Potencijal za interakciju lek-lek između R5000 i CsA je procenjen kod Cynomolgus majmuna jer je verovatno da će se R5000 istovremeno primenjivati sa CsA kod pacijenata sa PNH uključenim u planirana klinička ispitivanja.

[0244] R5000 (2 mg/kg, sc, pojedinačna doza) i ciklosporin A (CsA) (15 mg/kg, sc, pojedinačna doza) su primenjivani nezavisno ili zajedno kod dva mužjaka majmuna, a nivoi u plazmi su određeni pomoću LC-MS/MS metoda . Nisu primećene značajne promene u izloženosti bilo kom leku u plazmi, što ukazuje na nizak potencijal za interakciju lek-lek (pogledajte sledeću tabelu). U sledećoj tabeli, Cmax označava maksimalnu koncentraciju leka u plazmi, a AUC označava površinu ispod krive koncentracije u plazmi-vreme, „a“ susedna razlika u izloženosti označava odnos izloženosti za R5000+ciklosporin/R5000. "b" pored razlike u izloženosti odnosi se na odnos izloženosti za ciklosporin+R5000/ciklosporin.

Tabela 9. Efekti istovremene primene

1

[0245] Nisu primećene promene u hemijskim parametrima seruma uključujući bilirubin (endogeni supstrat OATP1 i OATP1B3), što ukazuje da nije bilo aditivnog efekta CsA i R5000 na ove transportere. Ukratko, istovremena primena CsA sa R5000 imala je nizak potencijal za interakciju lek-lek, i dobro se tolerisala bez uticaja na serumske hemijske parametre na nivoima u plazmi blizu ili iznad onih koji se očekuju u kliničkoj upotrebi.

Primer 11. Farmakokinetičko/farmakodinamičko modelovanje i simulacija farmakokinetike kod ljudi

[0246] PK/PD model je konstruisan in silico koristeći in vivo podatke dobijene ogledima na majmunima Cynomolgus. Poklapanje i tačnost modela su procenjeni upoređivanjem simuliranih rezultata sa novogenerisanim eksperimentalnim podacima. Kada je potvrđen kod majmuna, konačni model je korišćen za predviđanje ljudske farmakokinetike primenom alometrijskog prilagođavanja na njegove parametre. Dobijene simulacije podržavaju projektovani interval doziranja od jednom dnevno ili ređe, kod ljudi, pri čemu dnevne doze od 0,1 mg/kg održavaju skoro 90% ciljne inhibicije u stabilnom stanju (stanju mirovanja) (videti sliku 6). Zbog dugog poluživota R5000, potrebno je nekoliko doza da bi se dostigli konačni vršni i najniži nivoi leka. Očekuje se da će Cmax u plazmi biti približno 3 puta veće nakon nedelju dana dnevnog doziranja u odnosu na prvu dozu, kada nivoi leka dostignu stabilno stanje.

Primer 12. Efekti kod ljudi: Dizajn studije kliničkog ispitivanja Faze I.

[0247] Sprovedena je randomizovana, kontrolisana placebom, dvostruko slepa, jednostruko rastuća dozna i studija višestrukih doza da bi se procenila bezbednost i farmakokinetika R5000 kod zdravih dobrovoljaca, uzrasta 18-65 godina (isključujući pedijatrijske i starije osobe). U prvom delu studije, pojedinačna rastuća doza (SAD) R5000, ili placebo, primenjena je odvojenim grupama ispitanika. U drugom delu studije, kohorti sa višestrukim dozama (MD) primenjeno je 0,2 mg/kg R5000 (n=4) ili placebo (n=2) svakog dana tokom 7 dana. Sve doze R5000 su davane supkutanom injekcijom sa zapreminom doze koja je određena zahtevima za dozu kohorte i težinom subjekta. Ispitanici koji su bili trudni ili dojili, kao i svi subjekti sa sistemskom infekcijom ili kolonizacijom Neisseria meningitides, bili su isključeni. Pored toga, svi subjekti su primili profilaksu ciprofloksacinom, a ispitanici u kohorti sa najvećom jednostrukom

2

dozom (tj.0,4 mg/kg), kao i subjekti u kohorti sa višestrukim dozama, vakcinisani su protiv Neisseria meningitides najmanje 14 dana pre studije.

