RS54750B1

RS54750B1 - Borati kao inhibitori arginaze

Info

Publication number: RS54750B1
Application number: RS20160243A
Authority: RS
Inventors: Zandt Michael Van; Jr Gunnar Erik Jagdmann
Original assignee: Mars Inc
Priority date: 2010-10-26
Filing date: 2011-10-19
Publication date: 2016-10-31
Also published as: US20200246362A1; CA2815536A1; SMT201600141B; CN103249737B; BR112013010099A2; ES2568680T3; SI2632927T1; IL225926A; EP2632927A1; HRP20160305T1; CN106008569B9; CN106008569A; US9233985B2; MX2013004491A; JP5909239B2; AU2011320732B2; US10098902B2; CA2815536C; IL225926A0; US20120129806A1

Abstract

Jedinjenje Formule I,pri čemuR1je izabrano iz grupe koja se sastoji od -OH, ORa, i NRbRc;Raje izabrano iz grupe koja se sastoji od vodonika, linearnog ili razgranatog (C1-C6)alkila, (C3-C8)cikloalkila, (C3-C14)arila, (C3-C14)heterocikloalkil-( C1- C6)alkilena-, (C3-C14)heteroaril-(C1-C6)alkilena-, i (C3-C14)aril(C1-C6)alkilena-;svaki Rb i Rc je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, -OH, linearnog ili razgranatog (C1-C6)alkila, -SO2-(C1-C6)alkila, (C3-C14)aril-SO2-, (C3-C14)heterocikloalkil-(C1-C6)alkilena-, i (C3-C14)heteroaril-(C1-C6)alkilena-;R2 je izabrano iz grupe koja se sastoji od H, linearnog ili razgranatog (C1-C6) alkila, i (C1-C6)alkil-C(O)-;svaki W, X, Y, i Z je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od veze, -C(R')(R"')-, -C(R")2-, -CR'"-, -NR'"-, -N-, -O-, -C(O)-, i.-S-, pri čemu više od tri W, X, Y i Z istovremeno ne predstavljaju vezu;i više od dva susedna člana W, X, Y i Z istovremeno nisu -O-, -S-, -N-, ili -NR'"-;l, m, n i p nezavisno su celi brojevi između 0 i 2 uključujući njih, pri čemu najmanje jedan od l, m, n, ili p nije 0;opciono predstavlja jednu ili više dvostrukih veza;svaki R3 i R4 je nezavisno izabran između vodonika, linearnog ili razgranatog (C1-C6)alkila, i C(O)-R',ili R3 i R4zajedno sa atomom bora za koji su vezani obrazuju 5- ili 6-člani prsten kojije potpuno zasićen, ili je delimično zasićen;D je izabrano iz grupe koja se sastoji od linearnog ili razgranatog (C3-C5)alkilena, linearnog ili razgranatog (C2-C8)alkenilena, linearnog ili razgranatog (C2-C8)alkinilena, (C3-C14)arilena, i (C3-C14)cikloalkilena,pri čemu je jedna ili više -CH2- grupa u D opciono i nezavisno zamenjena sa radikalom izabranim iz grupe koja se sastoji od O, NR', S, SO, SO2, i CR'R"; ilipri čemu bilo koje dve susedne -CH2- grupe opciono predstavljaju dva člana (C3-C14)-cikloalkilenil grupe; ipri čemu dve nesusedne -CH2- grupe istovremeno predstavljaju O, NR', S, SO, ili SO2;svaki R', R" i R'" je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, OH, S(O)Rd, S(O)2Rd, (C1-C8)alkila, (C3-C6)arila, -NH2, -NH(C1-C6)alkila, -N[(C1-C6)alkil]2, -C(O)NRdRe, -C(O)( C1-C6)alkila, -C(O)(C3-C14)arila, -C(O)O(C1-C6)alkila, -C(O)O(C3-C14)arila, (C3-C6)cikloalkila, (C3-C14)heterocikloalkila, -C(O)( C3-C14)heterocikloalkila, (C3-C14)heteroarila, (C3-C14)aril-( C1-C6)alkilena-, -C(O) (C3-C14)aril-(C1-C6)alkilena-, -C(O)(C3-C14)arila, (C3-C6)cikloalkil-(C1-C6)alkilena-, (C3-C14)heteroaril-(C1-C6)alkilena-, (C3-C14)heterocikl-(C1-C6)alkilena-; i pri čemu je bilo koji alkil, alkilen, aril, heteroaril, cikloalkil, ili heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više članova izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, okso, -COOH, -CN, -NO2, -OH, -NRdRe, -NRgS(O)2Rh, (C1-C6)alkoksi, (C3-C14)arila, (C1-C6)haloalkila i (C3-C14)ariloksi; pri čemu je svaki Rd, Re, Rg, i Rh nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, linearnog ili razgranatog (C1-C6)alkila, opciono supstituisanog (C3-C14)aril(C1-C6)alkilena-, opciono supstituisanog (C3-C14)arila, (C1-C6)hidroksialkila, (C1-C6)aminoalkila, H2N(C1-C6)alkilena-, opciono supstituisanog (C3-C6)cikloalkila, opciono supstituisanog (C3-C14)heterocikloalkila, opciono supstituisanog (C3-C14)heteroarila, opciono supstituisanog (C3-C14)aril-(C1-C6)alkilena-, NR'R"C(O)- i (C3-C6)aril-(C3-C14)-cikloalkilena-,ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, stereoizomera ili tautomera;uz uslov da jedinjenje Formule I nije 1-amin-2-(3-borpropil)cikloheksan karboksilna kiselina.Prijava sadrži još 14 patentnih zahteva.

Description

Opis pronalaska

STANJE TEHNIKE

[0001]Predmetni pronalazak se generalno odnosi na inhibitore arginaze i na njihovu primenu za

lečenje patoloških stanja. Do danas su identifikovane dve izoforme arginaze. Arginaza I (ARG I), koja se izražava u citozolu, i Arginaza II (ARG II), koja se izražava u mitohondrijama. Enzimi arginaze zajedno sa NOS enzimima igraju važnu ulogu u regulisanju nivoa slobodnog arginina u ćelijama

[0002]Smatra se da arginaze igraju ulogu u različitim patološkim stanjima. Ona obuhvataju, na primer, sledeća: erektilna disfunkcija, pulmonarna hipertenzija, hipertenzija, ateroskleroza, bubrežna bolest, astma, disfunkcija T-ćelija, ishemijska reperfuziona bolest, neurodegenerativne bolesti, zarastanje rana, i fibrozne bolesti. Mada je mehanizam dejstva enzima arginaze u ovim bolesnim stanjima još uvek predmet aktuelnog istraživanja, nekoliko studija ukazuje da su enzimi arginaze često prekomerno regulisani u toku patoloških bolesnih stanja.

[0003]Na primer, pretpostavljeno je da prekomerna regulacija aktivnosti arginaze rezultuje smanjenim nivoima arginina, koji dalje smanjuju nivo NO fiziološki važnog signalnog molekula koji je potreban za deobu ćelija, stimulaciju povećanog protoka krvi i za kontrolu mišićne i neurološke transdukcije signala

[0004]Pored svoje uloge u regulaciji nivoa NO, arginaza takođe utiče na proizvodnju kritičnih

poliamina, kao što su putrescin, spermidin i spermin. Kada arginaza troši arginin, ona stvara ornitin. Ornitin se zatim konvertuje u putrescin, spermidin i spermin pomoću ornitin dekarboksilaze, spermidin sintaze i spermin sintaze, respektivno. Shodno tome, enzimi arginaze kontrolišu fiziološke signalne događaje putem kontrole intracelularnih nivoa poliaminskih prenosnika signala. Vidi Wang, J-Y;i Casero, Jr, R. A., Ed; Humana Press, Totowa, NJ, 2006.

[0005]Zato ovi rezultati ukazuju na ulogu inhibitora arginaze kao kandidata za lekove za lečenje različitih bolesnih stanja. Predmetnim pronalaskom su realizovana

[0006]Jedinjenja formule I kao inhibitori aktivnosti arginaze, kao i za primenu u metodama lečenja

SUŠTINA PRONALASKA

[0007]Predmetnim pronalaskom su realizovana jedinjenja koja inhibiraju aktivnost arginaze i farmaceutski prihvatljive formulacije tih jedinjenja, kao terapeutski agensi za primenu u lečenju različitih bolesnih stanja koja su povezana sa disbalansom ili disfunkcijom enzima arginaze Specifično su predmetnim pronalaskom realizovana jedinjenja koja imaju Formulu I.

[0008]Za jedinjenja Formule I, R'je izabrano iz grupe koja se sastoji od -OH, 0R<a>, i NR^R1".

[0009]Supstituent R<a>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, linearnog ili razgranatog (Cr Cs)alkila, (C3-Ce)cikloalkila, (C3-Ci4)arila, (C3-C14)heterocikloalkil-(C,-C6)alkilena-, (C3-CM)heteroaril-(Ci-C6)alkilena-, i (C3-C14)aril(Ct-C$)alkilena-,

[0010]Svaki od Ri R<c>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, -OH, linearnog ili razgranatog {CrC6)alkila, -S02-(C,-C6)alkila, -S02-(CrC14)arila, (CrC,4)heterocikloalkil-(Ct-C6)alkilena-. i (C3-C14)heteroaril-(C,-C6)alkilena-.

[0011]Supstituent R2je izabran iz grupe koja se sastoji od H, linearnog ili razgranatog (Ci-C6) alkila, i (CrC6)alkil-C(0)-.

[0012]Svaka promenljiva VV, X, Y, i 2 je nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od veze. -C(R"')2-,

-CR'"-, -NR" -N-. -O-, -C(O)-. i -S-. Alternativno tome, svaka promenljiva W, X, Y, i Z je nezavisno - C(R')(R"')-. Pored toga, više od tri VV, X, Y, i Z istovremeno ne mogu predstavljati vezu, niti su dva susedna člana od W, X, Y, i Z istovremeno -O-, -S-, -N-, ili -NR "-

[0013]Svaki od subskripta I, m, n i p u Formuli I je nezavisno ceo broj između 0 i 2 uključujući to da najmanje jedan od I, m, n, ili p nije 0. Pored toga. isprekidana linija

u Formuli I ukazuje na opciju da postoji jedna ili više dvostrukih veza

[0014]Svaki supstituent R<3>i R<J>u Formuli I je nezavisno izabran između vodonika, linearnog ili razgranatog (C,-C6)alkila, i C(0)-R' Alternativno tome, R3 iR4 zajednosa atomom bora za koji su vezani obrazuju 5- ili 6-člani prsten koji je potpuno zasićen ili je delimično zasićen.

[0015]Za jedinjenja koja odgovaraju Formuli I, D je izabrano iz grupe koja se sastoji od linearnog ili razgranatog (C3-C5)alkilena. linearnog ili razgranatog (C2-C8)alkenilena. linearnog ili razgranatog (C2-C8)alkinilena, (C:rCj4)arilena, i (C3-C14)cikloalkilena. U nekim primenma izvođenja, jedna ili više -CH2-grupe u D su opciono i nezavisno zamenjene sa radikalom izabranim iz grupe koja se sastoji od O, NR', S, SO, S02, i CR'R. Međutim, dve susedne -CHr grupe u D nisu istovremeno O, NR', S, SO, ili S02

[0016]Za izvesna jedinjenja Formule I, D odgovara jednoj od formula -L<1->L<2->CH2-CH2-. -CH2-L<1->L<;!->CHr, -CHj-CHj-L<1->^-, -L'-CHj-CHj-L<2->. -L<1->CH2-L<?->CH2-, ili -CHrL'-CHrL<2->Promenljive l_'iL<?>su nezavisno izabrane iz grupe koja se sastoji od O. NR'. S. SO. S02. i CR'R", pri čemu su R' i R" onakvi kao što je definisano dole. U primenma izvođenja kada su -L* i -L'<r>susedni jedan drugom, međutim, L<1>i l2 nisu istovremeno O. NR'. S, SO Ni S02 grupa. Prema jednom drugom primeru izvođenja. L.' i l/nisu istovremeno prisutni. Prema ovom aspektu pronalaska, linker D je izabran iz grupe koja se sastoji od - L<1->CH2-CH;-, -CHo-L'-CHj-, -CHj-CHrL<1->, L<2->CH,-CH2-, -CH2-L<2->CH2-, -CH2-CH2-L<2-.>

[0017]U još jednom drugom primeru izvođenja, bilo koje dve susedne -CH2- grupe od D opciono predstavljaju dva člana (C3-C14)-cikloalkilenil grupe

[0018]Svaki supstituent R', R" i R'" je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, OH, S(0)R<d>, S(0)2R<d>, (C,-C8)alkila, (C3-C6)arila, -NH2, -NH(C,-C6)alkila. -N[(CrC6)alkil]2l-C(0)NR<d>R<e>, - C( 0)( C,-C6)alkila, -C(0)(C3-C14)arila, -C(0)0(C,-C6)alkila, -C(0)0(C3-C14)anla, (C3-C6)cikloalkila, (C3-C14)heterocikloalkila, -C(0)(C3-C,4)heterocikloalkila, (C3-C,4)heteroanla, (C3-C,4)aril-(C,-C6)alkilena-, - C(0) (CrC14)arH-(CrC6)alkilena-, -C(0)(C3-C14)arila. (C3-Cs)cikloa[kil-(C1-C5)alkMena-. (C3-C14)heteroaril-(Ci-Cs)alkilena-, (C3-C,4)heterocikl-(C;-C6)alkilena-.

[0019]Bilo koji alkil. alkilen, aril, heteroaril. cikloalkil. ili heterocikloalkil je opciono supstituisan sa jednim ili više članova izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, okso,-COOH, -CN, -N02l-OH, -NR<d>R<e>, - NR<8>S(0)2R<h>, (CrC6)alkoksi, {C3-Cu)arila, (CrC6)haloalkila i (C3-C14)ariloksi.

[0020]Za jedinjenja Formule I, svaki R<rf>, R<5>, R<9>. i R<h>'je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, linearnog ili razgranatog (C,-CB)alkila, (C3-C14)aril(C,-C6)alkilena-. (C3-C,4)anla, (C,-CB}hidroksialkila, (CrC5)aminoalkila, H2N(C1-Cs)alkilena-, (C3-C6)cikloalkila, (C3-C^)heterocikloalkila, (C3-C,4)heteroarila, (C3-C14)aril-(C,-CB)alkilena-, NRR"C(0)-, i (C3-C6)aril-(C3-C,4)-cikloalkilena-

[0021]Podrazumeva se da, uprkos ovde datom opisu Formule I, Formula I ne obuhvata 1-amino-2-(3-borpropil)cikloheksan karboksilnu kiselinu preciznije( 1S, 2S)-ili{ 1S.2R)-1-amino-2-(3-borpropil)cikloheksan karboksilnu kiselinu

[0022]Predmetnim pronalaskom su takođe realizovane farmaceutski prihvatljive soli, stereoizomeh i tautomen jedinjenja Formule I

[0023]Jedinjenja i farmaceutske formulacije prema ovom pronalasku su korisni za lečenje više bolesti i stanja, uključujući, ali bez ograničavanja na pulmonarnu hipertenziju, erektilnu disfunkciju (ED), hipertenziju. aterosklerozu, bubrežnu bolest, astmu disfunkciju T-ćelija. ishemijsku reperfuzionu povredu, neurodegenerativne bolesti, zarastanje rana, i fibrozne bolesti

[0024]Jedan primer izvođenja predmetnog pronalaska je zbog toga farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efektivnu količinu najmanje jednog jedinjenja prema Formuli I, njenu farmaceutski prihvatljivu so, stereoizomer ili tautomer i farmaceutski prihvatljivi nosač,

[0025]Jedinjenje prema Formuli I se može primeniti u metodu za inhibiciju Arginaze I, Arginaze II, Hi njihove kombinacije u ćeliji, koji metod sadrži dovođenje ćelije u kontakt sa najmanje jednim pomenutim jedinjenjem.

[0026]Bolest ili stanje povezano sa ekspresijom ili aktivnošću Arginaze I, Arginaze II. ili njihove kombinacije kod subjekta mogu biti lečeni ili sprečeni administracijom subjektu terapeutski efektivne količine najmanje jednog jedinjenja Formula I, Shodno tome. pronalaskom je dalje realizovano jedinjenje Formule I za primenu u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja povezanog sa ekspresijom ili aktivnošću Arginaze I, Arginaze II ili njihove kombinacije kod subjekta Takođe je opisana pnmena jedinjenja Formule I u proizvodnji leka za lečenje ili prevenciju bolesti ili stanja povezanog sa ekspresijom ili aktivnošću Arginaze I, Arginaze II, ili kombinacije oba enzima u ćelijama,

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0027]Jedinjenja prema pronalasku su inhibitori arginaze Specifično, jedinjenja prema pronalasku koja koja imaju Formulu I su ciklični analozi a-aminokiselina koje sadrže najmanje jednu grupu koja sadrži bor. Predmetni pronalazak takođe obuhvata formulacije jedinjenja Formule I.

[002S]Jedinjenja i njihove farmaceutske kompozicije prema pronalasku su korisne u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja koja su povezana sa ekspresijom ili aktivnošću arginaze Primeri bolesnih stanja za koja kompozicije jedinjenja prema pronalasku nalaze terapeutske pnmene obuhvataju bez ograničenja pulmonarnu hipertenziju. erektilnu disfunkciju (ED), hipertenziju. aterosklerozu, bubrežnu

bolest, astmu, disfunkciju T-ćelija, ishemijsku reperfuzionu povredu, neurodegenerativne bolesti, zarastanje rana, i fibrozne bolesti.

Definicije

[0029]"Alkil" se odnosi na linearne, razgranate, ili ciklične hidrokarbil grupe koje sadrže od 1 do oko 20 atoma ugljenika. Na primer. alkil može imati od 1 do 10 atoma ugljenika ili od 1 do 5 atoma ugljenika. Primer alkila obuhvata alkil grupe sa linearnim lancem, kao što su metil. etil. propil. butil, pentil, heksil, heptil, oktil. nonil. decil, undecil, dodecil, i slično, etil, propil butil, pentil. heksil. heptil, oktil, nonil, decil, undecil, dodecil, i slično, i takođe obuhvata izomere sa razgranatim lancem alkil grupa sa linearnim lancem, na primer, bez ograničenja, -CH(CH3)?. -CH(CH3)(CH2CH3). -CH(CH2CH3)2, -C(CH3):), - C(CH2CH3)3. -CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)3. - CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3). - CH3CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3)3, -CH2CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2, - CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2, i slično Shodno tome, alkil grupe obuhvataju primarne alkil grupe, sekundarne alkil grupe, i tercijarne alkil grupe

[0030]Fraza "supstituisani alkil" se odnosi na alkil supstituisan na jednoj ili više pozicija, na primer, 1, 2, 3, 4, 5, ili čak 6 pozicija, koji supstituenti su pričvršćeni za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, sa supstitucijom kakva je ovde opisana "Opciono supstituisani alkil" se odnosi na alkil ili supstituisani alkil

[0031]Svaki od izraza "halogen." "halid," i "halo" se odnosi na -F -Cl, -Br, ih -I

[0032]Izrazi "alkilen" i "supstituisani alkilen" se odnose na divalentni alkil i divalentni supstituisani alkil respektivno. Primeri alkilena obuhvataju, bez ograničenja, etilen (-CH2-CH2-} "Opciono supstituisani alkilen" se odnosi na alkilen ili supstituisani alkilen.

[0033]"Alken" se odnosi na linearne, razgranate, ili ciklične hidrokarbil grupe koje sadrže od 2 do oko 20 atoma ugljenika, a koje imaju 1-3. 1-2, ili najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik - ugljenik "Supstituisani alken" se odnosi na alken supstituisan na 1 ih višenpr.1.2. 3 4, 5, ili čak 6 pozicija, koji supstituenti su pričvršćeni za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, sa supstitucijom koja je ovde opisana "Opciono supstituisani alken" se odnosi na alken ili supstituisani alken

[0034]Izraz "alkenilen" se odnosi na divalentni alken Primeri alkenilena obuhvataju bez ograničenja, etenilen <-CH=CH-) i sve njegove stereoizomerne i konformacione izomerne oblike "Supstituisani alkenilen" se odnosi na divalentni supstituisani alken "Opciono supstituisani alkenilen" se odnosi na alkenilen ili supstituisani alkenilen,

[0035]"Alkin ili "alkinil" se odnosi na nezasićeni ugljovodonik sa linearnim ili razgranatim lancem koji ima naznačeni broj atoma ugljenika i najmanje jednu trostruku vezu Primeri

[0036]{CrCs)alkinil grupe obuhvataju. ali nisu ograničeni na acetilen, propm, 1-butin, 2-butin, 1-pentin, 2-pentin, 1-heksm, 2-heksin, 3-heksin, 1-heptin, 2-heptm. 3-heptm, 1-oktm, 2-oktm, 3-oktin i 4-oktin Alkinil grupa može biti nesupstituisana I opciono supstituisana sa jednim ih više supstituenata kao što je opisano ovde u nastavku.

[0037]Izraz "alkinilen" se odnosi na divalentni alkin Primeri alkinilena obuhvataju bez ograničenja, etinilen. propinilen "Supstituisani alkinilen" se odnosi na divalentni supstituisani alkin

[0038]Izraz "alkoksi" se odnosi na -O-alkll grupu koja ima naznačeni broj atoma ugljenika. Na primer, (CrCeJalkoksi grupa obuhvata -O-metil. -O-etil. -O-propil, -O-izopropil, -O-butil, -O-se/c-butil, -O-fe/'C-butil, -O-pentil, -O-izopentil, -O-neopentil, -O-heksil, -O-izoheksil, i -O-neoheksil.

[0039]Izraz "aril," sam ili u kombinaciji se odnosi na aromatični monociklični ili biciklični prstenasti sistem, kao što je fenil ili naftil "Aril" takođe obuhvata aromatične prstenaste sisteme koji su opciono kondenzovani sa cikloalkil prstenom, kao što je ovde definisano

[0040]"Supstituisani aril" je aril koji je nezavisno supstituisan sa jednim ili više supstituenata pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje. pri čemu su supstituenti onakvi kao što je ovde opisano. "Opciono supstituisani aril" se odnosi na aril ili supstituisani aril

[0041]"Arilen" označava divalentni aril. a "supstituisani arilen" se odnosi na divalentni supstituisani aril "Opciono supstituisani arilen" se odnosi na arilen ili supstituisani arilen

[0042]Izraz "heteroatom" se odnosi na N, O, i S Jedinjenja prema pronalasku koja sadrže atome N ili S mogu biti opciono oksidisana u odgovarajuća N-oksidna, sulfoksidna ili sulfonska jedinjenja.

[0043]"Heteroaril," sam ili u kombinaciji sa bilo kojim drugim ovde opisanim radikalom se odnosi na monocikličnu aromatičnu prstenastu strukturu koja sadrži 5 ili 6 atoma u prstenu, ili bicikličnu aromatičnu grupu koja ima od 8 do 10 atoma, koja sadrži jedan ili više. kao što je 1-4, 1-3, ili 1-2, heteroatoma nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od O, S. i N Heteroaril takođe treba da obuhvati oksidisani S ili N, kao što su sulfinil, sulfonil i N-oksid tercijarnog azota u prstenu. Mesto vezivanja heteroaril prstenaste strukture je atom ugljenika ili heteroatom, tako da se dobije stabilno jedinjenje. Primeri heteroaril grupa obuhvataju ali nisu ograničeni na piridmil, piridazinil, pirazinil, hinaoksalil, indolizinil, benzo[b]tienil, hinazolmil, purin ti. indolil.hinolinil. pinmidinil. pirolil. pirazolil, oksazolil. tiazolil, tienil, izoksazolil, oksatiadiazolil. izotiazolil, tetrazolii, imidazolil. tnazolil, furanil, benzofuril, i indolil

[0044]"Supstituisani heteroaril" je heteroaril koji je nezavisno supstituisan, osim ako nije drugačije navedeno, sa jednim ili više,npr.sa 1, 2, 3, 4 ili 5, takođe sa 1, 2, ili 3 supstituenata, takođe sa 1 supstituentom, pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, pri čemu su supstituenti onakvi kao stoje ovde opisano "Opciono supstituisani heteroaril" se odnosi na heteroaril ili supstituisani heteroaril

[0045]"Heteroarilen" se odnosi na divalentni heteroaril, i "supstituisani heteroarilen" se odnosi na divalentni supstituisani heteroaril "Opciono supstituisani heteroarilen" se odnosi na heteroarilen ili supstituisani heteroarilen.

[0046]"Heterocikloalkil" označava zasićeni ili nezasićeni nearomatićni monociklični. biciklični, triciklični ili policiklični prstenasti sistem koji ima od 5 do 14 atoma u kome su od 1 do 3 atoma ugljenika u prstenu zamenjeni sa heteroatomima O, S ili N Heterocikloalkil je opciono kondenzovan sa benzo ili heteroarilom 5-6-članog prstena, i sadrži oksidisani S ili N, kao što su sulfinil, sulfonil i N-oksid tercijarnog azota u prstenu Mesto vezivanja heterocikloalkil prstena je atom ugljenika ili heteroatom koji je takav da se održava stabilan prsten Primeri heterocikloalkil grupa obuhvataju bez ograničenja morfolino, tetrahidrofuranil, dihidropindmil, pipendinil, pirolidinil. piperazinil, dihidrobenzofuril, i dihidroindolil.

[0047]"Opciono supstituisani heterocikloalkil" označava heterocikloalkil koji je supstituisan sa 1 do 3 supstituenta,nprsa 1, 2 ili 3 supstituenta. pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, pri čemu su supstituenti onakvi kao što je ovde opisano.

[0048]"Heteroalkil" označava zasićenu alkil grupu koja ima od 1 do oko 20 atoma ugljenika, od 1 do 10 atoma ugljenika, od 1 do 6 atoma ugljenika, ili od 1 do 3 atoma ugljenika, u kojoj je od 1 do 3 atoma ugljenika zamenjeno sa heteroatomima O, S ili N. Heteroalkil takođe treba da obuhvati oksidisane S ili N, kao što su sulfinil, sulfonil i N-oksid tercijarnog prstena sa azotom. Mesto vezivanja heteroalkil supstituenta je atom koji je takav da se zadržava stabilan prsten. Primeri heteroalkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na N-alkilaminoalkil( npr.CH3NHCH2-), N,N-dialkilaminoalkil( npr.(CH3)2NCH2-), i slično.

[0049]"Heteroalkilen" se odnosi na divalentni heteroalkil Izraz "opciono supstituisani heteroalkilen" se odnosi na heteroalkilen koji je supstituisan sa 1 do 3 supstituentanprsa 1 2 ili 3 supstituenta, pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje. pri čemu su supstituenti onakvi kao što je ovde opisano.

[0050]"Heteroalken" označava nezasićenu alkil grupu koja ima od 1 do oko 20 atoma ugljenika, od 1 do 10 atoma ugljenika, od 1 do 6 atoma ugljenika, ili od 1 do 3 atoma ugljenika, u kojoj su od 1 do 3 atoma ugljenika zamenjeni sa heteroatomima O. S ili N i koja ima 1-3, 1-2, ili najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik - ugljenik ili dvostruku vezu atom ugljenika - heteroatom

[0051]"Heteroalkenilen" se odnosi na divalentni heteroalken. Izraz "opciono supstituisani heteroalken i len" se odnosi na heteroalkenilen koji je supstituisan sa 1 do 3 supstituenta,nprsa 1, 2 ili 3 supstituenta, pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, pri čemu su supstituenti onakvi kao što je ovde opisano.

[0052]Izraz "cikloalkil" se odnosi na monociklične. biciklične, triciklične. ili policiklične. 3- do 14-ćlane prstenaste sisteme, koji su zasićeni, nezasićeni ili aromatični Heterocikl može biti pričvršćen preko bilo kog atoma. Cikloalkil takođe obuhvata kondenzovane prstenove, pri čemu je cikloalkil kondenzovan sa aril ili heteroaril prstenom kao stoje gore definisano. Reprezentativni primeri cikloalkila obuhvataju, ali nisu ograničeni na ciklopropil, cikloizopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, ciklopropen. ciklobuten, ciklopenten. cikloheksen, fenil. naftil, antracil, benzofuranil i benzotiofenil Cikloalkil grupa može biti nesupstituisana ili opciono supstituisana sa jednim ili više supstituenata kao što je opisano ovde u nastavku.

[0053]Izraz "cikloalkilen" se odnosi na divalentni cikloalkilen. Izraz "opciono supstituisani cikloalkilen" se odnosi na cikloalkilen koji je supstituisan sa 1 do 3 supstituenta,npr.sa 1, 2 ili 3 supstituenta, pričvršćenih za bilo koji raspoloživi atom da bi se dobilo stabilno jedinjenje, pri čemu su supstituenti onakvi kao što je ovde opisano.

[0054]Izraz 'nitril ili cijano" se upotrebljavaju jedan umesto drugog i odnose se na -CN grupu koja je vezana za atom ugljenika heteroaril prstena, aril prstena i heterocikloalkil prstena.

[0055]Izraz "okso" se odnosi na -O atom vezan za zasićeni ili nezasićeni (C3-C8) ciklični ili (CrCs) aciklični radikal =0atom može biti vezan za atom ugljenika, sumpora, i azota koji je deo cikličnog ili acikličnog radikala.

[0056]Izraz "amin ili amino" se odnosi na -NR<a>R<e>grupu, pri čemu se svaki R<d>i Re nezavisno odnosi na vodonik. (Ci-Ce)alkil, aril, heteroaril, heterocikloalkil, (Ct-C3)haloalkil, i (d-C6)hidroksialkil grupu.

[0057]Izraz "amid" se odnosi na -NR'R"C(0)- grupu, pri čemu se svaki R' i R" nezavisno odnosi na vodonik, (C,-C3)alkil, ili (C3-C6)aril.

[0058]Izraz "karboksamido" se odnosi na -C(0)NR'R" grupu, pri čemu se svaki R' i R nezavisno odnosi na vodonik, (C^Cgjalkil. ili (C3-Cs)artl

[0059]Izraz "ariloksi" se odnosi na -O-aril grupu koja ima naznačeni broj atoma ugljenika. Primeri ariloksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na fenoksi, naftoksi i ciklopropenoksi

[0060]Izraz "haloalkoksi," se odnosi na -0-(d-C6)alkil grupu, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u Cj-Caalkil grupi zamenjen sa halogenim atomom, koji mogu biti isti ili različiti. Primeri haloalkoksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na difluorometoksi. trifluorometoksi, 2,2,2-tnfluoroetoksi, 4-hlorobutoksi, 3-bromopropiloksi, pentahloroetoksi, i 1,1.1-trifluoro-2-bromo-2-hloroetoksi

[0061]Izraz "hidroksialkil," se odnosi na alkil grupu koja ima naznačeni broj atoma ugljenika, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika alkil grupe zamenjen sa -OH grupom Primeri hidroksialkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na -CH20H,-CH2CH20H, -CH7CH2CH20H. -CH2CH2CH3CH2OH, - CH2CH2CH2CH2CH2OH,-CH2CH2CH2CH2CH2CH2OH. i njihove razgranate verzije

[0062]Izraz "aikilsulfonil" se odnosi na (CrC6)alkil grupu, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u 0,-06alkil grupi zamenjen sa -S(0)agrupom. Subskript "a" može biti 1 ili 2, tako da se dobije alkil sulfoksid (sulfinil grupa), ili alkil sulfon, respektivno. Primeri aikilsulfonil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na dimetilsulfoksid, etilmetil sulfoksid, i metilvinilsulfon.

[0063]Izraz "haloalkil." se odnosi na (d-C6)alkil grupu, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u d-C6alkil grupi zamenjen sa halogenim atomom, koji mogu biti isti ili različiti Primeri haloalkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na difluorometil. tnfluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, 4-hlorobutil, 3-bromopropilil, pentahloroetil, i 1,1,1-tnfluoro-2-bromo-2-hloroetil.

[0064]Izraz "aminoalkil," se odnosi na (CrC6)alkil grupu, pri čemu su jedan ili više atoma vodonika u C,-C6alkil grupi zamenjeni sa -NR<d>R<e>grupom, gde R<d>i R<e>mogu biti isti ili različiti, na primer, svaki Rd i Re nezavisno se odnosi na vodonik, (C -Cs)alkil. aril heteroaril. heterocikloalkil (d-CsJhaloalkil. (C3-Cs)cikloalkil i (CrCc)hidroksialkil grupu Pnmen aminoalkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na aminometil, aminoetil, 4-aminobutil i 3-aminobutilil.

[0065]Izraz "tioalkil" ili "alkiltio" se odnosi na (d-CG)alkil grupu, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u C,-C6alkil grupi zamenjen sa -SR' grupom, pri čemu je R' izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, (d-C6)alkila i (C3-CM)arila.

[0066]"Amino (C,-C6)alkilen" se odnosi na divalentni alkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u d-Cs alkilen grupi zamenjen sa -NR5Re grupom. Primeri ammo (CrCs)alkilena obuhvataju, ali nisu ograničeni na aminometilen, aminoetilen, 4-aminobutilen i 3-aminobutililen.

[0067]Izraz "sulfonamiđ" se odnosi na -NR<9>S(0)2R<h>grupu, gde se svaki R<9>i Rh nezavisno odnosi na vodonik, (Ci-C8)alkil, aril, heteroaril, heterocikloalkil, (d-C8)haloalkil, i (Ci-C6)hidroksialkil grupu

[0068]Izraz "sulfoksid" se odnosi na -S(O)- grupu u kojoj je atom sumpora kovalentno vezan za dva atoma ugljenika.

[0069]Izraz "sulfon" se odnosi na hemijsko jedinjenje koje sadrži sulfonil (S(0)2) funkcionalnu grupu vezanu za dva atoma ugljenika. Centralni heksavalentni atom sumpora je vezan dvostrukom vezom za svaki od dva atoma kiseonika i kovalentno je vezan sa jednostrukim vezama za svaki od dva atoma ugljenika.

[0070]"Hidroksii" ili "hidroksi" se odnosi na -OH grupu

[0071]Izraz "(C3-C1;i)arll-(C1-Cs)alkilen" se odnosi na divalentni alkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u C,-CB alkilen grupi zamenjen sa (C3-C14)anl grupom, Primeri (C3-Ci4)aril-(C,-C5)alkilen grupa obuhvataju bez ograničenja 1-fenilbutilen, fenil-2-butilen, 1-fenil-2-metilpropilen. fenilmetilen, fenilpropilen i naftiletilen

[0072] Izraz "(C3-C14)heteroaril-(d-CB)alkilen" se odnosi na divalentni alkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u C:- CB alkilen grupi zamenjen sa (C3-C14)heteroaril grupom. Primeri (C3-C14)heteroaril-(CT-Csjalkilen grupa obuhvataju bez ograničenja 1-piridilbutilen, hinolinil-2-butilen i 1-piridil-2-metilpropilen

[0073]Izraz "(C3-CM)heterocikloalkil-(Ci-C6)alkilen" se odnosi na divalentni alkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u C--CBalkilen grupi zamenjen sa (C3-CM)heterocikloalkil grupom Primeri (C3-C,4)heterocikloalkil-(d-CB)alkilen grupa obuhvataju bez ograničenja 1-morfolmopropilen, azetidinil-2-butilen i 1-tetrahidrofuranil-2-metilpropilen.

[0074]Izraz,'(C3-Cl4)heteroanl-(C1-C!4)heterocikloalkilen'' se odnosi na divalentni heterocikloalkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u d-CB heterocikloalkilen grupi zamenjen sa (C3-C,4)heteroaril grupom Primeri (C3-C14)heteroanl-{C -Ce)heterocikloalkilen grupa obuhvataju bez ograničenja piridilazetidinilen i 4-hinolino-1 -piperazinilen

[0075]Izraz "(C3-C14)aril-(Ci-Ci4)heterocikloalkilen" se odnosi na divalentni heterocikloalkilen. pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u CrCM heterocikloalkilen grupi zamenjen sa (C3-d4)aril grupom. Primeri {C3-C14)aril-(C-i-Ci4) heterocikloalkilen grupa obuhvataju bez ograničenja 1-naftil-piperazinilen, fenilazetidinilen, i fenilpiperidiniien.

[0076]Izraz "(Cs-C^janKC^Csjalkil-fCi-CMjheterocikloalkilen'' se odnosi na divalentni heterocikloalkilen. pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u CrCu heterocikloalkilen grupi zamenjen sa (d-Ce) alkil grupom koja je dalje supstituisana zamenom jednog ili više atoma vodonika (Ci-C6) alkil grupe sa (C3-C14)aril grupom.

[0077]Izraz "(C3-Ci4)heteroaril-(d-C6)alkil-(Ci-C!4)heterocikloalkilen" se odnosi na divalentni heterocikloalkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u d-di heterocikloalkilen grupi zamenjen sa (Ci-C6) alkil grupom koja je dalje supstituisana zamenom jednog ili više atoma vodonika u (CrCG) alkil grupi sa (C3-C^)heteroaril grupom

[0078]Izraz "(Cs-CHjheterocikloalkil-fCi-Cajalkil-fC^CuJheterocikloalkilen" se odnosi na divalentni heterocikloalkilen, pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u d-C14heterocikloalkilen grupi zamenjen sa (Ci-Ce) alkil grupom koja je dalje supstituisana zamenom jednog ili više atoma vodonika u (0,-Cs) alkil grupi sa (C3-C,4)heterocikloalkil grupom

[0079]Izraz "(Cs-C^aril-tC^Cj^cikloalkilen" se odnosi na divalentni cikloalkilen koji je monocikličan, bicikličan ili policikličan i pri čemu je jedan ili više atoma vodonika u (C,-C)4)cikloalkilen grupi zamenjen sa (C3-C^)aril grupom. Primeri (C3-C14)aril-(C,-Ci4)cikloalkilen grupe obuhvataju bez ograničenja fenilciklobutilen, fenilciklopropilen i 3-fenil-2-metilbutilen-1-on

[0080]Supstituent -C02H može biti zamenjen sa bioizosternim zamenama kao što su i slično, pri čemu R ima istu definiciju kao što su ovde definisani R<1>i R"Vidi. nprTHE PRACTICE OF MEDICINAL CHEMISTRY (Academic Press: New York, 1996) na strani 203.