[0248] Ukupno 22 subjekta je uključeno u kohortnu studiju sa jednom dozom (n=14), od kojih su 2 primila R5000 u dozi od 0,05 mg/kg, po 4 u dozi od 0,10, 0,20 i 0,40 mg/kg. Ove doze su odabrane korišćenjem procenjenih bezbednosnih margina kod ljudi (videti prethodni primer i sledeću tabelu). U sledećoj tabeli, Cmax označava maksimalnu koncentraciju leka u plazmi, a AUC0-last označava površinu ispod krive koncentracija u plazmi-vreme između prve i poslednje doze.

Tabela 10. Poređenja izloženosti plazmi nakon višestrukih doza pri NOAEL kod životinja i najveće predložene pojedinačne kliničke doze od 0,8 mg/kg

[0249] Početna doza od 0,05 mg/kg je znatno ispod 1/10 procene humane ekvivalentne doze (HED). Ova doza se smatra odgovarajućom jer se pri ovoj dozi nije očekivala značajna inhibicija komplementa. Sistemska izloženost za koju se predviđa da će pratiti najveću predloženu pojedinačnu SC dozu u ispitivanju, 0,8 mg/kg, premašuje se konačnom izloženosti (28. dan) na NOAEL kod majmuna.

[0250] U kohortu sa višestrukim dozama, uključeno je 6 subjekata, od kojih su 4 primala R5000 (0,2 mg/kg), a 2 su primala placebo.

Primer 13. Lečenje pacijenata sa PNH

[0251] Pacijenti koji pate od PNH leče se pomoću R5000 u efektivnoj dozi od 0,1 mg/kg/dan do 40 mg/kg/dan. Kod ovih pacijenata primećena je inhibicija komplementa veća od ili jednaka 90% i dostiže se Cmax od 3,1 µg/mL.

Primer 14. Klinička studija sa višestrukim dozama R5000

[0252] Sprovedena je klinička farmakološka studija Faze 1 sa višestrukim dozama na zdravim ljudskim dobrovoljcima dizajnirana da se proceni bezbednost, podnošljivost, farmakokinetika i farmakokinetika i farmakodinamika R5000 nakon supkutanih (SC) injekcija jednom dnevno tokom 7 (dana). Studija je bila jednocentrična, randomizovana, dvostruko slepa i kontrolisana placebom (PBO). Subjekti su primali dnevne SC doze od 0,2 mg/kg R5000 ili odgovarajući PBO tokom 7 dana dok su bili smešteni u jedinici kliničke farmakologije. Bezbednost je procenjena intenzivnim kliničkim praćenjem i uzimani su dnevni uzorci krvi neposredno pre doziranja, kao i 3 sata i 6 sati posle svake dnevne doze u cilju određivanja koncentracije R5000 tečnom hromatografijom/masenom spektroskopijom visoke rezolucije i sposobnost inhibicije komplementom posredovane lize eritrocita u ex vivo testu hemolize antitelima senzibilizovanih ovčijih eritrocita.

[0253] U studiju je uključeno ukupno 6 ispitanika (4 su primala 5000 R i 2 su primala PBO). Demografija ispitanika prikazana je u sledećoj tabeli.

Tabela 11. Demografija ispitanika

[0254] Kao što se vidi iz sledeće tabele i srodnoj slici 9A (koja pokazuje procenat hemolize i koncentraciju u plazmi tokom 7 dana), koncentracije u plazmi su ukazivale na stalno rastuću izloženost tokom 7 dana doziranja. Iz ovih podataka, utvrđeno je da je poluživot R50007 dana. Nivoi u plazmi su se vratili na oko 2000 ng/ml do 15. dana i oko 1000 ng/ml do 21. dana (slika 9B).