[0081]Jedinjenje prema pronalasku može postojati u različitim izomernim oblicima, uključujući konfiguracione, geometrijske, i konformacione izomere, uključujući, na primer,c/s- /// trans-konformacije Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu takođe postojati u jednom ili više tautomernih oblika, uključujući oba pojedinačna tautomera i smeše tautomera. Izraz "izomer" treba da obuhvati sve izomerne oblike jedinjenja prema ovom pronalasku, uključujući tautomerne oblike jedinjenja. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu takođe postojati u obliku otvorenog lanca ili u ciklizovanim oblicima. U nekim slučajevima jedan ili više ciklizovanih oblika mogu rezultovati gubitkom vode Specifična kompozicija oblika sa otvorenim lancem i ciklizovanih oblika mogu zavisiti od toga kako je jedinjenje izolovano, skladišteno ili administnrano Na primer. jedinjenje može postojati prvenstveno u obliku otvorenog lanca pod kiselim uslovima, ali se ciklizuje pod neutralnim uslovima. Svi oblici su obuhvaćeni pronalaskom.

[0082]Neka od ovde opisanih jedinjenja mogu imati centre asimetrije i zbog toga postoje u različitim enantiomernim i dijastereomernim oblicima Jedinjenje prema pronalasku može biti u obliku optičkog izomera ili dijastereomera. Shodno tome, pronalazak obuhvata jedinjenja prema pronalasku i njihove primene koje su ovde opisane, u obliku njihovih optičkih izomera, dijastereoizomera i njihovih smeša, uključujući racemsku smešu Optički izomeri jedinjenja prema pronalasku se mogu dobiti poznatim tehnikama, kao što su asimetrična sinteza, hiralna hromatografija, simulacijom tehnologije fluidiziranog sloja ili putem hemijskog razdvajanja stereoizomera korišćenjem optički aktivnih agenasa za rastvaranje.

[0083]Osim ako nije drugačije naglašeno, "stereoizomer" označava jedan stereoizomer jedinjenja koji u suštini ne sadrži druge stereoizomere tog jedinjenja Shodno tome, stereomerno čisto jedinjenje koje ima jedan hiralni centar u suštini neće sadržati suprotni enantiomer jedinjenja. Stereoizomerno čisto jedinjenje koje ima dva hiralna centra u suštini neće sadržati druge dijastereomere jedinjenja. Uobičajeno stereomerno čisto jedinjenje sadrži više od oko 80% tež. jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 20% tež. drugih stereoizomera jedinjenja. na primer, više od oko 90% tež jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 10% tež. drugih stereoizomera jedinjenja, ili više od oko 95% tež jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 5% tež drugih stereoizomera jedinjenja, ili više od oko 97% tež. jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 3% tež drugih stereoizomera jedinjenja.

[0084]Ako postoji neslaganje između prikazane slike i imena datog toj strukturi, onda je prikazana struktura kontrola Pored toga, ako stereohemijska struktura ili deo strukture nije prikazan, na primer. sa podebljanim ili isprekidanim linijama, onda tu strukturu ili deo strukture treba interpretirati tako kao da obuhvata sve njene stereoizomere Međutim, u nekim slučajevima gde postoji više od jednog hiralnog centra, strukture i nazivi mogu biti predstavljeni kao pojedinačni enantiomeri da bi se pomoglo opisivanje relativne stereohemije Stručnjacima iz oblasti organske sinteze je poznato da li se jedinjenja dobijaju kao pojedinačni enantiomeri na osnovu metoda koji se koriste za njihovo dobijanje

[0085]U ovom opisu, "farmaceutski prihvatljiva so" je farmaceutski prihvatljiva, organska ili neorganska kisela ili bazna so jedinjenja prema pronalasku Reprezentativne farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju,npr.soli alkalnih metala, soli zemnoalkalnih metala, amonijumske soli, vodorastvorne i vodonerastvorne soli. kao što su acetat. amsonat (4,4-điaminostilben-2.2-disulfonat), benzensulfonat, benzonat. bikarbonat. bisulfat. bitartrat, borat, bromid. butirat, kalcijum, kalcijum edetat, kamzilat. karbonat, hlond, citrat, klavulariat, dihidrohlorid, edetat, edizilat, estolat, ezilat, fiunarat, gluceptat, glukonat, glutamat, glikolilarsanilat, heksafluorofosfat, heksilresorcinat, hidrabamin, hidrobromiđ, hidrohlorid, hidroksinaftoat, jodid, izotionat, laktat, laktobionat, laurat, malat, maleat, mandelat, mezilat, metilbromid. metilnitrat, metilsulfat, mukat, napzilat, nitrat, N-metilglukamin amonijumska so, 3-hidroksi-2-naftoat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat (1,1-meten-bis-2- hidroksi-3-naftoat. einbonat). pantotenat, fosfatJdifosfat. pikrat, poligalakturonat. propionat, p-toluensulfonal salicilat. stearat. subacetat, sukcinat, sulfat, sulfosalikulat, suramat. tanat, tartrat, teoklat. tozilat, tnetiojodid, i valeratne soli Farmaceutski prihvatljiva so može imati više od jednog naelektnsanog atoma u svojoj strukturi U ovom slučaju farmaceutski prihvatljiva so može imati više kontrajona. Shodno tome, farmaceutski prihvatljiva so može imati jedan ili više naelektrisanih atoma i/ili jedan ili više kontrajona

[0086]Izrazi "leci", "lečiti" i "lečenje" se odnose na ublažavanje ili iskorenjivanje bolesti ili simptoma povezanih sa bolesti U izvesnim primerima izvođenja, ovi izrazi se odnose na minimiziranje širenja ili pogoršanje bolesti koje rezultuje usled administracije jednog ili više profilaktičkih ili terapeutskih agenasa pacijentu sa takvom bolesti

[0087]Izrazi "sprečava." "sprečavanje," i "prevencija" se odnose na prevenciju pojave, vraćanja, ili širenja bolesti kod pacijenta koja nastaje usled administracije profilaktičkog ili terapeutskog agensa,

[0088]Izraz "efektivna količina" se odnosi na količinu jedinjenja prema pronalasku ili drugog aktivnog sastojka koja je dovoljan da obezbedi terapeutsku ili profilaktičku korist u lečenju ili prevenciji bolesti ili odlaganje ili minimiziranje simptoma povezanih sa bolesti Dalje, terapeutski efektivna količina u vezi jedinjenja prema pronalasku označava količinu samog terapeutskog agensa, ili u kombinaciji sa drugim terapijama, koja obezbeđuje terapeutsku korist u lečenju ili prevenciji bolesti. Kada se koristi u vezi sa jedinjenjem prema pronalasku, onda ovaj izraz može obuhvatiti količinu koja poboljšava celokupnu terapiju, smanjuje ili sprečava simptome ih ispoljavanje bolesti, ili povećava terapeutsku efikasnost ili je u sinergiji sa drugim terapeutskim agensom

[0089]Izrazi "moduliše". "modulacija" i slično se odnose na svojstvo jedinjenja da povećava ili smanjuje funkciju ili aktivnost, na primer, Arginaze I ili Arginaze II "Modulacija", u svojim različitim oblicima, treba da obuhvati inhibiciju, antagonizam, delimični antagonizam, aktivaciju, agonizam i/ili delimični agonizam aktivnosti povezanih sa arginazama. Inhibiton arginaze su jedinjenja koja se.npr.vezuju, delimićno ili potpuno blokiraju stimulaciju, smanjuju, sprečavaju, odlažu aktivaciju, inaktiviraju. desenzibilizuju ili slabe regulaciju prenošenja signala. Svojstvo jedinjenja da moduliše aktivnost arginaze može se demonstrirati u enzimskom testu ili testu baziranom na ćelijama.

[0090]"Pacijent" ili subjekt" obuhvata životinju, kao što je čovek, govedo, konj, ovca, jagnje. svinja, kokoška, ćurka, prepelica mačka. pas. miš. pacov. zec ili zamorče Životinja može biti sisar, kao što je ne-primat i primat( npr.majmun i čovek). U jednom primeru izvođenja, pacijent je čovek kao što je ljudsko odojče, dete, adolescent ili odrasli.

[0091] Predmetni pronalazak je usmeren na ciklične analoge u-aminokiselina. Preciznije, jedinjenja prema pronalasku sadrže najmanje jednu grupu koja sadrži bor kao stoje prikazano u Formuli I:

[0092]Za jedinjenja Formule I D je izabrano iz grupe koja se sastoji od linearnog ili razgranatog (C3-C5)alkilena, linearnog ili razgranatog (C2-CB)alkenilena, linearnog ili razgranatog (C2-Cs)alkinilena, (C3-C,4)ari]ena, i (C3-C14)cikloalkilena. U jednom primeru izvođenja, jedna ili više -CH2- grupa u D su opciono i nezavisno zamenjene sa radikalom izabranim iz grupe koja se sastoji od O, NR', S, SO, SO?, i CR'R" Međutim, za jedinjenja u skladu sa Formulom I dve susedne -CH2- grupe u D ne mogu istovremeno biti O, NR'. S. SO. Ni S02

[0093]Prema jednom primeru izvođenja, D ima formulu -L<1->L<2->CH2-CH2-, -CH..-I !-L'-CH2- -CH2-CH2-L'-L<2->, -L<1->CH2-CH2- L<2->, -L<1->CH2-L<2->CH2-, ili -CH2-L'-CH2-L<?-.>Promenljive L1 i L<2>su nezavisno izabrane iz grupe koja se sastoji od O, NR', S, SO. S02. i CR'R", pri čemu su R' i R" kao stoje definisano dole. U primerima izvođenja, pri čemu su -L<1>i -L2 susedni jedan drugom. -L<1>i -L<2>nisu istovremeno O. NR', S SO ili S02grupa

[0094]Prema jednom drugom primeru izvođenja, L<1>i L<7>nisu prisutni istovremeno. Prema ovom aspektu pronalaska, linker D je izabran iz grupe koja se sastoji od -L,-CH2-CH2-, -CHj-lJ-CHj-, -CH2-CHs-L<1->, L<2->CH2-CH2-, -CH2-L<2->CH2-, -CH2-CH2-L<2->

[0095]Prema jednom drugom primeru izvođenja, D sadrži (C3-C14)-cikloalkilenil prsten, u kome dva člana prstena obrazuju dve susedne -CH2- grupe u D, kojima je odstranjen atom vodonika Shodno tome, na primer, kada je D propilen, onda sa C2i C3atoma može biti odstranjen atom vodonika tako da se spoje sa -CH2- grupom da bi se obrazovao ciklopropil prsten kao što je ilustrovano sledećim radikalom

[0096]Za jedinjenja Formule I, R1 može biti -OH, 0R<a>, ili NRR<c>, R^je izabrano iz grupe koja se sastoji od H, linearnog ili razgranatog (Ct-C6) alkila, i (0i-CB)alkil-C(O)-1svaki W, X, Y. i Z je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od veze -C(R')(R"')-, -C(R"')r. -CR"- -NR "- -N-. -O-, -C(O)-, i -S-

[0097]U jednom primeru izvođenja, pronalaskom su realizovana jedinjenja Formule I u kojoj je D propilen, R<1>je -OH, svaki od R<2>, R<J>i R"je vodonik, svaki od W, Y i Zje -CH2i l+m+n+p -3. Alternativno tome, bilo koji od W, Y ili Z je -O-, -S-, ili -NH- i preostale dve grupe su svaka nezavisno -CH2 Zbog toga, kao što je prethodno opisano, jedinjenja koja imaju Formulu I obuhvataju analoge tetrahidro turana, tetrahidro tiofena i pirolidina, respektivno.

[0098]Prema jednom drugom primeru izvođenja, predviđena su jedinjenja Formule I u kojoj je D propilen, R'je -OH, svaki od R<£>. R'<1>i R^je vodonik, svaki od W. Y i Zje -CH2grupa, Xje -NH i l+m<+>n<+>p = 4 Alternativno tome, svaki W X Y i Z je -CH2grupa da bi se dobila jedinjenja Formule I koja su analozi 1-aminocikloheksan karboksilne kiseline.

[0099]Takođe su razmotrena jedinjenja Formule I u kojoj R1 je -ORa ili NR<h>R<c>. R<?>je izabrano iz grupe koja se sastoji od linearne ili razgranate (C,-C6) alkil, (C3-C6)cikloalkil-C(0)-, (C3-CB)cikloalkil i (C,-CB)alkil-C(0)-grupe, i svaki od R<3>i R"je nezavisno izabran između linearnog ili razgranatog (C,-C6)alkila, ili C(0)-R', ili R<3>iR4 zajednosa atomom bora za koji su vezani obrazuju 5- ili 6-člani prsten koji je potpuno zasićen, ili je delimično zasićen, gde su supstituenti R<a>, Rb i R<c>kao što je definisano.

[0100]Shodno tome, za izvesna jedinjenja Formule I, supstituent R'!je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, linearnog ili razgranatog (CrCG)alkila. (C3-C8)cikloalkila, (C:rC]4)arila, (C3-C14)heterocikloalkil-(C,-C6)alkifena-, (C3-Ci4)heteroanl-(CrCe)alkilena-, i (C3-C-4)aril(Ci-C6)alkilena-, i svaki odRb iR<c>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, -OH, linearnog ili razgranatog (CrC6)alkila, -SO^d-Csjalkila, (C3-C14)ari[-S02-, (C3-CM)heterocikloalkil-(C,-C6)alkilena-, i <C3-C,4)heteroaril-(C,-C(;)alkilena-

[0101]U jednom primeru izvođenja. W X, Y i Z zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani obrazuju prsten Prsten može sadržati jednu ih više dvostrukih veza koje su prikazane isprekidanom linijom

[0102]Svaki supstituent R'. R" i R'" za jedinjenja Formule I je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, OH, -S(O) R<d>. -S(0)2R<a>, (C,-C3)alkila. (C3-CB)arila. -NH3.-NH(C,-CB)alkila. -N[(CrCB)alkil]2, - CtOKd-CfOalkila, -C(0)(C3-C14)arila, -C(0)0(C,-C6)alkila, -C(O)0(C3-CM)arila, (C3-CB)cikloafkila, (C3-Ci4)heterocikloalkila, (C3-Ci4)heteroarila, {C3-C.4)aril-(Ci-CR)alkilena-, (C3-Cs)cikloalkil-(C,-CB)alkilena-, (C3-C14)heteroaril-(CT-C5)alkilena-, i {C3-Cl4)heterocikl-(C;-CB)alkilena-

[0103]Pored toga, za jedinjenja koja imaju Formulu I, bilo koji alkil, alkilen, aril, heteroaril. cikloalkil, ili heterocikloalkil su opciono supstituisani sa jednim ili više članova izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, okso, -COOH, -CN, -N02, -OH. -NRdRe -NR<9>S(0)2R<h>, (Ci-Cfi)alkoksi, i (C3-C,4)anloksi. pri čemu je svaki od R<d>,R<e>,R<9>, i Rh nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -H, linearnog ili razgranatog (d-Cs)a|kila, (C3-C14)aril(d-C6)alkilena-, (C3-Cn)arila, (CrCgJhidroksialkila, (C,-CB)aminoalkila. H2N(C1-C6)alkilena-. (C:rCfi)cikloalkila, (C:rC14)heterocikloalkila, (CrC-4)heteroarila, (C3-C,4)aril-(d-C5)alkilena-. NR'R"C{0)-. i (C3-CB)anl-(C3-C,4)-cikloalkilena-

[0104]Podrazumeva se da uprkos gore navedenim odredbama. Formula I ne obuhvata 1-amino-2-(3-borpropiljcikloheksan karboksilnu kiselinu, kao što su( 1S,2S)-1-amino-2-(3-borpropil)cikloheksan karboksilna kiselina i( 1S,2R)-1-amino-2-<3-borpropil)cikloheksan karboksilna kiselina

[0105]Primeri jedinjenja Formule I jedinjenja obuhvataju bez ograničenja ona koja su prikazana dole u Tabeli 1,

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I DOZIRANJA

[0106]Jedinjenja Formule I se daju pacijentu ili subjektu kome je potrebno lečenje, bilo sama ili u kombinaciji sa drugim jedinjenjima koja imaju slične ili različite biološke aktivnosti Na primer, jedinjenja i kompozicije prema pronalasku se mogu davati u kombinovanoj terapiji, tj. istovremeno u samo jednom doziranom ili odvojenim doziranim oblicima ili u odvojenim doziramm oblicima u toku svakog drugog sata ili dana. Primeri takvih kombinovanih terapija obuhvataju administraciju kompozicija i jedinjenja Formule I sa drugim agensima koji se primenjuju za lečenje erektilne disfunkcije, pulmonarne hipertenzije. hipertenzije, astme, zapaljenja, ishemijske reperfuzije, infarkta miokarda, arteroskleroze. imune reakcije, psorijaze i zarastanja rana Podesna jedinjenja za primenu u kombinovanoj terapiji obuhvataju, ali nisu ograničena na sledeća

Erektilna disfunkcija:sildenafil, vardenafil, tadalafil i alprostadil.

Pulmonarna hipertenzija / Hipertenzija:epoprostenol, iloprost, bozentan, amlodipin, diltiazem, nifedipin, ambrisentan i varfarin.

Astma:flutikazon. budezonid. mometazon flunizolid, beklometazon. montelukast, zafirlukast, zileuton, salmeterol, formoterol, teofilin. albuterol. levalbuterol. pirbuterol, ipratropijum, prednizon, metilprednizolon, omalizumab. kortikosteroid i kromolin.

Arteroskleroza:atorvastatin, lovastatin, simvastatin, pravastatin. fluvastatin, rosuvastatin, gemfibrozil, fenofibrat, nikotinska kiselina, klopidogrel

[0107]Pronalaskom je takođe realizovana farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više jedinjenja Formule I ili farmaceutski prihvatljivu so. solvat. stereoizomer ili tautomer u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. U nekim primerima izvođenja, kompozicija dalje sadrži, u skladu sa prihvatljivim praksama farmaceutskih jedinjenja, jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa, farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, razređivača, adjuvanasa, stabilizatora, emulgatora. konzervansa, boja, pufera, agenasa za poboljšanje ukusa.

[0108]U jednom primeru izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje koje je izabrano između onih koja su ilustrovana u Tabeli 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. solvat stereoizomer ili tautomer, i farmaceutski prihvatljivi nosač.

[0109]Kompozicije prema pronalasku se mogu davati oralno, topički, parenteralno, inhalacijom ili sprejom ili rektalno u formulacijama doziranih jedinica. Izraz parenteralno, kada se ovde koristi, obuhvata subkutane injekcije, intravenske, intramuskularne. intrasternalne injekcije ili tehnike infuzije.

[0110]Podesne oralne kompozicije u skladu sa pronalaskom obuhvataju bez ograničenja tablete, dražeje, lozenge, vodene ili uljne suspenzije, disperzibilne praškove ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule, sirupe ili eliksire.

[0111]U okviru pronalaska su obuhvaćene farmaceutske kompozicije podesne za pojedinačne jedinične doze koje sadrže jedinjenje prema pronalasku, njegov farmaceutski prihvatljivi stereoizomer, so. solvat, hidrat, ili tautomer i farmaceutski prihvatljivi nosač

[0112]Kompozicije prema pronalasku koje su podesne za oralnu upotrebu se mogu pripremiti bilo kojim poznatim metodom koji je poznat za proizvodnju farmaceutskih kompozicija Na primer, tečne formulacije jedinjenja prema pronalasku sadrže jedan ili više agenasa izabranih iz grupe koja se sastoji od zaslađivača. aroma, boja i konzervanasa u cilju da se realizuju farmaceutski elegantni i ukusni preparati inhibitora arginaze.

[0113]Za kompozicije tableta, aktivni sastojak u smeši sa netoksičnim farmaceutskim prihvatljivim ekscipijensom se upotrebljava za proizvodnju tableta. Primeri takvih ekscipijenasa obuhvataju bez ograničenja inertne razređivače, kao što su kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat ili natrijum fosfat; agense za granulaciju i raspadanje, na primer. kukuruzni škrob, ili alginsku kiselinu; veziva, na primer, škrob, želatin ili akaciju, i lubrikanse. na primer, magnezijum stearat, stearinsku kiselinu ili talk. Tablete mogu biti neobložene ili mogu biti obložene poznatim tehnikama oblaganja da bi se odložila dezintegracija i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu, a time se obezbeđuje odloženo terapeutsko dejstvo tokom željenog vremenskog perioda Na primer, može se primeniti materijal za vremensko odlaganje, kao što je gliceril monostearat ili gliceril distearat.

[0114]Formulacije za oralnu upotrebu takođe mogu biti prisutne kao tvrde želatinske kapsule, pri čemu se aktivni sastojak meša sa inertnim čvrstim razređivačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili kao meke želatinske kapsule, pri čemu se aktivni sastojak meša sa vodenim ili uljanim medijumom, na primer, uljem od kikirikija, tečnim parafinom ili maslinovim uljem

[0115]Za vodene suspenzije se jedinjenje prema pronalasku meša sa ekscipljensima koji su podesni za održavanje stabilne suspenzije Primeri takvih ekscipijenasa obuhvataju bez ograničenja natrijum karboksimetiicelulozu. metilcelulozu, hidropropilmetilcelulozu, natrijum alginat. polivinilpirolidon, guma tragakantu i guma akaciju

[0116]Oralne suspenzije mogu takođe sadržati agense za dispergovanje ili vlaženje. kao što je prirodni fosfatid, na primer, lecitin, ili proizvod kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama, na primer, polioksietilen stearat. ili proizvode kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima dugog lanca, na primer, heptadekaetilenoksicetanol. ili proizvode kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitola, kao što je polioksietilen sorbitol monooleat. ili proizvodima kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer, polietilen sorbitan monooleat. Vodene suspenzije takođe mogu sadržati jedan ili više konzervanasa, na primer. etil. ili n-propil p-hidroksibenzoat, jednu ili više boja, jednu ili više aroma, i jedan ili više zaslađivača, kao što su saharoza ili sahann,

[0117]Uljane suspenzije mogu biti formulisane suspendovanjem aktivnih sastojaka u biljnom ulju, na primer, ulju od kikirikija, maslinovom ulju, susamovom ulju ili kokosovom ulju, ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljane suspenzije mogu sadržati zgušnjavač, na primer, pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetll alkohol

[0118]Zaslađivači su oni koji su navedeni gore a mogu se dodati arome da bi se realizovali ukusni oralni preparati Ove kompozicije mogu biti konzervisane dodavanjem antioksidansa, kao što je askorbinska kiselina

[0119]Disperzibilni praškovi i granule podesni za dobijanje vodene suspenzije dodavanjem vode obezbeduju aktivni sastojak u smeši sa agensom za dispergovanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više konzervanasa Podesni agensi za dispergovanje Ni vlaženje i agensi za suspendovanje su oni koji su već gore navedeni Dodatni ekscipijensi, na primer, zaslađivači, arome i boje, takođe mogu biti prisutni.

[0120]Farmaceutske kompozicije prema pronalasku takođe mogu biti u obliku emulzija ulje-u-vodi. Uljana faza može biti biljno ulje, na primer, maslinovo ulje ili ulje od kikirikija, ili mineralno ulje. na primer, tečni parafin ili smeše ovih. Podesni emulgatori mogu biti prirodne gume. na primer, guma akacija ili guma tragakanta, prirodni fosfatidi. na primer. soja lecitin i estri ili parcijalni estn dobijeni od masnih kiselina i heksitola, anhidridi, na primer, sorbitan monoleat, i proizvodi kondenzacije pomenutih parcijalnih estara sa etilen oksidom, na primer. polioksietilen sorbitan monoleat Emulzije mogu takođe sadržati zaslađivače i arome

[0121]Sirupi i eliksiri mogu biti formulisani sa zaslađivačima, na primer, glicerolom, propilen glikolom. sorbitolom ili saharozom. Takve formulacije mogu takođe sadržati lokalni anestetik, konzervans, i arome i boje. Farmaceutske kompozicije mogu biti u sterilnom injektabilnom obliku, vodene suspenzije ili uljane suspenzije Ova suspenzija može biti formulisana na poznat način korišćenjem onih podesnih agenasa za dispergovanje i vlaženje i agenasa za suspendovanje koji su gore navedeni. Sterilni injektabilni preparati takođe mogu biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parentalno prihvatljivom razređivaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu primeniti su voda Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksirana ulja se obično upotrebljavaju kao rastvarač ili medijum za suspendovanje Za ove svrhe se može primeniti bilo koje blago fiksirano ulje. uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Pored toga. u dobijanju injektabilnih primenu nalaze masne kiseline, kao što je oleinska kiselina.

[0122]Jedinjenja opšte Formule I se mogu takođe davati u obliku supozitonja za rektalnu administraciju leka. Ove kompozicije se mogu pripremati mešanjem leka sa podesnim nei riti raj u čim ekscipijensom, koji je čvrst na običnim temperaturama, ali je tečan na rektalnoj temperaturi i zato se topi u rektumu da bi se oslobodio lek Takvi materijali su kakao puter i polietilen glikoli.

[0123]Kompozicije za parenteralne administracije se daju u sterilnom medijumu U zavisnosti od upotrebljenog nosača i koncentracije leka u formulaciji, parenteralna formulacija može biti suspenzija ili rastvor koji sadrži rastvoreni lek Adjuvansi kao što su lokalni anestetici konzervansi i puferi se takođe mogu dodati parenteralnim kompozicijama

SINTEZA JEDINJENJA

[0124]Jedinjenja prema pronalasku se dobijaju korišćenjem opštih metoda sinteze kao što je dalje opisano u nastavku Izbor odgovarajuće metodologije sinteze je vođen izborom željenog jedinjenja Formule I i prirodom funkcionalnih grupa koje su prisutne u međuproizvodu i finalnom proizvodu Shodno tome, mogu biti potrebni selektivni protokoli protekcije/deprotekcije tokom sinteze u zavisnosti od željenih specifičnih funkcionalnih grupa i zaštitnih grupa koje su upotrebljene. Opis takvih zaštitnih grupa i kako se one uvode t uklanjaju je onakav kao što je navedeno u PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS. treće izdanje, T VV Green i P G. M VVuts, John Wiley i Sons, Njujork 1999.

[0125]Primeri opštih metodologija sinteze za dobijanje jedinjenja Formule I su dati u nastavku. Takođe su date još specifičnije sinteze jedinjenja Formule I

[0126]Šema A dole ilustruje opšti metod za sintezu cikličnog skeleta mnogih jedinjenja Formule I. Po ovom metodu, u-alil keton A-3 se dobija od polaznih materijala koji se lako nabavljaju uz korišćenje različitih metoda. Na primer, A-3 se dobija putem sekvence koraka reakcije od odgovarajućeg estraa-karboksilne kiseline A-1. Shodno tome. kada je estar u-karboksilne kiseline A-1 komercijalno raspoloživ ili se može lako dobiti, A-3 se sintetizuje transesterifikacijom estra u ali I estar A-2, koji se podvrgava dekarboksilativnom pregrupisavanju, odn, rearanžiranju u prisustvu paladijumskog katalizatora da bi se dobio ciljni međuproizvod A-3.

[0127]Alternativno tome, ako se može nabaviti karboksilna kiselina, onda se ona može prevesti u jednostavni estar ili alil estar direktno korišćenjem mnoštva poznatih metoda. Jedan takav metod koristi alil bromid u acetonu sa vodenim kalijum karbonatom da bi se direktno sintetizovao alilestar A-2.

[0128]Prema jednom alternativnom pristupu, a-alil ketonA-3se dobija direktno od cikličnog ketonaA-4korišćenjem alil bromida i baze, kao što je litijum diizopropilamid (LDA), ili natrijum hidnd U nekim slučajevima dobija se ra-alil ketonA-3od ketonaA-4preko odgovarajućeg alil karbonata A-5. Shodno tome, reakcija cikličnog ketonaA-4sa alil hloroformatom u prisustvu baze. kao što je NaHMDS. u polarnom aprotonskom rastvaraču, kao što je THF, na -78" Crezultuje odgovarajućim alil karbonatom

A-5 koji se onda prevodi u u-alil keton A-3 u prisustvu metalnog reagensa. kao što je paladijum acetat ili tetrakis(trifenilfosfin}paladijum

[0129]Često se upotrebljavaju aditivi. kao što je tetrametiletilen diamin (TMEDA). za olakšanje obrazovanja alil karbonata Ova metodologija sinteze je prilagodljiva i podesna je za enantioselektivno dobijanje ketona A-3 uz konšćenje izvesnih hiralnih liganada. Opis ovog pristupa može se naći u Trost, B. M et al., J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 18343-18357.

[0130]u-alil keton A-3 se shodno tome lako pretvara u zaštićenu cikličnu amino kiselinu A-6 uz korišćenje Ugi reakcije, tretiranjem A-3 sa terc-butilizocijanatom (t-BuNC) i NH4OAc uz konšćenje trifluoroetanola kao rastvarača Za pregled Ugi reakcije vidi Doemling, A , Chem. Rev. 2006, 106, 17-89. Mogu se koristiti alternativni rastvarači, kao i drugi izocijanati, izvori amina i izvori karboksilnih kiselina. Izbor korišćenih amina, izocijanata i karboksilnih kiselina, pored toga, diktira prirodu zaštitne grupe koja je prisutna na rezultujućoj amino kiselini. U nekim primerima izvođenja, enantioselektivnost se ostvaruje korišćenjem optički aktivnog amina ili karboksilne kiseline.

[0131]Kao alternativa Ugi reakciji, a-supstituisana ciklična amino kiselina A-6 se sintetizuje od odgovarajućeg ketona A-3 uz korišćenje Štrekerove reakcije. Mnogi primeri Štrekerove reakcije modifikovane Štrekerove reakcije se nalaze na raspolaganju u literaturi (Ma, D , Tian, H , Zou, G , J. Org. Chem. 1999, 64. 120-125; Murata, Y.. Statake, K,, Svnthetic Communications, 2008, 38. 1485-1490). Finalni proizvod koji sadrži grupu borne kiseline se dobija reakcijom zaštićene amino kiseline A-6 sa izvorom borana, kao što je pinakol boran, u prisustvu iridijuma ili rodijuma kao katalizatora Rezultujući boranski međuproizvod A-7 se hidrolizuje korišćenjem vodene kiseline da bi se dobila ciljna jedinjenjaA-8.

[0132]Sledeći podesni metod za dobijanje aiil ketonskog međuproizvoda se odnosi na reakciju karboksilne kiseline B-1 sa oksalil hloridom i (N-izocijanimino) trifenilfosforanom (CNNPh3), što je bilo praćeno sa gašenjem reakcione smeše da bi se dobio odgovarajući hlorohidrozon B-2 kao stoje ilustrovano na Šemi B

[0133]Tretiranje međuproizvodaB-2sa Znf3r3 i bazom (npr diizopropilaminom), rezultuje obrazovanjem diazoketona B-3, koji se podvrgava ciklizaciji uz korišćenje Cu(AcAc) da bi se dobio željeni alil ketonski međuproizvod B-4.

[0134]Međuproizvod B-4 se onda prevodi u ciljno jedinjenje uz korišćenje Ugi reakcije, što je bilo praćeno sa hidroboracijom i deprotekcijom, kao što je prikazano na Šemi A. Vidi Padwa, A.; VVeingarten, D. Chem. Rev. 1996, 96, 223-269 za opšti pregled karbinom posredovanih reakcija ciklizacije.

[0135]Alternativno tome, alil ketonski međuproizvod se dobija korišćenjem Dikmanove kondenzacije kao što je prikazano dole na Šemi C. Po ovom metodu, alil diestar C-1 se ciklizuje sa bazom kao što je natrijum hidrid Ni LDA da bi se obrazovao željeni alil keton C-2 koji se konvertuje u ciljno borno-kiselinsko jedinjenje uz korišćenje metodologija koje su prikazane na Šemi A. Kada polazni dialilestar C-1 ne može komercijalno da se nabavi, onda se on lako priprema od odgovarajuće dikiseline uz konšćenje poznatih metoda

[0136]Enantioselektivna sinteza jedinjenja koja odgovaraju Formuli I se lako ostvaruje korišćenjem mnoštva metoda koje propisuju primenu hiralnih pomoćnih materija. Prema jednoj takvoj metodi za sintezu mnogih jedinjenja Formule I, upotrebljava se (R)-( + )-1-amino-2-(metoksi)pirolidin kao hiralna pomoćna materija. Vidi Šemu D i procedure koje su opisali Enders, D et al,. Organic Svnthesis 1987, 67 i Enders, D. et al., Sinteza 2005, 20, 3517-3530.

[0137]Shodno tome, keton D-1 se kondenzuje sa hidrazinskom pomoćnom materijom u prisustvu toluensulfonske kiseline u toluenu da bi se obrazovao hidrazon D-2. Često se reakcija kondenzacije izvodi u prisustvu molekulskih sita ili korišćenjem Dean-Stark aparature da bi se odstranila voda Supstituenti u prstenu na ugljeniku susednom hiđrazonu D-2 se uvode enantioselektivno pod baznim uslovima. Na primer. kada je željeni supstituent -CH2-CH2-CH2-B(OH)2grupa, ona se lako uvodi reakcijom hidrazona sa alil bromidom da bi se dobio supstituisani hidrazon D-3 koji se hiđroboratira da bi se dobilo dioksaborolansko jedinjenje D-4. Alternativno tome. hidrazon D-2 se može direktno alkilovati korišćenjem 2-(4-bromobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1 3.2-dioksaborolana (nije prikazan), da bi se dobiloD-4.

[0138]Posle enantioselektivnog inkorporiranja bočnog lanca, hidrazon D-4 se tretira sa ozonom, što je praćeno sa redukcijom ozonida sa trifenilfosfinom ili dimetil sulfidom da bi se dobio optički aktivni keton D-5. Keton D-5 se konvertuje u odgovarajuću cikličnu amino kiselinu uz korišćenje Ugi ili Štrekerove reakcije kao što je gore opisano. Deprotekcija ciklične amino kiseline koja sadrži bor D-6 sa vodenom mineralnom kiselinom daje jedinjenje Formule ID-7.

[0139]Za neke primere se upotrebljavaju hidrazonski intermedijeri D-3iliD-4 da bi se u prsten uveo supstituent, pri čemu Zje CRR' i R i/ili R' se uvode putem druge i opciono treće alkilacije. Metodologija sinteze koja je prikazana na Šemi D. takođe dozvoljava enantioselektivno uvođenje supstituenta grupe R i R' na poziciju Z.

[0140] U jednom primeru izvođenja, Jedinjenja Formule I koja imaju supstituentne grupe na Z se dobijaju korišćenjem odgovarajuće supstituisanog ketona D-1. Na osnovu opšteg metoda koji je prikazan na Šemi D, stručnjacima iz oblasti hernije je očigledno da se metodologija sinteze može iako primeniti uz variranje polaznih materijala i uslova reakcije da bi se došlo do jedinjenja obuhvaćenih predmetnim pronalaskom U nekim slučajevima, zaštita izvesnih reaktivnih funkcionalnosti može biti neophodna za ostvarivanje nekih od gore navedenih transformacija Generalno, potreba za takvim zaštitnim grupama, kao i uslovi koji su neophodni za vezivanje i odstranjivanje takvih grupa će biti očigledni stručnjacima iz oblasti organskih sinteza.

[0141]Sledeći koristan pristup za dobijanje jedinjenja prema pronalasku primenjuje Corey-Link sintezu amino kiselina. Vidi Corey et al , J Am. Chem Soc . 114. (1992). str 1906-1908 Prema ovom pristupu amino kiselina se formira od ketona korišćenjem ekvivalenta karboksilne kiseline, kao što je hloroform, i izvora amina, kao što je natrijum azid. Kada se upotrebljava optički čist izvor amina kao što je metil benzilamin, u reakciji se formiraju dijastereomen i često se mogu dobiti finalni proizvodi kao pojedinačni enantiomeri. Kao što je prikazano na Šemi E. međuproizvod alil keton E-1 se tretira sa anjonom hloroforma generisanim korišćenjem baze, kao što je UHMDS u THF, da bi se obrazovao odgovarajući karbinol E-2. Sledstveni tretman sa natrijum hidroksidom stvara dihloroepoksid koji se otvara sa izvorom amina, kao što je natrijum azid, da bi se dobila derivatizovana amino kiselina E-3. Karboksilna kiselina se može zaštititi estrom (E-4) ili amidom pre hidroboracije dvostruke veze da bi se dobio međuproizvod E-5. Redukcija azido grupe i hidroliza daju ciljna jedinjenja E-6. U zavisnosti od željene funkcionalnosti, mogu biti potrebni ili poželjni dodatni koraci ili alternativne procedure.

[0142]Dobijanje jedinjenja prema predmetnom pronalasku je dalje ilustrovano sledećim primerima.

PRIMERI

[0143]Generalno, međuproizvođi i ciljna jedinjenja koja sadrže hiralne centre su označeni stereospecifično. Ovo označavanje se upotrebljava primarno za razlikovanje relativne stereohemije i ne ukazuje na optičku čistoću. Stručnjacima iz oblasti organskih sinteza će biti očigledno koja jedinjenja su optički čista na osnovu metoda koje su upotrebljene za njihovo dobijanje Jedinjenja koja su opisana u odeljcima sa metodama i primenma takođe se mogu izolovati kao hidrati ili soli (npr soli hlorovodomčne kiseline), ali nisu nužno označena kao takva. Jedinjenja koja su opisana u ovom pronalasku su generalno imenovana korišćenjem opštih/zajedmčkih imena, IUPAC imena, ili imena generisanih korišćenjem algoritma za dodeljivanje imena u ChemDravv 10.0.

Primer 1. Dobijanje (1S,2S)-1-amino-2-(3-borpropil)ciklopentankarboksilne kiseline (anti-izomer,

racemska)

[0144]Primer 1 opisuje višekoračni protokol sinteze primenjen za dobijanje ilustrativnog jedinjenja Formule I.

Korak 1. Metod A; Alil 2- oksociklopentankarboksilat ( transesterifikacija)

[0145]

[0146]Mešani rastvor metil 2-oksociklopentankarboksilata (4,26 g. 30 mmol) i alil alkohola (10,2 ml_, 150 mmol) u anhidrovanom toluenu (25 mL) je bio tretiran sa prahom cinka (0,40 g, 6 mmol), pa je refluksovan 48 h. i ohlađen je na sobnu temperaturu Suspenzija je bila isfiltnrana, a zatim je filterski kolač ispran sa toluenom, i filtrat je koncentrovan da bi se dobio alil 2-oksociklopentankarboksiiai (5.01 g, 99%) kao bezbojno ulje<1>H NMR (CDCI3, 300 MHz) č 5.8 (ddt,J1 =15,9 Hz,J2 =10,5 Hz,J:, =4,8 Hz, 1 H), 5,33 (dtd,J, =15,9 Hz,J?= 2.7Hz,J3=14 Hz, 1 H). 5,23 (dtd,J, =10,5 Hz,J, = 2,7Hz,J3= 1,4Hz, 1 H), 4,83-4,75 (m, 1 H), 3,18 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 2,41 - 2,23 <m, 4 H), 2,22 - 2,07 (m, 1 H), 1,94 - 1,80 (m, 1 H); MS (+CI):m/z za C9Hi203:očekivano 168.1; utvrđeno 169,1 (M+H)<+>

Korak 1. Metod B: Alil 2- oksociklopentankarboksilat ( Dikman)

[0147]Mešani rastvor dialil adipata (4.53 g, 20 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (100 mL) je bio ohlađen na 0 X, pa je tretiran sa litijum bis(trimetilsilil)amidom (40 mL, 1.0 N u THF, 40 mmol). Pošto je dodavanje bilo završeno, rastvor je bio zagrejan do sobne temperature i onda je mešan 2 h Rastvor je zatim bio ponovo ohlađen na 0 C. pa je tretiran sa sirćetnom kiselinom (2,53 mL 44 mmol) ukapavanjem. Mutna smešaje bila zagrejana do sobne temperature i isfiltrirana je Filtrat je bio koncentrovan, a zatim je rastvoren u minimalnom dihlorometanu i prečišćen sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, dlhlorometan) da bi se dobio alil 2-oksociklopentankarboksilat (2,62 g, 78%) kao bezbojno ulje. Podaci za karakterizaciju su isti kao što je uočeno metodom A.

Korak 2: Sinteza 2- alilciklopentanona

[0148]

[0149]Mešani rastvor paladijum(ll) acetata (51 mg, 0,23 mmol) i trifenilfosfina (0,24 g, 0,9 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) je bio zagrevan pod atmosferom azota na 65 "C. Vrelom rastvoru je dodat alil 2-oksociklopentankarboksilat (2,52 g, 15 mmol) u anhidrovanom THF (brzo barbotiranje posle dodavanja) Posle 45 minuta na 65 °C. reakciona smeša je ohlađena i koncentrovana Rezultujuće rezidualno žuto ulje je bilo rastvoreno u minimalnom dihlorometanu i prečišćeno je sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, dihlorometan) da bi se dobio 2-alilciklopentanon (1,32 g, 71%) kao bezbojno ulje. 1H NMR (CDCI3, 300 MHz) č 5,72 (ddt, J, = 17,1 Hz,J2=10,2 Hz, J3=7,2 Hz, 1 H), 5.09-4.98 (m, 2 H), 2,55-2,46 (m. 1 H), 2.35-2,22 (m, 1 H). 2,22-1,91 (m, 5 H), 1,87 - 1,70 (m, 1 H), 1.63 - 1.48 (m,

1 H).

Korak 3: ( 1 S. 2S)- 1- acetamido- 2- alil- N- terc- butilciklopentankarboksamid ( anti- izomet: racemski)

[0150]

[0151]Mešana smeša 2-alilciklopentanona (0,993 g, 8 mmol) i atnonijum acetata (1,54 g, 20 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (2,5 mL) je bila tretirana sa t-butil izocijanidom (1,81 mL, 16 mmol). Reakciona smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi 4 dana, posle čega je smeša bila rastvorena u minimalnoj količini dihlorometana i prečišćena sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, 60% etil acetat u heptanu) da bi se dobio anti-izomer (1S.2S)-1-acetamido-2-alil-N-terc-butilciklopentankarboksamida (0,771 g, 36%) kao bela čvrsta materija Zadnje pomenuti migrirajući sln-izomerje dobijen kao bela čvrsta materija (0.851g, 40%), povećanjem koncentracije polarnog rastvarača etil acetata do 80%. Anti-izomer:<1>H NMR (CDCI3. 300 MHz) 5 7,26 (br s, NH. 1 H). 6.82 (br s, NH, 1 H), 5.88 - 5,72 (m. 1 H), 5.07 (br d,J= 17 Hz, 1 H), 5,00 (br d,J= 12 Hz, 1H). 2,56 - 2,41 (m, 1 H), 2.36 - 2,17 (m. 3 H). 2.01 (s.

3 H), 197 - 1,81 (m, 2 H), 1.72 - 1.60 (m. 2 H). 1.32 (s. 9 H), MS (+CI): m/z za C-..I L-.N.-O, očekivano 266,2; utvrđeno 266 2 (M+H)<+>

Korak 4: ( 1S, 2R)- 1- acetamido- N- terc- butil- 2-( 3-( 4. 4, 5, 5- tetrametil- 1, 3. 2- dioksaborolan- 2-

il) propi!) ciklopentankarboksamid { anti-\ zomer, racemski)

[0152]

[0153]Mešani rastvor (1S,2R)-1-acetamido-2-alil-N-terc-butilciklopentankarboksamida (0,599 g, 2.25 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (9 mL) pod azotom je bio tretiran sa I^CbfCODjj (45 mg, 0,07 mmol) i DiPhos (54 mg, 0,136 mmol) i onda je mešan na sobnoj temperaturi 30 min Ukapan je 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksaborolan (0,65 mL, 4.48 mmol), pa je rastvor mešan na sobnoj temperaturi 20 h Reakciona smeša je izlivena u vodu (20 mL) i onda je ekstrahovana sa etil acetatom (40 mL, onda 2 x 15mL), a sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (30 mL), te je osušen preko MgSCv i koncentrovan. Ostatak je bio rastvoren u minimalnom dihlorometanu, pa je prečišćen sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, 40-50% etil acetat u heptanu) da bi se dobio (1S,2S)-1-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4.4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil) ciklopentankarboksamiđ (0.695g, 78%) kao bela čvrsta materija 'H NMR (CDCI3. 300 MHz) 0 6.72 (br s, NH, 1 H), 5,68 (br s, NH, 1 H), 2.46 - 2,29 (m, 2 H), 2.10 - 2.19 (m, 1 H), 2,02 (s, 3 H). 2,00 - 1,88 (m, 1H), 1,75 - 1,60 (m, 3 H), 1,52 - 1,38 (4 H), 1,32 (s, 9 H), 1.31 (s. 12 H), 0,81 - 0,70 (m. 2 H): MS (+CI): m/z za C2,H39F3N204: očekivano 394.3, utvrđeno 395,2 (M+H)'.

Korak 5: ( 1 S, 2R)- 1- amino- 2-( 3- borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina ( antnzomer, racemski)

[0154]

[0155]Mešana smeša (1S,2R)-1-acetannido-N-terc-buttl-2-(3-(4.4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamida (0,627 g, 1,59 mmol) u6N HCI (15 mL) je bila zagrevana na 90 °C tokom 20 h, pa je ohlađena na sobnu temperaturu, i razređena sa vodom (15 mL) Smeša je bila ekstrahovana sa dihlorometanom (2x15 mL), te je koncentrovana Onda je bila dodata voda (20 mL) koncentrovanoj sirovoj smeši, a zatim je vodeni rastvor ponovo koncentrovan u vakuumu (2 x) da bi se odstranio višak HCI Rezultujući ostatak je bio rastvoren u metanolu (5 mL), te je razređen do zapremme od 40 mL sa etrom i onda je mešan 1 sat, da bi se odstranio čvrsti tercbutilamin hidrohlorid filtriranjem Rezultujući filtrat je posle koncentracije bio tretiran sa rastvorom koncentrovanog amonijum hidroksida (15 mL), što je bilo praćeno sa odstranjivanjem viška amonijum hidroksida pod vakuumom (3 x). Rezultujući čvrsti beli ostatak je bio rastrljan uz korišćenje acetonitnla, pa je osušen da bi se dobilo ciljno jedinjenje (1S,2R)-1-amino-2-(3-borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina (0,397g, 93%) kao beli prah koji je postojao kao 1:1 smeša ciklizovanog i neciklizovanog oblika.<5>H NMR (DMSO. 300 MHz) 56.38 (brd.J=11,4 Hz, NH, 0.5 H).5,97 (brd, J=12 Hz. NH. 0.5 H). 2.22-2,05 (m. 1 H). 1.98 - 1,42 (m, 6 H). 1,43 - 1,00 (m, 3 H), 0,95 - 0.88 (m, 1 H), 0,60 - 0,42 (m 1 H). 0,38 - 0 20 (m. 1 H); MS (+CI): m/z za C9H,3BN04: očekivano 215,1; utvrđeno 215,3 (M+H)'

Primer 2. Dobijanje (1S,2S)-1-amino-2-(3-borpropil) ciklopentankarboksiine kiseline (sin-izomer,

racemski)

[0156]

Korak 1: ( 1 S, 2S)- 1- acetamido- 2- alil- N- terc- buti! cikiopentankarboksamid

[0157]Ciljni međuproizvod (1S,2S)-1-acetamido-2-alil-N-terc-butilciklopentankarboksamid je bio takođe karakterisan korišćenjem 'H NMR spektroskopije i on predstavlja drugi izomer koji se formira korišćenjem stereoselektivnog metoda sinteze koji je opisan u koraku 3 Primera 1. "H NMR spektroskopija (CDCI3, 300 MHz) 5 6,44 (br s, NH, 1 H), 6.06 (br s, NH, 1 H) 5,80 - 5,65 (m, 1 H), 5,05

- 4,96 (m, 2 H). 2,54 - 2,56 (m, 2 H), 2,30 - 2,18 (m, 1 H), 2,10-1,95 (m, 1 H). 1,99 (s, 3 H), 1,91 - 1,72 (m, 5 H). 1,58 - 1,43 (ni, 1 H), 1,32 (s. 9 H); MS (+CI): m/z za C15H,,6N,,02: očekivano 266,2; utvrđeno 267,2 (M+H)<+>

Korak 2: ( 1S, 2S)- 1- acetamido- N- terc- hutil- 2-( 3-( 4. 4. 5. 5- tetrametil- 1.3, 2- dioksaborolan- 2-

il) propil) ciklopentankarboksamid ( sin- izomer)

[0158]

[0159]Mešani rastvor sin-(1S,2S)-1-acetamido-2-alil-N-terc-butilciklopentankarboksamida (0,600 g, 2,25 mmol) u anhidrovanom metilen hloriđu (9 mL) pod azotom je bio tretiran sa lr2CI2(COD)2 (45 mg, 0,07 mmol) i DiPhos (54 mg, 0,136 mmol). a rezultujuća smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Onda je bio ukapan 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksaborolan (0,65 mL, 4.48 mmol), pa je rastvor mešan na sobnoj temperaturi još dodatnih 20 h. Reakciona smeša je izlivena u vodu (20 mL), a zatim je ekstrahovana sa etil acetatom (40 mL, onda 2x15 mL). te su sjedinjeni organski slojevi bili isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (30 mL), i osušeni korišćenjem anhidrovanog MgSO^, pre koncentracije Dobijeni ostatak je bio rastvoren u minimalnoj zapremini dihlorometana. pa je prečišćen korišćenjem fleš kolonske hromatografije (silika gel. 40-80% etil acetat u heptanu) da bi se dobio sin-(1S,2S)-1-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamid kao bela čvrsta materija (0.71 Og. 80%)<1>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 6,21 (brs, NH, 1 H). 6,06 (br s, NH, 1 H). 2,40-2,31 (m, 2 H), 2.09 - 1.99 (m, 1 H), 1,98 (s, 3 H), 1,98 - 1,41 (m, 1 H), 1,86 - 1,73 (m 2 H), 1,58 - 1,48 (m, 3 H), 1,32 (s. 9 H), 1,35-1.16 (m, 2 H). 1,23 (s. 12 H), 0,80 - 0.71 (m 2 H); MS (+CI): m/z za C2iH39BN70, očekivano 394.4: utvrđeno 395.2 (M+H)<+>.

Korak 3: ( 1S. 2S)- 1- amino- 2-( 3- borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina ( sin- izomer)

[0160]

[0161]Mešana smeša sin-(1S,2S)-1-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamida (0.641 g, 1,625 mmol) u 6 N HCI (15 mL) je bila zagrevana na 90 °C tokom 20 h, pa je ohlađena na sobnu temperaturu, i razređena sa vodom (15mL). Smeša je bila ekstrahovana sa metilen hloridom (2 x 15mL) i zatim je koncentrovana. Dva puta joj je bila dodata voda (20 mL), i dva puta je bila odstranjenau vakuumuda bi se odstranio višak HCI. Ostatak koji je bio dobijen posle koncentracije je bio rastvoren u metanolu (5 mL), a zatim je razređen do zapremine od 40 mL sa etrom i onda je mešan 1 h da bi se odstranio čvrsti tercbutilamin hidrohlorid koji je isfiltriran, Rezultujući filtrat je bio koncentrovan, pa je tretiran sa koncentrovanim amonijum hidroksidom (15 mL, 3x) Odstranjivanjem viška amonijum hidroksida u vakuumu je dobijen čvrsti beli ostatak koji je bio rastrljan uz korišćenje acetonitnia i osušen da bi se dobila( 1S2S,)-1-amino-2-(3-borpropil)ciklopentankarboksilna kiselina kao beli prah koji je sadržao 1:1 smešu ciklizovanog i neciklizovanog oblika (0,276g. 63%) ^ NMR (DMSO, 300 MHz) 5 6.49 - 6,37 (m, NH. 2 H), .2,0 - 1,85 (m, 2 H), 1,83 - 1,58 (m, 6 H), 1,53 - 1,25 (m, 3 H), 1,00 - 0,80 (m, 1 H), 0,49 - 0,40 (m, 1 H), 0,40 - 0,31 (m, 1 H): MS (+CI). m/z za CQHlflBNO„ očekivano 215,1; utvrđeno 215.3 (M+H)

Primer 3: Dobijanje (2R,3S)-3-amino-2-(3-borpropil>tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline

Korak 1: 4-( altloksi)- 2- oksobutanhidrazonoil hlond

[0162]

[0163]Rastvoru 3-(propen-3-iloksi)propionske kiseline {0,976 g, 7.5 mmol) i anhidrovanog N,N-dimetilformamida (0,1 mL) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (40 mL) pod atmosferom azota je bio dodat oksalil ftlorid (5.5 mL. 2,0 N u dihlorometanu. 11 mmol) Reakciona smeša je onda mešana 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je koncentrovana na 40 "C pod vakuumom da bi se dobila finalna zapremina od 5 mL Bio joj je dodat anhidrovani dihloroetan (20 mL; 3x), a reakciona smeša je bila koncentrovana posle dodavanja svakih 20 mL dihlorometana. Rezidualni rastvor dobijen posle finalne re koncentracije je bio razređen sa anhidrovanim dihloroetanom (20 mL), pa je ukapan u mešani na 4 "C ohlađeni rastvor N-izocijanoimino-trifenilfosfoforana (3,33 g, 11 mmol) u anhidrovanom dihloroetanu (20 mL). Posle mešanja na 4 "C tokom 1 h, reakcija je zagrejana do sobne temperature i onda je ostavljeno da se meša još dodatnih 3 h. Reakcija je zaustavljena gašenjem sa vodom (10mL i ostavljanjem da se smeša voda-dihlorometan meša dodatnih 16 h na sobnoj temperaturi

[0164]Ugašenoj reakcionoj smeši je dodata voda (25 mL), tako da se vodeni sloj razdvojio od organskog sloja Vodeni sloj je bio ekstrahovan sa metilen hloridom (2x15 mL), a sjedinjeni organski sloj je bio osušen preko anhidrovanog Na2SOdpre koncentracije i prečišćavanja sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, 5% etil acetat u dihlorometanu) da bi se dobio 1-hloro-1,2-diketo-4-(propen-3-iloksi)butan-1 -hidrazon kao bledo žuto ulje (1,05 g, 74%). 1H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 6.64(brs. 2 H),5,87 (ddt Ji=17 Hz.J?=10 Hz, J3= 5,4 Hz. 1H), 5,30 - 5.14 (m 2 H), 4,00 - 3.93 (m, 2 H), 3,78( t. J= 6,5Hz, 2 H,). 3,12 (t.J = 6,5Hz, 2 H): MS (+CI):m/z za C - i ,0.N.,O očekivano 190,1; utvrđeno 191,2 (M+H)+

Korak 2: 4-( aliloksi)- 1- diazobutan- 2- ort

[0165]

[0166]Dok je bio pod atmosferom azota, mešanom rastvoru 1 -hloro-1,2-diketo-4-(propen-3-iloksi)butan-1-hidrazona (2.10 g, 11 mmol) u anhidrovanom metilen hlondu (40 mL) je bio dodat anhidrovani cink bromid (0,563 g, 2.5 mmol), što je bilo praćeno sa ukapavanjem anhidrovanog N,N-diizopropilamina (2,1 mL. 15 mmol). Reakciona smeša je bila onda mešana 1 h, pa je zatim tretirana sa 1% vodenom tetranatrijumovom soli etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) (30 mL), i mešana je još dodatnih 15 min Vodeni i organski slojevi formirani posle dodavanja vodene EDTA su bili razdvojeni, a vodeni sloj je bio ekstrahcvan sa metilen hloridom (2 x 15mL). Sjedinjeni organski slojevi bili osušeni preko anhidrovane Na2S04. i koncentrovani pre prečišćavanja korišćenjem fleš kolonske hromatografije (silika gel, 10% etil acetat u dihlorometanu), da bi se dobio 1-diazo-2-keto-4-(propen-3-iloksi)butan (1,42 g, 84%) kao žuto ulje.<1>H NMR (CDCI3. 300 MHz) č 5,95 - 5.80 (m, 1 H), 5,36 (s, 1 H), 5,28 (dq,J,= 15,6 Hz,J2 =1,6 Hz, 1 H).5,19 (dq,J, - 11,7Hz Jp= 1.6 Hz, 1 H). 5,36 (br s. 1 H). 5,15 - 5,30 (m. 2 H), 3,98 (dt.J, =5.5 Hz.J2 = 1,5Hz, 2 H). 3,71 (t,J = 6.5Hz. 2 H). 2.57 (br s. 2 H): MS (+CI): m/z za C/H10N2Oz: očekivano 154,1; utvrđeno 155,1 (M+H)<+>

Korak 3: 2- ali! dihidrofuran- 3( 2H)- on

[0167]

[0168]Rastvor 4-(aliloksi)-1 -diazobutan-2-ona (1,505g 9.76mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (150 mL) je bio ukapan u refluksirajući rastvor bakar(ll) acetilacetonata (0.13 g, 0,50 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (150 mL). Posle refluksovanja rezultujuće smeše tokom 2 sata, rastvor je bio koncentrovan i zatim je prečišćen korišćenjem fleš kolonske hromatografije (silika gel, dihlorometan) da bi se dobio 2-alildihidrofuran-3(2H)-on (1,147 g, 93%) kao bezbojno ulje. 'H NMR (CDCI3, 300 MHz) č 5,90 - 5,75 (m, 1 H), 5,20-5,05 (m, 2 H). 4,33 - 4,29 (m. 1 H), 4.07 (q,J= 9 Hz, 1 H), 3,79 (dd,J,=7,5 Hz,J2= 4,5Hz, 1 H), 2,60-2,45 (m, 3 H), 2,34 (q,J =7.5 Hz, 1H), MS ( + CI): m/z za C7H-0O2: očekivano 126,1; utvrđeno 127 2 (M+H)\ 149,1 (M + Na)

Korak 4: ( 2R, 3S)- 3- acetamido- 2- alil- N- terc- butiltetrahidrofuran- 3- karboksamid ( racemski)

[0169]

[0170]Rastvor 2-alildihidrofuran-3(2H)-ona (1,2 g. 9,5 mmol) i amonijum acetata (4,39 g, 57,0 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (5 mL) je bio tretiran sa terc-butil izocijanidom (2,37 g, 3,23 mL, 28,5 mmol) Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 dana, reakciona smeša je razređena sa vodom (50 mL) i ekstrahovana je korišćenjem etil acetata (2 x 50 mL) Sjedinjeni organski slojevi su bili isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom, pa su osušeni preko MgS04, te su isfiltrirani i koncentrovani. Prečišćavanje sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, 50 % etil acetat u metilen hloridu) je dalo( 2R3S)-3-acetamido-2-alil-N-terc-butiltetrahidrofuran-3-karboksamid kao bezbojno ulje (930 mg 36 %) i(2S. 3S)-3-acetilamido-2-aliLN-ferc-butiltetrahidrofuran-3-karboksamid kao bezbojno ulje (650 mg, 26 %). Analitički podaci za( 2R,3S)-3-acetilamido-2-alil-N-fe/c-butiltetrahidrofuran-3-karboksamid: ^ NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 6,65 (s, NH, 1 H), 6.06 (s, NH, 1 H), 5,86 (m, 1 H), 5,16 (m 2 H), 4,20 (dd. 9 Hz, J2 = 4 Hz, 1 H), 3,82 (m, 2 H), 2,54 (m 2 H). 2,20 - 2,40 (m, 2 H), 2 03 (s, 3 H), 1,32 (s. 9 H); MS (+CI): m/z za CuH2AN203 očekivano 268.2; utvrđeno 269.2 (M+H)'

Kora/c5.( 2R, 3S)- 3- acetamido- N- terc- butil- 2-( 3-( 4. 4.5, 5- tetrametil- 1. 3, 2- dioksaborolan- 2-

il) propil) tetrahidrofuran- 3- karboksamid

[0171]

[0172]Rastvor (2R,3S)-3-acetamido-2-alil-N-terc-butiltetrahidrofuran-3-karboksamida (930 mg. 3.47

mmol) u dihlorometanu (20 mL). je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien iridijum(l) dimerom (70 mg. 3 mol%) i 1,2-bis(difenilfosfino)-etanom (83 mg, 6 mol%) Rastvor je bio mešan na sobnoj temperaturi 30 minuta, a onda je bio ukapan 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksaborolan (1,01 mL, 6,94 mmol), i reakcija je bila mešana preko noći na sobnoj temperaturi Sledećeg dana, reakciona smeša je izlivena u vodu i vodeni rastvor je bio ekstrahovan uz korišćenje etil acetata (3 x). Sjedinjeni organski slojevi su bili isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom, pa su osušeni preko anhidrovanog magnezijum sulfata, te su isfiltrirani i koncentrovani Prečišćavanje sa fleš kolonskom hromatografijom (silika gel, 50

- 80% etil acetat u dihlorometanu) je dalo (2R,3S)-3-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4,4 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)tetrahidrofuran-3-karboksamid kao bezbojno ulje (864 mg, 63 %), H NMR (CDCI3, 300 MHz) č 7,01 (s. NH, 1 H), 6,10 (s. NH, 1 H), 4,38 (m, 1 H), 4,12 (m, 1 H), 4,00 (m, 1 H), 2,96 (m, 1 H), 2,02-2,18 (m, 2 H). 1,99 (s, 3 H). 1,42- 1,62 (m, 3 H), 1,36 (s. 9 H), 1,22 (s, 12 H), 0,76 (m, 2 H); MS (+CI); m/z za C;!)l l:. SN, 0: očekivano 396,3; utvrđeno 397,4 (M+H)\

Korak 6: { 2R, 3S)- 3- amino- 2-( 3- borpropil) tctrahidrofuran- 3- karboksi! na kiselina

[0173]

[0174]Rastvor (2R,3S)-3-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4,4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)propil)tetrahidrofuran-3-karboksamida (860 mg) u 6 N HCI (15 mL) je bio mešan na 90 °C tokom 1dana. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je bila preneta u levak za separaciju, pa je razređena sa dejonizovanom vodom (10 mL) i isprana je sa dihlorometanom (3 x) Vodeni rastvor je bio koncentrovan. Prečišćavanje sa RP-HPLC (10-100% acetonitrila u vodi) je dalo (2R.3S)-3-amino-2-

(3-borpropil)tetrahidrofuran-3-karboksilnu kiselinu, kao belu čvrstu materiju (269 mg) 'H NMR (D20, 300 MHz) 5 3.97 (m, 2 H). 3.82 (m, 1 H). 2.66 (ddd. J,= 15 Hz. J;.= 9.5 Hz, J}= 5 5 Hz. 1 H). 2.14 (ddd, J,= 15 Hz,J2=9 Hz, J3= 6.5 Hz, 1 H), 1.22-1,49 (m, 4 H). 0,67 (m, 2 H); MS (+CI). m/z za CaH1BBINOs: očekivano 217,1; utvrđeno 435.3 (2M+H)<+>, 417,2 (2M+H-H?0)<*>, 217,7 (M+H)<+>, 200,0 (M+H-2H20)\

Primer 4: Dobijanje (2S,3S)-3-amino-2-{3-borpropil)tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline

Korak 1: ( 2S. 3S)- 3- acetamido- 2- a! il- N- terc- butittetrahidrofuran- 3- karboksamid

[0175]

[0176](2S,3S)-3-acetamido-2-alil-N-terc-butiltetrahidrofuran-3-karboksamid je bio dobijen zajedno sa svojim izomerom u koraku 4 Primera 3. 'H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 5 6.99 (s, NH, 1 H), 6.09 (s, NH. 1 H). 5,78 (m, 1 H), 5,08 (m, 2 H). 4 49 (dd.J, = 9Hz,JP=5 Hz, 1 H), 4.17 (q,J= 9Hz, 1 H), 4.04 (td,J-, =9 Hz, Js= 3,5 Hz, 1 H). 2,97 (ddd, Jf = 12.5 Hz,J2=9 HzJ3=3,5 Hz, 1 H). 2,04 - 2 36 (m. 3 H). 1.99 (s, 3 H), 1.38 (s. 9 H); MS (+CI): m/z za C^H^Os očekivano 268,2; utvrđeno 269,2 (M+H)'

Korak 2: ( 2S, 3S)- 3- acetamido- N- terc- butil- 2-( 3-( 4. 4. 5. 5- tetrametil- 1 3. 2- dioksaborolan- 2-

il) propil) tetrahidrofuran- 3- karboksamid

[0177](2S,3S)-3-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4,4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)tetrahidrofuran-3-karboksamid je bio dobijen uz korišćenje metoda opisanog u koraku 5 Primera 3. Jedinjenje iz naslova je izolovano kao bezbojno ulje (496 mg),tH NMR (CDCI3. 300 MHz) 5 6 57 (s, NH, 1 H), 5.83 (s, NH, 1 H), 4.04 (m, 1 H), 3.88 (m, 2 H), 2,62 (m, 1 H), 2 48 (m, 1 H). 2 05 (s, 3 H), 1,40-1.58 (m, 4 H), 1 33 (s. 9 H), 1 24 (s, 12 H). 0 83 (t, J = 6 5 Hz, 2 H); MS (+CI): m/z za C20H37BN2O&: očekivano 396.3; utvrđeno 397 3 (M+H)V

Korak3:/2S, 3S)- 3- amino- 2-( 3- borpropii) tetrahidrofuran- 3- karboksiina kiselina

[0178](2S,3S)-3-amino-2-{3-borpropil)tetrahidrofuran-3-k3rboksilna kiselina je dobijena uz korišćenje metoda opisanog u koraku 6 Primera 3. Jedinjenje iz naslova je bilo izolovano kao bela čvrsta materija (91 mg): 'H NMR (Đ20, 300 MHz) 5 4,00 (m. 1 H), 3.80 (m, 1 H). 3.73 (m, 1 H). 2 58 (m. 1 H), 2,04 (ddd,J, =13,5 Hz,J?=8 Hz, J3= 4 Hz, 1 H), 1,34-1,49 (m, 3 H). 1.28 (m, 1 H), 0 66 (m, 2 H): MS (+CI): m/z za C8H16BINCv očekivano 217.1: utvrđeno 417,1 (2M+H-H?0)„ 399,3 (2M + H-2H20),. 217.7 (M+H)<4>", 200,0 (M+H-2H20)<4>

Primer 5: Dobijanje 3-amino-2-(3-borpropil)tetrahidrotiofen-3-karboksilne kiseline

[0179]

[0180]3-amino-2-(3-borpropil)tetrahidrotiofen-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 3. izuzev što je 3-(aliltio)propanska kiselina bila upotrebljena umesto 3-(propen-3-iloksi)propionske kiseline u koraku 1 Primera 3. Jedinjenje iz naslova je bilo izolovano kao bela čvrsta materija u vidu nerazdvojive (-1:1) smeše dijastereoizomera (51 mg); 'H NMR (D?0, 300 MHz) 5 3,91 (m. 0.5 H). 3,70 (m. 0,5 H). 3.05 (m, 1 H), 2,80 (m, 1 H), 2.50 (m, 1 H), 2,38 (m, 1 H), 1.52 (m. 1 H), 1.16 - 1,42 (m, 3 H), 0,64 (m. 2 H); MS (+CI) m/z za C5H-fiBIN04S očekivano 233,1, utvrđeno 234,0 (M+H)<+>, 216.1 (M+H-H20)'.

Primer 6: Dobijanje (3R,4S)-4-amino-3-(3-borpropil)piperidin-4-karboksilne kiseline

[0181]

[0182](3R,4S)-4-amino-3-(3-borpropil)pipendin-4-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 1 izuzev što je 1-terc-butil 3-metil 4-oksopiperidin-1,3-dikarboksilat bio upotrebljen umesto metil 2-oksociklopentankarboksilata u koraku 1 Primera 1. Analiza reakcione smeše ukazuje na prisustvo tri izomerna proizvoda 'H NMR (DMSO, 300 MHz) 5 3,40 - 3,17 (m, 3 H), 3,04 (t, J = 12,9 Hz, 1 H), 2,22 - 2,18 (m. 1 H), 2.01 - 1.68 (m, 2 H). 1,45 - 0.83 (m, 4 H), 0,75 - 0,40 (m, 2 H); MS (+CI): m/z za C9H,9BN204: očekivano 230,1: utvrđeno 231,0 (M+H) +

Primer 7: Dobijanje (3S,4S)-4-amino-3-(3-borpropil)piperidin-4-karboksilne kiseline

[0183]

[0184](3S,4S)-4-annino-3-(3-borroil)pieridin-4-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 1 izuzev što je 1-terc-butil 3-metil 4-oksopiperidin-1,3-dikarboksiiat bio upotrebljen umesto metil 2-oksociklopentankarboksilata u koraku 1 Primera 1. Analiza reakcione smeše ukazuje na prisustvo tri izomerna proizvoda. 'H NMR (DMSO, 300 MHz) S 3,40 - 3,20 {m, 2 H), 2,90 - 2,61 (m, 2 H), 2,28 - 2,19 (m, 2 H), 2,01 - 1,91 (m, 1 H). 1,27 - 0,95 (m, 4 H), 0,75 - 0,40 (m, 2 H); MS (+CI): m/z za C9H,9BN204: očekivano 230 1; utvrđeno 2310 (M+H)<+>.

Primer 8:Dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0185]

Korak 1, Metod A: terc- butil 3- alH- 4- oksopirolidin- 1- karboksilat

[0186]Ledom ohlađeni (3C) mešani rastvor N-boc-glicm, alil estra (6.46 g, 30 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (60 mL) pod azotom je bio tretiran sa 1N litijum bis(trimetilsililamid)/tetrahidrofurana (33 mL, 33 mmol) takvom brzinom da je temperatura u reaktoru bila ispod 10 "C, a onda je mešan na 3 °C tokom 15 min i ohlađen je (-40 °C) Rastvor alil akrilata (4,45 mL. 35 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (25 mL) je bio ukapan, a zatim je ostavljeno da smeša dostigne sobnu temperaturu, te je mešana 1 h, i refluksovana je 2 h Smeša je bila ohlađena na sobnu temperaturu, pa je ugašena sa ledeno-hladnom sirćetnom kiselinom (2.5 mL), i koncentrovana je. Preostalo ulje je bilo rastvoreno u metilen hloridu (300 mL) i onda je rastvor ispran sa vodom i zasićenim natrijum bikarbonatom (po 150 mL), te je osušen (Na2S04), i koncentrovan Ostatak je bio rastvoren u minimumu metilen hlorida. te je stavljen na kolonu sa silika gelom (350 mL zapremma) i eluiran sa 55:30 15 heptanom/metilen hloridom/etil acetatom da bi se dobio 3-alil 1-terc-butil 4-oksopirohdin-1.3-dikarboksilat (5,07g, 63%) kao bezbojno ulje. NMR (CDCI3): 5 5,85 - 6,00 (m, 1 H), 5,20 - 5,40 (m, 2 H), 4,60 - 4,75 (m, 2 H), 4,20 (m, 1 H), 3,95-4,10 (m, 1 H), 3,87 (dJ = 6,5 Hz, 1 H), 3,62 (t,J =8 Hz, 1 H), 1,48 (s, 9 H), MS (m + 1): 270,4; MS (m - bu + 1): 214,2.

[0187]Ovo jedinjenje (4.12 g. 15,3 mmol) je bilo rastvoreno u anhidrovanom tetrahidrofuranu (25 mL), a zatim je dodato mešanom rastvoru Pd(PPh3),, (0.36 g 0,31 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (40 mL) pod azotom, onda je mešano 4 h, i koncentrovano Ostatak je bio rastvoren u minimumu metilen hlorida, te je stavljen na kolonu sa silika gelom (350 mL zapremma) i eluiran sa 60:35:5 heptanom/metilen hloridom/etil acetatom da bi se dobio ferc-butil 3-alil-4-oksopirolidin-1-karboksilat

(4,16 g, 60%) kao veoma bledo žuto ulje. NMR (CDCI3): 5 5,65- 5,80 (m, 1 H), 5,05- 5,15 (m, 2 H), 4,02 (m, 1 H), 3,89 (br d,J =20 Hz, 1 H). 3,67 (br d,J=20 Hz. 1 H). 3,31 (dd,J, =11 Hz,J?=8,5 Hz, 1 H). 2,60 -2.70 (m, 1 H), 2,50 -2.60 (m, 1 H). 2.10-2.30 (m. 1 H), 1,48 (s. 9 H), MS (m+1): 226,1: MS (m-bu+1): 170,1.

Korak 1, Metod B terc- butil 3- alil- 4- oksopirolidin- 1- karboksilat

[0188]Rastvor 1-terc-butil 3-metil 4-oksopirolidin-1,3-dikarboksilata (48.65 g, 0,20 mol), alil alkohola (300 mL), i dibutiltin oksida (5.0 g, 20 mmol) u anhidrovanom toluenu (800 mL) je bio refluksovan 20 h pod Dean-Stark zamkom sa šaržnim odstranjivanjem rastvarača (ukupno 200 mL) tokom prvih 6 sati, što je bilo praćeno sa dodavanjem još alil alkohola (75 mL) na kraju prvih 6 sati. Reakciona smeša je bila koncentrovana, pa je rastvorena u minimalnom metilen hloridu, te je stavljena na kolonu sa silika gelom (700 mL zapremina) i eluirana sa metilen hloridom, 10%, pa zatim sa 15%, onda sa 20% etil acetata/metilen hlorida da bi se dobio 3-alil 1-terc-butil 4-oksopirolidin-1 3-dikarboksilat (48.6 g, 90%) kao bledo ružičasto ulje (NMR i MS kao gore) Ovo jedinjenje (48,47g, 0,18 mol) je bilo rastvoreno u anhidrovanom tetrahidrofuranu (200 mL), te je dodato mešanom rastvoru Pd(PPh3)i(4,16 g, 3.6 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (400 mL) pod azotom, a onda je mešano4 h, i koncentrovano. Ostatak je bio rastvoren u heptanu, te je stavljen na kolonu sa silika gelom (1000 mL zapremina) i eluiran je sa 60:35:5 heptanom/metilen hloridom/etil acetatom da bi se dobio fcrc-butil 3-alil-4-oksopirolidin-1-karboksilat (27,93, 69%) kao bledo žuto ulje (NMR i MS kao gore)

Korak 2: ( 3R, 4S)- terc- butil 3- acetamido- 4- alil- 3-( terc- butilkarbamoil) pirolidin- 1- karboksilat

[0189]Mešana smeša terc-butil 3-alil-4-oksopirolidin-1-karboksilata (13.23 g. 58.7 mmol) i amonijum acetata (11,95 g, 155 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (25 mL) pod azotom je bila tretirana sa t-butilizonitrilom (12,25 mL, 106 mmol), onda je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 dana i koncentrovana je. Ostatak je bio raspodeljen između vode (100 mL) i metilen hlorida (200 mL), a vodeni sloj je bio ekstrahovan sa metilen hloridom (2 x 75 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 100 mL). te je osušen (Na2SO^), i koncentrovan do beličaste čvrste materije Ova je bila dva puta rekristalizovana sa etil acetatom (po 150 mL) da bi se dobila šarža proizvoda iz naslova (8.36 g) kao bela čvrsta materija. Sjedinjene matične tečnosti su bile koncentrovane, pa su rastvorene u minimumu metilen hlorida, te su stavljene na kolonu sa silika gelom (650 mL zapremina). Ovo je bilo eluirano sa 60%, pa zatim sa 70%, a onda sa 90% etil acetata/heptana da bi se dobio dodatni proizvod (3,84 g). Ukupni prinos (3R.4S)-terc-butil 3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil)pirolidin-1-karboksilata je bio 12,22 g (57%) u vidu bele čvrste materije NMR (CDCI3)

č 6,30 - 6,70 (m, 2 H), 5,60 -5,75 (m, 1 H). 4,95 - 5,10 (m. 2 H), 3.94 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 3,75 (d,

J=11,5 Hz. 1 H). 3,60 (m, 1 H), 3,00 - 3.20 (m, 2 H). 2,20 - 2.30 (m. 1 H). 2,00 (s, 3 H), 1,80 - 1.90 (m, 1 H). 1,44 (s. 9 H), 1.33 (s, 9 H), MS (m + 1): 368,3; MS (m - bu +1) 312.1; MS (m - boe + 1): 268,3,

Korak3:{ 3R. 4S)- terc- buti! 3- acetamido- 3-{ terc- butilkarbamoil)- 4-( 3-( 4. 4. 5. 5- tetrametit- 1. 3, 2-

dioksaborolan- 2-\\) propii) pirolidin- 1- karboksilat

[0190]Mešani rastvor (3R,4S)-terc-butil 3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil)pirolidin-1-karboksilata (5,51 g, 15 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (80 mL) pod azotom je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien indijum dimerom (0,252 g, 0,375 mmol) i 1,2-bis(difemlfosfino)etanom (0,299 g, 0,75 mmol), a onda je mešan 30 min. i ohlađen je (-20 "C) Bio je ukapan 4,4,5.5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (3,30 mL, 22,5 mmol), te je rastvor bio stavljen u ledeno kupatilo, pa je ostavljeno da dostigne sobnu temperaturu preko noći (18 h). Smeša je bila ugašena sa vodom (75 mL), a zatim je mešana 15 min, i ekstrahovana je sa etil acetatom (400 mL, onda 2 x 100 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (150 mL). pa je osušen (MgSCv,), i koncentrovan Čvrsta materija je bila rekristalizovana (2 prinosa) iz acetonitrila da bi se dobio (3R.4S)-terc-butil 3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propi))pirolidin-1 -karboksilat (6,13g, 82%) kao bela čvrsta materija NMR (CDCI3) 5 6.40 - 6,60 (m, 1 H), 6,23 (s, 1 H), 3,95 - 4,05 (m, 1 H), 3,65 - 3,75 (m, 2 H), 2,90 - 3,20 (m, 2 H), 2,00 (s, 3 H). 1,45 (s, 9 H), 1,30 - 1,45 (m. 4 H), 1,33 (s, 9 H), 1,22 (s, 12 H), 0,70 -0,80 (m, 2 H), MS (m+1); 496.4.