Tabela 12. Koncentracije u plazmi R5000

4

[0255] PK parametri R5000 posle SC primene višestrukih doza (0,2 mg/kg/dan) tokom 7 dana su predstavljeni u sledećoj tabeli. Izmereni farmakokinetički (PK) parametri uključuju klirens (CL), Cmax (maksimalna koncentracija leka u plazmi), Tmax (vreme potrebno da se postigne maksimalna koncentracija u plazmi nakon primene leka), t1/2 (poluživot), AUCtau (površina ispod krive koncentracija-vreme u plazmi od vremena nula do 24 sata), AUC0-inf (površina ispod krive koncentracijavreme u plazmi od vremena nula do beskonačnosti), Vz/F (prividni volumen distribucije), Kel (brzina eliminacije) i F( razlomci).

Tabela 13. Rezime PK parametara

[0256] Srednji Cmax prvog dana i AUCtau bili su 2533 ng/mL i 50,010 ng∗h/mL, redom, što je u skladu sa rezultatima iz kohorte sa jednom dozom od 0,2 mg/kg tokom istog perioda posle doze. Nakon dnevne SC primene tokom 7 dana, Cmax i AUCtau povećani su približno 2,9 puta (srednji dan 7 Cmax = 7290 ng/mL) i 3,0 puta (srednji dan 7 AUCtau = 151.300 ng∗h/mL), redom. Srednje vreme do maksimalne koncentracije u plazmi (Tmax) Dana 7 bilo je 3,0 sata, što je bilo u skladu sa Tmax nakon SC primene pojedinačne doze (medijan Tmax Dana 1 = 3,0 - 4,6 sati). Ovo ukazuje na konstantnu stopu apsorpcije R5000 sa ponovljenim doziranjem. Srednji vidljivi ukupni klirens iz tela Dana 7 R5000 (Dan 7 CL/F = 1,3 mL/h/kg) bio je neznatno povećan u odnosu na ukupni telesni klirens nakon jedne SC doze od 0,2 mg/kg [pojedinačna rastuća doza (SAD) 0,2 mg/kg CL/F = 0,29 mL/h/kg]. Međutim, konstanta brzine eliminacije (Kei) R5000 bila je konzistentna nakon pojedinačne i ponovljene doze (0,2 mg/kg SAD srednja Kei = 0,0041b<-1>; 0,2 mg/kg MD srednja 7. dan Ke1 = 0,0043h<-1>) što ukazuje da se klirens R5000 ne menja značajno pri ponovljenom doziranju. Prividni volumen distribucije R5000 (Vz/F) pokazao je određeni porast sa primenom višestrukih doza R5000 (0,2 mg/kg SAD srednja vrednost Vz/F = 71,4 mL/kg; 0,2 mg/kg MD srednji Dan 7 Vz/F = 311,6 mL/kg). Međutim, Dan 7 Vz/F za R5000 je i dalje bio manji od ukupne vode u telu što sugeriše da se R5000 ne distribuira u ekstravaskularni prostor nakon ponovljene SC primene.

Tabela 14. Analiza hemolize

[0257] Srednji procenat inhibicije hemolize u poređenju sa početnom vrednosti dostigao je ≥ 95% počevši od prve vremenske tačke nakon doziranja, 3 sata nakon doziranja prvog dana, i nastavio se tokom 7 dana doziranja (pogledajte sledeću tabelu). Svi pojedinačni subjekti su pokazali ≥ 90% smanjenje hemolize u svim vremenskim tačkama. Uočeno je da je hemoliza 8. dana (24 sata nakon primanja poslednje doze) kod svih ispitanika ≤ 3%. Hemoliza se vratila na nivoe pre doze u roku od dve nedelje nakon poslednje doze.