Korak 4: ( 3R. 4S)- 3- acetamido- N- terc- butil- 4-( 3-{ 4. 4,5 5- tetrametil- 1. 3. 2- dioksaborolan- 2-

il) propil) pirolidin- 3- karboksamid

[0191]3-grli balon sa okruglim dnom od 250mL je bio napunjen sa (3R,4S)-terc-butil 3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-1-karboksilatom (4,95 g, 10 mmol) i4 N HCI/dioksana (50 mL) Posle mešanja tokom 3 h rastvor je bio razređen sa etrom (125 mL), pa je mešan nekoliko minuta, te je isfiltriran, a čvrsta materija je isprana sa etrom. izolovana i osušenau vakuumuda bi se dobila HCI so jedinjenja iz naslova Ovo je bilo rastvoreno u vodi (30 mL), pa je tretirano sa natrijum hidroksidom (0,5 g, 12,5 mmol) Vodeni rastvor je bio tretiran sa dovoljno kalijum karbonata da se dobije nerastvorljivi proizvod u obliku slobodne baze Smeša je bila ekstrahovana sa metilen hloridom (75 mL, onda 3 x 50 mL). a sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (30 mL), pa je osušen (Na?S04), i koncentrovan da bi se dobio (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4.4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidm-3-karboksamid (3,40 g, 86%) kao bela čvrsta materija NMR (CDCI3) č 8,26 (br s, 1 H), 7.25 (s, 1 H), 3.86 (d,J=9,5 Hz, 1 H), 3.53 (t,J = 9,5Hz. 1 H), 3,20 (d,J= 10Hz, 1 H), 2,98 (m. 1 H). 2,74 (dd, J, = 10 Hz,J2=7,5 Hz, 1 H), 2.02 (s, 3 H), 1,50 (m, 1 H). 1,33 (s, 9 H), 1.20 -1,40 (m, 3 H), 1.22 (s, 12 H), 0,70

-0.80 (m. 2 H), MS (m+1) 396.0

Korak 5: ( 3R, 4S)- 3- amino- 4-( 3- borpropii) pirotidin- 3- karboksilna kiselina

[0192]Rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaboroian-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (198mg, 0,5mmol) u 2:1:1 koncentrovanoj HCI Iedeno hladnoj sirćetnoj kiselini:vodi (8 mL) u boci pod pritiskom je onda mešan 2 h na 60 °C, pa je zatvoren poklopcem i zatim je mešan 18 h na 130 "C. te je ohlađen na sobnu temperaturu, i poklopac je skinut. Rastvor je bio razređen sa vodom (20 mL), a onda je ekstrahovan sa metilen hloridom (20 mL) i koncentrovan. Ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOVVE/<13>550A-OH smolom (3 g) koja je bila isprana sa metanolom Smeša je onda bila mešana 40 min, a zatim je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom, metilen hloridom, vodom, metanolom, i metilen hloridom Smola je onda bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 mL) i isfiltrirana je. a sjedinjeni filtrati su bili koncentrovani Ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan je tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je bio rastvore u 1.5-2,0 mL vode i podvrgnut je HPLC gradijentnom prečišćavanju kao što sledi: 0-25% B sa A=0,1%trifluorosirćetne kiseline/vode i B=0,1%trifluorosirćetne kiseline/acetonitrila. Odgovarajuće frakcije su bile koncentrovane, pa su tretirane tri puta sa 1 N HCI (10 mL) i koncentrovane, te su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a zatim su rastvorene u vodi (10 mL). zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobila (3R.4S)-3-ammo-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (114 mg, 79%) u vidu stakla bledo ćilibarne boje NMR (D?0) 6 3,90( d, J-13 Hz, 1 H), 3,71 (dd. J,=11,5 Hz, Js=8,5Hz, 1 H), 3,46 (d, J=13Hz, 1 H), 3,21( t.?12 Hz,1 H), 2,50 - 2,65 (m, 1H), 1,5 - 1,65 (m, 1 H). 1,10 - 1,40 (m, 3 H), 0,60 -0,75 (m. 2 H), MS (m+1): 217,3: MS (m - H,0 + 1): 199 1

Primer 9:(3R,4R)-3-amino-4-(3-borpropil)piroiidin-3-karboksilna kiselina

[0193]

[0194](3R,4R)-3-amino-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 8 izuzev stoje bio korišćen (3R,4R)-terc-butil 3-acetamido-4-alil-3-(terc-butiikarbamoil)pirolidin-1-karboksilat iz koraka 2 (izomer u manjoj količini) MS (+CI); m/z za CsH17BN304: očekivano 216.1; utvrđeno 217.3 (M+H)<4>199.1 (M - H20 + H)<+>

Primer 10: (3R,34R)-3-amino-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilnakiselina

[0195J

[0196](3R,4R)-3-amino-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 8 izuzev što je terc-butil 2-alil 3-oksopirolidin-1-karboksilat bio upotrebljen umesto terc-butil 3-alil-4-oksopirolidin-1-karboksilata u koraku 2. MS (+CI): m/z za C8H17BN204: očekivano 216,1; utvrđeno 217.3 (M+H)', 199,1 (M - H20+ H)'

Primer 11: Dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-izobutilpirolidin-3-karboksilne kiseline

[0197]

[0198]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i izobutiraldehidom (0,060 mL, 0,65 mmol), a onda je mešan 2,5 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%. 5 mL) i smeša je onda mešana nekoliko minuta, pa je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). osušen je (MgS04). i koncentrovan. Sirovi materija! je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-izobutilpirolidin-3-karboksilna kiselina (44 mg, 26%) kao bela polučvrsta materija. NMR (D20) 6 3,90 (m, 1 H), 3,50 (m. 1 H), 2.90 - 3,20 (m, 4 H), 2,50 (m, 1 H), 1,90 (m, 1 H), 1,50 (m, 1 H), 0,80 -1.30 (m, 9 H), 0,65 (m. 2 H). MS (m+ 1): 273,2: MS (m - H?0 + 1): 255,2; MS (m -2 H20 + 1): 237,2.

Primer 12. dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-benzil-4-(3-borpropil)pirolidtn-3-karboksilne kiseline

[0199]

[0200]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-buti[-4-(3-(4,4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (166 mg, 0,42 mmol) u anhidrovanom 1.2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (2 g) i benzaldehidom (69 mg, 0,65 mmol), pa je mešan 2.5 h. a onda je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidriđom (212 mg, 1.0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i onda je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL) i smeša je onda mešana nekoliko minuta, te je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mL. onda 2 x 10mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), pa je osušen (MgS04), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-benzil-4-(3-borpropi!)pirolidin-3-karboksilna kiselina (70 mg, 44%) kao bela polučvrsta materija NMR (d6-DMSO) 5 7.62 (br s. 2 H), 7,44 (br s, 3 H), 4,30 - 4,60 (m, 2 H), 3,60-3,90 (m. 2 H), 3,35 - 3,50 (m, 2 H), 2,85 (m, 1 H), 2.50 (m, 1 H), 1,20- 1,80 (m, 3 H), 0.60 - 0,80 (m, 2 H), MS (m + 1)- 307,3; MS (m - HL,0 + 1): 289,2.

Primer 13: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piridin-3-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0201]

[0202]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)propil)plrolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (175 mg, 0,443 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i piridin-3-karboksaldehidom (75 mg, 0 70 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg. 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 20 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL. onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvorje bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R 4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(pindin-3-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (115 mg, 68%) kao bela polučvrsta materija. NMR (d6-DMSO) 5 8,90 (m, 1 H), 8,74 (m, 1 H), 8,00 (m, 1 H), 7.12 (m. 1 H), 4,55-4.85 (m, 2 H), 3,10-4.00 (m, 3 H). 2,70 - 3,00 (m, 1 H), 1.70 (m, 2 H). 0,90 - 1,50 (m, 3 H), 0,55 - 0,70 (m, 2 H), MS (m + 1): 308,4; MS (m - H70 + 1); 290,4.

Primer 14: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminociklopentil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0203]

[0204]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5.5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0 5 mmol) i 2-(N-BOC-amino)ciklopentan-1-ona (0,199 g, 1.0 mmol) u anhidrovanom 1 2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol), te je mešan na 40<J>C tokom 1,5 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg, 1,3 mmol) i zatim je mešan 18 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), pa je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuoSirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminociklopentil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (116 mg, 57%) kao beli prah NMR (D20) S 3,85-4.05 (m, 4 H), 3,77( d.J= 12.5 Hz. 1 H) 3 42 (dt. J, = 11.5 Hz. J? = 4 Hz. 1 H). 2,50 - 2,65 (m, 1 H), 2,10-2,35 (m, 2 H). 1.75 - 1.95 (m, 4 H), 1.55 - 1,65 (m 1 H), 1.15- 1.40 (m, 3 H). 0,63-0.73 (m, 2 H). MS (m + 1): 300,0; MS (m - H?0 + 1): 281,9.

Primer 15: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-4-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0205]

[0206]Mešani rastvor (3R.4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamiđa (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i N-boc-piperidin-4-karboksaldehidom (149 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1.0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%. 5 mL). a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL, te je osušen (MgS04), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-4-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (65 mg, 31%) u vidu ćilibarne zrnaste čvrste materije. NMR (D20) C 3,70 - 4.00 (m. 2 H), 3,30 - 3,45 (m, 4 H). 3,25( ć. J=7Hz, 2 H). 2,92 (br t, J=13Hz, 2 H), 2,50-2.65 (m. 1 H). 2.00 -2.15 (m, 1 H), 1,85 - 2,00 (m, 2 H), 1,50 - 1,65 (m. 1 H). 1,35 - 1.50 (m, 2 H), 1,15-1,35 (m. 3 H), 0.65 - 0.75 (m, 2 H), MS (m-H20+1): 296,3; MS (m-2 HjO+1): 278,1

Primer 16: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(3-(4-karboksifenil)propil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0207]

[0208]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4 4,5.5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i 3-(4-(trifluorometil)fenil)propionaldehidom (142 mg, 0,7 mmol). a onda je mešan 2 h pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 10 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL. onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropll)-1-(3-(4-karboksifenil)propil)pirolidm-3-karboksilna kiselina (12 mg, 5%) kao volummozni beli prah, NMR (D20) 6 7,86 (d,J- 8 Hz, 2 H). 7,29 (d,J =8 Hz, 2 H), 3,70 - 4,00 (m, 2 H), 3,50 (m, 1 H), 3,10 - 3,30 (m, 3 H), 2.70 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2,40 -2,60 (m, 1 H). 2,00 (m, 2 H), 1,55 (m, 1 H), 1,10-1,35 (m 3 H), 0.65 (m, 2 H), MS (m - H20 + 1); 361,0; MS (m - 2 H20+1): 343,0.

Primer 17: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(3-(dimetilamino)-2,2-

dimetilpropil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0209]

[0210]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5.5-tetrametil-1.3,2-dioksaboralan-2-il)propil)pirohdin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dlhloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i 3-dimetilamino-2,2-dimetilpropionaldehidom (91 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (MgSO„), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(3-(dimetilamino)-2 2-dimetilpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (36 mg. 16%) kao bela zrnasta čvrsta materija NMR (D20) 6 3.80 - 4.00 (m, 2 H). 3,35 - 3,50 (m. 3 H), 3,20 (s, 2 H), 2,89 (s, 6 H). 2,50 - 2.65 (m, 1 H). 1,50 - 1,65(m, 1 H), 1,25-1,35 (m, 2 H), 1,21 (s. 6 H). 0,65 - 0,75 (m, 2 H), MS (m - H20 + 1) 312.0, MS (m -2 H20 + 1). 294,4.

Primer 18: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-{piperidin-3-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0211]

[0212]Mešani rastvor (3R 4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4 4,5.5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i N-boc-piperidin-3-karboksaldehidom (149 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-3-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (62 mg, 29%) kao zrnasta bledo ćilibama čvrsta materija NMR ( D20) č 3,70 - 4,00 (rn. 2 H), 3,20-3,45 (m, 5 H), 2.65 - 2,90 (m, 2 H), 2.50 -2,65 (m, 2 H), 2,15-2,30 (m, 1 H). 1,75 - 2,00 (m, 2 H), 1,50- 1,75 (m, 2 H), 1.10 - 1,40 (m, 4 H), 0.65 -0,75 (m, 2 H), MS (m - H20 + 1): 296,3; MS (m - 2 H20 + 1): 278,1

Primer 19:dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(hinolin-4-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0213]

[0214]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5!5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i hinotin-4-karboksaldehidom (110 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg. 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL). a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(hinolin-4-ilmetil)pirohdin-3-karboksilna kiselina (49 mg, 23%) u vidu bledo ćilibarne čvrste materije. NMR (D?0) 6 9,12 (d,J =5,5 Hz, 1 H), 8,41( d. J=8.5 Hz. 1 H). 8,23 (d,J =8,5 Hz, 1 H), 8,10 - 8,20 (m, 2 H), 8,00( t.J= 8,5 Hz, 1 H), 5,30 (m, 2 H), 4.06 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3.83 (m, 2 H), 3.51(t, J=11,5 Hz. 1 H), 2.50-2,70 (m, 1 H), 1,60 (m. 1 H). 1,15 - 1,30 (m, 3 H), 0,60 -0,70 (m, 2 H), MS (m - H20 + 1): 340,3; MS (m - 2H20 + 1): 322,1.

Primer 20: dobijanje (3R,4S)-1-((1H-imidazol-4-il}metil)-3-amino-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0215]

[0216]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i imidazol-4-karboksaldehidom (110 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 2 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 16 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-1-((1H-imidazol-4-il)metil)-3-ammo-4-(3-borpropH)pirolidin-3-karboksilna kiselina (38 mg, 21%) kao bledo žuta zrnasta čvrsta materija. NMR (DzO) 8,74 (s, 1 H),

7 71 (s, 1 H);4,60-4.80 (m, 2 H), 3.96(d. J=12,5 Hz, 1H),3.80 (dd, J, =1 Hz. J2= 8 Hz, 1 H). 3,71( d.J=12,5Hz. 1 H). 3,40 Cr. J= 11.5 Hz. 1 H). 2.50 -2.65 (m. 1 H). 1.50-1.65 (m, 1 H), 1.15-1,35 (m, 3 H), 0 60 -0,70 (m, 2 H). MS (m - H?0 + 1): 279,0; MS (m - 2 H20 + 1) 261,3

Primer 21: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1 -(piperidin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0217]

[0218]Mešani rastvor (3R 4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4 4.5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propi!)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0.5 mmoi) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i cbz-piperidin-2-karboksaldehidom (173 mg, 0,7 mmol), te je mešan 3 h, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1.0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL) a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04). i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (156 mg, 74%) u vidu bledo ćiltbarne čvrste materije NMR (D20) 3.85 - 4.05 (m, 2 H), 3.76 (d,J=12,5 Hz, 1 H), 3,50 - 3,65 (m, 3 H), 3,39 (m 2 H). 2,95 (dt, J,= 12,5 Hz,J2=3 Hz, 1 H), 2,55 - 2,70 (m, 1 H), 2,00 (m, 1 H), 1,80 (m, 2 H), 1,45 - 1,65 (m, 4 H), 1,15 -1,35 (m, 3 H), 0,65 - 0.72 (m, 2 H), MS (m+1): 314.1, MS (m - H?0 + 1): 296,2.

Primer 22: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(3-(4-hlorofenil)propil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0219]

[0220]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4!4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i 3-(4-hlorofeniljpropionaldehidom (118 mg. 0,7 mmol), a onda je mešan 2.5 h pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg. 1,0 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (MgS04). i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(3-(4-hlorofenil)propil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (84,3 mg, 38%) kao beli prah. NMR (D?0) 7,25 (d,J =8 Hz, 2 H), 7,13 (d, J = 8 Hz, 2 H), 3.75 -4,10 (m, 2 H). 3,40 - 3,60 (m, 1 H), 3,10 - 3,30 (m, 3 H), 2.60 (t, J=7 Hz, 2 H) 2,40 -2,55 (m, 1 H), 1,85-2,00 (m, 2 H), 1,50 - 1,65 (m, 1 H), 1,10- 1.40 (m, 3 H), 0,60 - 0,70 (m, 2 H), MS (m + 1): 369,1; MS (m - HzO + 1): 351,2.

Primer 23: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(7H-purin-6-il)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0221]

[0222]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) u anhidrovanom 2-propanolu (5 mL) je bio tretiran sa 6-hloropurinom (92 mg, 0,6 mmol) i diizopropiletilaminom (0,174 mL, 1,0 mmol). pa je zagrevan na 80 °C tokom 18 h, te je razređen sa metilen hloridom (20 mL) Smeša je bila isfiltrirana kroz Celit' i filtrat je koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(7H-purin-6-il)pirolidin-3-karboksilna kiselina (41 mg, 20%) u vidu bledo ćilibarne čvrste materije, NMR (D20) 5 8,20 - 8,45 (m, 2 H), 4.20 - 4.60 (m, 2 H), 3,50 - 4,00 (m, 2 H), 2.60 - 2,80 (m, 2 H), 1,65 (m. 1 H), 1,20 - 1,55 (m, 3 H), 0.65 - 0,75 (m, 2 H). MS (m + 1): 335,2; MS (m - H20 + 1): 317,1.

Primer 24: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminoetil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0223]

[0224]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4l4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i N-bocaminoacetalđehidom

(111 mg, 0,7 mmol), a onda je mešan 3 h. pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 10 mmol) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (2 kapi) i zatim je mešan 18 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgSCU). i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminoetil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (64 mg, 35%) kao žuta čvrsta materija. NMR (D20) S 3,60 - 4,00 (m, 4 H). 3,15 - 3,50 (m, 4 H), 2.60 (m, 1 H), 1.40 - 1,65 (m, 1 H), 1,10 - 1,35 (m, 3 H), 0,63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m + 1): 260,2; MS (m - H20 + 1): 242 3.

Primer 25: dobijanje 5-((3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-3-karboksiptrolidin-1-il)nikotinske

kiseline

[0225]

[0226]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5mmol) i etil 5-bromonikotinata (138 mg, 0,60 mmol) u anhidrovanom toluenu (2,5 mL) je bio degaziran pod azotom 15 min, pa je tretiran sa paladijum diacetatom (14 mg, 0,06 mmol), rac-bmapom (75 mg, 0.12 mmol), i cezijum karbonatom (0,65 g, 2 mmol) Smeša je bila zagrevana na 80 °C tokom 18 h, pa je ohlađena na sobnu temperaturu, te je razređena sa metilen hloridom (20mL), a zatim je isfiltrirana kroz Celit<®>i filtrat je koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila 5-((3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-3-karboksipirolidin-1 -iljnikotinska kiselina (82 mg, 40%) kao žuta čvrsta materija NMR (D20) 5 8,37 (s. 1 H), 8,00 (s. 2 H), 3,99 (d,J =11 Hz. 1H), 3,83 (t.J= 10 Hz. 1 H),3,68 ( d.J = 11 Hz, 1 H), 3,26 (t.J =10 Hz. 1 H), 2,60 - 2,75 (m, 1 H) 1,60 (m. 1 H), 1,20 - 1,50 (m, 3 H), 0,65 - 0,75 (m, 2 H), MS (m + 1); 338,2, MS (m - H20 + 1) 320,1

Primer 26: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-4-il)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0227]

[0228]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i N-CBZ-piperidin-4-ona (0.233 g. 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0.5 mmol), pa je mešan na 40 C tokom 2 5 h, a zatim je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (265 mg, 1.25 mmol) i onda je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL. onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (MgS04), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-4-il)pirolidin-3-karboksilna kiselina (146 mg, 71 %) u vidu bledo ćilibarne čvrste materije NMR (D?0) 6 4 02 (d. J - 13 Hz, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 3,77 (m, 1 H), 3,45 - 3,65 (m, 3 H), 3,36 (m. 1 H), 3,00 (m, 2 H), 2,50 - 2.60 (m. 1 H), 2,30 - 2,40 (m, 2 H), 1,75 - 1,95 (m, 2 H), 1,55 - 1,65 (m. 1 H), 1,15 - 1.40 (m, 3 H), 0,62 - 0,70 (m, 2 H), MS (m + 1): 300,0; MS (m - H,0 + 1): 282.2

Primer 27: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1,3'-bipirolidin-3-karboksilne kiseline

[0229]

[0230]Mešani rastvor (3R.4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i N-BOC-pirolidin-3-ona (0,185 g, 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol). te je mešan na 40 "C tokom 2,5 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg. 1,3 mmol) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%. 5 mL). a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL. onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)- 1,3'-bipirolidin-3-karboksilna kiselina (160 mg, 81 %) u vidu ćilibarne čvrste materije NMR (D30) 5 4.25 - 4,35 (m. 1 H). 4,00 (dd,J,= 12 Hz. J?= 5 Hz, 1 H), 3,70 - 3,95 (m, 3 H), 3,25 -3,60 (m. 4 H). 2,45 - 2,65 (m, 2 H) 2,15 - 2,25 (m 1 H), 1,50 -1,65 (m, 1 H), 1,15 - 1,35 (m, 3 H), 0,60 -0,70 (m, 2 H), MS (m + 1): 286.1 MS (m - H20 + 1): 268,3.

Primer 28: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-3-il)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0231]

[0232]Mešani rastvor (3R.4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,54etrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) i N-BOC-pipendin-3-ona (0,199 g, 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol). te je mešan na 40 ;,C tokom 3 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg, 13 mmol) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(piperidin-3-il)pirolidin-3-karboksilna kiselina (138 mg. 68%) u vidu ćilibarne čvrste materije NMR (DzO) 6 3,80 - 4.10 (m, 2 H), 3,60 - 3,80 (m. 2 H), 3.30 - 3.50 (m, 2 H), 3,00 - 3,15 (m, 1 H), 2,80 - 2,95 (m. 1 H). 2,45 - 2,60 (m, 1 H), 2,30 (m, 1 H), 1,95 - 2,10 (m, 1 H), 1.50 - 1,85 (m, 4 H), 1,10 - 1,40 (m, 3 H), 0,60 - 0,70 (m. 2 H), MS (m + 1): 300,1; MS (m - H20 +1); 282,1

Primer 29: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1 -(piridin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0233]

[0234]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4.5,5-tetrametiM ,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) i pindin-2-karboksaldehida (0.199 g, 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0.5 mmol), pa je mešan na 40 "C tokom 3 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, te je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg, 1,3 mmol) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(pindin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (141 mg, 74%) kao bela čvrsta materija. NMR (D20) 6 8,63 (m. 1 H), 8,20 (m, 1 H), 7,65 - 7,85 (m, 2 H), 4,50 - 4,65 <m, 2 H), 3,86 (d. J=12,5 Hz, 1 H), 3,70 (m, 2H), 3,22 (t, J=11 Hz, 1H). 2,55 (m, 1 H). 1,55 (m, 1 H), 1,15- 1,35 (m, 3 H), 0 60 -0,70 (m, 2 H). MS(m+1):308,0; MS(m- H20 + 1): 290,2.

Primer 30: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(4-karboksicikloheksil)pirojidin-3-

karboksilne kiseline

[0235]

[0236]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)piroiidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) i 4-karbetoksicikloheksanona (0,170 g, 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0.5 mmol), pa je mešan na 40 °C tokom 3 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg, 1,3 mmol) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (MgSO„), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(4-karboksicikloheksil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (135 mg, 65%) kao bela čvrsta materija NMR (D20) 5 3,97 (dd, J,=13 Hz,J2=7Hz, 1 H), 3,75- 3,90 (m, 2 H). 3.15-3,35 (m, 2 H), 2,20 - 2,70 (m, 2 H), 1,90 - 2,20 (m, 4 H), 1,50 - 1,65 (m, 3 H), 1,15- 1,45 (m. 5 H), 0,60-0,70 (m, 2 H), MS (m +1)- 343,1; MS (m- H20 + 1): 325,0.

Primer 31: dobijanje {3R,4S)-3-amino-4-<3-borpropil)-1-((1-metil-1H-imidazol-2-il)metil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0237]

[0238]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5.5-tetrametil-1.3 2-dioksaborolan-2-it)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) i 1-metilimidazol-2-karboksaldehida (83 mg, 0,75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol), a onda je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h, te je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i zatim je mešan 18 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-((1-metil-1H-imidazol-2-il)metil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (140 mg, 67%) kao bledo žuto čvrsta materija. NMR (D?0) 5 7,37 (s. 2 H), 4,35 - 4.50 (m, 2 H). 3,80 (s, 3 H), 3,40 - 3,60 (m, 3 H), 2,75 -2,85 (m, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 1,48 (s, 1 H), 1,15 - 1,30 (3 H), 0,60 - 0,70 (m, 2 H), MS (m +1): 311,0; MS (m - H20 + 1): 293,1.

Primer 32: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1 -(4-metilpiridin-3-il)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0239]

[0240]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0,5 mmol) i 3-bromo-4-metilpiriđina (0,258 g, 1,5 mmol) u anhidrovanom toluenu (5 mL) je bio degaziran pod azotom 15min, pa je tretiran sa Pd2dba3(46 mg, 0,05 mmol). rac-binapom (50 mg, 0,075 mmol), i natrijum t-butoksidom (0,18 g, 1.87 mmol) Smeša je bila zagrevana na 70 °C tokom 18 h, pa je ohlađena na sobnu temperaturu, te je razređena sa metilen hloridom (20 mL), isfiltrirana je kroz Celit<®>i filtrat je koncentrovan. Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(4-metilpiridin-3-il)pirolidin-3-karboksilna kiselina (22 mg, 12%) u vidu bledo ćilibarne čvrste materije. NMR (D20) 5 7.99 (d,J= 6 Hz. 1 H), 7,95 (s, 1 H), 7,57 (d,J= 6 Hz, 1 H), 3,80 (d,J=5 Hz, 2 H), 3,72 (t, J=9,5Hz, 1 H), 3,25 (t. J=9,5Hz, 1 H), 2,49 (s, 3 H), 2,40-2,60 (m, 1 H), 1,50 -1.60 (m. 1 H), 1,20 -1,45 (m, 3 H), 0,65- 0,75 (m, 2 H), MS (m -H20 + 1): 290,0; MS (m - 2 H20 +1); 271,9.

Primer 33: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(piperidin-1-il)etil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0241]

[0242]Ohlađeni {0 "C) rastvor N-(2-hidroksietil)piperidina (90,5 mg, 0.70 mmol) i diizopropiletilamina (0,30 mL, 1.7 mmol) u anhidrovanom acetonitnlu (12 mL) pod azotom je bio tretiran sa metansulfonil hloridom (80,2 mg, 0,70 mmol), pa je mešan 2 h,, te je tretiran sa (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamidom (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) i onda je zagrevan na 60 "C tokom 15 h. Reakciona smeša je bila koncentrovana, deprotektovana i izolovana korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(piperidin-1-il)etil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (140 mg, 64%) kao staklasta bezbojna čvrsta materija. NMR (D20) 5 3,85 - 4,05 (m, 2 H), 3,65 - 3.80 (m, 3 H), 3,35 - 3.55 (m, 5 H), 2,85 - 3,00 (m, 2 H). 2.60 (m, 1 H), 1,80-1.95 (m, 2 H), 1.55 -1,75 (m, 4 H), 1,10-1,50 (m, 4 H), 0,63 - 0,73 (m. 2 H). MS (m + 1): 328.3; MS (m - H20 + 1): 310.0.

Primer 34: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(dietilamino)etil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0243]

[0244]Ohlađeni (0 X) rastvor N,N-dietiletanolamina (82 mg. 0,70 mmol) i diizopropiletilamina (0,30 mL, 1,7 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (12 mL) pod azotom je bio tretiran sa metansulfonil hloridom (80,2 mg. 0,70 mmol), te je mešan 2,5 h, pa je tretiran sa (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1.3 2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamidom (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i zatim je zagrevan na 60 "C tokom 15 h Reakciona smeša je bila koncentrovana, a zatim je deprotektovana i izolovana korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila

(3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(dietilamino)etil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (120 mg, 57%) kao bela pena. NMR (D20) 6" 3,97 (d, J=12,5 Hz, 1 H), 3,87 (m, 1 H), 3,65 - 3,80 (m, 3 H), 3,35 - 3,55 (m, 3 H),3,19 (q. J=7, 5Hz, 4 H), 2,55 - 2,65 (m, 1 H), 1,50 -1,65 (m, 1 H),1,20 (t. J=7. 5Hz, 6 H), 1,15-1,35 (m, 3 H), 0,63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m - H20 +1): 298.3; MS (m - 2 H20 + 1): 280,1.

Primer 35: dobijanje (3R,4S)-4-(3-borpropil)-3-(metitamino)prrolidin-3-karboksilne kiseline

[0245]

[0246](3R,4S)-4-(3-borpropil)-3-(metilamino)piro!idin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 8, izuzev što su metilamin i sirćetna kiselina bili upotrebljeni umesto amonijum acetata u koraku 2 LC-MS ESI'MS utvrđeno zaC9H19BN;04 mlz230.1: (m + 1): 231,1; MS(m-H20 + 1); 213,1

Primer 36: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-({1-metilpiperidin-2-il)metiJ)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0247]

[0248]Ohlađeni (0 "C) rastvor 1-metilptperidin-2-metanola (97 mg, 0,75 mmol) i diizopropiletilamina (0,31 mL, 1,75 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (12 mL) pod azotom je bio tretiran sa metansulfonil hloridom (86 mg, 0,75 mmol), te je mešan 3 h, pa je tretiran sa (3R,4S)-3-acetamido-M-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamidom (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) i zagrevan je na 60 °C tokom 15 h. Reakciona smeša je bila koncentrovana, deprotektovana i izolovana korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-((1-metilpiperidin-2-il)metil)pirolidm-3-karboksilna kiselina (121 mg, 55%) kao bela pena. NMR (D20) 5 3,60-4,00 (m, 4 H), 3,15 - 3,55 (m, 3 H), 2,90 (m, 2 H), 2,67 (s, 3 H), 2,50 - 2,80 (m, 2 H), 2,00 - 2,30 (m, 1 H), 1,45- 1,95 (m, 5 H), 1,10- 1,40 (m, 3 H), 0.63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m +1): 328,1; MS (m - H20 + 1): 310,1

Primer 37: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-{3-borpropil)-1-(pirolidin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0249]

[0250]Mešani rastvor (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i N-BOC-pipendin-2-karboksaldehida (0,15 g, 0,75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetan (5mL)je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol), te je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i zatim je mešan 18 h. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), pa je smeša mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuo.Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan je korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(pirolidin-2-ilmetil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (144 mg, 70%) kao bela pena. NMR (D20) 5 3,85 - 4,05 (m, 3 H). 3,60 - 3 80 (m, 3 H), 3,40 (m, 1 H), 3,30 (m, 2 H), 2,55 - 2,70 (m, 1 H), 2,20 - 2.35 (m. 1 H) , 1,85 -2,10 (m, 2 H), 1,75 (m, 1 H). 1,60 (m 1 H), 1,15 -1,40 (m. 3 H), 0.63 - 0,73 (m, 2 H). MS (m + I) : 300,1; MS (m -H20 + 1): 282,1

Primer38:dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-{pirolidin-1-il)etil)pirolidin-3-

karboksiine kiseline

[0251]

[0252]Ohlađeni (0C) rastvor N-(2-hidroksietil)pirolidina (92 mg, 0,80 mmol) i diizopropiletilamina (0,32 mL, 1,8 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (12 mL) pod azotom je bio tretiran sa metansulfonil hloridom (92 mg, 0,80 mmol), a onda je mešan 3 h, pa je tretiran sa (3R,4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamidom (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i zagrevan je na 60 °C tokom 15 h, Reakciona smeša je bila koncentrovana, te je deprotektovana i izolovana korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(pirolidin-1-il)etil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (127 mg, 60%>) kao bela pena. NMR (D20) 6 3,80 - 4,00 (m, 2 H), 3,50 - 3,80 (m, 4 H), 3,40 (t, J= 11 Hz, 1 H), 3,05 (m, 2 H), 2,55 -2,75 (m, 4 H), 2,05 (m, 2 H), 1.90 (m, 2 H), 1,60 (m, 1 H), 1,10- 1,40 (m, 3 H), 0,63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m + 1); 314,0; MS (m - H20 + 1); 296,2.

Primer 39: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(((S)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-

il)metil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

f02531

[0254]Mešani rastvor (3Rl4S)-3-acetamido-N-terc-butii-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i N-BOC-tetrahidroizohinolin-3-karboksaldehida (0,196 g. 0.75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg. 0,5 mmol), te je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1.0 mmol) i zatim je mešan 18 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgSO„). ikoncentrovan in vacuo.Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan je korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(((S)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (146 mg, 62%) kao bela čvrsta materija. NMR (D20) 5 7,10 - 7,30 (m, 4 H), 4,39 (br s, 2 H), 3,85-4.10 (m, 3 H), 3.60 - 3,80 (m, 3 H), 3,20 - 3,50 (m, 2 H), 2.90-3,10 (m. 1 H), 2,62 (m, 1 H). 1,60 (m. 1 H). 1,15 - 1.30 (m, 3 H). 0,63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m +1): 362,4; MS (m - H20 + 1): 344,0.

Primer 40: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-(benzilamino)etil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0255]

[0256]Mešani rastvor (3Rl4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5.5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-iljpropil) pirolidin-3-karboksamida (Primer 8. korak 4) (198 mg, 0.5 mmol) i N-benzil-N-BOC-glicinaldehida (0,187 g 0,75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min, a onda je ohlađen ledenim kupatilom, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i zatim je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuo.Sirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan je korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-1-(2-(benzilamino)etil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (112 mg, 49%) kao bela čvrsta materija NMR (D20) č 7.30 -7,45 (m, 5 H). 4,21 (s, 2 H). 3,94 (d, 1 H,J~ 12Hz. 1 H). 3,84 (t, J=9,5 Hz, 1 H), 3.60-3,75 (m, 3 H), 3,30 - 3,50 (m, 3 H), 2,50 -2,65 (m, 1 H), 1,50 - 1,65 (m, 1 H), 1,10 - 1,35 (m, 3 H), 0,63 - 0,73 (m, 2 H), MS (m+ 1): 3504; MS (m - H20 +1): 332,1.

Primer 41: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(3,4-dihlorobenzilamino)etil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0257]

[0258]Mešani rastvor (3Rl4S)-3-acetamido-N-terc-butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidm-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg. 0.5 mmol) i N-(3,4-dihlorobenzil)-N-BOC-glicinaldehida (0,240 g, 0.75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. a onda je ohlađen ledenim kupatilom, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i zatim je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgS04). ikoncentrovan in vacuoSirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan je korišćenjem metoda opisanog za primer 8. korak 5 da bi se dobila (3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(3,4-dlhlorobenzilamino)etil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (111 mg, 42%) kao bela čvrsta materija. NMR (D20) 5 7,50 - 7,60 (m. 2 H). 7.28 (dd,J,= 8,5 Hz, J7= 2 Hz, 1 H), 4,20 (s, 2 H), 3,94 (d, J=12 Hz. 1 H), 3,84 (dd,J, =11,5Hz,J2=8 Hz. 1 H), 3.60 -3,75 (m. 3 H), 3,30 - 3,45 (m, 3 H). 2,50 - 2,65 (m, 1 H), 1,50 -1.65 (m, 1 H), 1,10 - 1,35 (m, 3 H), 0 62 - 0,72 <m, 2 H). MS (m + 1): 417,9; MS (m - H20 + 1): 400,3

Primer 42: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropii)-1-(4-hlorofenilkarbamoil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0259]

[0260](3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(4-hlorofenilkarbamoil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46, izuzev što je l-hioro-4-izocijanatobenzen bio upotrebljen kao agens za acilovanje u koraku 4 LC-MS ESI. MS utvrđeno zaC15H21BCIN305 m/ z 396,2:(m+ 1): 397,1, MS (m - H20 + 1): 379,0.

Primer 43: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-{3-borpropil)-1-((S)-pirolidin-2-karbonil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0261]

[0262](3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-((S)-pirolidin-2-karbonil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46. izuzev što je (S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-karboksilna kiselina bila upotrebljena kao agens za acilovanje u koraku 4 LC-MS ESLMS utvrđeno zaC13H24BN305m/z313,2: (m+1): 314,1; MS (m - H20 + 1): 296,0.

Primer 44: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminocikloheksil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0263]

[0264]Mešani rastvor (3R.4S)-3-acetamiđo-N-terc-butil-4-(3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4) (198 mg, 0,5 mmol) i 2-(N-BOC-amino)cikloheksan-1-ona (0,213 g, 1,0 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 mL) je bio tretiran sa anhidrovanim natrijum sulfatom (1 g) i ledeno hladnom sirćetnom kiselinom (30 mg, 0,5 mmol), te je mešan na 40 °C tokom 1 h, a onda je ohlađen na sobnu temperaturu, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (276 mg, 1,3 mmol) i zatim je mešan 18 h Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10% 5 mL). a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL, onda 2x10 mL) Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuoSirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan je korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminocikloheksil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (156 mg. 74%) kao beli prah NMR (D20) 5 3,65 -4,05 (m, 3 H), 3,05 - 3,60 (m, 3 H), 2,90 - 3.10 (m. 1 H). 1.95-2.10 (m. 2 H). 1,45 - 1.75 (m, 5 H), 1,15 - 1.40 (m, 5 H), 0,62 -0,72 (m, 2 H), MS (m + 1): 314,1; MS (m - H20 + 1): 296,1

Primer 45: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(4-hlorofenil)acetil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0265]

[0266](3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(2-(4-hlorofenil)acetil)pirolidin-3-karboksiina kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46. izuzev što je 2-(4-hlorofenil)sirćetna kiselina bila upotrebljena kao agens za acilovanje u koraku 4 LC-MS ESI MS utvrđeno zaC16H22BCIN20;,m/z368,1: (m + 1): 369.1: MS (m - H20 + 1): 352.1

Primer 46: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropii)-1 -(4-fluorobenzoil)piroHdin-3-karboksilne

kiseline

[0267]

Korak 1: terc- butil 4- alil- 3-[( 2- nitrofenil) karbamoil]- 3-[( trifluoroacetil) amino]- pirolidin- 1 - karboksilat

[0268]Dok je bila pod azotom, mešana smeša ferc-butil 3-alil-4-oksopirolidin-1-karboksilata (600 mg,

2,66 mmol), amonijum trifluoroacetata (698 mg, 5,33 mmol) i 2-nitrofenil izocijanida (690 mg, 4,6 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (2,7 mL) je bila stavljena u uljno kupatilo na 60 "C i mešana je preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je bila razređena sa etil acetatom (40 mL), a zatim je isprana sa vodom (3 x 20 mL) i sjedinjena vodena faza je bila re-ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL).