[0258] Studija sugeriše da će male dnevne doze postići stabilne nivoe pogodne za potpunu i trajnu inhibiciju komplementa i supresiju hemolize. Studija takođe sugeriše da doziranje jednom nedeljno može biti dovoljno da inhibira aktivnost komplementa i smanji hemolizu kod ljudi.

[0259] Aktivnost komplementa u uzorcima plazme ispitanika određena je analizom WIESLAB® ELISA (Euro Diagnostica, Malme, Švedska). Ovaj test meri alternativni put aktivacije komplementa. Kako što je izmereno ovim testom, supresija aktivnosti komplementa bila je brza, potpuna i održavana tokom perioda doziranja kod svih subjekata (videti sliku 10A i sledeću tabelu). U sledećoj tabeli, SEM pokazuje standardnu grešku srednje vrednosti.

Tabela 15. % aktivnosti komplementa u studiji višestrukih doza

[0260] Primećeno je da je aktivnost komplementa 8. dana (24 sata nakon poslednje doze) ≤ 5% kod svih subjekata. Aktivnost komplementa se vratila na nivoe pre doze u roku od dve nedelje nakon poslednje doze (slika 10B).

[0261] R5000 je bio bezbedan i dobro se podnosio kod zdravih dobrovoljaca sa izuzetkom pojedinog eritema na mestu injekcije (ISE) kod 3 od 6 ispitanika, ali bez bola, induracije, osetljivosti ili otoka. Sve je rešeno spontano. Nisu uočene klinički značajne promene u vitalnim znacima, kliničkim laboratorijskim parametrima (hematologija, hemija krvi, koagulacija i urinaliza), fizičkim pregledima i EKG.

[0262] R5000 je izmeren u grupi sa dozom od 0,20 mg/kg u grupi sa više doza u studiji (videti sledeću tabelu). U sledećoj tabeli, Cmax se odnosi na maksimalnu koncentraciju leka u plazmi, a AUC0-24 se odnosi na površinu ispod krive koncentracije u plazmi od vremena nula do 24 sata.

Tabela 16. Srednja izloženost R5000

Primer 15. Klinička studija Faze 1 sa jednom rastućom dozom R5000

[0263] Sprovedena je klinička farmakološka studija Faze 1 sa pojedinačnim rastućim dozama na zdravim ljudskim dobrovoljcima dizajnirana da proceni bezbednost, podnošljivost, farmakokinetiku i farmakodinamiku R5000 nakon supkutanog (SC) injektiranja. Studija je bila randomizovana, dvostruko slepa i kontrolisana placebom (PBO) sa 4 kohorte SC sa jednom rastućom dozom smeštene u jedinici kliničke farmakologije tokom 3 dana. Svi subjekti su primili 1 dozu R5000 prvog dana. Četiri subjekta (2 koja su primala R5000 i 2 koja su primala PBO) su primila najniži nivo doze (0,05 mg/kg) i na 6 ispitanika po kohorti (4 su primala R5000 i 2 su primala PBO) su uzastopno primenjene 3 veće doze (0,1, 0,2 i 0,4 mg/kg). Demografske informacije o subjektu date su u sledećoj tabeli.

Tabela 17. Demografija ispitanika

[0264] Bezbednost je procenjena intenzivnim kliničkim praćenjem, a uzimani su česti uzorci krvi za određivanje koncentracija R5000 tečnom hromatografijom/masenom spektroskopijom visoke rezolucije i sposobnost da se inhibira komplementom posredovana liza eritrocita u ex vivo testu hemolize ovčijih eritrocita senzibilizovanih antitelima.

[0265] Farmakokinetički (PK) parametri izmereni u ovoj studiji uključuju klirens (CL), Cmax (maksimalna koncentracija leka u plazmi, slika 11A), Tmax (vreme potrebno da se postigne maksimalna koncentracija u plazmi nakon primene leka), t1/2 (poluživot) , AUC0-24 (područje ispod krive koncentracija u plazmi-vreme od vremena nula do 24 sata; videti sliku 11B za koncentraciju u plazmi tokom vremena), AUC0-inf (područje ispod krive koncentracije u plazmi-vreme od vremena nula do beskonačnosti; vidi sliku 11B za koncentraciju u plazmi tokom vremena), Vz (prividni volumen distribucije tokom terminalne faze), K (brzina eliminacije) i F (frakcije). Rezultati za svaki parametar su predstavljeni u sledećoj tabeli.

Tabela 18. Farmakokinetički parametri

[0266] Sve kohorte su postigle nivoe Cmax u skladu sa predviđenim vrednostima iz in silico PK modela generisanog korišćenjem podataka iz studija ne-humanih primata (NHP). Koncentracije u plazmi jednog SC injektiranja pokazale su linearnu vezu između Cmax i nivoa doze (slika 11A) i potvrđena je izloženost zavisna od doze na svim nivoima doze (slika 11B). Srednja maksimalna koncentracija u plazmi (Cmax) kretala se od 1010 do 5873 ng/mL u različitim dozama. Srednja površina ispod krive koncentracija-vreme od vremena 0 do 24 sata nakon doze (AUC0-24) kretala se od 21.440 do 112.300 ng∗h/mL u različitim dozama. Ovi rezultati ukazuju da sa povećanjem doze R5000 dolazi do približno proporcionalnog povećanja koncentracije u plazmi (Cmax) i izloženosti (AUC0-24). Srednje vreme do maksimalne uočene koncentracije u plazmi (tmax) kretalo se od 3,0 do 4,6 sati u različitim dozama što ukazuje da R5000 pokazuje srednju brzinu apsorpcije iz SC prostora u centralni (krvni) odeljak. Srednji prividni ukupni telesni klirens (CL/F) nakon primene R5000 bio je nizak i kretao se od 0,2481 do 0,4711 mL/h/kg. Srednji poluživot (t1/2) bio je konzistentan u svim nivoima doze i kretao se od 155,6 do 185,4 sata. Srednji prividni ukupni volumen distribucije (Vz/F) u terminalnoj fazi nakon ekstravaskularne primene kretao se od 61,89 do 105,1 mL/kg što ukazuje da je R5000 lokalizovan prvenstveno u cirkulišućoj krvi sa minimalnom ekstravaskularnom distribucijom. Utvrđeno je da je približni t1/2 u svim kohortama 7 dana.

[0267] R5000 je takođe pokazao brzu inhibiciju hemolize zavisnu od doze [direktna hemoliza (slika 12A) i %CH50 (slika 12B) i liza crvenih krvnih zrnaca na 1% plazme tokom vremena (slika 12C)] i supresiju aktivnosti komplementa (kako je utvrđeno pomoću WIESLAB® ELISA kod svih subjekata nakon jedne doze, videti sliku 13). Maksimalni farmakodinamički efekat je primećen otprilike 3 sata posle doziranja. Rezultati su pokazali da je pri maksimalnoj koncentraciji u plazmi, maksimalni procenat inhibicije hemolize u poređenju sa početnom stanjem dostigao > 90% za kohorte doze od 0,1, 0,2 i 0,4 mg/kg i 60% za kohortu sa najnižom dozom (0,05 mg/kg). Inhibicija hemolize zavisna od doze u trajanju do 4 dana primećena je za kohorte doza od 0,1, 0,2 i 0,4 mg/kg. Značajno je da je srednja vrednost hemolize ostala iznad početne vrednosti do 2 dana u kohorti od 0,05 mg/kg, do 4 dana u kohorti od 0,1 mg/kg i do 7 dana u kohorti od 0,2 i 0,4 mg/kg.