Sjedinjena organska faza je bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (20 mL), pa je osušena preko Na2S04i koncentrovana pod smanjenim pritiskom Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (90 g kolona. 0-5% etil acetat u metilen hloridu) je dalo re/c-butil 4-alil-3-[(2-nitrofenil)karbamoil]-3-[(trifluoroacetil)amino]-pirolidin-1-karboksilat (665 mg, 51%, 3:2 smeša dijastereomera) u vidu ćilibarne gume. LC-MS ESI<4>MS utvrđeno zaC2.H25F3N406 m/ z509.0 (M + Na). LC-MS ESI MS utvrđeno zaC21H23F3N,06 mlz485,1 (M - H)

Korak 2: terc- butil 4- alil- 3-( 1 H- benzotriazol- 1 - ilkarbonil)- 3-[( tnfluoroacetil) atvino]- pirolidin- 1- karboksilat

{ trans racemski)

[0269]Rastvor ferc-butil 4-alil-3-[(2-nitrofenil)karbamoil]-3-[(tnfluoroacetil)amino]pirolidin-1 -karboksilata (0,816 g, 1,68 mmol) u metanolu (30 mL) je bio tretiran sa amonijum hloridom (0,897 g, 16,8 mmol) i cinkom (219 g, 33,5 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 40 min, smeša je bila razređena sa etil acetatom (30 mL) i isfiltrirana je kroz podlogu od Celita. Podloga je bila isprana sa etil acetatom i filtrat je bio koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je bio ponovo razređen sa etil acetatom (25 mL) i vodom (20 mL), pa su slojevi bili razdvojeni. Organska faza je bila isprana sa vodom (10 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL) te je osušena preko Na^O*, i koncentrovana, a zatim je sušena pod visokim vakuumom tokom- 2h da bi se dobio ferc-butil 4-alil-3-[(2-aminofenil)karbamoil]-3-[(trifluoroacetil)aminojpirolidin-1-karboksilatni međuproizvod (760 mg, 3:2 smeša dijastereomera) kao beličasta pena koja je bila upotrebljena bez daljeg prečišćavanja

[0270]Dok je bio pod azotom, sirovi međuproizvod je bio rastvoren u hloroformu (30 mL), pa je tretiran sa izoamil nitritom (0.78 mL, 5 6 mmol) Homogena smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi 3 h, a zatim je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i prečišćena je hromatografijom na silika gelu (90 g kolona, 2,5-7% etil acetata u metilen hloridu) da bi se dobio ferc-butil 4-alil-3-(1 H-benzotriazol-1-ilkarbonil)-3-[(trifluoroacetil)amino]-pirolidin-1-karboksilat (347 mg, 44%. 95:5 trans/cis) kao beličasta pena. Za smešu anilina kao međuproizvod (smeša dijastereomera), LC-MS ESI" MS utvrđeno zaC21H27F3N4O4 mlz 455,2(M - H), Za benzotriazol (izolovan kao prikazani dijastereomer), LC-MS ESI<*>MS utvrđeno za C2-H2,F3NS04m/z 490.0(M + Na) 1H NMR (CDCI:i, 400 MHz) č 8,30 (m, 1 H), 8,17 (m, 1 H), 7,77 (m, 1 H), 7.60 (m, 1 H). 5,45 (m, 1 H), 4,90 (m, 2 H), 4,60 - 4,15 (m, 2 H), 3,95 - 3,60 (m, 2 H), 3,19 (m, 1 H), 2,10 (m, 2 H), 1,53 (s, 9 H) (prisutni rotamen).

Korak 3: 1- terc- butil 3- metil ( 3R, 4S)- 4- alil- 3-[( trifluoroacetil) amino] pirolidin- 1. 3- dikarboksilat ( racemski)

[0271]Rastvor ferc-butil 4-alil-3-(1H-benzotnazol-1-ilkarbonil)-3-[(trifluoroacetil)amino]pirolidin-1-karboksilata (340 mg, 0,727 mmol, 95:5 trans/cis) u metilen hloridu (6 mL) i metanolu (3 mL) je bio tretiran sa Et3N (0,0203 mL, 0 145 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi 45 min. Smeša je bila koncentrovana pod smanjenim pritiskom i zatim je prečišćena hromatografijom na silika gelu (40 g kolona, 2-5% etil acetat/metilen hlorid) da bi se dobio 1- ferc-butil 3-metil (3R,4S)-4-alil-3-[(trifluoroacetil)amino]pirolidin-1,3-dikarboksilat (racemski) (208 mg, 75%) kao delimično kristalni film LC-MS ESI" MS utvrđeno za C,BH?3F3N;Ofim/ z379,1 (M - H).<1>H NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 7,20 (m, 1 H), 5.73 (m, 1 H). 5,13 (m, 2 H), 4,02( d. J=11.7 Hz, 1 H), 3,88 (s. 3 H), 3.80 (m, 2 H), 3,25-2,85 (m. 2 H), 2.18-1,93 (m, 2 H), 1,49 (s. 9 H) (prisutni rotameri).

Korak 4: Meti! ( 3R. 4S)- 4- atil- 1-( 4- f! uorobenzoit)- 3-[( trifluoroacetil) amino]- pirolidin- 3- karboksilat

( racemski)

[0272]Dok je bio pod azotom, racemski rastvor 1-terc-butil 3-metil (3R,4S)-4-alil-3-[(trifluoroacetil)amino]pirolidin-1,3-dikarboksilata (Korak 3, 0,207 g, 0.544 mmol) u metilen hloridu (11 mL) je bio tretiran sa trifluorosirčetnom kiselinom (838 uL, 10,9 mmoi). Posle mešanja tokom 2 h, smeša je bila koncentrovana. te je sušena pod visokim vakuumom preko noći da bi se dobio metil (3R,4S)-4-alil-3-[(trifluoroacetil)amino]pirolidin-3-karboksilat trifluoroacetat kao bledo žuta pena koja je bila upotrebljena bez daljeg prečišćavanja Mešani rastvor ovog međuproizvoda u suvom metilen hloridu (11 mL) pod azotom je bio tretiran sa Et3N (0.341 mL, 2,45 mmol), što je bilo praćeno sa 4-fluorobenzoil hloridom (0,0979 mL, 0,816 mmol) Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h, rastvor je bio razređen sa metilen hloridom (15 mL), te je ispran sukcesivno sa vodom (10 mL), zasićenim vodenim NaHCO3(10 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (5 mL) Rezultujuća organska faza je bila osušena preko Na2S04i koncentrovana je, pa je prečišćena radijalnom hromatografijom (rotor sa silika gelom od 2000 mikrona, 40-75% etil acetat u heksanima) da bi se dobio metil (3R,4S)-4-alil-1 -(4-fluorobenzoil)-3-[(trifluoroacetil)amino]-pirolidin-3-karboksilat (racemski) (220 mg, 100%) kao bledo žuti film Rf = 0,33 (50% etil acetat u heksanima). Za međuproizvod pirolidin trifluoroacetat, LC-MS ESf MSutvrđeno za CnH^FjN^ mlz281.1 (M + H). Za amiđni proizvod, LC-MS ESI" MS utvrđeno za C18H16F4N204m/ z401,1 (M - H).

Korak 5: Metil ( 3R, 4S)- 1-( 4- ftuorobenzotl)- 4-[ 3-( 4, 4, 5, 5- tetrametil- 1, 3. 2- diok$ aborolan- 2- ii) propil]- 3-[( trifiuoroacetil) amino] pirolidin- 3- karboksilat ( racemski)

[0273]Metil (3R.4S)-1-(4-fluorobenzoil)-4-[3-(4.4 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-i[)propil]-3-[(trifluoroacetil)amino]pirolidin-3-karboksilat (racemski) je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 1, korak 3 izuzev što je metil (3R,4S)-4-alil-1-(4-fluorobenzoil)-3-[(trifluoroacetil)aminoj-pirolidin-3-karboksi!at (racemski) bio upotrebljen kao supstrat. ESI* MS utvrđeno za C24H3iBF4N?06m/z 531,2 (M + H) R,= 0,28 (50% etil acetat u heksanima).

Korak 6: ( 3RAS)- 3- amino- 4-[ 3-( dihidroksiboril) prop! l]- 1-( 4- fluorobenzoi/) piroltdin- 3- karboksilna kiselina

hidrohlorid ( racemski)

[0274]

[0275]Mešani rastvor racemski metil (3R,4S)-1-(4-fluorobenzoil)-4-[3-(4.4,5,5-tetrametil-1 3.2-dioksaborolan-2-il)propil]-3-[(trifluoroacetil)amino]piroiidin-3-karboksilata (200 mg. 0,377 mmol) u THF (4 2 mL) i vodi (3,7 mL) prskan sa azotom tokom 5 min Bio je dodat litijum hidroksid monohidrat (33,2 mg, 0,792 mmol), pa je smeša bila prskana sa azotom tokom 10 min i mešana je pod azotom na sobnoj temperaturi tokom 4 dana. tokom kojih je bio dodat dodatni litijum hidroksid monohidrat (39,6 mg, 0,943 mmol) Smeša je bila razređena sa vodom (5 mL) i zatim zakišeljena na pH < 1 sa 3 M vodene HCI. Rezultujući rastvor je bio ispran sa etil acetatom (2 x 20 mL) i metilen hloridom (2 x 20 mL). Vodena faza je bila koncentrovana pod smanjenim pritiskom i onda je prečišćena reverzno faznom HPLC Frakcije proizvoda su bile izolovane, koncentrovane, a zatim ponovo rastvorene u 1M vodene HCI. te su koncentrovane i liofilizovane da bi se dobila racemska (3R,4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]-1-(4-fluorobenzoil)pirolidin-3-karboksilna kiselina hidrohlorid (42 mg, 30%) kao bela amorfna čvrsta materija. MS (ESI+) m/z 321 (M-H20 + H+), 303 (M - 2 H20 + H +) i MS (ESI-) m/z 319 (M - H20 - H+).

Primer 47: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-{3-borpropil)-1-(4-metoksibenzoil)pirolidin-3-karboksilne

kiseline

[0276]

[0277](3R.4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(4-metoksibenzoil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46. izuzev što je 4-metoksibenzoil hlorid bio upotrebljen kao agens za acilovanje u koraku 4

Primer 48: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropii)-1-(4-fluorofenilkarbamoil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0278]

Korak 1: ( 3RAS)- 3- amino- 4-[ 3-( dihidroksibonl) propil] pirolidin- 3- karboksilna kiselina dihidrohlorid

( racemat)

[0279]7erc-butil (3R,4S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-[3-(4,4,5.54etrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-1-karboksilat (racemski) (1,60 g, 3,23 mmol) je bio stavljen u Ace epruvetu pod pritiskom, pa je pažljivo tretiran sa konc HCI (22 mL) i zagrevan je na -120 °C. Posle 16 h, smeša je bila ohlađena na sobnu temperaturu, te je polako dodata ledenoj vodi (45 mL) i isprana je sa metilen hloridom (3 x 40 mL). Vodena faza je bila koncentrovana, te je ponovo rastvorena u dejonizovanoj vodi i liofilizovana da bi se dobila racemska (3R,4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]piroiidin-3-karboksiina kiselina dihidrohlorid kao beličasta čvrsta materija. Čvrsta materija je mogla da se azeotropira iz toluena nekoliko puta da bi se odstranila dodatna voda 'H NMR (D20, 400 MHz)5 3,87 (d J =12,8 Hz, 1 H), 3.72 (dd, J= 11.7, 8.5 Hz. 1 H). 3.44 (d. J = 12,8 Hz. 1 H), 3,23 (br t,J=11,7 Hz, 1 H), 2,53 (m, 1 H), 1,60 (m. 1 H), 1,31 (m, 2 H), 1,19 (m. 1 H), 0,68 (m. 2H), ESfMS utvrđeno zaCeH17BN2CX, m/ z199,1 (M- 18 + H), 181,8 (M -36 + H); ESI'MS utvrđeno za C8H17BN204m/z 197,3 (M - 18 - H).

Korak 2 ( 3R. 4S)- 3- amino- 4-[ 3-( dihidroksiboril) propi! J- 1 -[( 4- fluorofenil) korbamoil] pirolidin- 3- karboksilna

kiselina hidrohlorid ( racemat)

[0280]

[0281]Dok je bila pod azotom. mešana smeša (3R 4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]pirolidin-3-karboksilna kiselina dihidrohlorida (0,225 g, 0.623 mmol) u suvom DMF (9 mL) je bila tretirana sa Et3N (0.521 mL, 3,74 mmol) i 4-fluorofenil izocijanatom (92,1 uL, 0.810 mmol). Posle mešanja tokom 1,5 h, reakciona smeša je bila razređena sa vodom (5 mL) i zatim zakišeljena na pH -1 sa 3M vodene HCI (5 mL). Vodena faza je bila isprana sa metilen hloridom (2 x 25 mL) i etil acetatom (25 mL). pa je koncentrovana i prečišćena reverzno faznom HPLC. Frakcije proizvoda su bile izolovane, te su koncentrovane, ponovo rastvorene u IM vodene HCI, a zatim su koncentrovane i liofilizovane da bi se dobila {3R 4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]-1-[(4-fluorofenil)karbamoil]pirolidin-3-karboksilna kiselina hidrohlorid (racemat) (65 mg, 27%) kao bela amorfna čvrsta materija, MS (ESI+) m/z 336 (M-H20 + H'), 318 (M - 2 H;>0 + H<+>) i MS (ESI-) m/z 334 (M - H20 + H<+>).

Primer 49: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-((7-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-

il)metil)pirolidin-3-karboksilne kiseline (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat)

[0282]

Korak 1: Metil 2- amino- 3~( 4- hlorofenil) propanoat hidrohlorid

[0283]Dok je bila pod azotom, mešana suspenzija 4-hlorofenilalanina (2,50 g. 12.5 mmol) u anhidrovanom metanolu (18 mL) je bila ohlađena u kupatilu sa ledenom vodom, pa je pažljivo tretirana sa tionil hloridom (1,00 mL, 13.8 mmol). Posle mešanja tokom 10 min rashladno kupatilo je bilo uklonjeno, te je ostavljeno da se smeša ohladi do sobne temperature Refluksni kondenzator je bio privršćen, pa je mulj bio zagrejan na 55° C. Posle mešanja preko noći, smeša je bila ohlađena na sobnu temperaturu, a zatim je koncentrovana, te je osušena pod smanjenim pritiskom da bi se dobio metil 2-amino-3-(4-hlorofenil)propanoat hidrohlorid (3.13 g. 99%) kao bela čvrsta materija ESI+ MS utvrđeno zaCiCH,?CIN02m/z214,0 (M + H).

Korak 2. Metil 3-( 4- hlorofent!)- 2-( etoksikarbonilamino) propanoat

[0284]Dok je bila pod azotom, mešana smeša metil 2-amino-3-(4-hlorofenil)propanoat hidrohlorida (3,13 g, 12,5 mmol) u metilen hloridu (42 mL)je bila ohlađena u kupatilu sa ledenom vodom i pažljivo je tretirana sa piridinom (2,23 mL, 27,5 mmol) i etil hloroformatom (1,27 mL, 13,3 mmol). Posle mešanja tokom 1 h, rastvor je bio razređen sa etil acetatom (50 mL) i vodom (50 mL), i onda su slojevi bili razdvojeni Vodena faza je bila re-ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 25 mL). a sjedinjena organska Faza je bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (25 mL), te je osušena preko Na2S04 i koncentrovana je pod smanjenim pritiskom da bi se dobio metil 3-(4-hlorofenil)-2-(etoksikarbonilamino) propanoat (3 56 g, 99%) kao bela čvrsta materija. 'H NMR (CDCI3. 400 MHz) 5 7,28 (m, 2 H), 7,08 (m,2H), 5,12 (m. 1H). 4,65 (m, 1 H), 4,13 (q,J= 8Hz, 2 H). 3,74 (s, 3 H), 3,10 (qd,J =16, 4,0 Hz, 2 H),1,25 ( t, J=QHz, 3 H), LC-MS daje ESf MSutvrđeno za C13H16CIN04 m/ z308,0 (M + Na), 286,0 (M +

H).

Korak 3: 2- etit 3- metit 7- hloro- 34- dihidroizohinolin- 2, 3( 1H)- dikarboksilat

[0285]Smeša metil 3-(4-hlorofenil)-2-(etoksikarbonilamino)propanoata (3,55 g, 12,4 mmol) u sirćetnoj kiselini (12 mL) i sumpornoj kiselini (4 mL) je bila tretirana sa paraformaldehidom (0.392 g, 13,0 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi preko noći, smeša je bila dodata ledu (50-60 g), pa je razređena sa vodom (30 mL) i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x -50 mL) Sjedinjena organska faza je bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (25 mL), te je osušena preko MgS04 i koncentrovana Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (90 g kolona. 25-50% etil acetat u heksanima) je dalo 2-etil 3-metil 7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2,3(1H)-dikarboksilat (2.19 g, 59%) kao bistro, viskozno ulje. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) č 7,12 (m, 3 H), 5.20 (m, -0.6 H), 4.98 (m, -0.4 H), 4,76 (m, 1 H). 4,53 (m, 1H). 4,25 (m, 2 H), 3,65 (s, 3 H). 3,20 (m. 2 H).1,35 ( t. J= 1Hz, -1.8 H), 1,28 (t, J= 7 Hz, -1,2 H) (smeša rotamera), ESI' MS utvrđeno za C14H16CIN04m/ z298,0 (M + H, slabo).

Korak 4: 7- hioro- 1, 2r3, 4~ tetrahidroizohinolin- 3- karboksilna kiselina hidrohlorid

[0286]Smeša 2-etil 3-metil 7-hloro-3.4-dihidroizohinolin-2,3(1 H)-dikarboksilata (2.19 g, 7,36 mmol) u 6 M vodene HCI (30 mL) je bila zagrevana na 100-105 "C tokom 2 dana. Rezultujuća smeša je bio koncentrovana pod smanjenim pritiskom i je sa toluenom (2 x 100 mL). Kada je supernatant bio odstranjen, čvrsti ostatak je bio osušen pod visokim vakuumom da bi se dobila 7-hloro-1,2.3.4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilna kiselina hidrohlorid (1,71 g, 94%) kao bledo žuta čvrsta materija koja je bila upotrebljena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<:>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 14,2 (bs, -1 H). 10,0 (bs. -2 H), 7,41 (s, 1 H), 7.32 (m, 2 H), 4.40 (m, 1H). 4,32 (m. 2 H), 3.32 (dd. J= 17, 4,9 Hz, 1 H), 3,10 (dd, J = 17, 11 Hz), LC-MS daje ESI'MSutvrđeno za CI0HtnCINO2 m/ z212,1 (M + H).

Korak 5: 2-( terc- butoksikarbonil)- 7- hloro- 1. 2. 3. 4- tetrahidroizohmoIin- 3- karboksilna kiselina

[0287]Rastvor 7-hloro-1,2,3.4-tetrahidroizohmolin-3-karboksilne kiseline hidrohlonda (1 70 g, 6 85 mmol) u 1,4-dioksanu (11 mL) i 1 IVI vodenog NaOH (22,3 mL. 22,3 mmol) je bio ohlađen u kupatilu sa ledenom vodom, pa je tretiran sa drugim rastvorom di-terc-butildikarbonata (1.87 g, 8,56 mmol) u 1,4-dioksanu (11 mL) Posle 15 min rashladno kupatilo je uklonjeno, pa je mešanje nastavljeno tokom 2 h. Rezultujuća smeša je bila razređena sa vodom (25 mL) i onda je isprana sa etil acetatom (50 mL). Vodenoj fazi je bio podešen pH - 3 sa 1M iimunske kiseline i zatim je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 75 mL). Sjedinjena organska faza je bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (50 mL), te je osušena preko MgS04i koncentrovana je pod smanjenim pritiskom Ostatak je bio prečišćen hromatografijom na silika gelu (90 g kolona, 25-75% etil acetata u heksanima) da bi se dobila2-{ terc-butoksikarbonil)-7-hloro-1,2,3.4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilna kiselina (1,61 g, 79%) kao bela čvrsta materija. 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 12,8 (s, 1 H), 7,34 (m, 1 H), 7,24 (m, 2 H), 4,88 (m, -0,5 H), 4,67 (m, -0,5 H), 4,50 (m, 2 H), 3,10 (m, 2 H), 1,46 (s, -4,5 H), 1,40 (s, -4,5 H) (smeša rotamera), LC-MS daje ESI" MS utvrđeno zaC15H1BCN04 m/ z 310,1(M - H).

Kora/c 6: terc- butil 7- hloro- 3-( hidroksimetii)- 3. 4- dihidroizohinolin- 2( 1H)- karboksilat

[0288]Dok je bila pod azotom, plamenom osušeni balon je bio napunjen sa 2-(fe/c-butoksikarbonil)-7-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilnom kiselinom (400 mg, 1.28 mmol) i anhidrovanim THF (2.5 mL), pa je ohlađen u ledom zasićenom vodenom kupatilu sa natrijum hloridom i pažljivo je tretiran sa rastvorom borana u THF (1 M, 2,63 mL, 2,63 mmol). Rezultujuća smeša je bila mešana na 0 °C tokom -1.5 h i onda na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je bila onda ohlađena u kupatilu sa ledenom vodom, pa je polako ugašena ukapavanjem vode sve dok uglavnom nije prestalo razvijanje gasa, te je razređena sa dodatnom vodom (15 mL) i ekstrahovana je sa etil acetalom (2 x 25 mL) Sjedinjena organska faza je bila isprana sa zasićenim vodenim NaHCO3(10 mL), vodom (10 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL), pa je osušena preko Na?S04 i koncentrovana pod smanjenim pritiskom Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona, 10-20% etil acetat u metilen hloridu) je dalo ferc-butil 7-hloro-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1 H)-karboksilat (292 mg, 76%) kao bistru gumu 'H NMR (DMSO-đ6, 400 MHz) S 7,29 (m, 1 H), 7 20 (m, 2 H), 4,81 (m. 1 H), 4,64 (d.J=17 Hz. 1 H), 4.20 (bm, 2 H), 3,30 (m, 1 H), 3.12 (m, 1 H). 2,84 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H).

Korak 7: terc- butil 7- hloro- 3- formil- 3. 4- dihidroizohinolin- 2( 1H)- karboksilat

[0289]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor ferc-butil 7-hloro-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (Korak 6, 270 mg, 0,907 mmol) u metilen hloridu (11 ml_)je bio ohlađen u kupatilu sa ledenom vodom i tretiran je ukapavanjem sa rastvorom Dess-Martin perjodinana (461 mg, 1,09 mmol) u metilen hloridu (3 mL) tokom nekoliko minuta. Rashladno kupatilo je uklonjeno, a rezultujuća bistra smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Kada je kompletirana, smeša je bila ponovo ohlađena u kupatilu sa ledenom vodom, te je ugašena šaržno sa 1:1 smešom zasićenog vodenog Na2S203i zasićenog vodenog NaHCO3(20 mL ukupno), a zatim je mešana 10 min na sobnoj temperaturi. Slojevi su bili razdvojeni, pa je vodena faza bila re-ekstrahovana sa metilen hloridom (20 mL), i onda je sjedinjena organska faza bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL), te je osušena preko Na2S04i koncentrovana je pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona, 10-30% etil acetat u heksanima) je dalo ferc-butil 7-hloro-3-formil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (162 mg, 60%) kao bistru gumu 'H NMR (DMSO-đ6, 400 MHz) 5 9.45 (bs. 1 H), 7,34 (m. 1 H), 7,26 (m, 2 H). 4,78 (m, -0,5 H), 4,64 (m, -0,5 H). 4,50 (m. 2 H).

3,21 (m, 1 H). 3,05 (m, 1 H), 1,46 (s. -4.5 H). 1.38 (s, -4,5 H) (smeša rotamera)

Korak 8: ( 3R, 4S)- 3- acetamido- N- terc- butil- 4-[ 3-( 4, 4 5, 5- tetrametil- 1, 3, 2- dioksaborolan- 2-H) propilJpiroiidin- 3- karboksamid hidrohlorid ( racemat)

[0290]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor ferc-butil (3R,4S)-3-acetamido-3-(ferc-butilkarbamoil)-4-[3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-1-karboksilata (400 mg, 0,807 mmol) u anhidrovanom THF (5 mL) je bio tretiran sa 4 M HCI u 1,4-dioksanu (3,03 mL, 12,1 mmol). Posle 2,5 h, smeša je bila razređena sa dietil etrom (15 mL) i zatim je isfiltrirana, te je isprana sa dodatnim etrom i koncentrovana je da bi se dobio (3R,4S)-3-acetamido-N-ferc-bt/f/7-4-[3-(4,4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-3-karboksamid hidrohlorid (340 mg, 97%) kao bela čvrsta materija. 'H NMR (D20, 400 MHz) 5 4,11 (d.J=12 Hz, 1 H), 3,58 (dd, J = 11.5. 7.7 Hz, 1 H), 3,19 (d,J =12 Hz. 1 H), 3,01&J=11,5, 1 H). 2,42 (m, 1 H), 1,92 (s, 3 H). 1,52 (m. 1 H). 1,30 (m, 2 H), 1,19 (s, 9 H). 1,16 (s, 12 H), 1,08 (m, 1 H), 0,75 (m 2 H), LC-MS daje ESfMS utvrđeno za C20H3BBN3O4 m/z 396,1 (M +

H).

Korak 9: terc- butil 3-({( 3R. 4S)- 3- acetamido- 3-( terc- butilkarbamoil)- 4-[ 3-( 4. 4, 5. 5- tetrametil- 1. 3, 2-

dioksaborolan- 2-\\) propil] pirolidin- 1-\\} metil)- 7- hloro- 3, 4- dihtdroizohinolin- 2( 1 H)- karboksitat

[0291]Mešana smeša (3R,4S)-3-acetamido-N-ferc-butil-4-[3-(4,4.5!5-tetrametil-1 ^^-dioksaborolan^-il)propil]pirolidin-3-karboksamid hidrohlorida (226 mg, 0,524 mmol) i Et3N (0.110 mL, 0,786 mmol) u metilen hloridu (2,5 mL) bila je tretirana sa rastvorom ferc-butil 7-hloro-3-formil-3.4-dihidroizohino!in-2(1 H)-karboksilata (155 mg. 0.524 mmol) u metilen hloridu (2,5 mL) Posle mešanja tokom 20 min, bio je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (233 mg, 1.10 mmol) i mešanje je bilo nastavljeno još 1 h Rezultujuća smeša je bila pažljivo ugašena sa zasićenim vodenim NaHC03(5 mL), pa je razređena sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (15 mL) i ekstrahovana je sa metilen hloridom (4x15 mL). Sjedinjena organska faza je bila osušena preko Na?S04i koncentrovana je Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona, 2-4% MeOH u etil acetatu) je dalo ferc-butil 3-({(3R.4S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-[3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-1-il}metil)-7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (296 mg, 84%, smeša dijastereomera) kao bistru gumu. LC-MS daje ESI+ MS utvrđeno za C35H56BCIN406m/z675,4 (M + H).

Korak 10: ( 3R. 4S)- 3- amino- 1 -[( 7- hioro- 1, 2. 3. 4- tetranidroizohinolin- 3- il) meti!]- 4-[ 3-( dihidroksiboril) propil] pirolidin- 3- karboksilna kiselina trihidrohlorid ( smeša 2 dijastereomera, svaki je

racemat)

[0292]U Ace epruveti pod pritiskom je rastvor ferc-butil 3-({(3R,4S)-3-acetamido-3-(ferc-butilkarbamoil)-4-[3-(4.4.5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-1-il}metil)-7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (280 mg, 0,415 mmol) bio tretiran sa koncentrovanom HCI (8 mL) i mešanje na sobnoj temperaturi Posle 10 min epruveta je bila hermetički zatvorena, i smeša je bila zagrevana na~118 "C tokom 16 h Posle hlađenja do sobne temperature, rastvor je bio pažljivo razređen sa vodom (20 mL) i ispran je sa metilen hloridom (2x15 mL). Vodena faza je bila koncentrovana pod smanjenim pritiskom, a rezultujući ostatak je prečišćen reverzno faznom HPLC. Frakcije proizvoda (smeša dijastereomera) su bile izolovane i koncentrovane. Ostatak je bio rekonstituisan u 1 M HCI i re-koncentrovan Rezultujući ostatak je bio razređen sa dejonizovanom vodom i liofilizovan da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-[(7-hloro-1,2.3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil]-4-[3-(dihidroksiboril)propil]-pirolidin-3-karboksilna kiselina trihidrohlorid (smeša 2 dijastereomera. svaki je racemat) (102 mg, 49%) kao bledo žuta amorfna čvrsta materija.<1>H NMR (0,1M DCI u DzO, 400 MHz) 5 7,23 (m, 1 H), 7,15 (m, 2 H). 4,37 (s, 2 H), 4.00 (m, 3 H), 3,84 (m, 2 H), 3,69 (m, 1 H), 3,43 (m, 1 H),

3,22 (m, 1 H), 2,98 (m, 1 H), 2,68 (m, 1 H), 1,60 (m, 1 H), 1,25 (m, 3 H), 0,64 (m, 2 H), ESI<*>MSutvrđeno za C1BH2/BCIN3Oil m/ z378,1 (M - 18+ H), 360.1 (M - 36 + H);ESI MS m/ z376,2 (M - 18-H).

Primer 50: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-aminofenilsulfonil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0293]

[0294](3R,4S)-3-amino-1-(2-aminofenilsulfonil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksllna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46 izuzev što je 2-nitrobenzen-1-sulfonil hlorid bio upotrebljen kao agens za acilovanje u koraku 4 LC-MS ESI MS utvrđeno zaC^H?0BN3O8S m/ z400,1 (M-H).

Primer 51: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1 >((6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-

il)metil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0295]

[0296](3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-((6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil)pirolidin-3-karboksilna kiselina trihidrohlorid (smeša dva dijastereomera, svaki je racemat) je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 49. izuzev što je 3-hlorofenllalanin upotrebljen umesto 4-hlorofenilalanma u koraku 1<1>H NMR (0.1M DCI u D2G\ 400 MHz) 0 7.23 (m. 2 H), 7,09 (m, 1 H), 4.37 (S, 2 H), 4,00 (m, 3 H), 3,82 (m, 2 H), 3,69 (m, 1 H), 3,43 (m. 1 H). 3,22 (m. 1 H), 3,00 (m, 1 H), 2,68 (m, 1 H), 1,60 (m, 1 H), 1,26 (m, 3 H), 0,66 (m, 2 H). ESI* MS utvrđeno zaC18H27BCIN30<l m/ z378,1 (M - 18 + H), 360,0 (M - 36 + H), ESI" MSm/ z376,1 (M - 18 - H).

Primer 52: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-(bifenil-4-ilamino)etil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline

[0297]

[0298]Mešani rastvor {3R,4S)-3-acetamido-N-terc-buti[-4-(3-(4,4,5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)propil)pirolidin-3-karboksamida (Primer 8, korak 4} (198 mg. 0,50 mmol) i N-(4-fenil)benzil-N-BOC-glicinaldehida (244 mg, 0,75 mmol) u anhidrovanom 1,2-dihloroetanu (5 ml_)je bio mešan na sobnoj temperaturi 1 h, a onda je ohlađen ledenim kupatilom, pa je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (212 mg, 1,0 mmol) i zatim je mešan 18h na sobnoj temperaturi Bio je dodat vodeni natrijum karbonat (10%, 5 mL), a smeša je onda mešana nekoliko minuta i ekstrahovana je sa etil acetatom (30 mL. onda 2x10 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuoSirovi materijal je bio deprotektovan i izolovan korišćenjem metoda opisanog za primer 8, korak 5 da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-1-(2-(bifenil-4-ilamino)etil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-karboksilna kiselina (72 mg, 27%) kao voluminozna bela čvrsta materija NMR ( D?0) 5 7,60 - 7,75 (m, 4 H), 7,30 - 7,55 (m, 5 H). 4 27 (s, 2 H), 3,94 (d, J=12,5 Hz, 1 H), 3,82 (dt J,=11 Hz,J2=QHz, 1 H), 3,60 - 3,75 (m, 3 H), 3,45 (m, 2 H), 3,37 (t, J=11 Hz, 1 H), 2,50 - 2.65 (m, 1 H), 1,50 - 1,65 (m, 1 H), 1,10 - 1,35 (m, 3 H), 0.60 - 0,70 (m, 2 H). MS (m + 1): 426,1; MS (m - H20 + 1): 408,1.

Primer 53: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(1 2,3 4-tetrahidroizohinolin-3-

karbonil)pirotidin 3 karboksilne kiseline

[0299]

[0300](3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karbonil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46, izuzev što je 2-(terc-butoksikarbonll)-1,2.3.4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilna kiselina bila upotrebljen agens za acilovanje u koraku 4. omera, svaki je racemat) (43 mg. 12% ukupno iz 3 koraka) kao bledo žuta amorfna čvrsta materija. MS (ESI + ) m/z 375 (M - H?0 + H<+>). 392.

Primer 54: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]-1-[4-(trifluorometil)fenilalanil]pirolidin-3-karboksilne kiseline dihidrohlorida (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat)

[0301]

Korak 1: 2- okso- 2- feniletil ( 3R. 4S)- 3- azido- 1-[ N-( terc- butoksikarbonil)- 4-( trifluorometil) fenilal3nil]- 4-{ 3-( 4, 4, 5, 5- tetrametil- 1. 3. 2- dioksaborolan- 2- il) proptl] pirolidin- 3- karboksi! at

[0302]Smeša N-(ferc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)fenilalanina (268 mg, 0,804 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (123 mg, 0,804 mmol) i N-(3-dimetilarninopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorida (154 mg, 0,804 mmol) u suvom metilen hloridu (10 mL) i DMF (3 mL) je bila mešana na sobnoj temperaturi. Posle 1 h je bio dodat drugi rastvor racemskog 2-okso-2-feniletil (3R.4S)-3-azido-4-[3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaboroian-2-il)propil]pirolidin-3-karboksilat hidrohlorida (350 mg. 0,73 mmol) u metilen hloridu (3,5 mL), što je bilo praćeno neposredno sa Et3N (204 uL, 1,46 mmol). a rezultujuća homogena smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi 3.5 h. Kada je kompletirana, smeša je bila razređena sa dihlorometanom (8 mL), te je bila isprana sukcesivno sa vodom (2 x 20 mL), zasićenim vodenim NaHC03(2 x 20 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom, te je osušena preko Na2S04i koncentrovana je Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (90 g kolona, 15-35% etil acetat u heksanima) je dalo 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-3-azido-1-[N-(terc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)fenilalanil]-4-[3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-3-karboksi (233 mg, -60% čistoća) kao belu penu koja je bila upotrebljena bez daljeg prečišćavanja LC-MS EST MS utvrđeno zaC37H47BF3N5Oe m/z758,3 (M + H). 780 3 (M + Na): ESI MSm/ z756,5 (M - H)

Korak 2: ( 3R. 4S)' 3- amino- 1-[ N-( terc- butoksikarbonil)- 4-( trifluorometil) fen

1, 3, 2- dioksaborolan- 2- il) propil] pirolidin- 3- karboksilna kiselina

[0303]Mešani rastvor 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-3-azido-1-[N-(ferc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)fenilalanil]-4-[3-(4l4l5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-3-karboksilata (Korak 1) u sirćetnoj kiselini (9 mL) je bio tretiran sa cinkom (201 mg, 3,08 mmol, 10 ekv), a heterogena smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi. Posle 1,25 h, reakcija je bila isfiltrirana, pa je filterska podloga bila isprana sa sirćetnom kiselinom i etil acetatom, i onda je filtrat bio koncentrovan. te je osušen pod smanjenim pritiskom da bi se dobila sirova (3R,4S)-3-amino-1-[N-(ferc-butoksikarbonil)-4-

(trifluorometil)fenilalanil]-4-[3-(4,4,5.5-tetrametil-1.3.2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-3-karboksilna kiselina (242 mg) kao bistri film koji je bio upotrebljen bez daljeg prečišćavanja LC-MS ESI<*>MS utvrđeno za C29H43BF3N307 m/z 614,3 (M + H); ESI MS m/z 612,3 (M - H)

Korak 3: ( 3R. 4S)- 3- aminoA-[ 3( dihidroksiboril) propil]- 1-[ 4-( tnfluorometil) fenilalanil] pirolidin- 3-

karboksilna kiselina dihidrohlorid ( smeša dva dijastereomera: svaki je racemat)

[0304] Rastvor sirove (3R,4S)-3-amino-1 -[N-(ferc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)fenilalanil]-4-[3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3.2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-3-karboksilne kiseline (Korak 2. 242 mg) u anhidrovanom THF (6 mL) pod azotom je bio tretiran sa 4 N HCI u 1,4-dioksanu (6 mL). Posle mešanja tokom 2 h na sobnoj temperaturi, bio je dodat 1M vodene HCI (6 mL) i mešanje je bilo nastavljeno dodatnih 1,5 h. Reakciona smeša je bila razređena sa vodom (15 mL), a zatim je isprana sukcesivno sa etil acetatom (25 mL) i metilen hloridom (25 mL). Vodena faza je bila koncentrovana, a ostatak je prečišćen reverzno faznom HPLC. Frakcije proizvoda (smeša dijastereomera) su bile izolovane i koncentrovane. Ostatak je bio rekonstituisan u 1 M HC! i re-koncentrovan Rezultujući ostatak je bio razređen sa dejonizovanom vodom i liofilizovan da bi se dobila (3R,4S)-3-amino-4-[3-(dihidroksiboril)propil]-1-[4-(trifluorometil)fenilalanil]-pirolidin-3-karboksilna kiselina dihidrohlorid (smeša dva dijastereomera, svaki je racemat) (43 mg, 12% ukupno iz 3 koraka) kao bledo žuta amorfna čvrsta materija MS (ESI<*>) m/z 414 (M - H?0 + H*). 396 (M - 2 H20 + H'). MS (ESI-) m/z 412 (M - H20 - H<+>).

Primer 55: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-{(7-(trifluorometil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil)piroIidin-3-karboksilne kiseline (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat)

[0305]

[0306](3R.4S)-3-ammo-4-(3-borpropil)-1-((7-{tnfluorometil)-1.2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil)pirolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 51, izuzev što je 4-(trifluorometil)-fenilalanin upotrebljen umesto 4-hlorofenilalanina u koraku 1.<1>H NMR (0,1M DCI u D20, 400 MHz) 6 7,53 (d,J= 8,0Hz, 1 H), 7,49 (s, 1 H), 7,34 (d, J= 8.3 Hz, 1 H), 4,46 (s, 2 H), 4,08 (m, 2 H), 3,97 (m, 1 H), 3.83 (m, 2 H), 3,71 (m, 1 H), 3,44 (m, 1 H), 3,34 (m, 1 H), 3,07 (m, 1 H), 2,69 (m. 1 H). 1.60 (m, 1 H). 1,26 (m, 3 H), 0,66 (m, 2 H). ESI* MS utvrđeno zaC19H27BF3N30, m/z412.1 (M - 18 + H). 394.1 (M - 36 + H): ESI MSm/z 410,2(M - 18 - H)

Primer 56: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-(7-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-

karbonil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

f03071

Korak 1: terc- butil 3-(( 3R. 4S)- 4- alil- 3- azido- 3-(( 2- okso- 24eniletoksi) karbonil) pirolidin- 1- karbon

3, 4- dihidroizohinolin- 2( 1 H)- karboksilat

[0308]Mešana smeša racemskog 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-4-alil-3-azidopirolidin-3-karboksilat hidrohlorida (228 mg, 0,650 mmol) i 2-(ferc-butoksikarbonil)-7-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinohn-3-karboksilne kiseline (258 mg, 0,826 mmol) u metilen hloridu (6 mL) je bila tretirana sa Et3N (0.272 mL, 1,95 mmol), što je bilo praćeno sa N,N,N',N'-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfatom (HATU. 321 mg, 0,845 mmol). a rezultujuća skoro homogena smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi Posle 1 h. reakcija je bila razređena sa metilen hloridom (20 mL), te je isprana sukcesivno sa vodom (20 mL), 1 N vodene HCI (20 mL), zasićenim vodenim NaHCO3(20 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL), te je osušena preko Na2S04, i koncentrovana Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona, 15-25% etil acetat u heksanima) je daloferc-butil 3-({(3R,4S)-4-alil-3-azido-3-[(2-okso-2-feniletoksi)karbonil]pirolidin-1-il}karboni!)-7-hloro-3.4-dihidroizohinolm-2(1H)-karboksilat (214 mg, 54%) u vidu bledo ćilibamog filma koji je bio upotrebljen bez daljeg prečišćavanja. LC-MS ESI' MS utvrđeno zaC31H3JCN506 m/ z 608,2(M + H), 630,3 (M + Na); ESI" MSm/ z606,3 (M - H).

Korak 2; terc- butil 3-(( 3R. 4S)- 3- azido- 3-(( 2- okso- 2- feniletoksi) karbonil)- 4-( 3-( 4. 4 5. 5- tetrametil- 1. 3. 2-

dioksaboro! an- 2- il) propil) pirolidin- 1- karbonil)- 7- bloro- 3, 4- dihidroizotvnolin- 2( 1H)- karboksi^^^

[0309]ferc-butil 3-((3R,4S)-3-azido-3-((2-okso-2-feniletcksi)^ dioksaborolan-2Hl)propil)pirolidin-1-karbonil)-7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 1. korak 3 izuzev što je ferc-butil 3-({(3R,4S)-4-aiil-3-azido-3-[(2-okso-2-feniletoksi)karbonil]pirolidin-1-il}karbonil)-7-hloro-3.4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat bio upotrebljen kao supstrat. Posle hromatografije, neznatno nečisti materijal je bio upotrebljen bez daljeg prečišćavanja. LC-MS ESI<+>MS utvrđeno za C:i?H47BCIN508mlz736.3 (M + H).

Korak 3: ( 3R, 4S)- 3- amtno- 1-[( 7- hloro- 1, 2. 3, 4- tetrahidroizohmolm- 3- il) karboniij- 4- lJ-( dihidroksiboril) propil] pirolidin- 3- kart) oksilna kiselina dihidrohlorid ( smeša dva dijastereomera: svaki je

racemat)

[0310] (3R,4S)-3-amino-1-[(7-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)karbonil]-4-[3-(dihidroksiboril)propil]pirolidln-3-karboksilna kiselina dihidrohlorid (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat) je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 54. koraci 2-3, izuzev što je ferc-butil 3-({(3R,4S)-3-azido-3-[(2-okso-2-feniletoksi)karbonil]-4-[3-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil]pirolidin-1-il}karbonil)-7-hloro-3.4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (Korak 2) bio upotrebljen kao supstrat.

Primer 57: dobijanje (3R,4S)-3-amino-1-(2-amino-3-fenilpropil)-4-(3-borpropil)pirolidin-3-

karboksilne kiseline (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat)

[0311]

[0312](3R,4S)-3-amino-1-(2-amino-3-fenilpropil)-4-[3-(dihidroksiboril)propil]pirolidin-3-karboksilna kiselina trihidrohlorid (smeša dva dijastereomera; svaki je racemat) je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 54, Koraci 1-3 izuzev što je bio upotrebljen komercijalniN-(terc-butoksikarbonilaminoj-fenilalanin umesto ferc-butil 7-hloro-3-(hidroksimetil)-3.4-dihidroizohinolin-2(1 H)-karboksilata. 1H NMR (0,1M DCI u D2C\400 MHz) č 7.30 (m, 5 H). 4,41 (s, 2 H), 4,00 (m, 3 H), 3.85 (m, 2 H), 3.75 (m, 1 H), 3,41 (m, 2 H), 2,86 (m, 1 H). 2,69 (m. 1 H), 1,60 (m, 1 H), 1,27 (m, 3 H), 0,67 (m, 2 H),ESI+MS utvrđeno za d/H^B^O, mlz 332,2 (M - 18 + H),314.2 (M - 36 (2 H20) + H); ESIMS mlz330,2 (M - 18 (H20) - H).

Primer 58: dobijanje (3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropii}-1 -(2-(metilamino)-3-fenilpropanoil)pirolidin-3-karboksilne kiseline

[0313]

[0314]{3R,4S)-3-amino-4-(3-borpropil)-1-{2-(metilamino)-3-fenilpropanoil)ptrolidin-3-karboksilna kiselina je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 46, izuzev što je 2-(terc-butoksikarbonil(metil)amino)-3-fenilpropanska kiselina bila upotrebljena kao agens za acilovanje u koraku 4 MS (ESI + ) m/z 378 (M - H20 + H'), 395

Primer 59: dobijanje (3R.4S)-3-amino-1-[(5,7-dihlorO'12,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metiI]-4-[3-(dihidroksiboril)propil] pirolidin-3-karboksilne kiseline trihidrohlorida (smeša dva

dijastereomera; svaki je racemat)

[0315]

Korak 1: Metil 2. 4- dihloro- N-( etoksikarboni/) fcnilalaninat

[0316]Metil 2,4-dihloro-N-(etoksikarbonil)fenilalaninat je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 51, Koraci 1-2, izuzev što je bio upotrebljen 2,4-dihlorofenilalanin umesto 4-hlorofenilalanina u koraku 1 'H NMR (DMSO-đSl400 MHz) 5 7.71 (d,J=8,4 Hz, 1 H), 7,61 (s. 1 H), 7,38 (m, 1 H), 4,30 (m, 1 H), 3.92 (m, 2 H). 3,64 (s, 3 H), 3,19 (m. 1 H). 2.93 (m. 1 H). 1,10 (t, J= 7,1 Hz, 3 H), LC-MS daje ESI<4>MS utvrđeno zaC13H,5CI?NO, m/ z320,0 (M + H).

Korak 2: 2-( terc- butoksikarbonil)- 5. 7- dihloro- 1. 2. 3, 4- tetrahidroizohinolin- 3- karboksilna kiselina

[0317]Smeša metil 2,4-dihloro-N-(etoksikarbonil)fenilalaninata (100 mg, 0,312 mmol) i paraformaldehida (10,3 mg, 0,344 mmol) u sirćetnoj kiselini (0,90 mL) u mikrotalasnoj epruveti je bila tretirana sa konc. sumpornom kiselinom (0,30 mL) (blago egzotermna pri mešanju). Smeša je bila zagrevana na 80 "C u mikrotalasnoj ukupno 8 h, tokom kojih su alikvoti bili proveravani sa HPLC, Reakciona smeša je onda bila dodata vodi (8 mL), a ova vodena faza je bila isprana sa metilen hloridom (2 x 20 mL) i koncentrovana je da bi se dobila -4:1 smeša željenog proizvoda 5,7-dihloro-1,2,3.4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline i 2 4-dihlorofenilalanina kao nusproizvoda u rezidualnoj sumpornoj kiselini.

[0318]Mulj sirove 5,7-dihloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline u vodi (15 mL) je bio ohlađen u ledenom kupatilu, podešen mu je pH~8,5 sa 50% vodenim NaOH, te je razređen sa 1,4-dioksanom (10 mL), pa je tretiran sa rastvorom di-/erc-butildikarbonata (530 mg, 2,43 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) brzim ukapavanjem. Heterogena smeša je bila mešana na 0 °C tokom 10 min. a onda na sobnoj temperaturi preko noći, čime je dobijena gusta bela smeša. HPLC je ukazala na zaostali polazni materijal, tako da je reakcija bila tretirana sa 2 N vodenim NaOH (0,48 mL. 0.96 mmol) i dodatnim di-ferc-butilđikarbonatom (204 mg, 0,935 mmol) Posle mešanja tokom 4 h, smeša je bila razređena sa vodom (25 mL) i isprana je sa Et20 (2 x 25 mL) Vodenoj fazi je bio podešen pH~3 sa 1 M vodene limunske kiseline i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 40 mL). Sjedinjena organska faza (Et20/ etil acetat) je bila isprana sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL), pa je osušena preko MgS04 i koncentrovana je. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona. 15-45% etil acetata u heksanima) je dalo 2-(ferc-butoksikarbonil)-5.7-dihloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilnu kiselinu (265 mg, 41%) kao belu, delimično kristalnu čvrstu materiju. 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) č 12,9 (s, 1 H), 7,51 (m, 1 H), 7,41 (m, 1 H), 4,98 (m, -0,5 H), 4,80 (m, -0,5 H), 4,50 (m, 2 H), 3,29 (m, 1 H), 2,98 (m, 1 H), 1,46 (s, -4,5 H), 1,41 (s, -4,5 H) (smeša rotamera). LC-MS daje ESI MS utvrđeno zaC15H17CI2N04 mlz344,1 (M - H).

Korak 3 ( 3R:4S)- 3- amino- 1-[( 5, 7- dihtoro- 1,2. 3. 4- tetrahidroizohmolin- 3- il) metil]- 4-[ 3-( dihidroksiboril) propiljpirolidin- 3- karboksilna kiselina trihidrohlorid ( smeša dva dijastereomera; svaki je

racemat)

[0319](3R,4S)-3-amino-1-[(5,7-dihloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il)metil]-4-[3-(dihidroksiboril)propil]pirolidin-3-karboksilna kiselina trihidrohlorid (smeša dva dijastereomera, svaki je racemat) je dobijen na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 49. koraci.<1>H NMR (0,1M DCI u D20, 400 MHz) 5 7,43 (m, 1 H), 7.17 (m, 1 H), 4,41 (s, 2 H), 4,00 (m, 3 H), 3,85 (m, 2 H). 3,75 (m, 1 H), 3,41 (m, 2 H), 2,86 (m, 1 H). 2,59 (m, 1 H). 1,60 (m, 1 H), 1,27 (m, 3 H). 0,67 (m, 2 H), ESfMS utvrđeno zaC1BH26BCI?N304 m/ z 412,2(M - 18 + H), 394,2 (M - 36 + H): ESIMS m/ z410.3 (M - 18 - H)

Primer 60: dobijanje (3aR,4S,5S,6aR)-5-amino-4-(3-borpropi[)oktahidrociklopenta[c]pirol-5-karboksilne kiseline

[0320]

Korak 1: 2- okso- 2- feni! etil ( 3R. 4S)- 4- ali!- 3- azidopirolidin- 3- karboksitat trifluoroacetat ( racemski)

[0321]Dok je bio pod azotom, rastvor racemskog 1-ferc-butil 3-(2-okso-2-feniletil) (3R,4S)-4-alil-3-azidopirolidin-1,3-dikarboksilata (0,425 g, 1,02 mmol) u metilen hloridu (4 mL) je bio tretiran sa trifluorosirćetnom kiselinom (1,2 mL, 15 mmol) brzim ukapavanjem, a rezultujuća homogena smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi. Posle 40 min, smeša je bila koncentrovana pod smanjenim pritiskom, te je sušena pod visokim vakuumom tokom nekoliko sati da bi se dobio sirovi racemski 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-4-alil-3-azidopirolidin-3-karboksilat trifluoroacetat u vidu tamno ćilibarnog viskoznog ulja koje je bilo upotrebljeno neposredno u sledećem koraku LC-MS EST MS utvrđeno zaC,6H18N403rr>/z315,2(M + H). 'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 7,92 (m, 2 H), 7,69 (m, 1 H), 7,55 (m. 2 H), 5,75 (m, 1 H), 5,62 (m, 2 H), 5,24(d. J = 17Hz, 1 H), 5,20 (d,J =10,2 Hz. 1 H), 4.08 (m, 1 H), 3,80 (m.

1 H), 3,55 (m, 2 H), 2,80 (m. 1 H), 2,63 (m, 1 H), 2,27 (m, 1 H)

Korak 2. 2- okso- 2- feniletil ( 3R, 4S)- 4- alil- 3- azido- 1-[ N- benzil- N-( terc- butoksikarbonil) glicil] pirolidin- 3^

karboksilat

[0322]Mešana smeša sirovog racemskog 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-4-alil-3-azidopirolidin-3-karboksilat trifluoroacetata (Korak 1,~1 mmol) i N-benzil-N-(ferc-butoksikarbonil)glicina (337 mg, 1,27 mmol) u metilen hloridu (9 mL) je bila tretirana sa Et3N (0,495 mL, 3,55 mmol), što je bilo praćeno sa N,N,N',N'-tetrametil-0-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfatom (HATU, 502 mg, 1,32 mmol), a rezultujuća smeša je bila mešana na sobnoj temperaturi i nadzirana je sa HPLC. Posle 1 h, reakcija je bila razređena sa metilen hloridom (20 mL), te je isprana sa vodom (20 mL), 1N vodene HCI (10 mL), zasićenim vodenim NaHCO3(20 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (10 mL), pa je osušena preko Na2S04, i koncentrovana je pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (40 g kolona. 15-30% etil acetat u heksanima) je dalo 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-4-alil-3-azido-1-[N-benzil-N-(terc-butoksikarbonil)glicil]pirolidin-3-karboksilat (365 mg. 64%) u vidu ćilibarne gume koja bila upotrebljena kao takva u sledećem koraku. LC-MS ESI' MS utvrđeno za C30H3ftNsO6/n/z 562,3 (M + H), 584,3 (M + Na), ''H NMR (CDCI3, 400 MHz) č 7,92 (m, 2 H), 7,66 (m, 1 H), 7.53 (m. 2 H), 7,30 (m, 5 H). 5,75 (m, 1 H), 5,52 (m, 2 H), 5,12 (m, 2 H), 4,58 (m, 2 H), 4.22-3,42 (m, 6 H), 2,60 (m, 1 H), 2,50 (m, 1 H), 2,12 (m, 1 H), 1,48 (s, 9 H)

Korak 3: ( 3R, 4S)- 3- amino- 1-( N- benziiglicil)- 4-[ 3-( dih! droksiborii) propiljpirolidin- 3- karboksilna kiselina

dihidrohlorid ( smeša dva dijastereomera: svaki je racemat)

[0323](3R,4S)-3-amino-1-(N-benzilglicil)-4-[3-(dihidroksiboril)propil]pirolidin-3-karboksilna kiselina dihidrohlorid (smeša dva dijastereomera: svaki je racemat) je dobijena na način koji je analogan onome koji je opisan u Primeru 23, Koraci 2-3, izuzev što je bio upotrebljen 2-okso-2-feniletil (3R,4S)-4-alil-3-azido-1-[N-benzil-N-(terc-butoksikarbonil)glicil]pirolidin-3-karboksilat (Korak 2) umesto ferc-butil 3-({(3R,4S)-4-alil-3-azido-3-[(2-okso-2-feniletoksi)karbonil]pirolidtn-1-il}karbonil)-7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksiiata. MS (ESI+) m/z 346 (M - H2G + H'), 328 (M-2 H20 + H<+>); MS (ESI-) m/z 344 (M - H20 - H+).

Primer 61:dobijanje(1S,2S,4S)-1,4-diamino-2-(3-borpropil)ciklopentankarboksilne kiseline

(racemska)

[0324]

Korak 1: 2- alilciklopentanon

[0325]Mešani rastvor metil 2-karboksiciklopentanona (35.5 g, 250 mmol) u acetonu (500 mL)je bio

tretiran sa anhidrovanim kalijum karbonatom (138 g, 1,0 mol) i alil bromidom (100 mL, 1,15 mol), pa je refluksovan tokom 5 h. Smeša je bila ohlađena, a onda je isfiltrirana kroz Celit<®>(filterski kolač je ispran sa acetonom), i filtrat je bio koncentrovanin vacuo.Rezidualno ulje je bilo rastvoreno u metanolu (450 mL), te je tretirano sa 6 N HCI (250 mL), pa je refluksovano tokom 40 h. Rastvor je bio ohlađen na

sobnu temperaturu,koncentrovan je u vakuumuda bi se odstranio najveći deo metanola, i razređen je sa vodom (200 mL). Vodeni rastvor je bio ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 250 mL), a sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 200 mL). te je osušen (Na2S04), i nežno (isparljivi proizvod) jekoncentrovan u vakuumudo 75 mL zapremine. Ovaj rastvor je bio stavljen na kolonu sa silika gelom (-500 cc) i eluiran je sa dihlorometanom da bi se dobio (posle nežne koncentracije frakcija) 2-alilciklopentanon (27,3 g, 88%) kao bezbojno ulje NMR (CDCI3): 6 5.65 - 5,75 (m, 1 H), 4,90 - 5,05 (m, 2 H), 2,40 -2,50 (m, 1 H), 2,20 -2.30 (m, 1 H), 1.85-2.15 (m, 5 H), 1.65 - 1.75 (m, 1 H), 1,45 - 1,55 (m,

1 H).

Korak 2: 2- alil- 5-( fenilselanil) ciklopentanon

[0326]Dok je bio pod azotom, rastvor 2-alilciklopentanona (12.4 g, 100 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (100 mL) je ohlađen na -70 X. pa je tretiran sa 1 N litijum bis(tri-metilsililjamid/tetrahidrofuranom (200 mL, 200 mmol) takvom brzinom da je reaktorska temperatura održavana ispod -55 X. Kada je dodavanje bilo okončano, onda je smeša bila mešana na -60 do -70X tokom još jednog dodatnog sata. Bio je ukapan drugi rastvor fenilselenil hlorida (19,5 g. 102 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (50 mL) i smeša je onda mešana na -60 do -70 X tokom 30 min, pa je onda ostavljeno da se zagreje na 0 "C. Reakcija je bila ugašena dodavanjem rastvora brzo mešanoj smeši etil acetata (500 mL) i 5% vodene limunske kiseline (200 mL), i organski sloj je bio izdvojen. Vodeni rastvor je bio ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 100 mL), a sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (200 mL), te je osušen (MgS04), i koncentrovanin vacuo.Ostatak je bio rastvoren u heptanu, te je stavljen na kolonu sa silika gelom (-600 cc) i eluiran sa 2:1 heptanom/dihlorometanom, a onda sa 1:1 heptanom/dihlorometanom da bi se dobio 2-alil-5-(fenilselanil) ciklopentanon (19.7 g. 71%) kao bledo žuto ulje. NMR (CDCI3): 5 7,40 - 7,50 (m. 2 H) 7,05 -7,25 (m, 3H), 5,50 -5,70 (m, 1 H), 4,80 - 4,95 (m, 2 H), 3,45 - 3,75 (m, 1 H), 2.30 -2,50 (m, 1 H), 1.80

-2,25(m, 5H), 1.50- 1,75 (m, 1 H),MS(M+ 1): 279,1/280,9 (za 2 glavna izotopa Se).

Korak 3: 5- aliiciktopent- 2- enon

[0327]Mešani, ledeno hladni rastvor (3 X) 2-alil-5-(fenilselanil)ciklopentanona, smeša izomera (12,0 g, 43 mmol) u dihlorometanu (200 mL) u boci od 1 L sa zaobljenim dnom opremljenoj sa zadržavanjem ključalog sadržaja su bili tretirani sa zasićenim vodenim amonijum hloridom (45 mL), a onda ukapavanjem 30% vodenog vodonik peroksida (22 mL), i polako je pažljivo zagrejan do sobne temperature. Na približno 20 °C je postalo izrazito egzotermno, i onda je ponovo primenjeno ledeno kupatilo. Smeša je bila ohlađena na sobnu temperaturu, a zatim je mešana 1 h, pa je onda rastvor bio ispran sa vodom (100 mL), te je mešana sa 10% vodenim natrijum tiosulfat pentahidratom (75 mL) tokom 10 min, i razdvojena je. Organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 75 mL), te je osušen (NajS04), i koncentrovan do zapremine od 30 mL. Rastvor je bio dodat koloni sa silika gelom (-400 cc) i onda je eluiran sa dihlorometanom da bi se dobio (posle veoma nežne koncentracije odgovarajućih frakcija) 5-alilciklopent-2-enon (3.95 g, 75%) kao veoma bledo žuto ulje. NMR (CDCI3): 5 7,61 (m, 1 H), 6,12 (m, 1 H), 5,60 - 5,75 (m, 1 H), 4,90 - 5,05 (m, 2 H), 2,70 - 2,80 (m. 1H), 2,45 -2,55 (m, 1 H), 2,30 - 2,40 (m, 2 H), 2,05-2,15 (m, 1 H).

Korak 4: terc- butil 3- alil- 4- oksociklopentilkarbamat

[0328]Mešani rastvor 5-alilciklopent-2-enona (2.20 g. 18 mmol), t-butil karbamata (4.70 g, 40 mmol), i tetra-n-butilamonijum bromida (6,45 g. 20 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (40 mL) pod azotom je bio ohlađen u ledenom kupatilu (3 liC), pa je tretiran ukapavanjem sa bor trifluond eteratom (2.22 mL, 18 mmol). Ostavljeno je da se reakciona smeša zagreje do sobne temperature, a zatim je mešana 18 h. Bio je dodat zasićeni vodeni natrijum bikarbonat (40 mL), a onda je smeša mešana 15 min i razdvojena je. Vodeni rastvor je bio ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 20 mL), a sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20 mL). te je osušen (Na7S04), ikoncentrovan in vacuo.Ostatak je bio rastvoren u minimumu dihlorometana, pa je dodat koloni sa silika gelom (-300 cc) i prvo je eluiran sa 85:15 heptana/etil acetata da bi se dobio rekupensani polazni materijal (0,35 g), a onda sa 4:1 heptanom/etil acetatom da bi se dobila smeša t-butil karbamata i predmetnog jedinjenja. Ova smeša je bila zagrejana u heptanu i isfiltrirana je da bi se odstranio veći deo t-butil karbamata, a onda je bio dodat filtrat koloni sa silika gelom (-300 cc) i eluiran je sa 6:3:1 heptanom/dihlorometanom/etil acetatom da bi se dobio terc-butil 3-alil-4-oksociklopentilkarbamat 1,17g (27%) u vidu bledo ćilibarne čvrste materije. NMR (CDCb) 5 5,60 -5,75 (m, 1 H), 4,90 - 5,05 <m, 2 H), 4,50 (br s, 1 H), 4,00 - 4.25 (m, 1 H), 2.30 - 2.80 (m, 3 H), 2,20 - 2,30 (m, 1 H), 1,85 - 2,15 (m, 3 H), 1,38 (S. 9 H), MS (M + 1): 240,1,

Korak5:terc- butil ( 1S 3S. 4S)- 3- acetamido- 4- ali!- 3-( terc- butilkarbamoil) ciklopentiikarbamat

[0329]Dok je bila pod azotom, smeša terc-butil 3-alil-4-oksociklopentilkarbamata, smeša izomera (1,08 g, 4,5mmol) i amonijum acetata (1,39 g, 18 mmol) u 2,22-trifluoroetanolu (5 mL) je bila tretirana sa t-butilizonitrilom (1,53 mL, 13,5 mmol) i zatim je mešana na sobnoj temperaturi 3 dana Reakciona smeša je bila koncentrovanau vakuumu irastvorena je u dihlorometanu (50 mL). Rastvor je bio ispran sa vodom (25 mL). te je osušen (Na^Ci), i dodat je koloni sa silika gelom (-250 cc) Ovo je bilo eluirano sukcesivno sa 50%, 65%. 70%, i 75%> etil acetata u heptanu da bi se dobio terc-butil (1S,3S,4S)-3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil) ciklopentilkarbamat (0.99 g. 58%) kao bela čvrsta materija. NMR (CDCI3): 6 7,72 i 7,04 (br s, 1 H kombinovanoj, 7,27 i 6,35 (br s, 1 H kombinovanoj, 5,84 i 5,06 (br s, 1 H kombinovano), 5,55 - 5,70 (m, 1 H). 4,85 - 4,95 (m. 2 H). 3,90 - 4.15 (m. 1 H), 2,10 - 2,90 (m, 4 H), 1.70 - 2,00 (m, 6 H), 1,20 - 1.40 (m, 18 H), MS (M + 1): 382.2.

Korak6terc- butil ( 1S, 3S. 4S)- 3- acetamido- 3-( terc- butilkarbamoil)- 4-( 3-( 4. 4.5, 5- tetrametil- 1, 3. 2-

dioksaborolan- 2- il) propil) ciklopenti! karbamat

[0330]Mešani rastvor terc-butil (1S,3S,4S)-3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil) ciklopentilkarbamata, smeša izomera (0,954 g, 2,50 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (25 mL) pod azotom je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien iridijum dimerom (54 mg, 0,08 mmol) i Diphosom<lR>>(64 mg, 0,16 mmol), i onda je ohlađen (-25 [,C). Posle mešanja tokom 30 mm, bio je ukapan pinakolboran (0,55 mL, 3,8 mmol)pomoću šprica,i ostavljeno je da se reaktorska temperatura zagreje do temperature ledenog kupatila i postepeno je zagrejana do sobne temperature preko noći (18 h). Bila je dodata voda (10 mL), a smeša je bila mešana 20 min, i onda je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL). Organski rastvor je bio ispran sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (50 mL), te je osušen (MgS04) ikoncentrovan in vacuoRezidualna čvrsta materija je bila rekristalizovana nekoliko puta iz acetonitrila da bi se dobio terc-butil (1S,3S,4S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentilkarbamat, i koncentrovana matična tečnostje bila hromatografisana na silika gelu (eluiran sa 3:2, onda 4:1 etil acetatom/heptanom) i rekristalizovana nekoliko puta iz acetonitrila da bi se dobilo dodatno predmetno jedinjenje. Ukupni prinos je bio 0,52g (41%) kao bela čvrsta materija NMR (CDCl3): 5 7.26 (br s, 1 H), 6.56 (br s, 1 H), 5,48 (br s, 1 H), 4.13 (m, 1 H), 2,65 -2,80 (m, 1 H), 2,40-2,60 (m, 1 H). 2,15 - 2,25 (m. 1 H). 1,90 -2,05 (m, 1 H). 1,93 (s, 3 H), 1,40 - 1,55 (m. 1 H), 1,00 - 1,40 (m, 4 H), 1,38 (s, 9 H), 1,28 (s. 9 H). 1.16 (s, 12 H), 0.60 - 0,75 (m, 2 H), MS (M + 1): 510,6.

Korak 7: ( 1 S, 2S, 4S)- 1, 4- diamino- 2-( 3- borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina ( racemska)

[0331]Rastvor terc-butil (1 S,3S,4S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentilkarbamata (0,204 g, 0.40 mmol) u 2:1:1 koncentrovanoj HCtiedeno hladnoj sirćetnoj kiselini: vodi (8 mL) u boci pod pritiskom je bio onda mešan 2 h na 60 "C, pa je poklopljen i zatim je mešan 18 h na 130 °C, te je ohlađen na sobnu temperaturu, i otklopljen je. Rastvor je bio razređen sa vodom (20 mL), pa je ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL) ikoncentrovan in vacuo.Rezultujući ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOWEX<&>550A-OH smolom (3 g) koja je bila isprana sa metanolom. Smeša je onda bila mešana 40 min, a zatim je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom, dihlorometanom, vodom, metanolom, i dihlorometanom. Smola je bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 mL) i isfiltrirana je, a sjedinjeni filtrati su bilikoncentrovani in vacuo.Ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i zatim je koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u 1,5-2,0 mL vode. Posle prečišćavanja sa HPLC, odgovarajuće frakcije su bilekoncentrovane in vacuo,te su tretirane tri puta sa 1N HCI (10 mL) i koncentrovane, pa su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a onda su rastvorene u vodi (10 mL), zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobilo predmetno jedinjenje (98 mg, 81 %) kao bela pena. NMR (D20) 54,00 -4,10 (m, 1 H), 2,82 (dd. J,= 10.5 Hz,J?= 6 Hz,1 H). 2,35 - 2,45 (m. 1 H), 2,05 - 2,15 (m, 2 H), 1,90-2,00 (m, 1 H), 1.52 (m, 1 H), 1.40 (m, 1 H), 1,27 (m, 1 H), 1,09 (m, 1 H). 0,65- 0.75 (m, 2 H). MS (M+ 1): 230,9; MS (M - H20 + 1): 213,1.

Primer 62: dobijanje (1S,2S,4S)-1-amino-4-(benzilamino)-2-{3-borpropil)ciklopentankarboksilne

kiseline (racemska)

[0332]

Korak 1: benzil 3- alil- 4- oksociklopentilkarbamat

[0333]Rastvor 5-(propen-3-il)ciklopent-2-enona (4,28 g, 35 mmol) u dihlorometanu (15 mL) je bio tretiran sa benzil karbamatom (10,6 g, 70 mmol) i bizmut trinitrat pentahidratom (2,2 g, 4.5 mmol), te je mešan brzo tokom 18 h, a onda je razređen sa dihlorometanom (50 mL) Smeša je bila isfiltrirana kroz Celit® (ispran sa dihlorometanom), pa je filtrat polako dodat direktno na kolonu sa silika gelom (-550 cc). Eluiranjem prvo sa 3:2 petroleum etrom/dihlorometanom je dobijen rekuperisani polazni materijal (1,01

g), a onda je 4:1 heptan/etil acetat dao predmetno jedinjenje (4,54 g, 47,5% nekorigovani prinos) kao bledo žuto ulje. NMR (CDCI3): 6 7,28 (br s, 5 H), 5,55 -5,70 (m, 1 H), 5,03 (br s, 2 H). 4,90 - 5,10 (m. 2

H), 4,75 - 4,90 (m, 1 H), 4,10 - 4,30 (m. 1 H), 2.40 - 2,80 (m, 2 H), 2.15-2,40 (m, 2 H), 1,85 - 2.15 (m, 3 H), MS (M + Na); 296,0; MS (M - HjO + 1) 256.0 (nije bio vidljiv M + 1)

Korak 2: benzil ( 1 S. 3S, 4S)- 3- acetamido- 4- alit- 3-( terc- butilkarbamoil) ciklopentilkarbamat

[0334]Mešana smeša benzil 3-alil-4-oksociklopentilkarbamata, smeša izomera (5,19 g, 19 mmol) i amonijum acetata (5,86 g, 76 mmol) u 2,2.2-trifluoroetanolu (20 mL) pod azotom je bila tretirana sa t-butilizonitrilom (6,50 mL, 57 mmol) i onda je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana. Reakciona smeša je bilakoncentrovana in vacuo,te je rastvorena u dihlorometanu i dodata je u kolonu sa silika gelom (-550 cc). Sukcesivnim eluiranjem sa 60%, 70%, i 80% etil acetata/heptana je dobijeno predmetno jedinjenje zajedno sa nepoželjnim izomerom (ukupno 3,48 g). Rekristalizacija (2 kapi) iz minimalnog acetonitrila/etra je dala predmetno jedinjenje (1,83 g, 23%) kao belu čvrstu materiju. NMR (CDCI3): Č 7,38 (br S, 5 H), 7,10 (br s, 1 H), 5,65 - 5.80 (m, 1 H), 5,67 (br s. 1 H), 4,95 - 5,15 (m, 4 H), 4,25-4,35 (m. 1 H). 2,85 - 3,00 (m, 1 H), 2,60 -2,70 (m, 1 H), 2,20- 2,35 (m. 2 H). 1,85 - 2,15 (m, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 1,40 (s, 9 H), MS (M + 1); 416,1.

Korak 3: benzil ( 1S, 3S, 4S)- 3- acetamido- 3-( terc- butilkarbamoii)- 4-( 3-( 4. 4. 5. 5- tetrametil- 1, 3, 2-

dioksaborolan- 2- ii) propil) ciklopentiIkarbamat

[0335]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor benzil (1S,3S,4S)-3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoii) ciklopentilkarbamata (1,25 g, 3,00 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (30 mL) je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien iridijum dimerom (70,5 mg, 0,105 mmol) i Diphosom (83,7 mg, 0,21 mmol). pa je ohlađen (-25 °C). Posle mešanja tokom 30 min. pinakolboran (0.65 mL, 4,5 mmol) je bio ukapanpomoću šprica,te je ostavljeno da se reaktorska temperatura zagreje do temperature ledenog kupatila i postepeno se zagrejala do sobne temperature preko noći (18 h). Dodata je voda (5 mL), pa je smeša mešana 20 min, i onda je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 30 mL) Organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 25 mL), te je osušen (MgSO^) ikoncentrovan in vacuoOstatak je bio rastvoren u minimumu dihlorometana, te je stavljen na kolonu sa silika gelom (-250 cc) i eluiran je sa 2:1 etil acetatom/heptanom da bi se dobilo predmetno jedinjenje (0,75 g. 46%) kao bela čvrsta materija NMR (CDCI3) 5 7,20 - 7,35 (m, 6 H), 5,30 (br s. 1 H), 4.95 - 5,10 (m, 2 H), 4,20 (m, 1 H), 2,73 (m, 1 H), 2,46 (m, 1 H), 2,23 (d,J =12 Hz. 1 H), 2.05 (m, 1 H), 1,93

(s, 3 H), 1,45 (m, 1 H), 1,05 - 1,35 (m, 4 H), 1,28 <s, 9 H), 1.15 (s, 12 H), 0,60- 0,75 (m, 2 H), MS (M + 1): 544,0.

Korak 4: ( 1 S, 2Sl4S)- 1- acetamido- 4- amino- N- terc- butil- 2-( 3-{ 4, 4. 5. 5- tetrametil- 1, 3, 2- dioksaborolan- 2-

il) propil) ciklopentankarboksamtd

[0336]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor benzil (1S,3S,4S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentilkarbamata (0,544 g, 1,00 mmol) u 4:1 etil acetatu/metanolu (20 mL) je bio tretiran sa 20% Pd(OH)?/C (0.30 g), te je prečišćen sa vodomkom, i mešan je pod balonom tokom 18 h, Smeša je bila prečišćena sa azotom i pažljivo je isfiltrirana kroz podlogu od Celita<*>"(bez dopuštanja da se filterska podloga osuši), a filtrat jekoncentrovan u vakuumuda bi se dobilo 0,409 g (100%) predmetnog jedinjenja kao bela čvrsta materija. NMR (CDCI3): 5 6,72 (br s, 1 H), 6,67 (br s, 1 H), 3,63 (m, 1 H), 2,80 (m, 1 H), 2,57 (m, 1 H), 1,75 - 2,00 (m, 4 H), 1,93 (s, 3 H), 1,00 -1,50 (m. 3 H). 1,25 (s, 9 H), 1,17 (s, 12 H), 0,60 -0,75 (m, 2 H), MS (M + 1): 410,5.