[0268] Slično, analiza aktivnosti komplementa je pokazala da je inhibicija aktivnosti komplementa ostala vrlo izražena tokom 4 dana nakon injekcije od 0,4 mg/kg (videti sliku 13). Uzorci ljudske plazme uzeti od subjekata koji su primili injekciju od 0,4 mg/kg podvrgnuti su WIESLAB® ELISA (Euro Diagnostica, Malme, Švedska) analizi. Ovaj test meri alternativni put aktivnosti komplementa. Kako je izmereno ovim testom, aktivnost komplementa je smanjena na 3% 3 sata nakon doziranja i ostala je ispod 13% 96 sati nakon primene R5000.

[0269] Pojedinačne SC doze od R5000 bile su bezbedne i dobro se tolerisale kod zdravih dobrovoljaca. ISE je primećen kod 3 subjekta pri najvišoj dozi i bio je blag (stepen 1) bez bola, induracije, osetljivosti ili otoka i spontano se povukao u roku od 2-5 sati nakon injekcije. Nisu primećene klinički značajne promene u vitalnim znacima, kliničkim laboratorijskim parametrima, fizičkim pregledima i EKG-ima.

[0270] Ova studija sugeriše da male dnevne doze mogu postići nivoe ravnoteže pogodne za > 80% supresije hemolize i da doziranje jednom nedeljno može biti

1

dovoljno. Konkretno, 0,2 mg/kg može rezultirati potpunom supresijom aktivnosti komplementa i potpunom inhibicijom hemolize.

2

Claims (14)

Patentni zahtevi

1. Vodena farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži: polipeptid inhibitora C5 sa osnovnom sekvencom SEQ ID NO: 1; so; i pufer.

2. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time, što so obuhvata natrijum hlorid.

3. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 1 ili 2, naznačena time, što pufer obuhvata natrijum fosfat.

4. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 2 ili 3, naznačena time, što farmaceutska kompozicija sadrži natrijum hlorid u koncentraciji od 25 mM do 100 mM.

5. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 3 ili 4, naznačena time, što što farmaceutska kompozicija sadrži natrijum fosfat u koncentraciji od 10 mM do 100 mM.

6. Farmaceutska kompozicija prema jednom od zahteva 1-5, naznačena time, što:

(a) polipeptid je prisutan u koncetraciji od 1 mg/mL do 400 mg/mL;

(b) vrednost pH iznosi od 6.5 do 7.5;

(c) polipeptid se vezuje za C5 sa ravnotežnom konstantom disocijacije (KD) od 0,1 nM do 1 nM;

(d) polipeptid blokira proizvodnju C5a nakon aktivacije alternativnog puta aktivacije komplementa; ili

(e) polipeptid blokira proizvodnju membranskog napadačkog kompleksa (MAC), nakon aktivacije klasičnog puta, alternativnog puta ili lektinskog puta aktivacije komplementa.

7. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 6, naznačena time, što polipeptid je prisutan u koncentraciji od 40 mg/mL.

8. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 6 ili 7, naznačena time, što farmaceutska kompozicija sadrži 75.7 mM natrijum hlorida i 50 mM natrijum fosfata, i pH kompozicije iznosi 6.7-7.3.

9. Farmaceutska kompozicija prema jednom od zahteva 1-8 za upotrebu kao lek.

10. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 9, naznačena time, što farmaceutska kompozicija je administrirana subkutano (SC) ili intravenozno (IV).

11. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 9 ili 10, naznačena time, što subjekat nije nije kolonizovan sa Neisseria meningitides.

12. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema jednom od zahteva 9-11, naznačena time, što je subjektu istovremeno administriran jedan ili više antibiotika u cilju minito smanjivanja rizika od infekcija se Neisseria meningitides na minimum, pri čemu, opcionom, jedan ili više antibiotika obuhvata ciprofloksacin, gde, po izboru, ciprofloksacin je administriran oralno u dozi od oko 100 mg do oko 1000 mg.

13. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema jednom od zahteva 9-12, naznačena time, što farmaceutska kompozicija je primenjena u kombinaciji sa ekulizumabom.

14. Uređaj sa auto-injektorom koji sadrži farmaceutsku kompoziciju prema jednom od zahteva 1-8.

4