Korak 5: ( 1S, 2S, 4S)- 1- amino- 4-( benzilamino)- 2-( 3- borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina ( racemska)

[0337]Mešani rastvor benzaldehida (32 mg, 0,30 mmol) u metanolu (2 5 mL) je bio tretiran sa (1S,2S,4S)-1-acetamido-4-amino-N-terc-butil-2-(3-(4.4.5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamidom (102,4 mg, 0,25 mmol), a zatim je mešan 1 h na 50 "C. te je onda ohlađen na ledenom kupatilu. Bio je dodat natrijum borohidrid (12 mg, 0,32 mmol), i smeša je onda mešana 1h na 3 °C, te je zagrejana do sobne temperature, a onda je mešana 30 min, i ugašena je sa vodom (1 mL). Sirovi proizvod, u boci pod pritiskom, je bio rastvoren u 2:1:1 koncentrovanoj HCLiedeno hladnoj sirćetnoj kiselini:vodi (8 mL). a zatim je mešan 2 h na 60 °C, te je onda poklopljen i zatim je mešan 18 h na 130 °C. pa je ohlađen na sobnu temperaturu, i otklopljen je. Rastvor je bio razređen sa vodom (20 mL), te je ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL) ikoncentrovan in vacuo.Rezultujući ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan je tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOWEX<<R>>550A-OH smolom (3 g) koja je bila isprana sa metanolom. Smeša je onda bila mešana 40 min, a zatim je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom. dihlorometanom, vodom, metanolom, i dihlorometanom Smola je bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 mL) i isfiltrirana je. a sjedinjeni filtrati su bilikoncentrovani tn vacuo.Ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan je tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u 1,5-2.0 mL vode Posle prečišćavanja sa HPLC. odgovarajuće frakcije su bilekoncentrovane in vacuo.te su tretirane tri puta sa 1N HCI (10 mL) i koncentrovane, a zatim su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a onda su rastvorene u vodi (10 mL), zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobilo predmetno jedinjenje (30.7 mg, 31 %) kao bela pena. NMR (D20) S 7,40 (br s, 5 H), 4,17 (br s, 2 H), 4,00 - 4,10 (m, 1 H). 2,78 (m, 1 H), 2,34 (m, 1 H), 2,20 (m. 1 H), 1,95 - 2,15 (m, 2 H), 1,50 (m, 1 H), 1,39 (m, 1 H), 1,25 (m, 1 H), 1,06 (m, 1 H), 0.60-0.75 (m, 2 H), MS (M + 1). 321,1, MS (M - H20 + 1). 303.3; MS (M - 2H20 + 1). 285,4

Primer63:dobijanje (1S,2S,4S)-1-amino-2-(3-borpropil)-4-(dimetilamino)ciklopentankarboksilne

kiseline (racemska)

[0338]

[0339] Mešanasmeša (1S,2S,4S)-1-acetamido-4-amino-N-terc-butil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamida (102,4 mg, 0,25 mmol) i 37% vodenog formaldehida (0,07 mL, 0,94 mmol) u 1,2-dihloroetanu (2 mL) je bila tretirana sa trietilaminom (jedna kap), a onda sa natrijum triacetoksiborohidridom (0,20 g, 0,94 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi 2 dana, te je ugašena sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (1 mL). Smeša je bila ekstrahovana sa dihlorometanom (2 x 10mL), a sjedinjeni organski ekstrakti su bili isprani sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 5 mL), te su osušeni (Na2S04), ikoncentrovani in vacuo.Sirovi proizvod, u boci pod pritiskom, je bio rastvoren u 2:1:1 koncentrovanoj HCLIedeno hladnoj sirćetnoj kiselmi:vodi (8 mL) i zatim je mešan 2 h na 60 "C. pa je onda poklopljen i zatim je mešan 18 h na 130 "C. te je ohlađen na sobnu temperaturu, i otklopljen je. Rastvor je bio razređen sa vodom (20 mL), te je ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL) ikoncentrovan je in vacuo.Rezultujući ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan je tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOWEX® 550A-OH smolom (3 g) koja je bila isprana sa metanolom. Smeša je onda mešana 40 min, pa je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom, dihlorometanom, vodom, metanolom, i dihlorometanom Smola je bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 ml.) i isfiltrirana je. a sjedinjeni filtrati su bilikoncentrovani in vacuoOstatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan je tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u 1.5-2,0 mL vode. Posle prečišćavanja sa HPLC, odgovarajuće frakcije su bilekoncentrovane in vacuo.te su tretirane tri puta sa 1N HCI (10 mL) i koncentrovane, pa su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a onda su rastvorene u vodi (10 mL), zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobilo predmetno jedinjenje (24,5 mg. 30%) kao bela pena. NMR (D20) č 4,00 - 4,10 (m, 1 H), 2,81 (s, 3 H), 2.79 (s, 3 H), 2,70 (dd,J-~11 Hz.j*2=7 Hz, 1H), 2,20 - 2,35 (m, 2 H), 2.00 - 2.15 (m, 2 H), 1,50 (m, 1 H), 1.38 (m, 1 H). 1,25 (m. 1 H). 1,06 (m, 1 H), 0.60 - 0,75 (m, 2 H), MS (M + 1): 259.3; MS (M - H20 + 1): 241,5; MS (M - 2H20 + 1): 223,4.

Primer 64: dobijanje (1S,2S,4R)-1-amino-4-{aminometil)-2-(3-borpropil)ciklopentankarboksilne kiseline

[0340]

Korak 1: 2- a! il- 4-( nitrometil) ciklopentanon

[0341]Mešani rastvor 5-(propen-3-il)ciklopent-2-enona (0,428, 3.5mmol) u nitrometanu (2 mL) pod azotom je bio tretiran sa DOWEX<®>550A-OH smolom (0,80 g, te je ispran sa metanolom i delimično osušen na vazduhu). i onda je zagrevan na 60 °C tokom 2 h. Smeša je bila ohlađena na sobnu temperaturu, te je razređena sa dihlorometanom (20 mL), i isfiltrirana je. Filtrat je biokoncentrovan in vacuo,pa je ponovo rastvoren u minimumu dihlorometana, i dodat je koloni sa silika gelom (-100 cc) i eluiran je sa dihlorometanom da bi se dobilo predmetno jedinjenje (0,368 g. 57%) kao bezbojno ulje, NMR (CDCI3)'b 5.65 - 5,80 (m. 1 H), 5.00 - 5.15 (m, 2 H). 4,40 - 4.50 (m, 2 H), 2,85 - 3,15 (m, 1 H), 2,30 - 2,70 (m. 4 H), 1,90 - 2.20 (m. 3 H), MS (M + 1): 183.9

Korak 2: ( 1S, 2S)- 1- acetamido- 2- alil- N- terc- butif- 4-( nitrometii) cikiopentankarboksamid, izomeri A i B

[0342]Mešani rastvor 2-alil-4-(nitrometil)ciklopentanona, smeša izomera (0,366 g, 2,0 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (1,5 mL) pod azotom je bio tretiran sa amonijum acetatom (0,617 g, 8 mmol) i t-butilizonitrilom (0,68 mL, 6,0 mmol) i onda je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Smeša je bila razređena sa dihlorometanom (20 mL) i dodata je direktno koloni sa silika gelom (-250 cc) i eluirana je sa 7:3 dihlorometanorn/etil acetatom da bi se dobio prvi od dva izomera sa acetamino i alil supstituentima u sin relativnoj geometriji, i to izomer A (122 mg. 19%) kao bela čvrsta materija, pa onda izomer B (195 mg, 30%) kao bela čvrsta materija. Za izomer A: NMR (CDC!3): 5 6,12 (br s, 2 H), 5,65 - 5,80 (m, 1 H), 5,00-5,15 (m, 2 H), 4,53 (d,J = 7Hz, 1 H), 4,35 - 4,50 (m, 1 H), 2,80 - 3,00 (m, 1 H), 2,45 -2,60 (m, 1 H), 2,25 - 2,35 (m, 2 H), 1.90 -2.20 (m, 2 H), 2,00 (s, 3 H), 1,20 - 1,60 (m, 2 H), 1,34 (s, 9 H), MS (M + 1): 326.0 Za izomer B: NMR (CDCI3): 6 6.05 -6.15 (m. 2 H), 5.65 - 5,80 (m, 1 H),

5,00 -5,15 (m, 2 H), 4.43 (d, J=6,5Hz. 2 H). 2,90 - 3,10 (m. 2 H), 2,40 -2,50 (m, 1 H), 2,20 -2,30 (m, 1H), 2,00 (s, 3 H), 1,70-2,00 (m, 4 H), 1.35 (s. 9 H), MS (M + 1): 326,0.

Korak 3; ( 1S, 2S. 4R)- 1- acetamido- N- terc- butil- 4-( nitrometil)- 2-( 3-( 4, 4, 5. 5- tetrametil- 1. 3. 2- dioksaborolan-2- ii) propil) ciklopentankarboksamid ( racemski)

[0343]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor (1 S,2S)-1-acetamido-2-alil-N-terc-butil-4-(nitrometil) cikiopentankarboksamida, izomer A (0,180 g, 0,553 mmol) u anhidrovanom dihlorometanu (5 mL) je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien iridijum dimerom (12 mg, 0,018 mmol) i Diphosom<®>(14 mg, 0,035 mmol) i ohlađen je (-25°C) Posle mešanja tokom 30 min, bio je ukapan pinakolboran (0,123 mL. 0,85 mmol)pomoću šprica, iostavljeno je da se reaktorska temperatura zagreje do temperature ledenog kupatila i postepeno je zagrejana do sobne temperature preko noći (18 h). Bila je dodata voda (3 mL), pa je smeša mešana 20 min, a onda je ekstrahovana sa etil acetatom (25 mL, onda 10mL) Sjedinjen organski rastvor je bio ispran sa vodom i zasićenim vodenim natrijum hloridom (po 20mL), te je osušen (MgS04) ikoncentrovan in vacuo.Rekristalizacija iz acetonitrila (2 kapi) je dala 0,170 g (68%) predmetnog jedinjenja kao belu čvrstu materiju NMR (CDCI3): 5 6,08 (br s. 1 H), 5,92 (br s, 1 H), 4,46(d, J = 5Hz. 2 H), 2,75 -2,90 (m, 1 H), 2,49 (dd, J}= 11Hz, J? = 6Hz, 1H), 2,00 - 2,15 (m, 3 H), 1,95 (s, 3 H), 1,20 - 1,50 (m, 5 H), 1,25 (s, 9 H), 1,17 (s, 12 H), 0,65 -0,85 (m, 2 H), MS (M + 1): 454,5.

Korak 4: ( 1S, 2S, 4R)- 1- amino- 4-( aminometil)- 2-( 3- borpropil) cikiopentankarboksilna kiseiina ( racemska)

[0344] Mešani rastvor (1S,2S.4R)-1-acetamido-N-terc-butil-4-(nitrometil)-2-(3-(4.4.5,5-tetrametil-1,3,2-

dioksaborolan-2-il)propil)ciklopentankarboksamida (racemski), izomer A (0,167g, 0,368 mmol) u etanolu (5 mL) i tetrahidrofuranu (2mL) pod azotom je bio tretiran sa Rejni niklom (0,30 g), pa je prečišćen sa vodonikom, i onda je mešan pod balonom tokom 20 h. Balon je bio prečišćen sa azotom, a smeša je isfiltrirana kroz Celit® (pažljivo, da filterski kolač ne bi ostao suv), a filtrat jekoncentrovan in vacuo.Sirovi proizvod, u boci pod pritiskom je bio rastvoren u 2:1:1 koncentrovanoj HCI Iedeno hladnoj sirćetnoj kiselini: vodi (8 mL), a zatim je mešan 2 h na 60 "C, onda je poklopljen i zatim je mešan 18 h na 130 °C, te je ohlađen na sobnu temperaturu, i otklopljen. Rastvor je bio razređen sa vođom (20 mL), te je ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL) ikoncentrovan in vacuo.Rezultujući ostatak je bio tretiran

sa vodom (20 mL) i koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOVVE/<05>550A-OH smolom (3 g) koja je bila isprana sa metanolom. Smeša je onda mešana 40 min. a zatim je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom. dihlorometanom, vodom, metanolom, i dihlorometanom. Smola je bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 mL) i isfiltrirana je, a sjedinjeni filtrati su bilikoncentrovani in vacuo.Ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u 1.5-2,0 mL vode. Posle prečišćavanja sa HPLC, odgovarajuće frakcije su bilekoncentrovane in vacuo.te su tretirane tri puta sa 1N HCI (10 mL) i koncentrovane. pa su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a onda su rastvorene u vodi (10 mL), zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobilo predmetno jedinjenje (62mg, 53%) kao bela pena. NMR (D20) 6 2,95 - 3,10 (m, 2 H), 2,50 (m. 1 H), 2,10 - 2,30 (m, 4 H), 1,35

- 1,55 (m, 2 H), 1.10 - 1,35 (m, 3 H). 0,65 -0,75 (m, 2 H), MS (M + 1): 245,2; MS (M -H20 + 1)- 227,2

Primer 65: dobijanje (1S,2S,4S)-1-amino-4-(aminometil)-2-(3-borpropi1) ciklopentankarboksilne

kiseline (racemska)

[0345]

[0346](1S,2S4S)-1-amino-4-(aminometil)-2-(3-borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina (racemska) je dobijena na način koji je analogan Primeru 64 izuzev što je bio upotrebljen izomer B u koraku hidroboracije, NMR (D20) 5 2.85-3,15 (m, 2H), 2,45-2,80 (m, 2H). 2,15-2.35 (m, 1H), 1,75-2,00 (m, 2H), 1,10-1,75 (m, 5H), 0,65-0,80 (m, 2H), MS (M+1); 245,2; MS(M-H20+1); 227,1.

Primer 66: dobijanje (1S,2S,4R)-1-amino-4-(2-aminoetil)-2-(3-borpropii)ciklopentankarboksilne

kiseline (racemska)

[0347]

Korak 1: 2~( 3- aiil- 4- oksocik! opentii) acetonitril

[0348]Dok je bio pod azotom, ohlađeni (-70 °C) rastvor trimetilsililacetonitrila (1,83 g, 15 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (180 mL) je bio tretiran ukapavanjem pomoću šprica sa 2,3N n-butillitijumom/heksanom (7,4 mL, 17mmol), a onda je mešan 30 mm, pa je tretiran sa DMPU (9 mL). Posle još 30 min na -70 "C, bio je ukapan rastvor 5-(propen-3-il)ciklopent-2-enorta (1,83 g, 15 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (20 mL), i temperatura je održavana na -70 °C tokom 30 min, pa je zagrejana polako na -35 "C, te je smeša ugašena sa 5% vodenom limunskom kiselinom (90 mL). Reakciona smeša je bila ekstrahovana je sa etil acetatom (500 mL, onda 2 x 75mL), a sjedinjeni organski rastvor je ispran sa vodom, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. i slanim rastvorom (po 150 mL), te je osušen (MgS04) i koncentrovan invacuo.Ostatak je bio rastvoren u acetonitrilu (162 mL), pa je tretiran sa rastvorom kalijum fluorida (1,05 g, 18 mmol) u vodi (18 mL), a zatim je mešan jedan sat. Rastvor je bio koncentrovanu vakuumuda bi se odstranio najveći deo acetonitrila, a zatim je razređen sa vodom (150 mL), i vodena smeša je ekstrahovana sa etrom (150 mL, onda 3 x 75mL). Sjedinjeni organski rastvor ispran je sa vodom, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, i slanim rastvorom (po 100 mL), te je osušen (IvlgSO^), ikoncentrovan in vacuo.Rezidualno ulje je bilo rastvoreno u minimalnom metilen hloridu, pa je stavljeno na kolonu sa silika gelom (-225 cc), i eluirano je sa metilen hloridom da bi se dobilo 1,64 g (67%) 3-cijanometil-5-(propen-3-il)ciklopentanona, smeše izomera, kao bledo žuto ulje NMR (CDCI3): 5 5,65 - 5,80 (m, 1 H), 5,05 - 5,15 (m, 2 H), 2,60 - 2,70 (m, 1 H), 2,40 - 2,60 (m, 5 H), 2,10-2.25 (m. 2 H). 1.95-2.10 (m, 2 H). MS (M + 1): 164,3.

Korak 2: 2-( 9- alil- 1. 4- dioksaspiro[ 4. 4Jnonan- 7- il) acetonitril

[0349]Mešani rastvor 2-{3-alil-4-oksociklopentil)acetonitrila, smeša izomera (0,816 g, 5 mmol) u anhidrovanom toluenu (40 mL) pod azotom je bila tretirana sa etilen glikolom (0,56 mL, 10 mmol) i hidratom toluensulfonske kiseline (40 mg, 0,21 mmol), pa je refluksovan pod Dean-Stark zamkom tokom 8 h,koncentrovan je in vacuo./ ostatak je rastvoren u etru (100 mL). Organski rastvor je bio ispran sa vodom, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, i slanim rastvorom (po 50 mL). te je osušen (MgS04), ikoncentrovan in vacuo.Rezidualno ulje je bilo rastvoreno u minimalnom metilen hloridu, pa je stavljeno na kolonu sa silika gelom (-200 cc) i eluirano je sa 30% etil acetata/heptana da bi se dobilo 0,875 g (84%) 3-cijanometil- 5-(propen-3-H)ciklopentanona, ketala sa etilen glikolom, kao bledo žutog ulja. NMR (CDCI3): 5 5,70 - 5.85 (m. 1 H), 4,95 - 5,10 (m, 2 H), 3,85 - 4,00 (m, 4 H). 2,40 (m, 2 H), 2,25 - 2.35 (m, 2 H), 1.90 - 2,20 (m, 4 H), 1,65 - 1.80 (m, 1 H), 1,60 (m, 1 H), MS (M + 1)-208,0.

Korak 3: terc- butil 2-{ 3- alii- 4- oksociklopentil) etilkarbamat

[0350]Ledom ohlađeni (3 °C) mešani rastvor 2-(9-alil-1,4-dioksaspiro[4.4]nonan-7-il)acetonitrila sa etilen glikolom (0,829 g 4,0 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (30 mL) je bio tretiranpomoćušprica sa 2N litijum aluminijum hidrida/ tetrahidrofurana (6mL, 12mmol), pa je refluksovan tokom 4h (formirao se talog). Smeša je bila ohlađena na ledenom kupatilu i onda je tretirana sukcesivno i pažljivo sa vodom (0,5 mL), 15% vodenim natrijum hidroksidom (0,5 mL). i vodom (1,5 mL), pa je isfiltrirana, i filtrat jekoncentrovan in vacuo.Rezidualno ulje je bilo rastvoreno u metilen hloridu (20 mL), pa je tretirano sa di-tbutildikarbonatom (1,09 g, 5 mmol), a onda je mešano 3h, ikoncentrovano in vacuo.Ostatak je bio rastvoren u 5:1 acetonu/ vodi (30 mL), te je tretiran sa Montmorilonit K-10 glinom (5 g), pa je refluksovan tokom 6 h, a zatim je ohlađen na sobnu temperaturu, i isfiltriran je kroz Celite<*>' Filtrat je biokoncentrovan in vacuo,a ostatak je bio razređen sa vodom (20 mL), i vodeni rastvor je ekstrahovan sa metilen hloridom (2 x 30 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom (25 mL), te je osušen (Na2S04), ikoncentrovan in vacuo.Ostatak je bio rastvoren u minimalnom metilen hloridu, pa je stavljen na kolonu sa silika gelom (~150cc) i eluiran je sa 5% etil acetata/metilen hlorida da bi se dobio 0,51g (48%) predmetnog jedinjenja kao bezbojno ulje. NMR (CDCI3): č 5,60 -5.75 (m, 1 H), 4,90 - 5,05 (m, 2 H), 4.47 (m, 1 H), 3.10 (m, 2 H), 2,40 - 2,50 (m. 1 H), 2,20 - 2,40 (m. 2 H), 2,10 - 2,20 (m, 1 H), 1,90-2,10 (m, 2 H), 1,65- 1,90 (m, 2 H), 1,45- 1,60 <m, 2 H), 1,37 (s, 9 H), MS (M + 1): 268,2; MS (M + Na): 290,1

Korak 4: terc- butil 2-(( 1R, 3S)- 3- acetamido- 4- alil- 3-( terc- butilkarbamoil) ctklopentil)

etilkarbamat

[0351]Mešani rastvor terc-butil 2-(3-alil-4-oksociklopentil)etilkarbamata, smeša izomera (0,50 g, 1,87 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (2 mL) pod azotom je bio tretiran sa amonijum acetatom (0,62 g, 8 mmol) i t-butilizonitrilom (0,68 mL 6,0 mmol) i zatim je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 dana. Smeša je bila razređena sa metilen hloridom (20 mL) i dodata direktno na kolonu sa silika gelom (-250 cc) i eluirana je sa 1:1 etil acetatom/heptanom, a onda sa 2:1 etil acetatom/ heptanom da bi se dobio terc-butil 2-((1R,3S)-3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil) ciklopentil) etilkarbamat (260 mg, 34%) kao bela čvrsta materija. NMR (CDCl3) 5 6,25 (br s, 1 H), 6,00 (br s 1 H), 5.55 - 5.70 (m. 1 H). 4,90 - 5.00 (m, 2 H), 4,48 (m, 1 H), 3,03 (m, 2 H), 2,35 - 2,80 (m, 1 H). 2,27 (m. 1 H), 2,00 - 2,20 (m, 2 H), 1,70 - 2,00 (m, 2 H), 1,93 (s, 3 H). 1,45 - 1,65 (m, 4 H), 1,36 (s, 9 H), 1,27 (s. 9 H), MS (M + 1): 410,3; MS (M + Na): 432,4.

Korak 5: terc- butil 2-(( 1R. 3S)- 3- acetamido- 3-( terc- butilkarbamoil)- 4-( 3-( 4. 4, 5, 5- tetram

dioksaborolan- 2- il) propil) ciklopentil) etilkarbamat

[0352]Dok je bio pod azotom, mešani rastvor terc-butil 2-((1R,3S)-3-acetamido-4-alil-3-(terc-butilkarbamoil) ciklopentiljetilkarbamata (0,25 g. 0,61 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (6 ml_)je bio tretiran sa hloro-1,5-ciklooktadien iridijum dimerom (14,5 mg, 0,021 mmol) i Diphosom® (17 mg, 0,042 mmol) i onda je ohlađen (-25 "C). Posle mešanja tokom 30 min, bio je ukapan pinakolboran (0,134 mL, 0,92 mmol)pomoću šprica,i ostavljeno je da se reaktorska temperatura zagreje do temperature ledenog kupatila i da se postepeno zagreje do sobne temperature preko noći (18 h) Dodata je voda (4 mL), te je smeša mešana 20min, i onda je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mL, onda 20 mL). Sjedinjeni organski rastvor je bio ispran sa vodom i slanim rastvorom (po 20 mL), te je osušen (MgSO+) ikoncentrovan in vacuo.Rekristalizacijom iz acetonitrila (2 kapi) je dobijeno 0,136g predmetnog jedinjenja kao bele čvrste materije. Hromatografijom koncentrovane matične tečnosti na silika gelu (eluirano sa 70:30 etil acetatom/heptanom) dobijeno je dodatnih 0,102 g predmetnog jedinjenja. Ukupni prinos je bio 0.238 g (73%) NMR (CDCl3): 5 5.95-6,10 (m, 2 H), 4,50 (m, 1 H), 3,03 (m, 2 H), 2,00 -2,85 (m, 4 H), 1,92 (s, 3 H), 1,00 - 1,70 (m, 8 H). 1,37 (s, 9 H), 1,25 (s, 9 H), 1,17 (s, 12 H), 0,60 - 0,75 (m. 2 H), MS (M + 1): 538,1; MS (M+Na): 560,4.

Korak 6: ( 1S, 2S, 4R)- 1- amino- 4-( 2- aminoetil)- 2-( 3- borpropil) ciklopentankarboksilna kiselina

[0353] Terc-butil2-((1R,3S)-3-acetamido-3-(terc-butilkarbamoil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1.3,2-dioksaborolan-2-il)propil)cikiopentil)etilkarbamat (0,226 g, 0,42 mmol), u boci pod pritiskom, je bio rastvoren u 2:1:1 koncentrovanoj HCLIedeno hladnoj sirćetnoj kiselini vodi (8 mL), a zatim je mešan 2 h na 60 "C, pa je poklopljen i zatim je mešan 18 h na 130 °C, te je ohlađen na sobnu temperaturu, i otklopljen Rastvor je bio razređen sa vodom (20 mL), pa je ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL) ikoncentrovan in vacuoRezultujući ostatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i potom koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, a onda je rastvoren u vodi (40 mL), pa je tretiran sa DOWEX<®>550A-OH smolom (3 g), koja je bila isprana sa metanolom. Smeša je onda bila mešana 40 min, a zatim je isfiltrirana i smola je isprana sukcesivno sa vodom, metanolom, dihlorometanom, vodom, metanolom, i dihlorometanom. Smola je bila mešana četiri puta sa 1N HCI (15 mL) i isfiltrirana je, a sjedinjeni filtrati su bilikoncentrovani in vacuoOstatak je bio tretiran sa vodom (20 mL) i koncentrovan tri puta da bi se odstranio višak HCI, pa je rastvoren u 1,5-2,0 mL vode. Posle prečišćavanja sa HPLC, odgovarajuće frakcije su bilekoncentrovane in vacuo,te su tretirane tri puta sa 1N HCI (10 mL) i koncentrovane, pa su tretirane tri puta sa vodom (10 mL) i koncentrovane, a onda su rastvorene u vodi (10 mL), zamrznute, i liofilizovane preko noći da bi se dobilo predmetno jedinjenje (85mg, 61%) kao bela pena. NMR (D20) 5 2.85 - 3,00 (m, 2 H), 2,64 (br s, 1 H), 2,35 - 2,60 (m, 1 H), 2,05 - 2,25 (m, 2 H), 1.65 - 1,85 (m, 3 H), 1,35 - 1,55 (m, 2 H). 1,10 - 1,30 (m. 3 H), 0,65 -0,80 (m, 2 H), MS (M + 1): 259,0; MS (M - H20 + 1): 241,2.

METODI I PRIMENE

[0354]Jedinjenja prema pronalasku su korisna za inhibiciju ekspresije ili aktivnosti arginaze I, arginaze II ili kombinacije ovih enzima Enzimi familije arginaza igraju važnu ulogu u regulaciji fizioloških nivoa L-arginina, prekursora signalnog molekula azotnog oksida (NO), kao i u regulaciji nivoa izvesnih poliamina koji su važni fiziološki prenosnici signala,

[0355]Preciznije, pronalaskom su realizovana jedinjenja Formule I za primenu u inhibiciji arginaze I, arginaze II, ili njihove kombinacije u ćeliji koja sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa najmanje jednim jedinjenjem Formule I, ili njegovom kompozicijom koja je ovde opisana. U nekim primerima izvođenja, pronalaskom su realizovana jedinjenja za primenu u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja povezanog sa izražavanjem ili aktivnosti arginaze I, arginaze II, ili njihove kombinacije kod subjekta.

[0356]Na primer, bolest ili stanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od srčane bolesti, hipertenzije, seksualnih poremećaja, želudačnih poremećaja, autoimunih poremećaja, parazitarnih infekcija, pulmonarnih poremećaja, poremećaja relaksacije glatkih mišića i hemolitičkih poremećaja.

[0357]Preciznije, hipertenzija obuhvata sistemsku hipertenziju. pulmonarnu arterijsku hipertenziju (PAH), i pulmonarnu arterijsku hipertenziju velike visine.

[0358]Primeri seksualnih poremećaja su bolesti ili stanja izabrani iz grupe koja se sastoji od Peuronove bolesti i erektilne disfunkcije (ED)

[0359]U jednom primeru izvođenja inhibitor arginaze u skladu sa predmetnim pronalaskom je podesan za lečenje pulmonarnog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od hemijski-indukovane plućne fibroze, idiopatske pulmonarne fibroze, cistične fibroze, hronične opstruktivne plućne bolesti (COPD).

[0360]Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su takođe korisna za lečenje gastrointestinalnih poremećaja, kao što su bolesti ili stanja koja su izabrana iz grupe koja se sastoji od poremećaja gastrointestinalnog motiliteta, kancera želuca, poremećaja smanjenog hepatičkog protoka krvi, zapaljenske bolesti creva, Kronove bolesti, ulcerativnog kolitisa, i čireva na želucu

[0361]Transport organa povećava rizik od ishemijske reperfuzione (IR) povrede, kao što je IR jetre, IR bubrega, i IR miokarda Jedinjenja Formule I prema predmetnom pronalasku su korisna u zaštiti organa tokom transporta organa

[0362]Prema jednom drugom primeru izvođenja, inhibitori arginaze prema predmetnom pronalasku se upotrebljavaju za lečenje hemolitičkih poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od paroksismalne nokturnalne hemoglobinurije (PNH), bolesti srpastih ćelija, talasemija, nasledne sferocitoze i stomatocitoze, mikroangiopatskih hemolitičkih anemija, deficijencije piruvat kinaze, reakcije usled nepodudarnosti ABO pri transfuziji, paroksismalne hladne hemoglobinurije, ozbiljne idiopatske autoimune hemolitičke anemije, anemije indukovane infekcijom, kardiopulmonarnog bajpasa. anemije indukovane mehaničkim srčanim zaliskom i hemijski indukovane anemije Pored toga ovde opisana jedinjenja su korisna za lečenje malarije.

[0363]Jedinjenja prema pronalasku su korisna u lečenju autoimumh bolesti izabranih iz grupe koja se sastoji od encefalomijelitisa. multiple skleroze, anti-fosfolipidnog sindroma 1, autoimune hemolitičke anemije, hronične zapaljenske demijelinacione poliradikuloneuropatije. dermatitis herpetiformisa, dermatomiozitisa, mijastenije gravis, pemfigusa, reumatoidnog artritisa, sindroma ukrućenosti osobe, tipa 1 dijabetesa i ankilozirajućeg spondilitisa Prema jednom drugom primeru izvođenja, jedinjenja Formule I su korisna za lečenje imunih poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od imune-reakcije, disfunkcije T-ćelija, kao što je disfunkcija mijeloidno izvedenih supresorskih ćelija (MDSC) posredovana T-ćelijama, virusa humane imunodeficijencije (HIV) i autoimunog encefalomijelitisa,

[0364]Drugi primeri bolesnih stanja za koja su ovde opisana jedinjenja kandidati za terapeutike su Afrička bolest spavanja, Šagaova bolest poremećaji relaksacije glatkih mišića na primer. poremećaji glatkog mišića izabranog iz grupe koja se sastoji od poremećaja gastrointestinalnog glatkog mišića, glatkog mišića analnog sfinktera, mišića sfinktera ezofagusa. korpus kavernozuma, Odijevog sfinktera, arterijskog glatkog mišića, srčanog glatkog mišića, pulmonarnog glatkog mišića, glatkog mišića bubrega, glatkog mišića materice, vaginalnog glatkog mišića, cervikalnog glatkog mišića, glatkog mišića placente, i okularnog glatkog mišića.

[0365]Povećani nivoi arginaze kod izvesnih pacijenata sa kancerom ukazuju na terapeutsku ulogu inhibitora arginaze prema pronalasku u lečenju izvesnih kancera, na primer, karcinoma bubrežnih ćelija, kancera prostate, kolorektalnog kancera, kancera dojke, kancera kože, kancera pluća, kancera jajnika, kancera želuca.

[0366]Prvenstveno su jedinjenja prema pronalasku posebno korisna u lečenju stanja ili poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od artritisa, infarkta miokarda i ateroskleroze, bubrežne bolesti, astme, zapaljenja, psorijaze, lajšmanioze, bolesti srpastih ćelija (SCD), neurodegenerativih bolesti, zarastanja rana, kao što je zarastanje inficiranih i neinficiranih rana, hepatitis B virusa (HBV), infekcije saH. pylori,fibroznih bolesti, kao što je cistična fibroza, kandidijaze, periodontalne bolesti, keloida, ađenotonzilarne bolesti, cerebralnog vazospazma, i Goodpastureovog sindroma

[0367]Precizniji opisi bolesti i stanja slede u nastavku,

Erektilna disfunkcija

[0368]Opservacije da postoje razlike u aktivnosti arginaze u penisu mladih miševa u odnosu na starije miševe dovode do zaključka da arginaza može imati ulogu u erektilnoj disfunkciji (ED). U ovom kontekstu, Champion et. al., (Am. J. Phvsiol Heart Circ Phvsiol. 292:340-351. (2006) i Biochem. i Biophvs. Research Communications, 283:923-27, (2001)), su uočili povećanje nivoa ekspresije iRNK i proteina arginaze kod starijih miševa zajedno sa redukcijom aktivnosti konstitutivno aktivnog NOS.

[0369]Azotni oksid je uključen u neadrenergijsku, neholinergijsku neurotransmisiju koja dovodi do relaksacije glatkih mišića u korpus kavernozumu koja omogućava penisnu erekciju (New England Journal of Medicine, 326. (1992)). Zbog toga se erektilna disfunkcija može često tretirati podizanjem nivoa azotnog oksida (NO) u penisnom tkivu Takvo podizanje nivoa azotnog oksida (NO) u tkivu može se ostvariti inhibiranjem aktivnosti arginaze u penisnom tkivu ostarelog subjekta. Drugačije objašnjeno, smatra se da arginaza iscrpljuje zalihu slobodnog L-arginina koji je na raspolaganju NOS u ćelijama, što rezultuje nižim nivoima azotnog oksida (NO) i erektilnom disfunkcijom. Vidi Chnstianson et. al., Acc.

Chem. Res , 38:191-201, (2005), i Nature Structural Bio!, 6(11) 1043-1047, (1999). Zbog toga, inhibitori arginaze mogu igrati ulogu u lečenju erektilne disfunkcije

[0370]Pored njegove uloge u muškoj seksualnoj funkciji. Chnstianson et al., (Biochemistrv, 42:8445-51, (2003), su sugerisali ulogu ARG II u pobuđivanju ženske seksualnosti Mehanizam koji se nalazi u osnovi toga da inhibicija ARGII podstiče libido, međutim, izgleda da je to ista ona koja stimuliše muški libido. To znači da inhibicija ARGII povećava nivoe slobodnog L-arginina koji se nalazi na raspolaganju kao supstrat za NOS. Ovo izaziva više nivoe NO u klitorisnom korpus kavernozumu i shdno tome dovodi do povećanog seksualnog libida.

Pulmonarna hipertenzija

[0371]Sugerisano je da su promene u metabolizmu arginina uključene u patogenezu pulmonarne hipertenzije (Xu et al., FASEB J., 18:1746-48, 2004) Ova sugestija je bazirana delimično na otkriću da su ekspresija arginaze II i aktivnosti arginaze značajno povećane u endotelijalnim ćelijama pulmonarne arterije dobijenim iz plućnih eksplantata pacijenata sa klasom I pulmonarne hipertenzije.

[0372]Pored toga, sekundarna pulmonarna hipertenzija se pojavljuje kao jedan od vodećih uzroka mortaliteta i morbiditeta kod pacijenata koji boluju od hemolitičkih anemija, kao što su talasemija i bolest srpastih ćelija. Osnovni uzrok za sekundarnu pulmonarnu hipertenziju je poremećena bioraspoloživost azotnog oksida zbog oslobađanja arginaze koja sledi posle hemolize koja smanjuje zalihu slobodnog arginina koja je potrebna za sintezu azotnog oksida (NO). Shodno tome, inhibicija aktivnosti arginaze može obezbediti potencijalni terapeutski put za lečenje pulmonarne hipertenzije.

Hipertenzija

[0373]Xu et al. (FASEB 2004, 14, 1746-8), ukazuju na fundamentalnu ulogu arginaze II u regulaciji krvnog pritiska. U ovom kontekstu, visoki nivoi vaskularne arginaze su u korelaciji sa istovremenom redukcijom vaskulamog azotnog oksida (NO) kod životinja sa hipertenzijom. Na primer, prekomerna regulacija aktivnosti arginaze prethodi porastu krvnog pritiska kod pacova koji imaju genetsku predispoziciju za hipertenziju (tj. spontano hipertenzivni pacovi), ali administracija anti-hipertenzivnog agensa hidralazina je snižavala krvni pritisak uz smanjenje nivoa ekspresija vaskularne arginaze, što ukazuje na jaku korelaciju između aktivnosti arginaze i krvnog pritiska (Berthelot et al. Life Sciences, 80:1128-34, (2008). Slična administracija poznatog inhibitora arginaze N<u->hidroksi-nor-L-arginina (nor-NOHA) je snižavala krvni pritisak i poboljšavala je vaskularnu reakciju rezistentnih sudova na protok krvi i pritisak kod spontano hipertenzivnih životinja, što ukazuje na inhibitore arginaze kao kandidate za terapeutike za lečenje hipertenzije (Demougeot et al., (J Hvpertension, 26:1110-18. (2008).

[0374]Arginaza takođe igra ulogu u refleksnoj kutanoj hipertenziji smanjenjem ćelijskih nivoa azotnog oksida (NO). Azotni oksid izaziva vazodilataciju, a nivoi azotnog oksida (NO) su normalno povišeni ili sniženi da bi se održao krvni pritisak na fiziološki prihvatljivim nivoima. Kenny et al., (J. of Physiology 581 (2007) 863-872), su postavili hipotezu da refleksna vazodilatacija kod hipertenzivnih subjekata može da oslabi inhibiciju arginaze, što ukazuje na ulogu inhibitora arginaze za lečenje hipertenzije.

Astma

[0375]Aktivnost arginaze je takođe povezana sa hiperreaktivnošću vazdušnih puteva kod astme. Na primer, arginaza I je prekomerno regulisana kod humanih astmatičara i kod miševa koji boluju od akutne i hronične astme, dok nivoi arginaze II i NOS izoformi ostaju nepromenjeni (Scott et al.. (Am. J. Phvsiol. Lung Cell Mol Phvsiol. 296.911-920 (2009)). Pored toga, metaholinom indukovana reaktivnost centralnih vazdušnih puteva u mišijem hroničnom modelu je oslabljena posle administracije inhibitora arginaze S-(2-boroetil)-L-cisteina. Sličnost između profila ekspresije ARG I kod ljudi i miševa koji imaju hroničnu astmu ukazuje da su jedinjenja koja mogu da inhibiraju aktivnost arginaze kandidati za terapeutike za lečenje astme.

[0376]Druge linij dokaza otkrivaju dalje korelacije između povećane aktivnosti arginaze u astmatičnom tkivu pluća i progresiji bolesti, kao što je prekomerna regulacija gena vezanih za metabolizam katjonskih amino kiselina, uključujući Arginazu I i II kod miševa koji imaju astmu (Rothenberg et al.. (J. Clin. Invest., 111 1863-74 (2003), i Meurs et. al., (ExpertOpin. Investig Drugs, 14(10:12211231,

(2005)).

[0377]Dalje, nivoi svih amino kiselina su niži u plazmi astmatičara, ali su nivoi arginina u plazmi znatno niži u poređenju sa onima kod normalnog subjekta (Morris et al., (Am. J Respir. Cnt Care Med.,

170:148-154, (2004)). Shodno tome, aktivnost arginaze je značajno povećana u plazmi astmatičara, pri čemu povećani nivoi aktivnosti arginaze mogu doprineti manjoj bioraspoloživosti arginina iz plazme što dovodi do deficijencije azotnog oksida (NO), koji je odgovoran za podsticanje hiperreaktivnih vazdušnih puteva kod astmatičara.

Zapaljenje

[0378]Aktivnost arginaze je takođe povezana sa autoimunim zapaljenjem (Chen et al., Immunologv, 110:141-148, (2003)). Autori su identifikovali prekomernu regulaciju u nivoima ekspresije ARG I gena u mišijim spinalnim ćelijama kod životinja koje su bile podvrgnute eksperimentalnom autoimunom encefalomijelitisu (EAE). Međutim, administracija inhibitora arginaze amino-6-boroheksanske kiseline (ABH), je dovela do toga da se kod životinja razvije mnogo blaži oblik EAE nego kod kontrolnih životinja. Ovi rezultati ukazuju da inhibitori arginaze imaju terapeutsku ulogu u lečenju autoimunog encefalomijelitisa

[0379]Pored toga, Horowitz et al., (American J. Phvsiol Gastrointestinal Liver Phvsiol., 292:G1323-36,

(2007)), sugerišu ulogu enzima arginaze u vaskularnoj patofiziologiji. Na primer, ovi autori ukazuju na gubitak produkcije azotnog oksida (NO) kod hroničnog zapaljenja krvnih sudova creva kod pacijenata koji boluju od bolesti iritabilnih creva (IBD), Kronove bolesti i ulcerativnog kolitisa. Gubitak produkcije azotnog oksida (NO) je u korelaciji sa prekomernom regulacijom ekspresije i aktivnosti arginaze koje smanjuju nivoe arginina koji sprečava da se sintaza azotnog oksida (NOS), sintetiše od sintetizujućeg azotnog oksida (NO). Aktivnost inhibitora arginaze zato može da bude kandidat za terapeutik za lečenje vaskularne patofiziologije.

Ishemijska reperfuzija

[0380]Takođe je sugerisano da inhibicija arginaze igra kardioprotektivnu ulogu tokom ishemijske reperfuzije. Preciznije, inhibicija arginaze štiti protiv infarkta miokarda mehanizmom koji može biti zavisan od NOS aktivnosti i sledstvene bioraspoloživosti azotnog oksida (NO) (Pernow et al., (Cardiovascular Research, 85:147-154 (2010)).

Infarkt miokarda i arteroskleroza

[0381]Polimorfizam arginaze I je povezan sa infarktom miokarda zajedno sa povećanim rizikom od razvoja intima media debljine karotidne arterije, za koji se smatra daje pouzdan indikator arteroskleroze. kao i drugih koronarnih arterijskih bolesti (Brousseau et al.. (J Med Genetics, 44:526-531, (2007)). Povećana aktivnost arginaze povećava nivoe ornitina koji je biohemijski uključen u stimulaciju obrazovanja matrice i celularnih komponenata arteroskleroznog plaka.Id.Shodno tome, inhibitori arginaze mogu služiti kao kandidati za terapeutike za lečenje arteroskleroze. Berkowitz et al., (Circulation Res. 102, (2008)), ukazuju na ulogu ARGII u obrazovanju plaka i arteroskleroze Oksidacija LDLP koja prati obrazovanje plaka povećava aktivnost arginaze i smanjuje nivoe azotnog oksida (NO) u endotelijalnim ćelijama. Naročito su nivoi ARGII povećani kod miševa sa arterosklerozom, što ukazuje na ulogu inhibitora arginaze kao kandidata za terapeutike za lečenje arteroskleroze.

[0382]Dodatno tome, studije od strane Ming et al., (Current Hvpertension Reports.. 54:54-59, (2006)), ukazuju da prekomerna regulacija arginaze pre nego disfunkcija endotelijalnog azotnog oksida (NO) igra važnu ulogu u kardiovaskularnim poremećajima, uključujući arterosklerozu Da je arginaza uključena u kardivaskularne bolesti dalje je podržano opservacijom da je aktivnost ARG I i ARG II neregulisana kod srčanog miokarda, koji dalje negativno deluje na NOS aktivnost i kontraktilnost miokarda. (Vidi, Margulies et. al., Am. J. Phvsiol. Heart Circ. Phvsiol., 290:1756-62, (2006)).

Imuna reakcija

[0383]Putanja arginin/azotni oksid (NO) takođe može igrati ulogu u imunoj reakciji, kao što je posle transplantacije organa. Na primer, smatra se da reperfuzija transplantata ortotopnog grafta jetre izaziva značajno povećanje nivoa ornitina zbog prekomerne regulacije aktivnosti arginaze u graftu (Tsikas et al., (Azotni oksid, 20:61-67, (2009)}. Povećani nivoi hidrolitičkih i proteolitičkih enzima u graftu mogu rezultovati manje povoljnim ishodom za graftovani organ. Shodno tome. inhibicija enzima arginaze može predstavljati alternativni terapeutski pristup za poboljšanje ishoda transplantacije

Psorijaza

[0384]Ukazano je da arginaza igra ulogu u patogenezi psorijaze. Na primer, ARG I je veoma izražen u hiperproliferativnoj psorijazi, i u stvari je odgovoran za preslabu regulaciju azotnog oksida (NO) inhibitora proliferacije ćelija koji se takmiči za zajednički supstrat L-arginin, kao što su izvestili D Bruch-Gerharzetal., American Journal of Pathologv 162(1) (2003) 203-211. Skoriji radovi od strane Abevakirthi et al. (British J. Dermatologv, (2010)), i Berkovvitz et al, (VVO/2007/005620) sugerišu pronalaženje niskih nivoa azotnog oksida (NO) kod psorijatičmh keratinocita. Abeyakirthi efat,su utvrdili da su psorijatični keratinociti bili slabo izdiferencirani i hiperproliferativni. Slaba diferencijacija je pripisana niskim nivoima azotnog oksida (NO), a ne slaboj ekspresiji NOS. već prekomernoj ekspresiji arginaze koja se takmiči sa NOS za supstrat L-argmin. Shodno tome. inhibicija arginaze može obezbediti terapeutsko olakšanje kod psorijaze.

Zarastanje rana

[0385]Pod normalnim fiziološkim uslovima, azotni oksid (NO) igra važnu ulogu u podsticanju zarastanja rana. Na primer. Hulst etal., (Azotni Oksid, 21:175-183. (2009)), su proučavali ulogu ARG I i ARG II u zarastanju rana. Neposredno posle povrede, poželjno je da se podignu nivoi azotnog oksida (NO) u tkivu da bi se podstakla angiogeneza i proliferacija ćelija koje su važne za zarastanje Inhibitori arginaze zato mogu naći primenu kao terapeutici za lečenje rana, pošto bi takva jedinjenja podigla nivoe azotnog oksida (NO) u tkivu. Sledeća podrška za primenu inhibitora arginaze kao kandidata za terapeutike za zarastanje rana je obezbeđena od strane South et al. (Experimental Dermatology, 29:664-668 (2004)), koji su utvrdili 5-struko povećanje Arginaze I kod hroničnih rana, kao što su erozije kože i plikovi

Cistična fibroza

[0386]Cistična fibroza (CF) je multisistemski poremećaj izazvan mutacijama na genu regulatoru transmembranske konduktanse cistične fibroze (CFTR). Zajednički simptomi CF su uporna pulmonarna infekcija, teškoće pri disanju, pankreasna insuficijencija i povećani nivoi hlorida u znoju. CF može biti fatalna ako se ne leči, sa plućnim bolestima koje nastaju usled formiranja mukusa i smanjenja mukocilijarnog klirensa, koji predstavljaju vodeći uzrok morbiditeta i mortaliteta

[0387]Smatra se da pacijenti sa cističnom fibrozom (CF) imaju povećanu aktivnost arginaze u plazmi i sputumu, sa pratećim smanjenjem nivoa plazma 1-arginina (H. Grasemann etal., Am. J Respir. Crit. Care Med. 172(12) (2005) 1523-1528. Međutim, povećana aktivnost arginaze rezultuje sa manjim fiziološkim nivoima azotnog oksida (NO) što može izazvati smanjenje pulmonarne funkcije opstrukcijom vazdušnih puteva kod pacijenata koji boluju od cistične fibroze (CF).

[0388]Oštećena električnim poljem indukovana stimulacija relaksacije glatkih mišića u vazdušnim putevima mišijeg modela CF i administracija 1-arginina i NO preokreću ovaj efekat, kao što su predložili M. Mhanna et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 24(5) (200)1 621-626. Graesmann et al. su utvrdili da postoji pozitivna korelacija između pulmonarne funkcije i izdahnutog NO i koncentracija NO metabolita u sputumu CF pacijenata (Grasemann et al. 1997, 1998).

[0389]Posmatrani zajedno, ovi rezultati ukazuju da povećanje aktivnosti arginaze kod CF doprinosi NO deficijenciji i pulmonarnoj opstrukciji kod CF ograničavanjem raspoloživosti 1-arginina za NOS. Shodno tome, inhibitori aktivnosti arginaze su kandidati za terapeutike za lečenje cistične fibroze (CF)

Zaštita organa

[0390]Sleđeća terapeutska primena za jedinjenja prema predmetnom pronalasku je zaštita organa tokom transporta od donora do mesta gde oni treba da budu transplantirani primaocu. Ishemijska reperfuziona povreda (IR) zbog izlaganja organa za transplantaciju periodu tople ishemije (vreme od donora do ispiranja sa medijumom za čuvanje), i hladna ishemija (hipotermna prezervacija) se često uočavaju kod pacijenata koji se podvrgavaju transplantacionoj hirurgiji Ishemijska reperfuziona povreda (IR) i prateća primarna disfunkcija grafta i/ili akutno ili hronično odbacivanje nastaju usled izmene ćelijske aktivnosti putanje L-Arginina/NO

[0391]Sugerisanoje da se arginaza 1 i arginaza 2 oslobađaju iz apoptičkih endotelijalnih ćelija i bubrežnih ćelija u okviru prva 24 sata od uklanjanja organa iz tela. Da bi se suprotstavilo oslobođenoj arginazi, medijumu za čuvanje se dodaje L-Arginin. Rezultati sa transplantima psećih bubrega ukazuju da dodavanje L-arginina smanjuje pojavu i ozbiljnost ishemije. što rezultuje post-transplantatom sa nižim nivoima MDA posle 1 sata, i smanjenjem nivoa BUN & serumskog kreatinina tokom prvih 72 h. Vidi Erkasap, 2000.

[0392]Slični rezultati su bili uočeni za pseće plućne graftove tokom 24-časovnog perioda kada su pluća bila čuvana u rastvoru sa Univerziteta Viskonsin, kome je bio dodat L-Arginin Yen etal. su uočili da dodavanje L-arginina medijumu za čuvanje povećava pulmonarnu endotelijalnu zaštitu i da smanjuje pojavu ishemije u poređenju sa kontrolom koja je bila čuvana u medijumu koji nije sadržao L-arginin (Yen Chu, 2004).

[0393]Koch et al. tvrde da su poboljšane kontraktilnost miokarda i relaksacija srčanog mišića kod pacova posle transplantacije kada su srca bila čuvana u HTK rastvoru koji ima L-Arginin i N-alfa-acetil-histidin (Koch, 2009)

[0394]Zbog toga inhibitor arginaze, može biti kandidat za terapeutik za sprečavanje i/ili smanjenje pojave i rizika od ishemijske reperfuzione povrede na organu sinergističkim povećanjem zaštitnog efekta medijuma za čuvanje. Imajući u vidu mali broj raspoloživih organa koji su podesni za transplantaciju i gubitak i povredu organa zbog nastanka ishemije, inhibitori arginaze prema predmetnom pronalasku mogu imati primenu kao terapeutici za čuvanje organa, povećanje raspoloživosti organa smanjenjem količine ishemijskih reperfuzionih povreda tokom transporta organa.

Lajšmanijaza

[0395]Lajšmanijaza je izazvana protozoom i manifestuje se kao kutana lajšmanijaza (tj kožna infekcija koja izaziva hipo-pigmentisane nodule) i visceralna lajšmanijaza (ozbiljnije utiče na unutrašnje organe). Smatra se da arginaza igra ulogu u progresiji bolesti, pošto se parazit oslanja na arginazu u sintezi celularnih poliamina koji su esencijalni za patogenezu Zato bi inhibicija arginaze redukovala celularno parazitarno opterećenje i podstakla povećanje nivoa azotnog oksida (NO) povećavajući klirens parazita. Vidi Liew FY et al. Eur J Immunol 21 (1991)2489, Iniesta V et al Parasite Immunol. 24 (2002) 113-118, i Kane MM et al J. Immunol 166 (2001) 1141-1147. Jedinjenja Formule I se zato mogu primenjivati kao terapeutici za lečenje lajšmanijaze.

Mijeloidne izvedene supresorske ćelije (MDSC)

[0396]MDSC's su potentni imuni modulaton koji ograničavaju imune reakcije preko nekoliko putanja, kao što su, na primer, deplecija L-arginina usled oslobađanja arginaze 1 u mikrookruženje (Rodriguez 2009 Cancer Res), MHC ograničena supresija (Nagaraj 2007 Nat Med) indukcija T regulatornih ćelija (Serafini 2008 Cancer Res), i produkcija IL10 (Rodrigues 2010 Neuro Oncol) (Sinha 2007 J Immunol).

[0397]Smatra se da je razvoj tumora praćen sa povećanjem broja MDSC's bilo periferno ili infiltnranih unutar tumora Vidi Almand 2001 J immunol i Gabrilovich 2004 Nat Rev Immunol Tretiranje miševa koji nose tumor sa dobro poznatim hemoterapeuticima, kao što su gemcitabin i 5-Fluorouracil eliminiše MDSC imunosupresiju i rezultuje sa odlaganjem rasta tumora Vidi Le 2009 Int Immunopharmacol i Vincent 2010 Cancer Res., respektivno Pored toga, inhibicija arginazom 1 pojačava antitumorski imunitet redukcijom MDSC funkcije. Shodno tome. inhibitori arginaze, kao što su jedinjenja prema predmetnom pronalasku redukuju ili odlažu rast tumora i mogu se primeniti u kombinaciji sa dobro poznatim anti-kancerskim agensima u lečenju kancera.

Helikobakter pilori( H. pylori)

[0398]Helikobakter pilori( H. pylori) ieGram-negativna bakterija koja kolonizuje mukozu humanog želuca. Kolonizacija bakterija može dovesti do akutnog ili hroničnog gastritisa i značajno je povezana sa bolešću čira na želucu i kancerom želuca Opservacija da dodavanje L-arginina ko-kulturiH. pylori imakrofaga povećava ubijanjeH. pyloriposredovano azotnim oksidom (NO) (Chaturvedi 2007). podržava hipotezu da se bakterijska arginaza takmiči sa arginazom makrofaga za slobodni arginin koji je potreban za sintezu azotnog oksida (NO). Vidi Gobert AP 2001. L-arginin je potreban za aktivaciju T-ćelija i za brzi klirens bakterija iz inficiranih ćelija Deplecijom zaliha slobodnog L-arginina in vivo,H. pyloriredukuje argininom indukovanu CD3zeta ekspresiju na T-ćelijama i sprečava aktivaciju i proliferaciju T-ćelija. Vidi Zabaleta J, 2004

[0399]Međutim, inhibicija bakterijske arginaze uz korišćenje poznatog inhibitora NOHA, ponovo uspostavlja CD3 ekspresiju na T-ćelijama (Zabaleta J 2004), i povećava produkciju NO sa makrofagima, a shodno tome, stimuliše makrofagima posredovani klirens bakterija iz inficiranih ćelija. Vidi Chaturvedi 2007

[0400]Pored toga. Lewis et al.. su sugerisali ulogu arginaze II uH pyioninfekciji Na primer, ovi autori ukazuju da su argll-/- primarni makrofagi inkubirani sa ekstraktima H pylori ispoljili povećanu produkciju NO, a shodno tome i povećano ( -15%) sa NO-posredovano ubijanje bakterijskih ćelija (Lewis ND 2010). Inhibitori aktivnosti arginaze, zbog toga mogu biti kandidati za terapeutike za lečenje vaskularne patofiziologije. Inhibitori aktivnosti arginaze, zbog toga mogu biti kandidati za terapeutike za lečenjeH. py/ornnfekcijai za lečenje ćireva na želucu, čireva na dvanaestopalačnom crevu i kancera

Bolest srpastih ćelija (SCD)

[0401]Bolest srpastih ćelija (SCD), ili anemija srpastih ćelija, ili drepanocitoza, je genetički krvni poremećaj, a karakterisana je sa crvenim krvnim zrncima koja imaju abnormalan, kruti, srpasti oblik Srpasti oblik smanjuje fleksibilnost ćelija i povećava rizik od komplikacija Povećanje koncentracije reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) u cirkulaciji izaziva slepljivanje krvnih ćelija i potrošnju NO koja dovodi do loše vazodilatacije ili nesposobnosti krvnih sudova za vazodilataciju Nesposobnost za vazodilataciju zajedno sa povećanim slepljivanjem krvnih ćelija kod SCD rezultuje vazo-okluzivnom krizom i bolom

[0402]Niski nivoi L-arginina u plazmi se normalno detektuju kod pacijenata sa SCD (Morris 2005 JAMA). Prema ovim autorima. Iiza crvenih krvnih ćelija (RBC's) kod pacijenata koji boluju od SCD izaziva oslobađanje arginaze i sledstveno snižavanje fizioloških nivoa L-arginina Ovaj niz bioloških događaja snižava fiziološke koncentracije azotnog oksida (NO), signalnog molekula koji igra ulogu u vazodilataciji. Drugi biološki događaji takođe mogu ograničiti bioraspoloživost NO Ovi obuhvataju, na primer, dekuplovanje sintaze azotnog oksida (NOS), i sledestveno smanjenje fizioloških nivoa NO, kao i reakciju superoksida( O' 2)reaktivnih vrsta kiseonika sa NO da bi se dobio zadnje pomenuti kao ONOO.

[0403]Na osnovu ovih opservacija, inhibitori arginaze. a naročito inhibitori arginaze I su predloženi od strane aktuelnih pronalazača kao kandidati za terapeutike za pacijente sa bolešću srpastih ćelija Kao što je gore navedeno. SCD izaziva dekuplovanje eNOS zbog malih fizioloških nivoa L-arginina. Međutim, inhibicija arginaze, koja je prisutna u krvnoj cirkulaciji, može izazvati ovaj problem povećanjem fizioloških nivoa L-arginina, supstrata endotelijalne sintaze azotnog oksida (eNOS). Ova sekvenca događaja, što je važno, je predložena od strane aktuelnih pronalazača, da bi povećala endotelijalnu funkciju i da bi olakšala vazokonstnkciju povezanu sa SCD

Virus humane imunodeficijencije (HIV)

[0404]HIV je izazvan sa virusom koji inficira CD4+ pomoćničke T ćelije i izaziva ozbiljnu limfopeniju koja dovodi do predispozicije inficiranih pojedinaca prema oportunističkoj infekciji Mada se anti-retrovirusna terapija (ART) opsežno pnmenjuje za borbu protiv HIV infekcije, široka primena anti-retrovirusnih lekova je rezultovala genensanjem rezistentnih sojeva HIV.

[0405]Postoji korelacija između aktivnosti arginaze kod pacijenata koji boluju od HIV i ozbiljnosti HIV bolesti. Ovo povećava aktivnost arginaze koja je u korelaciji sa povećanim titrima virusa kod HIV pacijenata. Ovi pacijenti takođe ispoljavaju smanjenje nivoa serumskog arginina, kao i smanjene nivoe CD4+/CD8+ ćelija.

[0406]Posmatrane zajedno, ove opservacije sugerišu ulogu inhibitora arginaze, kao što su jedinjenja Formule I kao kandidate za terapeutike u lečenju HIV infekcije.

Hronični hepatitis Bvirus(HBV)

[0407]Hronična hepatitis B infekcija je virusna bolest koja se prenosi kontaktom sa infektivnim telesnim fluidima. Hronične HBV infekcije su karaktensane zapaljenjem jetre i žuticom, a ako se ostavi nelečenom, onda može izazvati cirozu jetre koja može napredovati do nastanka hepatocelularnih karcinoma. Međutim, anti-virusni lekovi koji se sada koriste imaju malu efikasnost protiv hroničnih HBV infekcija. Serum i homogenati jetre pacijenata sa hroničnim HBV infekcijama ispoljavaju smanjene nivoe arginina i povećanu aktivnost arginaze Za inficirane pacijente, pored toga, povećana aktivnost arginaze je u korelaciji sa oštećenom reakcijom citotoksičnih T-limfocita (CTL) sa smanjenom IL-2 produkcijom i CD3z ekspresijom.

[0408]Međutim, dopunjavanje serumskog arginina do fiziološki prihvatljivih nivoa, rekonstituiše CD3z i IL-2 ekspresiju, što ukazuje na ulogu inhibitora arginaze kao potencijalnih terapeutika u lečenju hroničnih HBV infekcija.

Načini administracije i režimi doziranja

[0409]Uprkos brojnim dokazima koji povezuju inhibiciju arginaze sa terapijama različitih bolesti i stanja, poznato je da je samo ograničen broj jedinjenja sposoban da inhibira aktivnost arginaze Zato su predmetnim pronalaskom realizovana jedinjenja i njihove farmaceutske kompozicije koje su korisne u lečenju subjekta koji boluje od takve bolesti ili stanja, kao što je gore opštije opisano

[0410]U jednom primeru izvođenja, subjekt koji prima tretman je sisar Na primer, metode i primene koje su ovde opisane su podesne za medicinsku primenu kod ljudi. Alternativno tome, metodi i primene su takođe podesni u veterinarskom kontekstu, pri čemu subjekat obuhvata, ali nije ograničen na psa, mačku, konja, govedo, ovcu i jagnje.

[0411]Jedinjenje ili kompozicija prema pronalasku mogu biti formulisani kao što je gore opisano i podesno za administraciju u terapeutski efektivnoj količini subjektu na bilo koji način. Terapeutski efektivna količina jedinjenja Formule I može zavisiti od količina i tipova upotrebljenih ekscipijenasa, količina i specifičnih tipova aktivnih sastojaka u doziranom obliku i načina kojim jedinjenje treba da se daje pacijentima. Međutim, tipični dozirani oblici prema pronalasku sadrže jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat, hidrat, izomer, ili prolek.

[0412]Uobičajeni nivoi doza za Jedinjenja Formule I generalno se nalaze u opsegu od oko 0,001 do oko 100 mg po kg telesne težine pacijenta dnevno, koje se mogu davati u pojedinačnim ili u više doza Primer doze je oko 0.01 do oko 25 mg/kg dnevno ili oko 0.05 do oko 10 mg/kg dnevno. U drugim primerima izvođenja, nivo doza je od oko 0.01 do oko 25 mg/kg dnevno, oko 0,05 do oko 10 mg/kg dnevno, ili oko 0,1 do oko 5 mg/kg dnevno.

[0413]Tipični opsezi doza se nalaze u opsezima od oko 0,1 mg do oko 2000 mg dnevno, koje se daju kao samo jedna doza dnevno ili, alternativno tome, kao podeljene doze tokom dana, opciono uzete sa hranom. U jednom primeru izvođenja, dnevna doza se daje dva puta dnevno u jednako podeljenim dozama. Opseg dnevnih doza može biti od oko 5 mg do oko 500 mg dnevno, kao što je, na primer, između oko 10 mg i oko 300 mg dnevno. Pri lečenju pacijenta, terapija može biti inicirana sa manjom dozom, možda od oko 1 mg do oko 25 mg, i povećava se, ako je neophodno, od oko 200 mg dnevno do oko 2000 mg dnevno, davanih bilo kao pojedinačna doza ili podeljenih u više doza, u zavisnosti od pacijentove globalne reakcije.

[0414]U zavisnosti od bolesti koja treba da bude lečena i subjektovog stanja, jedinjenja Formule I se mogu davati oralnim, parenteralnim (npr intramuskularno, intraperitonealno, intravenski, ICV. intracisternalnom injekcijom ili infuzijom, subkutanom injekcijom ili implantom), inhalacionim, nazalnim, vaginalnim, rektalnim, sublingvalnim, ili topičkim (npr. transdermalnim, lokalnim) načinima administracije. Jedinjenja mogu biti formulisana, sama ili zajedno, u podesnim formulacijama za dozirane jedinice koje sadrže uobičajene netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvanse i nosače, kao što je opisano gore. koji su podesni za svaki način administracije Pronalazak takođe razmatra administraciju jedinjenja prema pronalasku u depo formulaciji, u kojoj se aktivni sastojak oslobađa tokom definisanog vremenskog perioda

INHIBICIJA ARGINAZE

[0415]Jedinjenja prema pronalasku mhibiraju humanu arginazu I (ARG I) i arginazu II (ARG II). što je pokazano sa exvivotestom koji je opisan u objavljenom protokolu (Baggio et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 290, 1409-1416). Testom je određena koncentracija inhibitora koja je potrebna za redukciju aktivnosti arginaze za 50% (IC50), kao što je prikazano dole u Tabeli 2

Protokol testa

[0416]Inhibicija arginaze I (ARG I) i arginaze II (ARG II) sa jedinjenjima Formule I je praćena spektrofotometrijski na 530 nm. Jedinjenje koje treba da bude testirano je bilo rastvoreno u DMSO u inicijalnoj koncentraciji 50-struko većoj od finalne koncentracije u kiveti. 10 u.I gotovog rastvora je bilo razređeno u 90 ul pufera za test koji je sadržao 0,1 M natrijum fosfatnog pufera koji je sadržao 130 mM NaCI, pH 7,4, kome je dodat ovalbumin (OVA) u koncentraciji od 1 mg/ml Rastvori arginaze I i II su bili pripremljeni u 100 mM natrijum fosfatnog pufera, pH 7,4 koji je sadržao 1 mg/ml OVA da bi se dobio gotovi rastvor arginaze sa finalnom koncentracijom od 100 ng/ml.

[0417]Svakom bunarčiću mikrotitarske ploče sa 96-bunarčića je bilo dodato 40jil enzima, 10 liI jedinjenja prema pronalasku i 10 ul enzimskog supstrata (L-arginin + mangan sulfat). Za bunarčiće koji su bili korišćeni kao pozitivne kontrole, bili su dodati samo enzim i njegov supstrat, dok su bunarčići koji su upotrebljeni kao negativne kontrole sadržali samo mangan sulfat.

[0418]Posle inkubacije mikrotitarske ploče na 37 "C tokom 60 minuta, 150 u I urea reagensa, dobijenog sjedinjavanjem jednakih udela (1.1) reagenasa A i B. je dodato svakom bunarčiću mikrotitarske ploče da bi se zaustavila reakcija Urea reagens je napravljen neposredno pre korišćenja sjedinjavanjem Reagensa A (10 mM o-ftaldialdehida, i 0,4% polioksietilen (23) lauril etra (w/v) u 1,8 M sumporne kiseline) sa Reagensom B (1,3 mM primakvin difosfat, 0,4% polioksietilen (23) lauril etar (w/v). 130 mM borne kiseline u 3,6 mM sumporne kiseline). Posle gašenja reakcione smeše, ostavljeno je da mikrotitarska ploča stoji dodatnih 10 minuta na sobnoj temperaturi da bi se dozvolilo razvijanje boje. Inhibicija arginaze je bila izračunata merenjem optičke gustine (OD) reakcione smeše na 530 nm i normalizacijom OD vrednosti prema procentu inhibicije uočene kod kontrole Normalizovani OD je onda upotrebljen za generisanje krive doza-reakcija crtanjem normalizovanih OD vrednosti prema log [koncentracije] i primenom regresione analize za izračunavanje IC50 vrednosti

[0419]Tabela 2 dole prikazuje potenciju Jedinjenja Formule I na skali od 1 do 5, to jest najpotentnija jedinjenja su označena sa1,a najmanje potentna jedinjenja su označena sa 5. Shodno tome, vrednost potencije 1 se odnosi na jedinjenja prema pronalasku sa ICS0 vrednostima u opsegu od 0.1 nM do 250 nM; vrednost potencije 2 se odnosi na jedinjenja prema pronalasku sa ICM vrednostima u opsegu od 251 nM do 1000 nM; jedinjenja koja imaju vrednost potencije 3 ispoljavaju IC:,0 vrednosti u opsegu od 1001 nM do 2000 nM; jedinjenja prema pronalasku sa IC50 vrednostima u opsegu od 2001 nM do 5000 nM odlikuje vrednost potencije od 4, a jed inje nj ima sa IC5Đ vrednostima iznad 5001 nM su pripisane vrednosti potencije 5.

Relaksacija arterijskog prstena

[0420]Svrha ovog primera je da demonstrira da jedinjenja inhibitori arginaze prema pronalasku ispoljavaju efikasnost u lečenju pulmonarne hipertenzije u exvivomodelu bolesti. Shodno tome. inhibitori arginaze prema predmetnom pronalasku se ocenjuju u pogledu njihove efektivnosti na povećanje acetilholinom indukovane relaksacije prethodno kontrahovanog arterijskog tkiva dobijenog od miševa

[0421]U ovoj studiji, miševi su bih podeljeni u dve grupe na slučajni način Prva grupa miševa je služila kao kontrola, a drugoj grupi miševa je injektiran rastvor monokrotalina, agensa koji se eksperimentalno primenjuje za indukovanje povećanog krvnog pritiska u pulmonarnoj arteriji i srčanoj veni

[0422]Obe grupe miševa su držane u kavezima tokom 3-4 nedelja da bi se uspostavila pulmonarna hipertenzija kod grupe tretirane sa monokrotalinom. Na kraju ovog perioda i pre usmrđivanja, miševi iz kontrolne i monokrotalinske grupe su bili podeljeni na dve podgrupe Posle eutanazije, glavna pulmonarna arterija, njena leva i desna grana su isečene iz svake životinje, pa su očišćene i održavane u fiziološki prihvatljivom rastvoru pre njihove upotrebe u studiji relaksacije,

[0423]Dobijeno arterijsko tkivo je prvo isečeno da bi se dobili segmenti arterijskih prstenova dužine od 1,5-2 mm. Segmenti prstenova od svake pojedinačne životinje su onda montirani u nezavisne komore miografa (Danish Myo-Technology) uz korišćenje žice od nerđajućeg čelika od 200 jim Posle kupanja segmenata arterijskog prstena u Krebsovom puferu, svaki segment prstena je bio podešen na unapred određeno optimalno pasivno naprezanje (tj. odnos dužina/naprezanje) i ostavljeno je da se aklimatizuje najmanje 1 sat pre određivanja vijabilnosti tkiva korišćenjem KG (60 mM).

[0424]Arterijskom tkivu miševa iz jedne od dve podgrupe u okviru kontrolne i monokrotalinske grupe je onda dozvoljeno da se inkubira sa odgovarajućim inhibitorom arginaze tokom 30 minuta sa molskom koncentracijom od 100 uM pre dodavanja fenilefrina (PE), agensa za koji je poznato da izaziva kontrakciju mišića

[0425]Međutim, arterijsko tkivo koje je pripadalo drugoj podgrupi u okviru kontrolne i monokrotalinske grupe je indukovano tako da dođe u kontakt direktnim izlaganjem tkiva 1 jiM rastvora fenilefrina. Da bi se izračunala efektivnost inhibitora arginaze prema pronalasku za povećanje acetilholinom indukovane relaksacije prethodno kontrahovanog arterijskog tkiva, bio je korišćen miograf da bi se izmerila pramena naprezanja za svaki segment tkiva koji je bio izložen ili ne jedinjenju prema pronalasku u kontrolnoj i monokrotalinskoj grupi

[0426]Za jedinjenja prema pronalasku, studija relaksacije arterijskog prstena ukazuje da kod miševa koji su pripadali kontrolnoj grupi (tj. za miševe kojima nije bio davan monokrotalin), nije bilo razlike u procentu povećanja relaksacije prethodno kontrahovanih segmenata arterijskog tkiva izloženog inhibitoru arginaze ili izloženom nosaču (puferu), pre dodavanja acetilholma (AC) da bi se indukovala relaksacija

[0427]Nasuprot tome, kod miševa koji su pripadali monokrotalinskoj grupi, izlaganje arterijskog tkiva inhibitoru arginaze u koncentraciji od 100 uM pre indukovanja kontrakcije korišćenjem fenilefrina, povećava relaksaciju tkiva za oko 75%, Za tkivo od miševa tretiranih sa monokrotalinom koje je bilo izloženo nosaču (puferu), pre kontrakcije, dodavanje acetilholma je izazivalo manje povećanje relaksacije za oko 40% do 45%

[0428]Bez vezivanja za bilo koju specifičnu hipotezu, pronalazači veruju da jedinjenja prema pronalasku inhibiraju arginazu izazivajući povećanje intracelularne zalihe arginina, koja se onda nalazi na raspolaganju kao supstrat za celularne sintaze azotnog oksida (NOS) NOS pretvara arginin u azotni oksid (NO) i smatra se daje važni fiziološki signalni molekul koji igra ulogu u relaksaciji mišića. Shodno tome, inhibitori arginaze prema predmetnom pronalasku su podesni kao terapeutici za lečenje bolesti, kao što su hipertenzija, i erektilna disfunkcija

Claims

1.Jedinjenje Formule I, pri čemu R<1>je izabrano iz grupe koja se sastoji od -OH. OR<i!>. i NR<S>R<C> R<a>je izabrano iz grupe koja se sastoji od vodonika. linearnog ili razgranatog (CrC6)alkila, (C3-C8)cikloalkila, (C3-C14)arila, (C3-Ci4)heterocikloalkil-(Ci-C6)alkilena-, (C3-C14)heteroaril-(C,-C6)alkilena-, i (Cs-CujarilJd-CsJalkilena-; svaki Ri R<c>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, -OH, linearnog ili razgranatog (Cr C6)alkila, -SOz-(C1-C6)a!kila, (C3-C14)aril-S02-, <C3-C,4)heterocikloalkil-(C,-C6)alkilena-, i (C3-Ci4)heteroaril-(C,-Cs)alkilena-, R<2>je izabrano iz grupe koja se sastoji od H. linearnog ili razgranatog (C-,-C6) alkila, i (C,-CG)alkil-C(O)-; svaki W, X, Y, i Z je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od veze, -C(R')(R'")-, -C(R")2-, - CR'"-, -NR'"-, -N-, -O-, -C(O)-, i -S-, pri čemu više od tri W. X. Y i Z istovremeno ne predstavljaju vezu; i više od dva susedna člana VV, X Y i Z istovremeno nisu -O-, -S-. -N-, ili -NR'"-, I, m, n i p nezavisno su celi brojevi između 0 i 2 uključujući njih, pri čemu najmanje jedan od I. m, n, ili p nije 0; t j opciono predstavlja jednu ili više dvostrukih veza; svaki R<3>i R<4>je nezavisno izabran između vodonika, linearnog ili razgranatog (CrC6)alkila, i C(O)-R'. ili R3 i R* zajedno sa atomom bora za koji su vezani obrazuju 5- ili 6-člani prsten koji je potpuno zasićen, ili je delimično zasićen, D je izabrano iz grupe koja se sastoji od linearnog ili razgranatog (C3-C5)alkilena. linearnog ili razgranatog {C2-C8)alkenilena, linearnog ili razgranatog (C2-C8)alkmilena. (C3-C,4)arilena, i (C3-C,4)cikloalkilena, pri čemu je jedna ili više -CH2- grupa u D opciono i nezavisno zamenjena sa radikalom izabranim iz grupe koja se sastoji od O. NR'. S. SO, S02, i CR'R"; ili pri čemu bilo koje dve susedne -CH2- grupe opciono predstavljaju dva člana (C3-C14)-cikloalkilenil grupe; i pri čemu dve nesusedne -CH2- grupe istovremeno predstavljaju 0, NR'. S, SO, ili S02; svaki R', R" i R"' je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, OH, StOjR11, S(0)2R<d>, (Cr C8)alkila, (C3-C6)arila, -NH2l-NH(Ci-C6)alkila, -N[(C,-CB)alkil]2, -C(0)NR<d>R<e>, -C(0)(C-C6)alkila, - C(0)(C3-C,„)arila. -C(O)O(C1-0B)alkila, -C(0)0(C3-CH)anla, (C3-Cs)cikloalkila, (C3-C^jheterocikloalkila, -C(0)(C3-C14)heterocikloalkila, (Ca-C^heteroanla. (C3-Ci4)aril-{C,-C6)alkilena-, -C(O) (Ca-C^jaril-fd-CeJalkilena-, -C(O)(C3-014)arila. (C3-C6)cikloalkil-(C.-C6)alkilena-, (CirCujheteroariKCT-Cejalkilena-, {C3-Ci4)heterocikl-(C,-C6)alkilena-; i pri čemu je bilo koji alkil, alkilen, aril, heteroaril, cikloalkil, ili heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili više članova izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, okso. -COOH. -CN. - N02l-OH, -NR<đ>R<e>. -NR<9>S(0)2R<n>. (d-Cgjalkoksi. (C.-Cjarila. (C,-C8)haloalkila i (Ca-Cjariloksi; pri čemu je svaki R<d>. R<e>, R<9>, i R<h>nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od H, linearnog ili razgranatog (Ci-C6)alkila, opciono supstituisanog (C3-C14)aril(CrCs)alkilena-. opciono supstituisanog (C3-C,4)arila, (Ci-C6)hidroksialkila, {Ci-C6)aminoalkila, H2N(C,-C6)alkilena-, opciono supstituisanog (C3-C6)cikloalkila, opciono supstituisanog (C3-Ci4)heterocikloalkila, opciono supstituisanog {C3-C14)heteroarila, opciono supstituisanog (C3-C^)aril-(C,-C6)alkilena-, NR'R"0(O)- i (C3-Cs)aril-(C3-C14)-cikloalkilena-. ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, stereoizomera ili tautomera; uz uslov da jedinjenje Formule I nije 1-amin-2-(3-borpropil)cikloheksan karboksilna kiselina.

2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu je D linearni ili razgranati (C3-C5}alkilen

3. Jedinjenje prema zahtevu 2, pri čemu D je propilen

4. Jedinjenje prema zahtevu 3, pri čemu R1 je -OH.

5. Jedinjenje prema zahtevu 4, pri čemu svaki odR<2>,R'? i R<4>je vodonik

6. Jedinjenje prema zahtevu 5, pri čemu svaki od W, X, Y i Z je -C(R"')2-.

7. Jedinjenje prema zahtevu 6, pri čemu R'" je H

8. Jedinjenje prema zahtevu 7, pri čemu je I + m + n + p = 3 ili 4.

9. Jedinjenje prema zahtevu 5, pri čemu bilo koji od W, X, Y i Z je -NH- i svaki od preostala tri je - C(R"V.

10. Jedinjenje prema zahtevu 5, pri čemu bilo koji od W. X, Y i Z je -N- i svaki od preostala tri je - CR'"-,<t>. je prisutno i predstavlja jednu ili više dvostrukih veza.

11.Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je izabrano iz sledeće tabele:

12.Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je izabrano iz sledeće tabele:

13.A farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efektivnu količinu najmanje jednog jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 -12, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, stereoizomer ili tautomer; i farmaceutski prihvatljivi nosač.

14.Jedinjenje koje je definisano u bilo kom od zahteva 1 -12 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, stereoizomer ili tautomer za primenu u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja povezanih sa ekspresijom ili aktivnošću arginaze I, arginaze II, ili njihove kombinacije kod subjekta.

15.Jedinjenje za primenu prema zahtevu 14, pri čemu je bolest ili stanje izabrano između pulmonarne hipertenzije, erektilnedisfunkcije, hipertenzije, ateroskleroze, bubrežne bolesti, astme, disfunkcije T-ćelija, ishemijske reperfuzione povrede, neurodegenerativnih bolesti, zarastanja rana, i fibroznih bolesti.